Strigone在制備抑制肝臟成纖維細胞增殖藥物中的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物Strigone的新用途，尤其涉及Strigone在制備抑制肝臟成纖 維細胞增殖藥物中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝纖維化是慢性肝損傷向肝硬化發(fā)展的動態(tài)過程，過去的20年間，肝纖維化的研 究取得了長足進展，證實肝纖維化與一定程度的肝硬化都是可逆的。近年來陸續(xù)出現(xiàn)了一 些抗肝纖維化治療方法，包括化學藥、生物制劑、中藥與基因療法等，但是理想的臨床治療 手段仍然缺乏，目前防治肝纖維的關(guān)鍵是針對與肝星狀細胞激活相關(guān)的環(huán)節(jié)，主要是：減輕 肝損傷；抑制星狀細胞激活，減少細胞外基質(zhì)產(chǎn)生；調(diào)節(jié)細胞因子紊亂，促進活化肝星狀細 胞凋亡。
[0003] 本發(fā)明涉及的化合物Strigone是一個2013年發(fā)表（TakayaKisugi，et al. ,Strigone,isolationandidentificationasanaturalstrigolactonefrom Houttuyniacordata.Phytochemistry，87 (2013) 60 - 64.)的新化合物，該化合物擁有全新 的骨架類型，目前的用途僅僅促進種子發(fā)芽，（TakayaKisugi，etal.，Strigone,isolation andidentificationasanaturalstrigolactonefromHouttuyniacordata. Phytochemistry，87 (2013) 60 - 64.)，本發(fā)明涉及的Strigone在制備抑制肝臟成纖維細胞 增殖藥物中的用途屬于首次公開。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有Strigone研究中未發(fā)現(xiàn)其具有抑制肝臟成纖維細胞 增殖活性的報道的現(xiàn)狀，提供了Strigone在制備抑制肝臟成纖維細胞增殖藥物中的應用。
[0005] 所述化合物Strigone結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
[0006]
[0008] 本發(fā)明對Strigone抑制肝臟成纖維細胞增殖作用進行了藥理試驗?；罨母涡?狀細胞（HSC)具有成纖維細胞特征，NIH/3T3細胞是研究藥物抗肝纖維化活性常用的細胞 模型。本研究以NIH/3T3成纖維細胞為靶細胞，觀察發(fā)明藥物對其增殖的影響。用MTT法 檢測的抑制細胞增殖的試驗結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對NIH/3T3的細胞增殖有顯著的抑制活 性。結(jié)果證明Strigone具有抗肝纖維化作用。
【具體實施方式】
[0009]本發(fā)明所涉及化合物Strigone的制備方法參見文獻（TakayaKisugi，et al.,Strigone,isolationandidentificationasanaturalstrigolactonefrom Houttuyniacordata.Phytochemistry?87(2013)60 - 64.)
[0010] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
[0011] 實施例1 :本發(fā)明所涉及化合物Strigone片劑的制備：
[0012] 取5克化合物Strigone，加入糊精195克，混勻，常規(guī)壓片制成1000片。
[0013] 實施例2:本發(fā)明所涉及化合物Strigone膠囊劑的制備：
[0014] 取5克化合物Strigone，加入淀粉195克，混勻，裝膠囊制成1000粒。
[0015] 下面通過藥效學實驗來進一步說明其藥物活性。
[0016] 實驗例一：采用MTT法評價化合物Strigone對肝纖維化的抑制作用
[0017] 1、方法：NIH/3T3 細胞株購自引自ATCC(AmericanTypeCultureCollection)的 中科院上海細胞所細胞庫。將對數(shù)生長期的亞融合的NIH/3T3細胞用0. 25%胰酶消化，洗 滌，離心后，用DMEM培養(yǎng)液（含10%FCS)制成lX104cell/ml的細胞懸液，臺盼藍染色鑒 定存活率大于95%，按每孔100ul加入96孔板中，在37°C、5%C02培養(yǎng)24h同步處理后， 棄上清，加入含有不同稀釋濃度藥物的DMEM培養(yǎng)液（含10%FCS) 200ul，培養(yǎng)48h，每孔加 入MTT溶液孵育4h。棄去培養(yǎng)液，加入150ulDMS0,振蕩10分鐘，使結(jié)晶溶解，酶標儀490nm 處讀取0D值，結(jié)果以0D49。表示。
[0018] 2.結(jié)果：
[0019] 2. 1形態(tài)學觀察
[0020] NIH/3T3在用藥前伸展良好，折光性較弱，有方向性，呈放射狀，細胞增殖的速度 快；而加藥物24h后，成纖維細胞數(shù)目減少，形狀變得不規(guī)則，突起變短，細胞排列混亂，細 胞內(nèi)代謝產(chǎn)物增多。
[0021] 表1 :MTT法檢測本發(fā)明藥物對NIH/3T3增殖的抑制作用
[0022]
[0023] 注：與細胞陰性對照比較*P〈0. 05 ;#P〈0. 01
[0024] 結(jié)果：本發(fā)明藥物在10ug/ml-40ug/ml的濃度范圍內(nèi)對成纖維細胞NIH/3T3在 10 %小牛血清的刺激下的細胞增殖有顯著的抑制作用。表明本發(fā)明藥物體外對纖維細胞的 增殖有顯著抑制作用。
[0025] 實驗例2:本發(fā)明藥物對轉(zhuǎn)化生長因子-βi(TGF-β》誘導的成纖維細胞增殖的抑 制作用
[0026]TGF-βi是促進細胞增殖和膠原生成的強活性因子，在細胞中加入TGF-βJOng/ ml刺激細胞增殖，在檢測藥物對TGF-β1誘導的細胞增殖的抑制作用，以分析判斷本發(fā)明 藥物的作用機理。
[0027] 表2:MTT法檢測本發(fā)明藥物對TGF誘導NIH/3T3增殖的抑制作用
[0028]
[0029] 注：*，與細胞+TGF對照Ρ〈0· 05;#，與細胞+TGF對照Ρ〈0· 01
[0030] 結(jié)果：本發(fā)明藥物在10_40ug/ml兩個濃度區(qū)間內(nèi)對成纖維細胞ΝΙΗ/3Τ3在 TGF-β1的誘導下的細胞增殖有顯著的抑制作用。表明本發(fā)明藥物體外對纖維細胞增殖的 抑制作用可能是通過干預TGF信號通路實現(xiàn)的。
[0031] 由上述實施例表明，本發(fā)明對成纖維細胞NIH/3T3在10%小牛血清的刺激下的細 胞增殖有顯著的抑制作用；Strigone對成纖維細胞NIH/3T3在TGF-β1的誘導下的細胞增 殖有顯著的抑制作用。由此證明，Strigone可以明顯抑制肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展，可用于 制備抗肝纖維化、防治肝硬化的藥物。
【主權(quán)項】
1.Strigone在抑制肝臟成纖維細胞增殖藥物中的應用，所述化合物Strigone結(jié)構(gòu)如 式（I)所示： 式（I》 1.Strigone在抑制肝臟成纖維細胞增殖藥物中的應用，所述化合物Strigone結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
【專利摘要】本發(fā)明公開了Strigone在制備治療肝纖維化藥物的用途。藥理試驗證明，Strigone可以明顯抑制肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展，可用于制備抗肝纖維化、防治肝硬化的藥物，Strigone屬于全新的骨架類型，而且其對于肝臟成纖維細胞增殖抑制活性強，具備突出的實質(zhì)性特點，同時用于抗肝臟成纖維細胞增殖顯然具有顯著的進步。
【IPC分類】A61P1/16, A61K31/365
【公開號】CN105250262
【申請?zhí)枴緾N201510762567
【發(fā)明人】田麗華
【申請人】淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年11月11日