一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料及其制備方法，其包括以下步驟：1）microRNA溶液的配制；2）膠原溶液的配制；3）膠原膜的制備；4）金納米顆粒溶液的配制；5）microRNA與金納米顆粒混合溶液的配制；6）將混合溶液滴加到膠原膜上，得到具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。本發(fā)明的具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料具有層狀結(jié)構(gòu)，透光性好、含水率高、離子通過性能優(yōu)異，可有效降低、減緩瘢痕修復(fù)的發(fā)生。本發(fā)明的具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料可用于醫(yī)療領(lǐng)域中受損角膜基質(zhì)的修復(fù)，其原料廉價(jià)易得、制備工藝簡單、設(shè)備簡易，具有良好的應(yīng)用前景和科學(xué)價(jià)值。
【專利說明】
一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料及其制備方法，本發(fā)明的角膜 基質(zhì)修復(fù)材料可應(yīng)用于受損角膜基質(zhì)的修復(fù)，屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 角膜病是一種十分常見的眼科疾病，是僅次于白內(nèi)障的世界第二大致盲眼病。據(jù) 報(bào)道，世界上每年大約有1000萬人因?yàn)榻悄ぜ膊《鳌，F(xiàn)在唯一廣為接受的治療方法是 用人的角膜供體進(jìn)行移植，然而，特別是在發(fā)展中國家，供體角膜十分短缺，我國每年能夠 完成的角膜移植手術(shù)不超過5000例。因此，人工角膜修復(fù)材料的研發(fā)就顯得十分必要。
[0003] 常見的角膜疾病包括機(jī)械力損傷、酸堿燒傷、細(xì)菌或真菌引發(fā)的感染或潰瘍等，他 們都是引起視力減退的重要原因，會導(dǎo)致透明的角膜出現(xiàn)灰白色的混濁，使視力模糊、減 退，甚至?xí)?dǎo)致失明。角膜基質(zhì)細(xì)胞可以分泌膠原以及其他細(xì)胞外基質(zhì)。角膜損傷后由角膜 基質(zhì)細(xì)胞分泌膠原對損傷區(qū)域進(jìn)行修復(fù)，最終恢復(fù)損傷前厚度。然而，角膜在受損時(shí)，往往 上皮細(xì)胞層和基質(zhì)層都會受損，受損的角膜上皮細(xì)胞會釋放TGF-P2進(jìn)入基質(zhì)層，刺激角膜 基質(zhì)細(xì)胞向成肌纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，成肌纖維細(xì)胞會分泌紊亂的膠原纖維，是一種不同于健康 角膜基質(zhì)組織的膠原纖維排列方式，會造成細(xì)胞透明性下降，最終形成角膜瘢痕化修復(fù)，影 響視力。在不處理的角膜損傷中，上皮釋放的TGF-P2很快會進(jìn)入基質(zhì)層，最終形成明顯的瘢 痕。
[0004] 膠原(Col)是細(xì)胞外至關(guān)重要的纖維蛋白，也是組成細(xì)胞外基質(zhì)的骨架。膠原在細(xì) 胞外基質(zhì)中構(gòu)成半晶體的纖維，給細(xì)胞供應(yīng)抗張力和彈性，并在細(xì)胞的迀移、發(fā)育中起作 用，且膠原在各種動物中都有存在。膠原是生物科技產(chǎn)業(yè)最重要的原材料之一，其應(yīng)用領(lǐng)域 包括生物醫(yī)用材料、化妝品和食品工業(yè)等，可作為優(yōu)良的生物基底材料。
[0005] MicroRNAs(miRNAs)是真核生物體內(nèi)一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA，其 大小長約20~25個(gè)核苷酸。成熟的miRNAs是由較長的初級轉(zhuǎn)錄物經(jīng)過一系列核酸酶的剪切 加工而產(chǎn)生的，隨后組裝進(jìn)RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNA-induced silencing complex， RISC)，通過堿基互補(bǔ)配對的方式識別祀mRNA，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解 革巴mRNA或者阻遏祀mRNA的翻譯。最近的研究表明miRNA會參與各種各樣的調(diào)節(jié)途徑，包括發(fā) 育、病毒防御、造血過程、器官形成、細(xì)胞增殖和凋亡、脂肪代謝等等。而micr 〇RNA-133b已經(jīng) 被證實(shí)在體外調(diào)控角膜基質(zhì)細(xì)胞向成肌纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)型上有顯著的作用，從而可以進(jìn)一步實(shí) 現(xiàn)角膜修復(fù)過程中瘢痕減輕的目的。
[0006] 角膜修復(fù)材料想要在實(shí)際修復(fù)中實(shí)現(xiàn)良好的上皮與基質(zhì)修復(fù)效果，就需要角膜修 復(fù)材料的理化性能和天然組織相近。并且在角膜損傷發(fā)生后，角膜修復(fù)材料應(yīng)該能實(shí)現(xiàn)上 皮修復(fù)，即上皮化，還應(yīng)實(shí)現(xiàn)減輕或防止角膜瘢痕的產(chǎn)生，使修復(fù)后的角膜清澈、透明，隨著 材料的逐步降解，最終實(shí)現(xiàn)角膜的修復(fù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料及其制備方法。
[0008] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是： 一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟： 1) 將mi croRNA用DEPC處理水配制成mi croRNA溶液； 2) 將膠原加入到鹽酸DEPC處理水溶液或乙酸DEPC處理水溶液中，攪拌均勻，除去溶液 中的氣泡，得到膠原溶液； 3) 將膠原溶液倒入模具中，干燥成膜，脫除模具，用水多次洗滌，干燥，得到膠原膜； 4) 將金納米顆粒用DEPC處理水配制成金納米顆粒溶液； 5) 將配置好的microRNA溶液與金納米顆粒溶液混合均勻，得到混合溶液； 6) 將步驟5)中的混合溶液均勻滴加到步驟3)中的膠原膜上，干燥，即得到具有基質(zhì)修 復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。
[0009] 步驟1)所述m i cr oRNA溶液的摩爾濃度為15~2 5WI101 /L。
[0010] 步驟1)所述microRNA為具有角膜基質(zhì)修復(fù)功能的RNA。
[0011] 步驟2)所述膠原為從牛肌腱中提取的經(jīng)純化過的I型膠原。
[0012]步驟2)所述膠原溶液的質(zhì)量濃度為6.0~7.0mg/mL。
[0013] 步驟2)所述鹽酸DEPC處理水溶液的摩爾濃度為0 ? 001~0 ? 01mol/L。
[0014] 步驟2)所述乙酸DEPC處理水溶液的摩爾濃度為0.05~0.15mol/L。
[0015] 步驟4)所述金納米顆粒溶液的質(zhì)量濃度為0.025~0.045mg/mL。
[0016] 步驟4)所述金納米顆粒的粒徑為70~120nm。
[0017] 步驟5)所述混合溶液中microRNA、金納米顆粒的質(zhì)量比為1: (2~4)。
[0018]步驟6)所述混合溶液的體積與膠原膜的表面積的比為250yL:(800~1200)mm2。
[0019] 本發(fā)明的有益效果是： 1) 本發(fā)明的具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料具有層狀結(jié)構(gòu)，光學(xué)透過性能好、含水 性能好； 2) 本發(fā)明的具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的離子通過性能優(yōu)異，便于營養(yǎng)物質(zhì)的 透過和運(yùn)輸，可充分保證上皮細(xì)胞生長的需要； 3) 本發(fā)明的具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料可以很好的吸附、釋放并使microRNA進(jìn) 入到角膜基質(zhì)細(xì)胞中發(fā)揮作用，從而降低、減緩瘢痕修復(fù)的發(fā)生，達(dá)到更好的修復(fù)效果； 4) 本發(fā)明的具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料可用于醫(yī)療領(lǐng)域中受損角膜基質(zhì)的修 復(fù)，其原料廉價(jià)易得、制備工藝簡單、設(shè)備簡易，具有良好的應(yīng)用前景和科學(xué)價(jià)值。
【附圖說明】
[0020] 圖1為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜斷面的掃描電子顯微鏡(SEM)照片。 [0021 ]圖2為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜的含水率測試結(jié)果。
[0022]圖3為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜的光透過性能測試結(jié)果。
[0023] 圖4為實(shí)施例1的Col-microRNA_133b膠原膜進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)時(shí)的microRNA釋放效果 圖。
[0024] 圖5為實(shí)施例1的Col-microRNA-133b膠原膜進(jìn)行兔體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)的microRNA釋放效 果圖。
[0025]圖6為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù)7天后修 復(fù)效果檢測照片。
[0026]圖7為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù)7天后上 皮化效果檢測照片。
[0027]圖8為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù)7天后的 0CT基質(zhì)掃描圖像。
【具體實(shí)施方式】
[0028] -種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟： 1) 將mi croRNA用DEPC處理水配制成mi croRNA溶液； 2) 將膠原加入到鹽酸DEPC處理水溶液或乙酸DEPC處理水溶液中，攪拌均勻，除去溶液 中的氣泡，得到膠原溶液； 3) 將膠原溶液倒入模具中，干燥成膜，脫除模具，用水多次洗滌，干燥，得到膠原膜； 4) 將金納米顆粒用DEPC處理水配制成金納米顆粒溶液； 5) 將配置好的microRNA溶液與金納米顆粒溶液混合均勻，得到混合溶液； 6) 將步驟5)中的混合溶液均勻滴加到步驟3)中的膠原膜上，干燥，即得到具有基質(zhì)修 復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。
[0029]優(yōu)選的，一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟： 1) 將mi croRNA用DEPC處理水配制成mi croRNA溶液； 2) 將膠原加入到鹽酸DEPC處理水溶液或乙酸DEPC處理水溶液中，2~6 °C下攪拌2~5小 時(shí)，再室溫?cái)嚢?0~30小時(shí)，除去溶液中的氣泡，得到膠原溶液； 3) 將膠原溶液倒入模具中，室溫自然風(fēng)干成膜，脫除模具，用水多次洗滌，室溫下自然 風(fēng)干，得到膠原膜； 4) 將金納米顆粒用DEPC處理水配制成金納米顆粒溶液； 5) 將配置好的microRNA溶液與金納米顆粒溶液混合均勻，得到混合溶液； 6) 將步驟5)中的混合溶液均勻滴加到步驟3)中的膠原膜上，自然風(fēng)干，即得到具有基 質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。
[0030] 優(yōu)選的，步驟1)所述microRNA溶液的摩爾濃度為15~25WI101/L。
[0031 ]優(yōu)選的，步驟1)所述microRNA為具有角膜基質(zhì)修復(fù)功能的RNA。
[0032]進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟 1)所述microRNA為microRNA-133b。
[0033]優(yōu)選的，步驟2)所述膠原為從牛肌腱中提取的經(jīng)純化過的I型膠原。
[0034]優(yōu)選的，步驟2)所述膠原溶液的質(zhì)量濃度為6.0~7.0mg/mL。
[0035] 優(yōu)選的，步驟2)所述鹽酸DEPC處理水溶液的摩爾濃度為0.001~0.01mol/L。
[0036] 優(yōu)選的，步驟2)所述乙酸DEPC處理水溶液的摩爾濃度為0.05~0.15mol/L。
[0037] 優(yōu)選的，步驟4)所述金納米顆粒溶液的質(zhì)量濃度為0.025~0.045mg/mL。
[0038] 優(yōu)選的，步驟4)所述金納米顆粒的粒徑為70~120nm。
[0039] 優(yōu)選的，步驟5)所述混合溶液中microRNA、金納米顆粒的質(zhì)量比為1: (2~4)。
[0040] 優(yōu)選的，步驟6)所述混合溶液的體積與膠原膜的表面積的比為250iiL: (800~ 1200)mm2。
[0041 ]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋和說明。
[0042] 實(shí)施例1: 1) 將mi croRNA-133b粉末用去DEPC處理水配制成濃度為20wiio 1 /L的mi croRNA溶液； 2) 將從牛筋中提取的I型膠原用0.001m〇l/L的鹽酸DEPC處理水溶液配制濃度為6.5mg/ mL的膠原溶液，再在4°C冰箱中攪拌4小時(shí)，再在室溫下攪拌24小時(shí)，除去氣泡； 3) 將步驟2)中的溶液倒入模具中，于室溫下自然風(fēng)干成膜后，用去離子水進(jìn)行多次洗 滌，在室溫下自然風(fēng)干，得到膠原膜； 4) 將金納米顆粒用去DEPC處理水配制成濃度為0.03mg/mL的金納米顆粒溶液； 5) 將microRNA溶液與金納米顆粒溶液按照microRNA、金納米顆粒質(zhì)量比1:3混合均勾， 得到混合溶液； 6) 將步驟5)中的混合溶液按照液體體積與表面積比為250yL: 1000mm2均勻滴加在膠原 膜表面后，于室溫下自然風(fēng)干成膜，得到C〇l-mi cr〇RNA-133b膠原膜，即本發(fā)明的具有基質(zhì) 修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。
[0043] 實(shí)施例2: 1) 將microRNA-133b粉末用去DEPC處理水配制成濃度為25wnol/L的microRNA溶液； 2) 將從牛筋中提取的I型膠原，用0. lmol/L的乙酸DEPC處理水溶液配制濃度為6. Omg/ mL的膠原溶液，再在4°C冰箱中攪拌5小時(shí)，再在室溫下攪拌20小時(shí)，除去氣泡； 3) 將步驟2)中的溶液倒入模具中，于室溫下自然風(fēng)干成膜后，用去離子水進(jìn)行多次洗 滌，在室溫下自然風(fēng)干，得到膠原膜； 4) 將金納米顆粒用去DEPC處理水配制成濃度為0.025mg/mL的金納米顆粒溶液； 5) 將microRNA溶液與金納米顆粒溶液按照microRNA、金納米顆粒質(zhì)量比1:2混合均勾， 得到混合溶液； 6) 將步驟5)中的混合溶液按照液體體積與表面積比為250yL: 1100mm2均勻滴加在膠原 膜表面后，于室溫下自然風(fēng)干成膜，得到C〇l-mi cr〇RNA-133b膠原膜，即本發(fā)明的具有基質(zhì) 修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。
[0044] 實(shí)施例3: 1) 將mi croRNA-133b粉末用去DEPC處理水配制成濃度為15wiio 1 /L的mi croRNA溶液； 2) 將從牛筋中提取的I型膠原，用0.01m〇l/L的鹽酸DEPC處理水溶液配制濃度為7. Omg/ mL的膠原溶液，再在4°C冰箱中攪拌3小時(shí)，再在室溫下攪拌30小時(shí)，除去氣泡； 3) 將步驟2)中的溶液倒入模具中，于室溫下自然風(fēng)干成膜后，用去離子水進(jìn)行多次洗 滌，在室溫下自然風(fēng)干，得到膠原膜； 4) 將金納米顆粒用去DEPC處理水配制成濃度為0.045mg/mL的金納米顆粒溶液； 5 )將mi croRNA溶液與金納米顆粒溶液按照mi croRNA、金納米顆粒質(zhì)量比1:4混合均勾， 得到混合溶液； 6)將步驟5)中配置的混合溶液按照液體體積與表面積比為250yL: 900mm2均勻滴加在 膠原膜表面后，于室溫下自然風(fēng)干成膜，得到C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜，即本發(fā)明的具有 基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。
[0045] 測試?yán)?通過對實(shí)施例1中的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜材料(即本發(fā)明的具有基質(zhì)修復(fù)能力的 角膜修復(fù)材料)進(jìn)行理化性能表征，可以得出以下結(jié)論： 圖1為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜斷面的掃描電子顯微鏡（SEM)照片，由圖1 可知:Col-microRNA133b膠原膜材料呈層狀結(jié)構(gòu)。
[0046] 圖2為實(shí)施例1的Col-microRNA-133b膠原膜的含水率測試結(jié)果，由圖2可知:Col- mi croRNA-133b膠原膜材料與純膠原(Co 1)材料都具有較高的含水率。
[0047]圖3為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜的光透過性能測試結(jié)果，由圖3可知： C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜材料與純膠原(Col)材料都具有較高的光透過性能，且均隨著光 波長的增加其光透過率也增加，與健康角膜相一致。
[0048] 表1為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜的離子透過性能測試結(jié)果，由表1可 知:C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜材料與純膠原(Col)材料都具有較高的離子透過性能，營養(yǎng) 物質(zhì)容易透過，能夠很好的支持上皮細(xì)胞在膜材料上的增殖、生長。
[0049] 表1實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜的離子透過性能測試結(jié)果
圖4為實(shí)施例1的(3〇111；[01'01^4-13313膠原膜進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)時(shí)的1]1；[01'01^4釋放效果圖， 由圖4可知：通過綠色焚光標(biāo)記microRNA，再將制得的負(fù)載有焚光標(biāo)記microRNA的Col-micr0RNA-133b膠原膜材料與兔角膜基質(zhì)細(xì)胞在體外共培養(yǎng)后，能夠在兔角膜基質(zhì)細(xì)胞中 觀察到綠色焚光，說明Col-microRNA-133b膠原膜材料有很好的microRNA釋放效果，并且釋 放的microRNA-133b可以進(jìn)入兔角膜基質(zhì)細(xì)胞。
[0050] 圖5為實(shí)施例1的Col-microRNA-133b膠原膜進(jìn)行兔體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)的microRNA釋放效 果圖，由圖5可知：通過綠色焚光標(biāo)記microRNA，再將制得的負(fù)載有焚光標(biāo)記microRNA的 C 〇l-micr〇RNA-133b膠原膜材料進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù)后，能夠在兔角膜基質(zhì)細(xì)胞中 觀察到綠色焚光，說明Col-microRNA-133b膠原膜材料有很好的microRNA釋放效果，并且釋 放的microRNA-133b可以進(jìn)入兔角膜基質(zhì)細(xì)胞。
[0051 ]圖6為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù)7天后修 復(fù)效果檢測照片，由圖6可知:Col-microRNA-133b膠原膜材料進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù)7 天后，手術(shù)區(qū)域已經(jīng)恢復(fù)透明性，修復(fù)觀察情況優(yōu)異。
[0052]圖7為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù)7天后上 皮化效果檢測照片，由圖7可知:Col-microRNA-133b膠原膜材料進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植 術(shù)7天后內(nèi)即實(shí)現(xiàn)上皮化。
[0053]圖8為實(shí)施例1的C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù)7天后的 0CT基質(zhì)掃描圖像，由圖8可知:C〇l-micr〇RNA-133b膠原膜材料進(jìn)行兔體內(nèi)板層角膜移植術(shù) 后，角膜厚度有所恢復(fù)，基質(zhì)層有了明顯的修復(fù)，并且并沒有產(chǎn)生白色條帶，表明在術(shù)后7天 內(nèi)最容易形成瘢痕的時(shí)間里角膜基質(zhì)并沒有形成瘢痕化修復(fù)。
[0054]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特征在于:包括以下步驟： 1) 將microRNA用DEPC處理水配制成microRNA溶液； 2) 將膠原加入到鹽酸DEPC處理水溶液或乙酸DEPC處理水溶液中，攪拌均勻，除去溶液 中的氣泡，得到膠原溶液； 3) 將膠原溶液倒入模具中，干燥成膜，脫除模具，用水多次洗滌，干燥，得到膠原膜； 4) 將金納米顆粒用DEPC處理水配制成金納米顆粒溶液； 5) 將配置好的microRNA溶液與金納米顆粒溶液混合均勻，得到混合溶液； 6) 將步驟5)中的混合溶液均勻滴加到步驟3)中的膠原膜上，干燥，即得到具有基質(zhì)修 復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特征 在于:步驟1)所述m i cr oRNA溶液的摩爾濃度為15~2 5μηιο 1 /L。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特 征在于:步驟1)所述microRNA為具有角膜基質(zhì)修復(fù)功能的RNA。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特征 在于:步驟2)所述膠原為從牛肌腱中提取的經(jīng)純化過的I型膠原。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特征 在于:步驟2)所述膠原溶液的質(zhì)量濃度為6.0~7. Omg/mL。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特征 在于:步驟2)所述鹽酸DEPC處理水溶液的摩爾濃度為0.001~0.0 lmol/L;步驟2)所述乙酸 DEPC處理水溶液的摩爾濃度為0.05~0.15mol/L。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特征 在于:步驟4)所述金納米顆粒溶液的質(zhì)量濃度為0.025~0.045mg/mL;步驟4)所述金納米顆 粒的粒徑為70~120nm。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特征 在于:步驟5)所述混合溶液中microRNA、金納米顆粒的質(zhì)量比為1: (2~4)。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料的制備方法，其特征 在于:步驟6)所述混合溶液的體積與膠原膜的表面積的比為250yL: (800~1200)mm2。10. 權(quán)利要求9所述的方法制備的一種具有基質(zhì)修復(fù)能力的角膜修復(fù)材料。
【文檔編號】A61L27/04GK105854087SQ201610214283
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月7日
【發(fā)明人】任力, 趙軒, 王迎軍, 宋文婧, 陳婭偉
【申請人】廣州市樸道聯(lián)信生物科技有限公司