專利名稱：一株草除靈降解菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株草除靈降解菌，屬于廢水治理技術(shù)領(lǐng)域。是利用微生物的方法降 解化學(xué)農(nóng)藥，解決農(nóng)藥生產(chǎn)過(guò)程中的廢水治理問(wèn)題。
背景技術(shù)：
草除靈(benazolin-ethyl)，化學(xué)名稱4_氯-2-氧代苯并噻唑-3-基乙酸乙 酯，屬有機(jī)雜環(huán)類(lèi)除草劑。15%的草除靈乳油是一種防除油菜田闊葉雜草及其它旱田作物 闊葉雜草的芽后除草劑。純品為淺黃色結(jié)晶粉，帶有典型的硫磺味，溶點(diǎn)77.4°C，密度約 1. 45g · mL—1。在酸性介質(zhì)中極穩(wěn)定，不易水解。微溶于水，20°C時(shí)的溶解度為47mg · Γ1,易 溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑。法國(guó)萬(wàn)安特作物科學(xué)公司于1990年在我國(guó)登記商品草除靈10%乳 油、50%懸浮劑，主要防治繁縷、牛繁縷、豬殃殃、雀舌草等雜草，對(duì)于未出苗的雜草無(wú)效。施 藥后植物通過(guò)葉片吸收，輸導(dǎo)到整個(gè)植物體，敏感植物受藥后生長(zhǎng)停滯，葉片僵綠、增厚反 卷，新生葉扭曲，節(jié)間縮短，最后死亡。氣溫高作用快，氣溫低作用慢。草除靈在耐藥作物內(nèi) 能降解為無(wú)活性物質(zhì)，對(duì)油菜等作物比較安全，芥菜型油菜對(duì)草除靈高度敏感，白菜型油菜 施用草除靈后有輕度藥害。目前，有機(jī)雜環(huán)類(lèi)除草劑草除靈生產(chǎn)廢水生物降解實(shí)驗(yàn)及工程 治理的文獻(xiàn)國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道。因此，從環(huán)境中分離篩選高效降解草除靈的菌株，通過(guò)研究其生 物學(xué)特性、降解特性，能夠?yàn)檗r(nóng)藥生產(chǎn)過(guò)程中的廢水治理提供依據(jù)，可以滿足農(nóng)藥廢水排放 指標(biāo)以及總量控制的要求。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的在于從環(huán)境中篩選出一株高效草除靈降解菌，為農(nóng)藥生產(chǎn) 過(guò)程中的廢水治理問(wèn)題提供依據(jù)。技術(shù)方案下面為本發(fā)明的主要內(nèi)容本發(fā)明提供一株草除靈降解菌，2009年12月17日寄存于中國(guó)微生物菌種保存管 理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No. 3517。菌株為革蘭氏染色反應(yīng)陰性菌 cd_l，經(jīng)鑒定為 Methyloversatilis universalis (關(guān)于 Methyloversatilisuniversalis 國(guó)內(nèi)至今尚未有權(quán)威機(jī)構(gòu)對(duì)其屬名進(jìn)行中文命名，故本專利中涉及的降解菌只提供其拉丁 名屬名和種名的名稱，沒(méi)有中文命名)。主要生物學(xué)特性為G_，菌體為不規(guī)則短桿狀，大小約 0. 5X0. 6 μ m，無(wú)鞭毛；氧化酶和接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性；硝酸鹽還原、糖發(fā)酵及吲哚反應(yīng)陰性。按 5%接種量將菌株cd-Ι接種于100mg/L草除靈的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中48h后，草除靈完全降解。有益效果該發(fā)明的草除靈降解菌在48h內(nèi)能夠完全降解100mg/L的草除靈。可將其制成農(nóng) 藥降解菌劑，解決農(nóng)藥生產(chǎn)過(guò)程中的廢水治理問(wèn)題。
四

圖1 菌株cd-Ι對(duì)IOOmg · L—1草除靈的降解效率五具體實(shí)施例方式以下敘述本發(fā)明的實(shí)施例。1.菌株的富集樣品的采集采自揚(yáng)州某草除靈生產(chǎn)工廠廢水處理池的污泥；取活性污泥5. 00g，置于IOOmL草除靈濃度為20mg · Γ1的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中，30°C、 150r .min-1搖床培養(yǎng)5d，以5%的接種量接入新鮮的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)接3次，經(jīng)測(cè)定連 續(xù)3代能降解草除靈達(dá)90%以上的富集液，即為有活性的富集液。所述基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基的配方為(g· Γ1) :NaCl 1.0, (MM)2SO4 1. 0，K2HPO4 1.5， KH2PO4O. 5，MgSO4 ·7Η20 0. 2，去離子水 IOOOmL, ρΗ7. 0，固體培養(yǎng)基中加入 1. 5% -1. 8% 的瓊脂。2.菌株的分離純化取0. 5mL有活性的富集液作梯度稀釋，取10_2_10_8稀釋度的液體各0. ImL涂布于 含IOOmg · Γ1草除靈的基礎(chǔ)鹽固體培養(yǎng)基平板上，30°C培養(yǎng)，挑取單菌落劃線分離純化，得 到一株能以草除靈為唯一碳源生長(zhǎng)的草除靈降解菌cd-1。3.對(duì)菌株cd-1的16S rRNA基因序列進(jìn)行分析，結(jié)果表明，cd-Ι的16S rRNA基因 序列與Methyloversatilis universalis 16S rRNA基因序列同源性達(dá)99%。并結(jié)合生理 生化特性試驗(yàn)結(jié)果，將cd-Ι鑒定為Methyloversatilis universalis。菌株cd_l的主要生 物學(xué)特性為G—，菌體為不規(guī)則短桿狀，大小約0. 5 X 0. 6 μ m，無(wú)鞭毛；氧化酶和接觸酶試驗(yàn)陽(yáng) 性；硝酸鹽還原、糖發(fā)酵及吲哚反應(yīng)陰性。草除靈的降解試驗(yàn)4.菌株對(duì)草除靈的降解效率研究將菌株cd-Ι接種至3mL無(wú)機(jī)鹽試管中30°C、 150r · mirT1搖床培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，即成種子液；將種子液按5 %接種量轉(zhuǎn)接至含有 IOOmg · Γ1草除靈的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中，30°C、150r · mirT1搖床培養(yǎng)4d，每隔6小時(shí)通過(guò)紫外 掃描檢測(cè)其降解效果，如圖1所示，在培養(yǎng)48h后，草除靈已完全降解。用此方法，可將菌株 用于解決農(nóng)藥生產(chǎn)過(guò)程中廢水治理方面。
權(quán)利要求
一株草除靈降解菌，菌株為革蘭氏染色反應(yīng)陰性菌cd 1，經(jīng)鑒定為Methyloversatilis universalis，2009年12月17日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No.3517，主要生物學(xué)特性為G ，菌體為不規(guī)則短桿狀，大小約0.5×0.6μm，無(wú)鞭毛；氧化酶和接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性；硝酸鹽還原、糖發(fā)酵及吲哚反應(yīng)陰性。
2.權(quán)利要求1所述的草除靈降解菌cd-Ι在農(nóng)藥生產(chǎn)廢水治理方面的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述的草除靈降解菌cd-Ι降解草除靈農(nóng)藥的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一株草除靈降解菌，屬于廢水治理技術(shù)領(lǐng)域。菌株為革蘭氏染色反應(yīng)陰性菌cd-1，經(jīng)鑒定為Methyloversatilis universalis。該菌株16S rRNA基因序列的Genbank登錄號(hào)為GU350457。主要生物學(xué)特性為G-，菌體為不規(guī)則短桿狀，大小約0.5×0.6μm，無(wú)鞭毛；氧化酶和接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性；硝酸鹽還原、糖發(fā)酵及吲哚反應(yīng)陰性。按5％接種量將菌株cd-1接種于100mg/L草除靈的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基中48h后，草除靈完全降解?？蓪⑵渲瞥赊r(nóng)藥降解菌劑，解決農(nóng)藥生產(chǎn)過(guò)程中的廢水治理問(wèn)題，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A62D101/28GK101928684SQ20101010055
公開(kāi)日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2010年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月25日
發(fā)明者蔡天明, 錢(qián)麗花, 陳立偉 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)