專利名稱：作為神經(jīng)退行性疾病診斷/預(yù)后指示物的谷氨酰胺酰環(huán)化酶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用谷氨酰胺酰環(huán)化酶作為診斷/預(yù)后指示物預(yù)測、診斷和預(yù)后神經(jīng)退 行性疾病的方法，所述神經(jīng)退行性疾病例如為阿爾茨海默氏病(AD)、輕度認(rèn)知障礙(MCI) 和唐氏綜合癥的神經(jīng)退行性變(NDS)。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默病(AD)是一種導(dǎo)致癡呆的神經(jīng)退行性疾病。術(shù)語“阿爾茨海默病” 和“阿爾茨海默氏病”在本領(lǐng)域都被使用，這些術(shù)語是等價的并到處可互換使用。第一次 檢測出AD到死亡的時期可以從幾年到15年，在此期間患者遭受日益增加的失去精神功能 和身體控制功能的痛苦。疾病的進展具有顯著的可變性。大多數(shù)患者的進展是逐漸而不 可動搖(在30分的Folstein簡易精神狀態(tài)計分中每年平均失去3到4分)，大約30%的 AD病例有持續(xù)幾年的延長的穩(wěn)定初始平臺期(Haxby J. V.等，Individual trajectories ofcognitive decline in patients with dementia of the Alzheimer type, J. Clin. Exp. Neuropsychol 14 =575-592,1992.) 0小群患者有在幾年間爆發(fā)性的、迅速進展的下坡病程 (Mann, U.等，Heterogeneity in Alzheimer' s disease :Progressionrate segregated by distinct neuropsychological and cerebral metabolic profiles, J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 55 :956_959，1992)。其他患者(大約同類群的10% )維持緩慢進 展，僅顯現(xiàn)一年接一年的逐步下降(Grossi，D.等，Seniledementias, II International Symposium (pp. 97-99)，Paris John Libbey Eurotext，1988.)。該異質(zhì)性的病理學(xué)、化學(xué) 和分子基礎(chǔ)未明確。對AD進展可變性的識別代表了重要的臨床認(rèn)識，可以解釋由“非典型” 病例所呈現(xiàn)的診斷困難。盡管在某些病例中AD疾病有家族性現(xiàn)象，但看來大部分AD病例 是非家族性的，直到最近都沒有鑒定出該病的簡單的生物學(xué)標(biāo)記物(見下文)。現(xiàn)有的用于診斷AD的方法包括分析從死后的患者獲得的腦脊髓液(CSF)或大 腦組織。因此，目前考慮中的標(biāo)記物與可以解釋從尸體檢查發(fā)現(xiàn)的阿爾茨海默大腦的特 征的蛋白質(zhì)相關(guān)。神經(jīng)原纖維纏結(jié)主要由超磷酸化的tau蛋白(一種細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)) 構(gòu)成。神經(jīng)炎性斑含有一個淀粉樣蛋白核心，所述淀粉樣蛋白許多是由較大的前體蛋白 質(zhì)溶蛋白性裂解產(chǎn)生的42個氨基酸的肽(Αβ42)。來自相同前體的該蛋白質(zhì)另一形式只 含有40個氨基酸(Αβ4。)。在AD受害者的大腦中發(fā)現(xiàn)該蛋白質(zhì)的沉積。但是，tau和上 述β淀粉樣肽的改變的發(fā)生頻率和強度不足以提供診斷價值，因此，基于這些蛋白質(zhì)的 血液檢驗看起來與AD沒有很好的相關(guān)。除C端可變性外，N端修飾的Αβ肽是冗余的 (Saido，Τ. C.等 Dominant and differentialdeposition of distinct beta-amyloid peptide species，Aβ N3(pE), in senile plaques. Neuron 14,457-466(1995) ；Russo， C.等 Presenilin-Imutations in Alzheimer ' sdisease. Nature 405，531-532(2000)； Saido, T.C.，Yamao, H.，Iwatsubo，Τ.禾口 Kawashima，S. Amino-and carboxyl-terminal heterogeneity of beta-amyloidpeptides deposited in human brain. Neurosci. Lett. 215，173-176(1996))。大部分的Αβ肽通過兩個氨基酸進行N端截短，暴露出一個谷氨酸殘基，接著被環(huán)化成焦谷氨酸(PE)，產(chǎn)生Αβ3(ρΕ)-42肽(Saido，Τ. C.等Dominant anddifferential deposition of distinct beta-amyloid peptide species,A β N3(pE), insenile plaques. Neuron 14,457-466 (1995) ；Saido, T. C., Yamao, H. , Iwatsubo, T.禾口 Kawashima, S. Amino-and carboxyl-terminal heterogeneity of beta-amyloidpeptides deposited in human brain. Neurosci. Lett. 215，173-176 (1996))?；蛘?，pE 可以隨著 BACEl 的 β，-裂解形成，產(chǎn)生 A3Nll(pE)-42(Naslund，J.等 Relative abundance of Alzheimer A β amyloid peptide variants in Alzheimerdisease and normal aging. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 91,8378-8382(1994) ；Liu, K.等 Characterization of Aβ ll_40/42peptide deposition in Alzheimer ' sdisease and young Down ' s syndrome brains !implication of N-terminallytruncated Abeta species in the pathogenesis of Alzheimer' s disease. ActaNeuropathol. 112,163-174(2006))。具體 而言，ΑβΝ3 (pE)-42已被顯示為散發(fā)的和家族性的AD中Αβ沉積物的主要成分(Saido， Τ. C.等 Dominant anddifferential deposition of distinct beta-amyloid peptide species，A β N3(pE), insenile plaques. Neuron 14,457-466 (1995) ；Miravalle，L 等 Amino-terminallytruncated A β peptide species are the main component of cotton wool plaques. Biochemistry 44，10810—10821 (2005))。ΑβΝ3ρΕ-42 肽和 A β 1-40/1-42 肽共同存在(Saido，Τ. C.等 Dominant anddifferential deposition of distinct beta-amyloid peptide species， Abeta N3pE，insenile plaques. Neuron 14,457-466 (1995) ；Saido, T. C. , Yamao, H.，Iwatsubo，T.禾口 Kawashima，S. Amino-and carboxyl-terminal heterogeneity of beta-amyloidpeptides deposited in human brain.Neurosci.Lett.215， 173-176(1996))，并且，基于許多觀察，能夠在AD的發(fā)病機制中起主要作用。例如， A β Ν3ρΕ-42肽特別的神經(jīng)毒性已經(jīng)被概述(Russo，C.等Pyroglutamate-modif ied a myloidbeta-peptides—AbetaN3(pE)—strongly affect cultured neuron and astrocytesurvival. J. Neurochem. 82,1480-1489 (2002)),而 N 端截短的 Αβ 肽 的PE-修飾賦予了對大多數(shù)氨肽酶和Αβ-降解內(nèi)肽酶的降解的抗性(Russo，C.等 Pyroglutamate-modified amyloid beta-peptides—AbetaN3(ρΕ) —strongly affectcultured neuron and astrocyte survival. J. Neurochem. 82,1480-1489(2002)； Saido, T. C. Alzheimer ' s disease as proteolytic disorders :anabolism andcatabolism of beta-amyloid. Neurobiol. Aging 19，S69-S75 (1998))。谷氨酸環(huán)化 成pE導(dǎo)致N端電荷缺失，造成A β Ν3ρΕ與未修飾A β肽相比加速聚集(He，W.和Barrow， C.J. The Aβ 3-pyroglutamyl and 11-pyroglutamyl peptides foundin senile plaque have greater beta-sheet forming and aggregation propensities invitro than full-length A β .Biochemistry 38,10871-10877(1999) ；Schilling, S.等 On the seeding and oligomerization of pGlu-amyloid peptides(in vitro).Biochemistry 45,12393-12399 (2006)) ο因此，A β N3pE_42形成的減少應(yīng)該通過讓該肽更易于降解而使 其不穩(wěn)定，隨后，會防止更高分子量的A β聚集物形成而增加神經(jīng)元存活。然而，很長一段時間都不知道Αβ肽的pE-修飾如何發(fā)生。本申請人發(fā)現(xiàn)谷 氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)能夠在弱酸性環(huán)境催化ΑβΝ3ρΕ-42形成，特異性的QC抑制劑在體外防止ΑβΝ3ρΕ_42產(chǎn)生，因此，抑制谷氨酰胺酰環(huán)化酶是阿爾茨海默病成因性治療 新的治療才既念(Schilling, S. ，Hoffmann, Τ. ，Manhart, S. ，Hoffmann, Μ.禾口 Demuth， H.-U.Glutaminyl cyclases unfoldglutamyl cyclase activity under mild acid conditions. FEBS Lett. 563,191-196(2004) ；Cynis, H.等 Inhibition of glutaminyl cyclase alters pyroglutamateformation in mammalian cells.Biochim. Biophys. Acta 1764,1618-1625(2006) ；Schilling 等 Inhibition of glutaminyl cyclase-a novel therapeutic concept forthe causative treatment of Alzheimer' s disease. Nature Medicine 14,1106-1111(2008))。目前，對已經(jīng)出現(xiàn)的AD，或?qū)τ陔m然表現(xiàn)出正常認(rèn)知應(yīng)答但不可避免或很大可能 患上AD的對象，看起來沒有令人滿意的診斷標(biāo)記物。年齡相關(guān)性認(rèn)知衰退(AACD)和輕度認(rèn)知障礙(MCI)是用于識別有認(rèn)知衰退而未 達(dá)到癡呆的個體的術(shù)語。這些術(shù)語是等價的，在本申請全文可互換使用，MCI是更新近被采 用的術(shù)語。診斷標(biāo)準(zhǔn)(世界衛(wèi)生組織)的滿足要求由患者或家屬提供至少出現(xiàn)了六個月的 逐步的認(rèn)知功能衰退的報告。要涵蓋任何認(rèn)知域可能存在困難(盡管在大部分的病例中記 憶受到損害)，而且這必須有量化認(rèn)知評估中的不正常表現(xiàn)的支持，所述量化認(rèn)知評估中其 年齡和教育標(biāo)準(zhǔn)對相對健康個體適用(即患者和與其自身年齡一樣的正常對象比較)。在 此類測試中，表現(xiàn)必須低于合適的群體的平均值一個標(biāo)準(zhǔn)差。不應(yīng)存在癡呆和顯著抑郁或 藥物效應(yīng)。不應(yīng)存在大腦或系統(tǒng)性疾病或已知的導(dǎo)致大腦認(rèn)知功能障礙的狀況。在申請人 的經(jīng)驗中，被歸類為臨床癡呆評定量表的⑶R.5( “可疑癡呆”)和符合這些例外的所有患 者也符合AACD/MCI的標(biāo)準(zhǔn)。大約1/3的阿爾茨海默病患者有過可清楚定義的單獨的記憶 缺損時期，出現(xiàn)在其更全面的認(rèn)知衰退之前(Haxby J. V.等，Individual trajectories of cognitive decline in patients with dementia of theAlzheimer type, J.Clin. Exp. Neuropsychology 14 =575-592,1992.)。使用除記憶外還看其它域的AACD/MCI標(biāo)準(zhǔn)，可識 別前驅(qū)癥狀的比例可能更高。幸運的是，似乎不是所有AACD/MCI個體都衰退?？雌饋碛酗@ 著數(shù)量的這些對象在測試中顯現(xiàn)穩(wěn)定、非進行性的記憶缺損。預(yù)測AD、MCI和NDS起始或監(jiān)測其進程的嘗試只獲得有限的成功。本申請的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，從對象獲得的生物學(xué)樣品中的QC量偏離在對照者中的參 考量，可以與神經(jīng)系統(tǒng)疾病狀態(tài)正相關(guān)。因此，對于患有一種上述神經(jīng)退行性疾病的患者的 診斷，QC的存在與疾病狀態(tài)的相關(guān)性代表了一種正向的和更直接的測試。從而，本發(fā)明提供了用QC作為診斷標(biāo)記物預(yù)測、診斷或預(yù)后AD、MCI和NDS的易于 實施的生物學(xué)樣品測試。發(fā)明概述本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)與獲得自正常(即健康的)對照對象的谷氨酰胺酰環(huán)化酶 (QC)的量相比，獲得自患有AD或MCI的對象生物學(xué)樣品中的QC的量被提高。AD、MCI或NDS和正常對照之間QC量不同的指示形成了開發(fā)用于診斷這些神經(jīng)系 統(tǒng)疾病的測試的基礎(chǔ)。因而，本發(fā)明中通過測量患者樣品中QC量而診斷AD、MCI或NDS的 方法會大大地改進現(xiàn)有的對患有這些神經(jīng)退行性疾病患者的臨床診斷評估?；谧罱l(fā)現(xiàn)的存在于獲得自患者的生物學(xué)樣品中的QC量與正常對照之間的差 異，可以建立QC量與神經(jīng)退行性疾病可能的診斷的強相關(guān)性。QC量相對于對照樣品統(tǒng)計學(xué)顯著的提高是患者患有AD、MCI或NDS的合理預(yù)示。正常QC量，其由分離自正常年齡匹配 群體的對照QC樣品中的特征性QC量所決定，指示患者沒有患例如AD、MCI或NDS的神經(jīng)退 行性疾病。以生物學(xué)樣品中相對于正常對照QC提高或降低的量為基礎(chǔ)的神經(jīng)退行性疾病 的陽性指示，一般與其它因素一起考慮以對具體疾病作最終決定。因此，在作出神經(jīng)退行性 疾病的決定性診斷中，被測試的對象的提高或降低的QC水平通常會和其它AD、MCI或NDS 相關(guān)疾病的公認(rèn)的臨床癥狀一起考慮。因此，根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，提供了診斷對象的可能的阿爾茨海默病(AD)、唐 氏綜合癥的神經(jīng)退行性變(NDS)或輕度認(rèn)知障礙(MCI)的方法，所述方法包括(a)檢測獲得自所述對象的生物學(xué)樣品中的谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型 的量；和(b)將檢測出的生物學(xué)樣品中的QC量與正常對照特征性的QC量相比較；由此相對于正常對照而言，所述生物學(xué)樣品中QC提高的量是AD或MCI的陽性指 示物。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，生物學(xué)樣品是體液樣品，例如血清、血漿、尿或 腦脊液。更優(yōu)選地，體液樣品是血漿。 根據(jù)本發(fā)明的另外一個實施方案，QC量基于QC蛋白質(zhì)水平或QCmRNA水平而檢測。檢測或定量對象的生物學(xué)樣品中的QC量可以通過本領(lǐng)域公知的任何手段實現(xiàn)。 這些手段可以包括但不限于例如免疫比濁法、免疫熒光法、免疫擴散、酶聯(lián)免疫吸附測定 法(ELISA)、放射免疫測定法(RIA)、蛋白質(zhì)印跡、蛋白質(zhì)活性測定法，或者，對于QC的mRNA 水平的測定，Northern印跡、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分析，例如實時PCR。同樣可用的是高 效液相色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)和氣相色譜(GC)，以及其多種配置，包括氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用(GC-MS)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)系統(tǒng)。優(yōu)選地，生物學(xué)樣品中的QC量用以免疫測定形式結(jié)合QC的抗體測定。因此，根據(jù) 本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方案，提供了診斷對象的神經(jīng)退行性疾病的方法，該方法包括(a)從所述對象獲得生物學(xué)樣品；(b)將所述生物學(xué)樣品與結(jié)合谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的抗體接觸；(c)使得抗體與QC形成免疫復(fù)合物；和(d)檢測形成的作為所述生物學(xué)樣品中QC量指示的免疫復(fù)合物量；和(e)將檢測出的量與正常對照比較，由此相對于正常對照提高或降低的檢測量是神經(jīng)退行性疾病的陽性指示物。根據(jù)本發(fā)明仍另外的一個方面，提供了測定對象是否正患有神經(jīng)退行性疾病的診 斷試劑盒，包括結(jié)合QC的抗體和正常對照特征性QC量的確定的標(biāo)準(zhǔn)。實施該方法的試劑 和說明也包含其中。附圖簡述

圖1 圖1(a)顯示應(yīng)用定量RT-PCR的QC轉(zhuǎn)錄本水平分析。人新皮層大腦樣品 (布魯?shù)侣鼌^(qū)22)的總RNA分離自如標(biāo)示的正常老化的和處于不同Braak階段的AD的大 腦。QC轉(zhuǎn)錄本水平標(biāo)準(zhǔn)化至管家轉(zhuǎn)錄本濃度。圖1(b)顯示對QC的蛋白質(zhì)印跡分析，所述 QC來自和用于QC mRNA分析相同的病例和大腦區(qū)域。圖1(c)顯示來自于相同的病例和大 腦區(qū)域的A β N3 (ρΕ) -42 (標(biāo)示為A β 3(ρΕ)_42)和A β 1-42 (Α β ^42)濃度的定量，其應(yīng)用ELISA對人新皮層大腦樣品中的SDS-和甲酸抽提物進行分析。注意在早期AD時期，與Αβ 1-42 肽的十分溫和的增加相比，ΑβΝ3(ρΕ)-42肽濃度的強增加。圖1(d)顯示對來自正常老化 對象和不同AD階段的布魯?shù)侣鼌^(qū)22總A β肽(通過4G8抗體)和A β Ν3 (ρΕ) -42肽的免 疫組織化學(xué)檢測。在正常老化中檢測到稀疏的A β斑，但這些沉積物缺乏A β Ν3(ρΕ)-42免 疫反應(yīng)性。然而，在所有AD階段中，大多數(shù)A β斑含有ΑβΝ3(ρΕ)-42肽。圖2顯示對受激的THP-I細(xì)胞中QC和CCL2基因表達(dá)率的測定結(jié)果。圖3顯示對THP-I細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中QC比活性的測定結(jié)果。淀粉樣蛋白肽和 趨化因子的序列
權(quán)利要求
1.一種診斷對象的阿爾茨海默氏病(AD)、唐氏綜合癥的神經(jīng)退行性變(NDS)或輕度認(rèn) 知障礙(MCI)的方法，所述方法包括(a)檢測獲得自所述對象的生物學(xué)樣品中的谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的量；禾口(b)將檢測出的生物學(xué)樣品中的QC量與正常對照特征性的QC量相比較；由此相對于正常對照而言，所述生物學(xué)樣品中的QC提高的量是AD、NDS或MCI的陽性 指示物。
2.—種診斷對象的阿爾茨海默氏病(AD)、唐氏綜合癥的神經(jīng)退行性變(NDS)或輕度認(rèn) 知障礙(MCI)的方法，所述方法包括(a)檢測來自所述對象的生物學(xué)樣品中的谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的量；和(b)進一步檢測Aβ Ν3ρΕ-Χ的量，(c)將檢測出的生物學(xué)樣品中的QC和Aβ Ν3ρΕ-Χ量與正常對照特征性的QC和 A β Ν3ρΕ-Χ量相比較；由此相對于正常對照而言，所述生物學(xué)樣品中QC和A β Ν3ρΕ-Χ提高的量是AD、NDS或 MCI的陽性指示物，其中X是選自38、40和42的整數(shù)。
3.—種診斷對象的阿爾茨海默氏病(AD)、唐氏綜合癥的神經(jīng)退行性變(NDS)或輕度認(rèn) 知障礙(MCI)的方法，所述方法包括(a)檢測來自所述對象的生物學(xué)樣品中的谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的量；和(b)進一步檢測趨化因子的量，(c)將檢測出的生物學(xué)樣品中的QC和趨化因子量與正常對照特征性的QC和趨化因子 量相比較；由此相對于正常對照而言，所述生物學(xué)樣品中QC和趨化因子提高的量是AD、NDS或MCI 的陽性指示物。
4.前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述QC是人QC或其同種型，其具有選自SEQID NO 1、2、3、4和5的氨基酸序列。
5.前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述QC是SEQID N0:1的人QC。
6.前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述生物學(xué)樣品是血清、血漿、尿或腦脊液。
7.前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述生物學(xué)樣品是血漿。
8.前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中通過免疫比濁法、免疫熒光法、免疫擴散、酶聯(lián) 免疫吸附測定法(ELISA)、放射免疫測定法(RIA)、蛋白質(zhì)印跡、蛋白活性測定、Northern印 跡、PCR、高效液相色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)、氣相色譜(GC)、GC-MS, LC-MS或LC-MS/MS檢測 QC的量。
9.前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中基于所述QC或其同種型的蛋白質(zhì)水平檢測QC 或其同種型的量。
10.前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中用特異性地結(jié)合QC或其同種型的抗體檢測QC的量。
11.前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中通過測量QC或其同種型的酶活性檢測QC的量。
12.權(quán)利要求1-8中任一項的方法，其中基于所述QC或其同種型的mRNA水平檢測QC或其同種型的量。
13.權(quán)利要求2和4-12中任一項的方法，其中X是42。
14.權(quán)利要求2和4-12中任一項的方法，其中X是40。
15.權(quán)利要求2和4-12中任一項的方法，其中X是38。
16.權(quán)利要求2和4-12中任一項的方法，其中不僅單一形式的N端截短和焦谷氨酸化 的淀粉樣 β 肽，而且 A β Ν3ρΕ-42 和 / 或 A β Ν3ρΕ_40 和 / 或 A β Ν3ρΕ_38 和 pGluABri 和 / 或pGluADan的組合，和QC —起被檢測。
17.權(quán)利要求3-12中任一項的方法，其中所述趨化因子選自CCL2、CCL7、CCL8、 CCL9/10、CCL13、CCL15、CCL16、CCL25 和 Fractalkine0
18.權(quán)利要求3-12中任一項的方法，其中所述趨化因子是CCL2。
19.一種診斷對象的神經(jīng)退行性疾病的方法，所述方法包括(a)從所述對象獲得生物學(xué)樣品；(b)將所述生物學(xué)樣品與結(jié)合谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的抗體接觸；(c)使得抗體與QC形成免疫復(fù)合物；和(d)檢測形成的作為所述生物學(xué)樣品中QC量指示的免疫復(fù)合物量；和(e)將檢測出的量與來自正常對照對象的樣品比較，由此相對于正常對照提高或降低的檢測量是神經(jīng)退行性疾病的陽性指示物。
20.權(quán)利要求19中的方法，其中相對于正常對照提高的檢測量是AD的陽性指示物。
21.權(quán)利要求19中的方法，其中相對于正常對照提高的檢測量是MCI的陽性指示物。
22.權(quán)利要求19中的方法，其中相對于正常對照提高的檢測量是NDS的陽性指示物。
23.一種在來自對象的生物學(xué)樣品中診斷阿爾茨海默氏病(AD)、唐氏綜合癥的神經(jīng)退 行性變(NDS)或輕度認(rèn)知障礙(MCI)的體外方法，所述方法包括(a)檢測所述生物學(xué)樣品中谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的量；和(b)將檢測出的生物學(xué)樣品中的QC量與正常對照特征性的QC量相比較；由此相對于正常對照而言，所述生物學(xué)樣品中QC提高的量是AD、NDS或MCI的陽性指 示物。
24.一種在來自對象的生物學(xué)樣品中診斷阿爾茨海默氏病(AD)、唐氏綜合癥的神經(jīng)退 行性變(NDS)或輕度認(rèn)知障礙(MCI)的體外方法，所述方法包括(a)檢測來自所述對象的生物學(xué)樣品中的谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的量；和(b)進一步檢測Aβ Ν3ρΕ-Χ的量，(c)將檢測出的生物學(xué)樣品中的QC和ΑβΝ3ρΕ-Χ量與正常對照特征性的QC和 A β Ν3ρΕ-Χ量相比較；由此相對于正常對照而言，所述生物學(xué)樣品中QC和A β Ν3ρΕ-Χ提高的量是AD、NDS或 MCI的陽性指示物，其中X是選自38、40和42的整數(shù)。
25.—種在來自對象的生物學(xué)樣品中診斷阿爾茨海默氏病(AD)、唐氏綜合癥的神經(jīng)退 行性變(NDS)或輕度認(rèn)知障礙(MCI)的體外方法，所述方法包括(a)檢測來自所述對象的生物學(xué)樣品中的谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的量；和(b)進一步檢測趨化因子的量，(c)將檢測出的生物學(xué)樣品中的QC和趨化因子量與正常對照特征性的QC和趨化因子量相比較；由此相對于正常對照而言，所述生物學(xué)樣品中QC和趨化因子提高的量是AD、NDS或MCI 的陽性指示物。
26.權(quán)利要求23、24或25中任一項的體外方法，其中所述QC是人QC或其同種型，其具 有選自SEQ ID NO :1、2、3、4和5的氨基酸序列。
27.權(quán)利要求23-26中任一項的體外方法，其中所述QC是SEQID NO 1的人QC。
28.權(quán)利要求中23-27中任一項的體外方法，其中所述生物學(xué)樣品是血清、血漿、尿或 腦脊液。
29.權(quán)利要求23-28中任一項的體外方法，其中所述生物學(xué)樣品是血漿。
30.權(quán)利要求23-29中任一項的體外方法，其中通過免疫比濁法、免疫熒光法、免疫 擴散、酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、放射免疫測定法(RIA)、蛋白質(zhì)印跡、蛋白活性測定、 Northern印跡、PCR、高效液相色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)、氣相色譜(GC)、GC-MS、LC-MS或 LC-MS/MS檢測QC的量。
31.權(quán)利要求23-30中任一項的體外方法，其中基于所述QC或其同種型的蛋白質(zhì)水平 檢測QC或其同種型的量。
32.權(quán)利要求23-31中任一項的體外方法，其中用特異性地結(jié)合QC或其同種型的抗體 檢測QC的量。
33.權(quán)利要求23-30中任一項的體外方法，其中通過測量QC或其同種型的酶活性檢測 QC的量。
34.權(quán)利要求23-30中任一項的體外方法，其中基于所述QC或其同種型的mRNA水平檢 測QC或其同種型的量。
35.權(quán)利要求24和26-34中任一項的體外方法，其中X是42。
36.權(quán)利要求24和26-34中任一項的體外方法，其中X是40。
37.權(quán)利要求24和26-34中任一項的體外方法，其中X是38。
38.權(quán)利要求24和26-34中任一項的體外方法，其中不僅單一形式的N端截短和焦 谷氨酸化的淀粉樣β肽，而且A β Ν3ρΕ-42和/或A β Ν3ρΕ-40和/或A β Ν3ρΕ_38和/或 PGluABri和/或pGluADan的組合，和QC —起被檢測。
39.權(quán)利要求25-34中任一項的體外方法，其中所述趨化因子選自CCL2、CCL7、CCL8、 CCL9/10、CCL13、CCL15、CCL16、CCL25 和 Fractalkine0
40.權(quán)利要求25-34中任一項的體外方法，其中所述趨化因子是CCL2。
41.一種在來自對象的生物學(xué)樣品中診斷神經(jīng)退行性疾病的體外方法，所述方法包括(a)使所述生物學(xué)樣品與結(jié)合谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的抗體接觸；(b)使得抗體與QC形成免疫復(fù)合物；和(c)檢測形成的作為所述生物學(xué)樣品中QC量指示的免疫復(fù)合物量；和(d)將檢測出的量與來自正常對照對象的樣品比較，由此相對于正常對照提高或降低的檢測量是神經(jīng)退行性疾病的陽性指示物。
42.權(quán)利要求41中的體外方法，其中相對于正常對照提高的檢測量是AD的陽性指示物。
43.權(quán)利要求41中的體外方法，其中相對于正常對照提高的檢測量是MCI的陽性指示物。
44.權(quán)利要求41中的體外方法，其中相對于正常對照提高的檢測量是NDS的陽性指示物。
45.一種診斷神經(jīng)退行性疾病的試劑盒，其包括結(jié)合QC的抗體和正常對照特征性的QC 量的已制定的標(biāo)準(zhǔn)。
46.一種使用結(jié)合作為生物學(xué)標(biāo)記物的谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的抗體來 診斷神經(jīng)退行性疾病的方法，所述使用方法包括使獲得自對象的生物學(xué)樣品與所述抗體接 觸而測定樣品中的QC量。
47.結(jié)合作為生物學(xué)標(biāo)記物的谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)或其同種型的抗體在診斷神經(jīng) 退行性疾病中的用途。
48.權(quán)利要求45-47中任一項的試劑盒、方法或用途，其中神經(jīng)退行性疾病是AD。
49.權(quán)利要求45-47中任一項的試劑盒、方法或用途，其中神經(jīng)退行性疾病是MCI。
50.權(quán)利要求45-47中任一項的試劑盒、方法或用途，其中神經(jīng)退行性疾病是NDS。
全文摘要
本發(fā)明涉及用谷氨酰胺酰環(huán)化酶(QC)作為診斷/預(yù)后指示物預(yù)測、診斷和預(yù)后神經(jīng)退行性疾病的方法，所述神經(jīng)退行性疾病例如為阿爾茨海默氏病(AD)、輕度認(rèn)知障礙(MCI)和唐氏綜合癥的神經(jīng)退行性變(NDS)。還提供了用于施行所述診斷方法的結(jié)合QC的抗體的用途和試劑盒。
文檔編號G01N33/68GK102112880SQ200980130500
公開日2011年6月29日 申請日期2009年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月31日
發(fā)明者A·克倫, H-U·德穆特, J-U·拉費爾德, M·克萊因施密特, M·博爾納克, S·席林 申請人:前體生物藥物股份公司