專利名稱：Gardos通道拮抗劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及作為紅細胞Ca2+-激活鉀通道(Gardos通道)的特異性、強效和安全的抑制劑的有機化合物。具體說，本發(fā)明涉及氟取代的三芳基甲烷基抑制劑，其在體外生物介質(zhì)中表現(xiàn)出明顯提高的抗降解耐受性，且相對于其非氟化同源物表現(xiàn)出延長的半衰期。
背景技術：
鐮刀形紅細胞病在西非發(fā)現(xiàn)已有幾個世紀。鐮刀形細胞貧血和鐮刀形血紅蛋白(Hb S)的存在是在分子水平認識到的第一種遺傳疾病?，F(xiàn)已認識到其形態(tài)學和臨床結果是由于β珠蛋白鏈第6位上纈氨酸替代了甘氨酸所致(Ingram，Nature 178792-794(1956))。此氨基酸的改變以及該疾病狀況起源是因單個核苷酸取代的結果(Marotta等人，J.Biol.Chem.2525040-5033(1977))。
鐮刀形細胞病患者發(fā)病和死亡的主要原因是由鐮刀形細胞導致的血管堵塞，其造成急性和慢性形式的反復疼痛發(fā)作，隨著時間的推移還導致進行性器官損傷。很久以前人們就認識到并接受鐮刀形細胞完全脫氧合而致的畸形和變形是由鐮刀形血紅蛋白-血紅蛋白S(Hb S)的聚合和胞內(nèi)膠凝造成的。Eaton等人，Blood 701245(1987)對此現(xiàn)象進行了詳細的綜述和討論。在紅細胞通過血管系統(tǒng)過程中的任何時候Hb S都可能發(fā)生胞內(nèi)膠凝和聚合。所以，含有非聚合血紅蛋白S的鐮刀形細胞病患者的紅細胞可能通過微循環(huán)并返回到肺，而非鐮刀形化也可能在血管中或在毛細管中變成鐮刀形。
相對于正常毛細管轉運時間胞內(nèi)膠凝時間的滯后決定了產(chǎn)生這些事件的各自可能性(Eaton等人，Blood 47621(1976))。而滯留時間取決于血紅蛋白的氧合狀態(tài)，脫氧合會縮短滯留時間。如果熱動力學上有可能發(fā)生胞內(nèi)膠凝，或若靜脈氧壓的滯留時間多于15秒，細胞將不會變成鐮刀形。如果滯留時間在1-15秒之間，紅細胞將可能在靜脈中變成鐮刀形。如果滯留時間少于1秒，紅細胞將在毛細管中變成鐮刀形。
對于在毛細管中變成鐮刀形的紅細胞而言，隨后可能發(fā)生許多事件。這些事件從不影響運送時間、到毛細管暫時閉合，到更長久的阻斷，最終可能導致局部缺血或周圍細胞的堵塞、和隨后紅細胞的破裂。
正常紅細胞含有大約70％水。水透過正常紅細胞膜只要千分之一秒。細胞水的缺失將導致胞漿粘度呈指數(shù)增高，細胞血紅蛋白平均濃度(MCHC)上升至約32g/dl以上。由于胞漿粘度是紅細胞變形和變成鐮刀形的主要決定性因素，紅細胞脫水會造成流變和病理結果。對紅細胞脫水的調(diào)節(jié)被認為是一種重要的治療鐮刀形細胞病的方法。由于細胞水隨胞內(nèi)離子濃度滲透性的變化而變化，所以維持紅細胞的鉀濃度特別重要(Stuart等人，Brit J.Haematol.691-4(1988))。
已嘗試了許多方法來治療性處理脫水的鐮刀形細胞(通過降低血漿摩爾滲透壓濃度來減少血紅蛋白S的聚合)，但效果有限，這些方法包括靜脈輸注蒸餾水(Gye等人，Am.J.Med.Sci.266267-277(1973))；給予抗利尿激素加壓素并輸入高流體并限制鹽(Rosa等人，M.Eng.J.Med.3031138-1143(1980))；Charache等人，Blood 58892-896(1981))；用莫能菌素增加鐮刀形細胞的陽離子含量(Clark等人，J.Clin.Invest.701074-1080(1982))；Fahim等人，Life Sciences291959-1966(1981))；靜脈給予枸櫞酸西替地爾(Benjamin等人，Blood 671442-1447(1986))；Berkowitz等人，Am.J.Hematol.17217-223(1984))；Stuart等人，J.Clin.Patho1.401182-1186(1987))；和使用己酮可可堿(Stuart等人，如上)。
其他治療性處理脫水的鐮刀形細胞方法，包括通過靶向鈣依賴性鉀通道來調(diào)節(jié)紅細胞的鉀流通(Ishi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.94(21)11651-6(1997))。該鈣激活的鉀通道也稱作Gardos通道(Brugnara等人，J.Clin.Invest.92520-526(1993))。最近，顯示了一種克隆的人電導中間體的鈣激活鉀通道(hIK1)與Gardos通道具有類似的生物物理和藥理特性(Ishi，同上)。
已采用一些方法來抑制Gardos通道包括給予紅細胞咪唑、硝基咪唑和三唑抗真菌劑如氯三苯甲咪唑(Brugnara等人的美國專利No.5,273,992)。氯三苯甲咪唑(一種含咪唑的抗真菌劑)已表現(xiàn)出是正常和鐮刀形紅細胞Gardos通道的特異性強抑制劑，且能防止體外和體內(nèi)鐮刀形細胞的Ca2+依賴性脫水(Brugnara，同上；De Franceschi等人，J.Clin.Invest.931670-1676(1994))。當其與能穩(wěn)定HbS氧合構型的化合物聯(lián)合應用時，氯三苯甲咪唑?qū)⒄T導進一步減少微孔濾器的阻塞速率，還可能減弱不可逆鐮刀形細胞的形成(Stuart等人，J.Haematol.86820-823(1994))。據(jù)信其他含有雜芳基咪唑樣基團的化合物，通過Gardos通道的抑制，也可用于降低鐮刀形紅細胞的脫水，這些化合物包括咪康唑、益康唑、布康唑、奧康唑(oxiconazole)和硫康唑。雖已證明這些化合物能有效地減少鐮刀形細胞的脫水，但發(fā)現(xiàn)其他咪唑化合物不能夠抑制Gardos通道和防止鉀的流失。
由于鐮刀形細胞貧血是一種慢性病，所以用于治療該病的藥物應設計成能理想地表現(xiàn)出某些特性，這些特性對用于治療可治愈疾病(如真菌感染)的藥物中不是必須的。臨床所用的Gardos通道抑制劑在長期給藥過程中應表現(xiàn)出極低的毒性，應具有良好的生物可利用性，應對Gardos通道有高度特異性，且與該通道的相互作用應很強。
雖然氯三苯甲咪唑和某些相關的化合物已表現(xiàn)出能抑制Gardos通道和防止鉀流失，但這些化合物作為治療鐮刀形細胞貧血的臨床藥物還欠理想。主要是因為長期給予咪唑抗真菌藥將導致肝細胞毒性(參見Rodriguez等人，Toxicology 683-92(1995)；Findor等人，Medicina 58277-81(1998)；和Rodriguez等人，J.Biochem.Toxicol.11127-31(1996))。藥物的毒性傾向必須與其他特性(如生物可利用性、靶選擇性和效力)平衡。
目前已知的Gardos通道抑制劑在體內(nèi)的半衰期和生物可利用性很低。這些缺陷與這些藥物特別受到關注，因為它們必須在人的一生中大部分時間內(nèi)定期地使用。對這些藥物，患者遵從劑量制度是關鍵，因此療法越簡單患者就越可能遵守。由于Gardos通道抑制劑生物可利用性低，必須頻繁給藥，用錯劑量的風險升高，結果血漿中的藥物水平不足以防止紅細胞脫水。除了頻繁給藥外，與生物可利用性較好的同類藥物相比，生物可利用性低的藥物通常必須給予較高的劑量。而較高的劑量，產(chǎn)生不良副作用和毒性是非常現(xiàn)實的問題。
除了生物可利用性低外，已知的Gardos通道抑制劑(如氯三苯甲咪唑)與Gardos通道相互作用的效力也很低。這些化合物的低生物利用度和體內(nèi)的迅速清除加劇了它們的低效力。許多已知的Gardos通道抑制劑的另一個缺點是它與鈣激活鉀通道的相互作用不是特異性的這些藥物易與非Gardos通道的其他鈣激活鉀通道反應?？傊?，已知的Gardos通道抑制劑的效力低、特異性低和生物可利用性低使得需要較高劑量和較頻繁給藥，從而增加了發(fā)生不良副作用和毒性的危險性。
從目前已知的Gardos通道抑制劑的上述缺點來看，在治療鐮刀形細胞貧血中寄望于如下的實質(zhì)性進展，即發(fā)現(xiàn)一種不含咪唑作為結構成分的Gardos通道抑制劑，它應具有良好的生物可利用性、代謝和排泄慢，與Gardos通道的相互作用強而具特異性。令人驚訝的是，本發(fā)明提供了具有這些特性的Gardos通道抑制劑。
附圖簡述

圖1是化合物1(靜脈內(nèi)(◆)、口服(▲))、化合物3(靜脈內(nèi)(*)、口服(●))和化合物18(靜脈內(nèi)(■)、口服(×))的平均血漿濃度與時間關系圖。劑量為靜脈內(nèi)(1mg/kg)和口服(10mg/kg)。
發(fā)明概述對治療和/或預防鐮刀形細胞病而言，通過阻斷Gardos通道來減少鐮刀形紅細胞脫水是一種非常有效的治療方法。能抑制Gardos通道減少鐮刀形細胞脫水的化合物是非常理想的，而且是本發(fā)明的一個目的。雖然證明是有效的，但目前已開發(fā)的咪唑為基礎的Gardos通道抑制劑受許多缺點(包括已有充分記載的肝細胞毒性)牽制。抑制劑效力低、與非Gardos通道的其他鈣激活鉀通道的非特異性相互作用和生物可利用性低，每一種缺點都使得需要給予更高劑量的抑制劑和較頻繁的給藥，從而加劇了這種毒性。
與這些已知的藥物相反，可藥用的第二代Gardos通道抑制劑將在生物內(nèi)部環(huán)境中表現(xiàn)出延長的穩(wěn)定性和對Gardos通道的強效力和選擇性。在生物內(nèi)部環(huán)境(如微粒體制劑)中培育2小時后，理想藥物的降解應小于60％，且對Gardos通道的IC50不超過30nM。另外，這些藥物對Gardos通道的選擇性至少是對其他鉀通道(如IKs)的100倍。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)Gardos通道的三苯基乙酰胺基抑制劑(其中一個或多個苯基被一個或多個氟原子或含氟基因所取代)，相對于氯三苯甲咪唑和非氟化的三苯基乙酰胺類似物而言，體內(nèi)的半衰期和體外的代謝穩(wěn)定性都提高到令人驚奇的程度。例如，在肝微粒體制備物中培育2小時后，氯三苯甲咪唑(19)94.2％降解，而2小時后87％的非氟化三苯基甲基乙酰胺(20)降解。與其明顯相反，在相似的培育后本發(fā)明的代表性二氟化合物3和5的降解分別為24％和29％。
雖然對氟化三苯基咪唑抗真菌劑的研究表明這些氟化制劑比它們的氯化同類物代謝慢，但這些制劑的藥理活性也比同類的氯化衍生物要低(參見Conte等人，Arneim-Forsch./Drug Res.42854-858(1992)；和Bartoli等人，Arneim-Forsch./Drug Res.42832-835(1992))。但出人意料地，對本發(fā)明的化合物觀察到相反的傾向氟化的化合物不僅效力更強，而且與氯三苯甲咪唑相比是Gardos通道的選擇性更好的抑制劑。例如化合物3和5對Gardos通道比氯三苯甲咪唑強約8和10倍。另外，相對于其他鉀離子通道(如IKs)對Gardos通道的選擇性，化合物3和5是氯三苯甲咪唑的16和17倍。
所以，本發(fā)明一方面提供一種具有式(I)結構的化合物 其中，m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1；當m、n和p都是1時，環(huán)1和環(huán)2上的氟取代基各位于如下位置乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的間位和乙酰胺取代基的對位；和環(huán)3上的取代基位于從乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的對位；和當p是0，m是1和n是1時，環(huán)1上的氟取代基位于乙酰胺取代基的對位，環(huán)2上的取代基位于乙酰胺取代基的鄰位和乙酰胺取代基的對位。
第二方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包含與藥學上可接受的賦形劑混合的式(I)的化合物。可在本發(fā)明的方法中使用這種制劑。
通過改變患病細胞的細胞離子流通量來控制疾病(如鐮刀形細胞病)是一種非常有效的方法。另外，通過對細胞離子流在疾病過程和正常生理過程中作用的基本了解，可以提供新型的治療方式、方案和藥物。那些改變細胞離子流通的化合物(尤其是那些抑制鉀流通的化合物)，是非常理想的藥物和闡明這些離子流通基本機理的探針。類似地，在基礎研究和治療應用中使用這些化合物的方法，是研究人員和臨床醫(yī)生武庫中的有價值的工具。所以這些化合物和方法也是本發(fā)明的一個發(fā)明目的。
因此，本發(fā)明的第三方面提供一種抑制細胞鉀流通的方法。該方法包括使細胞與大量能有效抑制鉀流通的式(I)的化合物接觸。
治療鐮刀形細胞病的一個重要治療方法是通過操縱紅細胞的細胞離子流通來防止或阻滯紅細胞的脫水。故本發(fā)明另一方面提供了減少紅細胞脫水的方法。該方法包括使紅細胞與用量能有效減少紅細胞脫水的式(I)化合物接觸。
第五方面，本發(fā)明提供了治療或預防鐮刀形細胞病的方法。該方法包括給予患鐮刀形細胞病的病人治療有效量的具有呈式(I)結構的化合物。
本發(fā)明的化合物代表一類新型的鈣激活鉀流通的抑制劑，其表現(xiàn)出對代謝降解有優(yōu)良的抗性，相對于它們的非氟化的同類物，它們對Gardos通道的選擇性和效力有所提高。所以在第六方面，本發(fā)明提供一種方法來提高鉀通道抑制劑(包括三苯基甲基部分)在生物介質(zhì)中對降解的抵抗力。
本發(fā)明的這些和其他目的和優(yōu)點經(jīng)過下詳細描述和實施例將會明白。
發(fā)明和優(yōu)選實施例詳述簡寫和定義“MCHC”是“細胞血紅蛋白平均濃度”。
“SAD-1”指鐮刀形細胞病(如Trudel等人，EMBO J.，10(11)3157-3165(1991)所述)的轉基因小鼠模型。
本文所用的“生物介質(zhì)”指體內(nèi)和體外生物微環(huán)境。體外“生物介質(zhì)”的例子包括(但不限制于)細胞培養(yǎng)物、組織培養(yǎng)物、勻漿、血漿和血液。體內(nèi)應用通常在哺乳動物(優(yōu)選人)中進行。
“氟代烷基”指包括烷基或取代的烷基基團的“取代的烷基”的一個亞類，可以是部分氟化的或全氟化的。氟取代可以僅是烷基部分的取代或可與其他任何取代或取代基團聯(lián)合。
引言如上所述，通過抑制Gardos通道來阻斷鐮刀形細胞脫水，是一種有效的治療和/或預防鐮刀形細胞病的治療方法。體外研究表明氯三苯甲咪唑(一種含咪唑的抗真菌藥)封阻鐮刀形紅細胞中的Ca2+激活的K+流通和細胞脫水(Brugnara等人，J.Clin.Invest.92520-526(1993))。對鐮刀形細胞病的轉基因小鼠模型(SAD-1小鼠)的研究(Trudel等人，EMBO J.113157-3165(1991))，顯示口服氯三苯甲咪唑，能抑制紅細胞Gardos通道，增加紅細胞K+含量，減少細胞血紅蛋白平均濃度(MCHC)和降低細胞密度(De Franceschi等人，J.Clin.Invest.931670-1676(1994))。另外，口服氯三苯甲咪唑治療患鐮刀形細胞病患者，能抑制Gardos通道和降低紅細胞脫水(Brugnara等人，J.Clin.Invest.971227-1234(1996))。其他抑制體外Gardos通道的抗真菌藥包括咪康唑、益康唑、布康唑、奧康唑和硫康唑(Brugnara等人的美國專利No.5,273,992)。所有這些化合物都含有類咪唑環(huán)，即含有2個或多個氮的雜芳環(huán)。
雖然咪唑基Gardos通道抑制劑顯示有效，但至今發(fā)現(xiàn)它們受幾種缺點所阻撓，包括已有明確記錄的潛在的肝細胞毒性。抑制劑效力低、與Gardos通道以外的鉀通道的非特異性相互作用和生物可利用性低(每一種缺點都使得需要給予更高劑量的抑制劑和較頻繁的給藥)加劇了這種毒性。
為了提供能抑制Gardos通道的優(yōu)良藥物，必須滿足三個藥物標準。首先，這些化合物在生物微環(huán)境中必須穩(wěn)定，如在生物微環(huán)境中2小時后至少保留40％化合物完整。其次，這些化合物必須是Gardos通道的強抑制劑，對該通道的IC50小于或等于30nM。除對Gardos通道的效力外，這些化合物與該通道的相互作用必須是選擇性的。這些化合物的選擇性如IC50比率(IKs/Gardos)測定的必須大于或等于80。
化合物第一方面，本發(fā)明提供了式(I)結構的化合物 其中，m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1；當m、n和p都是1時，環(huán)1和環(huán)2上的氟取代基各位于如下位置乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的間位和乙酰胺取代基的對位；和環(huán)3上的取代基位于從乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的對位；和當p是0，m是1和n是1時，環(huán)1上的氟取代基位于乙酰胺取代基的對位，環(huán)2上的取代基位于乙酰胺取代基的鄰位和乙酰胺取代基的對位。
在一優(yōu)選實施例中，本發(fā)明的化合物為式(II)結構 其中m、n和p各是0和1，且m、n和p中至少一個是1。
表1列出了具有此結構的化合物，包括化合物1-5。
在另一優(yōu)選實施例中，本發(fā)明的化合物具有式III的結構 其中m是0或1。
表1列出了具有此結構的化合物，包括化合物3和5a表1還列出了與本發(fā)明化合物結構非常相近的化合物。與本發(fā)明化合物結構相近的化合物可作為評估本發(fā)明氟化化合物優(yōu)點和出人意料特性和益處的“基線”。
表1 化合物的合成可用有機合成領域的標準技術制備本發(fā)明的化合物?？少彽眠m當?shù)钠鹗疾牧虾驮噭?，或可用標準有機化學方法制備。優(yōu)選實施例顯示了優(yōu)選方法。流程1列出了一合成路線的例子。 流程1在流程1中，由相應的氟取代的三苯基甲醇(由氟取代的二苯甲酮和將苯基或氟取代的苯基加到二苯甲酮上的試劑制備)進行氟取代的三苯基乙酰胺的合成。隨后通過將三苯基甲醇與乙酰氯接觸，然后再與氰化銅接觸，將氟取代的三苯基甲醇轉變成相應的氟取代的三苯基乙腈。將中間體腈與硫酸和冰醋酸的混合物反應，可以形成乙酰胺。其他合成氟取代的三苯基甲烷(尤其是乙酰胺)的途徑是本領域技術人員能力范圍內(nèi)的。
化合物的穩(wěn)定性對作為Gardos通道抑制劑的藥物化合物而言，必須證明候選化合物具有可接受的體內(nèi)生物可利用性和穩(wěn)定性。當在生物培養(yǎng)基(如微粒體制劑)中培育2小時后，該化合物至少保留40％完整的初始量時，判斷該化合物具有足夠水平的穩(wěn)定性。這種穩(wěn)定水平對治療慢性綜合癥(如鐮刀形細胞貧血)特別重要。對接受鐮刀形細胞貧血治療的患者而言，在他們一生中必須有規(guī)律地接受抗鐮刀形細胞藥(如Gardos通道抑制劑)治療。其他方面，這種終身治療方案則對患者(遵守該方案)產(chǎn)生了嚴重危險性。如果由于遵守差，患者體系中該藥物的滴度下降，這就使產(chǎn)生鐮刀形細胞、伴發(fā)性疼痛和身體和生理損害的危險性升高。能增加體內(nèi)停留時間和生物可利用度的化合物可以簡化劑量方案(即每天的劑量較小和/或給藥次數(shù)較少)。另外，降低給予的化合物量可減少該藥物和/或其代謝物導致的副作用。所以，提供具有良好生物可利用性和體內(nèi)穩(wěn)定性提高的Gardos通道抑制劑是非常理想的。
可用本領域已知的方法檢驗這些化合物在各種生物微環(huán)境中的穩(wěn)定性。在一實施例中，在體外制備物中檢驗這種化合物的穩(wěn)定性。在一優(yōu)選實施例中，體外制備物是肝微粒體制備物。這種體外試驗的結果提供了本發(fā)明化合物體內(nèi)相關的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。其他可用于分析本發(fā)明化合物穩(wěn)定性的體外試驗是本領域已知的。
除體外方法外，在一定范圍的動物模型中還可進行體內(nèi)分析如藥物動力學研究?？梢圆煌瑒┝亢?或不同途徑(如i.v.、i.p.、p.o.)，將一種或多種本發(fā)明的化合物給予動物(較佳地為大鼠)。然后在系列時間點收集血液、尿液和/或糞便樣品，分析樣品中本發(fā)明化合物和/或化合物的代謝產(chǎn)物的存在和/或濃度。
可用適當?shù)膮?shù)比較不同化合物的數(shù)據(jù)。參數(shù)例子包括半衰期、生物利用度、預定時間后化合物保留完整的量等。在一優(yōu)選實施例中，采用預定時間后化合物保留完整的量。本文所用的“完整”指未被代謝或未被降解成與初始化合物不同品種的化合物。
在一優(yōu)選實施例中，預定時間約為2小時到72小時，更佳地是4小時-24小時。在另一優(yōu)選實施例中，2小時預定時間后保留的完整化合物量至少為初始樣品的40％，較佳地至少50％，更佳地至少70％。
任何能檢測且較佳地能定量檢測這種化合物和/或代謝產(chǎn)物的方法都適用于本發(fā)明化合物的分析。這些方法包括(但不限制于)光譜方法(如NMR(如19FNMR)、MS、IR、UV/vis)、色譜方法(如LC、GC、HPLC)和聯(lián)用光譜和色譜方法的混合法(如GC/MS、LC/MS、LC/MS/MS)。另外，這些方法可使用可檢測標記物如標記有放射性同位素(如3H、15N、14C)或熒光標記物(如熒光素、若丹明)的本發(fā)明化合物。體內(nèi)分析小有機分子(尤其是那些適用于生物活性分子的)存在的其他方法對本領域技術人員而言是顯然懂得的。
化合物活性為了開發(fā)可用于Gardos通道抑制劑的藥物，候選化合物必須證明具有對該靶通道的可接受的活性。如果化合物對Gardos通道的IC50不大于30nM，則判斷這些化合物足夠有效。
如以上對化合物穩(wěn)定性所述，這種活性水平對治療慢性綜合癥(如鐮刀形細胞貧血)非常重要。對Gardos通道效力為30nM的Gardos通道抑制劑能很好地應付處理關于患者順從性和副作用的各種擔心。
可用本領域已知的方法分析本發(fā)明化合物對離子通道(如Gardos通道)的活性。例如，參見Brugnara等人，J.Biol.Chem.268(12)8760-8768(1993)。用該參考文獻所述的方法，可分析本發(fā)明化合物對Gardos通道的抑制及其IC50。
在一示范性試驗中，可用人血紅細胞分析測試化合物對紅細胞Gardos通道的抑制?？捎每蓹z測的物質(zhì)(如86Rb)測定抑制程度。在一示范性試驗中，使用86Rb，通過使紅細胞與86Rb和測試化合物接觸分析Gardos通道抑制劑，并測定被細胞攝取的86Rb量。該試驗的各種變化形式對本領域技術人員顯然懂得的。
通過如Brugnara等人，J.Clin.Invest.92520-526(1993)所公開的方法，用紅細胞試驗本發(fā)明化合物的效力。簡單地說，使紅細胞與測試化合物和含86Rb的介質(zhì)接觸?？蓮囊粎?shù)如細胞攝入86Rb的線性最小平方斜率，計算86Rb轉運的初始速率。用計算機輔助的非線性曲線擬合，用標準方法可計算出抑制常數(shù)。
其他分析離子通道活性和影響離子通道的試劑的活性的方法是本領域已知的。選擇適當?shù)脑囼灧椒ㄔ诒绢I域技術人員的能力范圍之中。參見如Hille，B.，“興奮性膜的離子通道”，Sinaner Associates，Inc.Sunderland，MA(1992)。
下表2列出了用本發(fā)明的化合物和其他相關化合物對Gardos通道和紅細胞抑制試驗的結果。表2中的化合物編號與表1所列出的化合物結構可交叉參考。
表2
N.D.＝未測得化合物選擇性對作為藥用Gardos通道抑制劑的化合物而言，候選化合物必須證明對該靶通道具有可接受的選擇性。某化合物對IKs的IC50與其對Gardos通道的IC50的比例至少為80時，判斷該化合物對Gardos通道的選擇性足夠充分。如Turgeon等人，Circulation Research 75879-86(1994)所述，在豚鼠肌細胞上用全細胞碎片堆方法記錄了IKs電流。
相對于其他鉀離子通道，某具體化合物對Gardos通道的選擇性可方便地以兩種化合物的有關結合量(如IC50)來測定。在一優(yōu)選實施例中，用如上所述測定的活性確定了選擇性，其他分析離子通道活性和作用于該離子通道的試劑的活性的方法是本領域已知的。選擇適當?shù)脑囼灧椒ㄔ诒绢I域技術人員能力范圍內(nèi)的。見如Hille，B.，“興奮性膜的離子通道”，SinanerAssociates，Inc.Sunderland，MA(1992)。
表2列出了對本發(fā)明化合物和其他密切相關的化合物的選擇性測定結果。相對于IKs(一示范性鉀離子通道)確定了這些化合物對Gardos通道的選擇性。表2中的化合物編號與表1所列出的化合物結構可交叉參考。
由上述結果可以看出，證明相對于對其他鉀離子通道(如IKs)，本發(fā)明的化合物對Gardos通道具有顯著的選擇性。另外，本發(fā)明的化合物還是Gardos通道的強抑制劑。而且，相對于非氟化化合物(如氯三苯甲咪唑)這些化合物的體內(nèi)半衰期顯著增加。
在一實施例中，本發(fā)明的化合物是鉀流通(如那些受Gardos通道介導的)的強、選擇性和穩(wěn)定的抑制劑。
較佳地，本發(fā)明的化合物在生物微環(huán)境中是穩(wěn)定的，如在生物微環(huán)境中培育2小時后，體外微粒體酶制備物中至少保留40％完整的化合物，較佳地為50％以上，更佳地在70％以上。
不希望束縛于具體理論，現(xiàn)認為本發(fā)明化合物的某些結構特征(即用氟取代氫)決定了這些化合物的穩(wěn)定性、選擇性和效力。所以在一優(yōu)選實施例中，本發(fā)明的抑制劑含有一芳基部分，其中芳基的至少一個氫原子被含有氟原子的基團取代。在該實施例中，本發(fā)明包括能抑制鉀離子流通的化合物的氟化衍生物，尤其是那些具有Gardos通道抑制活性的(如抗真菌藥，如咪康唑、益康唑、布康唑、奧康唑和硫康唑)。其他具有鉀離子通道抑制活性，尤其是Gardos通道抑制活性且至少一個芳基部分帶有至少一個氟原子的化合物也在本發(fā)明的范圍之中。
在一優(yōu)選實施例中，芳基部分是苯基。在另一優(yōu)選實施例中，芳基部分是三苯基甲基的一個組成部分。
可單獨給予本發(fā)明的化合物，或以藥物組合物的形式給予，藥物組合物中活性化合物與一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑混合。所以，除影響細胞離子流通(如Gardos通道抑制活性)的化合物外，本發(fā)明還提供含有本發(fā)明化合物的藥物制劑。
藥物制劑第二方面，本發(fā)明提供含有與藥學上可接受的賦形劑混合的本發(fā)明式(I)化合物的藥物制劑。在一優(yōu)選實施例中，這些化合物是式(II)化合物，更佳地為式(III)化合物。
可以將本文所述的化合物或其藥學上可接受的加成鹽或水合物制備成制劑用各種給藥途徑或模式送遞給患者。合適的給藥途徑包括(但不限制于)吸入法、透皮、口服、眼用、直腸、透粘膜、腸道和腸胃外給藥，包括肌注、皮下和靜脈內(nèi)注射。
本文所述的化合物或其藥學上可接受的鹽和/或水合物可以單獨給予、與本發(fā)明的其他化合物聯(lián)合給予、和/或與其他治療劑混合給予。對與本發(fā)明化合物共同給予的治療劑的選擇，部分取決于所治療的病癥。
例如，當給予患鐮刀形細胞病患者時，本發(fā)明的化合物可與治療與鐮刀形細胞病通常相關的疼痛、感染和其他癥狀和副作用的制劑混合給予。這些制劑包括如止痛藥、抗菌素等。這些化合物還可與含有常用于治療鐮刀形細胞病的其他制劑聯(lián)合給予，包括丁酸酯和丁酸酯衍生物(Perrine等人，N.Engl.J.Med.328(2)81-86(1993))、羥基脲(Charache等人，N.Engl.J.Med.323(20)1317-1322(1995))；促紅細胞生成素(Goldberg等人，N.Engl J Med.323(6).366-372(1990))；和食用鹽如鎂(De Franceschi等人，Blood 88(648a)2580(1996))。
用于本發(fā)明的藥物組合物可以用一種或多種生理可接受的載體以常規(guī)方法制備，所述的載體包括便于將活性化合物加工成藥物的賦形劑和輔助劑。合適的制劑取決于所選的給藥途徑。
對注射而言，可將本發(fā)明的試劑制備成水溶液，較佳地用生理相容的緩沖液如Hanks溶液、Ringer溶液或生理鹽水。在一優(yōu)選實施例中，制劑包括水和酒精和/或乙二醇。該制劑中其他有用的成分包括例如表面活性劑、乳化劑和諸如乙氧基化油等材料。一典型制劑包括本發(fā)明的化合物、聚(乙二醇)400、乙醇和水(比例為1∶1∶1)。另一典型制劑包括本發(fā)明的化合物、水、聚(乙二醇)400和Cremophor(聚乙二醇)-EL。
對透粘膜給藥(如頰、直腸、鼻、眼等)而言，在制劑中采用適用于待滲透的屏障的滲透劑。這些滲透劑通常是本領域已知的。
對口服給藥，通過將活性化合物與本領域已知的藥學上可接受的載體混合，不難制備這種化合物。這些載體可以將本發(fā)明的化合物配制成片劑、丸劑、糖衣丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等，讓接受治療的患者口服攝入?？蓪⒂糜诳诜乃幬镏苽湮锱c固態(tài)賦形劑混合，任選地研磨得到的混合物，加入適當?shù)妮o助劑后加工此顆粒混合物，如果需要得到片劑或糖衣藥丸芯。合適的賦形劑特別指填充劑如糖(包括乳糖、蔗糖、甘露糖或山梨糖醇)、纖維素制備物(如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯粉、明膠、黃蓍樹膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解劑如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽(如海藻酸鈉)。
在糖衣藥丸芯上加上適當?shù)耐繉?。出于該目的，可使用濃縮糖液，可任選地含有阿拉伯樹膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、光澤劑(lacquer)溶液、和合適的有機溶劑或溶劑混合物?？蓪⑷玖匣蛏丶拥狡瑒┗蛱且峦柰繉又?，以鑒別或檢定活性化合物劑量的不同組合。
可用子口服的藥物制備物包括由明膠制備的推入型膠囊、以及由明膠和增塑劑(如甘油或山梨糖醇)制備的密封軟膠囊。這種推入型膠囊可含有與填充劑(如乳糖)、結合劑(如淀粉)和/或潤滑劑(如滑石粉或硬脂酸鎂)和任選地穩(wěn)定劑混合的活性組分。在軟膠囊中，可將活性組分溶解于或懸浮于適當?shù)囊后w中，如脂肪油、液態(tài)石蠟、或液態(tài)聚乙二醇。另外，可加入穩(wěn)定劑。所有用于口服給藥的制劑都應為適用于口服給藥的劑量。
對頰給藥，可用常規(guī)方法將組合物制備成片劑或錠劑形式。
對吸入法給藥，通?？捎眠m當?shù)耐七M劑(如二氟二氯甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合適的氣體)，從壓縮包裝或噴霧器以氣霧劑形式送遞本發(fā)明的化合物。對壓縮的氣霧劑而言，劑量單位由送遞計量的一閥門所確定?？蓪⒂糜谖肫骰虼等肫鞯哪z囊和藥丸(catridge)(如明膠)制備成含有本發(fā)明化合物和適當粉末基料(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
可將這些化合物制備成通過注射(如造影劑團注射或連續(xù)輸液)進行腸胃外給藥。可將注射用的制劑制備成單位劑量，如裝在安瓿中或多劑量容器中(添加有防腐劑)。這些組合物可以油性或水性載體制成懸浮劑、溶液或乳劑形式，且可含有制藥用的試劑如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或加入分散劑，如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽如海藻酸鈉。
用于腸胃外給藥的藥物制劑包括呈水溶液形式的活性成分水溶液，如以上靜脈內(nèi)給藥所述的那些。另外，也可將活性化合物的懸浮液制成適當?shù)挠蜖钭⑸溆脩腋：线m的親脂性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油、或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯、或脂質(zhì)體。含水的注射用懸浮劑可包含增加懸浮劑粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖。任選地，懸浮劑還可含有合適的穩(wěn)定劑或增加化合物溶解性的試劑，以制備高濃度的溶液。
另外，在使用前，活性成分可以粉末形式與適當載體(如無菌無熱源水)混合。
也可將化合物制備成直腸用組合物，如栓劑或留置灌腸劑，如含有常規(guī)的栓劑堿如可可豆油或其他甘油酯。
除上述制劑外，還可將化合物制備成儲存制劑。通過植入或透皮送遞(如皮下或肌內(nèi))、肌內(nèi)注射或透皮貼片，可以給予長效制劑。所以例如可與適當?shù)木酆匣蚴杷牧?如以可接受油配的乳劑)或離子交換樹脂、或低(sparingly)溶解性衍生物如低溶度鹽，制備這些化合物。
藥物組合物還可含有合適的固相或凝膠相載體或賦形劑。這些載體或賦形劑的例子包括(但不限制于)碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物如聚乙二醇。
有效劑量適用于本發(fā)明的藥物組合物包括含有治療有效量(即能有效實現(xiàn)預定目的的量)的活性成分的組合物。具體應用的實際有效量取決于其所治療的疾病。例如，當用于減少鐮刀形細胞脫水和/或延緩紅細胞變成鐮刀形或原位變形的方法中，這些組合物應含有能實現(xiàn)此結果的有效量的活性成分。有效量的確定是在本領域技術人員能力范圍中的，尤其是在本文詳細公開的提示下。
對任何本文所述的化合物，可由細胞培養(yǎng)物試驗初步確定治療有效量。靶血漿濃度是能誘導Gardos通道抑制的活性化合物的濃度。在一優(yōu)選實施例中，Gardos通道的活性被至少抑制了25％。能對Gardos通道鉀流通產(chǎn)生至少約50％、75％、或甚至90％或更高抑制的活性化合物靶血漿濃度是優(yōu)選的。可監(jiān)測患者Gardos通道的抑制百分比，以評估血漿藥濃度達到的適合程度，可上下調(diào)節(jié)劑量以達到理想的抑制百分比。
如本領域所知，可由動物模型確定用于人的治療有效量。例如，配制用于人的劑量以達到在動物中所發(fā)現(xiàn)的有效循環(huán)濃度。特別有用的鐮刀形細胞病的動物模型是SAD-1小鼠模型(Trudel等人，EMBO J.1131573165(1991))。如上所述，通過監(jiān)測Gardos通道抑制和上下調(diào)節(jié)劑量，可調(diào)節(jié)用于人的劑量。由顯示出類似藥物活性的已知化合物(如氯三苯甲咪唑和其他抗真菌藥)的人體數(shù)據(jù)，也可確定治療有效量(參見Brugnara等人，JPET273266272(1995))；Benzaquen等人，Nature Medicine 1534-540(1995)；Brugnara等人，J.Clin.Invest.97(5)1227-1234(1996))。根據(jù)所給予的化合物與氯三苯甲咪唑相比的相對生物利用度和效力可調(diào)節(jié)給藥的劑量。
根據(jù)上述方法和本領域已知的其他方法，對劑量進行調(diào)節(jié)以達到對人的最大效率在本領域普通技術人員的能力范圍之內(nèi)。
對局部給藥而言，給予的化合物的體循環(huán)濃度并不十分重要。在這種情況下，給予的化合物要在局部地區(qū)達到有效濃度以實現(xiàn)所需的結果。
對預防和/或治療鐮刀形細胞病(包括慢性鐮刀形細胞貧血和急性鐮刀形細胞危象)而言，認為給予的化合物達到0.001IM到20IM的循環(huán)濃度是有效的，0.01IM到5IM是優(yōu)選的。
本發(fā)明化合物的患者口服(這是預防和治療慢性鐮刀形細胞病發(fā)作的優(yōu)選模式)劑量，通常范圍約為1mg/天到10,000mg/天，較佳地約10mg/天到1，000mg/天，更佳地約50mg/天到500mg/天。從患者體重來看，通常范圍約為0.1到15mg/kg/天，更常為0.1-15mg/kg/天，最常為1到10mg/kg/天。
其他給藥模式，可個別調(diào)節(jié)劑量和間隔時間以使所給予的化合物的血漿水平能有效治療所治療的具體臨床病癥。例如在一實施例中，若急性鐮刀形細胞危象是最主要的臨床表現(xiàn)，本發(fā)明的化合物可以相對高的濃度每天多次給予。另外在一實施例中，若患者僅表現(xiàn)出周期性的鐮刀形細胞危象，不頻繁、周期性或無規(guī)律時，則以最低有效濃度給予本發(fā)明的化合物，且給藥次數(shù)較少較為理想。這就提供了一種與個體鐮刀形細胞病程度相匹配的治療方案。
用本文所提供的方法，可以有計劃安排有效的預防或治療方案，而基本不具有毒性且對治療的具體患者所出現(xiàn)的臨床癥狀完全有效。這種計劃應包括考慮如下因素來仔細選擇活性化合物例如化合物的效力、相對生物可利用性、患者體重、不良副作用的存在和嚴重程度、給藥的優(yōu)選模式和所選試劑的毒性。
化合物毒性某具體化合物的毒性與其治療效之間的比例是它的治療性指數(shù)，可以ID50(致死總數(shù)50％的化合物量)與ED50(對總數(shù)50％有效的化合物量)的比例表達。表現(xiàn)出高治療指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。獲自細胞培育試驗和/或動物研究的治療指數(shù)數(shù)據(jù)可配制用于人的劑量范圍。這些化合物的劑量較佳地應處于能誘導ED50而無毒性或極小的血漿濃度范圍內(nèi)。根據(jù)所用的劑量形式和所用的給藥途徑，該范圍中的劑量可以有所不同。參見Fingl等人，InTHEPHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS，Ch，1，第1頁，1975?？捎舍t(yī)生根據(jù)患者的癥狀和使用化合物的具體方法選擇確切的配方、給藥途徑和劑量。
方法除了上述化合物和藥物制劑以外，本發(fā)明還提供許多使用本發(fā)明化合物的方法。這些方法包括從那些可用于實驗室的方法以探測基礎機理(如藥物動力學、藥物活性、病因和疾病發(fā)展等)。
所以，本發(fā)明第三方面提供了抑制細胞鉀流通的方法。該方法包括使細胞與有效量的式I結構的化合物接觸。在一優(yōu)選實施例中，該化合物具有式I的結構，更佳地是具有式III的結構。
本發(fā)明這方面具有廣泛的用途，但較佳地是作為研究鉀流通的基本機理和調(diào)節(jié)鉀流通試劑活性的機制的模式。另外，還可將本發(fā)明的化合物用于發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)鉀流通的新藥的工具。例如，可將本發(fā)明的化合物用于試驗(如競爭性試驗)中，以測試假定的鉀流通抑制劑的效力。可在體外和體內(nèi)進行本發(fā)明的這些方法。通過例如改進本領域已知的方法來將本發(fā)明的化合物加入其中，可進行本發(fā)明的試驗。這些改進是本領域技術人員能力內(nèi)的事。
在另一優(yōu)選實施例中，用這種方法來治療或預防受到調(diào)節(jié)性鉀流通影響的疾病。在一優(yōu)選實施例中，該疾病是鐮刀形細胞病。
第四方面，本發(fā)明提供了一種減少紅細胞脫水的方法。該方法包括使紅細胞與有效量的式I結構的化合物接觸。在一優(yōu)選實施例中，該化合物具有式II的結構，更優(yōu)選的是具有式III結構。
本發(fā)明這方面可用于以下范圍的目的，包括紅細胞脫水機理的研究、抑制逆轉紅細胞脫水的化合物的研究、治療或預防與紅細胞脫水相關的疾病。
第五方面，本發(fā)明提供了一種治療或預防鐮刀形細胞病的方法。該方法包括給予患鐮刀形細胞病的患者治療有效量的式I結構的化合物。在一優(yōu)選實施例中，該化合物具有式II的結構，更佳地是具有式III的結構。
本發(fā)明這方面可用于預防急性鐮刀形細胞的發(fā)病或改善該病的影響。另外，該方法還可用于治療和/或預防慢性鐮刀形細胞病。該方法可單獨采用本發(fā)明化合物，或較佳地使用本發(fā)明的藥物配方。有關的給藥模式、劑量水平的選擇和給藥的頻率如上所述。
第六方面，本發(fā)明提供了提高鉀通道抑制劑(包括苯基部分)在生物介質(zhì)中對降解的抵抗力。該方法包括用含苯基的基團取代抑制劑苯基上的氫原子。
可用含許多結構的鉀通道抑制劑來實施本方法。對抑制劑結構的唯一限制是在抑制劑結構部分必需存在一苯環(huán)。在一優(yōu)選實施例中，此苯環(huán)是三苯基甲基部分。在另一優(yōu)選實施例中，在與生物介質(zhì)接觸2小時后，被降解的化合物不到60％。
可用本文所公開的方法或有機化學的其他標準方法，實施以氟基團取代氫?？捎梢讖纳虡I(yè)供應商如Aldrich Chemical Co.(Milwaukee，WI)得到的氟-芳基化合物，制備具有所需取代的許多化合物。另外，有許多標準合成途徑來制備適用于制備本發(fā)明方法所用的化合物的起始物。
在選擇轉化成氟衍生物的靶化合物時，技術人員明白理想的是用對Gardos通道具有已知活性的含芳基化合物起始。已證明本領域已知的許多具有抗真菌特性的化合物有Gardos通道活性。所以，技術人員可選擇具有抗真菌活性的試劑或這些化合物的類似物，來制備它們的氟化類似物。用本文所述的方法和本領域已知的其他方法，技術人員可以常規(guī)地進行對這些新化合物效力和生物降解抵抗力的試驗。另外，通過采用這些方法的常規(guī)實驗，技術人員可以很快速分析一種或多種含芳基的分子對Gardos通道的活性。然后可以如上所述制備和分析有希望成為靶標的氟衍生物。
使藥物特性最佳化a.對代謝的抗性本發(fā)明Gardos通道的三苯基乙酰胺基抑制劑，其中一個或多個苯基基團被一個或多個氟原子或含氟基團所取代，相對于其他已知的抑制劑(如氯三苯甲咪唑)具有出人意料的高度代謝穩(wěn)定性。例如，在肝微粒體制備物中培育2小時后，氯三苯甲咪唑19降解了94.2％。而類似培育后，本發(fā)明的氟化化合物如3和5分別僅降解了24％和29％。這些氟化的三苯基乙酰胺也比它們的非氟化類似物明顯更穩(wěn)定。例如，類似培育后非氟化化合物20降解了87％。
雖然在氟取代后觀察到穩(wěn)定性升高的總趨勢，但這對所有氟化衍生物并非都正確。例如，在微粒體制備物中培育2小時后，在兩個苯環(huán)上3-和3’-位(9)有取代的三苯基乙酰胺降解了97％。所以在這種情況中，相對于氯三苯甲咪唑和非氟化的氯三苯甲咪唑，氟取代明顯增加了降解量。
類似地，在一個環(huán)上有兩個氟取代的類似化合物也迅速降解。例如，在微粒體培養(yǎng)物中培育2小時后，在2-、4-(8)和3-、4-位(7)有取代的衍生物分別降解了61％和85％。另外，那些三個苯環(huán)之一有單取代的化合物也迅速降解。例如，在微粒體制備物中培育2小時后，在3-、3’-和3”-位(17)有取代的衍生物降解82％。
綜上所述，業(yè)已發(fā)現(xiàn)只有所選擇的取代模式才能賦予氟化的三苯基乙酰胺所需的穩(wěn)定性水平。還觀察了具有取代模式化合物的效力和選擇性的類似變化。
b.效力用氟取代苯環(huán)上氫的一個出人意料的結果是顯著提高了本發(fā)明化合物(相對于氯三苯甲咪唑和非氟化的三苯基乙酰胺)對Gardos的效力。例如，非氟化三苯基乙酰胺20對Gardos通道的IC50為50nM。與其相比，類似物單氟化三苯基乙酰胺2的IC50為15nM，效力提高了330％。
雖然觀察到氟化三苯基乙酰胺衍生物效力增加的總趨勢，但某些取代模式相對于未取代的親代化合物看來效力改善得更多。這種總趨勢的一方面是多環(huán)取代的衍生物通常比單環(huán)取代的衍生物效力更強。例如，化合物8在一個環(huán)上的2-和4-位有兩個氟取代，它的IC50為34nM。與其相比，化合物12在一個環(huán)的2-位上有一個氟取代，在另一個環(huán)的4位有一個氟取代，它的IC50為5nM。這反映了化合物12比化合物8效力提高近700％。另外，化合物12比非氟化的母體化合物20效力大1000％。這反映效力增加超過氯三苯甲咪唑2000％！除了效力增加的趨勢外，化合物效力的改善程度卻無法從每個環(huán)上的取代數(shù)事先預測。例如，化合物9在一個環(huán)的3-位有氟取代、在另一個環(huán)的3’位有一個氟取代，它的IC50為30nM。類似的化合物11在一個環(huán)的2-位有一氟取代，在另一環(huán)的4’-位有一氟取代，它的IC50為5nM，化合物11比化合物9效力高600％。
如上所述，已發(fā)現(xiàn)通過慎重地選擇氟取代的數(shù)量和氟取代基在三苯基乙酰胺上的位置，可操縱這些化合物對Gardos通道的效力。令人驚訝的是，觀察到這些化合物對Gardos通道選擇性的類似影響。
c.選擇性除了效力和生物可利用性外，通過抑制離子流治療鐮刀形細胞貧血的藥物還必需對其靶離子通道具有選擇性。藥物與靶以外通道的相互作用很可能導致不良的和潛在的危險性副作用。例如，已知氯三苯甲咪唑和它的一些類似物與肌細胞延遲整流的鉀電流IKs的慢成分相互反應。此電流的阻斷與心室纖維性顫動導致的猝死相關(Turgeon等人，Circulation Research 75879-86(1994))。所以，表現(xiàn)出對Gardos通道選擇性(相對于IKs)的化合物可能證明是更安全和有效的藥物。
在Gardos通道抑制劑的一個或多個環(huán)上氟化的另一個出人意料的結果，是這些化合物對Gardos的選擇性相對于其他鉀通道有所提高。與氯三苯甲咪唑和非氟化的母體三苯基乙酰胺相比，本發(fā)明的幾種氟取代的三苯基乙酰胺表現(xiàn)出它們對Gardos通道的選擇性(相對于IKs)明顯提高。例如，化合物3和化合物5對Gardos通道(相對于IKs)的選擇性比氯三苯甲咪唑分別高約16和18倍。另外，這些化合物比未取代的三苯基乙酰胺母體20對Gardos通道的選擇性高6倍。
已發(fā)現(xiàn)氟取代的三苯基甲烷衍生物(尤其是氟取代的含氮化合物如三苯基乙酰胺)能有效地抑制紅細胞的Gardos通道。另外，氟取代的化合物表現(xiàn)出生物介質(zhì)中的降解有抵抗力，相對于未被氟取代的相應化合物達到了令人驚訝的水平。
用以下實施例進一步說明本發(fā)明的化合物、組合物和方法。這些實施例僅起說明作用，對本發(fā)明的權利要求無任何限制。
實施例1說明了本發(fā)明化合物的合成和定性方法。用該實施例所詳述的方法可以分離得到基本純形式的本發(fā)明的化合物且收率良好。
實施例2說明了對本發(fā)明化合物在生物介質(zhì)抵抗降解的分析。在該實施例中，用人肝微粒體形成生物介質(zhì)。發(fā)現(xiàn)相對于非氟化的三苯基甲基化合物，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出對微粒體制備物引起的降解作用的明顯抵抗力。
實施例3列出了在大鼠中對本發(fā)明化合物進行的藥物動力學研究。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的氟化化合物在體內(nèi)表現(xiàn)出相對于非氟化的衍生物半衰期有所增加。
實施例4描述了一種生物試驗用于檢測本發(fā)明化合物對鉀通道(Gardos通道)的抑制。
實施例1本實施例說明了本發(fā)明化合物的合成和定性方法。用以下所述的方法分離了基本純形式的本發(fā)明化合物且收率良好。本實施例提供了常規(guī)范圍的方法，可用以合成除特別說明以外的本發(fā)明的化合物。
1.1材料和方法除非特別指出可直接使用得到的試劑。用Franco等人，J.Chem.Soc.PerkinsTrans.II，443(1998)的方法制備不能購得的氟化苯基鋰試劑和氟化苯酮。所有這些水份敏感的反應都是用烘干的玻璃器皿在氮氣中進行的。用TLC在硅膠60F254上監(jiān)測反應，并用Hanessian染料碳化探測(Khadem等人，Anal.Chem.1958，30，(1965))。用Selecto硅膠(32-63IM)進行柱層析。在Electrothermal IA9000單元上測定熔點且不校正。室溫在CDCl3中用Varian(Gemini 2000)NMR儀記錄1H(300MHz)和19F(282MHz)波譜。用四甲基硅烷作為內(nèi)參照。用CHIRACEL5OD-R柱通過手性技術進行化合物1的手性分離，用乙腈/水洗脫。
1.2化合物1的制備從可購得的前體分四步制備化合物1，收率為28％。
1.2a(2-氟苯基)-(4-氟苯基)苯基甲醇的合成將苯基溴化鎂(1.83ml，5.5mmol)逐滴加入攪拌中的以叔丁基甲醚(12ml)中配的2，4’-二氟二苯酮(1.09，5.0mmol)溶液中。添加完畢后，將反應物加熱回流3小時。溶液冷卻至室溫，傾倒入冰凍的1.0M HCl(aq)(20ml)中。用EtOAc(3×10ml)提取有機層，并干燥(Na2SO4)。減壓濃縮得到所需的產(chǎn)物(2-氟苯基)-(4-氟苯基)苯基甲醇，呈淺褐色油性，無需進一步純化可直接用于下一步驟。
1.2b(2-氟苯基)-(4-氟苯基)苯基乙腈的合成室溫將(2-氟苯基)-(4-氟苯基)苯基甲醇(1.47g，5.0mmol)加到二氯甲烷(10ml)配的20％乙酰氯溶液中。攪拌得到的溶液12小時，然后蒸發(fā)除去溶劑。在殘留物中加入甲苯(2×20ml)，蒸發(fā)得到粗制的2-氟苯基-(4-氟苯基)苯基氯甲烷，其無需純化可直接用于下一步驟。
在殘留物中加入氰化銅(0.50g，5.5mmol)，將得到的混合物130℃加熱2.5小時。一旦反應物冷卻到110℃，就加入甲苯(30ml)，劇烈攪拌此混合物10分鐘。過濾反應混合物，減壓除去溶劑。在此粗制物質(zhì)中加入熱己烷(30ml)，劇烈攪拌此混合物30分鐘。過濾并用更多的己烷洗滌，得到所需的呈白色固體的氰化物，無需進一步純化可直接使用。
1.2c(2-氟苯基)-(4-氟苯基)苯基乙酰胺(1)的合成室溫將濃硫酸(10ml)和冰醋酸(10ml)溶液加到粗制的(2-氟苯基)-(4-氟苯基)苯基乙腈(1.48g，5.0mmol)中。攪拌得到的橙紅色溶液，130℃加熱3小時。將反應物冷卻至0℃，逐滴加入氫氧化銨中和。加入水(30ml)，用氯仿(3×30ml)提取有機層。合并有機組分，依次用水(2×10ml)和鹽水(20ml)洗滌。干燥有機相(Na2SO4)，減壓濃縮。將己烷(30ml)加到得到的淺褐色油中，引發(fā)沉淀。研磨沉淀，依次用熱己烷(30ml)洗滌。己烷/二氯甲烷結晶得到呈白色晶體的所需產(chǎn)物(2-氟苯基)-(4-氟苯基)苯基乙酰胺(0.45g，1.4mmol，28％，4步)。
1.3化合物3的制備從購得的前體分3步制備化合物3，收率為58％。
1.3a合成二(4-氟苯基)苯基甲醇室溫將苯基溴化鎂(100ml，0.1mol)逐滴加到攪拌中的以叔丁基甲醚(150ml)配的4，4’-二氟二苯酮(20g，0.092mol)溶液中。添加完畢后，加熱回流反應物3小時。將溶液冷卻至室溫，傾倒入冰凍的1.0M HCl(100ml)水溶液中。用EtOAc(2×50ml)提取有機層，并干燥(Na2SO4)。減壓濃縮得到呈淺褐色油的二(4-氟苯基)苯基甲醇。真空干燥2小時后，得到的粗制物質(zhì)無需進一步純化直接用于下一反應。
1.3b合成二(4-氟苯基)苯基乙腈室溫將二(4-氟苯基)苯基甲醇(0.092mol)加到二氯甲烷(50ml)配的20％乙酰氯溶液中。攪拌此紫色溶液12小時，然后蒸發(fā)除去溶劑。將甲苯(100ml)加到殘留物中，然后蒸發(fā)，得到粗制的二(4-氟苯基)苯基氯甲烷，其無需純化可直接用于下一步驟。
在殘留物中加入氰化銅(8.24g，0.11mol)，將得到的混合物140℃加熱3小時。反應物冷卻到100℃，加入甲苯(100ml)。劇烈攪拌此混合物10分鐘，冷卻至室溫，通過硅短襯墊過濾，減壓除去溶劑得到棕色固體。在此粗制物質(zhì)粉中加入熱己烷(100ml)，劇烈攪拌此混合物4小時。過濾并加入己烷洗滌，得到所需的呈白色固體的二(4-氟苯基)苯基乙腈(18.9g，67％)。
1.3c合成二(4-氟苯基)苯基乙酰胺(3)室溫將濃硫酸(50ml)和冰醋酸(50ml)溶液加到二(4-氟苯基)苯基乙腈(18.9g，0.06mol)中。攪拌得到的橙紅色溶液，130℃加熱3小時。將反應物冷卻至0℃，傾倒入冰水(150ml)中，用氫氧化銨中和。用氯仿(3×100ml)提取有機層，合并有機組分，用鹽水(2×50ml)洗滌。干燥有機相(Na2SO4)，減壓濃縮，得到橙黃色固體。用熱己烷(100ml)攪拌此固體30分鐘，然后過濾。從二氯甲烷/己烷結晶得到呈白色結晶固體的二(4-氟苯基)苯基乙酰胺(3)(16.9g，0.052mmol，87％)。
1.4制備化合物5從購得的前體分4步制備化合物5，收率為66％。
1.4a合成二(4-氟苯基)-2-氟苯基甲醇室溫將對氟苯基溴化鎂(124ml，0.12mol)逐滴加到攪拌中的以叔丁基甲醚(100ml)配的2，4’-二氟二苯酮(24.5g，0.11mol)溶液中。添加完畢后，加熱回流反應物3小時。然后將該溶液冷卻至室溫，傾倒入冰凍的1.0M HCl(aq)(100ml)中。用EtOAc(3×70ml)提取有機層，并干燥(Na2SO4)。減壓濃縮，得到淺黃色油性的二(4-氟苯基)-2-氟苯基甲醇，其無需進一步純化可直接用于下一反應。
1.4b合成二(4-氟苯基)-2-氟苯基乙腈室溫將二氯甲烷(60ml)配的20％乙酰氯溶液加到粗制的二(4-氟苯基)-2-氟苯基甲醇中。攪拌此溶液12小時，然后蒸發(fā)除去溶劑。在殘留物中加入甲苯(100ml)，然后蒸發(fā)得到粗制的二(4-氟苯基)-2-氟苯基氯己烷，其無需純化可直接用于下一步驟。
在此粗制物質(zhì)中加入氰化銅(12g，0.13mol)，160℃加熱此混合物3小時。將反應物冷卻至110℃左右，加入甲苯(100ml)，劇烈攪拌此混合物10分鐘。冷卻混合物，用短硅石柱過濾，減壓濃縮。在此粗制物質(zhì)中加入熱己烷(100ml)，劇烈攪拌混合物30分鐘。過濾并用更多己烷洗滌后得到呈白色固體的所需的二(4-氟苯基)-2-氟苯基乙腈(25.3g，70％)。
1.4c合成二(4-氟苯基)-2-氟苯基乙酰胺(5)室溫將濃硫酸(10ml)和冰醋酸(10ml)溶液加到二(4-氟苯基)-2-氟苯基乙腈(5.0g，0.015mol)中。攪拌得到的橙紅色溶液，130℃加熱2小時。將反應物冷卻至0℃，傾倒在冰上(50g)。逐滴加入氫氧化銨中和。加入CH2Cl2(100ml)，用加入的CH2Cl2(3×30ml)提取有機層。依次用水(2×10ml)和鹽水(20ml)洗滌合并的有機組分。干燥(Na2SO4)有機相，減壓濃縮得到黃色/橙色固體。將固體制成粉末，反復用熱己烷(50ml)洗滌，直到濾液不再有顏色。從己烷/二氯甲烷結晶得到呈白色晶體的二(4-氟苯基)-2-氟苯基乙酰胺(5)(4.89g，0.0145mmol，94％)。
1.5制備化合物16從購得的前體分4步制備化合物16，收率為11％。
1.5a合成二(4-氟苯基)-3-氟苯基甲醇78℃將正丁基鋰(4ml，10mmol)逐滴加到攪拌中的以THF(25ml)配的溴-3-氟苯(1.75g，10mmol)溶液中。20分鐘后加入4，4’-二苯甲酮(1.96g，9mmol)。讓反應物升溫至0℃，為時30分鐘。加入飽和NH4Cl(aq)(30ml)，繼續(xù)攪拌30分鐘。加入EtOAc(20ml)，分出有機相，用鹽水(20ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮。柱層析純化殘留物(100％己烷對100％CH2Cl2)，得到二(4-氟苯基)-3-氟苯基甲醇(2.81g，92％)。
1.5b合成二(4-氟苯基)-3-氟苯基乙腈室溫在二氯甲烷(10ml)配的20％乙酰氯溶液中加入二(4-氟苯基)-3-氟苯基甲醇(999mg，3.18mmol)。攪拌此紫色溶液12小時，然后蒸發(fā)除去溶劑。在殘留物中加入甲苯(20ml)，然后蒸發(fā)得到粗制的二(4-氟苯基)-3-氟苯基氯甲烷，其無需純化可直接用于下一步驟。
在此粗制物質(zhì)中加入氰化銅(344mg，3.82mol)，140℃加熱此混合物3小時。將反應物冷卻至110℃左右，加入甲苯(50ml)，劇烈攪拌此混合物10分鐘。將混合物冷卻至室溫，用短硅石柱過濾，減壓除去溶劑得到米色固體。在此粉末狀粗制物質(zhì)中加入熱己烷(100ml)，劇烈攪拌混合物1小時。過濾并用更多己烷洗滌后得到呈白色固體的所需的二(4-氟苯基)-3-氟苯基乙腈，其無需純化可直接使用。
1.5c合成二(4-氟苯基)-3-氟苯基乙酰胺(16)室溫將濃硫酸(10ml)和冰醋酸(10ml)溶液加到二(4-氟苯基)-3-氟苯基乙酰胺(3.18mmol)中。攪拌得到的橙色溶液，130℃加熱3小時。將反應物冷卻至0℃，傾倒到冰水(50ml)中，用氫氧化銨中和。用氯仿(3×50ml)提取有機層。用鹽水(2×10ml)洗滌合并的有機組分，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮得到黃色/橙色固體。用熱己烷(50ml)攪拌固體30分鐘，并過濾。從二氯甲烷/己烷結晶得到呈白色晶體的二(4-氟苯基)-3-氟苯基乙酰胺(16)(147mg，0.43mmol，11％，4步)。
1.6用1H和19F NMR光譜定性化合物及其熔點聯(lián)用1H和19F NMR光譜定性本發(fā)明的化合物，并測定化合物的熔點。
11H NMRΓ(CHCl3)7.39-7.26(8H，m)，7.15-6.90(5H，m)，5.83(1H，brs)，5.72(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-103.4(1F，s)，-115.8(1F， s)；m.p 180-181θC.
21H NMRΓ(CHCl3)7.37-7.28(6H，m)，7.15-7.05(2H，m)，6.93(1H，dt，J＝8and 2Hz)，5.90(1H，brs)，5.68(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-103.4(1F，m)；m.p210θC.
31H NMRΓ(CHCl3)7.37-7.20(9H，m)，7.04-6.91(4H，m)，5.81(1H，brs)，5.71(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-115.7(2F，s)；m.p 180-181θC.
41H NMRΓ(CHCl3)7.37-7.24(12H，m)，6.97(2H，t，J＝8.5Hz)，5.83(1H，brs)，5.75(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-116.2(1F，s)；m.p 193-194θC.
51H NMRΓ(CHCl3)7.41-7.34(1H，m)，7.29-7.23(4H，m)，7.16(1H，ddd，J＝18.1，8.1和1.2Hz)，7.15(1H，d，J＝7.7Hz)，7.05-6.97(4H，m)，6.93-6.87(1H，dt，J=8.0和1.4Hz)，5.90(1H，brs)，5.74(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-103.3(1F，s)，-115.5(2F，s)；m.p 168-169θC.
61H NMRΓ(CHCl3)7.64-7.54(4H，m)，7.40-7.34(6H，m)，5.70(2H，brs)；19FNMRΓ(CHCl3)137.3(2F，d，J＝19.2Hz)，-155.8(1F，t，J＝21.4Hz)，-161.9(2F，dd，J＝21.4和17.1Hz).
71H NMRΓ(CHCl3)7.37-7.31(6H，m)，7.28-7.20(5H，m)，7.12-7.04(2H，m)，5.90((1H，brs)，5.74(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-137.8 to-137.9(1F，m)，-140.3 to-140.4(1F，m)；m.p 174-175θC.
81H NMRΓ(CHCl3)7.37-7.28(10H，m)，6.95-6.83(2H，m)，6.81-6.75(1H，m)，5.92(1H，brs)，5.80(H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-99.1(1F，dd，J＝19.2和8.5Hz)，-111.6(1F，m)；m.p 187-188θC.
91H NMRΓ(CHCl3)7.38-7.22(7H，m)，7.09-6.96(6H，m)，5.83(1H，brs)，5.77(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-112.6(2F，dd，J＝17.1 and 6.4Hz)；m.p195-196θC.
131H NMRΓ(CHCl3)7.26-7.19(6H，dd，J＝9.0和5.4Hz)，7.20-7.01(6H，t，J＝8.7Hz)，5.83(1H，brs)，5.69(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-115.3(3F，s)；m.p180-181θC.
141H NMRΓ(CHCl3)7.39-7.27(9H，m)，7.17-7.03(4H，m)，5.90(1H，brs)，5.85(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-102.9(2F，s)；m.p 166-167θC.
151H NMRΓ(CHCl3)7.41-7.34(2H，m)，7.29-7.23(4H，m)，7.17-7.05(4H，m)，6.99(2H，t，J＝8.7Hz)，5.78(2H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-103.0(2F，s)，-115.9(1F，m)；m.p 187-188θC.
161H NMRΓ(CHCl3)7.34-7.20(6H，m)，7.06-6.97(6H，m)，5.90(1H，brs)，5.71(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-112.2(1F，dd，J＝17.1和7.4Hz)，-115.1 to-115.2(2F，m)；m.p 165-166θC.
171H NMRΓ(CHCl3)7.35-7.21(3H，m)，7.06-6.97(9H，m)，7.17-7.05(4H，m)，5.96(1H，brs)，5.76(1H，brs)；19F NMRΓ(CHCl3)-112.2(3F，dd，J＝17.1和8.5Hz)；m.p 186-188θC.
實施例2本實施例說明了對本發(fā)明化合物在生物介質(zhì)中抗降解的試驗。在本實施例中，用人肝微粒體形成生物介質(zhì)。發(fā)現(xiàn)相對于非氟化的三苯基甲基化合物，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出對耐微粒體制備物的降解作用具有明顯的抗性。
2.1材料和方法測試了17種氟化的三芳基甲烷化合物、氯三苯甲咪唑和氯化的三芳基甲烷化合物18，在人肝微粒體反應混合物中的體外代謝穩(wěn)定性。反應混合物含有1.0mg/ml人肝微粒體蛋白質(zhì)、100mM磷酸鉀(pH 7.4)、10mM MgCl2和生成NADPH的系統(tǒng)。37℃以5IM濃度測試化合物，且計算2小時后該混合物中保留的完整化合物的量，以初始劑量的百分比表示。
2.2結果本研究的結果表明本發(fā)明的氟化化合物比類似物非氟化的化合物對生物微環(huán)境中的降解抗性提高。上表2列出了這些結果。
實施例3本實施例描述了用大鼠對本發(fā)明化合物的藥物動力學研究。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的氟化化合物顯示其體內(nèi)半衰期比非氟化的衍生物長。
3.1材料和方法用大鼠進行藥物動力學研究發(fā)現(xiàn)在苯環(huán)上所選的氟取代，將化合物體外的代謝穩(wěn)定性增加到體內(nèi)的研究中。將化合物1、化合物3和化合物18給予3-5只雌性Spargue-Dawley大鼠，在測定T1/2和口服生物利用度前劑量為1mg/kg i.v.和10mg/kg p.o.。從給藥前和p.o.給藥后24小時間的9個時間點，以及給藥前和i.v.給藥后24小時間的11個時間點收集血樣。制備樣品并用LC-MS/MS分析化合物血漿濃度。
3.2結果如從體外代謝數(shù)據(jù)所預計的那樣，化合物18的口服利用度很差，在給藥后0.25和1小時間血漿中的水平極低(31-65ng/ml)，且給藥后2小時的樣品中沒有可檢測水平。通過i.v.途徑，自血流清除的速率非常快。因為口服給藥樣品中的血漿水平非常低，以至于不能計算化合物18的生物利用度百分比。
與化合物18得到的結果明顯相反的是，化合物1具有好得多的口服生物利用度(35％)，計算出化合物3的口服利用度為100％。
圖1顯示了本藥物動力學實驗的結果。
實施例4實施例4描述了測定本發(fā)明化合物對血紅細胞中鈣激活的鉀通道(Gardos通道)的抑制的生物試驗。
4.1材料和方法用改良的Flux緩沖液(MFB140mM NaCl；5mM KCl；10mM Tris；0.1mMEGTA；pH＝7.4)洗滌肝素化的(Haparinized)全血3次。然后用86Rb(5μCi/ml)培育洗滌過的細胞3小時。培育后，用冷MFB洗滌PBC 3次。然后用本發(fā)明的測試化合物培育洗滌過的載有86Rb的RBC 10分鐘。然后加入20μl/ml MFB溶液(含有10mM CaCl2和100μM A23187，一種鈣離子載體)，引發(fā)86Rb流通。在培育介質(zhì)中產(chǎn)生終濃度200μM CaCl2和2μM A23187。培育細胞10分鐘，離心沉降，除去上清液。在Wallace Microbeta液體閃爍計數(shù)器中通過Cerenkov發(fā)射計數(shù)樣品。用水裂解RBC，然后用乙醇∶氯仿(50∶50)混合液沉淀蛋白質(zhì)測定總RBC86Rb含量。用微量離心管離心20分鐘后，分開水層和有機層，取出水層并計數(shù)。以初始細胞的86Rb含量的百分比表示流出量。
4.2結果上述生物試驗表明本發(fā)明的化合物是優(yōu)良的Gardos通道抑制劑。上表2列出了抑制研究的數(shù)據(jù)結果。
可以理解本文所述的實施例和實例僅起說明的作用，那些本領域技術人員可能建議的各種改進或變化都在本申請的精神和范圍中，且視為在本發(fā)明所附的權利要求范圍中。本文所引用的所有出版物、專利和專利申請都全部納入本文作為參考。
權利要求
1.一種具有如下結構的化合物 其特征在于，其中，m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1；當m、n和p都是1時，環(huán)1和環(huán)2上的氟取代基各位于如下位置乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的間位和乙酰胺取代基的對位；和環(huán)3上的取代基位于從乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的對位；和當p是0，m是1和n是1時，環(huán)1上的氟取代基位于乙酰胺取代基的對位，環(huán)2上的取代基位于乙酰胺取代基的鄰位和乙酰胺取代基的對位。
2.如權利要求1所述的具有如下結構的化合物 其特征在于，其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1。
3.如權利要求2所述的具有如下結構的化合物 其特征在于，m是0或1。
4.如權利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物的結構選自
5.一種藥物組合物，它包含與藥學上可接受的賦形劑混合的化合物，所述的化合物具有如下結構 其特征在于，其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1；當m、n和p都是1時，環(huán)1和環(huán)2上的氟取代基各位于如下位置乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的間位和乙酰胺取代基的對位；和環(huán)3上的取代基位于從乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的對位；和當p是0，m是1和n是1時，環(huán)1上的氟取代基位于乙酰胺取代基的對位，環(huán)2上的取代基位于乙酰胺取代基的鄰位和乙酰胺取代基的對位。
6.如權利要求5所述的藥物組合物，所述的化合物具有如下結構 其特征在于，其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1。
7.如權利要求6所述的藥物組合物，所述的化合物具有如下結構 其特征在于，m是0或1。
8.如權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述的化合物的結構選自
9.一種抑制細胞鉀流通的方法，其特征在于，所述的方法包括將所述的細胞與有效量的具有如下結構的化合物接觸 其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1；當m、n和p都是1時，環(huán)1和環(huán)2上的氟取代基各位于如下位置乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的間位和乙酰胺取代基的對位；和環(huán)3上的取代基位于從乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的對位；和當p是0，m是1和n是1時，環(huán)1上的氟取代基位于乙酰胺取代基的對位，環(huán)2上的取代基位于乙酰胺取代基的鄰位和乙酰胺取代基的對位。
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的化合物具有如下結構 其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1。
11.如權利要求8所述的方法，所述的化合物具有如下結構 其特征在于，m是0或1。
12.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的化合物的結構選自
13.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的細胞是紅細胞。
14.一種減少紅細胞脫水的方法，其特征在于，所述的方法包括將紅細胞與劑量能有效減少脫水的化合物接觸，所述的化合物具有如下結構 其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1；當m、n和p都是1時，環(huán)1和環(huán)2上的氟取代基各位于如下位置乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的間位和乙酰胺取代基的對位；和環(huán)3上的取代基位于從乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的對位；和當p是0，m是1和n是1時，環(huán)1上的氟取代基位于乙酰胺取代基的對位，環(huán)2上的取代基位于乙酰胺取代基的鄰位和乙酰胺取代基的對位。
15.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述的化合物具有如下結構 其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1。
16.如權利要求15所述的方法，所述的化合物具有如下結構 其特征在于，m是0或1。
17.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述的化合物的結構選自
18.一種治療或預防鐮刀形細胞病的方法，其特征在于，所述的方法包括給予患鐮刀形細胞病對象與治療有效量的具有如下結構的化合物 其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1；當m、n和p都是1時，環(huán)1和環(huán)2上的氟取代基各位于如下位置乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的間位和乙酰胺取代基的對位；和環(huán)3上的取代基位于從乙酰胺取代基的鄰位、乙酰胺取代基的對位；和當p是0，m是1和n是1時，環(huán)1上的氟取代基位于乙酰胺取代基的對位，環(huán)2上的取代基位于乙酰胺取代基的鄰位和乙酰胺取代基的對位。
19.如權利要求18所述的方法，其特征在于，所述的化合物具有如下結構 其中m、n和p各選自0和1，且m、n和p中至少一個是1。
20.如權利要求19所述的方法，所述的化合物具有如下結構 其特征在于，m是0或1。
21.如權利要求18所述的方法，其特征在于，所述的化合物的結構選自
22.一種提高含苯基的鉀通道抑制劑在生物介質(zhì)中抵抗降解的方法，其特征在于，所述的方法包括用含氟原子的基團取代該抑制劑芳基上的氫原子。
23.如權利要求22所述的方法，其特征在于，所述的鉀通道是IK1。
24.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述的鉀通道是Gardos通道。
25.如權利要求22所述的方法，其特征在于，所述的芳基是三芳基甲基基團組分。
全文摘要
本發(fā)明公開了新型的鉀流通抑制劑。相對于非氟取代的同類物,這些抑制劑表現(xiàn)出令人驚訝的對生物介質(zhì)中降解的抗性和提高的體內(nèi)半衰期。這些化合物的使用方法包括治療鐮刀形細胞病、預防紅細胞脫水和抑制鉀流通。
文檔編號C07C233/11GK1344158SQ00805452
公開日2002年4月10日 申請日期2000年2月10日 優(yōu)先權日1999年2月23日
發(fā)明者G·A·麥克諾頓－史密斯, G·C·里格登, J·W·施特克爾 申請人:安克進藥物公司