儲(chǔ)存穩(wěn)定的酶顆粒的制作方法【專(zhuān)利摘要】用于去污劑的酶顆粒的儲(chǔ)存穩(wěn)定性可以通過(guò)加入這樣的聚胺來(lái)改善，所述聚胺的分子含至少10%w/w的氮，其中至少50%的氮原子作為胺存在?！緦?zhuān)利說(shuō)明】?jī)?chǔ)存穩(wěn)定的酶顆粒發(fā)明領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及酶顆粒。更具體地，本發(fā)明涉及這樣的酶顆粒，它們?cè)趩为?dú)儲(chǔ)存過(guò)程中或者作為顆粒去污劑的一部分儲(chǔ)存的過(guò)程中的儲(chǔ)存穩(wěn)定性提高。[0002]發(fā)明背景[0003]呈顆粒形式的酶在顆粒(粉末)去污劑中普遍使用，且在酶顆粒單獨(dú)儲(chǔ)存和作為顆粒去污劑的成分儲(chǔ)存的過(guò)程中，儲(chǔ)存穩(wěn)定性都是一個(gè)主要的關(guān)注因素。[0004]用于去污劑的酶顆粒的儲(chǔ)存穩(wěn)定性的改善在現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)受到許多關(guān)注，且人們已經(jīng)提出了多種添加劑來(lái)改善儲(chǔ)存穩(wěn)定性。[0005]EP0674002A1,DE4422609A1,US2010/078381A1,W094/16064A1,W098/17768A1和US6872297A1公開(kāi)了多種酶顆粒的配方。【
發(fā)明內(nèi)容】[0006]本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)摻入聚胺可以改善單獨(dú)的酶顆粒或去污劑中的酶顆粒的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。[0007]相應(yīng)地,本發(fā)明提供一種顆粒,其具有包含均勻(homogenous)混合物的核心,所述混合物包含可溶形式的酶以及聚胺。所述聚胺分子含有至少10%w/w的氮，且至少50%的N原子作為胺存在。本發(fā)明進(jìn)一步提供制備所述顆粒的方法、以及包含所述酶顆粒的顆粒去污劑組合物。[0008]發(fā)明詳細(xì)說(shuō)明[0009][0010]所述聚胺通常具有三個(gè)或更多個(gè)伯胺或仲胺基團(tuán)(NH2或NH)。聚胺分子含有至少10%w/w的氮；其可以含有至少15%w/w的氮，具體地是至少20%、至少25%或至少30%。聚胺分子中至少60%的N原子可以作為胺(伯胺、仲胺和叔胺)存在，具體地是至少70%、至少80%或至少90%。至少50%的N原子可以作為伯胺或仲胺存在，具體地是至少55%、至少60%、至少65%或至少70%。[0011]有用的聚胺的一個(gè)例子是基于乙烯亞胺(ethyleneimine)、尤其是聚乙烯亞胺的陽(yáng)離子聚合物。有用的聚胺還包括:聚賴(lài)氨酸、聚烷基胺；聚烯丙基胺(polyallylamines)、聚乙烯胺(polyvinylamines);聚(1-氨基丁二烯)[poly(1-aminobutadiene)]、胺封端的超支化聚服[amine-terminatedhyperbranchedpolyurea];聚(氨基乙基甲基丙烯酸酯)[poly(aminoethylmethacrylate)];和氨基乙基化的丙烯酸類(lèi)聚合物(aminoethylatedacrylicpolymers);胺封端的丁二烯丙烯腈共聚物[amineterminatedpoly(butadiene-co-acrylonitrile)];多氨基取代的單糖、二糖、寡糖、多糖；包含一個(gè)或多個(gè)胺部分的樹(shù)狀分子；聚氨基酸、氨基官能化的聚二烷基硅氧烷(aminofunctionalizedpolydialkylsiloxane)、多氨基烷基(polyaminoalkyls)及它們的混合物。[0012]聚胺的平均分子量(重均)可高于800Da，尤其是高于1200Da，高于1500Da或高于2000Da。平均分子量可低于2，000，OOODa，尤其是低于I,000,OOODa,低于100,OOODa,低于20，000或低于10，OOODa0所述聚胺可以以按所述混合物(未包被的核心)的重量計(jì)0.1-10%、或0.2-5%的量，尤其是0.5-2%的量存在。[0013]聚乙烯亞胺[0014]聚乙烯亞胺(PEI)是一種陽(yáng)離子聚合物，可以是直鏈的或者是支鏈的。直鏈PEI由以-NH-CH2-CH2-作為重復(fù)單元的聚合鏈構(gòu)成，基本上所有的N原子均作為仲胺存在。支鏈PEI可以通過(guò)乙烯亞胺(又稱(chēng)氮丙唳(azeridine))的聚合來(lái)制備。支鏈PEI中仲胺對(duì)伯胺的比例可高于0.7，尤其是高于0.9或高于1.1;所述比例可低于2，尤其是低于1.5、低于1.25或低于I。支鏈PEI中叔胺對(duì)伯胺的比例可高于0.4，尤其是高于0.5，高于0.6，或高于0.7;所述比例可低于1，尤其是低于0.8或低于0.6。[0015]任選的多價(jià)陽(yáng)離子的鹽[0016]為了改善儲(chǔ)存穩(wěn)定性，顆粒核心中的所述混合物可還包含多價(jià)陽(yáng)離子的鹽，尤其是二價(jià)陽(yáng)離子的鹽。在25°C，所述鹽在水中的溶解度高于0.01g/100ml，尤其是高于0.lg/100ml,高于lg/100ml,或高于1.0g/100ml。[0017]所述陽(yáng)離子可以是Zn++，Mg++，Cu++或Mn++。所述可溶鹽的陰離子可以是有機(jī)的或無(wú)機(jī)的，例如硫酸根、乙酸根、硝酸根、磷酸根、檸檬酸根、甲酸根、氯(chloride)、或亞硫酸根。所述鹽可以是無(wú)水的，或者是水合物的形式。具體的例子是MgSO4?7H20,ZnSO4?7H20,以及乙酸鋅、乙酸鎂(Mg-acetate)、，MgCl2,ZnCl2,Mg(NO3)2，Zn(NO3)2，ZnSO3,檸檬酸鎂(Mg-citrate)、朽1樣酸鋒(Zn-citrate)。[0018]所述混合物可以以按重量計(jì)0.01-90%、更具體地是0.05-50%、更優(yōu)選的是0.1-20%、或0.1-10%的量(以無(wú)水形式計(jì)算)包含鹽或鹽的組合。所述混合物典型地以0.005-5%、更優(yōu)選0.01-2%的量包含所述陽(yáng)離子(例如Zn和/或Mg)。[0019]酶`[0020]所述酶可以是水解酶(酶命名法EC3)、脂肪酶、角質(zhì)酶、蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、甘露聚糖酶、裂合酶或果膠酸裂合酶。[0021]脂肪酶和角質(zhì)酶[0022]合適的脂肪酶和角質(zhì)酶包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾的或蛋白質(zhì)工程化的變體。例子包括來(lái)自嗜熱絲孢菌屬(Thermomyces)，例如如EP258068和EP305216中描述的來(lái)自疏棉狀嗜熱絲孢菌(T.1anuginosus)(原先名為疏棉狀腐質(zhì)霉(Humicolalanuginosa)的脂肪酶,來(lái)自腐質(zhì)霉屬(Humicola)的角質(zhì)酶,例如W096/13580中描述的來(lái)自特異腐質(zhì)霉(H.1nsolens)的角質(zhì)酶；假單胞菌屬(Pseudomonas)脂肪酶,例如來(lái)自產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)或假產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP218272)、洋蔥假單胞菌(P.cepacia)(EP331376)、斯氏假單胞菌(P.stutzeri)(GBI,372,034)、突光假單胞菌(P.fluorescens)、假單胞菌菌株SD705(W095/06720和W096/27002)、威斯康星假單胞菌(P.wisconsinensis)(W096/12012)、芽孢桿菌屬(Bacillus)脂肪酶,例如來(lái)自枯草芽抱桿菌(B.subtilis)(Dartoisetal.,1993,BiochemicaetBiophysicaActa,1131:253-360)、嗜熱脂肪芽抱桿菌(B.stearothermophilus)(JP64/744992)或細(xì)小芽孢桿菌(B.pumilus)(W091/16422)。[0023]其他例子是如W092/05249,W094/01541,EP407225,EP260105,W095/35381,W096/00292，W095/30744,W094/25578,W095/14783,W095/22615,W097/04079,W097/07202,W000/060063，W02007/087508和W02009/109500中描述的脂肪酶變體。[0024]優(yōu)選的可商購(gòu)脂肪酶包括LipolaseTM,LipolaseUltraTM,andLipex?；LecitaseTM,LipolexTM;LipocleanTM,LipoprimeTM(NovozymesA/S)。其他可商購(gòu)的脂肪酶包括Lumafast(GenencorIntInc);Lipomax(Gist-Brocades/GenencorIntInc)和來(lái)自Solvay的芽孢桿菌屬脂肪酶。[0025]蛋白酶[0026]合適的蛋白酶包括動(dòng)物、植物或微生物來(lái)源的那些。優(yōu)選微生物來(lái)源。蛋白酶可以是絲氨酸蛋白酶或金屬蛋白酶，優(yōu)選堿性微生物蛋白酶或胰蛋白酶樣蛋白酶。堿性蛋白酶的例子有枯草桿菌蛋白酶，尤其是源自芽孢桿菌屬的那些，例如枯草桿菌蛋白酶Novo、枯草桿菌蛋白酶Carlsberg、枯草桿菌蛋白酶309、枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿菌蛋白酶168(描述于W089/06279)。胰蛋白酶樣蛋白酶的實(shí)例為胰蛋白酶(例如，豬或牛來(lái)源的)，和描述于W089/06270和W094/25583的鐮孢屬(Fusarium)蛋白酶。[0027]可用的蛋白酶的實(shí)例為描述于W092/19729、W098/20115、W098/20116和W098/34946的變體，特別是在下述位置中一個(gè)或多個(gè)具有取代的變體:27、36、57、76、87、97、101、104、120、123、167、170、194、206、218、222、224、235和274。[0028]優(yōu)選的商業(yè)上可獲得的蛋白酶包括Alcalase?,Savinase?,Primase?,Duralase?,Esperase?,和Kannase?(NovozymesA/S),Maxatase?,Maxacal?,Maxapem?,Properase?,Purafect?,Purafectoxp?,Fn2?,和Fn3?(GenencorInternationalInc.)。[0029]淀粉酶:[0030]合適的淀粉酶(a和/或0)包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾或蛋白質(zhì)工程的突變體。淀粉酶包括，例如從芽孢桿菌屬獲得的a-淀粉酶，例如，從一種詳述于GBl,296，839中的特殊地衣芽孢桿菌菌株獲得的a-淀粉酶。[0031]可用的淀粉酶的實(shí)例為描述于W094/02597、W094/18314、W096/23873和W097/43424的變體，特別是在下述位置中一個(gè)或多個(gè)具有取代的變體:15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408和444。[0032]商業(yè)上可獲得的淀粉酶為Stainzyme；StainzymePlus,DuramyI?,Termamyl?,TermamylUltra；Natalase,Fungamyl?和Ban?(NovozymesA/S),Rapidase?和Purastar?(來(lái)自GenencorInternationalInc.)。[0033]裂合酶[0034]裂合酶可以是源自芽孢桿菌屬，尤其是地衣芽孢桿菌或B.agaradhaerens的果膠酸裂合酶，或者衍生自其中任一者的變體，例如如US6，124，127，W01999/027083,W01999/027084，W02002/006442,W02002/092741,W02003/095638中所述的，一種可商購(gòu)的果膠酸裂合酶是XPect;Pectawash和Pectaway(NovozymesA/S)。[0035]甘露聚糖酶[0036]所述甘露聚糖酶可以是家族5或26的堿性甘露聚糖酶。其可以是來(lái)自芽孢桿菌屬或腐質(zhì)霉屬，尤其是B.agaradhaerens,地衣芽孢桿菌，耐堿芽孢桿菌(B.halodurans)，克勞氏芽孢桿菌(B.clausii)，或特異腐質(zhì)霉。合適的甘露聚糖描述于W01999/064619中。一種可商購(gòu)的甘露聚糖酶是Mannaway(NovozymesA/S)。[0037]纖維素酶[0038]合適的纖維素酶包括細(xì)菌或真菌來(lái)源的那些。包括化學(xué)修飾或蛋白質(zhì)工程的突變體。它可以是來(lái)自特異腐質(zhì)霉(US4,435,307)或來(lái)自木霉屬(Trichoderma)，例如里氏木霉(T.reesei)或綠色木霉(T.viride)的真菌纖維素酶。纖維素酶的例子描述于EP0495257?？缮藤?gòu)的纖維素酶包括Carezyme?>Celluzyme?>Celluclean?>CelIuclast?、和Endolase?;Renozyme;Whitezyme(NovozymesA/S)Puradax,PuradaxHA,和PuradaxEG(可獲自Genencor)。[0039]酶核心[0040]所述包含酶和聚胺的均勻混合物(酶核心)以當(dāng)在水中或洗滌液中稀釋時(shí)會(huì)溶解的形式含有所述酶。溶解度可以通過(guò)例如本說(shuō)明書(shū)后文中描述的溶解測(cè)試來(lái)加以測(cè)定。[0041]所述酶基本上沒(méi)有對(duì)所述聚胺的共價(jià)連接(covalentlinks)。因此,顆粒中存在的該酶的分子量與單獨(dú)的該酶多肽的分子量沒(méi)有實(shí)質(zhì)差異，例如，顆粒中存在的酶的平均分子量是該酶多肽的+/_500Da以內(nèi)。優(yōu)選的是該組合物中沒(méi)有添加胺交聯(lián)劑，例如本領(lǐng)域中已知的戊二醛或亞氨酸酯，以避免酶通過(guò)共價(jià)反應(yīng)(例如與添加的聚胺)被固定化，以及多胺與配方中的不溶粒子共價(jià)反應(yīng)。[0042]制備顆粒的方法可見(jiàn)于HandbookofPowderTechnology;Particlesizeenlargement,C.E.Capes著；Volumel;1980;Elsevier。制備方法包括已知的飼料和顆粒制劑技術(shù)，即:[0043]a)噴霧干燥產(chǎn)物，其中在噴霧干燥塔中霧化液體含酶溶液以形成小液滴，在它們?cè)谘馗稍锼陆档倪^(guò)程中干燥·形成含有酶的顆粒狀物質(zhì)。該方法可產(chǎn)生非常小的顆粒(MichaelS.Showell(編)；Powdereddetergents;SurfactantScienceSeries;1998;第71卷，140-142頁(yè);MarcelDekker)。[0044]b)成層的(layered)產(chǎn)物，其中酶作為層包被在預(yù)成型的惰性核心顆粒周?chē)?，其中將含有酶的溶液霧化，通常流化床設(shè)備中(其中預(yù)形成的核心粒子被流化)霧化，含有酶的溶液粘附于核心粒子并干燥，在核心顆粒的表面上留下干燥酶的層。如果能找到具有期望尺寸的有用的核心粒子，則該方法可獲得具有期望尺寸的顆粒。這種類(lèi)型的產(chǎn)品描述于例如W097/23606中。[0045]c)吸收的(absorbed)粒子，其中不是將酶包被為核心周?chē)膶?，而是使酶被吸收到核心的表面上?或表面中。這樣的方法描述于W097/39116中。[0046]d)擠出或丸粒化(pelletized)的產(chǎn)品,其中將含有酶的糊料壓成丸粒(pellets)或在壓力下通過(guò)小的開(kāi)口擠出并切割為粒子，隨后干燥該粒子。這樣的粒子通常具有相當(dāng)大的尺寸，因?yàn)殚_(kāi)有擠出開(kāi)口的材料(通常是具有鉆孔的板)限制了擠出口上的容許壓降。此外，當(dāng)使用小的開(kāi)口時(shí)，非常高的擠出壓力可增加酶糊料的產(chǎn)熱，這對(duì)酶是有害的(MichaelS.Showell(編)；Powdereddetergents;SurfactantScienceSeries;1998;第71卷，140-142頁(yè);MarcelDekker)。[0047]e)噴射造粒產(chǎn)物，其中將酶粉末懸浮于熔化的蠟中，并將懸浮液噴射(例如通過(guò)轉(zhuǎn)盤(pán)噴霧器)到冷卻室中，在此冷卻室中液滴快速地固化(MichaelS.Showell(編輯)；Powdereddetergents;SurfactantScienceSeries;1998;第71卷，140-142頁(yè)；MarcelDekker)。所獲產(chǎn)物中酶均勻分布于惰性材料中而不是集中在其表面上。US4,016,040和US4，713，245也是涉及此技術(shù)的文獻(xiàn)。[0048]f)混合器造粒產(chǎn)物，其中將含酶液體添加于常規(guī)造粒組分的干燥粉末組合物。將液體和粉末以合適的比例混合，并且隨著液體的水分為干燥粉末所吸收，干燥粉末的組分開(kāi)始粘著并團(tuán)聚，粒子變大，形成包含酶的微粒(granulates)。這樣的方法描述于US4,106，991和有關(guān)的文獻(xiàn)EP170360、EP304332、EP304331、W090/09440和W090/09428中。在該方法的一種具體產(chǎn)品中，其中可以用各種高剪切混合器作為造粒機(jī)，將由作為活性化合物的酶、填充劑和粘合劑等組成的微粒與纖維素纖維混合以強(qiáng)化粒子，而得到所謂的T-微粒(T-granulate)。經(jīng)強(qiáng)化的粒子更加堅(jiān)固，酶粉塵釋放更少。[0049]g)粉碎(sizereduction),其中通過(guò)磨碎或壓碎含有酶的較大的粒子、丸粒、片體(tablet)、還塊(briquettes)等而產(chǎn)生核心。通過(guò)將磨碎或壓碎的產(chǎn)物過(guò)篩來(lái)獲得所需要的核心粒子級(jí)分。尺寸過(guò)大和尺寸過(guò)小的粒子可循環(huán)利用。粉碎描述于(MartinRhodes(編輯)；PrinciplesofPowderTechnology;1990;ChapterlO;Johnffiley&Sons)中。[0050]h)流化床造粒。流化床造粒包括將細(xì)粒(particulate)懸浮于空氣流中并經(jīng)噴嘴噴射液體到流化的粒子上。被噴射的液滴擊中的粒子濕潤(rùn)并發(fā)粘。粘性的粒子與其它粒子碰撞并粘附于其上而形成顆粒。[0051]i)可對(duì)核心進(jìn)行干燥，如在流化床干燥器中干燥。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用飼料或酶工業(yè)中其它已知的用于干燥顆粒的方法。所述干燥優(yōu)選在25-90°C的產(chǎn)品溫度進(jìn)行。對(duì)于某些酶，包含酶的核心在用鹽包被之前含水量低是重要的。如果在除去過(guò)量水之前就用鹽包被水敏感性酶，則水分會(huì)被截留在核心中并可能給酶的活性造成不利的影響。在干燥之后，所述核心優(yōu)選含有0.l-10%w/w的水。[0052]任選的包衣[0053]鹽.包衣[0054]所述顆粒包含核心，該核心可以是無(wú)包衣的，或者可以被至少一個(gè)包衣所包圍。包衣可包含按重量計(jì)至少60%w/w的鹽，例如按重量計(jì)至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%,至少90%,至少95%或至少99%w/w的鹽。[0055]包衣可以以核心重量的至少5%，例如至少10%或15%的量施加。所述量可為至多70%、50%、40%或30%。[0056]為了提供可接受的保護(hù)，鹽包衣優(yōu)選為至少I(mǎi)Um厚，尤其是至少2ymm、至少4ii_、或至少8iimm厚。包衣越厚,產(chǎn)生顆粒就越耗時(shí)、越昂貴。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，鹽包衣的厚度低于IOOiim。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，鹽包衣的厚度低于60iim。在一個(gè)甚至更具體的實(shí)施方案中，鹽包衣的總厚度低于40um。[0057]包衣應(yīng)通過(guò)形成基本上連續(xù)的層來(lái)包被核心單元?；旧线B續(xù)的層應(yīng)理解為極少有孔或無(wú)孔的包衣，從而使得它所包裹/封裝的核心單元極少有或沒(méi)有未包被區(qū)域。層或包衣特別應(yīng)在厚度上是均勻的。鹽可以從完全溶解有該鹽的鹽溶液、或從其中細(xì)粒子小于50iim、例如小于10iim或小于5iim的鹽懸液加入。優(yōu)選的是所述鹽作為包衣層中的連續(xù)相存在。[0058]鹽包衣可以進(jìn)一步含有如本領(lǐng)域已知的其他材料，例如填充劑、防粘劑、色素、染料、增塑劑和/或粘合劑，例如二氧化鈦、高嶺土、碳酸鈣或滑石。[0059]優(yōu)選的是包衣層的連續(xù)部分(相對(duì)于離散的填充粒子(fillerparticles))占包衣的至少50%w/w，更優(yōu)選多于60%,75%,90%或95%。[0060]鹽[0061]鹽包衣可以包含單一鹽或兩種或多種鹽的混合物。鹽可以是水溶性的，特別具有在20°C在100g水中至少5克，優(yōu)選每100g水至少I(mǎi)Og的溶解度。[0062]鹽可以是無(wú)機(jī)鹽。這些鹽中的陽(yáng)離子的離子是銨、鈉、鉀和鎂。陰離子的例子包括氯(chloride)、硫酸根、磷酸根、檸檬酸根。具體實(shí)例包括NaH2P04、Na2HP04、Na3P04、(NH4)H2PO4'K2HPO4'KH2PO4'Na2SO4'K2SO4'KHSO4'MgSO4'Mg(NO3)2、(NH4)2S04和檸檬酸鈉。[0063]鹽可以是無(wú)水形式，或它可以是水合鹽，即具有結(jié)合的結(jié)晶水的結(jié)晶鹽水合物。具體例子包括無(wú)水硫酸鈉(Na2SO4)、無(wú)水硫酸鎂(MgSO4)、七水硫酸鎂(MgS04(7H20))、七水磷酸氫二鈉(Na2HPO4(7H20))、六水硝酸鎂(Mg(NO3)2(6H20))、二水檸檬酸鈉和四水乙酸鎂。[0064]優(yōu)選地，將所述鹽作為該鹽的溶液涂施，例如使用流化床。[0065]仵詵的額外包衣[0066]所述顆粒可以包括一個(gè)或多個(gè)額外的包衣，例如用來(lái)進(jìn)一步改進(jìn)儲(chǔ)存穩(wěn)定性或降低粉塵形成(dustformation)。合適的包衣材料的例子有聚乙二醇(PEG)、甲基輕丙基纖維素(MHPC)、和聚乙烯醇(PVA)。[0067]測(cè)試方法[0068]溶解測(cè)試[0069]下述溶解測(cè)試可以用來(lái)確定顆粒的核心中的酶是否為可溶形式。該測(cè)試用來(lái)區(qū)分可溶形式的酶和固定化的酶。`[0070]將水或去污劑溶液(經(jīng)30min攪拌并通過(guò)一層絲網(wǎng)過(guò)濾)調(diào)整到20°C±2°C并放置在一臺(tái)調(diào)節(jié)到600rpm±10rpm的4葉螺旋槳式攪拌器(4-bladedpropellerstirrer)之下。在Ttl加入75mg含酶粒子(75mgenzymecontainingparticle)/I去污劑溶液。添加含酶粒子之后，在最先的60秒內(nèi)每15秒從去污劑溶液中抽取樣品并過(guò)濾來(lái)測(cè)量釋放到去污劑溶液中的酶的濃度。然后每30秒取出樣品直到120秒，再每60秒取出樣品直到1100秒。分別計(jì)算從含酶顆粒釋放50%和90%的酶的時(shí)間。如果90%釋放的時(shí)間小于10分鐘，尤其是小于5分鐘或小于3分鐘,或者如果50%釋放的時(shí)間小于5分鐘,尤其是小于2.5分鐘或1.5分鐘，則認(rèn)為核心中的酶是可溶形式。[0071]抽出的樣品中的酶活性可以通過(guò)合適的分析方法來(lái)測(cè)量，例如對(duì)于脂肪酶，使用包含合成底物，如對(duì)硝基苯基丁酸酯或?qū)ο趸交貦八狨サ臏y(cè)定法。或者，作為測(cè)定酶活性的替代，可以通過(guò)測(cè)定去污劑溶液或水中酶蛋白的量來(lái)求出酶釋放。[0072]去污劑組合物[0073]所述顆粒特別適合摻入包含表面活性劑的顆粒去污劑中。依照本發(fā)明的酶顆粒當(dāng)摻入到去污劑中，即使是包含有攻擊性(aggressive)的組分如漂白體系的去污劑中時(shí)，導(dǎo)致該酶的儲(chǔ)存穩(wěn)定性改善。[0074]所述去污劑組合物可以例如配制為用于手洗或機(jī)洗的洗衣去污劑組合物，該組合物包含適于預(yù)處理沾污織物的清潔添加劑組合物，或織物軟化組合物，或用于一般家用硬表面清潔操作的去污劑組合物，或用于手動(dòng)或機(jī)器餐具洗滌操作的組合物。[0075]本發(fā)明的去污劑組合可以是任何方便的干燥形式，例如條、片、粉末、微?；蚝稀Ｆ湟部梢允且后w去污劑，或者是水性液體去污劑或非水性去污劑。[0076]表面活性劑[0077]所述去污劑組合物包含一種或多種表面活性劑，表面活性劑可以是非離子型(包括半極性)和/或陰離子型和/或陽(yáng)離子型和/或兩性離子型。表面活性劑典型地以按重量計(jì)0.1至60%的水平存在。[0078]當(dāng)包含在其中時(shí)，去污劑通常將含有約1%至約40%的陰離子型表面活性劑，例如直鏈烷基苯磺酸鹽(linearalkylbenzenesulfonate)、a-烯烴磺酸鹽(alpha-olefinsulfonate)、烷基硫酸鹽(alkylsulfate)(脂肪醇硫酸鹽(fattyalcoholsulfate))、醇乙氧基硫酸鹽(alcoholethoxysulfate)、仲烷基橫酸鹽(secondaryalkanesulfonate)、a-橫基脂肪酸甲酯(alpha-sulfofattyacidmethylester)、烷基或烯基玻拍酸(alkyl-oralkenylsuccinicacid)或肥阜(soap)。[0079]當(dāng)包含在其中時(shí)，去污劑通常會(huì)含有約0.2%-約40%的非離子表面活性劑，如醇乙氧基化物(alcoholethoxylate)、壬基酌?乙氧基化物(nonylphenolethoxylate)、燒基多糖苷(alkyIpoIyglycoside)、烷基二甲胺氧化物(alkyldimethyIamineoxide)、乙氧基化脂肪酸單乙醇酸胺(ethoxylatedfattyacidmonoethanolamide)、脂肪酸單乙醇酸胺(fattyacidmonoethanolamide)、多羥基烷基脂肪酸酸胺(polyhydroxyalkylfattyacidamide)、或葡糖胺的N_酸基N_烷基衍生物(N-acylN-alkylderivativesofglucosamine)(“葡糖酸胺”(glucamides))。[0080]所述去污劑組合物可包含一種或多種表面活性劑，表面活性劑可以是陰離子型和/或陽(yáng)離子型和/或非離子型和/或半極性型和/或兩性離子型，或者是它們的混合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述去污劑組合物包含一種或多種非離子型表面活性劑和與一種或多種陰離子表面活性劑的混合物。表面活性劑典型地以按重量計(jì)大約0.1%至60%、例如約1%至約40%、或約3%至約20%、或約3%至約10%的水平存在。[0081]當(dāng)包含在其中時(shí)，所述去污劑通常將會(huì)含有按重量計(jì)約1%至約40%，例如約5%至約30%，包括約5%至約15%，或約20%至約25%的陰離子型表面活性劑。陰離子型表面活性劑的非限制性實(shí)例包括硫酸鹽(sulfates)和磺酸鹽(sulfonates),尤其是直鏈烷基苯磺酸鹽(LAS)、支鏈烷基苯磺酸鹽(BABS)、苯基鏈烷磺酸鹽、a-烯烴磺酸鹽(AOS)、烯烴磺酸鹽、鏈烯烴磺酸鹽、鏈烷_(kāi)2，3-二基雙(硫酸鹽)、羥基鏈烷磺酸鹽和二磺酸鹽、烷基硫酸鹽(AS)例如十二烷基硫酸鈉(SDS)、脂肪醇硫酸鹽(FAS)、伯醇硫酸鹽(PAS)、醇醚硫酸鹽(AES或AEOS或FES，也稱(chēng)為醇乙氧基硫酸鹽或脂肪醇醚硫酸鹽)、仲鏈烷磺酸鹽(SAS)、石蠟磺酸鹽(PS)、磺酸酯、磺化脂肪酸甘油酯、a-磺基脂肪酸甲酯(a-SFMe或SES)包括甲酯磺酸鹽(MES)、烷基或烯基琥珀酸、十二烯/十四烯琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基-琥珀酸的二酯和單酯或肥皂、及其組合。[0082]陽(yáng)離子型表面活性劑的非限制性例子包括烷基二甲基乙醇胺季銨化合物(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、二甲基雙十八烷基氯化銨(DSDMAC)和烷基苯甲基二甲銨、及其組合。[0083]當(dāng)包括在其中時(shí)，去污劑通常會(huì)含有按重量計(jì)約0.2%-約40%，例如約0.5%-約30%，特別是約1%-約20%、約3%-約10%，例如約3%-約5%、或約8%-約12%的非離子型表面活性劑。非離子型表面活性劑的非限制性例子包括醇乙氧基化物(AE或AE0)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酷，例如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸單乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸單乙醇酰胺(PFAM)、多羥基烷基脂肪酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺，GA，或脂肪酸葡糖酰胺，F(xiàn)AGA)，以及可以通過(guò)商品名SPAN和TffEEN獲得的產(chǎn)品，及其組合。[0084]半極性型表面活性劑的非限制性例子包括氧化胺(AO)例如烷基二甲基氧化胺、N-(椰油烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛脂-烷基)-N,N-雙(2-羥乙基)氧化胺、脂肪酸鏈烷醇酰胺和乙氧基化脂肪酸鏈烷醇酰胺、及其組合。[0085]兩性離子型表面活性劑的非限制性例子包括甜菜堿、烷基二甲基甜菜堿、和磺基甜菜堿、及其組合。[0086]增潔劑或絡(luò)合劑[0087]去污劑可以含有0-65%的去污劑增潔劑(detergentbuilder)或絡(luò)合劑，例如沸石、二磷酸鹽、三磷酸鹽、膦酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽、次氮基三乙酸、乙二胺四乙酸、二乙烯三胺五乙酸、烷基或烯基琥珀酸、可溶性硅酸鹽或?qū)訝罟杷猁}(例如來(lái)自Hoechst的SKS-6)。[0088]在餐具洗滌去污劑中，增潔劑的水平一般為40-65%，特別是50-65%。增潔劑和/或共增潔劑(co-builder)可以特別是與Ca和Mg形成水溶性絡(luò)合物的螯合劑。增潔劑的非限制性例子包括沸石、二磷酸鹽(焦磷酸鹽)、三磷酸鹽例如三磷酸鈉(STP或STPP)、碳酸鹽例如碳酸鈉、可溶性硅酸鹽例如偏硅酸鈉、層狀硅酸鹽(例如來(lái)自Hoechst的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、亞氨基二乙醇(DEA)和2，2，，2”，-次氮基三乙醇(TEA)、和羧甲基菊粉(CMI)、及其組合。[0089]去污劑組合物可以包括單獨(dú)的共增潔劑、或與如沸石增潔劑等增潔劑組合的共增潔劑。共增潔劑的非限制性例子包括聚丙烯酸鹽的同聚物或其共聚物，例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/馬來(lái)酸)(PAA/PMA)。進(jìn)一步的非限制性例子包括檸檬酸鹽、螯合劑例如氨基羧酸鹽、氨基多羧酸鹽和膦酸鹽、和烷基或烯基琥珀酸。另外的特定例子包括2，2’，2”_次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、亞氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N，N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N，N-二乙酸(GLDA)、1-羥基乙烷-1，1-二基雙(膦酸)(HEDP)、乙二胺四(甲叉)四(膦酸)(EDTMPA)、二乙烯三胺五(甲叉)五(膦酸)(DTPMPA)、N-(2-羥乙基)亞氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-單乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N，N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-單丙酸(ASMP)、亞氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亞氨基二乙酸(MIDA)、a-丙氨酸-N，N-二乙酸(a-ALDA)、絲氨酸-N，N-二乙酸(SEDA)、異絲氨酸-N，N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N，N-二乙酸(PHDA)、鄰氨基苯甲酸-N，N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N，N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N，N-二乙酸(TUDA)和磺甲基-N，N-二乙酸(SMDA)、N_(輕乙基)_乙二胺三乙酸鹽(N-(hydroxyetheyl)-ethylidenediaminetriacetate)(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亞乙基三胺五(甲叉膦酸)(DTPMP)、氨基三(甲叉膦酸)(ATMP)、及其組合和鹽。進(jìn)一步的示例性增潔劑和/或共增潔劑在例如W009/102854、US5977053中描述。[0090]聚合物[0091]去污劑可以包含一種或多種聚合物。例子有羧甲基纖維素、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯咪唑)、聚羧酸鹽/酯例如聚丙烯酸鹽/酯、馬來(lái)酸/丙烯酸共聚物和月桂基甲基丙烯酸/丙烯酸共聚物。[0092]漂白體系[0093]所述去污劑可以含有漂白體系，其可以包含H2O2來(lái)源例如過(guò)硼酸鹽或過(guò)碳酸鹽，其可以與過(guò)酸形成性漂白活化劑(例如四乙酰乙二胺或壬酰氧苯磺酸鹽)組合?？商娲兀左w系可以包含過(guò)酸，例如酰胺、亞胺或砜類(lèi)型的過(guò)酸。[0094]合適的漂白體系組分包括漂白催化劑、光漂白劑、漂白活化劑、過(guò)氧化氫來(lái)源例如過(guò)碳酸鈉和過(guò)硼酸鈉、預(yù)形成的過(guò)酸及其混合物。合適的預(yù)形成的過(guò)酸包括但不限于過(guò)氧羧酸和鹽、過(guò)碳酸和鹽、過(guò)亞胺酸和鹽、過(guò)一硫酸和鹽例如臭氧(R)、及其混合物。漂白體系的非限制性例子包括與過(guò)酸形成漂白活化劑組合的基于過(guò)氧化物的漂白體系，其可以包含例如無(wú)機(jī)鹽，包括堿金屬鹽例如過(guò)硼酸鹽的鈉鹽(通常為單或四水合物)、過(guò)碳酸鹽、過(guò)硫酸鹽、過(guò)磷酸鹽、過(guò)硅酸鹽。合適的光漂白劑可以例如是磺化鋅酞菁。合適的漂白活化劑包括4-(十二烷酰氧基)苯磺酸鹽(LOBS)、4-(癸酰氧基)苯磺酸鹽、4-(癸酰氧基)苯甲酸鹽(DOBS)、4_(3，5，5-三甲基己酰氧基)苯磺酸鹽(IS0N0BS)、四乙酰基乙二胺(TAED)和4_(壬酰氧基)苯磺酸鹽(NOBS)和/或公開(kāi)于W098/17767中的那些。可替代地，漂白體系可以包含例如酰胺、亞胺或砜類(lèi)型的過(guò)酸。漂白體系還可以包含過(guò)酸例如6-(鄰苯二甲酰氨基)過(guò)己酸(PAP)。漂白體系還可以包括漂白催化劑。在一些實(shí)施方案中，漂白組分可以是選自具有下式的有機(jī)催化劑的有機(jī)催化劑:[0095]【權(quán)利要求】1.一種顆粒，其具有包含均勻混合物的核心，該混合物包含可溶形式的酶和聚胺，所述聚胺的分子具有至少10%w/w的氮，其中至少50%的N原子作為胺存在。2.權(quán)利要求1的顆粒，其中所述聚胺是聚乙烯亞胺。3.權(quán)利要求1或2的顆粒，其中所述聚胺的平均分子量高于800Da。4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述聚胺的平均分子量低于2，000，OOODa05.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述聚胺以所述核心中的混合物的重量的0.1-10%、尤其是0.2-5或0.5-2%的量存在。6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述核心中的混合物還包含多價(jià)陽(yáng)離子的可溶鹽，尤其是二價(jià)陽(yáng)離子的可溶鹽。7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述陽(yáng)離子是Zn、Mg、Cu或Mn。8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述可溶鹽是硫酸鹽或乙酸鹽。9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述可溶性鹽以按無(wú)水形式重量計(jì)0.1-20%,尤其是0.5-10%或1-5%的量存在。10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述顆粒包含按所述核心的重量計(jì)1-5%的量的乙酸鋅。11.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述酶是脂肪酶、角質(zhì)酶、淀粉酶、糖酶、纖維素酶、果膠酶、果膠酸裂合酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、漆酶、或過(guò)氧化物酶。12.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒，其中所述核心具有包含鹽的包衣，具體是相對(duì)于未包被的顆粒以重量計(jì)占5-70%的包衣,更具體是包含以重量計(jì)60%w/w的所述鹽的包衣,最具體地是包含在20°C具有至少60%的恒定濕度的鹽的包衣。13.制備前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的顆粒的方法，其包括用包含所述酶和所述聚胺的水溶液制粒。14.一種顆粒去污劑組合物，其包含表面活性劑和權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的酶顆粒。【文檔編號(hào)】C11D3/386GK103797104SQ201280044386【公開(kāi)日】2014年5月14日申請(qǐng)日期:2012年7月5日優(yōu)先權(quán)日:2011年7月12日【發(fā)明者】P.D.赫德,O.西蒙森申請(qǐng)人:諾維信公司