L-半胱氨酸組合物在預(yù)防、清除（或消除）吸煙、飲酒時(shí)所產(chǎn)生的致癌因素乙醛的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及L-半胱氨酸藥物組合物在吸煙、飲酒時(shí)所產(chǎn)生上呼吸道、上消化道乙 醛致癌的方面的應(yīng)用，屬于藥品的技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】：
[0002] 癌是威脅人類健康長(zhǎng)壽的大敵，每年要奪去數(shù)千萬(wàn)人的生命，現(xiàn)已證明，上呼吸 道、上消化道發(fā)生的癌與人類的嗜煙、長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)過(guò)量飲酒和不良飲食習(xí)慣成正相關(guān)。2009 年10月，國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)宣布：乙醛為一類致癌物，大量存在于煙草、含酒精飲料中。據(jù) 估計(jì)，發(fā)達(dá)國(guó)家中高達(dá)80%的口腔、咽和食管癌都是由吸煙和喝酒引起的。芬蘭的研究人員 指出，這類上消化道病變的流行部分原因是由于飲酒和吸煙導(dǎo)致上消化道接觸到乙醛，這 時(shí)致癌因素就乘機(jī)同時(shí)而入，誘發(fā)癌的生成。
[0003] L-半胱氨酸是生物體內(nèi)一種常見(jiàn)的氨基酸，中文名稱又稱之為半氨基酸，目前主 要用于化妝品領(lǐng)域和食品產(chǎn)業(yè)當(dāng)中，主要目的是作為添加劑或者改良劑使用，而目前醫(yī)藥 領(lǐng)域中使用更是很局限，主要用于祛痰；特別是用于治療支氣管炎和化痰的作用。數(shù)據(jù)顯 示，與乙醛接觸而誘發(fā)的癌癥占據(jù)40%的比例，為此開(kāi)發(fā)和研究一種新型、有效的消除致癌 的藥物是目前亟待解決的問(wèn)題，對(duì)大量吸煙、飲酒及不良習(xí)慣的人群的上呼吸道、上消化道 癌癥的發(fā)生帶來(lái)了福音，在去除致癌物乙醛的同時(shí)，還可收到保護(hù)肝、腎，降低血脂，促進(jìn)血 液循環(huán)和NO(-氧化氮）的釋放，在免疫保護(hù)方面發(fā)揮重要作用。同時(shí)減少和降低癌癥對(duì) 人類的侵害，節(jié)約大量醫(yī)藥資源，保護(hù)人類健康。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004] 本發(fā)明的目的在于通過(guò)藥物組合使用，解決清除通過(guò)消化道、呼吸道進(jìn)入人體的 一類致癌物乙醛。預(yù)防與吸煙、飲酒及不良飲食習(xí)慣的人群的上呼吸道、上消化道癌癥的發(fā) 生。
[0005] 為了解決上述的問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明涉及一種L-半胱氨酸藥物組合物由活性成分L-半胱氨酸與銀杏葉提取 物、人參、原花青素蜂王漿、微量元素中的一種或一種以上組合制成；
[0007] 上述的L-半胱氨酸藥物組合物，其活性成分光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽及水合物；
[0008] 上述的L-半胱氨酸藥物組合物，其活性成分按照重量份計(jì)：含有5~100份的 L-半胱氨酸和10~200份的其他活性成分；其活性成分優(yōu)選10份L-半胱氨酸與30份銀 杏葉提取物、人參、原花青素蜂王漿、微量元素中的一種或一種以上組合組成。
[0009] 上述的L-半胱氨酸藥物組合物，藥物組合物可以制成醫(yī)學(xué)上藥物制劑及其醫(yī)療 器械。
[0010] 上述的L-半胱氨酸藥物組合物，該藥物組合物用于于預(yù)防、清除吸煙、飲酒時(shí)上 呼吸道、上消化道乙醛致癌的方面的應(yīng)用。
[0011] 本申請(qǐng)人進(jìn)行了 L-半胱氨酸和銀杏葉提取物、L-精氨酸、人參、原花青素、微量元 素中的一種或一種以上組合分別進(jìn)行了藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，以進(jìn)一步闡述本發(fā)明提供的藥物 組合物的有益效果。
[0012] 一藥物組合物配比篩選實(shí)驗(yàn)
[0013] 發(fā)明人通過(guò)不同組方的L-半胱氨酸藥物組合物進(jìn)行了配伍，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)制定 了以下實(shí)驗(yàn)方案：并通過(guò)藥物組合物對(duì)乙醛的消除作用及對(duì)A549細(xì)胞內(nèi)環(huán)境抗氧化的影 響研究，再次證明了以下藥物組合具有很好的療效。
[0014] I. 1具體藥物組分配比組合物A1~G1
[0015] 表1藥物組分配比組合物A1~G1組
[0017] 以上選擇配比，" + "表示配比，表示不配比，通過(guò)"藥物組合物對(duì)乙醛消除作用 的研究"藥理實(shí)驗(yàn)證明，上述藥物配伍組合物對(duì)乙醛誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷具有明顯的保護(hù) 作用。
[0018] 1. 2具體藥物單位配比組合物A2~G2藥物
[0019] 表2藥物單位配比組合物A2~G2藥物
[0021] 以上選擇配比，通過(guò)"物組合物對(duì)乙醛消除作用的研究"藥理實(shí)驗(yàn)證明，上述活性 成分單位配比組合物對(duì)乙醛誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷具有明顯的保護(hù)作用。其中藥理研究表 明，其中配比采用活性成分IlO份與活性成分1130份效果明顯，其中活性成分II配伍選擇 B2效果更佳。
[0022] 二藥物組合物對(duì)乙醛消除作用的研究
[0023] 1. 1材料、試劑與儀器
[0024] 非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞由天津市肺癌研究所提供。乙酸（含量40% )、藥物組 合物（A2~G2)、RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、青鏈霉素混合液（100X)、胰蛋白酶、噻唑 藍(lán)（MTT)、二甲基亞砜（DMSO)、PBS緩沖液、乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒、一氧化氮測(cè)定試劑盒、 BCA法測(cè)定超微量蛋白含量試劑盒、超氧化物歧化酶測(cè)定試劑盒南京建成生物工程研究所。 HERAce 11150二氧化碳培養(yǎng)箱德國(guó)賀利氏公司；BDS200-PH倒置生物顯微鏡重慶奧特光學(xué) 儀器公司；Multiskan Spectrum全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀上海雷勃生物有限公司。
[0025] 1. 2細(xì)胞培養(yǎng)
[0026] 將A549細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清、青鏈霉素混合液（I X)的1640培養(yǎng)基中，于 37°C、飽和濕度、5% C02條件下培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)每隔2~3d換液1次。待細(xì)胞長(zhǎng) 滿80%后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化用于傳代培養(yǎng)或用于實(shí)驗(yàn)。
[0027] I. 3MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)活性
[0028] 用含10 %胎牛血清的1640培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞至6 X 104個(gè)/mL，并接種至96孔培養(yǎng) 板，每孔加入100L細(xì)胞懸液（空白孔不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)基）培養(yǎng)24h，待細(xì)胞長(zhǎng)滿80%左 右，換成無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h，使細(xì)胞同步化；然后分別加入藥物組合物（A 2~G2)、乙 醛等處理因素，每個(gè)劑量重復(fù)6孔，置培養(yǎng)箱中孵育24h后進(jìn)行檢測(cè)。吸棄上清液20L，每孔 加入20L質(zhì)量濃度為5mg/mL MTT (終質(zhì)量濃度為0. 5mg/mL)，繼續(xù)孵育4h后棄培養(yǎng)基，每 孔加入150LDMS0終止反應(yīng)，避光低速振搖IOmin使深紫色沉淀溶解，于酶標(biāo)儀波長(zhǎng)570nm 處測(cè)定OD值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0029] 1. 4細(xì)胞上清液LDH活性測(cè)定
[0030] 用10 %胎牛血清的1640培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞至6 X 104個(gè)/mL，將細(xì)胞接種至24孔板 中，每孔加入細(xì)胞懸液lmL，置5% C02培養(yǎng)箱，37°C培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁長(zhǎng)滿培養(yǎng)板后，換 用含無(wú)血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h使細(xì)胞同步化。隨后加入不同處理因素繼續(xù)培養(yǎng)24h，每組 培養(yǎng)3孔細(xì)胞。培養(yǎng)終止后，3000r/min離心3min，小心吸取上清液，按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定 LDH活力，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0031] 1. 5細(xì)胞上清液中NO活性測(cè)定
[0032] 將細(xì)胞制成密度為6 X 104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，接種在24孔培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng)，待 細(xì)胞長(zhǎng)滿80 %時(shí)，按上面分組處理，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。每孔取上清液100L，按照南京建成生 物工程研究所試劑盒要求測(cè)定NO含量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0033] 1 · 6細(xì)胞內(nèi)SOD活力測(cè)定
[0034] 將細(xì)胞制成密度為6 X 104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，接種在24孔培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng)，待 細(xì)胞長(zhǎng)滿80%時(shí)，按上面分組處理，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。終止培養(yǎng)后，加入細(xì)胞裂解液，4°C裂 解30min，12000r/min離心15min，取上清BCA法測(cè)定蛋白濃度，同時(shí)按照南京建成生物工程 研究所試劑盒要求測(cè)定SOD活