膠原蛋白肽作為制備預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松藥物的用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種膠原蛋白肽在制備用于預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松的藥物中的用途。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：能有效地預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松。
【專利說明】
膠原蛋白肽作為制備預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松藥物的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種膠原蛋白肽作為制備預(yù)防或治療骨質(zhì)疏 松藥物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨質(zhì)疏松即骨質(zhì)疏松癥，是多種原因引起的一組骨病，骨組織有正常的鈣化，鈣鹽 與基質(zhì)呈正常比例，以單位體積內(nèi)骨組織量減少為特點(diǎn)的代謝性骨病變。在多數(shù)骨質(zhì)疏松 中，骨組織的減少主要由于骨質(zhì)吸收增多所致。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種膠原蛋白肽作為制備預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松藥物的用途。
[0004] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是膠原蛋白肽在制備用于預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松的藥物 中的用途。
[0005] 作為優(yōu)選，所述膠原蛋白肽來源于鱈魚的皮、鱗或骨。
[0006] 作為優(yōu)選，所述膠原蛋白肽來源于狹鱈魚的皮、鱗或骨。
[0007] 作為優(yōu)選，所述膠原蛋白肽包含蛋白質(zhì)和羥脯氨酸;所述羥脯氨酸的重量百分比 含量^6%。
[0008] 作為優(yōu)選，所述膠原蛋白肽中>5000分子量范圍的肽含量為6 %~8 %，> 3000~ 5000分子量范圍的肽含量為15%~20%，> 1000~3000分子量范圍的肽含量為35%~ 45 %，500~1000分子量范圍的肽含量為25 %~30 %，< 500分子量范圍的肽含量為5 %~ 10%〇
[0009] 作為優(yōu)選，所述膠原蛋白肽中>5000分子量范圍的肽含量為6.9%，>3000~5000 分子量范圍的肽含量為18%，> 1000~3000分子量范圍的肽含量為40.6%，500~1000分子 量范圍的肽含量為27.2%，<500分子量范圍的肽含量為7.3%。
[0010] 作為優(yōu)選，所述膠原蛋白肽的制備方法包括以下步驟：
[0011] a、將鱈魚的皮、鱗或骨置于80°C~85°C的水中1~1.5小時(shí)，冷卻，離心分離，取上 清液置于55°C~60°C的水中，得到粗提液；
[0012] b、向所述粗提液中加入混合酶解液進(jìn)行水解，將所得的水解液加熱滅活蛋白酶， 冷卻，除腥除臭，過濾，然后將過濾液進(jìn)行冷凍干燥。
[0013] 作為優(yōu)選，所述混合酶解液包含堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶 和菠蘿蛋白酶。
[0014] 作為優(yōu)選，所述混合酶解液由1~10重量份的堿性蛋白酶、1~10重量份的木瓜蛋 白酶、1~10重量份的胰蛋白酶、1~10重量份的風(fēng)味蛋白酶和1~10重量份的菠蘿蛋白酶制 成。
[0015] 作為優(yōu)選，所述水解的時(shí)間為6小時(shí);所述除腥除臭采用活性炭來進(jìn)行。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于:能有效地預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松。
【附圖說明】
[0017] 圖1為各組大鼠股骨的拍攝照片；
[0018] 圖2為各組大鼠股骨平均灰度值的影響圖；
[0019] 圖3為各組HE染色結(jié)果的照片；
[0020] 圖4為樣品對(duì)各組大鼠骨小梁的影響圖；
[0021 ]圖5為樣品對(duì)各組大鼠骨皮質(zhì)相對(duì)厚度的影響圖；
[0022]圖6為各組TGF-β免疫組化染色結(jié)果的照片；
[0023]圖7為樣品對(duì)各組大鼠骨質(zhì)疏松血清BALP含量的影響圖；
[0024]圖8為樣品對(duì)各組大鼠骨質(zhì)疏松血清PINP含量的影響圖；
[0025] 圖9為樣品對(duì)各組大鼠骨質(zhì)疏松血清CTX-I含量的影響圖；
[0026] 圖10為樣品對(duì)各組大鼠骨質(zhì)疏松血清TRAP含量的影響圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 為使本領(lǐng)域技術(shù)人員詳細(xì)了解本發(fā)明的生產(chǎn)工藝和技術(shù)效果，下面以具體的生產(chǎn) 實(shí)例來進(jìn)一步介紹本發(fā)明的應(yīng)用和技術(shù)效果。
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 膠原蛋白肽的制備方法包括以下步驟：
[0030] a、將鱈魚的皮、鱗或骨置于82 °C的水中1.5小時(shí)，冷卻至室溫，離心分離，取上清液 置于58°C的水中，得到粗提液；
[0031] b、向粗提液中加入混合酶解液進(jìn)行水解6小時(shí)，將所得的水解液加熱滅活蛋白酶， 冷卻至室溫，采用活性炭來除腥除臭，采用帶有100目濾網(wǎng)的過濾器進(jìn)行過濾，然后將過濾 液進(jìn)行濃縮，滅菌，冷凍干燥，得成品。
[0032] 其中，混合酶解液由5重量份的堿性蛋白酶、5重量份的木瓜蛋白酶、5重量份的胰 蛋白酶、5重量份的風(fēng)味蛋白酶和5重量份的菠蘿蛋白酶混合制成，混合酶解液的加入量占 整個(gè)粗提液重量的1 % (質(zhì)量比）。
[0033] 經(jīng)檢測(cè)，所得膠原蛋白肽中>5000分子量范圍的肽含量為6.9%，>3000~5000分 子量范圍的肽含量為18%，>1000~3000分子量范圍的肽含量為40.6%，500~1000分子量 范圍的肽含量為27.2%，<500分子量范圍的肽含量為7.3%。輕脯氨酸的重量百分比含量 7.02%，蛋白質(zhì)的重量百分比含量96.1%。
[0034] 實(shí)施例2
[0035]膠原蛋白肽的制備方法包括以下步驟：
[0036] a、將鱈魚的皮、鱗或骨置于85 °C的水中1.5小時(shí)，冷卻至室溫，離心分離，取上清液 置于60°C的水中，得到粗提液；
[0037] b、向粗提液中加入混合酶解液進(jìn)行水解6小時(shí)，將所得的水解液加熱滅活蛋白酶， 冷卻至室溫，采用活性炭來除腥除臭，采用帶有100目濾網(wǎng)的過濾器進(jìn)行過濾，然后將過濾 液進(jìn)行濃縮，滅菌，冷凍干燥，得成品。
[0038] 其中，混合酶解液由10重量份的堿性蛋白酶、10重量份的木瓜蛋白酶、1重量份的 胰蛋白酶、1重量份的風(fēng)味蛋白酶和1重量份的菠蘿蛋白酶混合制成，混合酶解液的加入量 占整個(gè)粗提液重量的1.5% (質(zhì)量比）。
[0039] 經(jīng)檢測(cè)，所得膠原蛋白肽中>5000分子量范圍的肽含量為7.8%，>3000~5000分 子量范圍的肽含量為15.3%，> 1000~3000分子量范圍的肽含量為44.7%，500~1000分子 量范圍的肽含量為25.1%，<500分子量范圍的肽含量為9.7%。輕脯氨酸的重量百分比含 量8.22%，蛋白質(zhì)的重量百分比含量94.31 %。
[0040] 實(shí)施例3
[0041]膠原蛋白肽的制備方法包括以下步驟：
[0042] a、將鱈魚的皮、鱗或骨置于80°C~85°C的水中1~1.5小時(shí)，冷卻至室溫，離心分 離，取上清液置于55°C~60°C的水中，得到粗提液；
[0043] b、向粗提液中加入混合酶解液進(jìn)行水解6小時(shí)，將所得的水解液加熱滅活蛋白酶， 冷卻至室溫，采用活性炭來除腥除臭，采用帶有100目濾網(wǎng)的過濾器進(jìn)行過濾，然后將過濾 液進(jìn)行濃縮，滅菌，冷凍干燥，得成品。
[0044] 其中，混合酶解液由1~10重量份的堿性蛋白酶、1~10重量份的木瓜蛋白酶、1~ 10重量份的胰蛋白酶、1~10重量份的風(fēng)味蛋白酶和1~10重量份的菠蘿蛋白酶混合制成， 混合酶解液的加入量占整個(gè)粗提液重量的2% (質(zhì)量比）。
[0045] 經(jīng)檢測(cè)，所得膠原蛋白肽中>5000分子量范圍的肽含量為6.1%，>3000~5000分 子量范圍的肽含量為19.8%，> 1000~3000分子量范圍的肽含量為35.4%，500~1000分子 量范圍的肽含量為29.7%，<500分子量范圍的肽含量為5.2%。輕脯氨酸的重量百分比含 量6.08%，蛋白質(zhì)的重量百分比含量97.2%。
[0046] 實(shí)施例4
[0047] 以實(shí)施例1所得的膠原蛋白肽為研究對(duì)象。
[0048]對(duì)大鼠股骨灰度值分析結(jié)果
[0049] 各組大鼠股骨經(jīng)時(shí)拍攝片如圖1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，地塞米松誘導(dǎo)后6W，模型組大鼠股 骨平均灰度值較正常組顯著降低(P〈〇.05)，持續(xù)至19W，說明大鼠骨質(zhì)疏松模型復(fù)制成功， 在試驗(yàn)中模型的穩(wěn)定性良好。
[0050] 膠原蛋白肽預(yù)防組在給藥IOW(地塞米松誘導(dǎo)后6W)時(shí)，大鼠股骨平均灰度值升高， 且隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)（16W和23W)進(jìn)一步升高，較模型組差異具有顯著性(P〈0.05)，說明膠 原蛋白肽能經(jīng)時(shí)改善大鼠股骨平均灰度值，而預(yù)防糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松。
[0051 ]膠原蛋白肽治療組（I g/Kg和0.5g/Kg)大鼠股骨平均灰度值，在連續(xù)給藥6W時(shí)較同 期模型組提高(P〈〇. 05)，連續(xù)治療13W時(shí)該觀察指標(biāo)進(jìn)一步改善，以大劑量組為著，證明膠 原蛋白肽對(duì)大鼠糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松具有治療作用。預(yù)防給藥組與同期模型組比較，其 平均灰度值經(jīng)時(shí)改變表明，預(yù)防組具有一定預(yù)防作用，結(jié)果詳見表1和圖2。
[0052]表1狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)各組大鼠股骨平均灰度值的影響（X士S,

[0054] 和正常組比，*P〈0 · 05;和模型組比，#p〈0 · 05。
[0055] 各組大鼠骨關(guān)節(jié)經(jīng)時(shí)變化骨小梁百分比分析結(jié)果
[0056] HE染色結(jié)果詳見圖3。正常組骨小梁數(shù)量隨實(shí)驗(yàn)周期的延長(zhǎng)而增多，計(jì)算骨小梁的 百分比升高，反映了大鼠正常骨組織的生長(zhǎng)過程;經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)后6W，模型組大鼠成模時(shí) (藥物誘導(dǎo)6W)出現(xiàn)骨小梁數(shù)量減少，骨小梁百分比降低，且其連接程度完整性降低，維持至 實(shí)驗(yàn)期末19W(P〈0.01)。形態(tài)學(xué)結(jié)果表明，大鼠糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松病理模型復(fù)制成功， 此模型穩(wěn)定性好。
[0057]膠原蛋白肽預(yù)防給藥組在給藥IOW(地塞米松誘導(dǎo)后6W)時(shí)，其骨小梁數(shù)量和百分 比（％)升高，連接完整性改善，均具有時(shí)間依賴性(P〈〇.01)，說明膠原蛋白肽在實(shí)驗(yàn)劑量下 預(yù)防骨質(zhì)疏松與改善骨的形態(tài)學(xué)有關(guān)。
[0058] 膠原蛋白肽治療組（lg/Kg和0.5g/Kg)連續(xù)給藥6W后，僅見大劑量組能提高大鼠骨 小梁數(shù)量和百分比，改善其連接完整度，隨連續(xù)給藥時(shí)間的延長(zhǎng)作用增強(qiáng)。膠原蛋白肽小劑 量治療組自連續(xù)給藥13W起，對(duì)該指標(biāo)的影響也呈時(shí)間依賴性，以大劑量作用為優(yōu)。詳見表2 和圖4。
[0059] 表2狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)各組大鼠骨小梁百分比影響C S土S，n=3)
[0061 ] 和正常組比，#P〈0 · 01;和模型組比，##p〈0 · 01。
[0062]狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)大鼠骨皮質(zhì)相對(duì)厚度的經(jīng)時(shí)影響
[0063]光鏡下可見，模型組大鼠骨皮質(zhì)相對(duì)厚度較正常組明顯變薄(P〈0.01)，其穩(wěn)定性 維持至19W。證明糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松模型穩(wěn)定。
[0064] 預(yù)防給藥組較模型組對(duì)大鼠骨皮質(zhì)相對(duì)厚度的影響，呈時(shí)間依賴性增加，以連續(xù) 給藥23W作用最為顯著。說明膠原蛋白肽預(yù)防給藥系通過改善大鼠骨皮質(zhì)相對(duì)厚度而抗地 塞米松性骨質(zhì)疏松。
[0065] 膠原蛋白肽治療組結(jié)果表明，成模后連續(xù)灌胃給藥6W，小劑量組對(duì)該指標(biāo)的影響 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>〇. 05)，大劑量組能增加大鼠骨皮質(zhì)相對(duì)厚度(P〈0.01);治療13W時(shí)，膠原 蛋白肽大小劑量組均能提高其厚度值，大劑量組效果優(yōu)于小劑量組。（P〈〇.01)。詳見表3和 圖5。
[0066] 表3狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)各組大鼠骨皮質(zhì)厚度相對(duì)值影響^土s，H=3>

[0068] 和正常組比，林P〈0 · 01;和模型組比，##p〈0 · 01。
[0069] 狹鱈魚皮膠原蛋白肽對(duì)大鼠股骨TGF-β表達(dá)影響
[0070] TGF-β免疫組化染色結(jié)果詳見圖6。光鏡下可見TGF-β主要表達(dá)于骨小梁周圍成骨 細(xì)胞胞膜和胞漿內(nèi)，陽(yáng)性表達(dá)區(qū)呈棕黃色顆粒。經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)后6W，模型組大鼠成模時(shí) (藥物誘導(dǎo)6W)出現(xiàn)TGF-β平均積分光密度降低，維持至實(shí)驗(yàn)期末19W(P〈0.05)。免疫組化結(jié) 果表明，大鼠糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松病理模型中TGF-β表達(dá)降低，提示可能與成骨細(xì)胞損傷 有關(guān)。
[0071] 膠原蛋白肽預(yù)防給藥組在給藥IOW(地塞米松誘導(dǎo)后6W)時(shí)，其TGF-β平均積分光密 度升高，直至連續(xù)給藥后23W，具有時(shí)間依賴性(P〈0.05)，說明膠原蛋白肽在實(shí)驗(yàn)劑量下預(yù) 防骨質(zhì)疏松與TGF-β表達(dá)有關(guān)。
[0072]膠原蛋白肽治療組（lg/Kg和0.5g/Kg)連續(xù)給藥6W后，兩劑量組TGF-β平均積分光 密度升高均提高，隨連續(xù)給藥時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量增多，維持至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(治療13W)大劑量作 用優(yōu)于小劑量(P〈〇.05)。詳見表4。
[0073]表4各組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠骨關(guān)節(jié)TGF-β表達(dá)平均積分光密度（X土s, n=3 )
[0075] 注:和同時(shí)期正常組比，*p〈0.05;和同期模型組比，#p〈0.05;和同一時(shí)期0.5g治療 組比，ΔΡ〈〇.〇5。
[0076] 大鼠血液上清指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 [0077]⑴血清BALP含量的檢測(cè)結(jié)果
[0078]除正常對(duì)照組大鼠外（等容量的生理鹽水注射），其余各組大鼠均自12周齡臀肌注 射地塞米松磷酸鈉注射液(1.0mg/kg，每周2次），持續(xù)至19周。結(jié)果顯示，模型組大鼠注射地 塞米松6周后，血清MLP含量較正常對(duì)照組顯著降低(p〈0.05)，檢測(cè)注射藥物后12周、19周 時(shí)模型組大鼠血清BALP含量均呈現(xiàn)穩(wěn)定性低水平(p〈0.05 )，說明大鼠注射地塞米松6周，就 能通過骨形成重要指標(biāo)BALP致大鼠骨質(zhì)疏松，在實(shí)驗(yàn)周期中該模型穩(wěn)定。
[0079]膠原蛋白肽預(yù)防給藥（lg/kg/d)組大鼠自注射地塞米松藥物6周時(shí)，其血清BALP含 量較模型組差異無顯著性(P>〇. 05)，連續(xù)給藥16周和23周時(shí)，該組大鼠血清BALP含量的升 高呈時(shí)效關(guān)系(P〈〇. 05)。提示膠原蛋白肽能通過促進(jìn)骨形成指標(biāo)BALP而預(yù)防地塞米松所致 大鼠的骨質(zhì)疏松。
[0080]大鼠注射地塞米松誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松成模后，分別給予膠原蛋白肽高、低劑量治療6 周、13周時(shí)，各給藥組大鼠血清BALP含量均高于模型組(p〈0.05 )，BALP的升高與給藥時(shí)間呈 正相關(guān)，高劑量組升高BALP優(yōu)于低劑量組(p〈0.05)，提示實(shí)驗(yàn)劑量下膠原蛋白肽發(fā)揮對(duì)大 鼠地塞米松所致骨質(zhì)疏松治療作用，與通過促進(jìn)骨形成、提高BALP含量有關(guān)，詳見表5和圖 7〇
[0081 ]表5膠原蛋白肽對(duì)地塞米松誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松血清BALP含量的影響（i±.S，：
[0082] n=：3)
[0084] 注:和正常組比，#p〈0 · 01;和模型組比，#p〈0 · 05;和同一時(shí)期0 · 5g治療組比，Δ P〈 0.05〇
[0085] 血清PINP含量的檢測(cè)結(jié)果
[0086]模型組大鼠注射地塞米松6周后，其血清PINP含量較正常對(duì)照組顯著降低（ρ〈 0.01 )，術(shù)后12周、19周時(shí)，PINP含量同樣持續(xù)穩(wěn)定在低水平，說明地塞米松（1.0 mg/kg，每周 2次)注射6周，能通過降低大鼠血清PINP含量而建立骨質(zhì)疏松病理模型，且該模型在實(shí)驗(yàn)期 內(nèi)穩(wěn)定性好。
[0087]注射地塞米松藥物6周時(shí)，即大鼠骨質(zhì)疏松模型建立時(shí)，PINP的結(jié)果顯示，較模型 組升高但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>〇.05)，膠原蛋白肽預(yù)防組（lg/kg/d)連續(xù)給藥12周、19周時(shí)，大 鼠血清PINP含量均高于模型組，且隨膠原蛋白肽預(yù)防給藥周期的延長(zhǎng)，PINP含量的升高呈 時(shí)間依賴性(P〈〇.〇l)。
[0088] 膠原蛋白肽高、低劑量治療組(給藥6周、13周）均能時(shí)間依賴性升高大鼠PINP含 量，以膠原蛋白肽高劑量組（lg/kg)為優(yōu)。顯示膠原蛋白肽在實(shí)驗(yàn)劑量下，對(duì)地塞米松致大 鼠骨質(zhì)疏松(PINP)既有預(yù)防作用，又有治療作用。詳見表6和圖8。
[0089] 表6膠原蛋白肽對(duì)地塞米松誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松血清PINP含量的影響（?土S， 11=3:)
[0091] 注:和正常組比，**p〈0.01;和模型組比，#p〈0.05;和同一時(shí)期0.5g治療組比，Δ P〈 0.05〇
[0092] 血清CTX-I含量的檢測(cè)結(jié)果
[0093]注射地塞米松6周后，模型組大鼠血清CTX-I含量較正常對(duì)照組顯著升高（p〈 0.01)，且在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定在高水平，說明該手術(shù)方案在術(shù)后6周建立了大鼠骨質(zhì)疏 松模型，且模型穩(wěn)定。
[0094] 膠原蛋白肽預(yù)防給藥10周時(shí)，即地塞米松注射6周時(shí)，該組大鼠血清CTX-I含量較 模型組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>〇.05)，連續(xù)給藥16周、23周時(shí)，預(yù)防組大鼠血清CTX-I含量均低于 模型組(P〈〇.05)，且隨膠原蛋白肽預(yù)防給藥周期的延長(zhǎng)，CTX-I含量的降低呈時(shí)間依賴性(p <0.05)〇
[0095] 膠原蛋白肽高、低劑量組治療6周時(shí)，大鼠血清CTX-I含量均低于模型組(p〈0.05)， 治療13周時(shí)，大鼠血清的CTX-I含量較治療6周時(shí)進(jìn)一步降低，以高劑量組降低CTX-I作用為 著(p〈0.05)<XTX-1含量的經(jīng)時(shí)改變顯示，膠原蛋白肽通過降低CTX-I呈現(xiàn)抗地塞米松誘導(dǎo) 的骨質(zhì)疏松大鼠的防治作用。詳見表7和圖9。
[0096] 表7膠原蛋白肽對(duì)地塞米松誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松血清C T X -1含量的影響(& 士 s, n=3)
[0098] 注:和正常組比，#p〈0 · 01;和模型組比，#p〈0 · 05;和同一時(shí)期0 · 5g治療組比，Δ P〈 0.05〇
[0099] 血清TRAP含量的檢測(cè)結(jié)果
[0100] 大鼠注射地塞米松6周后，ELI SA法檢測(cè)模型組大鼠血清TRAP含量較正常對(duì)照組顯 著升高(p〈0.01)，證明大鼠骨吸收增強(qiáng)，骨質(zhì)疏松模型復(fù)制成功。TRAP經(jīng)時(shí)(注射地塞米松 藥物6、12、19周)檢測(cè)結(jié)果表明，在注射地塞米松藥物在19周內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定，提示在該實(shí)驗(yàn)周 期中注射地塞米松誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松模型穩(wěn)定。
[0101]膠原蛋白肽預(yù)防給藥組（lg/kg/d)在給藥10周時(shí)，與模型組比較TRAP水平雖然降 低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>〇.05)，說明骨質(zhì)疏松模型復(fù)制成功時(shí)，膠原蛋白肽預(yù)防給藥10周并 不能有效阻止骨質(zhì)疏松的發(fā)生(P>〇. 05)。在連續(xù)給藥膠原蛋白肽16周、23周時(shí)，TRAP值持續(xù) 下降，較模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇.05)，呈時(shí)效性。證明膠原蛋白肽能通過降低TRAP而 抑制骨吸收，產(chǎn)生預(yù)防骨質(zhì)疏松作用。
[0102] 膠原蛋白肽高、低劑量治療組在用藥6周、13周時(shí)，各給藥組大鼠血清TRAP含量與 模型組比呈時(shí)間依賴性降低(p〈〇.05)，高劑量組TRAP降低大于低劑量組。提示膠原蛋白肽 在實(shí)驗(yàn)劑量下，對(duì)地塞米松致大鼠血清TRAP升高的骨質(zhì)疏松具有防治作用，詳見表8和圖 10。
[0103] 表8膠原蛋白肽對(duì)地塞米松誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松血清T R A P含量的影響士 s, n=3 )
[0105] 注:和正常組比，#p〈0.01;和模型組比，#p〈0.05;和同一時(shí)期0.5g治療組比，Δ P〈 0.05〇
[0106] 最后應(yīng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明而非限制本發(fā)明的技術(shù)方案，盡管參照 上述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，依然可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行 修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明的精神和范圍的任何修改或局部替換，其均應(yīng)涵蓋在 本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 膠原蛋白肽在制備用于預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松的藥物中的用途。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述膠原蛋白肽來源于鱈魚的皮、鱗或骨。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述膠原蛋白肽來源于狹鱈魚的皮、鱗或 骨。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述膠原蛋白肽包含蛋白質(zhì)和羥脯氨酸； 所述羥脯氨酸的重量百分比含量多6%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述膠原蛋白肽中>5000分子量范圍的肽 含量為6%~8%，>3000~5000分子量范圍的肽含量為15%~20%，> 1000~3000分子量 范圍的肽含量為35%~45%，500~1000分子量范圍的肽含量為25%~30%，<500分子量 范圍的肽含量為5%~10%。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述膠原蛋白肽中>5000分子量范圍的肽 含量為6.9%，>3000~5000分子量范圍的肽含量為18%，> 1000~3000分子量范圍的肽含 量為40.6%，500~1000分子量范圍的肽含量為27.2%，<500分子量范圍的肽含量為 7.3%〇7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述膠原蛋白肽的制備方法包括以下步 驟： a、 將鱈魚的皮、鱗或骨置于80°C~85°C的水中1~1.5小時(shí)，冷卻，離心分離，取上清液 置于55°C~60°C的水中，得到粗提液； b、 向所述粗提液中加入混合酶解液進(jìn)行水解，將所得的水解液加熱滅活蛋白酶，冷卻， 除腥除臭，過濾，然后將過濾液進(jìn)行冷凍干燥。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述混合酶解液包含堿性蛋白酶、木瓜蛋 白酶、胰蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶和菠蘿蛋白酶。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述混合酶解液由1~10重量份的堿性蛋 白酶、1~10重量份的木瓜蛋白酶、1~10重量份的胰蛋白酶、1~10重量份的風(fēng)味蛋白酶和1 ~10重量份的菠蘿蛋白酶制成。10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述水解的時(shí)間為6小時(shí)；所述除腥除臭 采用活性炭來進(jìn)行。
【文檔編號(hào)】A61K38/39GK105963686SQ201610335183
【公開日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年5月19日
【發(fā)明人】王春波, 苗德森, 趙晨懿, 韓彥弢, 張德巖, 高圣杰
【申請(qǐng)人】青島海博瑞克生物科技有限公司