>[0048] 本發(fā)明的融合蛋白可W用作藥物，特別是用于治療淀粉樣蛋白病癥，特別是用于 治療阿爾茨海默病。
[0049] 定義
[0050] 凸起進(jìn)入孔桐二聚化模塊和它們?cè)诳贵w工程中的應(yīng)用記述在化derP.;Ridgway J.B.B.;PrestaL.G. :Immunotechnology，卷2,1號(hào)，1996年2月，pp.73-73(1))中。
[0051] "血腦屏障"或"BBB"是指外周循環(huán)與腦和脊髓之間的生理屏障，其由腦毛細(xì)血管 內(nèi)皮質(zhì)膜內(nèi)的緊密連接部形成，產(chǎn)生限制分子(甚至非常小的分子如尿素(60道爾頓））運(yùn)輸 進(jìn)腦中的緊密屏障。腦內(nèi)的BBB、脊髓內(nèi)的血液-脊髓屏障和視網(wǎng)膜內(nèi)的血液-視網(wǎng)膜屏障， 是CNS內(nèi)的相連毛細(xì)血管屏障，并且在本文中被統(tǒng)稱為血腦屏障或BBBdBBB還包括血液-CSF 屏障(脈絡(luò)叢），其中屏障由室管膜細(xì)胞而不是毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成。
[0052] 術(shù)語(yǔ)"針對(duì)Αβ的抗體"是指能夠W充分的親和力結(jié)合A朗太的抗體，W使所述抗體可 用作祀向A削太的診斷劑和/或治療劑。
[0053] 應(yīng)該注意，Αβ具有幾種天然存在的形式，其中人形式是指上文提及的Αβ39，Αβ40，Α M1，AM2和AM3dAM2是最主要的形式，其具有下述氨基酸序列(從Ν-端開始）：
[0054]DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(Seq.Id.No.1)〇
[00對(duì)在Αβ41、ΑΜ0、Αβ39中，分別缺少C端氨基酸A、IA和VIA。在Αβ43形式中，在上述序列 (Seq.Id.No. 1)的C端包含另外一個(gè)蘇氨酸殘基。
[0056] "中樞神經(jīng)系統(tǒng)"或乂NS"是指控制身體功能的神經(jīng)組織的復(fù)合體，并且包括腦和 脊髓。
[0057] "血腦屏障受體"（本文中簡(jiǎn)寫為"R/邸B")是在腦內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞外膜連接 的受體蛋白，其能夠?qū)⒎肿舆\(yùn)輸穿過BBB或者用于運(yùn)輸外源施用的分子。本文中R/B邸的例 子包括:轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TfR)、膜島素受體、膜島素樣生長(zhǎng)因子受體（IGF-R)、低密度脂蛋白 受體(包括但不限于低密度脂蛋白受體相關(guān)的蛋白l(LRPl)和低密度脂蛋白受體相關(guān)的蛋 白8(LRP8))和肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子樣生長(zhǎng)因子化B-EGF)。本文中的一種示例性的R/ BBB是轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TTR)。
[0058] "效應(yīng)子實(shí)體"是指要穿過BBB運(yùn)輸至腦的分子。所述效應(yīng)子實(shí)體通常具有希望遞 送至腦的特征性治療活性。效應(yīng)子實(shí)體包括神經(jīng)學(xué)病癥藥物和細(xì)胞毒性劑，如例如膚、蛋白 和抗體，特別是單克隆抗體。
[0059] "單價(jià)結(jié)合實(shí)體"是指能夠特異性地且W單價(jià)結(jié)合模式與R/BBB結(jié)合的分子。例如， 所述單價(jià)結(jié)合實(shí)體可W是IgG的一部分，諸如單個(gè)SC化b片段。例如，所述單價(jià)結(jié)合實(shí)體可W 是使用現(xiàn)有技術(shù)(如隧菌體展示或免疫)工程改造的支架蛋白。所述單價(jià)結(jié)合實(shí)體還可W是 膚。
[0060] "單價(jià)結(jié)合模式"是指與R/BBB的特異性結(jié)合，其中單價(jià)結(jié)合實(shí)體和R/BBB之間的相 互作用通過一個(gè)單獨(dú)表位而發(fā)生。由于單個(gè)表位相互作用點(diǎn)，所W單價(jià)結(jié)合模式會(huì)阻止R/ BBB的任何二聚化/多聚化。單價(jià)結(jié)合模式會(huì)阻止R/B邸的細(xì)胞內(nèi)分選發(fā)生變化。
[0061] "轉(zhuǎn)鐵蛋白受體"（"TfR")是一種跨膜糖蛋白（具有約180，000的分子量），其由參與 脊椎動(dòng)物中的鐵攝取的兩個(gè)二硫鍵鍵合的亞基(各自的表觀分子量為約90,000)組成。在一 個(gè)實(shí)施方案中，本文中的TfR是人TfR，其包含例如在Schneider等.Nature311:675-678 (1984)中的氨基酸序列。
[0062] 術(shù)語(yǔ)"抗體"在本文中W最廣泛的意義使用，并且特別涵蓋單克隆抗體、多克隆抗 體、由至少兩個(gè)完整抗體形成的多特異性抗體Η列如，雙特異性體及抗體片段，只要它們 表現(xiàn)出需要的生物學(xué)活性。
[0063] "抗體片段"在本文中包括完整抗體的一部分，所述部分保留結(jié)合抗原的能力。抗 體片段的實(shí)例包括化bJab'，F(xiàn)(ab'）2和Fv片段;雙抗體;線性抗體;單鏈抗體分子，如scFv 和ScFab;和由抗體片段形成的多特異性抗體。
[0064] 術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"用在本文中是指由一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即，組 成所述群體的單獨(dú)抗體是相同的和/或結(jié)合相同的表位，除了可能在生產(chǎn)單克隆抗體過程 中產(chǎn)生的可能的變體W外，所述變體通常W少量存在。與典型地包括針對(duì)不同決定簇(表 位)的不同抗體的多克隆抗體制劑相反，每種單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一決定簇。除了它 們的特異性之外，由于它們沒有被其他免疫球蛋白污染，因此，單克隆抗體是有利的。修飾 詞"單克隆"表示抗體從基本上同質(zhì)的抗體群體獲得的特征，并且不被解釋為需要通過任何 特定的方法生產(chǎn)抗體。例如，要按照本發(fā)明使用的單克隆抗體可W通過最先由Kohler等人， 化ture，256:495( 1975)所述的雜交瘤方法制備，或者可W通過重組DNA方法(例如，參見美 國(guó)專利號(hào)4,816，567)制備/'單克隆抗體"還可W使用例如Clackson等人，Nature,352:624-628( 1991)和Marks等人，J.Mol.Biol. ,222:581-597( 1991)中描述的技術(shù)從隧菌體抗體文 庫(kù)中分離。本文中單克隆抗體的具體實(shí)例包括嵌合抗體、人源化抗體和人抗體，包括其抗 原-結(jié)合片段。本文的單克隆抗體特異性包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白），其中重鏈和/或輕 鏈的一部分與來(lái)源于特定物種或?qū)儆谔囟贵w種類或亞類的抗體中的對(duì)應(yīng)序列相同或同 源，而所述鏈的其余部分與來(lái)源于另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w種類或亞類的抗體中的對(duì)應(yīng)序 列相同或同源，W及包括所述抗體的片段，只要它們表現(xiàn)出需要的生物學(xué)活性(美國(guó)專利號(hào) 4,816,567;Morrison等人，Proc.化tl.Acad.Sci.USA，81:6851-6855( 1984))。本文中感興 趣的嵌合抗體包括"靈長(zhǎng)類化的(primatized)"抗體，其包含來(lái)源于非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物{例如， 舊世界猴（OldWorldMonkey),如拂拂，恒河猴（rhesusmonkey)或食蟹猴（cynomolgus monkey))的可變結(jié)構(gòu)域抗原結(jié)合序列和人恒定區(qū)序列（美國(guó)專利號(hào)5,693,780)。
[0065] 非人(例如鼠）抗體的"人源化"形式指包含最少的衍生自非人免疫球蛋白的序列 的嵌合抗體。在大部分情況中，人源化抗體是人免疫球蛋白（受體抗體），其中受體高變區(qū)的 殘基被具有所需特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體）（諸如小鼠、大鼠、兔或非人 靈長(zhǎng)類動(dòng)物)的高變區(qū)殘基替換。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng) 的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體中或在供體抗體中沒有發(fā)現(xiàn)的殘基。 進(jìn)行運(yùn)些修飾W進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。一般而言，人源化抗體將包含基本上全部的至少 一個(gè)、典型地兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或基本上所有高變區(qū)對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的高 變區(qū)，且所有或基本上所有FRs是人免疫球蛋白序列的那些，不同之處在于如上所述的FR置 換。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)，所述免疫球蛋白恒定區(qū)典型地 是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)見例如Jones等人，Nature321:522-525(1986); Riechmann等人，Na1:ure332:323-329( 1988);及Pres1:a，Qirr.Op.Struct.Biol2:593-596 (1992) 。
[0066] "人抗體"在本文中是包含運(yùn)樣的氨基酸序列結(jié)構(gòu)的抗體，所述氨基酸序列結(jié)構(gòu)與 可獲得自人B細(xì)胞的抗體的氨基酸序列結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)，并且包括人抗體的抗原結(jié)合片段?？蒞通 過多種技術(shù)鑒定或制備運(yùn)樣的抗體，所述技術(shù)包括、但不限于:通過在免疫后能夠在不存在 內(nèi)源免疫球蛋白產(chǎn)生的情況下生產(chǎn)人抗體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物{例如，小鼠）生產(chǎn)（例如，參見 Jakobovits等人，Proc.化tlAcad.Sci.USA,90 : 2551 (1993) ;Jakobovits等人，Nature， 362: 255-258( 1993) ;Bruggermann等人，YearinImmuno.，7: 33( 1993);和美國(guó)專利號(hào)5， 591，669，5，589，369和5，545，807));從表達(dá)人抗體或人抗體片段的隧菌體展示文庫(kù)選擇 (參見，例如，McCafferty等人，Nature348:552-553(1990) ;Johnson等人，Current OpinioninStructuralBiology3:564-571(1993) ;Clackson等人，Na1:ure，352:624-628 (1991);Marks等人，J.Mol.Biol. 222:581-597( 1991);Griffith等人，EMBOJ. 12:725-734 (1993) ;美國(guó)專利號(hào)5,565,332和5,573,905);通過體外活化的B細(xì)胞生成(參見美國(guó)專利5， 567，610和5，229，275);和分離自生產(chǎn)人抗體的雜交瘤。
[0067] "多特異性抗體"在本文中是對(duì)至少兩個(gè)不同的表位具有結(jié)合特異性的抗體。示例 性多特異性抗體可W結(jié)合R/BBB和腦抗原兩者。多特異性抗體可W被制備成全長(zhǎng)抗體或抗 體片段(例如F(ab'）2雙特異性抗體）。也預(yù)期具有兩個(gè)三個(gè)或更多個(gè)(例如四個(gè)間能性抗 原結(jié)合位點(diǎn)的改造的抗體(參見，例如，美國(guó)申請(qǐng)?zhí)朥S2002/0004587A1，Mi1ler等人）。多 特異性抗體可W被制備成全長(zhǎng)抗體或抗體片段。
[0068] 本文中的抗體包括具有改變的抗原結(jié)合或生物學(xué)活性的"氨基酸序列變體"。運(yùn)樣 的氨基酸變化的例子包括具有增強(qiáng)的對(duì)抗原的親和力的抗體(例如"親和力成熟"抗體），和 具有改變的化區(qū)（如果存在的話)的抗體，例如具有改變的（增加或減小的)抗體依賴性細(xì)胞 毒性(ADCC)和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)的抗體(參見，例如，W0 00/42072，Presta，L. 和WO99/51642，Iduosogie等人）；和/或具有增加的或減小的血清半衰期的抗體(參見，例 如，W000/42072，Presta，L.)。
[0069] "可變結(jié)構(gòu)域"（輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)、重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH))，當(dāng)用于本文時(shí)，指每 對(duì)輕鏈和重鏈結(jié)構(gòu)域的每個(gè)結(jié)構(gòu)域，其直接參與抗體與抗原的結(jié)合。輕鏈和重鏈的可變結(jié) 構(gòu)域具有相同的通用結(jié)構(gòu)，并且每個(gè)結(jié)構(gòu)域包括序列是廣泛保守的4個(gè)構(gòu)架(FR)區(qū)，其由3 個(gè)"高可變區(qū)"（或互補(bǔ)決定區(qū)，CDRs)連接。所述構(gòu)架區(qū)采用β-折疊構(gòu)象，并且所述CDRs可W 形成連接所述0-折疊結(jié)構(gòu)的環(huán)。在每條鏈中的CDRs通過構(gòu)架區(qū)保持在它們的Ξ維結(jié)構(gòu)中， 并且與另一條鏈的CDRs-起形成抗原結(jié)合位點(diǎn)?？贵w重鏈和輕鏈CDR3區(qū)在本發(fā)明所述的抗 體的結(jié)合特異性/親和性中起著特別重要的作用，并且因此提供本發(fā)明的另一個(gè)目的。
[0070] 術(shù)語(yǔ)"抗體的抗原-結(jié)合部分"，當(dāng)用于本發(fā)明時(shí)，是指抗體負(fù)責(zé)抗原-結(jié)合的氨基 酸殘基?？贵w的抗原-結(jié)合部分包括來(lái)自"互補(bǔ)決定區(qū)"或乂DRs"的氨基酸殘基。"構(gòu)架"或 "FR"區(qū)是除超變區(qū)殘基之外的那些可變結(jié)構(gòu)域區(qū)域，如本文所定義的。因此，抗體的輕鏈和 重鏈可變結(jié)構(gòu)域從N端到C端包括結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。特別地，重鏈 的CDR3是最有助于抗原結(jié)合的區(qū)域，并且限定所述抗體的性質(zhì)。CDR和FR區(qū)按照Kabat等人， S