一種用于治療手足口病的藥物制劑及其用圖
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種用于治療手足口病的藥物制劑及其用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，藥物制劑含有：金銀花、蓍草、連翹、薄荷、菊花、桔梗、大青葉、玄參、板藍(lán)根、蒲公英、白綠葉、藁本、牛蒡子、紫花地丁、元胡、甘草。本發(fā)明藥物的制劑注重中醫(yī)理論，諸藥聯(lián)合具固本去標(biāo)、復(fù)正除邪之功效，君臣佐使俱全，陰陽(yáng)均衡，同時(shí)注重腎、心、肝、脾等臟腑的機(jī)能協(xié)調(diào)，諸藥配伍后通過(guò)改善微循環(huán)的障礙，增進(jìn)細(xì)胞免疫功能?？捎行У刂委熓肿憧诓?，使藥效和功能更為全面而標(biāo)本兼治。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種用于治療手足口病的藥物制劑及其用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及用于治療手足口病的藥物及其用途，特別設(shè)及一種用于治療手足口病 的藥物制劑及其用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 手足口病（化nd-foot-mouthdisease，HFMD)是由多種腸道病毒引起的常見(jiàn)傳染 病，W嬰幼兒發(fā)病為主。大多數(shù)患者癥狀輕微，W發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或瘤疹為 主要特征。少數(shù)患者可并發(fā)無(wú)菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻搏、呼吸道感染和屯、肌炎等， 個(gè)別重癥患者兒病情進(jìn)展快，已發(fā)生死亡。少年兒童和成人感染后多不發(fā)病，但能夠傳播病 毒。手足口病的癥狀表現(xiàn)為:急性起病，發(fā)熱，手掌或腳掌部出現(xiàn)斑丘疹和瘤疹，臀部或膝蓋 也可出現(xiàn)皮疹。皮疹周?chē)醒仔约t暈，瘤內(nèi)液體較少；口腔黏膜出現(xiàn)散在的瘤疹，疼痛明顯。 部分患兒可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、惡屯、、嘔吐和頭疼等癥狀。
[0003] 手足口病是全球性傳染病，世界大部分地區(qū)均有此病流行的報(bào)道。1957年在新西 蘭首次報(bào)道該病，1958年第一次分離出柯薩奇病毒，1959年提出并命名為手足口病。我國(guó)于 1981年上海首次報(bào)道本病，此后，北京、河北、天津、福建、吉林、安徽等10幾個(gè)省份均有本病 報(bào)道。1983年天津發(fā)生CoxAie引起的手足口病暴發(fā)，5-10月間發(fā)生了7000余病例。1995年武 漢病毒研究所從手足口病人中分離出EV71d2008年HFMD疫情在安徽省阜陽(yáng)市暴發(fā)，共發(fā)生 HFMD病例4496例，死亡22例，其病原體為EV71。
[0004] 2010年全國(guó)報(bào)告1795336例患者，死亡888例，流行呈逐年增加的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著 人類(lèi)的健康和全球經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。引起手足口病的腸道病毒包括腸道病毒71型化V71)和A組 柯薩奇病毒(CoxA)、?？刹《净痗ho)等某些血清型。EV71病毒顆粒為二十面體對(duì)稱(chēng)的球形 結(jié)構(gòu)，無(wú)包膜和突起，直徑大約在24~30nm。病毒顆粒的衣殼共包括60個(gè)亞單位，分別由4種 衣殼蛋白（VP1-VP4)拼裝成五聚體樣結(jié)構(gòu)。4種結(jié)構(gòu)蛋白中，除VP4包埋在病毒顆粒外殼的內(nèi) 側(cè)與病毒的核屯、緊密連接W外，其他巧巾結(jié)構(gòu)蛋白均暴露在病毒顆粒的表面，因而抗原決定 簇基本上位于運(yùn)立種蛋白上。病毒基因組為712~81化b核巧酸單股正鏈RNA，基因組中僅有 一個(gè)開(kāi)放閱讀框，編碼含2194個(gè)氨基酸的多聚蛋白，在其兩側(cè)為5/和y非編碼區(qū)，在y非編 碼區(qū)的末端含有一個(gè)長(zhǎng)度可變的多聚腺巧酸尾己(polyA)。該多聚蛋白可進(jìn)一步被水解成 P1、P2、P33個(gè)前體蛋白。P1前體蛋白編碼VP1、VP2、VP3、VP44個(gè)病毒外殼蛋白；P2和P3前體蛋 白編碼7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，包括2A(特異性蛋白水解酶）、2B、2C、3A、VPg(5/蛋白水解酶）、3C(特 異性蛋白水解酶）、3D(RNA多聚酶組分）。據(jù)推測(cè)，5/非編碼區(qū)可能與病毒株的致病性有關(guān)。
[0005] 目前防治手足口病的最有效手段是接種疫苗，但至今仍未開(kāi)發(fā)出供臨床應(yīng)用的的 手足口病病毒疫苗，從而加大了防治的難度。由于目前尚無(wú)特異、高效的抗病毒藥物，對(duì)癥 處理是臨床的主要治療原則，利用更昔洛韋、病毒挫、干擾素進(jìn)行抗病毒治療，但最終還需 靠人的自身免疫力治愈，且大多數(shù)的西藥都可能導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用。中藥治療效果優(yōu)于西 藥，常規(guī)藥物對(duì)治療手足口病有一定的療效，能緩解一定的癥狀，但效果不確定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明是針對(duì)目前治療之現(xiàn)狀，提供一種用于治療手足口 病的藥物制劑，無(wú)毒副作用，效果好。
[0007] 具體而言，本發(fā)明的具體方案是運(yùn)樣實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 首先，發(fā)明人根據(jù)中藥配伍經(jīng)驗(yàn)提供了一種用于治療手足口病的藥物制劑，處方 中含有的中藥成分為:金銀花、著草、連翅、薄荷、菊花、枯梗、大青葉、玄參、板藍(lán)根、蒲公英、 白綠葉、蔓本、牛募子、紫花地下、元胡、甘草。
[0009] 進(jìn)一步，發(fā)明人根據(jù)中藥配伍經(jīng)驗(yàn)提供了一種用于治療手足口病的藥物制劑，處 方的各原料用量在本發(fā)明的重量份范圍都具有較好的療效，所述的配方W及重量份為:金 銀花5-14份、著草2-7份、連翅3-8份、薄荷2-7份、菊花3-9份、枯梗3-10份、大青葉7-12份、玄 參5-14份、板藍(lán)根3-9份、蒲公英1-6份、白綠葉2-7份、蔓本2-6份、牛募子8-16份、紫花地下 3-8份、元胡2-9份、甘草4-9份。
[0010] 更進(jìn)一步地，對(duì)上述的重量份的配方進(jìn)行優(yōu)選，達(dá)到更好的技術(shù)效果，優(yōu)選的配方 為:金銀花9.5份、著草4.5份、連翅5.5份、薄荷4.5份、菊花6份、枯梗6.5份、大青葉9.5份、玄 參9.5份、板藍(lán)根6份、蒲公英3.5份、白綠葉3.5份、蔓本4份、牛募子12份、紫花地下5.5份、元 胡5.5份、甘草6.5份。
[0011] 或者；
[0012] 金銀花10份、著草5份、連翅6份、薄荷5份、菊花6.5份、枯梗7份、大青葉10份、玄參 10份、板藍(lán)根6.5份、蒲公英4份、白綠葉4份、蔓本4.5份、牛募子12.5份、紫花地下6份、元胡6 份、甘草7份。
[0013] 上述所述的藥物制劑中，所使用的中藥均使用其常用入藥部位入藥，所使用的中 藥劑量合理，諸藥合用后對(duì)于治療手足口病具有較好的治療的效果，尤其是小兒手足口病。
[0014] 本發(fā)明的治療手足口病的藥物制劑中所使用的各味中藥材的功用如下：
[00巧]金銀花:味甘，性寒。
[0016] 歸經(jīng)：歸肺、屯、、胃經(jīng)。
[0017] 功能主治:清熱解毒，涼散風(fēng)熱，用于癡腫療瘡，喉搏，丹毒，熱毒血頻，風(fēng)熱感冒， 溫病發(fā)熱。
[0018] 著草:味辛、苦，平。有小毒。
[0019] 功能主治：解毒消腫，止血，止痛。用于風(fēng)濕疼痛，牙痛，經(jīng)閉腹痛，胃痛，腸炎，頻 疾;外用治毒蛇咬傷，癡巧腫毒，跌打損傷，外傷出血。
[0020] 連翅:味苦，微寒。
[0021] 歸經(jīng):歸肺、屯、、小腸經(jīng)。
[0022] 功能主治:清熱解毒，消腫散結(jié)。用于癡痘，療巧，乳癡，丹毒，風(fēng)熱感冒，溫病初起， 溫?zé)崛霠I(yíng)，高熱煩渴，神昏發(fā)斑，熱淋尿閉。
[0023] 薄荷:味甜，性涼。
[0024] 歸經(jīng)：歸肺、肝經(jīng)，宣散風(fēng)熱，清頭目，透疹，用于風(fēng)熱感冒，風(fēng)溫初起，頭痛，目赤， 喉搏，口瘡，風(fēng)疹，麻疹，胸脅脹悶。
[0025]菊花:味甘、苦，微寒。
[0026] 歸經(jīng):歸肺、肝經(jīng)。
[0027]功能主治:散風(fēng)清熱，平肝明目。用于風(fēng)熱感冒，頭痛眩暈，目赤腫痛，眼目昏花。 [002引枯梗:味苦、辛，平。
[0029] 歸經(jīng)：歸肺經(jīng)。
[0030] 功能主治：宣肺，利咽，桂疲，排脈。用于咳嗽疲多，胸悶不楊，咽痛，音啞，肺癡吐 脈，瘡瘍脈成不潰。
[0031] 大青葉:味苦，性寒。
[00創(chuàng)歸經(jīng)：歸屯、、胃經(jīng)。
[0033] 功能主治:清熱解毒，涼血消斑。用于溫邪入營(yíng)，高熱神昏，發(fā)斑發(fā)疹，黃痘，熱頻， 巧腮，喉搏，丹毒，癡腫。
[0034] 玄參:味苦，性涼。
[0035] 功能主治:清熱解毒，消腫止痛。
[0036] 板藍(lán)根:味苦，性寒。
[0037] 歸經(jīng)：歸屯、、胃經(jīng)。
[0038] 功能主治:清熱解毒，涼血利咽。用于溫毒發(fā)斑，舌絳紫暗，巧腮，喉搏，爛喉丹額， 大頭攝疫，丹毒，癡腫。
[0039] 蒲公英:味苦，性寒。
[0040] 歸經(jīng):歸肝、胃經(jīng)。
[0041] 功能主治:清熱解毒，消腫散結(jié)，利尿通淋。用于療瘡腫毒，乳癡，療巧，目赤，咽痛， 肺癡，腸癡，濕熱黃痘，熱淋澀痛。
[00創(chuàng)白綠葉:味酸，平。
[0043]功能主治:利尿排石，止咳定喘，行氣止痛。主治慢性腎炎，胃痛，慢性支氣管炎，支 氣管哮喘。
[0044] 蔓本:味辛，溫。
[0045] 歸經(jīng):歸膀脫經(jīng)。
[0046] 功能主治:桂風(fēng)，散寒，除濕，止痛。用于風(fēng)寒感冒，顫頂疼痛，風(fēng)濕肢節(jié)搏痛。
[0047] 牛募子:味辛，性寒。
[004引歸經(jīng):歸肺、胃經(jīng)。
[0049] 功能主治：疏散風(fēng)熱，宣肺透疹，解毒利咽。用于風(fēng)熱感冒，咳嗽疲多，麻疹，風(fēng)疹， 咽喉腫痛，巧腮丹毒，癡腫瘡毒。
[0050] 紫花地下:味苦、辛，寒。
[005。歸經(jīng)：歸屯、、肝經(jīng)。
[0052]功能主治:清熱解毒，涼血消腫。用于療瘡腫毒，癡痘發(fā)背，丹毒，毒蛇咬傷。
[00對(duì)元胡:味辛、苦，性溫。
[0054] 功能主治:活血散疲，利氣止痛的功能。
[0055] 臨床應(yīng)用：臨床上常見(jiàn)于水煎服，用于全身各部氣滯血疲之痛，痛經(jīng)，經(jīng)閉，癥瘤， 產(chǎn)后疲阻。
[0化6] 甘草:味甘，性平。
[0057] 歸經(jīng):入脾、胃、屯、、肺經(jīng)。
[005引功能主治:補(bǔ)中益氣，清熱解毒，桂疲止咳，緩急止痛。
[0059] 臨床應(yīng)用：多用于中氣不足，氣血兩虧的各種中晚期腫瘤的治療，用于腫瘤復(fù)方中 能緩解或減低某些藥物峻烈之性及其毒性。
[0060] 本發(fā)明所述的藥物劑型為灌腸劑。
[0061] 本發(fā)明對(duì)W上的處方經(jīng)過(guò)認(rèn)真的研究，根據(jù)中醫(yī)用藥的合理性，發(fā)明人提出了具 體的一種治療手足口病的藥物制劑的制備方法，具體步驟為：
[0062] (1)取金銀花、著草、連翅、薄荷、菊花、枯梗、大青葉、玄參、板藍(lán)根、蒲公英、白綠 葉、蔓本、牛募子、紫花地下、元胡、甘草加6-8倍體積的水煎煮3次，第1次沸后l，h，第2次沸 后1.化，第2次沸后1.化，合并濾液；
[0063] (2)步驟(1)的濾液縮至成品3.5倍量，靜置2地；
[0064] (3)取步驟(2)的上清液濃縮至所需量，過(guò)濾，加入適量的防腐劑攬勻，添加蒸饋水 至全量，攬勻后分裝于直腸給藥瓶?jī)?nèi)封口即得。
[0065] 進(jìn)一步地，本發(fā)明步驟(3)中的防腐劑為醋類(lèi)或酸類(lèi)。
[0066] 進(jìn)一步地，本發(fā)明步驟(3)中的防腐劑優(yōu)選為徑苯醋類(lèi)或山梨酸。
[0067] 更進(jìn)一步優(yōu)，本發(fā)明步驟(3)中的防腐劑優(yōu)選為山梨酸。
[0068] 步驟(3)中藥瓶的規(guī)格為20ml/瓶。
[0069] 使用方法:將直腸給藥瓶封口剪開(kāi)，套上一支100cm長(zhǎng)的直腸給藥管，待患者排便 后，取左側(cè)邸位將給藥管從肛口插入，深度為5~10cm，將藥液緩緩擠入。為保證藥液全部擠 入直腸，脫下給藥瓶，待給藥瓶充盈空氣后，再次與直腸給藥管接上，充入少許空氣，使給藥 管內(nèi)藥液全部進(jìn)入直腸，灌完后慢慢拔出給藥管，用手紙輕輕按壓肛口，W免藥液流出。
[0070] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明治療手足口病的膠囊劑具有W下優(yōu)點(diǎn)：
[0071] 本發(fā)明藥物的制劑與現(xiàn)有技術(shù)相比，注重中醫(yī)理論，諸藥聯(lián)合具固本去標(biāo)、復(fù)正除 邪之功效，君臣佐使俱全，陰陽(yáng)均衡，同時(shí)注重腎、屯、、肝、脾等臟腑的機(jī)能協(xié)調(diào)，諸藥配伍后 通過(guò)改善微循環(huán)的障礙，增進(jìn)細(xì)胞免疫功能?？捎行У刂委熓肿憧诓。顾幮Ш凸δ芨鼮槿?面而標(biāo)本兼治。 具體實(shí)施例
[0072] 對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精 神或基本特征的情況下，能夠W其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性 的，而且是非限制性的，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化 囊括在本發(fā)明內(nèi)。
[0073] 實(shí)施例1: 一種用于治療手足口病的藥物制劑，包括W下重量份的原料藥：
[0074] 金銀花5克、著草克、連翅3克、薄荷2克、菊花3克、枯梗3克、大青葉7克、玄參5克、板 藍(lán)根3克、蒲公英1克、白綠葉2克、蔓本2克、牛募子8克、紫花地下3克、元胡2克、甘草4克。
[00巧]制備方法為：
[0076] (1)取金銀花、著草、連翅、薄荷、菊花、枯梗、大青葉、玄參、板藍(lán)根、蒲公英、白綠 葉、蔓本、牛募子、紫花地下、元胡、甘草加6-8倍體積的水煎煮3次，第1次沸后l，h，第2次沸 后1.化，第2次沸后1.化，合并濾液；
[0077] (2)步驟(1)的濾液縮至成品3.5倍量，靜置24h;
[0078] (3)取步驟(2)的上清液濃縮至所需量，過(guò)濾，加入適量山梨酸攬勻，添加蒸饋水至 全量，攬勻后分裝于直腸給藥瓶?jī)?nèi)封口即得。
[0079] 實(shí)施例2:-種用于治療手足口病的藥物制劑，包括W下重量份的原料藥：
[0080] 金銀花14克、著草7克、連翅8克、薄荷7克、菊花9克、枯梗10克、大青葉12克、玄參14 克、板藍(lán)根9克、蒲公英6克、白綠葉7克、蔓本6克、牛募子16克、紫花地下8克、元胡9克、甘草9 克。
[0081] 制備方法同實(shí)施例1。
[0082] 實(shí)施例3:-種用于治療手足口病的藥物制劑，包括W下重量份的原料藥：
[0083] 金銀花9.5克、著草4.5克、連翅5.5克、薄荷4.5克、菊花6克、枯梗6.5克、大青葉9.5 克、玄參9.5克、板藍(lán)根6克、蒲公英3.5克、白綠葉3.5克、蔓本4克、牛募子12克、紫花地下5.5 克、元胡5.5克、甘草6.5克。
[0084] 制備方法同實(shí)施例1。
[0085] 實(shí)施例4: 一種用于治療手足口病的藥物制劑，包括W下重量份的原料藥：
[0086] 金銀花10克、著草5克、連翅6克、薄荷5克、菊花6.5克、枯梗7克、大青葉10克、玄參 10克、板藍(lán)根6.5克、蒲公英4克、白綠葉4克、蔓本4.5克、牛募子12.5克、紫花地下6克、元胡6 克、甘草7克。
[0087] 制備方法同實(shí)施例1。
[0088] 實(shí)施例5:細(xì)胞、病毒實(shí)驗(yàn)
[0089] 利己韋林是廣譜強(qiáng)效的抗病毒藥物，目前廣泛應(yīng)用于病毒性疾病的防治。合成的 核巧類(lèi)抗病毒藥。體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)表明具有顯著的抗病毒作用。本發(fā)明用來(lái)作為陽(yáng)性對(duì) 照試驗(yàn)。
[0090] 對(duì)照藥物:利己韋林注射液，由廣州市白云山天屯、制藥股份有限公司，批號(hào)：
[00川 5.1細(xì)胞、病毒培養(yǎng)
[0092] 細(xì)胞培養(yǎng):37°C ,5% (體積比，W下相同）C02加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。使用含有10% (體 積比，W下相同）FBS、100U/ml的青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基。細(xì)胞至90%匯合度后傳代， 傳代比例1/3-1/4。
[0093] 病毒培養(yǎng):接種EV71病毒200ul/孔于已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)90%細(xì)胞的24孔板，置37°C，5%C02 培養(yǎng)箱中，吸附化，加入含1 %FBS的維持液，次日換液，逐日觀察，待3/4細(xì)胞出現(xiàn)病變時(shí)，放 在-80°C冰箱中凍存20min，自然解凍20min，反復(fù)3次，13000巧m，10min，4°C離屯、，過(guò)濾膜，取 上清液，每管0.5ml分裝于無(wú)菌離屯、管（1.5ml)中，冷凍保存于-80°C備用。
[0094] 5.2試驗(yàn)過(guò)程
[0095] 5.2.1TCID50 的測(cè)定
[0096] 選擇經(jīng)24-4化培養(yǎng)后生長(zhǎng)旺盛、成層良好的畑細(xì)胞細(xì)胞1瓶，傾棄生長(zhǎng)液，加入1ml 膜酶，37°C消化2-3min，用含10 %FBS的DMEM生長(zhǎng)液分散細(xì)胞，使細(xì)胞胞懸液濃度為2 X 1〇4 個(gè)/孔。用移液器將細(xì)胞懸液加入96孔板中，每孔lOOul。將培養(yǎng)板置于37°C，5%C02溫箱中 培養(yǎng)12~18小時(shí)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后備用；將腸道病毒EV71用含1%FBS的維持液作10倍稀 釋系列成10個(gè)濃度，棄去培養(yǎng)板中的生長(zhǎng)液，每孔加入不同稀釋度的病毒液lOOul，每個(gè)稀 釋度6孔。6個(gè)對(duì)照孔加入維持液100ul，37°C吸附化，然后各孔再加入維持液lOOul，輕輕搖 勻，37 °C，5 % C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，逐日觀察記錄各孔細(xì)胞病變情況。
[0097] 5.2.2結(jié)果統(tǒng)計(jì)
[009引細(xì)胞全部出現(xiàn)CPE判為(++++);50%-75%細(xì)胞出現(xiàn)CPE為(+++);25%-50%細(xì)胞出 現(xiàn)C陽(yáng)(++); 25 % W內(nèi)細(xì)胞出現(xiàn)CPE為(+);無(wú) CPE為(一）。并根據(jù)Reed和Muench方法對(duì)病毒滴 度進(jìn)行計(jì)算，最終獲得TCID50/100微升;距離比=(高于50%病變率的百分?jǐn)?shù)-50%)/(高于 50%病變率的百分?jǐn)?shù)-低于50%的病變率化ogTCID50 =距離比*稀釋度對(duì)數(shù)之間的差+高于 50 %病變率的稀釋度的對(duì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0099] 表1腸道病毒EV71接種畑細(xì)胞的TCID50滴度統(tǒng)計(jì)
[0100]
[0101] 測(cè)定結(jié)果顯示腸道病毒EV71的TCIDsq為1〇-5'VlOOul
[0102] 5.3本發(fā)明藥物制劑對(duì)RD細(xì)胞毒性作用
[0103] RD細(xì)胞按2X104個(gè)/孔（lOOul)接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，細(xì)胞貼壁后備用；用細(xì) 胞維持液將藥物2倍稀釋成9個(gè)梯度，每孔10化1，每個(gè)濃度6孔，同時(shí)設(shè)立6孔正常細(xì)胞對(duì)照、 空白組，置37°C、5%C02培養(yǎng)箱，每日在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，連續(xù)觀察60h。吸去培 養(yǎng)液，PBS潤(rùn)洗一遍，每孔加入lOOuL的0.5mg/mLMTT溶液，37 °C解育4h，棄去MTT，加入 150ULDMS0,震蕩5min，于酶標(biāo)儀測(cè)定490nm波長(zhǎng)處的0D值，計(jì)算實(shí)施例1-4制劑W及利己韋 林藥物濃度下細(xì)胞存活率，結(jié)果見(jiàn)表2。
[0104] 表2實(shí)施例1-4制劑不同濃度下細(xì)胞存活率
[0105]
[0107]表2的結(jié)果顯示，實(shí)施例1-4均w及利己韋林對(duì)RD細(xì)胞均有一定的清除殺滅作用， 實(shí)施例3中的清除效果最為顯著。
[010引5.4本發(fā)明藥物制劑抗病毒藥效作用RD細(xì)胞按2X104個(gè)/孔(lOOul)接種于96孔細(xì) 胞培養(yǎng)板中，細(xì)胞貼壁后備用;細(xì)胞在96孔板中長(zhǎng)成單層后，吸去培養(yǎng)液，每孔加入lOOul的 100TCID50病毒液和lOOul的不同稀釋濃度的石岐外感茶藥液，每一藥物濃度設(shè)置4個(gè)復(fù)孔， 同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組、正常細(xì)胞對(duì)照組、病毒對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。繼續(xù)將培養(yǎng)板置于37 °C，5 %C02溫箱中培養(yǎng)，逐日觀察細(xì)胞病變效應(yīng)，約在病毒對(duì)照組75%-100 %病變時(shí)吸去含 藥維持液，加入lOOul的PBS潤(rùn)洗一遍，每孔加入lOOuL的0.5mg/mLMTT溶液，37°C解育地，棄 去MTT，加入150ULDMS0，震蕩5min，于酶標(biāo)儀測(cè)定490nm波長(zhǎng)處的0D值，計(jì)算藥物的病毒抑制 率，結(jié)果見(jiàn)表3。
[0109] 表3實(shí)施例1-4制劑不同濃度下細(xì)胞存活率
[0110]
[0111] 表3的結(jié)果顯示在不影響細(xì)胞活性的濃度下，實(shí)施例1-4W及利己韋林組可W抑制 腸道病毒EV71在RD細(xì)胞中的復(fù)制，通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)可W發(fā)現(xiàn)本發(fā)明實(shí)施例具有體外抗腸道病 毒EV71的藥效作用，具有顯著的防治手足口病的作用
[0112] 實(shí)施例6:臨床資料
[0113] 6.1、一般資料
[0114] 我院2012年12月至2015年12月收治的重癥手足口病患兒370例，均符合我國(guó)衛(wèi)生 部制定的《手足口病診療指南(2010版)》中的重癥手足口病診斷標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)分為兩組。治療 組135例，其中男67例，女68例，年齡6個(gè)月至5歲，平均（1.9±0.5)歲；病程1~3d，平均（2.5 ± 1.4)d;對(duì)照組135例，其中男67例，女68例，年齡6個(gè)月至5歲，平均(2.3 ± 1.2)歲，病程2~ 4d，平均（2.4±1.6)d;兩組患兒在發(fā)熱、嘔吐、易驚、肢體抖動(dòng)、皮疹等病情程度上差異無(wú)統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義(P〉〇.〇5)。
[011引 6.2、診斷標(biāo)準(zhǔn)
[0116] 均符合中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒發(fā)的《手足口病診療指南(2010年版)》中手足口 病普通型和重型的診斷標(biāo)準(zhǔn)。
[0117] 6.3、治療方法
[0118] 治療組:患兒使用本發(fā)明所述的中藥實(shí)施例3灌腸劑，每日一劑。灌腸方法:灌腸劑 的溫度為38~40°C，該溫度下灌腸可有利于灌腸液的吸收和在腸腔內(nèi)的保留，用20mL注射 器連接靜脈輸液針管(針頭純形剪去)保留灌腸，深度約為5~10cm，每日2次。每次20mL，連 續(xù) lOd。
[0119] 對(duì)照組:給予利己韋林10~15mg/化g/d)加入5 %葡萄糖50mL靜脈滴注，每日1次； 連續(xù)lOd。
[0120] 6.4、療效標(biāo)準(zhǔn)
[0121] 顯效:治療3d內(nèi)體溫恢復(fù)正常，瘤疹干燥結(jié)挪無(wú)滲液且明顯減少，患兒一般情況好 轉(zhuǎn)，進(jìn)食恢復(fù)至正常，精神好；
[0122] 有效:治療4d內(nèi)體溫恢復(fù)正常，瘤疹大部分干燥結(jié)挪，一般情況好轉(zhuǎn)，進(jìn)食增加；
[0123] 無(wú)效:治療5d后仍發(fā)熱，瘤疹較前無(wú)減少或增加或破潰合并細(xì)菌感染，少食。
[0124] 6.5、治療結(jié)果
[0125] 經(jīng)過(guò)lOd的治療，兩組治療后療效比較見(jiàn)表4。
[01%] 表4兩組治療后療效比較
[0127]
[012引從表3可W看出，治療組與對(duì)照組比較P<0.05。治療組135例患者，顯效117例，有 效17例，無(wú)效1例;對(duì)照組135例患者，顯效83例，有效25例，無(wú)效10例，兩組比較治療組顯效 率、總有效率，明顯優(yōu)于對(duì)照組，具有可比性。P < 0.05。
[0129] 6.5.2兩組治療后臨床癥狀消失時(shí)間比較見(jiàn)表2。
[0130] 表4兩組治療后臨床癥狀消失時(shí)間比較
[0131]
[0133] 從表4可W看出，兩組臨床癥狀消失時(shí)間比較，治療組治療后首次退熱、口腔潰瘍 愈合、皮疹消失時(shí)間均明顯短于對(duì)照組，具有可比性。P<〇.05。上述治療過(guò)程中，治療組和 對(duì)照組患者均沒(méi)有出現(xiàn)較大副反應(yīng)，安全性較好。
[0134] 6.6典型病例
[0135] 病例1:楊某，男，2歲，山東臨巧人。2013年來(lái)我院檢查，患兒因突發(fā)咳嗽、咽疼、發(fā) 熱、惡風(fēng)寒等癥狀，手掌、手背、足背、足底、咽后壁可見(jiàn)數(shù)個(gè)大小不等的紅色丘疹，部分被抓 破，有淡紅色分泌物，診斷為手足口病。使用本發(fā)明實(shí)施例3的灌腸劑5天，上述癥狀減輕繼 使用本發(fā)明實(shí)施例4的灌腸制劑5天上述癥狀全部消失，隨訪無(wú)復(fù)發(fā)，徹底治愈。
[0136] 病例2、宋某，女，1.5歲，山東臨沐人。2014年來(lái)我院檢查，患兒高熱不退、蔽窩溫度 為39.8°C，汗少、手掌、手背、足背、足底、咽后壁可見(jiàn)數(shù)個(gè)大小不等的紅色丘疹，經(jīng)過(guò)檢查被 診斷為手足口病。使用本發(fā)明實(shí)施例4的灌腸劑5天，上述癥狀減輕，繼使用本發(fā)明實(shí)施例4 的灌腸制劑5天，上述癥狀全部消失，隨訪無(wú)復(fù)發(fā)，徹底治愈。
[0137] 病例3、謝某，女，3.5歲，山東濟(jì)寧人。2015年來(lái)我院檢查，患兒無(wú)明顯誘因發(fā)生口 腔黏膜潰瘍，疼痛明顯，影響進(jìn)食。手掌、手背出現(xiàn)紅色斑疹，服用利己韋林（口服），效果不 佳。經(jīng)人介紹來(lái)我院檢查，醫(yī)生確診為手足口病。使用本發(fā)明實(shí)施例3的灌腸劑5天，上述癥 狀減輕，繼使用本發(fā)明實(shí)施例3的灌腸制劑5天，上述癥狀全部消失，隨訪無(wú)復(fù)發(fā)，徹底治愈。
[0138] 病例4、馬某，男，1.5歲，山東鄰城人。2015年來(lái)我院檢查，患兒高熱蔽窩溫度為 39.(TC，汗少、手掌、手背、足背、足底、咽后壁可見(jiàn)數(shù)個(gè)大小不等的紅色丘疹，飲食受到影 響，經(jīng)過(guò)檢查被診斷為手足口病。經(jīng)人介紹來(lái)我院就診。使用本發(fā)明實(shí)施例3的灌腸劑5天， 上述癥狀減輕，繼使用本發(fā)明實(shí)施例3的灌腸制劑5天，上述癥狀全部消失，隨訪無(wú)復(fù)發(fā)，徹 底治愈。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于治療手足口病的藥物制劑，其特征在于，所述的藥物制劑包括以下中藥材： 金銀花、蓍草、連翹、薄荷、菊花、桔梗、大青葉、玄參、板藍(lán)根、蒲公英、白綠葉、藁本、牛蒡子、 紫花地丁、元胡、甘草。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于，所述的藥物制劑包括以下重量份中藥 材:金銀花5-14份、蓍草2-7份、連翹3-8份、薄荷2-7份、菊花3-9份、桔梗3-10份、大青葉7-12 份、玄參5-14份、板藍(lán)根3-9份、蒲公英1-6份、白綠葉2-7份、藁本2-6份、牛蒡子8-16份、紫花 地丁 3-8份、元胡2-9份、甘草4-9份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于，所述的藥物制劑包括以下重量份中藥 材:金銀花9.5份、蓍草4.5份、連翹5.5份、薄荷4.5份、菊花6份、桔梗6.5份、大青葉9.5份、玄 參9.5份、板藍(lán)根6份、蒲公英3.5份、白綠葉3.5份、藁本4份、牛蒡子12份、紫花地丁5.5份、元 胡5.5份、甘草6.5份。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于，所述的藥物制劑包括以下重量份中藥 材:金銀花10份、蓍草5份、連翹6份、薄荷5份、菊花6.5份、桔梗7份、大青葉10份、玄參10份、 板藍(lán)根6.5份、蒲公英4份、白綠葉4份、藁本4.5份、牛蒡子12.5份、紫花地丁6份、元胡6份、甘 草7份。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于:所述的藥物劑型為灌腸劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物制劑，其特征在于:所述的灌腸劑的規(guī)格為20ml/瓶。7. -種權(quán)利要求1-4所述的藥物制劑的制備方法，其特征在于，具體的步驟為： (1) 取金銀花、蓍草、連翹、薄荷、菊花、桔梗、大青葉、玄參、板藍(lán)根、蒲公英、白綠葉、藁 本、牛蒡子、紫花地丁、元胡、甘草加6-8倍體積的水煎煮3次，第1次沸后l，h，第2次沸后 1.5h，第2次沸后1.5h，合并濾液； (2) 步驟（1)的濾液縮至成品3.5倍量，靜置24h; (3) 取步驟(2)的上清液濃縮至所需量，過(guò)濾，加入適量的防腐劑攪勻，添加蒸餾水至全 量，攪勻后分裝于直腸給藥瓶?jī)?nèi)封口即得。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述藥物制劑的制備方法，其特征在于：步驟(3)中所述的防腐劑為 酯類(lèi)或酸類(lèi)，優(yōu)選為羥苯酯類(lèi)或山梨酸，進(jìn)一步優(yōu)選為山梨酸。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于:所述的藥物制劑在在制備治療小兒手 足口病的藥物中的用途。
【文檔編號(hào)】A61K36/86GK105998402SQ201610442751
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年6月20日
【發(fā)明人】劉同祥, 徐海燕, 王建超, 方沙沙
【申請(qǐng)人】劉同祥