專利名稱：：從用巴氏法滅菌的生物量中制備含有微生物多不飽和脂肪酸的油的方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及含有多不飽和脂肪酸(PUFA)的油，特別涉及純的并穩(wěn)定的含有至少一種多不飽和脂肪酸的微生物油?？梢詮慕?jīng)巴氏法滅菌的生物量或者發(fā)酵肉湯中獲得這種油。
背景技術：
：對各種食物中使用的含有多不飽和脂肪酸的脂質(zhì)產(chǎn)品(這種產(chǎn)品來源于發(fā)酵過程)的需要不斷增加。目前最重要的需要是在嬰兒食品中加入多不飽和脂肪酸。對于發(fā)酵生產(chǎn)含有多不飽和脂肪酸的脂質(zhì)或者油的各種過程已經(jīng)進行了描述。例如EP-A-0155420描述了從被孢霉屬中生產(chǎn)含有γ-亞麻酸(GLA)脂的過程；EP-A-0223960、EP-A-0276541和WO-A-92/13086描述了從被孢霉屬和/或腐霉屬(Pythium)中產(chǎn)生含有花生四烯酸(ARA)油的過程；WO-A-91/07498和WO-A-91/11918描述了從Crypthecodiniumcohnii或者破囊壺菌屬(Thraustochytrium)中產(chǎn)生含有二十二碳六烯酸(DHA)的油的過程；WO-A-91/14427描述了從Nitzschia中產(chǎn)生含有二十碳五烯酸(EPA)的油的過程；US5539133描述了從微型硅藻產(chǎn)生ARA和EPA的過程。通常，將能夠產(chǎn)生含有所要求的多不飽和脂肪酸的脂類的微生物培養(yǎng)在合適的培養(yǎng)基中，然后收獲生物量，并將其進行預處理，以確保接下來能夠使用合適的溶劑從所說的微生物生物量中提取脂類。這樣提取的脂類為粗提物，通常需要進行若干步驟的精煉。通常通過干燥(如噴霧干燥或者凍干)和/或機械粉碎(如勻漿或制粉)來對濕的生物量餅狀物進行預處理。為了降低溶劑的使用量并防止出現(xiàn)令人煩惱的乳狀液，需要將生物量進行干燥。如果需要分離氧化敏感和熱敏感的脂類(如含有多不飽和脂肪酸的脂類)，則特別需要小心，盡量避免使它們暴露在能夠刺激其發(fā)生氧誘導的降解的不良條件下。然而，本領域中所使用的生物量預處理的方法不能避免這些不利的條件。Yamada等(單細胞油的工業(yè)應用，Kyle和Ratledge編輯，118-138(1992))描述了由高山被孢霉中純化的含有花生四烯酸的油，其甘油三酯含量超過90％。在回收處理中，在進行己烷抽提前，將所收獲的生物量干燥并經(jīng)球磨機粉碎。這一方法也不能最大限度地降低其在不利條件下的暴露。這樣，按照本領域現(xiàn)有的方法從微生物生物量中分離的含有多不飽和脂肪酸的脂類通常暴露在刺激氧化的條件下，這些條件對所得的油的質(zhì)量產(chǎn)生不利的影響。發(fā)明描述按照本發(fā)明的第一個方面，其提供了包含至少一種多不飽和脂肪酸(PUFA)的微生物油，這種油的甘油三酯含量超過90％。與現(xiàn)有的含有PUFA的油相比，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這種油特別穩(wěn)定?？梢酝ㄟ^一種或多種適于發(fā)酵過程的微生物來產(chǎn)生這種PUFA?？梢酝ㄟ^各種方法步驟從生物量中回收PUFA，所說的生物量實質(zhì)上是從產(chǎn)生PUFA的發(fā)酵過程中獲得的物質(zhì)。由于本發(fā)明的油可以是微生物來源的，所以應該理解這種油不包括合成油。盡管申請人不希望受理論束縛，但是本申請人相信關于“為什么本發(fā)明的油較其以前描述的油具有更高的穩(wěn)定性”這一問題有很多解釋。這種油可以含有一種或多種存在于所說的生物量中的化合物。而這些化合物中的很多物質(zhì)都可以作為抗氧化劑。另一方面，這些化合物中的一種或多種可以滅活(部分滅活或者至少抑制)存在于這種油中的一種或多種氧化(或者原氧化劑)物質(zhì)。很多物質(zhì)能夠降解含有PUFA的油。這些物質(zhì)包括可以充當催化劑的金屬(如銅、鐵和/或鋅)。此外，類似的金屬可以充當自由基引發(fā)劑。其它降級的因素是光和熱。還存在一種或多種物質(zhì)，例如可以與一種這樣的金屬復合的物質(zhì)，或者它們可以充當自由基凈化劑。此外，獲得本發(fā)明的油的方法可以除去本來存在于所說的生物量中的一種或多種氧化或?qū)е卵趸奈镔|(zhì)。人們相信當PUFA是ARA時，降解的程度尤其高，因此油中的物質(zhì)可以抑制或防止這種PUFA的降解。下文將詳細描述的獲得本發(fā)明的油的方法包括顆粒狀物質(zhì)(或者甚至是干燥的顆粒)的形成，這種顆粒狀形式可以使顆粒或者顆粒形式內(nèi)的PUFA更少地接觸空氣，特別使氧氣，因此可以減少氧化變化。在本發(fā)明的方法中，固醇含量可以減少，這樣固醇(如5-鏈甾醇)的最大量為1.5％重量比。因此所說的油可以含有一種或多種自由基抑制劑、自由基凈化劑和/或抗氧劑。這樣本發(fā)明涉及含有微生物多不飽和脂肪酸(PUFA)的油，其甘油三酯含量高(如至少90％)，并且具有高的Rancimat誘導時間(如80℃下至少5小時)。所說的多不飽和脂肪酸可以是C18、C20或C22ω-3和C18、C20或C22ω-6多不飽和脂肪酸。優(yōu)選的是C20或C22ω-3、或者C20ω-6多不飽和脂肪酸。具體地說PUFA是花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)。這些油的例子是被孢霉屬的含有花生四烯酸的油，或者Crypthecodinium的含有二十二碳六烯酸的油。本發(fā)明的油在用于人類和動物的食品、食物、以及食品組合物或者營養(yǎng)添加劑方面是有利的。此外，本發(fā)明的油可以用于化妝品中。粒狀微?；蛘哳w?？梢杂米魇称坊蛘唢暳辖M合物或者添加劑。本發(fā)明的油含有一種或多種多不飽和脂肪酸，同時甘油三酯含量高。與本領域已經(jīng)描述的含有微生物多不飽和脂肪酸的油相比，這種油具有更高的氧化穩(wěn)定性。優(yōu)選地本發(fā)明的油具有下列特征。甘油三酯的含量超過90％，優(yōu)選的是≥93％。然而，甘油三酯含量≥95％是合適的，甘油三酯的含量可以也可以不≥97％。此外，它在80℃下的Rancimat誘導時間≥5小時，優(yōu)選地80℃下的誘導時間為5-16小時。80℃下的誘導時間為7-16小時是更合適的，80℃下誘導時間可以也可以不為10-16小時。在80℃下測量Rancimat誘導時間，這是因為此溫度更適合于含有多不飽和脂肪酸的油。當在100℃下測量時，本發(fā)明的油的誘導時間為3-5小時。應該注意到本發(fā)明的油的Rancimat誘導時間是在沒有加入外源的穩(wěn)定化合物(如抗氧劑)的情況下測量的。很明顯，在油中存在穩(wěn)定添加劑能夠增加它的Rancimat誘導時間。穩(wěn)定添加劑(如抗氧劑)可以來源于油回收過程中的某個步驟的添加物(例如培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中的添加物)，或者來源于油本身的添加物。Rancimat檢驗包括加熱所說的物質(zhì)，同時進行充分地吹氣。如果此物質(zhì)氧化，它的重量就增加，通常氧化在一段特定的時間后比較迅速地發(fā)生。因此，這一時間可以表明此物質(zhì)的氧化穩(wěn)定性。本發(fā)明的油的其它特征可以包括甘油二酯含量較低，優(yōu)選地低于2％；和/或甘油單酯含量較低，優(yōu)選地低于0.1％。此外，它的顏色較淺，無味，茴香胺值低(茴香胺是用來檢驗醛類的，其是氧化降解的產(chǎn)物)。茴香胺值通常為0.1-5，優(yōu)選的是0.1-2，更優(yōu)選的是0.1-1。本發(fā)明的油的顏色通常是黃至淺黃色。本發(fā)明的微生物油通常以一種特定的多不飽和脂肪酸為主(或者只含有一種)，但它可以還含有少量的其它多不飽和脂肪酸。本發(fā)明也涉及其中存在不只一種多不飽和脂肪酸的微生物油。存在于本發(fā)明的微生物油中的多不飽和脂肪酸為C20ω-3和C18、C20和C22ω-6多不飽和脂肪酸。具體地說，它們包括γ-亞麻酸(GLA)、二高-γ-亞麻酸(DLA)、花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DKA)。獲得本發(fā)明的油的微生物生物量可以含有或者來源于任何種類的能夠產(chǎn)生含有PUFA的油的微生物，例如細菌、酵母、真菌或藻類(或它們的混合物)。例如，本發(fā)明的油可以含有二十二碳六烯酸(DHA)，這種酸優(yōu)選是從藻類或者真菌中獲得的。藻類包括腰鞭毛目(如此屬的那些藻類)Crypthecodiniun。真菌可以是毛霉目屬(如thraustochytrium)的真菌，如優(yōu)選從真菌(如被孢霉屬、腐霉屬或者蟲霉屬(Entomophthora))中獲得的γ-亞麻酸(GLA)，dihomo-γ-亞麻酸或者花生四烯酸(ARA)；或者優(yōu)選從藻類(如Porphyridium或者Nitzschia)中分離出來的含有二十碳五烯酸(EPA)的油。通常從這些有機體中獲得油主要含有一種特定的多不飽和脂肪酸。然而，它們還可以含有少量的其它多不飽和脂肪酸。本發(fā)明涉及從微生物生物量中分離含有所說的多不飽和脂肪酸的本發(fā)明第一個方面的油的方法；在提取油之前可以將所說的微生物生物量進行預處理。由于預處理過程相對溫和的條件，存在于所說的油中的熱敏感和氧化敏感的多不飽和脂肪酸可以不暴露在導致降解的條件下。這樣，按照本發(fā)明的第二個方面，本發(fā)明提供了從微生物生物量(包含產(chǎn)生所說的PUFA的有機體)中獲得含有至少一種多不飽和脂肪酸(PUFA)的油的方法，所說的方法包括a)提供或者獲得干物質(zhì)含量為25-80％的生物量；b)使生物量成為顆粒狀；c)將顆粒干燥，以便得到干燥的顆粒；和d)從干燥的顆粒中提取或分離所說的油。優(yōu)選地，顆粒狀物質(zhì)的平均干物質(zhì)含量為30-70％。從(c)步驟中獲得的干燥顆粒的最適平均干物質(zhì)含量為至少80％。在本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提供了從微生物生物量中分離一種或多種化合物的方法，所說的方法包括a)在使微生物能夠產(chǎn)生所說的化合物的條件下于發(fā)酵肉湯中培養(yǎng)所說的微生物；b)將發(fā)酵肉湯或者從中獲得的微生物生物量經(jīng)巴氏法滅菌；同時c)從所說的微生物生物量中提取、分離或者回收所說的化合物。(b)步驟的巴氏法滅菌的目的是至少部分滅活可能存在于生物量或者肉湯中的一種或多種降解物質(zhì)。這些物質(zhì)可以包括蛋白質(zhì)，如酶(例如蛋白酶)。尤其是，人們的目的是至少部分地滅活脂酶、磷脂酶和/或脂氧合酶。所說的化合物優(yōu)選包括甘油三酯，如上文提到的PUFA中的一種。發(fā)酵的最后步驟是巴氏法滅菌。優(yōu)選地，所說的巴氏法滅菌在任何顆粒化(粉碎或者捏和)之前進行。將發(fā)酵肉湯進行巴氏法滅菌是合適的，盡管也可以將由肉湯獲得的微生物生物量進行滅菌。通過巴氏法滅菌，人們認為至少可以部分避免導致化合物(如PUFA)降解的物質(zhì)。這一巴氏法滅菌至少能夠提高可以由本發(fā)明獲得的PUFA的質(zhì)量。由于巴氏法滅菌不僅能夠殺死所說的微生物，更重要的是它能夠滅活對化合物有不利影響的一種或多種酶，所以巴氏法滅菌是有利的。例如巴氏法滅菌能夠滅活各種脂酶，這些酶能夠?qū)⒅舅釓母视腿サ墓羌苤星懈钕聛?。這對PUFAs是不利的，而高含量的甘油三酯是優(yōu)選的。在巴氏法滅菌后，但在(c)步驟提取之前，可以如本發(fā)明第二個方面(b)和(c)的描述進行顆?；?以便得到顆粒)并將所說的顆粒干燥。本發(fā)明的一個方面的優(yōu)選特性是對等的可適用性，這對其它方面也是如此。在本發(fā)明的方法中，首先將微生物在使得能夠產(chǎn)生所說的多不飽和脂肪酸或者其它將要產(chǎn)生的酸的條件下發(fā)酵。這種發(fā)酵過程是本領域公知的用碳和氮源以及其它多種能夠使微生物生長和/或產(chǎn)生PUFA的添加的化學樣品或物質(zhì)培養(yǎng)所說的微生物。合適的發(fā)酵條件如實施例22所示。然后將發(fā)酵(通常稱為肉湯)所得的物質(zhì)過濾，或者進行其它處理以便至少除去部分含水的組分。優(yōu)選地除去大部分水分，以便獲得生物量餅。此階段的生物量干物質(zhì)含量優(yōu)選為25-80％。然后將生物量顆?；?yōu)選通過擠壓完成這一過程。然而，無論選擇哪種技術進行顆?；?，盡量防止細胞破碎或使之最小化是優(yōu)選的。然后將所得的顆粒干燥。這些顆?？梢悦黠@地增加接下來的干燥步驟的效率。所得的(干燥)顆粒特別適合于浸漬和滲濾提取?？梢哉{(diào)整顆粒的大小使之成為最佳的干燥和提取添加物。優(yōu)先選擇的顆?；瘲l件(如擠壓過程的條件)是能夠使所說的微生物細胞破碎最小的條件。這樣可以提高多不飽和脂肪酸的抗氧化能力，這是因為沒有破碎的細胞通常是保護定位于細胞內(nèi)的多不飽和脂肪酸防止其氧化降解的最好形式。優(yōu)選地，使用溶劑從干燥的顆粒中提取PUFA。任何本領域技術人員公知的合適的溶劑都可以使用。然而，使用非極性溶劑是合適的，例如C1-6烷(如己烷)。在超級臨界態(tài)下使用溶劑也是可能的，例如液態(tài)二氧化碳。本發(fā)明的方法可以降低成本并能夠有效地提取PUFA油，同時可以提供特別高質(zhì)量的油。例如，干燥的粒狀(生物量)允許人們使用特別有效的滲濾提取方法。此外，顆粒使得可以使用相對較低的溫度進行提取，而不會降低PUFA的產(chǎn)率。此外，干燥的顆粒要求降低提取過程中的溶劑使用量。另外的好處是能夠使使用過的溶劑更有效地從生物量中釋放出來(此過程通常稱為溶劑的釋放過程)。(溶劑)提取后所得的殘渣(和甚至溶劑釋放后所得的殘渣)可以用于飼料或飼料組分(如用于動物的飼料)。已經(jīng)提取的PUFA(油)可以直接使用，而不需要進一步的加工；或者經(jīng)過一個或幾個進一步精煉步驟。由于從干燥的顆粒中提取的PUFA油質(zhì)量很高，所以接下來任何必需的精煉步驟不僅容易，而且可以從簡?？梢允褂脴藴始夹g對油進行精煉。例如，將油脫膠、脫酸、漂白和/或除臭。含有PUFA的本發(fā)明的油的甘油三酯含量可以很高和/或具有較高的氧化穩(wěn)定性。其特別適合于營養(yǎng)目的。因此，可以將其加入到食品中(食品成品或者在食品的制備過程中加入)。其也可以作為營養(yǎng)添加劑，例如，將其在合適的莢膜中制成膠囊劑(例如膠囊)。因此PUFA油可以用于人或者動物的食品組合物中。例如牛奶、保健飲料和面包。本發(fā)明的油特別合適用于嬰兒食品中。此外，所說的油也可以用于化妝品中。因此，本發(fā)明的第三方面涉及一種包含本發(fā)明第一個方面的微生物油的組合物。這種組合物可以是人和/或動物的食品或者飼料或者營養(yǎng)添加劑。如果是食品組合物，優(yōu)選的是嬰兒食品。此外，其可以是化妝品組合物。使用生物量的干燥顆粒，可以獲得較期望分離的化合物更高產(chǎn)量的化合物。這是因為顆粒狀結(jié)構可以使所用的溶劑最大限度地進行提取。當然，如果顆粒太大，表面積將更低，導致相應的產(chǎn)量降低。然而，顆粒不能太小，否則將阻塞提取過程中使用的濾膜。為此，本發(fā)明的方法不包括碾磨、剝成薄片或者粉碎步驟或者階段。各階段的含水量也影響產(chǎn)量。干物質(zhì)含量過高，粉碎的生物量將形成細或者塵埃，如果使用過濾提取法，這是不利的。然而，含水量太高，得到的將是泥漿，其太濕不能成為顆粒。將材料顆粒化的方法是本領域公知的。然而，在某些階段它們經(jīng)常與碾磨和剝成薄片結(jié)合使用，這兩種方法具有如上所述的缺點。在本發(fā)明中，使用的是干燥的顆粒進行化合物提取，而不是碾磨或者剝成薄片的形式。此外，通過顆粒化，可以最大限度地減少對生物量中的細胞的破壞。US5,340,594公開了生物量的擠壓方法，但是本文的擠壓形式用于動物飼料沒有證據(jù)表明從那種顆粒形式中提取特定的化合物能夠提高產(chǎn)量。通過將生物量加工成顆粒，有助于顆粒的干燥。生物量在加工成顆粒形式后，干燥可以相當容易而且更有效地進行。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)干燥的顆粒特別穩(wěn)定，尤其在環(huán)境或者室溫下。這種生物量可以以這種形式貯存相當長的一段時間而不降解。盡管不希望受理論約束，但一般推測這是因為所說的化合物位于顆粒的內(nèi)部，因此至少部分地免受環(huán)境(對于某些化合物，環(huán)境可以導致化合物因氧化而降解)的影響。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)干燥的顆粒是特別穩(wěn)定的生物量形式。例如在室溫下，它們可以貯存若干周(如果不是幾年)，降解很少，或者沒有降解或者性質(zhì)變化很少。這就意味其含有的化合物也可以穩(wěn)定地貯存(或者甚至運輸)。此外，它可以在室溫下貯存，這就不需要冷凍或者在特別低的溫度下貯存，而現(xiàn)有的生物量物質(zhì)需要在冷凍或者特別低的溫度下貯存。很明顯，這種穩(wěn)定性是有利的，這是因為貯存費用相當?shù)汀Ｊ股锪款w?；瘍?yōu)選的方法是擠壓。這可以使細胞的破壞最小化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)生物量的穩(wěn)定性有助于最大限度地降低細胞的破碎，換句話說應用本發(fā)明的方法可以優(yōu)化仍然保持完整的細胞的數(shù)目。這一點與許多現(xiàn)有的提取方法不同，它們是破碎細胞以便分離所說的化合物。本發(fā)明也涉及從生物量的顆粒中分離一種或多種PUFA的方法，所說的方法包括a)提供干物質(zhì)含量至少為80％的顆粒，這種顆粒來源于含有微生物的微生物生物量，所說的微生物能夠產(chǎn)生PUFA；和b)通過溶劑提取法從干燥的顆粒中提取或分離所說的PUFA或者每種PUFA。優(yōu)選的提取方法是使用溶劑，相應地所說的化合物在這種溶劑中是可溶的。優(yōu)選的提取方法是使用滲濾本發(fā)明中使溶劑通過顆粒床。在這一技術中，應該確保所用的顆粒不能太小(例如不應該碾磨或粉碎)，否則得到的將是太多的“粉末”(或者細沫)，它們將阻塞濾膜。也應該避免太大的顆粒，但是在這兩種極限之間，技術人員可以獲得最佳的表面積，因此優(yōu)選的顆粒是大于濾膜孔的顆粒。優(yōu)選地，所說的顆粒是高度多孔的，以便使所說的溶劑很容易地接觸到將要提取的化合物。對微生物生物量餅進行預處理，以便使之形成粒狀的微粒將明顯改善后來的干燥的過程。所得的干燥粒狀的生物量特別適合于浸漬或者滲濾提取?？梢詫㈩w粒的大小進行特別的調(diào)整以便適應最佳的干燥和提取條件。通過使用按照本發(fā)明的預處理的生物量，對于提取所需要的化合物是有利的，這樣不需要在提取前破碎細胞?？梢允褂帽景l(fā)明的過程從幾乎任何類型的微生物制備粒狀的微粒或者干燥的顆粒。所說的微生物可以是絲狀形式(如真菌或者特定的細菌)或者單細胞(如酵母、藻類和細菌)。這樣，這些生物量可以是酵母、真菌、細菌或者藻類的微生物。優(yōu)選的真菌是毛霉目的真菌。例如，所說的真菌可以是被孢霉屬、須霉屬(Phycomyces)、布拉霉氏屬(Blakeslea)或者曲霉屬的真菌。優(yōu)選的真菌是高山被孢霉、三孢布拉氏霉(Blakesleatrispora)和土曲霉(Aspergillusterreus)的真菌。就酵母而言，畢赤酵母屬(Pichia)的真菌是優(yōu)選的，如Pichiaciferrii種的真菌。細菌可以是丙酸桿菌屬(Propionibacterium)的細菌。如果生物量中含有藻類，優(yōu)選的是腰鞭毛目和/或Crypthecodinium屬的藻類。優(yōu)選的藻類是Crypthecodiniumcohnii種的藻類。從按照本發(fā)明制備的微生物生物量中的化合物可以位于細胞內(nèi)，與細胞膜或者細胞壁結(jié)合，或者在胞外產(chǎn)生所說的化合物(這種情況下，其在水中可能不溶)。將要分離的化合物可以是親水的或者疏水的(如親脂)。這些化合物的例子是胞內(nèi)蛋白質(zhì)或者酶、脂類、如維生素類的次生代謝物(如維生素B12)、大環(huán)內(nèi)酯或者多烯抗菌素、有香味的物質(zhì)或者類胡蘿卜素。優(yōu)選地，從微生物生物量中將要分離的化合物是親脂化合物。從按照本發(fā)明所處理的生物量中提取的化合物，由于處理過程所使用的溫和條件對化合物的損害極小(如果有的話)，所以化合物的質(zhì)量很高。因此，本發(fā)明特別適合于制備將要從中分離熱和/或氧化敏感的化合物的微生物生物量。本發(fā)明的第二個方面適合于制備用來分離高度不飽和化合物(如含有多不飽和脂肪酸(PUFA)的脂類)的微生物生物量。優(yōu)選的PUFA是C18、C20或C22ω-3或ω-6的多不飽和脂肪酸。例如，所說的化合物可以是二十二碳六烯酸(DHA)(來源于藻類或者真菌，如腰鞭毛目Crypthecodinium或者真菌破囊壺菌屬)；γ-亞麻酸(GLA)、二高-γ-亞麻酸或者花生四烯酸(ARA)(來源于真菌，如被孢霉屬、腐霉屬或者蟲霉屬)；或者二十碳五烯酸(EPA)(來源于藻類，如Porphyridium或者Nitzschia)。可以以其本來的狀態(tài)分離這些PUFA中的任何一種，更常見地是以液體形式分離它們。按照本發(fā)明(本發(fā)明的第四方面)可以分離的化合物的其它例子包括例如從真菌屬分離的β-胡蘿卜素(如霉菌目的須霉屬或者布拉霉氏屬)；從酵母Phaffiarhodozyma分離的變胞藻黃素；從酵母Pichiaciferrii分離的四乙酰植物鞘氨醇(TAPS)和/或從丙酸細菌中分離的維生素B12?？梢蕴崛〉钠渌衔锇ㄓH脂性的/非極性的化合物，如lovastatin、環(huán)孢菌素和萊特洛霉素。在這些化合物中，頭兩個或者可以在細胞外產(chǎn)生，或者在靠近細胞壁的部位產(chǎn)生。因此，合適的溶劑包括庚烷、己烷、丙酮、甲醇和甲苯和乙醇。然而，對于后兩個化合物，可以異丙醇或者丁基乙酸鹽提取環(huán)孢菌素以及使用乙醇或者甲醇提取萊特洛霉素。一般來說，已烷適合于可溶性的抗生素，如由鏈霉菌屬有機體產(chǎn)生的抗生素。其它的化合物包括聚酮化合物或者聚酮化合物的代謝物衍生，其中包括許多抗生素。優(yōu)選的聚酮化合物是那些不合有氮的化合物，并且應該是芳香族的化合物，優(yōu)選地含有至少6個成員的環(huán)。優(yōu)選的聚酮化合物是抑制素，這包括lovastatin,simvastatin,pravastatin和compactin。其它優(yōu)選的化合物是HMG-輔酶A還原酶抑制劑。這些化合物可以降低血液中的膽固醇水平?？梢蕴崛〉牧硪活惢衔锇惞檀己顽薮?如麥角固醇)。這些化合物可以由酵母和霉菌產(chǎn)生。按照本發(fā)明的過程所分離的化合物適合用于人或者動物食品(如嬰兒食品)或者其它可食用的組合物中，并且可以用在化妝品，保健品組合物或者補品或者藥物組合物中。在本發(fā)明的方法中，可以將選擇的微生物首先發(fā)酵以便獲得足夠的生物量來用于接下來的化合物的提取。發(fā)酵條件將取決于所用的有機體，并且使得在所得的生物量中優(yōu)選獲得高含量的化合物。在發(fā)酵過程完成后，發(fā)酵肉湯，根據(jù)將要提取的化合物的類型，將所得的發(fā)酵肉湯進行巴氏滅菌以便殺死生產(chǎn)有機體，并且滅活任何不受歡迎的酶。如果需要，可以向肉湯中加入絮凝劑和/或其它加工助劑，以便提高肉湯的可過濾性。合適的絮凝劑包括CaCl2、Al2(SO4)3和極性陽離子酰胺。這些物質(zhì)的加入量為0.1-2％重量比。優(yōu)選地將生物量(或者肉湯)進行巴氏法滅菌。發(fā)酵后，巴氏法滅菌對于獲得能夠以衛(wèi)生的方式進行加工的漿液是必需的。在發(fā)酵罐中對生物量進行巴氏法滅菌可以有幾個優(yōu)點。首先，生產(chǎn)有機體不會暴露在環(huán)境中。另外，可以將影響靶化合物質(zhì)量的不需要的酶促活性滅活。根據(jù)生產(chǎn)有機體的物種，可以在60-100℃的溫度下進行巴氏法滅菌?？梢酝ㄟ^蒸汽直接加熱發(fā)酵罐來進行巴氏法滅菌，也可以通過間接的加熱方法，使用介質(zhì)經(jīng)換熱器或者通過墻壁或者線圈加熱，或者經(jīng)外部換熱器或者其它合適的換熱器來進行加熱?？梢允褂孟铝械膬?yōu)選的巴氏法滅菌條件，特別是對于被孢霉屬的有機體來說。將發(fā)酵肉湯(或者生物量)進行巴氏滅菌以便殺死所說的微生物并且滅活酶活性。這大約在主要發(fā)酵罐接種后的144小時進行。在50-95℃下對生物量(或者肉湯)進行合適的巴氏殺菌，優(yōu)選的是60-75℃，最優(yōu)選的是63-68℃。滅菌時間為30-90分鐘，優(yōu)選的使50-75分鐘，最優(yōu)選的是55-65分鐘?？梢允褂萌魏魏线m的加熱方式，但是優(yōu)選的是直接蒸汽注射，例如將蒸汽直接注射到主要發(fā)酵容器中。巴氏法滅菌后，使肉湯涼下來或者冷卻。這一過程大約為4小時，大約冷卻到25℃是合適的。如果涉及來源于不同的生物量或者發(fā)酵肉湯的兩個或者更多的有機體，可以將每一種生物量(或者肉湯)分別進行巴氏法滅菌，或者在混合后，將它們一起進行巴氏法滅菌。然而，前者是優(yōu)選的，這是因為然后可以使用不同的巴氏法滅菌條件對不同的有機體進行巴氏法滅菌。通常，在進行發(fā)酵的發(fā)酵罐中進行巴氏法滅菌。然而，對于一些有機體(如細菌)來說，通常首先從容器中除去微生物，然后再進行巴氏法滅菌(例如在聚成粒狀過程的噴霧干燥之前)是優(yōu)選的。如我們所理解的，巴氏法滅菌通常將殺害大多數(shù)(如果不是全部)微生物。因此，在干燥的顆粒中，至少95％，(如果不是95％，則至少為98％)的微生物已經(jīng)被殺死(即它們已經(jīng)比再活著)。對于一些有機體(如畢赤酵母屬)優(yōu)選地使用非巴氏法滅菌。為了防止經(jīng)巴氏法滅菌的生物量在接下來的加工步驟的再污染，可以設計條件以減少微生物生長的危險。一種可能性是使用合適的酸將肉湯酸化。為了防止限度微生物物種的過量生長，3-4的pH范圍結(jié)合較低的加工溫度是足夠的。其它的生物穩(wěn)定(biostatic)劑，如乙醇、吸著物等等也可用于此目的。對于熱穩(wěn)定產(chǎn)品的加工，可以在更高的溫度(60-100℃)下進行。優(yōu)選的酸化條件(如用于被孢霉屬的有機體)如下。將經(jīng)巴氏法滅菌的肉湯的pH調(diào)節(jié)到2-5以便改進微生物的穩(wěn)定性，優(yōu)選的pH為3-4，最優(yōu)選的pH為3.5。肉湯的酸化(在巴氏法滅菌之前或之后)還有其它好處。如果化合物是聚化合物酮(例如抑制素)，那么酸化作用可以導致化合物沉淀。對于許多化合物(特別是水溶性的化合物)來說，在進一步加工之前，沉淀是合適的，當過濾肉湯除去水時只損失極少的化合物。因此，在巴氏法滅菌之前或之后，可以將化合物沉淀(例如通過酸化方法，盡管本領域技術人員熟知的任何其它方法都可以使用)?？梢酝ㄟ^合適的方法調(diào)節(jié)pH，如85％的磷酸，優(yōu)選地使用稀釋的55％的磷酸和最優(yōu)選地使用稀釋的33％的磷酸。在此階段可以得到將巴氏法滅菌的肉湯。下階段，通過將微生物與其周圍的培養(yǎng)基分開將得到生物量?？梢允褂霉?液分離技術來將生物量與發(fā)酵肉湯分開。根據(jù)微生物的種類，通常這種(收獲的)生物量的干物質(zhì)含量為20-35％。然而，為了便于擠壓(和接下來的干燥)，通常這種生物量的干物質(zhì)含量應該為25-80％。如果生物量的含水量太高(例如對于擠壓和/或爾后的干燥來說)，可以將它脫水和/或增加它的干物質(zhì)含量?？梢酝ㄟ^很多方法來完成這一過程。首先，可以將生物量進行(額外的)脫水?？梢允褂眉夹g人員已知的任何脫水方法；期望得到的干物質(zhì)含量為25或30-80％。優(yōu)選使用機械脫水方法。然而，機械脫水所能夠達到的最大干物質(zhì)含量隨微生物類型而變化。對于某些微生物(例如酵母)，在機械脫水后生物量的干物質(zhì)含量不會超過35-40％的水平，而同是這一過程，在某些富含脂類的微生物的生物量中使用，干物質(zhì)含量可高達45-60％。更為理想的方法是使用膜濾器壓榨(帶有壓榨膜的干版和支架濾器壓榨)，這種方法可以結(jié)合帶有機械脫水裝置的固-液分離方法，并且特別適合于獲得所需要的干物質(zhì)含量。此外，可以通過加入增稠(或者干燥)劑來增加所需要的微生物生物量的干物質(zhì)含量。這些增稠劑最好是干燥的，優(yōu)選地對化合物的提取過程和/或化合物的性質(zhì)沒有副影響。例如，增稠劑可以包括淀粉和/或植物纖維(如燕麥或者小麥的糠或者纖維素)。甚至可以使用另一種生物量(含水量更低的生物量)。所說的物質(zhì)可以以任何方式加入，只要其能夠改進擠壓性。有時，例如在固-液分離和/或機械脫水之后，所說的生物量可以形成很大的餅狀物。這可能不適合于粒狀化(例如擠壓)。為了將生物量的大小降至能夠進行顆粒化的程度(例如壓出機的有效輸送)，將生物量粉碎、捏制和/或混合是合適的。可以通過在高剪切混合器中進行(短時間的)處理來完成這一和/或捏制的過程。在此過程中，可以加入也可以不加入所說的或其它的增加稠度的試劑。接下來將所得的(經(jīng)粉碎或者捏制，也可以不經(jīng)過這一過程)生物量進行顆粒化，以便形成顆粒狀的微粒?？梢酝ㄟ^很多種方法進行顆?；Ａ硪环N較低含水量(或者增加干物質(zhì)含量)的方法是使用鹽(例如鹽水)洗滌所說的生物量或者(也是優(yōu)選的)在所說的生物量與肉湯分開后進行洗滌，例如使用洗滌過濾方法。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，通過擠壓過程獲得所需要的微粒結(jié)構和大小。為了優(yōu)化干燥和/或提取過程，顆粒的特性(如結(jié)構和大小)是重要的。在干燥步驟中，如果微粒太小，可能出現(xiàn)的問題是產(chǎn)生塵埃和細沫，而太大的微粒則不能流動并且干燥表現(xiàn)差。在提取過程中，顆粒太小則無法使用滲濾過程，這是因為生物量床的壓力將太高。太多的細沫可能使接下來的純化步驟出現(xiàn)問題。顆粒太大將妨耐提取過程中溶劑有效地滲入。此外，微粒結(jié)構應該是充分緊湊的，以便在干燥和提取期間防止破碎，但是微粒(干燥的顆粒)優(yōu)選具有一定的孔隙度，以便在提取過程中使溶劑有效地滲入。技術人員可以調(diào)整擠壓條件，以便獲得所需要結(jié)構和大小的生物量顆粒。可以調(diào)整擠壓條件以便使細胞破裂最大限度地減少。最小限度的細胞破裂可以確保易變的，氧化敏感的化合物得到最佳的保護，使之免受氧化誘導的降解。因此，優(yōu)選地擠壓在較低的溫度下進行，沒有任何的加熱手段。優(yōu)選的溫度范圍為20-30℃，如大約在室溫下。在擠壓過程中，顆?？赡茏匀恍纬桑氨粩D壓的物質(zhì)”因其本身的重量，在重力的影響下從模板上落下。然而，如果生物量是天然的，那么經(jīng)模板擠壓后形成長條(如意大利面條)狀，然后可以將類似意大利面條的東西切割成所需要東西的顆粒。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)生物量的溫度影響在擠壓過程中產(chǎn)生的顆粒的性質(zhì)。優(yōu)選地，生物量的溫度在擠壓前為6-15℃。然而，壓出機中生物量的溫度可能升高至10-60℃，盡管優(yōu)選的溫度為15-30℃。溫度的上升取決于對生物量施加的壓力和它的干物質(zhì)含量。在擠壓過程中，通常通過向著模板的桶(經(jīng)常是通過螺絲連接的)來給生物量施加壓力。對桶不進行加熱是優(yōu)選地。事實上，當桶為冷的時是有利的。冷卻劑(例如含水溶液，如水)的溫度為1-4℃是合適的，如大約為2℃。一般地說，擠壓不能改變含水量。這就是為什么階段(b)的干物質(zhì)含量與階段(a)的干物質(zhì)含量相同。然而，正象我們理解的那樣，其它顆?；夹g(如下文描述的技術)的確能夠改變含水量，即可以減少含水量(換句話說增加了干物質(zhì)的含量)。對于含有真菌(例如毛霉目的真菌，特別是產(chǎn)生PUFA的真菌)的生物量，步驟(a)中的干物質(zhì)含量(其通常與擠壓顆?；^程中產(chǎn)生的顆粒的干物質(zhì)含量相同)為35-60％是合適的，優(yōu)選地為50-60％。干燥后，干燥顆粒的干物質(zhì)含量優(yōu)選地為至少90％，例如至少95％。優(yōu)選的顆粒化技術是使用壓出機。綜合來看，性能良好的壓出機是W.Pietsch生產(chǎn)的(“通過團聚增加大小”Wiley和Sons1991,385頁)。所說的機器可以是間歇式或者連續(xù)式的壓出機。對于連續(xù)式的壓出機，有已經(jīng)提到的簡單單一螺桿壓出機(兩軸徑向運輸)。此外，還有雙螺桿的壓出機，為共計算器或者計算器旋轉(zhuǎn)。運輸將要擠壓的生物量，它們經(jīng)穿孔的模板部分地被壓緊密并壓縮。另一組壓出機包括球團機。圓柱狀的壓縮工具壓過置于穿孔板上的材料層。如果通過擠壓的方式獲得生物量，那么需要可擠壓形式的生物量。根據(jù)生物量的狀況、所使用的微生物和擠壓條件，如果需要，可以調(diào)節(jié)生物量的含水量?？梢酝ㄟ^加入固體(例如淀粉)來除去水分或者增加干物質(zhì)含量?？梢酝ㄟ^這種方式調(diào)節(jié)生物量的稠度，通常相當于糊狀物的稠度。雖然可以將所說的顆粒用于所說化合物的提取，此外，這些顆粒的確代表可以貯存的生物量的穩(wěn)定形式。這些顆粒可能的其它用途例如，它們可以用于制備嬰兒食品，其中所說的生物量含有一種或多種多不飽和脂肪酸(PUFAs)。本發(fā)明也涉及了其它能夠形成(顆粒狀)微粒的顆?；椒?。例如，多級干燥過程可以包括噴霧干燥和流化床的結(jié)合使用，這種方法也可以產(chǎn)生顆粒狀的微粒。也可以使用其它類型的顆?；夹g。通常的顆粒化是在顆粒狀的形式上通過增加大小或者減少大小獲得固體的行為。一般來說，使用增加大小的方式。綜合來看，現(xiàn)有的較好的顆?；^程類型如W.Pietsch(“通過團聚方式增加大小”(Wiley和Sons,1991，參見上文))描述的類型。在該文中可以得到許多種不同的顆粒化技術，其中包括幾種下文將描述的團聚方法。團聚使小微粒彼此吸附在一起(團聚)，結(jié)果形成較大的微粒(此時為顆粒狀的微粒)。因此，如果第一種技術形成的微粒太小，然后可以使用團聚技術來得到較大的(顆粒狀)微粒。通常使用滾動和/或旋轉(zhuǎn)卷筒或者帶有吸附特性粉沫(以便使微粒粘結(jié)在一起)的錐形物干燥器來進行滾動團聚。有些情況下，可以將額外加入的粘合劑。通過這一機理，可以形成了圓形微粒。通常壓力團聚方法的特征在于將很大的力量作用在大量的顆粒狀物質(zhì)上。一般來說，使用細沫或者“塑料”(非彈性)物質(zhì)來完成這一過程。通常這一過程用于磨碎的物質(zhì)上(然而，通常它也用于干燥的酵母生產(chǎn)上，以便產(chǎn)生具有一定稠度的生面團)。將成形的微粒干燥，以便使干物質(zhì)含量最適于貯存?？梢酝ㄟ^活塞、滾筒、均衡的和成壓出機壓力來完成壓力團聚。上文提到的Pietsch書對這一類型的裝置作了很好的描述。擠壓壓力通常使用壁面摩擦，通過孔或開放末端的模產(chǎn)生對塑料材料流的抗性。特別是在螺桿壓出機上進行充分地混合，并使用很強的剪切力。一般來說，具有低熔解或者增塑溫度的材料可以直接進行團聚。其它的團聚技術也是可能的。例如，與流化床團聚器結(jié)合使用的噴霧干燥方法。首先，可以將生物量經(jīng)噴口霧化或者使用噴霧干燥器的旋轉(zhuǎn)輪子來干燥?；厥占毼⒘?，再加入到噴霧部分。將得到的粘性粉沫在流化床中進一步團聚。在某些情況下，將粉沫潤濕可以改進團聚過程。所描述技術被稱為多步干燥。為了更詳細地描述多步干燥過程，首先將生物量進行噴霧干燥。這樣可以得到細粉。噴霧干燥的溫度通常為160-260℃和/或空氣出口溫度為75-90℃。在本發(fā)明中，通過快速旋轉(zhuǎn)盤或能夠產(chǎn)生小微粒的噴口使所說的生物量噴霧。然后在重力作用下使微粒落向噴霧干燥塔的底部。我們能夠提供可以使用熱空氣進行干燥(90-95℃是合適的)的流化床。這樣能夠發(fā)生團聚，并且微粒可以粘著在一起。然后，將團聚的(顆粒狀的)微粒進行干燥，例如在帶狀干燥床或者半流化床上進行干燥。在開始加工前，生物量的干物質(zhì)含量可能低于30％。在噴霧干燥后，干物質(zhì)的含量可能增加至75-90％，在團聚后，干物質(zhì)的含量可能增加至90-95％。在干燥后，干物質(zhì)的含量可以增加至至少95％。另一種技術是使用流化床團聚器。使粉沫在氣流中流動。在微粒床上，氣流可以和水一起噴射，其中水可以濕潤粉沫并能夠改進團聚作用。一般來說，所描述的團聚過程是用于能夠被塑化的干燥的粉沫。此外還有在多步干燥器上的干燥。在干燥劑后，噴霧干燥結(jié)合使用流化床的干燥方法適合于多種不同類型生物量的團聚。然而，這種過程并不總是適合于容易熱分解的產(chǎn)品或?qū)?熱)空氣的氧化敏感的產(chǎn)品。產(chǎn)生顆粒狀的干燥生物量的好方法是擠壓經(jīng)機械脫水的膜餅，之后進行合適的干燥(如流化床或者半流化床干燥)。另一種團聚(干燥的)生物量的方法是使噴霧干燥的產(chǎn)品重新濕潤，然后進行擠壓，再干燥(如在流化床干燥器上進行干燥)。具有低熔點或低增塑溫度的粉沫(或者某些含有大量細胞內(nèi)油的干燥的生物量，其由于壓出機的壓力而部分溶化)可以進行擠壓。在模板上形成合適的小球。如上所述，可以將(擠壓或者其它方式獲得的)顆粒狀生物量進行干燥，其中在使得這些微粒能夠保持完整的條件下進行干燥是合適的。在顆?；^程后形成的生物量的微粒結(jié)構和大小應該能夠使生物量的干燥更有效。可以使用各種干燥器進行干燥，如帶狀干燥器、真空或者真空帶狀干燥器、流體或半流化床干燥器。技術人員有能力選擇間歇式或者連續(xù)的過程。在本發(fā)明的過程中特別優(yōu)選使用流體或半流化床干燥器?？梢栽诳諝饣蛘叩獨庵羞M行干燥。使用流體和半流化床干燥方法，床內(nèi)的溫度可以調(diào)整到預定值。這些預定值的范圍很廣，例如50-120℃(如50-90℃)，或者為60-80℃。如果需要從生物量中分離易變的化合物，可以將干燥過程中的溫度很容易地調(diào)整到較低的范圍，以防止其氧化或降解。此外可以使用真空干燥過程，例如時間為1-2小時。干燥有以下幾個方面的好處。首先，生物量微粒的干燥(形成顆粒)能夠形成可以穩(wěn)定貯存一段相當長時間的中間材料。所說的生物量的(相對)較高干物質(zhì)含量可以防止從其中將要提取的化合物的降解。從這一點來說，可以將干燥的顆粒認為是存在于所說的生物量中或者與生物量結(jié)合存在的化合物的穩(wěn)定形式。例如，這些顆?？梢宰鳛槊傅妮d體，因此在擠壓前通過將適量的交聯(lián)劑(如戊二醛)混合在所說的生物量中，可以使這些酶穩(wěn)定地存在于顆粒中。此外，按照本發(fā)明制備的干燥的顆粒的好處是可以直接用作，例如食品或者飼料組合物或者添加劑。所說的微粒和/或顆粒(例如通過擠壓產(chǎn)生的)具有下列性質(zhì)。所說的顆粒具有巧克力糖果的性狀。擠壓的顆粒的直徑為0.1-12mm，如0.3-10mm。更理想的是1.5mm-6mm和最理想的(對于干燥后的提取)直徑為2-3mm。顆粒的長度可以是直徑的大約2-5或者6倍。然后可以很容易地包裝它們，并用在市售的提取器上(確保床的通透性)。通常大部分(如果不是實質(zhì)上的全部)顆粒具有相同的大小，確實，技術人員可以獲得高度一致或者均一的顆粒，其中全部顆粒的至少80％(如90％)在限定的范圍內(nèi)具有特定的性質(zhì)。第二方面的組合物(顆粒)優(yōu)選是不能流動的。在形狀上它們大約為圓柱形?？梢允褂脭D壓來得到這種形狀。這些微粒的直徑與用于擠壓的模板的孔大致相同(盡管可能略大)。在這一過程中，微?？梢栽诹鞒瞿０鍟r自動形成。在這種情況下，微粒的長度是可變的。然而，如果技術人員使用剪切手段，例如刀(如緊挨模板的一個或多個旋轉(zhuǎn)刀片)，微粒的長度將受到影響，大部分微粒(不是全部)將實質(zhì)上具有相同的長度。這些微粒優(yōu)選的長度是至少2mm，如至少3mm。顆粒的大小和含水量應該使它們?nèi)菀住扒宓埂?，容易貯存和運輸。一般地說，盡管大多數(shù)微粒實質(zhì)上是細長的，但有些近乎球形。顆粒優(yōu)選的脂類含量為重量比30-50％。顆粒的堆密度通常為400-1100kg/m3。如上所討論的，理想的顆粒是多孔的，以便使溶劑很容易地滲入到將要提取的化合物中。優(yōu)選地，所說的顆粒具有空的通道，這些通道朝向并達到顆粒的中心。通道的數(shù)目應該使顆粒體積的40-60％(如45-55％，優(yōu)選的是50％)是空的。就通道而言，它們的長度可以為它們平均直徑的10-20倍。一般地說，這些顆粒在組成上是同質(zhì)的，這是因為顆粒的外部實質(zhì)上與中心的材料相同。這一點與現(xiàn)有的酵母組合物不同，這種酵母組合物的外部比較堅固，但中心比較空。這些顆?？梢苑€(wěn)定地貯存在最終將要提取的化合物適于的溫度。干燥顆粒優(yōu)選的干物質(zhì)含量為超過80％，更優(yōu)選地至少85％，最優(yōu)選地至少90％，最理想的溫度范圍為93-97℃?？梢允褂门c水可混溶的溶劑提取干物質(zhì)含量較低的顆粒。通常(干燥的)顆粒是多孔的，以便在提取過程中使用的溶劑可以很容易地加進入到顆粒的內(nèi)部。這樣，在擠壓和干燥期間，可以將塵埃的量降至最小(這樣可以增加產(chǎn)率)，同時可以避免在提取物蒸發(fā)前，對(溶劑)提取物進行額外的過濾。顆粒的孔隙率取決于顆粒狀微粒的(水或者)干物質(zhì)含量。通常顆粒中的水分在干燥過程中蒸發(fā)，留下(空的)孔。干燥的顆粒的孔隙率優(yōu)選地為15-50％，如20-40％，最理想地為25-35％。優(yōu)選地，顆粒中的大部分細胞(如果不是實質(zhì)上的全部)是完整的(也就是說，沒有破裂)。特別是來源于霉菌生物量的顆?？梢允峭耆锪课⒘?，它的直徑為0.3-10mm，優(yōu)選地直徑為0.7-5mm，最理想地為1-3mm。一般地，這些微粒以所要求的長度自動形成。另外，也可以將這些顆粒切割成所要求的長度。如果通過擠壓進行顆?；敲磯撼鰴C模板上的孔相當于顆粒的直徑。在顆粒化之前或過程中，可以加入也可以不加入抗氧化劑。所說的抗氧化劑包括酚和抗壞血酸棕櫚酸鹽，例如含量可多達0.1％(重量比)。這樣本發(fā)明可以提供生物量材料，這些生物量材料的特征是能夠使化合物的提取更經(jīng)濟更有效。然后，將存在于其中的化合物純化、分離或者(優(yōu)選地)提取。本發(fā)明的過程使得能夠使用滲濾提取過程。這一提取過程的優(yōu)點似乎歸功于材料的結(jié)構、大小和較高的干物質(zhì)含量。干燥的擠出物要求提取有效化合物的溶劑使用量減少。此外，使用擠出物形式的生物量可以使脫溶劑的烘烤過程進行得更好和更有效。在脫溶劑烘烤過程中和的擠出物殘渣可以用作飼料組分。90-95％的擠出物的干物質(zhì)含量使所說的擠出物可以穩(wěn)定地貯存，而干物質(zhì)含量高于85％已經(jīng)可以明顯地改進接下來的提取過程。優(yōu)選地使用溶劑進行提取。所使用的溶劑取決于將要提取的化合物，但是值得一提的是C1-10烷基酯(例如乙基或丁基醋酸酯)、甲苯、C1-3醇(如甲醇、丙醇)和C3-6烷烴(例如己烷)和/或超臨界流體(例如液態(tài)CO2或者超臨界丙烷)。按現(xiàn)有技術，可以在肉湯的微生物中直接使用溶劑。然而，在顆粒上進行提取，可以明顯地減少所使用的溶劑量。在申請人的部分實驗中，用于提取的溶劑量減少了20-30倍。這樣不僅明顯地節(jié)省了開支(因為使用的溶劑減少了)，而且最大限度地減少了蒸發(fā)問題。使用顆粒，尤其使與溶劑接觸的表面積明顯增加，因此可以獲得更好的產(chǎn)量。如果將要提取的化合物是疏水的，那么優(yōu)選使用非極性溶劑。對于親水的化合物，使用極性溶劑(如醇)是合適的?？梢允褂酶鞣N技術進行提取。優(yōu)選的方法是使用濾膜進行滲濾提取。使用干燥的顆粒填充柱子。然后加入溶劑(己烷)，浸沒所說的顆粒。盡管可以使溶劑只通過柱和干燥的顆粒一次，但優(yōu)選的是把溶劑循環(huán)起來(或者作為關閉和開放的系統(tǒng))。將溶劑循環(huán)3-7次是合適的，如大約5次，循環(huán)一次的合適的時間為半小時至一個半小時。圖3為合適的滲濾提取器。在與含有干燥顆粒的滲濾器連接前，將溶劑加入到容器中。借助于泵使日循環(huán)。使用光滑的濾膜以便除去細沫。也可以使用其它的滲濾器。這些滲濾器可以是反流或者錯流型的。對于前者，可以把干燥的顆粒裝入到被分割成各個部分的旋轉(zhuǎn)量筒量筒(如carousel)。溶劑從一個方向通過一個部分的顆粒，然后通過(以同一個方向是優(yōu)選的)另一個部分(如相鄰的部分)的顆粒。這些機器經(jīng)常稱作carousel提取器，并且可以從Kripp(德國)買到。在另一種技術中，可以將顆粒放置在，例如移動(例如多孔的)帶或者運輸器上，所說的移動帶或者運輸器實質(zhì)上以與溶劑相反的方向運動。這就意味著使用已經(jīng)通過其它顆粒的溶劑提取新鮮的顆粒，同時在已經(jīng)由所說的溶劑事先提取過的顆粒上使用使用新鮮的溶劑。這一安排是最有效的。在錯流技術中，使用新鮮的溶劑提取各批顆粒。也可以使用本發(fā)明的過程從不同的微生物中通過由兩種或更多的微生物混合物制備顆粒狀微?；蛘哳w粒來獲得一種或兩種化合物的混合物。可以通過在發(fā)酵完成后直接將兩種或更多不同微生物的發(fā)酵肉湯混合來獲得微生物混合物，或者剛好在顆?；?如擠壓過程)之前通過合并兩種或更多微生物的生物量來獲得微生物的混合物。在提取過程前，混合兩種或更多不同微生物擠出物也是可能的。按照本發(fā)明的更為優(yōu)選的過程如下a)在允許所說的微生物產(chǎn)生所期望的化合物的條件下，在合適的培養(yǎng)基中發(fā)酵一種或多種微生物，這種發(fā)酵能夠(在周圍的培養(yǎng)基中)產(chǎn)生(微生物)肉湯；b)如果需要，沉淀或者固化所說的化合物，如通過酸化作用；c)把在肉湯中的微生物與培養(yǎng)基分開，可以通過固/液分離(如過濾)方法來進行分離以便獲得生物量；d)將從(a)中獲得的肉湯或者(c)中獲得的生物量進行巴氏法滅菌；e)如果需要，可以增加干物質(zhì)的含量，例如通過加入干物質(zhì)或者通過降低含水量(例如通過脫水或干燥技術)；f)將所得的生物量粉碎和/或捏制(可以增加也可以不增加干物質(zhì)含量，通過加入一種或多種干物質(zhì)來完成)；g)例如通過擠壓方法將所說的生物量顆?；员愕玫筋w粒狀的微粒；h)將顆粒狀的微粒干燥以便獲得干燥的顆粒；i)例如通過使用合適的溶劑提取一種或多種化合物。按照本發(fā)明分離的化合物可以具有很高的質(zhì)量，并且適合用于人或者動物營養(yǎng)品中。尤其是按照本發(fā)明分離的含有多不飽和脂肪酸(PUFA)的脂類適合于營養(yǎng)目的，特別適合加入到嬰兒食品中。下文通過實施例來描述本發(fā)明，所說的實施例是以例證的形式提供的。這些實施例中伴隨下列附圖圖1是溫度和干物質(zhì)(％)對時間的分布圖，表明不同量的擠壓生物量在不同溫度的干燥行為；圖2是油產(chǎn)量對溫度的分布圖，表明在不同時間段由擠壓的生物量中提取的油；圖3是(已知)滲濾提取過程的流程圖；和圖4是油產(chǎn)量對時間的分布圖，表明提取的油量和其提取時間的關系。實施例1-6被孢霉屬發(fā)酵肉湯的處理將160l事先經(jīng)巴氏法滅菌的(68℃,1小時)(盤上生長)高山被孢霉的發(fā)酵肉湯在標準的Dieffenbach平板和框壓濾器(紗布類型nycot2794)上過濾。以最大使用壓力為1.0bar過濾肉湯。在20分鐘內(nèi)，將160l的肉湯經(jīng)過4.35m2的總過濾面積，這樣平均流速為大約110l/m2h。使用大約3倍餅體積的處理水(≈150l)洗滌過濾的餅?；厥沾蠹s30kg干物質(zhì)含量大約為25％的濕餅。使用三種類型的干燥過程。真空干燥35℃下，在真空(大約50mbar)托盤干燥器(大約1m2干燥表面)中干燥10kg的濾餅，在24小時的干燥過程中，得到大約2.5kg干物質(zhì)含量大約為94％的干燥生物量。干燥生物量包含粉碎的生物量和一些大塊生物量。由于塊大的原因，真空干燥很費時間。通風托盤干燥器35℃下，于氮氣中在通風托盤干燥器(大約1m2的干燥面積)中干燥10kg的濾餅，歷時24小時。總共回收了大約2.5kg的干物質(zhì)含量大約為93％的干燥生物量。干燥的生物量由粉碎的生物量和一些大塊組成?？赡苡捎诤写髩K，通風托盤干燥器需要較長時間。流化床干燥器在AEROMATIC的實驗室型流化床干燥器(MP-1類型)中干燥5kg的濾餅，入口氣溫為大約200℃。出口溫度為大約40℃。大約45分鐘，濕的生物量得到干燥，獲得大約1kg干物質(zhì)含量為大約81％的干燥的生物量。將通過最后一種方法回收的干燥的物質(zhì)用于提取油，在6種不同的溫度(這就是實施例1-6)下通過己烷方法進行提取。在氮覆蓋條件下，使用1500ml的己烷(加熱到回流)提取150g干燥的生物量，90分鐘。過濾除去細胞群，在真空條件下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上將所得的微膠粒上的溶劑蒸發(fā)掉。得到粗制的PUFA油。結(jié)果如表1所示。室溫下提取的產(chǎn)率較低，溫度升高后，產(chǎn)率提高。表1從生物量中提取油富含甘油三酯的油是一種淺黃色的油，其中含有一些固體物質(zhì)。實施例7和對比實施例8被孢霉屬發(fā)酵肉湯的處理將500l肉湯(預先如前面實施例所述經(jīng)巴氏法滅菌)在薄膜濾器(SCHULE)中過濾，壓力差為0.5bar。使用10倍于濾餅體積的加工水洗滌濾餅，之后在5.5bar下壓榨30分鐘。所得的餅的干物質(zhì)含量大約為46％。在中試(pilot)擠出機(ODEKERKE，桶的直徑為50mm,profiled桶)上擠壓以這種方式回收的餅。此模板上有10個直徑為1.6mm的孔。在大約45分鐘內(nèi)擠壓了總共19kg的濾餅。在中試工廠流化床干燥器(T4AEROMATIC0.26m2干燥表面)上干燥以這一方法回收的壓出物。65℃下，在大約45分鐘內(nèi)干燥壓出物，最后的干物質(zhì)含量大約為85％(實施例7)。在同一實驗過程中，一些濾餅沒有擠壓(用于比較的實施例8)，并于40℃下在真空托盤干燥器中干燥。由于塊大，這一干燥過程很費時間。這兩種物質(zhì)都使用己烷進行提取。所得物質(zhì)的特性如下干燥壓出物(實施例7)主要由小球組成，提取過程相當容易真空干燥的生物量(用于比較的實施例8)小球和塊，許多細沫，提取過程難，過濾特性不好。實施例9和10使用下列壓出機對與實施例7相同的肉湯進行擠壓實驗LALESSE(Amhem，荷蘭)在實施例9中，使用LALESSE單一螺絲通用壓出機。這種類型的壓出機通常用于小食品的產(chǎn)生。首先以玉米粉(干物質(zhì)含量大約95％)進行實驗，加入到壓出機中，然后在一定的壓力和溫度下，擠壓玉米；直到成型的膨脹擠出物不再出來。這種類型壓出機的桶為模式桶，目的是運輸加工的玉米。用于擠壓的螺絲的類型取決于所加工的材料。螺絲是通用的運輸螺絲或者直徑為48mm的壓縮螺絲。LALESSE機器是7.5Kw中試機器(驅(qū)動容量)。機器的總功率需要為12.1Kw。壓出機的桶可以加熱或者冷卻。在生物量的擠壓過程中，使用帶有1-4個孔(直徑為1.8、2.0、2.2)的模板。處理被孢霉屬生物量的容量(冷卻桶)大約為40kg/h。在擠壓過程中，模板上孔的長/直徑(L/D)比是變化的。ALMEX(Zutphen，荷蘭)在實施例10中，使用實施例7的被孢霉屬生物量和ALMEX公司的加大壓出機。這種類型的壓出機用于寵物食品的生產(chǎn)。它具有配備針的光滑的桶，這種桶能夠運輸生物量。這些針具有相同的功能，即如LALESSE壓出機中桶的模式。這種加大的壓出機的螺絲是標準螺絲。技術數(shù)據(jù)ALMEXContivar150L/D為10(螺絲長與螺絲直徑的比例)螺絲最大轉(zhuǎn)速為180rpm22Kw(驅(qū)動容量)螺絲直徑為150mm使用自來水冷卻模板3環(huán)孔，每個孔的直徑為1.8mm在處理過程中，將生物量的溫度升高到大約25℃。機器的容量是每小時大約為250kg被孢霉屬壓出物。比較實施例11比較以不同方法進行的固/液分離傾瀉器將350l高山被孢霉的發(fā)酵肉湯移入到“FLOTTWEG”傾瀉器(類型Z23-3/441)中。將速度設置在大約4000rpm。在操作過程中，速度在7.5-20rpm的范圍內(nèi)變化。流入速度設置為400l/h。洗滌所說的生物量。總共倒出350l肉湯。飼料溫度為8℃，上清液溫度為15℃?；厥盏母晌镔|(zhì)含量為大約25％。傾瀉器+轉(zhuǎn)鼓真空過濾機將從上述實驗的傾瀉器中獲得的20kg生物量(干物質(zhì)含量為25％)懸浮在500l處理水中，其中溶解有10kgNaCl。在使用帶進行卸貨的轉(zhuǎn)鼓真空過濾機((PAXMAN，紗布類型865.912K/5polyprop))上過濾所得的漿，沒有另外洗滌。鼓的速度為1rpm，壓力差最大為600mbar。在15分鐘之內(nèi)總共過濾了400l。凈濾面積為大約0.3m2，這樣平均流速為5000l/m2h(濾面)。過濾速度十分合適，但所得的餅相當不好?；厥盏倪^濾生物量的干物質(zhì)含量為大約35％。板框壓濾器在板框壓濾器(標準R&amp;B，紗布類型nycot2794)上過濾500l肉湯。使用0.3bar壓力差過濾肉湯。在35分鐘內(nèi)，在總共為5m2的過濾面積上過濾500l的肉湯，平均流速為±175l/m2h。在30分鐘內(nèi)使用大約于2.5倍餅體積的處理水洗滌濾餅，平均流速為400l/m2h。用空氣將所說的餅吹干30分鐘，所回收的生物量的干物質(zhì)含量為大約25％。膜式壓濾器在膜式壓濾器(SCHULE，紗布類型propex46K2)上過濾700l肉湯。使用0.3bar壓力差過濾肉湯。在30分鐘內(nèi)，在總共為6.8m2的過濾面積上過濾700l的肉湯，平均流速為205l/m2h。在7分鐘內(nèi)使用大約于3倍餅體積的加工水(≈300l)洗滌濾餅，平均流速為375l/m2h。與板框壓濾器相比，膜式壓濾器的優(yōu)點為過濾后，可以以很高的壓力擠榨濾餅，這樣可以提高干物質(zhì)的含量。在5.5bar的壓力下壓榨所說的餅30分鐘，這樣所回收的生物量的干物質(zhì)含量為大約45％。在另一個實驗中，在膜式壓濾器(SCHULE，紗布類型propex46K2)上過濾1100l肉湯。使用0.3bar壓力差過濾肉湯。在45分鐘內(nèi)，在總共為12.3m2的過濾面積上過濾1100l的肉湯，平均流速為120l/m2h。在18分鐘內(nèi)使用大約于3倍餅體積的1％NaCl溶液(≈600l)洗滌濾餅，平均流速為162l/m2h。6bar下，將所得的餅壓榨30分鐘，這樣所回收的濾餅的干物質(zhì)含量為大約55％。壓榨并使用1％的鹽溶液洗滌可以明顯增加濾餅的干物質(zhì)含量。實施例12擠壓干物質(zhì)含量不同的生物量擠壓干物質(zhì)含量不同的生物量，這些生物量是通過如實施例7(參見表2)所示的方法獲得的。使用帶有模式桶和通用螺絲的單螺桿壓出機進行擠壓。在擠壓中使用的模板上的孔的數(shù)量不同，孔的直徑大約為2mm。擠壓后所得的微粒的直徑為大約2mm。表現(xiàn)及壓出物的質(zhì)量取決于用于擠壓的生物量的干物質(zhì)百分含量。盡管25％的干物質(zhì)的結(jié)果不夠理想，對于其它的微生物，這樣低的干物質(zhì)含量還是可以使用的。表2．使用不同干物質(zhì)含量生物量的擠壓實驗結(jié)果。實施例13和14及比較實施例15高山被孢霉常規(guī)和擠壓的生物量干燥真空干燥40℃下，將通過常規(guī)方法回收的生物量(比較實施例15，沒有擠壓)在真空托盤中干燥器中干燥50小時。由于大塊的存在，干燥進行的十分緩慢。以這種方法干燥的生物量的干物質(zhì)含量大約為92.5％。作為比較，將大約20g干物質(zhì)含量為55％的壓出物(從實施例11獲得的，φ微粒=2mm)5在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以實驗室標準進行干燥。水浴溫度為68℃，所用的壓力為40mbar。干燥表現(xiàn)適中，只是干燥的生物量粘貼到壁上，并有少量的油滲出。干燥后干物質(zhì)含量是92.3％)。流化床干燥在實施例13中，在不同溫度下將生物量干燥。對于沒有進行預處理的生物量，生物量中的大塊沒有完全被干燥。在這種情況下，由于微粒的大小不同，生物量的干燥是十分不均勻的。如果在干燥前，通過擠壓將生物量進行預處理，干燥的效能可以得到充分地改進。在這種情況下，所干燥的生物量的微粒大小是比較均一的。從這些結(jié)果可知，可以對不同形式分離的生物量進行流化床干燥，但是使用擠壓物可以改進干燥效果。在另一個實驗中(實施例14)，在流化床干燥器上，使用空氣(8000Nm3/m2h)對不同量的(15和30kg)壓出物進行干燥。在干燥過程中取樣并計算干物質(zhì)含量。溫度和這兩種不同量擠出物的干物質(zhì)含量之間的關系如圖1所示。床溫度設置為80℃。擠壓的生物量的直徑是1.3mm。干燥后擠壓的生物量的干物質(zhì)含量為大約96％。實施例16從高山被孢霉的干燥的壓出物中提取脂類在不同溫度下，通過攪拌提取干燥的壓出物使用500ml己烷或者500ml丙醇-2提取100g干物質(zhì)含量分別為93.4％和97.8％的干燥壓出物樣品，如果使用己烷，溫度為20℃、35℃和50℃，如果使用丙醇-2，溫度為20℃、40℃和70℃。在“四-頸”的圓底燒瓶中使用兩個葉片式攪拌器攪拌漿液，并通過加熱罩進行加熱。最后通過回流冷卻器再循環(huán)蒸發(fā)的己烷或丙醇-2。在提取過程中，每個30分鐘在攪拌器停止和微粒沉降后，從燒瓶中去上清液15ml。將1ml樣品用吸移管移到預先稱重的2ml微量離心管中。40℃下，在真空條件過夜后，稱量微量離心管的重量并計算了所有的油。圖2中顯示了此實驗的結(jié)果。己烷提取的結(jié)論-溫度對可以提取的脂類的總量沒有影響，即在比較低的提取溫度下可以獲得較好的脂類產(chǎn)量；-溫度對提取所有可提取的脂類總量所用的時間只有非常小的影響；-在高于20℃的溫度下，可以在30分鐘內(nèi)使用5倍體積的己烷從生物量中提取所有的脂類。丙醇-2提取的結(jié)論-溫度對可以提取的脂類的總量有明顯的影響；-溫度對提取所有可提取的脂類總量所用的時間有明顯的影響；-在73℃下，可以在2小時內(nèi)使用5倍體積的丙醇-2從生物量中提取所有的脂類。所得油的組分取決于提取過程中所用的溶劑(參見表3)。提取溶劑的極性越大，提取的磷脂就越多。可以選擇溶劑的極性以便優(yōu)化所得油的組分。表3在室溫下使用兩種不同的溶劑提取干燥的被孢霉屬的生物量。在較大規(guī)模提取中存在著菌絲過濾的問題，這是由于在提取過程中很高的攪拌器速度使壓出物破裂成為小的微粒。使用滲濾提取代替攪拌提取可以避免這些問題。使用己烷對干燥的壓出物進行滲濾提取以中試規(guī)模進行幾種滲濾提取(參見圖3的過程圖)。20℃下使用己烷提取大約40-45kg的干燥擠壓生物量(己烷/生物量的最初比為4.4l/kg)。齒輪泵的流速設置為1.5m3/h。以大約0.1bar的壓力使用氮氣清洗裝樣容器。提取4小時(提取過程中溫度從18增加到25℃)。每隔30分鐘從菌絲中取樣。將每一個樣品100ml在真空(大約50mbar)條件下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(T水浴是64℃)中一以實驗室規(guī)模蒸發(fā)20分鐘。評價所得油的量。結(jié)果如圖4所示?？梢宰⒁獾?小時后達到平衡。之后，使用大約0℃6備床體積的己烷洗滌提取的生物量。在提取過程中床的高度不變。蒸發(fā)前將菌絲體仔細過濾。在提取過程中我們注意到菌絲體變得越來越清晰，這是由于因為在微粒床上進行深度過濾的原因。實施例17和比較實施例18從三孢布拉氏霉中回收β-胡蘿卜素油使用實驗室過濾設備收獲10升真菌三孢布拉氏霉的發(fā)酵肉湯(預先在75℃經(jīng)巴氏法滅菌15分鐘)。為了提高肉湯的過濾性，向其中加入了CaCl2(終濃度為5g/l)。在這種方式中，使用通用的水果壓汁機(柑橘類的植物壓汁機，HAFICOD.G.M)將回收的生物量以實驗室規(guī)模進行機械脫水(壓榨)，直到干物質(zhì)含量為45％。通過不銹鋼注射器擠壓以這種方式回收的餅，所說的不銹鋼上裝備有模板，模板上有4個孔，每個孔的直徑為1.8mm。以實驗室規(guī)模在流化床干燥器中干燥所得的壓出物(T空氣=40℃，干燥時間為90分鐘，氣流速度為150Nm3/h,AEROMAIICMP-1)。以這一方法干燥的生物量的干物質(zhì)含量為大約95％。使用滲濾提取方法以乙酸乙酯(最初體積/生物量比為30l/kg)提取大約為50g的干燥的壓出物樣品。50℃下提取2小時后，通過真空過濾收獲提取物。使用1倍床體積的乙酸乙酯洗滌生物量。蒸發(fā)前，使用軟化水(提取物/水比為5v/v)將以這種方式回收的提取物洗滌兩次。在50℃(T水浴)下蒸發(fā)乙酸乙酯，直到β-胡蘿卜素的濃度為8g/l。通過有控制的結(jié)晶和爾后的過濾從濃縮物中回收β-胡蘿卜素晶體。使用經(jīng)混合和干燥，但沒有如此擠壓的生物量進行同樣的實驗(實施例18)?；旌细稍锏纳锪刻崛『?，其過濾性于干燥的壓出物相比很差。實施例19從Crypthecodinium回收DHA油使用實驗室離心機(BECKMAMNJM/6E型)從7lCrypthecodiniumcohnii的發(fā)酵肉湯(預先在65℃下經(jīng)巴氏法滅菌1小時)中收獲生物量。將肉湯以5000rpm，每次800ml進行離心，得到澄清的上清液?？偣不厥?24g干物質(zhì)含量為13％的生物量。這就意味著生物量在發(fā)酵肉湯中的濃度大約為4g/kg。向回收的生物量中加入300g淀粉(ROQUETTE,10EV0024批)以便增加干物質(zhì)含量。通過使用通用螺絲和模式桶的單一螺絲實驗室壓出機擠壓以這種方式回收的餅。模板上孔的直徑是2mm，模板的厚度是6mm，這樣模板的L/D為3。50℃下，在真空條件下將所得的光滑壓出物過夜干燥，得到帶有裂紋的干燥的壓出物。以這一方法干燥的生物量的干物質(zhì)含量是大約94％。使用乙烷(最初的己烷/生物量比為5l/kg)提取大約180g干燥的壓出物樣品。60℃下，提取3小時之后，經(jīng)Whatman濾紙將菌絲過濾。使用1000ml新鮮的己烷將得到的提取生物量洗滌一次。將以這一方法回收的過濾菌絲在68℃(T水浴)蒸發(fā)。以這一方法，回收了含有DHA的油的粗制品。借助于GC分析，油中的DHA濃度是32.6％。以這一方法回收的油含有大約67％的甘油三酯，12％的二甘油酯，3.7％的甾醇和大約0.2％的消泡劑(NMR)。這種油的其它特征是類胡蘿卜素的水平(β-胡蘿卜素為0.15mg/ml,γ-胡蘿卜素為5mg/ml)。實施例20從丙酸桿菌屬(Propionibacterium)的未知種中回收維生素B12通過BRPX-213-SGV型沉降器以大約5000G-因子從大規(guī)模的丙酸桿菌屬未知種的發(fā)酵液(28噸)中收獲肉湯(ALFALAVAL,3-7t噸/小時)，所說的肉湯在90℃下熱激2分鐘。使用帶有大約150m2螺旋形聚乙烯砜膜(5kD截斷)的ABCORKOCH組件(HFK131-VSV型)通過超濾將以這種方式澄清的肉湯濃縮2.5倍。以500％的含有加工水的濃縮體積將所得的超濾液滲濾。通過真空蒸發(fā)以3倍濃縮所得的滲濾物。將所得的濃縮物顆?；?，并在NIRO250多步干燥器(流化床噴射干燥器/團聚器)上干燥。干燥器的入口空氣溫度為大約250℃，出口空氣溫度是大約70℃。所用的氣流是大約3000m3/h。這樣產(chǎn)物的溫度為大約70-80℃。加入到干燥器中的濃縮物的密度為大約1050kg/m3。環(huán)境溫度下，使用125ml大約75％的乙醇(含有水可以使提取/技術表現(xiàn)最佳)將大約2g的干燥的顆粒樣品在錐形瓶中通過攪拌提取60分鐘(澄清的提取物)。提取后，使用Whatman濾紙(過濾容易)將提取的生物量過濾。分析以這一方法回收的澄清的粉紅濾液中的維生素B12。使用25ml大約75％的乙醇洗滌所得的生物量。以這種方法，從顆粒化的生物量中提取了大約90％的維生素B12(表4表4從多步團聚的丙酸細菌中提取維生素B12的數(shù)據(jù)實施例2lC.cohnii和高山被孢霉的協(xié)同擠壓將10升高山被孢霉真菌的發(fā)酵肉湯和10升Crypthecodiniumcohnii的發(fā)酵肉湯混合在一起。為了改進混合肉湯的過濾性CaCl2(終濃度為5g/l)。將過濾混合的肉湯，使用通用的水果壓汁機(柑橘類的植物壓汁機，HAFICO)將所得的餅進行機械脫水。通過使用帶有位于模式桶上的通用運輸螺絲和上面帶有一個2mm孔的模板的單螺絲實驗室壓出機回收多說的餅。壓出物的直徑為大約2mm，在實驗室規(guī)模在流化床干燥器中干燥一這種方式獲得的壓出物(T空氣=40℃，干燥時間為1小時，氣流速度為150Nm3/h,AEROMAIICMP-1)。以這一方法干燥的生物量的干物質(zhì)含量為大約92％。使用己烷(最初體積/生物量比為4l/kg)提取大約為100g的干燥的壓出物樣品。環(huán)境溫度下提取2小時后，通過真空過濾回收菌絲。使用4倍床體積的新鮮己烷(最初體積/生物量比為4l/kg)洗滌剩下的提取過的壓出物。將洗滌的己烷與菌絲混合，將所得的菌絲在50℃(T水浴)下蒸發(fā)。通過這種方式回收到含有ARA(C20:4ω6)和DHA(C22:6ω3)的PUFA油的粗制品。按照通常用于食用/植物油的方法精煉所得的油的粗制品。比較實施例22下表列出了用于獲得前面實施例中描述的生物量和肉湯的各種培養(yǎng)條件。</tables>發(fā)酵技術的參考文獻1．MaisterH.G.,RogovinS.p.,StodolaF.H.,WickerhamL.J.,″微生物細胞外鞘脂的形成Ⅳ。通過西弗漢遜酵母中試生產(chǎn)四乙酰植物鞘氨醇″。應用微生物，10,401-406(1962)2．Zu-YiLi,YingyinLu,YadwadV.B.,WardO.P.,″通過高山被孢霉菌株生產(chǎn)花生四烯酸的過程″3．加拿大生物化學雜志，英語73,135-139(1995)4．FinkelsteinM.,HuangC-C.,ByngG.S.,TsauB-R.,LeachJ.,″能夠增加β-胡蘿卜素生產(chǎn)的三孢布拉氏霉的配對培養(yǎng)物″美國專利5,422,247(1995)5．KojimaI.,KoujiK.,SateH.,OguchiY.,″通過發(fā)酵技術生產(chǎn)維生素B12的過程，和產(chǎn)生維生素B12的微生物″美國專利4,544,633(1985)6．KyleD.J.,ReebS.E.,SicotteV.J.,″通過腰鞭毛目生產(chǎn)二十二碳六烯酸″美國專利5,407,957(1995)實施例23原油和精煉油的分析通過實施例1描述的方法(流化床干燥和己烷提取)制備各批原油。應用于油上的所有分析都是按照“美國油化學家學會(AOCS)”描述的程序。使用600MHz儀器通過H-NMR測定三、二、單甘油單酯和磷脂含量。原油具有下列組分使用用于食用油加工過程的標準方法精煉原油。簡言之，通常在排除包埋的空氣的情況下，將油加熱到80-90℃。向油中加入稀釋的NaOH溶液(化學計量的125％相當于游離脂肪酸的量)。反應30分鐘后，通過離心分離水相。用水洗滌油，直到酚酞反應為中性。(為此，使用油量的10％洗滌3次足夠)。通過離心除去水層。所有洗滌步驟完成后，70℃下將油進行真空干燥。加入漂白粉TonsilSupremeFF將干燥的油漂白。(加入的量為2％重量比)。60℃下，于10-15mbar的壓力下使漂白粉與油接觸。反應結(jié)束后，在1bar(含氮)的壓力下，通過葉濾機過濾除去漂白粉。180℃,2-5bar下，將過濾的油分批真空除臭2小時。蒸汽用作除去的介質(zhì)。這樣的蒸汽在加入到油中的水分的原位形成。反應結(jié)束后，將油冷卻。加入氮氣，使反應器中的壓力降至1bar。經(jīng)過這一加工過程，得到含有下列組分的澄清的油>權利要求1．一種微生物油，這種油含有至少一種多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中的甘油三酯含量超過90％。2．按照權利要求1的油，這種油在80℃下的Rancimat誘導時間大于等于5小時。3．按照權利要求1或2的油，其中所說的多不飽和脂肪酸是C18、C20或C22ω-3或者C18、C20或C22ω-6多不飽和脂肪酸。4．按照權利要求1、2或者3的油，其中所說的PUFA是C20或C22ω-3或C20ω-6多不飽和脂肪酸。5．按照上面權利要求之任一的油，其中所的PUFA是花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)。6．按照前面權利要求之任一的油，其中所說的PUFA只是ARA。7．按照前面權利要求之任一的油，其中所說的PUFA是由真菌產(chǎn)生的。8．按照前面權利要求之任一的油，其中所說的真菌是被孢霉屬(Mortierella)的真菌。9．按照權利要求1-5之任一的油，其中所說的PUFA是由藻類產(chǎn)生的。10．按照權利要求8的油，其中所說的藻類是Crypthecodinium屬的藻類。11．一種從微生物生物量中獲得含有至少一種多不飽和脂肪酸(PUFA)的油的方法，這種方法包括a)提供干物質(zhì)含量為25-80％的生物量；b)使生物量成為顆粒狀；c)將顆粒干燥，以便得到干燥的顆粒；和d)從干燥的顆粒中提取或分離所說的油。12．按照權利要求11的方法，其中所說的顆粒的平均干物質(zhì)含量為30-70％。13．按照權利要求12或者13的方法，其中所說的干燥的顆粒的平均干物質(zhì)含量為至少80％。14．按照權利要求11-13之任一的方法，其中使用合適的溶劑提取所說的油。15．按照權利要求11-14之任一的方法，這種方法還包括精煉所提取油。16．按照權利要求11-15之任一的方法，其中(b)步驟中是通過擠壓生物量而進行顆?；摹?7．按照權利要求16的生物量，將其中所說的生物量在顆粒化之前粉碎或者捏合。18．按照權利要求11-17之任一的方法，其中(a)步驟中所說的生物量是通過將發(fā)酵肉湯進行固/液分離而得到的。19．按照權利要求18的方法，其中所說的固/液分離與機械脫水結(jié)合使用。20．按照權利要求11-19之任一的方法，其中(a)步驟中所說的干物質(zhì)含量為25-80％的生物量是通過將固體物質(zhì)加入到所說的生物量中而獲得的。21．按照權利要求11-20之任一的方法，其中(c)步驟中所說的將顆?；锪扛稍锍筛晌镔|(zhì)含量為至少80％的過程是通過流化床或者半流化(subfluidized)床干燥而完成的。22．按照前面權利要求之任一的方法，其中所說的生物量包括或者起源于真菌。23．按照權利要求22的方法，其中所說的真菌屬于毛霉目(Mucorales)。24．按照權利要求22或者23的方法，其中所說的真菌屬于被孢霉屬。25．按照權利要求22-24之任一的方法，其中所說的真菌是高山被孢霉(Mortierellaalpina)。26．按照權利要求11-21之任一的方法，其中所說的生物量包括或者起源于藻類。27．按照權利要求26的方法，其中所說的藻類是甲藻和/或?qū)儆贑rypthecodinium。28．按照權利要求26或者27的方法，其中所說的藻類是Crypthecodiniumcohnii。29．按照權利要求11-28之任一的方法，其中所說的化合物是多不飽和脂肪酸(PUFA)，其可以包含也可以不包含在脂類中。30．按照權利要求29的方法，其中所說的多不飽和脂肪酸是C18、C20或C22ω-3或者C18、C20或C22ω-6多不飽和脂肪酸。31．按照權利要求30的方法，其中所說的PUFA化合物是C20或者C22ω-3或者C20ω-6多不飽和脂肪酸。32．按照權利要求11-31之任一的方法，其中所說的PUFA是花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)。33．按照權利要求1-10之任一的微生物油在制備食品或者化妝品組合物或者營養(yǎng)添加劑方面的用途。34．按照權利要求33的用途，其中所說的食品組合物包括嬰兒食品。35．人類或動物的食品或者化妝品組合物或者營養(yǎng)添加劑，其中包含權利要求1-10之任一所限定的油。36．按照權利要求35的食品組合物，這種食品是嬰兒食品。37．一種從微生物生物量中分離一種或多種化合物的方法，這種方法包括a)在使微生物能夠產(chǎn)生所說的化合物的條件下于發(fā)酵肉湯中培養(yǎng)所說的微生物；b)將發(fā)酵肉湯或者從中獲得的微生物生物量經(jīng)巴氏法滅菌；同時c)從所說的微生物生物量中提取、分離或者回收所說的化合物。38．按照權利要求37的方法，其中所說的巴氏法滅菌至少能夠部分滅活存在于所說的生物量或者肉湯中的一種或多種降解化合物的物質(zhì)。39．按照權利要求38的方法，其中所說的物質(zhì)是降解蛋白酶或者甘油三酯的酶。40．按照權利要求39的方法，其中所說的酶是脂肪酶、磷脂酶、或者脂氧合酶。41．按照權利要求37-40之任一的方法，其中所說的巴氏法滅菌包括在50-100℃下加熱。42．按照權利要求41的方法，其中所說的加熱為65-95℃下加熱。43．按照權利要求41或者42的方法，其中所說的加熱的時間為30-90分鐘。44．按照權利要求37-43之任一的方法，當其中所說的發(fā)酵肉湯仍在發(fā)酵容器中時就對其進行巴氏法滅菌。45．按照權利要求37-44之任一的方法，其中所說的巴氏法滅菌是在發(fā)酵完成后進行的。46．按照權利要求37-45之任一的方法，其中所說的化合物包括甘油三酯。47．按照權利要求37-46之任一的方法，其中所說的化合物包括至少一種多不飽和脂肪酸(PUFA)。48．按照權利要求37-47之任一的方法，其中所說的發(fā)酵肉湯在巴氏法滅菌之后要進行脫水和/或過濾以便產(chǎn)生微生物生物量。49．按照權利要求48的方法，如果需要將其中所說的微生物生物量進行處理以便使干物質(zhì)含量達到25-80％。50．按照權利要求49的方法，其中先將所得到的微生物生物量顆?；缓髮⑺玫念w粒干燥。全文摘要本發(fā)明公開了含有微生物多不飽和脂肪酸(PUFA)的油,這種油具有高的甘油三酯含量,并且具有高的氧化穩(wěn)定性。此外,本文描述了從微生物生物量(這種微生物生物量來源于用巴氏法滅菌的發(fā)酵肉湯)中回收所說的油的方法,其中將所說的微生物生物量壓成顆粒,干燥,然后使用合適的溶劑從干燥的顆粒中提取所說的油。文檔編號C11B1/02GK1217029SQ97194210公開日1999年5月19日申請日期1997年3月21日優(yōu)先權日1996年3月28日發(fā)明者H·L·比爾,J·H·沃爾夫,A·沙普,J·M·J·維瑟申請人:吉斯特-布羅卡迪斯股份有限公司