一種有機(jī)硒營(yíng)養(yǎng)液的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種耕地土壤板結(jié)化修復(fù)方法，屬于營(yíng)養(yǎng)液制備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]砸是人體必需的微量元素，能提高人體免疫，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖及抗體和免疫球蛋白的合成。砸對(duì)結(jié)腸癌、皮膚癌、肝癌、乳腺癌等多種癌癥具有明顯的抑制和防護(hù)的作用，其在機(jī)體內(nèi)的中間代謝產(chǎn)物甲基烯醇具有較強(qiáng)的抗癌活性。砸與維生素E、大蒜素、亞油酸、鍺、鋅等營(yíng)養(yǎng)素具有協(xié)同抗氧化的功效，增加抗氧化活性。同時(shí)，砸具有減輕和緩解重金屬毒性的作用。
[0003]我國(guó)除湖北恩施、陜西紫陽等地區(qū)外，有80%的地區(qū)屬于缺砸地區(qū)，其中包括華東地區(qū)的蘇、浙、滬等省市，而且太湖流域蘇南居民砸攝人量?jī)H為35.7 μ g/天，與中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)推薦的最低標(biāo)準(zhǔn)相差甚遠(yuǎn)。因此開發(fā)富砸農(nóng)產(chǎn)品，特別是富砸果品，通過日常飲食來提高砸攝入量，對(duì)于提高缺砸居民群體的健康水平具有重要的意義。但目前還沒有較好的方法和試劑來增加農(nóng)產(chǎn)品，尤其是果品的含砸量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對(duì)目前砸作為是人體必需的微量元素，可以提高人體免疫力，可是居民在日常生活中對(duì)于砸的攝量非常少，所以往往需要通過飲食來提高人體中砸攝入量，但是目前食品中砸含量，尤其水果中砸含量特別少的弊端，提供了一種有機(jī)砸營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，該方法首先通過采集葡萄頂端嫩芽后碾碎，進(jìn)行抽提得到抽提液，然后通過在其中加入黃鱔血放置在陰涼處發(fā)霉，接下來待霉菌長(zhǎng)出時(shí)每天用亞硝酸鈉淋洗直至霉菌全部長(zhǎng)出，最后將霉菌進(jìn)行酶解以及避光保存，從而得到本發(fā)明所制得的“富砸營(yíng)養(yǎng)液”，該營(yíng)養(yǎng)液不含有其它有害雜質(zhì)，對(duì)于環(huán)境和植物本身沒有危害，另外使用后，使得葡萄含砸量提高了 90%以上，達(dá)到了 3.5?8.5yg /g。
[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)選定無病、長(zhǎng)勢(shì)良好的新出葡萄植株，使用切口鋒利平滑且已消毒的剪刀將頂端的嫩芽全部剪掉后用清水洗干凈后撈起，并用轉(zhuǎn)速為250r/mim的離心機(jī)進(jìn)行甩干操作，直至葡萄嫩芽表面無自然滴水，之后采用粉碎機(jī)將葡萄嫩芽粉碎成尺寸為1.2X1.2cm以下的碎塊，備用；
(2)將上述粉碎后的葡萄嫩芽裝入濾紙筒中，將濾紙筒放入索式提取器，并連接收集瓶，往收集瓶中加入瓶體積2/3的乙醇，進(jìn)行冷凝回流，抽提8?12h后，得抽提液；
(3 )選取健康無病的黃鱔放入水中2?3天，不進(jìn)行喂食，使其排除體內(nèi)雜質(zhì)，之后在黃鱔泄殖孔后0.8?1.2cm處剪去其尾部，使血液流滴于消毒后的直徑為5cm的圓形培養(yǎng)皿中，當(dāng)厚度為1.8?2.2mm停止流滴，隨及將上述所得的抽提液倒入其中與新鮮黃鱔血液混合攪拌；
(4)將新鮮黃鱔血液和抽提液混合物，用紗布遮蓋，設(shè)置溫度為25?32°C，空氣相對(duì)濕度為65?70%，放置5?8天；
(5)當(dāng)上述混合物變質(zhì)產(chǎn)生霉菌時(shí)，選取濃度為1.2mol/L的亞硫酸鈉溶液，調(diào)節(jié)pH為
5.5?6.2，每隔一天對(duì)霉菌進(jìn)行一次淋洗，直至霉菌完全生長(zhǎng)出來；
(6)將產(chǎn)生的黃鱔血霉菌接種到固體培養(yǎng)基上，在25°C下培養(yǎng)7?10天，即可得到黃鱔血霉菌孢子培養(yǎng)物，之后用無菌水將孢子制成懸浮液接種到種子罐內(nèi)已滅菌的培養(yǎng)基中，通入無菌空氣，攪拌，在27°C下培養(yǎng)22?24h，后將種子培養(yǎng)液接種到發(fā)酵罐已滅菌的含有苯乙酸前體的培養(yǎng)基中，通入無菌空氣，攪拌，在26°C下培養(yǎng)7天，之后將發(fā)酵液冷卻，過濾，用濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至2?2.5，并用醋酸丁酯進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，得到丁酯萃取液，將此丁酯萃取液經(jīng)活性炭脫色，蒸餾后即可得黃鱔血霉菌提取液；
(7)將上述得到的黃鱔血霉菌提取液在溫度為20?25°C下，封閉處理，避光保存即可。
[0006]本發(fā)明的應(yīng)用方法是:取適量本發(fā)明所制得的“富砸營(yíng)養(yǎng)液”，第I?2天加入蒸餾水稀釋1000倍后加入噴壺中，噴灑在葡萄葉子和頂端枝芽上，第3?5天加入蒸餾水稀釋100倍后加入噴壺，噴灑在葡萄葉子和頂端枝芽上，第6?7天加入蒸餾水稀釋10倍后加入噴壺，噴灑在葡萄葉子和頂端枝芽上，使其慢慢適應(yīng)，至第八天停止噴灑，即可。
[0007]本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明的“富砸營(yíng)養(yǎng)液”沒有其它有害雜質(zhì)，對(duì)于環(huán)境和植物本身沒有任何危害；
(2)使用本發(fā)明制得的“富砸營(yíng)養(yǎng)液”生產(chǎn)的葡萄，經(jīng)過檢測(cè)，葡萄含砸量提高了90?95%，達(dá)到了 3.5 ?8.5 yg /g ；
(3)本發(fā)明施用時(shí)只需噴灑葡萄葉子和頂端枝芽即可，無需復(fù)雜工藝，且生產(chǎn)簡(jiǎn)單易行，容易推廣。
【具體實(shí)施方式】
[0008]
首先選定無病、長(zhǎng)勢(shì)良好的新出葡萄植株，使用切口鋒利平滑且已消毒的剪刀將頂端的嫩芽全部剪掉后用清水洗干凈后撈起，并用轉(zhuǎn)速為250r/mim的離心機(jī)進(jìn)行甩干操作，直至葡萄嫩芽表面無自然滴水，之后采用粉碎機(jī)將葡萄嫩芽粉碎成尺寸為1.2X1.2cm以下的碎塊，備用；接下來將上述粉碎后的葡萄嫩芽裝入濾紙筒中，將濾紙筒放入索式提取器，并連接收集瓶，往收集瓶中加入瓶體積2/3的乙醇，進(jìn)行冷凝回流，抽提8?12h后，得抽提液；隨后選取健康無病的黃鱔放入水中2?3天，不進(jìn)行喂食，使其排除體內(nèi)雜質(zhì)，之后在黃鱔泄殖孔后0.8?1.2cm處剪去其尾部，使血液流滴于消毒后的直徑為5cm的圓形培養(yǎng)皿中，當(dāng)厚度為1.8?2.2mm停止流滴，隨及將上述所得的抽提液倒入其中與新鮮黃鱔血液混合攪拌；之后將新鮮黃鱔血液和抽提液混合物，用紗布遮蓋，設(shè)置溫度為25?32°C，空氣相對(duì)濕度為65?70%，放置5?8天；當(dāng)上述混合物變質(zhì)產(chǎn)生霉菌時(shí)，選取濃度為1.2mol/L的亞硫酸鈉溶液，調(diào)節(jié)pH為5.5?6.2，每隔一天對(duì)霉菌進(jìn)行一次淋洗，直至霉菌完全生長(zhǎng)出來；然后將產(chǎn)生的黃鱔血霉菌接種到固體培養(yǎng)基上，在25°C下培養(yǎng)7?10天，即可得到黃鱔血霉菌孢子培養(yǎng)物，之后用無菌水將孢子制成懸浮液接種到種子罐內(nèi)已滅菌的培養(yǎng)基中，通入無菌空氣，攪拌，在27°C下培養(yǎng)22?24h，后將種子培養(yǎng)液接種到發(fā)酵罐已滅菌的含有苯乙酸前體的培養(yǎng)基中，通入無菌空氣，攪拌，在26°C下培養(yǎng)7天，之后將發(fā)酵液冷卻，過濾，用濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至2?2.5，并用醋酸丁酯進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，得到丁酯萃取液，將此丁酯萃取液經(jīng)活性炭脫色，蒸餾后即可得黃鱔血霉菌提取液；最后將上述得到的黃鱔血霉菌提取液在溫度為20?25°C下，封閉處理，避光保存即可。
[0009]實(shí)例I
首先選定無病、長(zhǎng)勢(shì)良好的新出葡萄植株，使用切口鋒利平滑且已消毒的剪刀將頂端的嫩芽全部剪掉后用清水洗干凈后撈起，并用轉(zhuǎn)速為250r/mim的離心機(jī)進(jìn)行甩干操作，直至葡萄嫩芽表面無自然滴水，之后采用粉碎機(jī)將葡萄嫩芽粉碎成尺寸為1.2X1.2cm以下的碎塊，備用；接下來將上述粉碎后的葡萄嫩芽裝入濾紙筒中，將濾紙筒放入索式提取器，并連接收集瓶，往收集瓶中加入瓶體積2/3的乙醇，進(jìn)行冷凝回流，抽提8h后，得抽提液；隨后選取健康無病的黃鱔放入水中2天，不進(jìn)行喂食，使其排除體內(nèi)雜質(zhì)，之后在黃鱔泄殖孔后0.8cm處剪去其尾部，使血液流滴于消毒后的直徑為5cm的圓形培養(yǎng)皿中，當(dāng)厚度為
1.8mm停止流滴，隨及將上述所得的抽提液倒入其中與新鮮黃鱔血液混合攪拌；之后將新鮮黃鱔血液和抽提液混合物，用紗布遮蓋，設(shè)置溫度為25°C，空氣相對(duì)濕度為65%，放置5天；當(dāng)上述混合物變質(zhì)產(chǎn)生霉菌時(shí)，選取濃度為1.2mol/L的亞硫酸鈉溶液，調(diào)節(jié)pH為5.5，每隔一天對(duì)霉菌進(jìn)行一次淋洗，直至霉菌完全生長(zhǎng)出來；然后將產(chǎn)生的黃鱔血霉菌接種到固體培養(yǎng)基上，在25°C下培養(yǎng)7天，即可得到黃鱔血霉菌孢子培養(yǎng)物，之后用無菌水將孢子制成懸浮液接種到種子罐內(nèi)已滅菌的培養(yǎng)基中，通入無菌空氣，攪拌，在27 °C下培養(yǎng)22h，后將種子培養(yǎng)液接種到發(fā)酵罐已滅菌的含有苯乙酸前體的培養(yǎng)基中，通入無菌空氣，攪拌，在26°C下培養(yǎng)7天，之后將發(fā)酵液冷卻，過濾，用濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液調(diào)