一種桑椹生物堿的選擇性提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種生物堿的提取方法，具體設(shè)及一種桑權(quán)生物堿的選擇性提取方 法，屬于生物化工領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物堿是存在于自然界(主要為植物，但有的也存在于動(dòng)物）中的一類(lèi)含氮的堿性 有機(jī)化合物，有似堿的性質(zhì)，所W過(guò)去又稱(chēng)為歴堿。大多數(shù)有復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，氮素多包含 在環(huán)內(nèi)，有顯著的生物活性，是中草藥中重要的有效成分之一。具有光學(xué)活性。有些不含堿 性而來(lái)源于植物的含氮有機(jī)化合物，有明顯的生物活性，故仍包括在生物堿的范圍內(nèi)。按照 生物堿的基本結(jié)構(gòu)，已可分為60類(lèi)左右。下面介紹一些主要類(lèi)型:有機(jī)胺類(lèi)(麻黃堿、益母草 堿、秋水仙堿）、化咯燒類(lèi)(古豆堿、千里光堿、野百合堿）、化晚類(lèi)(藤堿、橫柳堿、半邊蓮堿）、 異哇嘟類(lèi)(小築堿、嗎啡、粉防己堿）、嗎I噪類(lèi)(利血平、長(zhǎng)春新堿、麥角新堿）、賞窘燒類(lèi)(阿托 品、東賞窘堿）、咪挫類(lèi)(毛果蕓香堿）、哇挫酬類(lèi)(常山堿）、嚷嶺類(lèi)（咖啡堿、茶堿）、醬體類(lèi) (茄堿、浙貝母堿、澳洲茄堿）、二祗類(lèi)(烏頭堿、飛燕草堿）、其它類(lèi)(力爛他敏、雷公藤堿）。
[0003] 桑樹(shù)在我國(guó)的栽培歷史悠久，桑樹(shù)種類(lèi)、品種和種植面積位居世界首位。桑權(quán)是桑 樹(shù)的成熟果實(shí)，桑權(quán)又叫桑果、桑泡兒，農(nóng)人喜歡其成熟的鮮果食用，味甜汁多，是人們常食 的水果之一。桑權(quán)中的氮糖類(lèi)化合物呈現(xiàn)弱堿性，運(yùn)些生物堿類(lèi)均具有良好的降血糖、降血 壓等活性作用。1-脫氧野尻霉素(DNJ)是一種典型的桑生物堿，化學(xué)名稱(chēng)為3,4,5-S徑基-2 徑甲基四氨化晚，是桑葉中特有的天然活性成分，具有高效的藥理活性，可用于治療糖尿 病、肥胖癥、病毒感染等功能。
[0004] 中國(guó)專(zhuān)利"從桑權(quán)中分離制備花色巧單體的方法，授權(quán)號(hào)CN100439384C"公開(kāi)了采 用酸化乙醇浸提桑權(quán)中的花色巧。由于使用酸和乙醇作為提取劑，引入了雜質(zhì)酸，雖然能實(shí) 現(xiàn)提取生物堿的功能，但是不能選擇性提取，也不能在提取過(guò)程中進(jìn)行純化，反而引入了酸 為雜質(zhì)。中國(guó)專(zhuān)利"一種桑權(quán)抗氧化多糖及其制備方法，申請(qǐng)?zhí)?014104733656"采用水提和 堿提相結(jié)合的方式進(jìn)行提取，即先采用水提，得到部分多糖提取液，再對(duì)濾渣進(jìn)行堿提，對(duì) 于生物堿的提取效率較低，不能選擇性提取，也不能在提取過(guò)程中進(jìn)行純化，反而引入了堿 為雜質(zhì)。因此，目前已有的提取方法不能實(shí)現(xiàn)選擇性提取和純化功能。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引解決的技術(shù)問(wèn)題:針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不能選擇性高效提取桑權(quán)生物堿、提取過(guò)程中引 入雜質(zhì)的不足，本發(fā)明提供了一種桑權(quán)生物堿的選擇性提取方法，結(jié)合纖維素基鹽和雙水 相，建立了雙相提取純化的方法，提取的同時(shí)使生物堿得到純化。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明提供的一種桑權(quán)生物堿的選擇性提取方法，包括如下步驟： (1) 將桑權(quán)洗凈，陰干或者冷凍干燥控制水分含量^ 8%，粉碎得到桑權(quán)粉； (2) 浸提劑的制備:取纖維素粉，過(guò)100~200目篩子放入相蝸，置于管式爐中，氮?dú)獗Ｗo(hù) 400~500°C加熱處理1~化，獲得黑灰色固體，然后加入黑灰色固體質(zhì)量1.5-2倍的發(fā)煙硫 酸，80°C加熱處理化W上，用蒸饋水洗涂除去雜質(zhì)，采用濾紙過(guò)濾除去固體，根據(jù)所需浸提 的桑甚質(zhì)量，按照乙醇水溶液體積:桑甚質(zhì)量=2-10ml: lg(v/w)的比例加入乙醇水溶液，得 到浸提劑； (3) 浸提：向步驟(1)所得的桑權(quán)粉中加入步驟(2)制得的浸提劑，所述桑權(quán)粉與浸提劑 的比例為lg:2-10ml(w/v)，50~80°C磁力攬拌1-化得到混合液，然后對(duì)混合液進(jìn)行兩次過(guò) 濾，第一次過(guò)濾采用孔徑為0.5cm的篩網(wǎng)，第二次過(guò)濾采用濾紙或者孔徑為0.45WI1的濾膜， 獲得濾液； (4) 雙相浸提:在步驟(3)所得濾液中加入硫酸錠，所述硫酸錠與濾液的比例為16-30g: 100mL(w/v)，磁力攬拌1-地，靜置待分層，取顏色較深的生物堿層，透析除去雜質(zhì)，得到生物 堿樣品； 巧)調(diào)節(jié)生物堿樣品的抑為8-9，用0.2WI1濾膜過(guò)濾，濾液加入到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，60-80°C 減壓蒸饋，將提取液蒸發(fā)回收，蒸發(fā)器中產(chǎn)品在真空條件下-20~-40°C干燥，得到桑權(quán)生物 堿。
[0007] 步驟(2)所述纖維素為微晶纖維素;所述發(fā)煙硫酸中=氧化硫的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15~ 20〇/〇。
[0008] 步驟(2 )中所述乙醇水溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50~80%;步驟(2 )和(3 )所述濾紙 均為中速雙圈定性濾紙。
【附圖說(shuō)明】
[0009] 圖1為本發(fā)明工藝流程圖； 圖2為實(shí)施例1、2中獲得的乙醇/硫酸錠雙水相相圖； 圖3為實(shí)施例2中獲得的雙相提取系統(tǒng)圖，其中A-上層水相、B-活性物質(zhì)相。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面通過(guò)實(shí)施例的方式進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不因此局限于 下述實(shí)施例，而是由本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)限定。
[00川實(shí)施例1 (1) 取微晶纖維素，過(guò)100目篩子； (2) 取100g微晶纖維素，加入5g氯化鋒； (3) 獲得的樣品放入相蝸里，置于管式爐中，氮?dú)獗Ｗo(hù)500°C加熱處理化，500ml蒸饋水 洗涂3次； (4) 取步驟(3)獲得的樣品，加入20%立氧化硫的發(fā)煙硫酸，80°C加熱攬拌處理化，過(guò)濾 除去酸(硫酸可W重復(fù)使用），加入砂忍漏斗，蒸饋水洗涂直至檢測(cè)不到硫酸根，過(guò)濾，加入 80%的乙醇50ml。
[0012]雙相提取相圖的考察 根據(jù)濁度法繪制乙醇/硫酸錠相圖，硫酸錠濃度范圍為16%-30%。，然后將乙醇滴加到反 應(yīng)器中，每滴一滴均混合5分鐘，當(dāng)添加一滴乙醇使得混合物變渾濁時(shí)，表明第二相的存在， 再滴加一滴乙醇，發(fā)現(xiàn)渾濁變澄清。則開(kāi)始渾濁的時(shí)候的點(diǎn)即為濁點(diǎn)，記錄濁點(diǎn)時(shí)的水總 量，硫酸錠W及乙醇的含量，并按W下方程計(jì)算和繪制相圖曲線。 (公式I)
(公式2) Wi和W2代表乙醇和硫酸錠的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。虹、m2和m3分別代表乙醇，硫酸錠和水的添加量。 [0014] (5 )將20g桑權(quán)洗凈，漸干水分，粉碎得至隱權(quán)粉； (6 )向步驟巧)桑權(quán)粉中加入100mL的浸提劑，50°C磁力攬拌化； (7)采用兩次過(guò)濾，第一次過(guò)濾采用0.5cm篩