一種單克隆抗體在治療神經(jīng)退行性疾病中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明術(shù)語生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，涉及一種單克隆抗體在神經(jīng)退行性疾病中的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茨海默病（Alzheimer's disease，AD)是一種慢性漸進(jìn)性的神經(jīng)退行性疾病， 臨床主要表現(xiàn)為認(rèn)知功能不斷下降，同時(shí)伴有多種行為異常，最終導(dǎo)致死亡。AD主要包括家 族性和散發(fā)性：前者發(fā)病早，與淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein, APP)、早老 素 Upresenilin 1，PS 1)和早老素2(preSenilin 2，PS2)基因突變有關(guān)；后者病例多，多 數(shù)在65歲以后發(fā)病，與載脂蛋白E(Ap〇lip〇pr 〇tein E，Ap〇E)的多態(tài)性有關(guān)。AD目前在所 有死亡原因中居第六位，在65歲以上人群的死亡原因中居第五位。2010年，全球AD病例 有3600萬；到2030年，可能會(huì)達(dá)到6600萬；到2050年，可能會(huì)達(dá)到11500萬。AD的發(fā)病 原因非常復(fù)雜，至今尚未確切闡明。
[0003] 目前臨床上AD的主要治療藥物為多奈哌齊，該藥為膽堿酯酶抑制劑，通過減少乙 酰膽堿的降解而發(fā)揮改善學(xué)習(xí)記憶的作用，只能夠緩解AD病人的學(xué)習(xí)記憶損傷癥狀，并不 能減輕神經(jīng)炎癥、老年斑沉積等病理損傷。
[0004] 因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種療效更好、副作用少的治療神經(jīng)退行性疾病的藥 物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種療效更好、副作用少的治療神經(jīng)退行性疾病的藥物。
[0006] 在本發(fā)明的第一方面，提供了一種單克隆抗體的用途，所述單克隆抗體用于制備 治療神經(jīng)退行性疾病的藥物組合物，其中所述的單克隆抗體具有如SEQ ID N0. :1所示序 列。
[0007] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物含有SEQ ID N0. :1所示序列的單克隆抗體， 和藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 在另一優(yōu)選例中，所述的神經(jīng)退行性疾病選自下組：阿爾茨海默病、帕金森氏病和 腦中風(fēng)等（Αβ誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶障礙、LPS誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶障礙）。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物中所述單克隆抗體的濃度為l-100mg/ml。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體的施用劑量為0. l-100mg/kg。 toon] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還用于：（i)抑制炎癥因子與受體結(jié)合和/或
[11] 抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和活化；和/或（iii)抑制炎癥因子分泌。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述炎癥因子選自下組：IL-l、IL-2、和IL-6。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物的劑型包括：注射劑、凍干粉。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物為注射劑，并優(yōu)選地含有：
[0015] (i)治療有效量的抗TNF-α抗體（即SEQ ID NO. : 1所示序列的單克隆抗體）；
[0016] (ii)含〇· 8-6. 2mg/ml組氨酸的緩沖體系；
[0017] (iii)滲透壓調(diào)節(jié)劑；以及
[0018] (iv)表面活性劑，
[0019] 其中，所述制劑的pH為5. 5-6. 5。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述抗TNF- α抗體的濃度為40-60mg/ml。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，所述抗TNF-α抗體的濃度為45-55mg/ml，優(yōu)選為48-52mg/ml， 最優(yōu)選為50mg/ml。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述組氨酸的濃度為1. 6-5. Omg/ml，優(yōu)選為3. 0-3. 8mg/ml。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，所述組氨酸的pH為5. 5-6. 5,優(yōu)選為5. 8-6. 2。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，所述抗TNF-a抗體為單克隆抗體。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體為全長(zhǎng)抗體。
[0026] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體為IgGl抗體。
[0027] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體為人源化抗體。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體為包含抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，所述抗體片段為Fab或F(ab' )2片段。
[0030] 在另一優(yōu)選例中,所述單克隆抗體結(jié)合TNF- α。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，所述抗TNF-α抗體選自：阿達(dá)木單抗（adalimumab)、英夫利昔 單抗（infliximab)、戈利木單抗（Golimumab)。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述抗TNF-α抗體為SEQ ID NO. :1所示序列的單克隆抗體。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，所述制劑的pH為5. 8-6. 2,優(yōu)選為5. 9-6. 1，最優(yōu)選為6. 0。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑包括多元醇和氯化鈉。
[0035] 在另一優(yōu)選例中，所述多元醇為甘露醇或山梨醇。
[0036] 在另一優(yōu)選例中，所述多元醇的濃度為8-20mg/ml，優(yōu)選為10-15mg/ml。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述NaCl的濃度為2-10mg/ml，優(yōu)選為4-8mg/ml，更優(yōu)選為 5. 5-6. 5mg/ml 〇
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述表面活性劑的濃度為0· 6-1. Omg/ml，優(yōu)選為0· 8-1. Omg/ ml〇
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述表面活性劑為聚山梨酯。
[0040] 在另一優(yōu)選例中，所述聚山梨酯為聚山梨酯80。
[0041] 在另一優(yōu)選例中，所述制劑具有下組的一種或多種特征：
[0042] (a)所述制劑在2-8 °C可保存至少2年；
[0043] (b)所述制劑適合皮下注射。
[0044] 在另一優(yōu)選例中，所述制劑包括：
[0045] (a)40_60/ml抗TNF-α單克隆抗體（即SEQ ID N0. :1所示序列的單克隆抗體）；
[0046] (b) 0· 8-6. 2mg/ml 組氨酸；
[0047] (c) 8_20mg/ml 多兀醇；
[0048] (d) 2-10mg/mlNaCl ；
[0049] (e)0· 6_1· 0mg/ml 聚山梨酯，
[0050] 并且所述制劑的pH為5· 5-6. 5。
[0051 ] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中不含檸檬酸。
[0052] 在另一優(yōu)選例中，所述的單克隆抗體由CH0細(xì)胞表達(dá)，經(jīng)純化獲得。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，所述治療神經(jīng)退行性疾病的治療效果呈劑量依賴型。
[0054] 本發(fā)明第二方面提供了一種治療神經(jīng)退行性疾病的藥物組合物，所述的藥物組合 物含有安全有效量的SEQ ID N0. :1所示序列的單克隆抗體，和藥學(xué)上可接受的載體。
[0055] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物包括：
[0056] ⑴治療有效量的抗TNF-α抗體（即SEQ ID NO. : 1所示序列的單克隆抗體）；
[0057] (ii)含0· 8-6. 2mg/ml組氨酸的緩沖體系；
[0058] α ?)滲透壓調(diào)節(jié)劑；以及
[0059] (iv)表面活性劑，
[0060] 其中，所述制劑的pH為5. 5-6. 5。
[0061] 本發(fā)明的第三方面提供了一種治療神經(jīng)退行性疾病的方法，所述方法包括步驟： 將具有SEQ ID N0. :1所示序列的單克隆抗體或其藥物組合物施用于需要的對(duì)象。
[0062] 在另一優(yōu)選例中，所述的需要的對(duì)象為哺乳動(dòng)物，例如人、非人靈長(zhǎng)類、大鼠、小 鼠。
[0063] 本發(fā)明的第四方面提供了一種體外非治療性的抑制炎癥因子分泌的方法，所述方 法包括步驟：
[0064] 在SEQ ID NO. : 1所示單克隆抗體的存在下，培養(yǎng)細(xì)胞，從而抑制所述細(xì)胞分泌炎 癥因子。
[0065] 在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞包括小膠質(zhì)細(xì)胞。
[0066] 在另一優(yōu)選例中，所述炎癥因子包括下組：IL_1、IL-2、和IL-6。
[0067] 本發(fā)明第五方面提供了一種體外非治療性的抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和/或活化 的方法，所述方法包括步驟：
[0068] 在SEQ ID N0. :1所示單克隆抗體的存在下，培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞，從而抑制所述小膠 質(zhì)細(xì)胞的增殖和/或活化。
[0069] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0070] 圖1顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體與TNF-a的結(jié)合動(dòng)力學(xué)曲線。
[0071] 圖2顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體與不同種類細(xì)胞因子的結(jié)合情 況比較。
[0072] 圖3顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體對(duì)TNF-a與重組p55或p75 結(jié)合的抑制作用。
[0073] 圖4顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體對(duì)TNF- a介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的 中和作用。
[0074] 圖5顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體對(duì)〇Αβ142誘導(dǎo)學(xué)習(xí)記憶 損傷小鼠在Υ迷宮中自發(fā)交替反應(yīng)率的影響。###Ρ〈〇. 001，與saline組比較；*ρ〈0. 05， **ρ〈0· 01，與 οΑβ i 42組比較。
[0075] 圖6顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對(duì)〇Α β i 42誘導(dǎo)小鼠海馬內(nèi)小 膠質(zhì)細(xì)胞活化的抑制作用。A :saline組；Β :〇Αβ i 42組；C :重組人抗腫瘤壞死因子-ct單 克隆抗體5mg/kg組；D :重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體15mg/kg組；E :重組人抗腫 瘤壞死因子-α單克隆抗體50mg/kg組；F:多奈哌齊5mg/kg組。###p〈0. 001，與saline組 比較；*ρ〈〇· 05, **ρ〈0· 01，***ρ〈0· 001，與 οΑβ i 42組比較。
[0076] 圖7顯示了重組人抗腫瘤壞死因子- α單克隆抗體對(duì)〇Αβ i 42誘導(dǎo)學(xué)習(xí)記憶損傷 小鼠海馬內(nèi)TNF-α水平的影響。###p〈〇. 〇〇1，與saline組比較；*p〈0. 05, #p〈0. 01，與 〇Αβ i 42組比較。
[0077] 圖8顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對(duì)LPS誘導(dǎo)學(xué)習(xí)記憶損傷小鼠 在Υ迷宮中自發(fā)交替反應(yīng)率的影響。###Ρ〈〇. 001，與saline組比較；*#ρ〈0. 001，與LPS組 比較。
[0078] 圖9顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠海馬內(nèi)小膠質(zhì) 細(xì)胞活化的抑制作用。A:saline組；B:LPS組；C:重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體 5mg/kg組；D :重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體15mg/kg組；Ε :重組人抗腫瘤壞死因 子- α單克隆抗體50mg/kg組；F :米諾環(huán)素50mg/kg組。###p〈0. 001，與saline組比較； ***p〈0. 001，與 LPS 組比較。
[0079] 圖10顯示了重組人抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對(duì)LPS誘導(dǎo)學(xué)習(xí)