專利名稱：含有人參皂甙Rb的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，用于預(yù)防、處置或治療器官組織、活體組織或活體組織的具有病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病，更具體地，用于因皮膚組織或粘膜組織的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損引起的疾病，且更進(jìn)一步具體地說，用于促進(jìn)皮膚組織或粘膜組織的再生或重構(gòu)，或促進(jìn)創(chuàng)傷的治愈，所述的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物含有人參皂甙如人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽。本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于皮膚組織再生、重構(gòu)和/或創(chuàng)傷治愈的促進(jìn)劑的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽。
本發(fā)明還涉及一種或多種用于靜脈內(nèi)給用的制劑或一種或多種皮膚外用或在皮膚局部應(yīng)用的制劑，其含有用于預(yù)防、處置或治療所述疾病的組合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及使用如人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物的人參皂甙作為先導(dǎo)化合物，研究用于預(yù)防、處置或治療皮膚組織疾病的新的、有用的化合物，或用于研究皮膚再生或創(chuàng)傷治愈的促進(jìn)劑。
本發(fā)明涉及一種或多種含有如人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的人參皂甙，對(duì)預(yù)防、處置和/或改善皮膚的老化癥狀有用的化妝品組合物和育發(fā)、生發(fā)及毛發(fā)營養(yǎng)組合物等皮膚外用或皮膚局部應(yīng)用的組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種或多種含有如人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的人參皂甙，用于促進(jìn)植物或動(dòng)物組織的再生、產(chǎn)生或重構(gòu)的組合物，更具體地涉及一種或多種用于生長調(diào)節(jié)的組合物。本發(fā)明的用于生長調(diào)節(jié)的組合物可用作肥料組合物和飼料組合物。
另外，本發(fā)明涉及一種研究用于促進(jìn)活體、生命組織或活體組織的物質(zhì)再生、產(chǎn)生、生根、發(fā)芽、生長、分化或重構(gòu)的方法，該方法包括測定腦室內(nèi)施用的被檢物質(zhì)對(duì)腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。
背景技術(shù)：
已知皮膚或粘膜的損傷或缺損，如損傷、創(chuàng)傷、咬傷、燙傷、灼傷、凍傷、放射線損傷、紫外線照射、電擊傷、外傷、皮膚潰瘍、褥瘡及水皰性皮膚疾病，引起皮膚組織構(gòu)成細(xì)胞或粘膜組織構(gòu)成細(xì)胞的變性脫落、壞死、編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡。作為預(yù)防或治療由皮膚組織或粘膜組織的機(jī)械的或物理的損傷或缺損引起的疾病的有效方法，考慮施用一種或多種可以迅速再生和/或重構(gòu)變性脫落的和有缺損的皮膚組織、粘膜組織以及它們的構(gòu)成細(xì)胞，以及促進(jìn)創(chuàng)傷治愈的藥劑。
以下通過舉例說明皮膚組織，簡要地說明組織的再生和/或重構(gòu)。通常，如果一部分皮膚組織因疾病或外傷而脫落或有缺損，在有缺損的皮膚組織周圍生存的表皮細(xì)胞分裂、增殖并向有缺損的皮膚區(qū)域移動(dòng)。在本說明書中，狹義地將這種現(xiàn)象定義為表皮細(xì)胞或表皮組織的再生。后文中，向有缺損的皮膚區(qū)域已經(jīng)或正在移動(dòng)的再生的表皮細(xì)胞互相粘連而終止分裂和增殖，結(jié)果表皮組織被重構(gòu)。在本說明書中，這種現(xiàn)象被定義為表皮細(xì)胞或表皮組織(表皮)的重構(gòu)。與此類似，發(fā)生表皮細(xì)胞或表皮組織(表皮)的再生和重構(gòu)的生命現(xiàn)象通常稱為表皮形成。表皮組織中的大部分表皮細(xì)胞是表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化(keratinized)細(xì)胞或角質(zhì)化細(xì)胞。盡管與表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞和角質(zhì)化細(xì)胞混合的細(xì)胞的數(shù)目很少，但也有黑素細(xì)胞(產(chǎn)生黑色素的細(xì)胞)、梅克爾細(xì)胞(與皮膚感覺有關(guān)的細(xì)胞)、朗氏細(xì)胞(與皮膚免疫系統(tǒng)，特別是淋巴細(xì)胞的抗原表達(dá)有關(guān)的細(xì)胞)、干細(xì)胞(可以分化為所有的細(xì)胞種的細(xì)胞)、從表皮細(xì)胞分化的汗腺細(xì)胞、從表皮細(xì)胞分化的皮脂腺細(xì)胞、從表皮細(xì)胞分化的毛囊細(xì)胞等。與表皮形成或表皮化相對(duì)應(yīng)，當(dāng)皮膚組織受到損傷或患皮膚疾病的時(shí)候，這些細(xì)胞種在保持與表皮組織的連接形成皮膚附屬物(汗腺、皮脂腺、毛囊等)的同時(shí)，也通過分裂、增殖、粘連或分化等復(fù)雜過程，進(jìn)入表皮組織(或稱為表皮)，或向深皮膚區(qū)域(真皮和皮下組織)移動(dòng)。為再生和/或重構(gòu)皮膚組織，應(yīng)再生和重構(gòu)所有的產(chǎn)生表皮的細(xì)胞和皮膚附屬物如黑素細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、干細(xì)胞、汗腺或汗腺細(xì)胞、皮脂腺或皮脂腺細(xì)胞、毛囊或毛囊細(xì)胞等。另一方面，在真皮和皮下組織的再生和/或重構(gòu)的現(xiàn)象中，成纖維細(xì)胞和血管起著主要作用。成纖維細(xì)胞與表皮細(xì)胞一樣，產(chǎn)生和分泌(再生)膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維和各種細(xì)胞外基質(zhì)成分。另外，如果這些分泌的成分在與健康的真皮和皮下組織接近的狀態(tài)下沒有很有規(guī)律地和系統(tǒng)地重構(gòu)，即如果真皮和皮下組織中的成纖維細(xì)胞、膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維和各種細(xì)胞外基質(zhì)成分不能可靠地、快速地再生和/或重構(gòu)，皮膚組織的再生和/或重構(gòu)就不能完成。換句話說，在真皮和皮下組織的再生和重構(gòu)現(xiàn)象中，成纖維細(xì)胞起著極為重要的作用。因此，為順利地進(jìn)行皮膚組織的再生和/或重構(gòu)，應(yīng)避免抑制成纖維細(xì)胞的分裂、增殖、移動(dòng)和/或分化。關(guān)于血管的重要作用，當(dāng)皮膚組織的再生和重構(gòu)活躍地進(jìn)行時(shí)，因皮膚損傷而斷裂或破裂的血管(包括在血管中膜和血管外膜中的血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞)的再生和/或產(chǎn)生應(yīng)活躍地發(fā)生，但當(dāng)皮膚組織的再生和/或重構(gòu)結(jié)束時(shí)，血管的重構(gòu)應(yīng)通過調(diào)節(jié)機(jī)制的活動(dòng)而結(jié)束，在調(diào)節(jié)機(jī)制中，多余的血管退化而必要的血管保留。另外，皮膚受到損傷或患疾病時(shí)，分布在受損傷或患病皮膚中的末梢神經(jīng)和小體(corpuscular)神經(jīng)受體(梅克爾小體、Pacini小體等)被切斷或破壞，但是，從維持再生的皮膚組織的功能來看，同時(shí)再生和/或重構(gòu)這些神經(jīng)組織是重要的。
如前面所說明的，除非上述極為復(fù)雜的生命現(xiàn)象能很有規(guī)律地進(jìn)行，否則象皮膚組織的再生或重構(gòu)這樣的生命現(xiàn)象就不能成功進(jìn)行。與生命現(xiàn)象有關(guān)的分子團(tuán)的例子有EGF、TGF-β1、TGF-α、FGF、VEGF、PDGF-BB、TGF-β1、PDGF-AB、IGF、KGF、PDGF、TGF-β2、TGF-β6、FGF-2、U-PA、t-PA、粘合素(integrin)、粘連因子等(Singer，A.J.和Clark，R.A.F.，New Engl.J.Med.，341，738-746，1999)。據(jù)說皮膚組織受損傷時(shí)向血管外漏出的血細(xì)胞成分或血漿成分起著重要的作用。
因此，如前所述，皮膚細(xì)胞再生和重構(gòu)的生命現(xiàn)象非常復(fù)雜，且與此相關(guān)的細(xì)胞種類、血管、神經(jīng)和分子團(tuán)(molecular group)不可計(jì)量。人們認(rèn)為由一種化合物調(diào)節(jié)和控制如此復(fù)雜的生命現(xiàn)象而快速、準(zhǔn)確地促進(jìn)組織的再生和/或重構(gòu)是不可能的。已知局部涂布或局部噴霧堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)或血小板生成生長因子(PDGF)能夠促進(jìn)皮膚的部分再生和/或重構(gòu)，顯示對(duì)皮膚潰瘍和褥瘡的效果和效能，但這些效果從臨床觀點(diǎn)來看不能令人滿意(Singer，A.J.和Clark，R.A.F.，New Engl.J.Med.，341，738-746，1999)。上述的肽因子(bFGF、PDGF)是僅可能局部涂布和局部噴霧的醫(yī)藥組合物，且通過靜脈內(nèi)給用等全身給藥不能達(dá)到預(yù)期效果和作用。因此，為促進(jìn)受到損傷或有缺損的皮膚組織，粘膜組織，四肢，頭、頸、腹部和胸部的內(nèi)臟器官和真皮外組織的再生和/重建，需要一種涉及可靜脈內(nèi)施用的皮膚組織再生促進(jìn)劑，和涉及用于促進(jìn)內(nèi)臟器官或組織的再生的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。另外，也需要一種用于預(yù)防、處置或治療上述疾病的優(yōu)良的皮膚外用或皮膚局部應(yīng)用的組合物或制劑，粘膜外用或局部應(yīng)用的優(yōu)良的組合物或制劑，或一種用于預(yù)防、改善或處置皮膚或粘膜的老化癥狀(皮膚萎縮，皮膚皺縮或萎縮、易感染性，松弛，頭皮屑，脫毛，禿頭癥，白發(fā)癥，灰發(fā)，瘙癢，皮膚干燥，粗糙，皮脂分泌減少，皮脂缺乏癥，角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的風(fēng)化或剝離，龜裂，裂紋，皺裂，雀斑，斑點(diǎn)，皺紋，紋路，溝，雀斑，色素沉著，干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)的優(yōu)良的化妝品組合物或促進(jìn)健康的醫(yī)藥組合物。另外，除用于促進(jìn)上述動(dòng)物組織的再生或重構(gòu)的醫(yī)藥組合物外，用于促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、生長、分化、再生、新生或重構(gòu)的生長調(diào)節(jié)組合物或肥料添加劑對(duì)于農(nóng)作物栽培、水栽培、蔬菜栽培、果實(shí)栽培、蘑菇栽培、天然植物栽培、鮮花保存、煙草栽培、藥用植物栽培、植物改良和茶葉栽培也是必需的。
人參皂甙Rb1是由下式表示的化合物 且人參皂甙Rb1是根據(jù)Shibata等公知的化合物(Shibata，S.等，Economic and medicinal plant research，World Scientific，philadelphia，217-284頁，1985)。
在日本專利申請(qǐng)平10-365560(含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中，本發(fā)明的發(fā)明人之一(阪中)發(fā)明了靜脈內(nèi)連續(xù)給用低劑量的人參皂甙Rb1，通過抑制類似編程性細(xì)胞死亡的神經(jīng)細(xì)胞死亡，將腦梗塞病變的體積減少到未給藥組的約1/4。也就是說，阪中等發(fā)明了人參皂甙Rb1在患部組織的細(xì)胞外液濃度為1 ng/ml或更低，優(yōu)選為10pg/ml或更低，更優(yōu)選為100fg/ml或更低時(shí)，細(xì)胞死亡抑制基因產(chǎn)物Bcl-xL的表達(dá)被促進(jìn)，編程性細(xì)胞死亡或類似編程性細(xì)胞死亡的細(xì)胞死亡被抑制，從而表現(xiàn)出細(xì)胞保護(hù)作用。但是，在上面的發(fā)明中，并沒有說明是不是低濃度的人參皂甙Rb1促進(jìn)了一次死亡的細(xì)胞或變性脫落的組織的再生。此外，受到外傷或損傷的變性脫落的組織因存在于脫落的組織近旁的活細(xì)胞的分裂、增殖、移動(dòng)、分化等而恢復(fù)到接近正常的狀態(tài)的現(xiàn)象一般稱為組織再生和/或重構(gòu)。沒有注意靜脈內(nèi)連續(xù)給藥或向病變處局部涂布低濃度的人參皂甙Rb1能否促進(jìn)組織再生或重構(gòu)。
在美國專利5,663,160中，描述了高細(xì)胞外液濃度的人參皂甙Rb1(100μg/ml)能夠有效促進(jìn)皮膚表皮角質(zhì)細(xì)胞或角質(zhì)化細(xì)胞的分裂和增殖，且對(duì)毛發(fā)生長和毛發(fā)營養(yǎng)、皮膚的保護(hù)、皮膚的保濕作用、表皮的再生及皺紋的抑制是有效的。在WO 99/07338中，描述了細(xì)胞外濃度10μg/ml的人參皂甙Rb1能夠促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞中的彈性蛋白的產(chǎn)生，對(duì)抑制皮膚的皺紋是有效的。在上述的美國專利5,663,160和WO 99/07338中，描述了當(dāng)在化妝品或皮膚外用劑中混合濃度為0.001重量％或更大(即，濃度為10μg/ml或10μg/g或更大)的人參皂甙Rb1時(shí)，對(duì)于毛發(fā)生長和毛發(fā)營養(yǎng)、皮膚的保護(hù)、皮膚的保濕作用、表皮的再生和皺紋的抑制有效的。但是，按照本發(fā)明的發(fā)明人(阪中)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550中的描述，高濃度的人參皂甙Rb1并不總是對(duì)細(xì)胞具有好的作用，而是有可能對(duì)細(xì)胞具有有害的作用。特別是如上所述，混合高濃度的人參皂甙Rb1并長期皮膚外涂布是不好的，因?yàn)榭赡艹霈F(xiàn)有害的作用。
我們(本發(fā)明人)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，皮膚中的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度被調(diào)節(jié)為1ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低，將低劑量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1靜脈內(nèi)連續(xù)給藥或皮膚外用給藥。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)，低濃度或低劑量的人參皂甙Rb1表現(xiàn)出對(duì)皮膚組織再生和/或重構(gòu)的優(yōu)良促進(jìn)作用或?qū)?chuàng)傷治愈的優(yōu)良促進(jìn)作用，這是出乎意料之外的，由此完成了本發(fā)明。更具體地說，我們發(fā)明了以低劑量或低濃度施用人參皂甙Rb1能夠再生和重構(gòu)全部皮膚上皮(表皮)、真皮、真皮的乳頭層、皮下組織、結(jié)締組織、汗腺、皮脂腺、毛囊、毛乳頭、血管、末梢神經(jīng)、表皮細(xì)胞、表皮角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、黑素細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞等，并且能夠?qū)⒓?xì)胞外基質(zhì)、膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維等再生和重構(gòu)到接近健康的狀態(tài)。發(fā)現(xiàn)低劑量或低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，通過促進(jìn)皮膚組織的再生和/或重構(gòu)，對(duì)因皮膚組織的損傷、外傷和缺損造成的疾病以及所有引起皮膚的病理組織學(xué)變化的疾病(創(chuàng)傷、燙傷、灼傷、放射線損傷、凍傷、凍瘡、港澳凍瘡、紫外線損傷、電擊傷、外傷、皮膚潰瘍、褥瘡(bedsort，decubitus)、接觸性皮炎、水皰性皮炎、特應(yīng)性皮炎、干皮癥、糖尿病性皮膚潰瘍、自體敏感性皮炎、紅皮病、剝脫性皮炎、表皮水皰癥、光線過敏癥、光過敏、進(jìn)行性色素病(Schamberg病)、嬰兒苔癬、螫傷、蟲咬、癢疹、多形性紅斑、環(huán)形紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎、掌足膿皰癥、牛皮癬、扁平苔癬、魚鱗癬、毛發(fā)苔癬、黃瘤癥、皮膚淀粉樣變性、單純皰疹、病毒性疣、觸染性軟疣、膿皮病、皮膚結(jié)核、皮膚非典型分支桿菌病、癬、發(fā)癬菌疹、發(fā)癬菌癥、皮膚或口腔念珠菌病、疥瘡、毛虱病、虱病、梅毒、瘢痕瘤、肥厚性瘢痕、血管瘤、淋巴瘤、痣、尋常性白斑、雀斑、黃褐斑、黑皮病、汗皰疹、栗疹、尋常性痤瘡、酒糟鼻(紅斑痤瘡)、酒糟鼻(紅斑痤瘡)樣皮炎、口腔粘膜損傷、口腔炎、口周皮炎、皮膚的老化癥狀、脫發(fā)癥、指甲周圍疾病、嵌甲等)有效果和作用。
我們(本發(fā)明人)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽在患部組織的細(xì)胞外液濃度被調(diào)節(jié)并維持在如上所述的低水平，將人參皂甙特別是人參皂甙Rb1外用到口腔粘膜上。結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)低濃度的人參皂甙Rb1促進(jìn)口腔粘膜組織的再生和/或重構(gòu)、創(chuàng)傷治愈或咬傷治愈，這是沒有預(yù)料到的，并因此完成了本發(fā)明。更具體地，我們發(fā)現(xiàn)向粘膜組織外部施用或局部施用低劑量或低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，能夠引起口腔粘膜上皮、固有層、唾液腺、粘液腺、混合腺、結(jié)締組織、肌肉組織、血管、末梢神經(jīng)、上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、肌肉細(xì)胞等的再生或重構(gòu)，并進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)、膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維的再生或重構(gòu)到接近其健康組織的狀態(tài)。即，發(fā)現(xiàn)低劑量或低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過促進(jìn)粘膜組織的再生和/或重構(gòu)，對(duì)由粘膜特別是口腔粘膜的創(chuàng)傷或缺損引起的疾病，或?qū)λ幸鹫衬ぬ貏e是口腔粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病(齲齒、牙髓炎、牙周病、邊緣性牙周炎、口腔炎、舌炎、復(fù)發(fā)性口瘡性口炎、口腔內(nèi)口瘡、口臭、口腔觸物感痛、口腔感覺異常、牙原性感染、口腔粘膜咬傷、舌咬傷、口腔粘膜燙傷、口腔粘膜灼傷、口腔粘膜損傷、口腔粘膜潰瘍等)表現(xiàn)出預(yù)防、改善或治療效果和效能。
我們(本發(fā)明人)還發(fā)現(xiàn)人參、或其提取物、其成分或其代謝產(chǎn)物不僅能夠促進(jìn)動(dòng)物組織而且促進(jìn)植物組織或全部植物細(xì)胞的新生、再生、生根、發(fā)芽、生長、分化或重構(gòu)，并完成了本發(fā)明。更具體地，我們發(fā)現(xiàn)人參的粗皂角甙級(jí)分或人參的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為植物組織，例如黃金葛(pothos)的莖或枝等的插枝繁殖或水栽培時(shí)的生根、發(fā)芽、生長、分化、再生或新生的促進(jìn)劑或肥料添加劑是有用的。即，我們發(fā)現(xiàn)人參、其提取物、其成分或其代謝產(chǎn)物可用于植物的栽培、生長或保存、鮮花的保存、水栽培、農(nóng)作物栽培、農(nóng)作物生長、蔬菜栽培、果實(shí)的栽培和生長、植物的改良和改善、煙草的栽培和生長或茶葉的栽培和生長。
另外，我們(本發(fā)明人)還發(fā)現(xiàn)人參皂甙的一種在PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中被描述過的、新的化學(xué)衍生物二氫人參皂甙Rb1，與人參皂甙Rb1一樣，不僅表現(xiàn)出神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用，而且表現(xiàn)出優(yōu)良的皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用。即，發(fā)現(xiàn)上述的人參皂甙Rb1的效果、效能、用途適用于人參皂甙衍生物，特別是二氫人參皂甙Rb1。
發(fā)明的公開本發(fā)明的一個(gè)目的是提供由皮膚的損傷或缺損，即創(chuàng)傷、燙傷、灼傷、凍傷、凍瘡、港澳凍瘡、放射線損傷、紫外線損傷、電擊傷、外傷、潰瘍、褥瘡引起的，或因皮膚或其他器官的疾病引起病理組織學(xué)變化造成皮膚組織或其他器官或變性、脫落或形態(tài)變化后，可以連續(xù)靜脈內(nèi)給藥或可以外部涂布到皮膚的局部，并且表現(xiàn)出優(yōu)良的組織再生和/或重構(gòu)促進(jìn)作用、創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用的藥物。更具體地，本發(fā)明提供含有低劑量或低濃度的人參皂甙或其代謝產(chǎn)物或其它們的鹽、用于預(yù)防、處置或治療引起器官組織、活體、活體或生命組織的病理組織學(xué)變化的疾病的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，皮膚外用或皮膚局部使用的組合物，例如化妝品組合物或促進(jìn)健康的醫(yī)藥組合物，外用或局部用于粘膜的組合物，或用于動(dòng)物或植物的生長調(diào)節(jié)的組合物。在本發(fā)明中，促進(jìn)健康的藥物或健康藥物不僅包括狹義的健康藥物，而且包括健康食品、健康飲料、健康飲料食品等。
本發(fā)明還提供通過使用人參皂甙或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，研究或篩選用于預(yù)防、處置或治療皮膚組織或粘膜組織疾病的有效成分的方法，或?yàn)闈M足此目的對(duì)人參皂甙或其代謝產(chǎn)物的使用。本發(fā)明進(jìn)一步提供包括向動(dòng)物的腦室內(nèi)給藥被檢物質(zhì)，測定腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，研究和篩選用于促進(jìn)器官組織、活體組織或生命組織的再生、新生、生根、發(fā)芽、生長、分化或重構(gòu)的方法。
本發(fā)明涉及含有人參皂甙Rb1等人參皂甙或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，用于預(yù)防、處置或治療引起器官、活體、活體組織或生命組織的病理組織學(xué)變化的疾病的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。更具體地，本發(fā)明涉及人參皂甙Rb1等人參皂甙或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的含量低于組合物總重量的0.001重量％的上述醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。即，本發(fā)明涉及人參皂甙Rb1等人參皂甙或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的含量低于組合物總重量的0.001重量％的，用于預(yù)防、處置或治療引起器官組織、活體、活體組織或生命組織的病理組織學(xué)變化的疾病的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。更優(yōu)選地，本發(fā)明涉及人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽在患部組織中的細(xì)胞外液濃度被調(diào)節(jié)至1ng/ml或更低，或更優(yōu)選患部組織中的細(xì)胞外液濃度為0.01-100fg/ml或1-1000fg/ml的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物的優(yōu)選給藥制劑有例如一次性靜脈內(nèi)注入制劑或靜脈內(nèi)連續(xù)給藥制劑等靜脈內(nèi)給用制劑，粘膜外用或局部用制劑或皮膚外用或局部用制劑。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及在組合物中包括或主要包括濃度小于0.001重量％的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或其鹽的皮膚外用或局部用組合物或粘膜外用或局部用組合物。本發(fā)明的皮膚外用或局部用組合物或粘膜外用或局部用組合物可作為化妝品組合物、化學(xué)去皮的皮膚外用或局部涂布組合物、健康醫(yī)藥組合物或毛發(fā)生長或毛發(fā)營養(yǎng)組合物，直接或間接應(yīng)用于皮膚組織或粘膜組織。更具體地，本發(fā)明涉及其中如人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或其鹽的人參皂甙含量為小于0.001重量％的低劑量、低用量或低濃度的皮膚外用或局部用組合物或粘膜外用或局部用組合物，優(yōu)選在皮膚組織或粘膜組織中的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml，更優(yōu)選所述的濃度為0.01-100fg/ml或1-10,000fg/ml的皮膚外用或局部用組合物或粘膜外用或局部用組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，用于促進(jìn)植物或動(dòng)物組織或細(xì)胞的新生、再生、生長、重構(gòu)、分化、儲(chǔ)存、保鮮、營養(yǎng)或栽培的生長調(diào)節(jié)組合物。本發(fā)明的用于生長調(diào)節(jié)的組合物可用作植物的生根或發(fā)芽促進(jìn)劑等生長促進(jìn)用組合物或肥料組合物，或用作動(dòng)物的生根促進(jìn)劑、生長促進(jìn)劑等生長促進(jìn)用組合物或飼料組合物。更具體地，本發(fā)明涉及其中如人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的人參皂甙含量為小于0.001重量％的低劑量、低用量或低濃度的生長調(diào)節(jié)用組合物。
另外，本發(fā)明涉及以人參皂甙或其代謝產(chǎn)物為先導(dǎo)化合物，研究或篩選用于預(yù)防、處置或治療皮膚組織或粘膜組織的疾病的活性組合物或化合物的方法，以及涉及將它們用于研究或篩選用于預(yù)防、處置或治療皮膚或粘膜疾病的有效成分或化合物的先導(dǎo)化合物的方法。本發(fā)明還涉及含有通過上文的方法研究的物質(zhì)的，用于預(yù)防、處置或治療皮膚組織或粘膜組織的疾病的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
另外本發(fā)明涉及包括通過測定被檢的腦室內(nèi)給藥的物質(zhì)對(duì)腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，研究或篩選用于促進(jìn)活體組織的再生、新生、生根、發(fā)芽、生長、分化或重構(gòu)的物質(zhì)的方法。本發(fā)明還涉及含有通過所述的方法、經(jīng)腦室內(nèi)給藥顯示出對(duì)腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用的化合物或它們的鹽，用于促進(jìn)活體組織的再生、新生、生長、分化或重構(gòu)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明涉及使用能夠產(chǎn)生人參皂甙的培養(yǎng)細(xì)胞或植物株，大量生產(chǎn)人參皂甙或其代謝產(chǎn)物的方法。
本發(fā)明的活體組織的例子有人類、動(dòng)物、植物、微生物等生物的活體組織，例如皮膚組織、粘膜組織等活體的外部組織，腹部和胸部的內(nèi)臟組織如肝臟、腎臟、脾臟、胰臟、肺、腸和胃等消化器官、膀胱等泌尿器官、子宮和睪丸等生殖器官，頭頸部組織、骨組織、關(guān)節(jié)、韌帶、肌肉、血管、神經(jīng)等。這些活體組織優(yōu)選是體內(nèi)狀態(tài)的形式，但也可以是器官移植用等的體外狀態(tài)的形式。
本發(fā)明的活體組織的病理組織學(xué)變化是上述的活體組織中的正常組織發(fā)生病理和組織學(xué)變化的狀態(tài)，例如損傷、創(chuàng)傷、外傷、創(chuàng)傷或缺損。引起這些病理組織學(xué)變化的成因或來源沒有特別的限制，可以是任何起因，包括來自外部的物理力、外科的處置及手術(shù)中的切除、橫切或縫合、消化性潰瘍病變等病理學(xué)變化。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物用于預(yù)防、處置或治療引起活體組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病，其特征在于促進(jìn)引起病理組織學(xué)變化的活體組織的細(xì)胞或組織的再生和/或重構(gòu)。因此，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物的特征是通過引起病理組織學(xué)變化的活體組織或其細(xì)胞的再生和/或重構(gòu)，促進(jìn)器質(zhì)性疾病的治愈。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物的特定特征是優(yōu)選低劑量、低用量或低濃度，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的含量為小于組合物總重量的0.001重量％，更準(zhǔn)確地是0.0001重量％或更低，0.00001重量％或更低，0.000001重量％或更低，0.0000001重量％或更低，或0.00000001重量％或更低。通過使用如此低的劑量、低用量或低濃度，有效成分人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的細(xì)胞外液濃度維持在1ng/ml或更低、優(yōu)選0.01-100fg/ml或1-10000fg/ml。本發(fā)明的特征是發(fā)現(xiàn)了如此低濃度的有效成分的新作用。
本發(fā)明的“人參皂甙”可以是人參的成分的諸如人參皂甙Rb1的所謂人參皂甙、含有人參皂甙Rb1的人參或其提取物等天然產(chǎn)物、提取物、分餾成分或精制成分，進(jìn)一步地可以是對(duì)天然存在的如人參皂甙Rb1的人參皂甙化合物通過化學(xué)方法進(jìn)行化學(xué)修飾而衍生的化合物。
“人參皂甙”或天然存在的人參皂甙化合物舉例如下。
人參皂甙Ro(竹節(jié)參皂甙(Chikusetsusaponin)V；皂角甙A)、人參皂甙Ra1、人參皂甙Ra2、人參皂甙Rb1；皂角D、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rb3、人參皂甙Rc、人參皂甙Rd、人參皂甙Re；人參皂甙Ra3；三七皂甙(notoginsenoside)R4；西洋參皂甙R1；人參皂甙Rs1；人參皂甙Rs2；20s-人參皂甙Rg3；20-葡糖人參皂甙(glucoginsenoside)Rg2；三七皂甙R1；人參皂甙Rf；20r-人參皂甙Rg2；20R-人參皂甙Rh1；人參皂甙Rf、人參皂甙Rg1；人參皂甙Rg2；竹節(jié)參皂甙I；人參皂甙Rg3；人參皂甙Rh1；人參皂甙Rh2；丙二?；藚⒃磉?malonylginsenoside)Rb1；丙二?；藚⒃磉癛b2；丙二?；藚⒃磉癛c；丙二?；藚⒃磉癛d；竹節(jié)參皂甙Ia；竹節(jié)參皂甙Ib；竹節(jié)參皂甙III；竹節(jié)參皂甙IV；皂角甙B；竹節(jié)參皂甙IVa；皂角甙C；原人參二醇、原人參三醇、齊墩果醇酸等或它們的立體異構(gòu)體。在本發(fā)明中，由于這些人參皂甙互相具有類似的化學(xué)結(jié)構(gòu)并因此被認(rèn)為具有共同的效果、效能和用途，它們中的每一種都可以單獨(dú)使用，或?qū)⒉煌亩喾N人參皂甙組合后同時(shí)使用。
天然產(chǎn)物的例子如人參或其提取物，含有人參皂甙的提取物、分級(jí)級(jí)分或純化成分可以是含有相對(duì)大量的上文的人參皂甙化合物的天然產(chǎn)物。這些可以是天然產(chǎn)物本身，通過提取和濃縮含有人參皂甙化合物的成分制備的提取物、從提取物中，進(jìn)一步地，由含有從皂角甙級(jí)分等提取物精制和分離的人參皂甙化合物的級(jí)分，或通過精制含有人參皂甙化合物的級(jí)分制備的人參皂甙化合物的精制乳劑，以液態(tài)或固態(tài)形式制備的提取物或片劑。
天然產(chǎn)物的例子如人參或其提取物、含有人參皂甙化合物的提取物、分級(jí)成分或精制級(jí)分是藥用人參、人參提取物或人參的粗制皂角甙級(jí)分。
通過化學(xué)修飾由天然存在的人參皂甙Rb1等人參皂甙化合物衍生的化合物是通過下面的修飾方法從上述的天然人參皂甙的化學(xué)結(jié)構(gòu)制備的(以下，本說明書中的這些化合物被稱作“人參皂甙衍生物”或“人參皂甙的衍生物”)。
也就是說，(1)與類固醇樣骨架或結(jié)構(gòu)(達(dá)瑪烷骨架或結(jié)構(gòu))鍵合的側(cè)碳鏈中的一個(gè)雙鍵被還原(因此被稱為二氫人參皂甙)；(2)人參皂甙的羥基被乙?；?3)除乙?；?，側(cè)碳鏈中的雙鍵轉(zhuǎn)變?yōu)閱捂I，且可選擇的與官能團(tuán)如一個(gè)或多個(gè)羥基鍵合；(4)除乙?；?，側(cè)鏈中的雙鍵被切斷，且其末端轉(zhuǎn)化為醛；(5)除乙?；猓蛇x擇的官能團(tuán)如烷基或芳基與側(cè)鏈末端鍵合；(6)除乙酰化外，側(cè)鏈中的雙鍵被切斷并與羧基鍵合；(7)側(cè)鏈中的雙鍵被切斷并與羧基鍵合；(8)側(cè)鏈末端的一端上的甲基被氫原子取代，另一端的甲基可選擇的被官能團(tuán)如烷基或芳基取代；(9)側(cè)鏈中的雙鍵被轉(zhuǎn)變?yōu)閱捂I，且可選擇的鍵合官能團(tuán)如羥基；和(10)任何具有原人參二醇、原人參三醇、達(dá)瑪烷、齊墩果醇酸或它們的還原化合物骨架結(jié)構(gòu)的化合物。上述人參皂甙的衍生物(特別是，基于原人參二醇的皂角甙和基于原人參三醇的皂角甙)在PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中有描述。另外，在PCT/JP00/04102中，還描述了上述的人參皂甙衍生物之一—二氫人參皂甙Rb1的神經(jīng)保護(hù)作用、其制備方法及NMR圖。
對(duì)于人參皂甙中具有輕微不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)的齊墩果醇酸如人參皂甙Ro(竹節(jié)參皂甙V)，可以提到通過下面方法的化學(xué)修飾制備的化合物(1)人參皂甙的類固醇樣骨架或糖苷配基(齊墩果醇酸)的化學(xué)結(jié)構(gòu)中的雙鍵的還原(所謂的二氫人參皂甙)；(2)將(1)的還原部位的氫原子置換為任意的官能團(tuán)(例如，羥基、烷基、芳基等)；(3)羧基的酯化；(4)羥基的乙?；缓?5)(1)～(4)的修飾法中的任意兩種或更多方法的組合。由于上述的人參皂甙衍生物或其立體異構(gòu)體具有類似的化學(xué)結(jié)構(gòu)并被認(rèn)為具有共同的效果、效能和用途，它們可以單獨(dú)使用，或組合不同的多種人參皂甙衍生物或人參皂甙同時(shí)使用。
本發(fā)明的人參皂甙的代謝產(chǎn)物是本發(fā)明的人參皂甙在體內(nèi)的代謝而產(chǎn)生的化合物，本發(fā)明的有效成分不限于上述的人參皂甙，體內(nèi)代謝產(chǎn)物以及能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明目的的化合物也包括在內(nèi)。
附圖簡要說明

圖1是代替顯示靜脈內(nèi)施用的人參皂甙Rb1對(duì)切開創(chuàng)傷的效果圖的明視野顯微照片。A施用人參皂甙Rb1的情況；B施用生理鹽水的情況。
圖2是代替顯示靜脈內(nèi)施用的人參皂甙Rb1對(duì)開放式創(chuàng)傷的效果圖的明視野顯微照片。A施用人參皂甙b1的情況；B施用生理鹽水的情況。
圖3是代替顯示靜脈內(nèi)預(yù)施用的人參皂甙Rb1對(duì)開放式創(chuàng)傷的效果圖的亮視野顯微鏡照片。A施用人參皂甙b1的情況；B施用生理鹽水的情況。
圖4是顯示通過利用人參皂甙Rb1作為先導(dǎo)化合物制備的化學(xué)衍生物的一部分的圖。
圖5是代替顯示皮膚外給藥、局部施用低濃度(0.001重量％)人參皂甙Rb1時(shí)對(duì)開放式創(chuàng)傷的輕微治療效果圖的照片。
圖6是代替皮膚外給藥、局部施用低濃度(0.0001重量％、0.00001重量％和0.000001重量％)人參皂甙Rb1對(duì)開放式創(chuàng)傷的效果圖的照片。
圖7是代替顯示粘膜外給藥、局部施用濃度為10-5重量％的人參皂甙Rb1對(duì)人口腔粘膜咬傷的效果的照片。
圖8是代替顯示粘膜外給藥、局部施用濃度為10-5重量％的人參皂甙Rb1對(duì)人口腔粘膜咬傷的效果圖的照片。
圖9是代替顯示用人參皂甙Rb1處置后第13天，人參皂甙Rb1(100fg/ml)對(duì)黃金葛(pothos)的根的新生、再生和/或生根的效果圖的照片。
圖10是代替顯示用人參皂甙Rb1處置后第22天，人參皂甙Rb1(100fg/ml)對(duì)黃金葛的根的新生和/或再生的效果圖的照片。
圖11是代替顯示用粗皂角級(jí)分處置后第14天，人參的粗皂角級(jí)分(1450fg/ml)對(duì)黃金葛的根的新生和/或再生的效果圖的照片。
圖12是代替顯示外用給藥、局部施用濃度為10-4-10-8重量％的人參皂甙Rb1對(duì)大鼠的開放式創(chuàng)傷的效果圖的照片。
圖13是顯示外用給藥或局部施用濃度為10-4-10-8重量％的人參皂甙Rb1對(duì)大鼠的開放式創(chuàng)傷的效果圖。
圖14是代替顯示外用給藥或局部施用濃度為10-4-10-7重量％的二氫人參皂甙Rb1對(duì)大鼠的開放式創(chuàng)傷的效果圖的照片。
圖15是顯示外用給藥或局部施用濃度為10-4-10-7重量％的二氫人參皂甙Rb1對(duì)大鼠的開放式創(chuàng)傷的效果圖。
圖16是代替顯示二氫人參皂甙Rb1對(duì)SNP誘導(dǎo)的培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡的保護(hù)效果圖的MAP2免疫印跡照片。
圖17是顯示二氫人參皂甙Rb1對(duì)SNP誘導(dǎo)的培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡的保護(hù)效果圖。
圖18是二氫人參皂甙Rb1的NMR圖。
實(shí)施發(fā)明的最佳方式以下將基于具體的實(shí)施例，詳細(xì)說明本發(fā)明的低劑量、低用量或低濃度的人參皂甙的促進(jìn)創(chuàng)傷治愈的作用或促進(jìn)組織再生和重構(gòu)的作用。為此，將通過使用人參皂甙Rb1—一種典型的人參皂甙，和二氫人參皂甙Rb1—一種人參皂甙Rb1衍生物(天然人參皂甙的化學(xué)修飾衍生物之一)作為本發(fā)明的人參皂甙來解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
為研究低劑量、低用量或低濃度的人參皂甙Rb1對(duì)皮膚組織再生和/或重構(gòu)的效果，考查了連續(xù)靜脈注入人參皂甙Rb1對(duì)使我們?nèi)菀子^察組織或細(xì)胞的再生現(xiàn)象的、皮膚的切開創(chuàng)傷的效果。使用了雄性的Wistar大鼠(體重約300g)。在室內(nèi)通過1212小時(shí)明暗循環(huán)飼養(yǎng)動(dòng)物，隨意地供應(yīng)水和飼料。在吸入麻醉狀態(tài)下在動(dòng)物的背部上制作長約3cm的切開創(chuàng)傷，并用尼龍線縫合。一小時(shí)后，靜脈內(nèi)注射一次溶解于生理鹽水中的人參皂甙Rb1(60μg)。此后利用Alza滲透微型真空泵連續(xù)靜脈內(nèi)注入人參皂甙Rb1(60μg/天)7天。
在制作了相同的切開創(chuàng)傷并用尼龍線縫合的對(duì)照動(dòng)物中靜脈內(nèi)給用同等量的生理鹽水。
在結(jié)束連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1或生理鹽水后的第2天，用戊巴比妥對(duì)動(dòng)物實(shí)施麻醉并固定，經(jīng)心灌注含有4％多聚甲醛的0.1M磷酸鹽緩沖劑。然后，采集包含切開縫合部位的皮膚組織，后固定并嵌入石蠟中。制作厚度為5μm的石蠟切片，供蘇木精-曙紅染色(HE)用。結(jié)果如圖1所示。圖1是代替圖的照片。圖1A顯示施用人參皂甙Rb1的情況，圖1B顯示施用生理鹽水的情況。圖中“S”表示瘢痕或疤痕。
如圖1A所示，施用人參皂甙Rb1與圖1B施用生理鹽水相比，在切開創(chuàng)傷局部的鄰近處觀察到汗腺、皮脂腺和毛囊等許多皮膚附屬物。這說明作為靜脈內(nèi)給用低劑量或低用量的人參皂甙Rb1的結(jié)果，汗腺、皮脂腺、毛囊以及它們細(xì)胞快速地再生和重構(gòu)。另外，施用低劑量或低用量的人參皂甙Rb1與給用生理鹽水的情況不同，除創(chuàng)傷局部外，表皮、真皮和皮下組織被再生、重構(gòu)或恢復(fù)到接近正常的狀態(tài)。即可以說，靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1快速地再生和重構(gòu)有創(chuàng)傷的皮膚組織，結(jié)果是明顯地促進(jìn)了創(chuàng)傷愈合。
在圖1B中施用生理鹽水的情況下，觀察到瘢痕或疤痕，所謂的瘢痕或疤痕大量生長，但幾乎觀察不到受損傷組織的再生。即，在常規(guī)的創(chuàng)傷治愈中，僅有瘢痕或疤痕生長，而沒有觀察到受損傷組織的系統(tǒng)再生和重構(gòu)。但是，如圖1A中所觀察到的，本發(fā)明的特征是施用人參皂甙Rb1不僅縮小了瘢痕或疤痕區(qū)域，而且再生和重構(gòu)了各個(gè)受損傷的組織。
因此，從靜脈內(nèi)施用人參皂甙Rb1引起甚至是皮膚組織的深部的組織的再生和/或重構(gòu)的進(jìn)行，并以良好狀態(tài)促進(jìn)創(chuàng)傷治愈這方面判斷，如果在手術(shù)前和/或手術(shù)后給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，容易產(chǎn)生縫合不充分的高齡者、低營養(yǎng)患者、糖尿病患者、免疫缺損癥患者、愛滋病患者或癌癥患者，預(yù)計(jì)發(fā)揮優(yōu)良的效果和效能。另外，在整形外科手術(shù)(包括美容外科)前和/或手術(shù)后，或發(fā)生引起皮膚損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損疾病后靜脈內(nèi)給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，將通過優(yōu)良的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)效果和組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用“快速并確實(shí)地治愈損傷”。如圖1A所示，施用人參皂甙Rb1時(shí)，由于組織再生和重構(gòu)過程令人滿意，并且在真皮和皮下組織中充分地產(chǎn)生并分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維和細(xì)胞外基質(zhì)至接近正常的狀態(tài)，結(jié)果瘢痕或疤痕比圖1B給用生理鹽水的情況變得更小。
我們考查了靜脈內(nèi)施用低劑量或低用量的人參皂甙Rb1能否促進(jìn)皮膚組織缺損的疾病(褥瘡、皮膚潰瘍、灼傷、凍傷、放射線損傷、開放式創(chuàng)傷、紫外線損傷、電擊傷等)中皮膚組織的再生和/或重構(gòu)。為此，例如，通過利用雄性Wistar大鼠(體重約300g)，在吸入麻醉的狀態(tài)下在動(dòng)物的背部皮膚區(qū)域中進(jìn)行直徑6mm的穿刺活檢以產(chǎn)生開放式創(chuàng)傷，并原樣放置。約1小時(shí)后，靜脈內(nèi)施用溶于生理鹽水中的人參皂甙Rb1(12μg)一次，然后利用Alza滲透微型真空泵連續(xù)靜脈內(nèi)灌注人參皂甙Rb17天(12μg/天)。
在制作了同樣的開放式創(chuàng)傷并原樣放置的對(duì)照動(dòng)物中，靜脈內(nèi)給用了等量的生理鹽水。
結(jié)束連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1或生理鹽水后的第2天，用戊巴比妥將動(dòng)物麻醉并固定，經(jīng)心灌注含有4％多聚甲醛的0.1M磷酸鹽緩沖劑。此后，采集包含開放式創(chuàng)傷的皮膚組織、后固定并嵌入石蠟中。切下厚5μm的石蠟切片并用蘇木精-曙紅(HE)染色。結(jié)果如圖2所示。圖2是代替圖的照片。圖2A顯示了給用人參皂甙Rb1的情況，圖2B顯示了給用生理鹽水的情況。圖2A和B中箭頭的左側(cè)是健康區(qū)域；圖2A中箭頭的右側(cè)是再生的皮膚組織；圖2B中箭頭的右側(cè)主要是瘢痕或疤痕。在圖2A的再生皮膚組織中，在表皮下的結(jié)締組織(真皮或皮下組織)中觀察到許多毛囊、毛乳頭、皮脂腺和立毛肌，在再生和重構(gòu)的皮膚組織下面觀察到少量的瘢痕或疤痕。
如圖2A所示，在給用人參皂甙Rb1的情況下，與圖2B中給用生理鹽水的情況相比，發(fā)生了充分的上皮形成或上皮化，并且具有乳頭的真皮的結(jié)締組織和皮下組織的再生和重構(gòu)進(jìn)行到接近正常的狀態(tài)。另外，給用人參皂甙Rb1的情況與給用生理鹽水的情況不同，在開放式創(chuàng)傷后再生的皮膚組織中觀察到大量的皮膚附屬物如毛囊、毛乳頭、皮脂腺、立毛肌、汗腺等，并且血管網(wǎng)絡(luò)也再生、重構(gòu)和/或恢復(fù)到接近正常組織的狀態(tài)?？赡苁怯捎诒砥?、真皮的結(jié)締組織、真皮的乳頭、皮下組織、皮膚附屬物和血管的再生和/或重構(gòu)，在制作開放式創(chuàng)傷時(shí)切斷的末梢神經(jīng)看起來也通過靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1而再生。如圖2A所示，在給用人參皂甙Rb1時(shí)，由于組織再生和重構(gòu)的進(jìn)行令人滿意，且真皮和皮下組織中充分產(chǎn)生和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維和細(xì)胞外基質(zhì)至接近正常的狀態(tài)，結(jié)果瘢痕或疤痕比圖2B中給用生理鹽水的情況變得更小。
然后，我們(本發(fā)明人)考查了在準(zhǔn)備皮膚的開放式創(chuàng)傷之前靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1能否促進(jìn)皮膚組織的再生和/或重構(gòu)。為此，在吸入麻醉狀態(tài)下向雄性Wistar大鼠(體重約300g)靜脈內(nèi)給用溶于生理鹽水中的人參皂甙Rb1(12μg)，然后使用Alza滲透微型真空泵靜脈內(nèi)連續(xù)注入人參皂甙Rb14天(12μg/天)。之后，在吸入麻醉下在動(dòng)物的背部皮膚區(qū)域進(jìn)行直徑6mm的穿刺活檢以制作開放創(chuàng)傷，同時(shí)靜脈內(nèi)連續(xù)注入人參皂甙Rb13天。
在制作了同樣的開放式創(chuàng)傷并原樣放置的對(duì)照動(dòng)物中，靜脈內(nèi)給用了等量的生理鹽水。
結(jié)束靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參皂甙Rb1或生理鹽水后的第2天(即，制作皮開創(chuàng)傷后的第5天)，用戊巴比妥將動(dòng)物麻醉并固定，經(jīng)心灌注含有4％多聚甲醛的0.1M磷酸鹽緩沖劑。然后，采集包含開放創(chuàng)傷的皮膚組織，后固定并按照常規(guī)方法嵌入石蠟中。切取5μm厚的石蠟切片并用蘇木精-曙紅(HE)染色。結(jié)果如圖3所示。圖3是代替圖的照片。圖3A顯示了給用人參皂甙Rb1的情況，圖3B顯示了給用生理鹽水的情況?！癷”代表結(jié)痂或焦痂，“ep”代表表皮的復(fù)層扁平上皮，“bv”代表血管。
如圖3A所示，在給用人參皂甙Rb1的情況下，在制作開放性創(chuàng)傷后第5天，焦痂下面表皮(復(fù)層扁平上皮)明顯地再生和重構(gòu)，并且在緊接表皮(復(fù)層扁平上皮)的下面分布著充滿紅血球的密集再生的血管或新生的血管，同時(shí)在真皮的結(jié)締組織或皮下組織中，觀察到從所述的血管分枝出來的較細(xì)的血管密集地存在。另一方面，如圖3B所示，在給用生理鹽水的情況下，即使在制作開放性創(chuàng)傷后的第5天，焦痂下面真皮的再生也極為不完全，并且在緊接非常薄的真皮下面再生的血管明顯比給用人參皂甙Rb1時(shí)的細(xì)。在被認(rèn)為將來變成瘢痕或疤痕的、表皮下的結(jié)締組織中觀察到少量極細(xì)的血管。因此，通過靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1，明顯地促進(jìn)了皮膚組織的再生和重構(gòu)，并且一次斷裂和切斷的血管的再生、新生和重構(gòu)受到了靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1的促進(jìn)。另外，不應(yīng)忘記如圖3A所示，在給用人參皂甙Rb1的情況下，制作開放性創(chuàng)傷后的第5天在緊接真皮(復(fù)層扁平上皮)下面觀察到的密集的血管，在制作開放性創(chuàng)傷后的第9天就如同圖2A那樣退化或消失，并且在該區(qū)域觀察到含有乳頭的真皮的結(jié)締組織。即，給用人參皂甙Rb1的情況下，在制作開放性創(chuàng)傷后的時(shí)期階段就出現(xiàn)血管的再生或新生血管重構(gòu)的發(fā)生與皮膚組織的再生和/或重構(gòu)的完成相符合。應(yīng)該說，證明一種化合物能如此明顯地完成組織再生和重構(gòu)的復(fù)雜生命現(xiàn)象的本發(fā)明，是人類歷史上的第一次。在健康的組織中，給用人參皂甙Rb1的情況與給用生理鹽水的情況觀察不到明顯的差別。這支持連續(xù)地靜脈內(nèi)給用低劑量或低用量的人參皂甙Rb1不會(huì)影響健康的組織，而僅對(duì)有病變的組織或受損傷的組織具有有利的作用。即，可以說人參皂甙特別是人參皂甙Rb1是具有較少副作用的醫(yī)藥組合物。
通過靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1快速地將由開放式創(chuàng)傷引起的一次缺損的皮膚組織再生和重構(gòu)至接近正常狀態(tài)的本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說明，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1促進(jìn)表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角質(zhì)新生細(xì)胞(corneocyte)、角質(zhì)化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、間葉細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的分裂、生長、移動(dòng)和分化，并且促進(jìn)表皮細(xì)胞向毛囊、汗腺和皮脂腺細(xì)胞的分化。另外，發(fā)明了通過給用人參皂甙Rb1，上述的各種細(xì)胞、末梢神經(jīng)和血管有機(jī)地、系統(tǒng)地再生和/或重構(gòu)，結(jié)果是皮膚的開放式創(chuàng)傷快速地恢復(fù)到接近正常皮膚組織的狀態(tài)。即，通過低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)連續(xù)給藥，在皮膚的缺損區(qū)中新再生的表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞以類似于正常的皮膚組織的狀態(tài)排列，并且細(xì)胞外基質(zhì)、膠原纖維、彈性纖維和網(wǎng)狀纖維再生和重構(gòu)至接近正常皮膚組織的狀態(tài)。如本發(fā)明實(shí)驗(yàn)的結(jié)果(圖2A和圖3A)所示，通過靜脈內(nèi)給藥人參皂甙Rb1，不僅表皮組織而且真皮和皮下組織都在開放式創(chuàng)傷(皮膚缺損區(qū))中再生和重構(gòu)，即使是在開放式創(chuàng)傷上皮化(上皮形成)以后相同的區(qū)域再次受到外傷，預(yù)計(jì)難以在曾經(jīng)施用人參皂甙Rb1的上皮化的開放式創(chuàng)傷區(qū)域中發(fā)生表皮組織的脫落。
另一方面，如圖2B和圖3B所示，在給用生理鹽水的情況下，即使在外表上發(fā)生上皮形成(上皮化)，由于真皮和皮下組織沒有伴隨再生或重構(gòu)并且形成瘢痕或疤痕，僅通過施加輕微的外力表皮組織就容易脫落的可能性很高。按照本發(fā)明人的經(jīng)驗(yàn)，即使表皮生長因子(EGF)、或血小板生長因子(PDGF)或堿性成纖維生長因子(bFGF)被噴霧或涂布在大鼠皮膚的局部開放式創(chuàng)傷上，它們的促進(jìn)創(chuàng)傷治愈的效果也比靜脈內(nèi)連續(xù)給用低劑量或低用量的人參皂甙Rb1的效果差。如此低劑量或低用量的人參皂甙Rb1自身取得如此明顯的皮膚組織的再生和/或重構(gòu)或創(chuàng)傷治愈的事實(shí)說明，與創(chuàng)傷治愈或皮膚組織的再生和重構(gòu)的細(xì)胞因子(EGF、TGF-β1、TGF-α、FGF、VEGF、PDGF-BB、TGF-β1、PDGF-AB、IGF、KGF、PDGF、TGF-β2、TGF-β3、FGF-2、U-PA、t-PA等)的產(chǎn)生，以及血細(xì)胞成分或血漿成分的功能受到低劑量或低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的調(diào)節(jié)。如Singer，A.J.和Clark，R.A.F.，New Engl.J.Med.，341，738-746，1999的綜述所述，低劑量、低用量或低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1單獨(dú)就能實(shí)現(xiàn)與創(chuàng)傷治愈或組織再生或重構(gòu)有關(guān)的復(fù)雜生命現(xiàn)象。
按照使用大鼠皮膚的開放式創(chuàng)傷的本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用于靜脈內(nèi)給用、含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的制劑對(duì)創(chuàng)傷愈合的促進(jìn)作用和對(duì)皮膚組織再生或重構(gòu)促進(jìn)作用被認(rèn)為是歷史上最強(qiáng)的。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽看來具有極為強(qiáng)大的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用和皮膚組織再生或重構(gòu)促進(jìn)作用，并且該事實(shí)支持人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽可以是預(yù)防、處置或治療由皮膚的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損或引起的皮膚病或引起皮膚的病理組織學(xué)變化的疾病的先導(dǎo)化合物。
作為利用人參皂甙Rb1作為先導(dǎo)化合物制備的用于皮膚疾病的治療藥的候補(bǔ)物，可能性最高的化合物是二氫人參皂甙Rb1。如上文所述，可通過還原與類固醇樣骨架或結(jié)構(gòu)(達(dá)瑪烷骨架或結(jié)構(gòu))鍵合的側(cè)碳鏈中的一個(gè)雙鍵制備所述的化合物。圖4所示的人參皂甙Rb1的其他化學(xué)衍生物與人參皂甙Rb1一樣，也可以作為預(yù)防、處置或治療由皮膚或粘膜的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損引起的疾病，或引起皮膚或粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病的藥劑。圖4的左上，(1)為乙?；u基而得的衍生物的例子；(2)為除乙?；?，還將側(cè)碳鏈中的雙鍵轉(zhuǎn)變?yōu)閱捂I、并選擇地鍵合官能團(tuán)如羥基的例子；(3)為除乙酰化外，還切斷側(cè)鏈中的雙鍵并將其末端轉(zhuǎn)變?yōu)槿┑睦樱?4)為除乙?；?，還在側(cè)鏈末端上選擇地鍵合官能團(tuán)如烷基或芳基的例子；(5)為除乙?；?，還將側(cè)鏈中的雙鍵切斷并與羧基鍵合的例子；(6)為切斷側(cè)鏈中的雙鍵并與羧基鍵合的例子；(7)為將側(cè)鏈末端的一端的甲基置換為氫原子、并用官能團(tuán)如烷基或芳基選擇取代另一端的甲基的例子；(8)為將側(cè)鏈中的雙鍵轉(zhuǎn)變?yōu)閱捂I并選擇地鍵合官能團(tuán)如羥基的例子。對(duì)于上述的衍生物，也在“發(fā)明的公開”部分中描述。在人參中，除人參皂甙Rb1外，還包括約30種已知的精制皂角甙，即人參皂甙(莊司順三，“藥用人參”’95，251-261頁，熊谷朗編，共立出版株式會(huì)社)，并且由于這些精制皂角甙即人參皂甙的化學(xué)結(jié)構(gòu)與人參皂甙Rb1類似，這些物質(zhì)也可以是用于處置、預(yù)防或治療上述的皮膚組織或粘膜疾病的藥劑。當(dāng)然，通過利用人參皂甙Rb1作為先導(dǎo)化合物制備的新的化學(xué)衍生物并不限于上述化合物。精制皂角甙即人參皂甙的化學(xué)衍生物(特別是原人參二醇、原人參三醇皂角甙)也可以通過還原達(dá)瑪烷骨架或結(jié)構(gòu)(類固醇樣骨架或結(jié)構(gòu))的側(cè)鏈或通過以類似于圖4的方法修飾精制的皂角甙來制備。關(guān)于齊墩果醇酸的化學(xué)衍生物如人參皂甙Ro已在“發(fā)明的公開”中描述。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的上述化學(xué)衍生物，即人參皂甙衍生物和已知的類似物，即具有莊司的概述中描述的三種類型的糖苷配基的化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物預(yù)計(jì)對(duì)腦和神經(jīng)疾病或伴隨細(xì)胞死亡的疾病如腦卒中、神經(jīng)變性疾病、脊髓損傷、頭部損傷、神經(jīng)外傷、神經(jīng)損傷等具有與人參皂甙Rb1同樣的效果和效能(日本專利申請(qǐng)?zhí)柶?0-365560、PCT/JP99/02550，含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑；日本專利申請(qǐng)?zhí)柶?1-340850、PCT/JP99/06804，含有人參皂甙Rb1的腦血管再生和重構(gòu)促進(jìn)劑及神經(jīng)組織繼發(fā)變性抑制劑；和PCT/JP00/04102，含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)。預(yù)計(jì)上述的人參皂甙或人參皂甙衍生物適用于伴隨細(xì)胞死亡的各種疾病和疾病狀態(tài)(病理癥狀)中，這包括在該書(《今日治療指南》，日野原重明、阿部正和編，醫(yī)學(xué)書院；1995)中描述的所有疾病和疾病狀態(tài)(病理癥狀)。當(dāng)然，日本厚生省指定的45種特定疾病也可能通過人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，或人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙進(jìn)行預(yù)防、處置或治療。
由于人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)效果是劃時(shí)代的，所以，不僅通過利用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物可以制備用于處置或治療皮膚疾病的新藥劑或組織再生促進(jìn)劑，而且通過在鑒定人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物的目標(biāo)分子后，直接合成修飾目標(biāo)分子的功能的化合物，可以指導(dǎo)皮膚疾病處置或治療劑的開發(fā)。
在本實(shí)驗(yàn)中，在制作了產(chǎn)生皮膚缺損的開放式創(chuàng)傷后，連續(xù)靜脈內(nèi)給用低用量或低劑量的人參皂甙Rb1，結(jié)果是促進(jìn)了皮膚組織的再生和重構(gòu)并顯著地促進(jìn)了創(chuàng)傷的治愈。該事實(shí)說明連續(xù)靜脈內(nèi)給用低用量或低劑量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，也能對(duì)其他引起皮膚缺損的疾病(例如，褥瘡、皮膚潰瘍、灼傷、凍傷、放射線損傷、水皰性皮膚疾病、紫外線損傷、電擊傷、中暑、皮膚外傷等)起到有利的作用。另外，靜脈內(nèi)或局部給藥人參皂甙特別是人參皂甙Rb1據(jù)說不僅對(duì)皮膚病有效，而且也對(duì)部分器官或組織有缺損的其他疾病(例如，胃潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎、粘膜糜爛、粘膜潰瘍、消化道或消化管的粘膜糜爛、慢性腸胃炎、急性腸胃炎、克羅恩氏病、貝切特氏綜合癥、鼓膜損傷、角膜損傷、角膜糜爛、角膜潰瘍、骨缺損、膀胱、尿道和陰莖損傷等)有效。在上述疾病中，人參皂甙特別人參皂甙Rb1可通過滴鼻給藥、直腸給藥、滴耳給藥、滴眼給藥或舌下給藥。當(dāng)然，低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過促進(jìn)引起病理組織學(xué)變化的器官或組織的再生或重構(gòu)發(fā)揮效果和效能。引起這樣的病理組織學(xué)變化的疾病和病理癥狀的例子有創(chuàng)傷、灼傷、外傷、咬傷、皮膚潰瘍、褥瘡以及在該書(今日治療指南；日野原重明、阿部正和編；醫(yī)學(xué)書院；1995)中所述的所有疾病和病理癥狀。
在使用大鼠皮膚的開放式創(chuàng)傷的本實(shí)驗(yàn)中，靜脈內(nèi)連續(xù)給藥低劑量或低用量的人參皂甙Rb1顯著地促進(jìn)皮膚組織的再生和/或重構(gòu)。盡管在此不需重述，皮膚與其他器官和組織具有共同的組成要素，如表皮(復(fù)層扁平上皮)、結(jié)締組織、血管、神經(jīng)、分泌腺等。因此，本實(shí)驗(yàn)的事實(shí)，即連續(xù)靜脈內(nèi)給用低劑量或低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1顯著地促進(jìn)皮膚組織的再生和/重建說明，它也能促進(jìn)其他器官和組織(例如，肝臟、腎臟、消化道、消化管、胰臟、肌肉組織、呼吸器官、感覺器官、尿殖器官、內(nèi)分泌器官、角膜、粘膜、口腔粘膜、神經(jīng)組織等)的再生和/或重構(gòu)。即，在肝部分切除后，或在諸如擠壓綜合癥、急性腎小管壞死、急性腎衰竭、肝炎、腎炎、胰臟部分切除、胃潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、角膜損傷、角膜糜爛、角膜潰瘍、口腔炎、口瘡性口炎、口腔粘膜損傷、鼓膜損傷等病理情況下，為促進(jìn)所述的器官的再生或重構(gòu)，靜脈內(nèi)給用或局部給藥人參皂甙特別是人參皂甙Rb1看來是有效的。
本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果還說明，本發(fā)明的人參皂甙Rb1促進(jìn)血管的再生和/或重構(gòu)，外周神經(jīng)的再生，及因開放式創(chuàng)傷引起的在缺損皮膚部位中的毛囊、汗腺和皮脂腺的再生。按照這些結(jié)果，低劑量、低用量或低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以用作主要癥狀為血流障礙的疾病(主動(dòng)脈炎綜合癥，外周動(dòng)脈閉塞癥，閉塞性血栓血管炎，閉塞性動(dòng)脈硬化癥，雷諾氏病，雷諾氏綜合癥，心絞痛，心肌梗塞，肺動(dòng)脈栓塞，腦梗塞，肝，腎和心的局部缺血再灌流損害，腦血管障礙(疾病)、褥瘡、痔疾、煙霧陰影癥等)的預(yù)防、治療、處置劑，毛發(fā)恢復(fù)劑或毛發(fā)營養(yǎng)劑、預(yù)防脫毛發(fā)展的藥劑、脫毛(斑禿、雄性脫發(fā)、男性型脫毛癥和慢性脫毛癥)的治療或處置劑、或外周神經(jīng)障礙(疾病)和神經(jīng)痛的預(yù)防、治療或處置劑。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)說明，含有低劑量、低用量或低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其鹽、用于靜脈內(nèi)給藥的制劑通過優(yōu)良的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用或皮膚組織再生或重構(gòu)促進(jìn)作用，可用于處置、預(yù)防或治療由皮膚損傷引起的疾病、創(chuàng)傷(切開創(chuàng)傷或開放式創(chuàng)傷)、外傷、外傷或缺損或引起皮膚的病理組織學(xué)變化的疾病。
本發(fā)明的低劑量、低用量或低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或它們的鹽是已知的人參的成分，并且是副作用極少的物質(zhì)。
我們考查了對(duì)皮膚外部給藥或局部給藥人參皂甙能否對(duì)具有皮膚組織缺損的疾病(褥瘡、皮膚潰瘍、灼傷、凍傷、放射線損傷、開放式創(chuàng)傷、紫外線損傷、電擊傷等)發(fā)揮作用和效能。為此，例如通過利用Wistar雄性大鼠(體重約300g)，在吸入麻醉的狀態(tài)下從動(dòng)物的背部剃毛后進(jìn)行直徑6mm的穿刺活檢，制作3處開放式創(chuàng)傷。其中，在兩個(gè)部位上每天涂布一次含有0.01重量％或0.001重量％人參皂甙Rb1的眼科用白凡士林(Propet)0.1g，在剩下的開放式創(chuàng)傷中，涂布等量的眼科用白凡士林。制作開放式創(chuàng)傷9天后，對(duì)包含創(chuàng)傷部位的皮膚進(jìn)行照相。另外，我們用同樣的方法考查了皮膚外用或局部涂布0.0001重量％、0.00001重量％或0.000001重量％人參皂甙Rb1的效果。照相之前剛剛對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)施了安樂死，照相后采集創(chuàng)傷部位，或采集創(chuàng)傷部位后進(jìn)行照相。此后，將創(chuàng)傷部位組織保存在固定液中。結(jié)果如圖5和圖6所示。圖5和圖6是代替圖的照片。
在圖5中，從上面數(shù)第一個(gè)創(chuàng)傷是在制作了開放式創(chuàng)傷后僅外部施用(外部涂布)了propet的情況，顯示了明顯的紅色創(chuàng)傷(在照片中的黑色開放式創(chuàng)傷)。圖5中，從上面數(shù)第二個(gè)創(chuàng)傷是外部涂布(皮膚外部給藥)含有0.001重量％的人參皂甙Rb1的propet的情況，并且開放式創(chuàng)傷面積與僅外部涂布或局部涂布了propet的第一個(gè)創(chuàng)傷相比，開放式創(chuàng)傷的面積略微減小。用含有0.01重量％人參皂甙Rb1的propet進(jìn)行外部或局部涂布的第三個(gè)開放式創(chuàng)傷顯示與作為對(duì)照的第一個(gè)創(chuàng)傷相比沒有差別。即，含有0.01重量％人參皂甙Rb1的propet(即，含有100μg/g軟膏基質(zhì))即使涂布在開放式創(chuàng)傷上后，也沒有顯著地促進(jìn)皮膚組織的再生和/或重構(gòu)，因此，創(chuàng)傷的治愈沒有顯著地進(jìn)行，結(jié)果其可能不會(huì)抑制瘢痕的形成。
如圖6所示，從上面數(shù)的第二個(gè)和第三個(gè)，含有0.00001重量％(10-5重量％)或0.000001重量％(10-6重量％)人參皂甙Rb1的propet與含有0.0001重量％人參皂甙Rb1的propet相比具有優(yōu)良的效果。這說明含有低濃度人參皂甙或基本上由低濃度的人參皂甙Rb1組成的皮膚外用或局部涂布劑在外部涂布或外部噴霧到開放式創(chuàng)傷上時(shí)，可以獲得與靜脈內(nèi)連續(xù)給藥低劑量或低用量的人參皂甙Rb1幾乎一樣的作用和效果。另外，皮膚外用給藥0.000001重量％人參皂甙Rb1的結(jié)果是，從再生的開放式創(chuàng)傷上觀察到明顯的毛發(fā)恢復(fù)或毛發(fā)生長。即，如本發(fā)明所詳細(xì)說明的，與靜脈內(nèi)連續(xù)給藥低劑量或低用量的人參皂甙Rb1的作用、效能和用途有關(guān)的事項(xiàng)大部分可以適用于在病變部位局部給藥或外部給藥人參皂甙Rb1。皮膚外用涂布低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1被認(rèn)為可促進(jìn)真皮的表皮組織、結(jié)締組織，真皮乳頭，血管，皮脂腺，神經(jīng)，汗腺，毛乳頭，立毛肌，毛囊等的再生和/或重構(gòu)，并促進(jìn)創(chuàng)傷治愈。就我們所知，皮膚外用給藥或皮膚局部給藥人參皂甙Rb1的效果遠(yuǎn)比肽生長因子(PDGF、EGF和bFGF)的效果優(yōu)越。本實(shí)驗(yàn)中使用的含有低濃度人參皂甙Rb1的外用或局部給藥的軟膏或藥劑不僅可通過外用或局部給用于皮膚，而且可用于所有受損傷或發(fā)生病理組織學(xué)變化的器官和組織(角膜、口腔、外耳、鼓膜、陰道、子宮、尿道、直腸、肛門等)，以促進(jìn)病變組織的再生或重構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的混合量是每10g proet中0.1mg或更少、優(yōu)選0.0001mg或更少。即，患有皮膚疾病的人或脊椎動(dòng)物使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1皮膚外部給藥量盡管取決于個(gè)人的差異或疾病狀況，但遠(yuǎn)較先前考慮的要小。在本實(shí)驗(yàn)中，高濃度的人參皂甙Rb1(0.0001重量％或更高)的效果因動(dòng)物而分散或隨動(dòng)物不同而各不相同。在大鼠中，即使向開放式創(chuàng)傷外部給用或局部給用0.001重量％至0.0001重量％的高濃度人參皂甙Rb1，由于動(dòng)物經(jīng)常舔開放式創(chuàng)傷，結(jié)果是開放式創(chuàng)傷部位的人參皂甙Rb1的濃度降低，有時(shí)看起來獲得優(yōu)選的結(jié)果。但是，由于人很少舔開放式創(chuàng)傷，為促進(jìn)創(chuàng)傷治愈，優(yōu)選對(duì)人外部給用或局部給用更低濃度的人參皂甙Rb1(例如，濃度小于0.00002重量％)。
如上所述，皮膚外涂布低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1促進(jìn)皮膚的表皮組織、結(jié)締組織、真皮乳頭、皮下組織、血管、立毛肌、皮脂腺、汗腺、毛乳頭、毛囊等的再生和/或重構(gòu)這樣一個(gè)事實(shí)很自然地證明，皮膚外涂布人參皂甙Rb1還促進(jìn)表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、黑素細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、真皮和皮下組織中的成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、間葉細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞等的再生和/或重構(gòu)。即。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1被認(rèn)為促進(jìn)構(gòu)成皮膚組織的所有細(xì)胞及其分泌物的再生和/或重構(gòu)。另一方面，伴隨老齡的各種皮膚癥狀(皮膚收縮或萎縮、感染易損性、易受感染、松弛、皮膚萎縮、瘙癢、粗糙、龜裂、皮脂缺乏、皮脂分泌減少、角質(zhì)化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞和角質(zhì)層的脫落、皺裂、雀斑、脫毛、白發(fā)、頭屑、色素沉著、曬斑、干燥皮膚等)被認(rèn)為是由于上述的皮膚組織構(gòu)成細(xì)胞的逐漸死亡或機(jī)能障礙而發(fā)生的，這些細(xì)胞的漸進(jìn)死亡或機(jī)能障礙由紫外線或生理老化損害引起，并且不可能再生到原來的健康的狀態(tài)。例如，伴隨老齡和老化的皮膚粗糙、皮膚干燥、脫落、禿頭癥、龜裂、角質(zhì)細(xì)胞和角質(zhì)層的脫落、裂紋、皸裂、皺裂、皮脂分泌減少、皮脂缺乏、瘙癢等被認(rèn)為是由于皮膚的汗腺、毛囊和皮脂腺中的細(xì)胞的功能障礙或死亡后缺少再生而產(chǎn)生的。另外，曬斑、色素沉著、雀斑等可能由于缺乏皮膚細(xì)胞再生到原來狀態(tài)，甚至被日光或紫外線照射的皮膚細(xì)胞發(fā)生死亡等而引起的。另外，可以說皮膚的皺紋、松弛、皺紋、松弛、收縮、萎縮等是由于真皮和皮下組織的成纖維細(xì)胞或間葉細(xì)胞隨老齡發(fā)生機(jī)能障礙或數(shù)目減少，以及真皮或皮下組織不能保持足夠的膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維或細(xì)胞外基質(zhì)而發(fā)生。白發(fā)癥、灰發(fā)和易受感染性可能由于黑素細(xì)胞或朗氏細(xì)胞的機(jī)能障礙而產(chǎn)生的。
由于低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1能夠促進(jìn)構(gòu)成皮膚組織的所有細(xì)胞的再生和/或重構(gòu)，如果將其用作化妝品組合物，可以預(yù)防、減少或改善由皮膚的構(gòu)成細(xì)胞的減少(細(xì)胞死亡)和/或伴隨老齡的細(xì)胞機(jī)能障礙(皮膚的收縮或萎縮、易受感染性、感染的易損性、松弛、龜裂、瘙癢、裂紋、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞或角質(zhì)化細(xì)胞的脫落、角質(zhì)層的脫落、皺紋、雀斑、皺紋、灰發(fā)、頭屑、脫毛、色素沉著、再生不充分、曬斑、發(fā)育不全、干燥等)引起的各種癥狀。另外，按照本發(fā)明人(阪中和田中)在先的專利申請(qǐng)(日本專利申請(qǐng)?zhí)柶?0-365560、PCT/JP99/02550，“含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑”；和PCT/JP00/04102，“含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑”)的描述，人參皂甙Rb1被認(rèn)為增加細(xì)胞死亡抑制基因產(chǎn)物BcL-xL的表達(dá)，并保護(hù)所有的皮膚細(xì)胞，包括表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等；因此，可以預(yù)先防止與老齡和老化伴隨的皮膚構(gòu)成細(xì)胞的死亡和機(jī)能障礙。如上所述，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1能夠保護(hù)所有的皮膚構(gòu)成細(xì)胞，即使一旦皮膚細(xì)胞趨于死亡或陷于機(jī)能障礙，也可以通過由人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1再生皮膚細(xì)胞以預(yù)防、改善或減少伴隨老齡的皮膚老化癥狀(皮膚的收縮、萎縮、感染的易損性、易受感染性、松弛、瘙癢、龜裂、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞或角質(zhì)化細(xì)胞的脫落、角質(zhì)層的脫落、皺裂、雀斑、皺紋、黃褐斑、灰發(fā)、白發(fā)癥、頭屑、脫毛、禿頭癥、色素沉著、曬斑、再生不好、再生不充分、發(fā)育不全、干燥等)。即，可以說人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過兩種強(qiáng)有力的作用防止、改善或減少伴隨老齡的老化癥狀，這兩種作用是細(xì)胞保護(hù)作用及組織和細(xì)胞再生促進(jìn)作用。另外，如本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和在先專利申請(qǐng)(日本專利申請(qǐng)?zhí)柶?0-365560、PCT/JP99/02550)所證明的，當(dāng)病變部位組織和/或皮膚組織的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低，優(yōu)選為10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更少時(shí)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1能夠表現(xiàn)細(xì)胞保護(hù)作用及組織和細(xì)胞再生促進(jìn)作用。另外，如下文的實(shí)施例所示，低濃度、低用量或低劑量的人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1能夠促進(jìn)粘膜組織的再生和/或重構(gòu)，并治愈口腔粘膜的咬傷。因此，向每種化妝品或促進(jìn)健康的藥物(美容洗劑(潤膚洗液)、乳液、美容液、按摩劑、包裝劑、乳劑、粉底霜、潤手霜、凝膠、洗劑、乳劑、粉劑、染發(fā)劑、修發(fā)劑、冷霜、眼影膏、潔面霜、潔面乳、晚霜、美白霜、錠劑、止咳糖、撲面粉、口紅、洗浴凝膠、美容香皂、健康飲料水、等滲性水、酒精水稀釋用冰、凍果汁露、冰激凌、酒精飲料、洗眼劑、眼藥水、清潔液、漱口劑、香波、洗發(fā)水、牙粉、牙膏、唇霜、化妝基底、UV打底液、粉底等)混入微量的人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1，并用來維持皮膚的局部區(qū)域或粘膜的局部區(qū)域中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度處于下文的低水平時(shí)，對(duì)伴隨老齡的皮膚和粘膜的老化癥狀(收縮、萎縮、感染易損性、易受感染性、松弛、瘙癢、裂開、裂紋、粗糙、再生不好、發(fā)育不全、上皮細(xì)胞脫落、粘膜脫落、皮脂分泌減少、皮脂缺乏、角化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞的脫落、角質(zhì)層的脫落、皺裂、雀斑、龜裂、皺紋、白發(fā)癥、灰發(fā)、頭屑、脫毛、禿頭癥、色素沉著、曬斑、干燥等)具有優(yōu)良的效果。例如，僅有伴隨老齡或老化的皮膚脂類分泌缺陷(即皮脂缺乏或皮脂分泌減少)引起粗糙、龜裂、干燥、裂開、皸裂、瘙癢、角化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞的脫落等，但由于施用含有低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的各種化妝品，可以促進(jìn)皮脂腺的保護(hù)或再生和重構(gòu)，并因此防止、改善或減少伴隨老齡的皮膚老化癥狀。由于任何含有低濃度人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的化妝品不僅保護(hù)表皮細(xì)胞(角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞)或表皮角化細(xì)胞，而且促進(jìn)它們的再生，通過人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1對(duì)細(xì)胞內(nèi)脂類(即，角質(zhì)層中角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞間的脂類)和天然保濕因子的產(chǎn)生和分泌的促進(jìn)作用，皮膚的干燥和粗糙可以被抑制從而為皮膚提供天然濕度。另外，在礦泉水中混合人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，人參的人參提取物或粗皂角甙級(jí)分，可使酒精飲料或高溫刺激引起的口腔粘膜或消化道粘膜(特別是食管粘膜)的損傷被改善、防止或處置。通過將低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1與化學(xué)去皮全過程(化學(xué)去皮之前、之中和/或之后)中使用的一種或多種試劑或藥劑混合，可將其用作化學(xué)去皮組合物。關(guān)于本發(fā)明化妝品組合物，用于頭發(fā)修復(fù)、營養(yǎng)和生長的組合物，以及化學(xué)去皮組合物(人參、人參提取物、人參的粗皂甙級(jí)分、人參皂甙和人參皂甙衍生物))基質(zhì)的例子，有脂肪和油類、蠟、烴、脂肪酸、低級(jí)醇、高級(jí)醇、多元醇、酯、表面活性劑、水溶液性聚合物等。上述本發(fā)明的皮膚外用或局部施用組合物可與其他皮膚細(xì)胞活化劑、抗炎藥、活性氧清除劑、美白劑、紫外線吸收劑、防腐劑和殺菌劑、潤膚劑、天然產(chǎn)物萃取物和視黃酸中的任意一種或多種混合。
接下來，本發(fā)明人之一(阪中)本人確認(rèn)了含有低濃度人參皂甙Rb1的propet對(duì)于口腔粘膜的咬傷是否有效。在2000年5月2日，牙科治療后的約下午2點(diǎn)，在三叉神經(jīng)的左第三分枝和牙周麻醉醒來之前，由于很餓阪中開始吃午飯。他咬了自己的左唇粘膜三次，由于感到口腔中有鐵腥味(血液)，使用鏡子確認(rèn)其咬傷的結(jié)果是，他發(fā)現(xiàn)了至少五個(gè)口腔粘膜的糜爛或缺損區(qū)，在一個(gè)點(diǎn)上發(fā)現(xiàn)了另外的血囊腫或血腫。由于他斷定如果讓它(即口腔粘膜的咬傷)按照原樣放置數(shù)日，將并發(fā)口瘡性口腔炎，需要1周至10天才完全治愈，將少量通過本發(fā)明人的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已確認(rèn)具有效果和效能的、含有低濃度(0.00001重量％)人參皂甙Rb1的propet涂布到有口腔粘膜糜爛或缺損的5個(gè)部位上及一個(gè)血囊腫或血腫部位。飯前和飯后以及在飯間吃飯前后進(jìn)行外部涂布或局部涂布。盡可能多地在刷牙后進(jìn)行外部涂布或局部涂布。即，在嘴唇粘膜的咬傷部位上外部涂布或局部涂布含有0.00001重量％人參皂甙Rb1的propet每天6-10次。咬傷后96小時(shí)時(shí)嘴唇粘膜的照片如圖7所示。圖7是代替圖的照片。
如圖7的照片所示，盡管在咬傷后96小時(shí)時(shí)，如白箭頭所示，仍有血囊腫或血腫，但是如黑箭頭所示的嘴唇粘膜的咬傷部位(即，糜爛或缺損的口腔粘膜)僅有輕微地發(fā)紅并發(fā)展了完全的上皮化，并且創(chuàng)傷被認(rèn)為明顯治愈。另外，在咬傷部位上外部涂布或局部涂布含有0.00001重量％人參皂甙Rb1的propet后，創(chuàng)傷部位的疼痛明顯減輕。向口腔粘膜外部涂布或局部涂布低濃度人參皂甙Rb1的結(jié)果是，由于被咬傷切斷的末梢神經(jīng)迅速地與上皮化協(xié)調(diào)一致地再生，疼痛被減輕。按照本發(fā)明人的經(jīng)驗(yàn)，盡管治愈這樣的傷需要至少7-10天，但通過外部給用或局部給用低濃度的人參皂甙Rb1，嘴唇粘膜組織迅速地再生及重構(gòu)，且在96小時(shí)內(nèi)顯著地促進(jìn)咬傷(創(chuàng)傷)治愈。另外，在這種情況下咬傷后沒有觀察到并發(fā)口瘡性口腔炎?？梢酝ㄟ^在病變部位每天1-10次地局部給用含有人參皂甙特別是人參皂甙的外用藥劑可預(yù)計(jì)到對(duì)粘膜病變的效果。
一般來說，地塞米松(dexaltin)軟膏等的類固醇藥劑通常在臨床上用于處置口瘡性口炎，但眾所周知，盡管類固醇藥劑可以緩解口瘡性口炎的疼痛，但其具有副作用，使得組織的有缺損部位的創(chuàng)傷治愈或治愈被延遲。另外，考慮到并發(fā)感染，外部給用或局部給用對(duì)存在各種微生物的口腔粘膜病變具有免疫抑制作用的類固醇藥劑通常是不優(yōu)選的。
另一方面，由于粘膜外部給用低濃度的人參皂甙Rb1促進(jìn)創(chuàng)傷治愈和上皮形成，還促進(jìn)粘膜病變中末梢神經(jīng)的再生，被認(rèn)為是比粘膜外或局部給用類固醇藥劑更優(yōu)良的治療方法。另外，由于低濃度的人參皂甙Rb1沒有顯示免疫抑制作用，因此可以將其稱為一種極為安全的醫(yī)藥組合物。預(yù)期可利用低濃度的人參皂甙Rb1作為治療口瘡性口炎的藥物的第一選擇。
下面，本發(fā)明的發(fā)明人之一(阪中)在2000年5月26日午飯時(shí)再次咬了左下嘴唇粘膜，并向咬傷的部位局部或外部涂布了含有0.00001重量％人參皂甙Rb1的propet。咬傷后立即拍攝的照片如圖8的左邊所示，咬傷后72小時(shí)時(shí)拍攝的照片如圖8的右邊所示。圖8顯示了代替圖的照片。
如圖8所示，在粘膜上外部或局部涂布低濃度的人參皂甙Rb1時(shí)，發(fā)現(xiàn)咬傷迅速地治愈且沒有并發(fā)口瘡性口炎。因此，低濃度的人參皂甙Rb1不僅能夠促進(jìn)皮膚組織，而且能促進(jìn)粘膜組織如人口腔粘膜的再生和/或重構(gòu)，而且能夠迅速地促進(jìn)創(chuàng)傷治愈?；谶@樣的事實(shí)?？梢哉f低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用，對(duì)引起包括口腔粘膜的粘膜或口腔內(nèi)組織的病理組織學(xué)變化的所有疾病和病理狀態(tài)具有效果和效能。這些疾病的例子有齲齒、牙髓炎、牙周病、邊緣性牙周炎、口腔炎、舌炎、復(fù)發(fā)性口瘡、口內(nèi)口瘡、口臭、口腔異味、口腔觸物感痛、牙原性感染、口腔粘膜咬傷、舌咬傷、口腔灼燒、舌灼燒、口腔粘膜損傷、齒齦炎、牙槽膿溢、卡他性口炎、壞疽性口炎、文森特(Vincent)口炎、口瘡性口炎、急性皰疹性齦口炎、皰疹性咽峽炎、帶狀皰疹、口腔粘膜糜爛、口腔粘膜潰瘍、褥瘡、放射性口炎、天皰瘡、口腔念珠菌病、扁平苔癬、雷弗病(Riga-Fededisease)、光舌、紅平舌、角膜腐蝕、角膜潰瘍、干眼病、斯約格林綜合癥(Sjgren’s syndrome)等。
外部或局部施用低濃度的人參皂甙Rb1對(duì)口腔粘膜咬傷有效的這樣一個(gè)事實(shí)支持人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1促進(jìn)口腔粘膜的再生或重構(gòu)，所述的口腔粘膜包括粘膜表皮、固有層、唾腺、粘液腺、混合腺、結(jié)締組織、肌肉組織、血管、外周神經(jīng)、上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、膠原纖維、彈性纖維或網(wǎng)狀纖維。
通過不僅向口腔粘膜、而且向消化管粘膜、鼻粘膜、眼粘膜(結(jié)膜和角膜)、陰道粘膜、子宮粘膜、尿道粘膜、膀胱粘膜、氣管和支氣管粘膜，將含有低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的粘膜外用劑或粘膜局部用劑，對(duì)引起這些粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病具有顯著的效果和效能。特別地，外部給用或局部給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1對(duì)于粘膜的創(chuàng)傷、灼燒、炎癥、糜爛、潰瘍、缺損、花粉病或春季結(jié)膜炎是用的。另外，粘膜外用或粘膜局部用的、含有低濃度人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的藥劑可以用作保健藥物，用于預(yù)防、改善或處置粘膜的老化癥狀(萎縮、收縮、上皮剝離、粘膜脫落或再生不完全或不良、龜裂、皸裂、裂開、干燥等)。另外，如上所述的低濃度人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的作用、效能和用途可以適用于人參的粗皂角甙級(jí)分、人參提取物或人參。當(dāng)然，如上所述的人參皂甙Rb1的作用、效能和用途與下文將要描述的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的作用、效能和用途有共同之處。
接下來，我們考查了人參皂甙特別是人參皂甙Rb1能否不僅促進(jìn)皮膚組織或口腔粘膜組織，而且可促進(jìn)植物組織的新生、再生或重構(gòu)。為此，選擇了一種葉子植物—黃金葛。在本發(fā)明人之一(田中)房間中從黃金葛上采集六個(gè)相似的插條。其中，3個(gè)插條僅用水進(jìn)行水培養(yǎng)，其余的3個(gè)插條在含有濃度為100fg/ml人參皂甙Rb1的水中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)第13日的插條的照片如圖9所示。圖9是代替圖的照片。
圖9照片的左側(cè)是僅用水培養(yǎng)的插條(黃金葛的莖和枝)，圖9照片的右側(cè)是能含有濃度為100fg/ml人參皂甙Rb1的水進(jìn)行培養(yǎng)的插條。在用含有低濃度人參皂甙Rb1(100fg/ml)的水對(duì)黃金葛進(jìn)行水培養(yǎng)時(shí)，根的生長被促進(jìn)。
然后，我們進(jìn)一步用水培養(yǎng)上述插條，在第22天，再次拍照。結(jié)果如圖10所示。圖10是代替圖的照片。圖10的左側(cè)為僅用水培養(yǎng)了22天的黃金葛的插條的照片，圖10的右側(cè)是用含有低濃度的人參皂甙Rb1(100fg/ml)的水培養(yǎng)的插條的照片。含有或不含有人參皂甙Rb1的水栽用水一周更換一次。我們進(jìn)一步觀察了第27天時(shí)的生根部位。
如圖10所示，當(dāng)用含有低濃度的人參皂甙Rb1(100fg/ml)的水培養(yǎng)插條22天時(shí)，與僅用水培養(yǎng)的黃金葛相比，新生或再生的多條根接觸到用于水栽培的玻璃容器。另外，在第27天，明顯觀察到在用含有低濃度的人參皂甙Rb1(100fg/ml)的水培養(yǎng)的黃金葛的三條插條上從初生根部位上產(chǎn)生了次生根。但是，在僅用水培養(yǎng)的三條黃金葛插條上沒有觀察到次生根。因此，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明了低濃度、低用量和/或低劑量的人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1不僅促進(jìn)皮膚組織和人的口腔粘膜組織，而且促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、生長、分化、新生、再生或重構(gòu)。
后來，我們考查了人參的粗皂角甙級(jí)分能否象低濃度的人參皂甙Rb1那樣促進(jìn)黃金葛插條的新生、再生或重構(gòu)。為此，從黃金葛的母體植物上取兩條相同的插條。其中的一條插條僅用水培養(yǎng)，剩余的一條用含有濃度為1450fg/ml的人參的粗皂角甙級(jí)分的水培養(yǎng)。培養(yǎng)第14天插條的照片如圖11所示。圖11為代替圖的照片。圖11的照片左側(cè)是僅用水培養(yǎng)的插條，圖11的照片右側(cè)是用含有人參的粗皂角甙級(jí)分(1450fg/ml)的水培養(yǎng)的插條。在用含有低濃度的人參的粗皂角甙級(jí)分(1450fg/ml)水培養(yǎng)黃金葛的插條時(shí)，根的新生、再生或生長(即生根)被促進(jìn)。即，粗皂角甙級(jí)分與人參皂甙Rb1一樣促進(jìn)植物組織的新生、再生或重構(gòu)。很自然，含有粗皂角甙的人參提取物和人參也具有相同的作用。即，可以說人參、人參提取物、人參的粗皂角甙和人參皂甙特別是人參皂甙Rb1能夠促進(jìn)所有活體組織(動(dòng)物和植物組織)的再生、新生和重構(gòu)。
如上面的實(shí)驗(yàn)所證明的，當(dāng)植物組織如黃金葛的插條在含有100fg/ml人參皂甙Rb1或1450fg/ml粗皂角甙的水溶液中培養(yǎng)時(shí)，與對(duì)照插條相比，明顯地促進(jìn)了根的新生。因此，如上所述，含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、或人參皂角甙的人參提取物或人參能夠不僅能夠促進(jìn)動(dòng)物組織、而且能夠促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、生長、分化、新生、再生或重構(gòu)。
另外，發(fā)現(xiàn)能夠促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、生長、分化、新生、再生或重構(gòu)的人參皂甙Rb1或粗皂角甙級(jí)分的細(xì)胞外液濃度與動(dòng)物組織(皮膚組織和口腔粘膜組織)的再生和重構(gòu)的情況一樣，也極低。因此，人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分和人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以用于植物的栽培、生長或保存；鮮花的保鮮、栽培或生長；水栽培；溶液栽培；農(nóng)作物的栽培或生長；蔬菜的栽培和生長；水果的栽培或生長、馬鈴薯的栽培和生長；菌類的栽培；藥用植物的栽培；或茶葉的栽培和生長。含有上述的人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分和/或人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1的生根、發(fā)芽、生長或分化促進(jìn)劑或肥料添加劑可以混合入或加入任何肥料中，優(yōu)選以低濃度加入；或可以獨(dú)立用作植物組織的生根、發(fā)芽、分化、再生、重構(gòu)、新生或生長促進(jìn)劑。當(dāng)然，如上所述，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，可以與人參皂甙Rb1相同的方式促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、新生、生長、再生、分化或重構(gòu)，并且可以如上所述用于農(nóng)作物、植物或蔬菜的栽培、生長和保存。
人參皂甙特別是人參皂甙Rb1和人參的粗皂角甙級(jí)分不僅能夠促進(jìn)動(dòng)物組織(皮膚組織和口腔粘膜組織)，而且能夠促進(jìn)植物的生根、發(fā)芽、分化、生長、新生、再生或重構(gòu)的這樣一個(gè)事實(shí)說明，人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分和人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1可促進(jìn)所有活體組織的生根、發(fā)芽、分化、生長、新生、再生或重構(gòu)。因此，人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分和人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1可以用作家畜、養(yǎng)殖的魚貝類、寵物的飼料添加劑。例如，在養(yǎng)殖魚和貝類、甲殼類、鰻魚、珍珠貝、海鰻等時(shí)，將人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分和/或人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1與常用的飼料一起加入海水或淡水中被認(rèn)為可以促進(jìn)這些水產(chǎn)資源或海產(chǎn)資源的生長。當(dāng)然，人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分和人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1通過其細(xì)胞保護(hù)作用，能夠保護(hù)魚和貝類、甲殼類、鰻魚、海鰻等海產(chǎn)免受外傷、創(chuàng)傷、病原微生物、生物危害、內(nèi)分泌攪亂物質(zhì)、環(huán)境污染、毒素等。即，本發(fā)明的飼料添加劑對(duì)于使人類擺脫即將到來的糧食危機(jī)是必要的。粗皂角甙級(jí)分促進(jìn)植物組織的再生、新生或重構(gòu)的這樣一個(gè)事實(shí)支持含有低濃度粗皂角甙或粗皂角甙級(jí)分的人參提取物或人參通過促進(jìn)皮膚組織或口腔粘膜的再生或重構(gòu)，可以用作化妝品組合物、保健藥物、獸醫(yī)藥組合物或醫(yī)藥組合物。當(dāng)然，如上所述，人參皂甙衍生物，特別是二氫人參皂甙Rb1，可以與人參皂甙Rb1同樣的方式用作上述水產(chǎn)資源或海產(chǎn)資源的生長促進(jìn)劑。
在上述的口腔粘膜咬傷的情況下，發(fā)明人(阪中)顯示了外部涂布或局部每天6-10次涂布含有0.00001重量％(10-5重量％)人參皂甙Rb1的propet，迅速地再生和重構(gòu)口腔粘膜組織和治愈創(chuàng)傷，以及預(yù)先防止了口瘡性口炎。但是很自然地，即使含有0.00001重量％(10-5重量％)人參皂甙Rb1的propet外部涂布或局部涂布到口腔粘膜咬傷部位上，因此可以估計(jì)咬傷部位附近的人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度由于唾液的作用迅速下降。因此可以認(rèn)為含有0.00001重量％人參皂甙Rb1的propet即使大大稀釋，也可以顯著地促進(jìn)有咬傷的口腔粘膜組織的再生和/或重構(gòu)。即，可以估計(jì)人參皂甙Rb1在大大低于0.00001重量％的濃度下也具有效果和效能。因此，當(dāng)含有人參皂甙Rb1的外用劑或局部用劑涂布到皮膚創(chuàng)傷病變部位上時(shí)，由于在所述的外用劑或局部用劑中人參皂甙Rb1的濃度不認(rèn)為被大大地稀釋，可以優(yōu)選使用濃度低于0.00001重量％的人參皂甙Rb1。因此，本發(fā)明人考查了含有更低濃度的人參皂甙Rb1的propet外部涂布或局部涂布到如上所述的大鼠的開放式創(chuàng)傷時(shí)的效果。
在吸入麻醉狀態(tài)下在每只動(dòng)物的6個(gè)背部區(qū)域上施行直徑6mm的穿刺活檢，制作開放式創(chuàng)傷。之后，在每個(gè)創(chuàng)傷上外部涂布0.1g含有濃度分別為0.0001重量％(10-4重量％)、0.00001重量％(10-5重量％)、0.000001重量％(10-6重量％)、0.0000001重量％(10-7重量％)、0.00000001重量％(10-8重量％)人參皂甙Rb1的propet(眼科白凡士林)，一天一次，涂布9天。在對(duì)照動(dòng)物中僅用等量的propet外部或局部涂布。然后，通過麻醉施行安樂死后立即取下含有開放式創(chuàng)傷的皮膚并拍照。取下的皮膚組織保存在固定劑中。結(jié)果如圖12所示。圖12是代替圖的照片。
圖12的上段顯示了第一種情況；中段顯示了第二種情況；下段顯示了第三種情況。在每種情況中，在左側(cè)有三處創(chuàng)傷，右側(cè)有三處創(chuàng)傷，共有6處創(chuàng)傷痕跡。從左側(cè)的上部到左側(cè)的下部，顯示了10-4重量％、10-5重量％和10-6重量％的情況，從右側(cè)的上部到右側(cè)的下部，顯示了10-7重量％、10-8重量％、和0重量％(對(duì)照或僅有載體)的情況。
如圖12所示，即使當(dāng)含有濃度為10-6重量％至10-8重量％的人參皂甙Rb1(即，人參皂甙Rb1的濃度為10ng/g至100pg/g)的propet被外部涂布或局部涂布到開放式創(chuàng)傷上時(shí)，與僅用propet外部涂布或局部涂布開放式創(chuàng)傷相比，也顯著地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈。在外部施用低濃度的人參皂甙Rb1時(shí)，在創(chuàng)傷治愈部位明顯地觀察到了毛發(fā)生長。因此，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1用作皮膚外用劑或皮膚局部用劑時(shí)，外用劑或局部涂布劑中的濃度優(yōu)選設(shè)定為約10-8重量％或更低。因此，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、人參的粗皂角甙級(jí)分、人參的提取物或人參可用作毛發(fā)生長、毛發(fā)營養(yǎng)或育毛組合物、化學(xué)去皮組合物或化妝品組合物時(shí)，化妝品中的濃度應(yīng)設(shè)定為低于0.001重量％、優(yōu)選為0.00001重量％(10-5重量％)或更低、更優(yōu)選0.00000001重量％(10-8重量％)或更低。
在上述說明的實(shí)驗(yàn)例中，一個(gè)僅用propet外部涂布的開放式創(chuàng)傷區(qū)域(發(fā)紅區(qū))被設(shè)定為分母，用以濃度為10-4重量％至10-8重量％的人參皂甙Rb1外部涂布的開放式創(chuàng)傷區(qū)設(shè)定為分子，并計(jì)算出其比值。結(jié)果如圖13所示。在圖13中，n＝3和單星號(hào)(*)顯示了明顯的差別，P＜0.05，兩個(gè)星號(hào)(**)顯示了明顯的差別，P＜0.01。按照謝弗事后檢驗(yàn)(Scheffe’s post hoc test)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)。
如圖13所示，在開放式創(chuàng)傷上外部或局部施用低濃度的人參皂甙Rb1顯著地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈。特別地，外部或局部施用濃度為0.0000001重量％(10-7重量％)或更低的人參皂甙Rb1，即1ng/g或更低或1ng/ml或更低人參皂甙Rb1，顯著地減小了開放式創(chuàng)傷的這樣一個(gè)事實(shí)，強(qiáng)烈支持當(dāng)病變組織中人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低時(shí)，促進(jìn)了活體組織的新生、再生或重構(gòu)。
接下來，我們考查了人參皂甙衍生物能否象人參皂甙Rb1一樣，以低濃度、低用量或低劑量促進(jìn)組織再生和/或重構(gòu)。為此，我們選擇了二氫人參皂甙Rb1作為人參皂甙衍生物之一，并考查了所述化合物的創(chuàng)傷治愈作用。二氫人參皂甙Rb1的詳細(xì)情況在PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)的說明書中描述。在吸入麻醉狀態(tài)下在大鼠(n＝4)背部的5處進(jìn)行6mm的穿刺活檢，制作開放式創(chuàng)傷。其后，在各開放式創(chuàng)傷上外部或局部分別施用0.1g含有濃度分別為0.0001重量％(10-4重量％)、0.00001重量％(10-5重量％)、0.000001重量％(10-6重量％)、0.0000001重量％(10-7重量％)二氫人參皂甙Rb1的propet，一天一次，涂布9天。在對(duì)照動(dòng)物中僅用等量的propet涂布。然后，在通過麻醉施行安樂死后立即采集含有開放式創(chuàng)傷的皮膚并拍照。取下的皮膚組織保存在固定劑中。結(jié)果如圖14所示。圖14是代替圖的照片。在圖14中，顯示了四種情況，從上段，顯示了第一種情況、第二種情況、第三種情況和第四種情況。在每種情況中，在左側(cè)有2處創(chuàng)傷，右側(cè)有3處創(chuàng)傷，并有5個(gè)開放式創(chuàng)傷，從左側(cè)上部，顯示了10-4重量％和10-5重量％的情況；從右側(cè)上部，顯示了10-6重量％的情況、10-7重量％的情況和0重量％的情況(對(duì)照或僅有載體)。
如圖14所示，即使在開放式創(chuàng)傷上外部或局部涂布含有濃度為0.00001重量％(10-5重量％)至0.0000001重量％(10-7重量％)的二氫人參皂甙Rb1(即二氫人參皂甙的濃度為100μg/g)propet時(shí)，與僅用propet外部或局部涂布的開放式創(chuàng)傷相比，明顯地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈。在外部或局部給用低濃度的二氫人參皂甙Rb1時(shí)，在創(chuàng)傷治愈的部位明顯觀察到毛發(fā)生長。因此，人參皂甙衍生物，特別是二氫人參皂甙Rb1用作皮膚外用劑或皮膚局部用劑時(shí)，外用或局部用劑中的濃度認(rèn)為優(yōu)選設(shè)定為約0.0000001重量％(10-7重量％)或更低。因此，在人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也用作化妝品組合物時(shí)，化妝品或保健藥物中的濃度應(yīng)設(shè)定為低于0.001重量％的水平，優(yōu)選為0.00001重量％(10-5重量％)或更低，更優(yōu)選0.0000001重量％(10-7重量％)或更低。
在上述說明的實(shí)驗(yàn)例中，僅用propet(眼科白凡士林)外部涂布的開放式創(chuàng)傷區(qū)域被設(shè)定為分母，用以濃度為0.0001重量％(10-4重量％)至0.0000001重量％(10-8重量％)的二氫人參皂甙Rb1外部涂布的開放式創(chuàng)傷區(qū)設(shè)定為分子，并計(jì)算出其比值。結(jié)果如圖15所示。在圖15中，n＝4和星號(hào)(*)顯示了明顯的差別，P＜0.05。按照費(fèi)歇爾PLSD進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)。
如圖15所示，在開放式創(chuàng)傷上外部或局部施用濃度為0.00001重量％(10-5重量％)或更低的二氫人參皂甙Rb1促進(jìn)了皮膚組織的再生和/或重構(gòu)，并顯著地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈。特別地，外部或局部施用濃度為0.00001重量％(10-5重量％)或更低的二氫人參皂甙Rb1，即100ng/g或更低或100ng/ml或更低的二氫人參皂甙Rb1顯著地減小了開放式創(chuàng)傷的這樣一個(gè)事實(shí)，有力地支持當(dāng)病變部位中二氫人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度為100ng/ml或更低時(shí)，促進(jìn)了活體組織的新生、再生或重構(gòu)。
為確認(rèn)二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1具有相同的效果、效能和用途，我們使用了培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。
我們(阪中和田中)報(bào)告說當(dāng)培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞受到短時(shí)間的硝普鈉的作用時(shí)，引發(fā)神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡(Toku，K.等，J.Neurosci.Res.，53，415-425，1998)。使用該培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，我們已發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低的人參皂甙Rb1能抑制神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性死亡樣細(xì)胞死亡(日本專利申請(qǐng)平10-365560，含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)。我們使用同樣的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)考查了二氫人參皂甙Rb1的神經(jīng)保護(hù)作用。
使用胰島素EDTA，從妊娠17天的大鼠胎仔的大腦皮質(zhì)中分離神經(jīng)細(xì)胞，并接種到涂有聚左旋賴氨酸的24孔板中。在含有10％胎牛血清的Dulbecco氏改進(jìn)的伊氏培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)細(xì)胞16小時(shí)后，用含有胰島素、鐵傳遞蛋白等、用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基取代培養(yǎng)基，并培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞3或4天。在培養(yǎng)的第3或第4天，向神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基中加入濃度為300μm硝普鈉(SNP)并溫育10分鐘。然后，用含有二氫人參皂甙Rb1(0-1ng/ml)和牛血清白蛋白的伊氏(Eagle′s)極限必需培養(yǎng)基代替培養(yǎng)基。加入SNP16小時(shí)后，用Laemmli’s電泳用樣品緩沖液溶解神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)，并進(jìn)行聚丙烯酰胺電泳分析。將經(jīng)電泳的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到硝基纖維素膜后，利用神經(jīng)細(xì)胞特異的蛋白質(zhì)MAP2的抗體進(jìn)行免疫印跡(immunoblotting)。為定量神經(jīng)細(xì)胞的存活率，通過密度測定法分析免疫染色的MAP帶。結(jié)果如圖16和圖17所示。圖16是代替圖的照片。圖17中，n＝5且單星號(hào)(*)表示顯著的差別，P＜0.001，雙星號(hào)(**)表示顯著的差別，P＜0.0001。按照謝弗事后檢驗(yàn)(Scheffe’s post hoc test)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)試驗(yàn)。
作為參考，圖18顯示了二氫人參皂甙Rb1的NMR圖譜(400MHz，CD3OD)。
圖16是代替圖的照片，顯示了微管關(guān)聯(lián)蛋白2(MAP2)的免疫印跡的結(jié)果。左側(cè)的第一泳道表示培養(yǎng)的神經(jīng)元對(duì)照，顯示了清晰的MAP2帶(即，神經(jīng)元標(biāo)記的帶)。當(dāng)進(jìn)行SNP處理時(shí)，大量的神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡，并且從左數(shù)第二泳道中觀察到MAP2帶顯著被減弱。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入濃度為0.01fg/ml(泳道3)至1ng/ml(泳道7)的二氫人參皂甙Rb1時(shí)，由SNP引起的神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡被顯著地抑制，結(jié)果是，觀察到神經(jīng)元存活的標(biāo)記—強(qiáng)MAP2帶。
上述的MAP的免疫印跡實(shí)驗(yàn)重復(fù)了5次，并通過密度測量法分析結(jié)果(圖17)。如圖17所示，濃度為0.01fg/ml至1ng/ml的二氫人參皂甙Rb1明顯地抑制了神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡。即，濃度范圍稍寬于人參皂甙Rb1的二氫人參皂甙Rb1對(duì)細(xì)胞具有有利的作用，特別是對(duì)神經(jīng)細(xì)胞。因此，人參皂甙衍生物，特別是二氫人參皂甙Rb1，當(dāng)其在病變組織中的細(xì)胞外液濃度為100ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選0.0001ng/ml-100fg/ml時(shí)，通過抑制細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡，可以表現(xiàn)出優(yōu)良的細(xì)胞保護(hù)作用。通過謝弗的事后檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。*P＜0.001。**P＜0.0001。
從上述含有0.00001重量％(10-5重量％)二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑或局部涂布用劑表現(xiàn)出優(yōu)良的開放式創(chuàng)傷治愈作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以判斷出，當(dāng)在病變組織中的細(xì)胞外液濃度為100fg/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選0.0001fg/ml-100fg/ml時(shí)，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1對(duì)活體組織具有再生和重構(gòu)作用。
在上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，闡明了人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，以與人參皂甙Rb1相同的方式，表現(xiàn)出優(yōu)越的皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用、創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用和細(xì)胞保護(hù)作用。另外，在PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中發(fā)明了，連續(xù)靜脈內(nèi)給用低劑量或低用量的二氫人參皂甙Rb1，與人參皂甙Rb1的方式相同，對(duì)腦梗塞具有優(yōu)越的治療效果。因此，可以說人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，具有本發(fā)明和在先專利申請(qǐng)(PCT/JP99/02550、PCT/JP99/06804、PCT/JP00/04102)所描述的人參皂甙Rb1的全部效果、效能和用途。即，由于人參皂甙的衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1具有促進(jìn)活體組織的新生、再生、生長、生根、發(fā)芽、分化或重構(gòu)，故它們可用作(1)預(yù)防、治療、處置引起病理組織學(xué)變化的所有疾病(包括病理狀態(tài))的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物；(2)預(yù)防、改善、減輕和處置皮膚或粘膜的老化癥狀的化妝品組合物或健康藥物組合物；(3)農(nóng)產(chǎn)物、蔬菜、植物和鮮花的栽培、生長和保存的生長調(diào)節(jié)組合物或肥料添加劑；(4)保護(hù)、飼養(yǎng)海產(chǎn)資源、水產(chǎn)資源、家畜、養(yǎng)殖用魚和貝類的生長調(diào)節(jié)組合物或飼料添加劑；(5)預(yù)防、處置或治療引起細(xì)胞死亡的所有疾病的醫(yī)藥組合物。人參皂甙衍生物，特別是二氫人參皂甙Rb1，可以用作粘膜外用或粘膜局部施用的組合物、化妝品組合物、毛發(fā)生長、毛發(fā)營養(yǎng)或育發(fā)組合物、化學(xué)去皮組合物、醫(yī)藥組合物、保健藥物組合物、生長調(diào)節(jié)組合物、飼料添加劑、肥料添加劑、植物的生根、發(fā)芽、生長和/或分化促進(jìn)劑，與人參皂甙Rb1的方式相同。注意人參皂甙衍生物，特別是二氫人參皂甙Rb1以比人參皂甙Rb1可在更寬的濃度范圍對(duì)細(xì)胞、組織發(fā)揮有利的作用，前提是必須選擇適宜的劑量或用量。
另外，二氫人參皂甙Rb1促進(jìn)活體組織的再生和/或重構(gòu)的優(yōu)越作用的本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，通過利用人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1作為先導(dǎo)化合物，可以新制備出優(yōu)良的皮膚、粘膜疾病治療藥物、組織再生、新生、發(fā)根、發(fā)芽促進(jìn)劑。通過利用人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1(其合成方法目前還沒有確定)作為先導(dǎo)化合物，制備促進(jìn)組織再生和/或重構(gòu)的醫(yī)藥組合物的想法據(jù)我們所知還是沒有的。
在本發(fā)明中，發(fā)現(xiàn)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1促進(jìn)活體組織的再生和/或重構(gòu)。除此之外，在本明人(阪中)的在先專利申請(qǐng)中，發(fā)明了低濃度的人參皂甙Rb1通過BcL-xL表達(dá)增強(qiáng)作用表現(xiàn)出細(xì)胞保護(hù)作用(日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550)。另外，在本發(fā)明人(阪中和田中)的在先專利申請(qǐng)(日本專利申請(qǐng)平11-340850、PCT/JP99/06804)中，人參皂甙Rb1促進(jìn)腦血管的再生和/或重構(gòu)。另一方面，本發(fā)明人(阪中和田中)發(fā)明了前皂角甙(prosaposin)關(guān)聯(lián)肽以與人參皂甙Rb1相同的低濃度通過BcL-xL表達(dá)增強(qiáng)作用表現(xiàn)出細(xì)胞保護(hù)作用，即當(dāng)在病變部位的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml(5nM)或更低，優(yōu)選10pg/ml(5pM)或更低，更優(yōu)選100fg/ml(50fM)或更低時(shí)(日本專利申請(qǐng)平11-185155)。按照日本專利申請(qǐng)平11-185155所述，前皂角甙關(guān)聯(lián)肽是指由前皂角甙或具有特定共有氨基酸序列(共有序列)的細(xì)胞因子衍生得到的肽。因此，人參皂甙Rb1和前皂角甙關(guān)聯(lián)肽雖然化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，但效果、效能和用途類似。事實(shí)上，本發(fā)明人(阪中和田中)報(bào)道說，當(dāng)向腦血管閉塞后患有動(dòng)脈皮質(zhì)分支永久閉塞的大鼠(即腦梗塞大鼠)的腦室內(nèi)注入人參皂甙Rb1或前皂角甙關(guān)聯(lián)肽時(shí)，觀察到腦梗塞縮小效果和場所定位障礙改善的效果(Igase，K.等，J.Cereb.Blood Flow Metab.，19，298-306，1999；Zhang，B.等，J.Stroke Cerebrovasc.Dis.，7，1-9，1998)。從這些事實(shí)進(jìn)行判斷，很容易推斷出前皂角甙關(guān)聯(lián)肽與人參皂甙Rb1一樣，能夠促進(jìn)腦血管的再生和/或重構(gòu)。更具體地，前皂角甙關(guān)聯(lián)肽以與人參皂甙Rb1或同樣的低濃度，也可以促進(jìn)腦血管中內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)膜、中膜、外膜、結(jié)締組織、膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維或細(xì)胞外基質(zhì)的再生和/或重構(gòu)。這樣，基于人參皂甙Rb1和前皂角甙關(guān)聯(lián)肽在效果、效能和用途方面互相類似的這樣一個(gè)事實(shí)，前皂角甙關(guān)聯(lián)肽可能以與人參皂甙Rb1同樣的方式促進(jìn)活體組織的再生和/或重構(gòu)。
在先申請(qǐng)日本專利申請(qǐng)平11-185155中，發(fā)明了包括促紅細(xì)胞生成素的細(xì)胞因子在與前皂角甙關(guān)聯(lián)肽和人參皂甙Rb1同樣低濃度范圍下，促進(jìn)BcL-xL表達(dá)，并表現(xiàn)出細(xì)胞保護(hù)作用。另外，本發(fā)明人(阪中)發(fā)現(xiàn)，向患有大腦皮質(zhì)分支永久閉塞的大鼠(即腦梗塞大鼠)腦室內(nèi)，以與前皂角甙關(guān)聯(lián)肽和人參皂甙Rb1同樣的方式施用促紅細(xì)胞生成素，也表現(xiàn)腦梗塞減小和場所定向障礙改善的效果(Sadamoto，Y.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，253，26-32，1998)。因此，認(rèn)為促紅細(xì)胞生成素也促進(jìn)包括腦血管在內(nèi)的活體組織的再生和/或重構(gòu)。由于我們(阪中和田中)發(fā)現(xiàn)，腦室內(nèi)給用白介素3(IL-3)(一種菌落刺激因子)與促紅細(xì)胞生成素一樣保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞和促進(jìn)BcL-xL的表達(dá)(Wen，T.-C.等，J.Exp.Med.，188，635-649，1998)，類似地，估計(jì)IL-3也能以低摩爾濃度促進(jìn)組織的再生和/或重構(gòu)。如上所述，具有神經(jīng)保護(hù)作用的非肽因子(例如，人參皂甙Rb1、異卡巴西林(isocarbacycline)、前列腺素和異卡巴西林衍生物)或細(xì)胞因子和生長因子(例如，促紅細(xì)胞生成素、白介素3和前皂角甙關(guān)聯(lián)肽)估計(jì)能夠以低摩爾濃度促進(jìn)組織的再生和/或重構(gòu)。換句話說，通過腦室內(nèi)向患有腦局部缺血的動(dòng)物模型中注入具有腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的化合物(例如，人參皂甙、異卡巴西林、營養(yǎng)因子、前列腺素、類固醇、生長因子、增殖因子、前皂角甙關(guān)聯(lián)肽、細(xì)胞因子、趨化因子、肽因子、非肽化合物或它們代謝產(chǎn)物)，如上所述，被認(rèn)為以低摩爾濃度發(fā)揮組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用。關(guān)于通過腦室內(nèi)施用具有腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的具體化合物或生理活性化合物，可以舉出的是堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)、腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)、白介素6、TEI-7165(一種異卡巴西林)、雌二醇、谷氨酸拮抗劑、表皮生長因子(EGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、谷氨酸受體15R-異卡巴西林衍生物、前列腺素、15-脫氫-異卡巴西林衍生物等，但本明并不限于這些例子。異卡巴西林、前列腺素和15-脫氫-異卡巴西林衍生物的詳細(xì)情況見日本專利公開JP-A-11-222436、平11-228418、平11-228417、昭59-210044、平4-26654、昭61-197518、平2-167227、平8-20540、平8-20541和平8-40909。有關(guān)TEI-7165對(duì)患腦局部缺血的保護(hù)作用被本明人之一(阪中)公開(Matsuda，S.等，Brain Res.，769，321-328，1997)。即，上述的所有化合物都可通過組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用，用于預(yù)防、處置或治療引起組織病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病，當(dāng)其在病變部位的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低或0.5nM或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低或5pM或更低，更優(yōu)選0.01-100fg/ml或0.005-50fM，或1-1000fg/ml或0.5-5000fM時(shí)。
當(dāng)然，上述的所有化合物都具有與人參皂甙(包括人參皂甙Rb1)和二氫人參皂甙Rb1相同的效果、效能和用途。即，上述的化合物或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽產(chǎn)以與人參皂甙Rb1相同的方式，可用作預(yù)防、處置、改善或治療引起或延遲活體組織再生、新生、生根、發(fā)芽、生長、分化或重構(gòu)的疾病、病理狀態(tài)、癥狀或狀態(tài)的組合物、醫(yī)藥組合物、健康藥組合物、化妝品組合物、肥料添加劑、飼料添加劑或獸醫(yī)藥組合物。預(yù)期適用上述這些化合物的疾病、病理狀態(tài)、癥狀和或狀態(tài)可提及的例如，PCT/JP00/04102中所述的所有引起細(xì)胞死亡的疾病和病理狀態(tài)、本說明書所述的皮膚和粘膜的老化癥狀，和在水栽培中的植物如黃金葛的插條的生根、發(fā)芽和生長、或養(yǎng)殖魚和貝類的生長狀態(tài)。特別地，當(dāng)上述的化合物(醫(yī)藥組合物)用作皮膚外用劑或皮膚局部用劑，用于預(yù)防、治療或處置皮膚疾病如創(chuàng)傷、灼傷、褥瘡、皮膚潰瘍等時(shí)，由于所述化合物在病變部位的細(xì)胞外液濃度可以相對(duì)容易地控制，因此通過向病變部位組織通過外部或局部涂布或噴霧與皮膚外用劑混合的低濃度的化合物(0.001重量％或更低，優(yōu)選0.00001重量％或更低，更優(yōu)選0.0000001重量％或更低，更進(jìn)一步優(yōu)選0.000000001重量％)，可獲得優(yōu)良的效果。
以下將詳細(xì)說明本發(fā)明。
如上所述，本發(fā)明基本上是發(fā)現(xiàn)了人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，優(yōu)選以低濃度或低劑量使用時(shí)，具有對(duì)引起活體組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的預(yù)防、處置或治療具有優(yōu)良的作用。本發(fā)明的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，優(yōu)選以低濃度和低劑量使用，不僅能夠治愈引起活體組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病，而且能夠再生或重構(gòu)發(fā)生病理組織學(xué)變化的活體組織；例如如上所例示的皮膚損傷的情況，本發(fā)明的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，優(yōu)選以低濃度或低劑量使用，不僅能夠從活體組織外部遮斷受損部位從而保護(hù)體內(nèi)組織，而且能夠再生受損傷部位的每一組織并將每個(gè)再生的組織重構(gòu)到原始狀態(tài)，以及再生受損前的生理狀態(tài)。另外，本發(fā)明的特征是發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的應(yīng)用，優(yōu)選以低濃度和低劑量使用，可促進(jìn)引起活體組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的治愈。
本發(fā)明的另一個(gè)特征是通過使用低濃度、低用量或低劑量、優(yōu)選極低濃度、極低用量或極低劑量的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，發(fā)現(xiàn)了一種完全不同于人參皂甙的已知的常規(guī)作用的新作用。
本發(fā)明的再一個(gè)特征是通過腸胃外如靜脈內(nèi)、粘膜外用或皮膚外施用低濃度、低用量或低劑量、優(yōu)選極低濃度、極低用量或極低劑量的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們鹽。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供含有優(yōu)選低濃度、低用量和/或低劑量的人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，用于預(yù)防、處置或治療引起活體組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的新型醫(yī)藥組合物或新型獸醫(yī)藥組合物。
更具體地，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供新型的醫(yī)藥組合物或新型獸醫(yī)藥組合物，其通過再生和/或重構(gòu)所述的發(fā)生病理和組織學(xué)變化的組織，能夠處置或治愈具有由活體組織的損傷或缺損引起的病理組織學(xué)變化的疾病，或能夠防止活體組織可能引起此類變化并促進(jìn)這些疾病的治愈。
進(jìn)一步地，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供預(yù)防、處置或治療疾病的方法，包括將有效量的上述本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物施用給患有引起活體組織的病現(xiàn)組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的患者。
更具體地，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供預(yù)防、處置或治療疾病的新方法，包括將有效量的上述本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物施用到患有病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的患者，所述的器質(zhì)性疾病具有由活體組織的損傷或缺損等引起的病理組織學(xué)變化。該新方法通過再生和/或重構(gòu)所述發(fā)生病理組織學(xué)變化的組織而處置或治療具由活體組織的損傷或缺損等引起的病理學(xué)和組織學(xué)變化的疾病，另外，該方法也用于預(yù)防可能引起這樣的變化的活體組織的疾病，以及用于促進(jìn)這些疾病的治愈。
本發(fā)明的另外的目的是提供使用人參皂甙如人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們鹽，制備本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的器質(zhì)性疾病可以是活體組織的正常狀態(tài)被破壞的任何狀態(tài)。皮膚組織的疾病的例子有皮膚組織的創(chuàng)傷、灼傷、放射線損傷、凍傷、紫外線損傷、電擊傷、外作、皮膚潰瘍、褥瘡、外科手術(shù)后的各種創(chuàng)傷、電擊癥、外傷、接觸性皮炎、水皰性皮炎、特應(yīng)性皮炎、郁滯性(stagnation)皮炎、干皮癥、糖尿病性皮膚潰瘍、自體敏感性皮炎、紅皮癥、剝脫性皮炎、表皮水皰癥、光線過敏癥、著色慢性紫斑性皮炎(Schamberg病)、嬰兒苔癬、花粉癥、蟲咬、癢疹、多形性紅斑、環(huán)狀紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、天皰疹、類天皰疹、皰疹性皮炎、掌足膿皰癥、牛皮癬、扁平苔癬、魚鱗癬、毛發(fā)苔癬、黃瘤癥、皮膚淀粉樣變性、單純皰疹、病毒性疣、下垂性疣(molluscum pendulum)、傳染性軟屬腫、膿皮癥、皮膚結(jié)核、皮膚非定型抗酸菌癥、白癬、皮膚與口腔念珠菌癥、疥癬、毛虱癥、梅毒、瘢痕瘤、肥厚性瘢痕、血管腫、淋巴腫、痣、尋常性白斑、雀斑、黃褐斑、黑皮癥、汗皰疹、栗疹、尋常痤瘡、酒渣鼻、酒渣鼻樣皮炎、口腔粘膜損傷、口炎、口周皮炎、皮膚的老化癥狀(例如皮膚萎縮、皮膚皺縮或萎縮、易感染性、易受感染、松弛、松軟、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、斑點(diǎn)、皺紋、皺紋、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)、脫毛、禿頭癥、甲周炎、嵌甲等。
通過本發(fā)明的組合物促進(jìn)再生和/或重構(gòu)的皮膚或皮膚細(xì)胞包括表皮細(xì)胞、真皮、真皮乳頭、皮下組織、結(jié)締組織、毛乳頭、毛囊、立毛肌、皮脂腺、汗腺、末梢神經(jīng)、血管、表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、黑素細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等。
粘膜組織疾病的例子是引起粘膜組織的病理組織學(xué)變化的所有疾病和病理狀態(tài)，如由粘膜組織(包括口腔粘膜)的損傷、咬傷、創(chuàng)傷、燒傷、外傷性損傷、外傷或缺損引起的疾病，例如齲齒、牙髓炎、牙周病、邊緣性牙周炎、口腔炎、舌炎、復(fù)發(fā)性口瘡、口內(nèi)口瘡、口臭、口腔觸物感痛、牙原性感染、口腔粘膜咬傷、舌咬傷、口腔灼燒、舌灼燒、舌損傷、口腔粘膜損傷、齒齦炎、牙槽膿溢、卡他性口炎、壞疽性口炎、文森特口炎、口瘡性口炎、急性皰疹性齦口炎、皰疹性咽峽炎、帶狀皰疹、口腔粘膜糜爛、口腔粘膜潰瘍、褥瘡、放射性口炎、天皰瘡、口腔念珠菌病、扁平苔癬、雷弗病(Riga-Fede disease)、光舌、紅平舌、粘膜潰瘍、粘膜糜爛、白內(nèi)障、結(jié)膜糜爛、消化道粘膜糜爛、斯約格林綜合癥(Sjgren’s syndrome)，粘膜特別是口腔粘膜的老化癥狀(例如萎縮、粘膜脫落、龜裂、表皮脫落、再生不良、干燥)。廣義上來說，灼傷、褥瘡、皮膚潰瘍、凍傷、電擊傷等也屬創(chuàng)傷之列。但是，適合治療或處置這些疾病的藥劑或醫(yī)藥組合物各不相同。例如，在褥瘡或隱形眼鏡引起的角膜損傷中，由于皮膚或角膜的表皮細(xì)胞緩慢地發(fā)生編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡，因此預(yù)期所謂的細(xì)胞保護(hù)劑或抗編程性細(xì)胞死亡劑對(duì)這些疾病有效果和效能。但是，如果構(gòu)成活體組織的細(xì)胞由于創(chuàng)傷(例如，切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷、灼傷、咬傷等)立即脫落，則原則上應(yīng)使用組織再生和重構(gòu)促進(jìn)劑而不是細(xì)胞保護(hù)劑。創(chuàng)傷周邊發(fā)生編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡時(shí)，細(xì)胞保護(hù)劑或抗編程性細(xì)胞死亡劑可以用于防止創(chuàng)傷病變的擴(kuò)展和惡化。
本發(fā)明器質(zhì)性疾病的例子不限于上述皮膚組織和粘膜組織，也包括引起其他所有組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病，這些組織包括例如中樞神經(jīng)組織、肝臟、腎臟、脾臟、造血組織、消化道、肺、胰臟、角膜、內(nèi)分泌腺、外分泌腺、唾液腺、性腺、膀胱等組織。這些疾病的例子，例如肝炎、肝切除和肝局部缺血和再灌注后的肝組織的創(chuàng)傷和疾病，神經(jīng)外傷(頭外傷，脊髓損傷)后的中樞神經(jīng)的疾病，切斷指，趾的疾病，腎炎，急性尿道壞死后的腎組織疾病，脾臟的疾病，胰臟的疾病，肺切除后的器官疾病，移植骨髓的再生和植入，白內(nèi)障，鼓膜損傷，角膜損傷，角膜糜爛，角膜潰瘍，指甲損傷，消化性潰瘍，外科手術(shù)(胸、腹部外科手術(shù)、整形外科手術(shù)、成形外科手術(shù)、美容外科手術(shù)、產(chǎn)婦外科手術(shù)、泌尿系手術(shù)、眼科手術(shù)、頭頸部外科手術(shù)、牙科口腔外科手術(shù)、耳鼻喉科手術(shù)、獸醫(yī)學(xué)手術(shù)、腦神經(jīng)外科手術(shù)等)的創(chuàng)傷和疾病。
另外，在皮膚的開放式創(chuàng)傷(缺損)中，盡管分布在有缺損皮膚區(qū)域的末梢神經(jīng)和血管被破壞和切斷，但這些末梢神經(jīng)和血管通過靜脈內(nèi)給用或皮膚外用人參皂甙Rb1可以迅速再生、重構(gòu)、恢復(fù)和修復(fù)到原始的健康狀態(tài)。因此，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以用作促進(jìn)神經(jīng)組織和血管組織的再生和/或重構(gòu)的醫(yī)藥組合物。即，對(duì)于糖尿病性神經(jīng)病、椎間盤突出、脊柱管狹窄癥、椎關(guān)節(jié)強(qiáng)硬、脊椎滑脫癥、頸椎病、脊椎病性脊髓癥、脊椎病性神經(jīng)根病、后縱肌骨化癥、顏面神經(jīng)麻痹、脊髓損傷、末稍神經(jīng)疾病、壓通性神經(jīng)病、頭外傷、神經(jīng)外傷、神經(jīng)痛、神經(jīng)變性疾病、末梢神經(jīng)麻痹、腦中風(fēng)的任何一種病理狀態(tài)，通過靜脈內(nèi)給用、局部給用、點(diǎn)鼻給用、直腸給用等可以對(duì)促進(jìn)一次受損的神經(jīng)組織的再生和/或重構(gòu)發(fā)揮效果和效能。另一方面，通過血管的再生和/或重構(gòu)促進(jìn)作用，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1對(duì)以血流障礙或失調(diào)為主要病狀的疾病(主動(dòng)脈炎綜合癥、膠原病、末梢動(dòng)脈閉塞癥、閉塞性血栓血管炎、閉塞性動(dòng)脈硬化癥、血栓性靜脈炎、糖尿病性皮膚潰瘍、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、視網(wǎng)膜中心動(dòng)脈閉塞癥、雷諾氏病、雷諾氏綜合癥、心肌梗塞、褥瘡、痔瘡、肛周炎、骨壞死、骨端癥、末梢循環(huán)不全、狹心癥、肝、腎、心局部缺血再灌流損傷、腦血管疾病、骨萎縮、變性治愈骨折、延遲治愈骨折等)表現(xiàn)出效果和效能。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的如上所述的效果、效能和用途可適用于人參的粗皂角甙級(jí)分、人參提取物或人參。
除上述的疾病和外傷外，本發(fā)明的器質(zhì)性疾病包括引起所有器官的病理組織學(xué)變化的疾病和病理狀態(tài)。更具體地，包括在書籍(《今日治療指南》，日野原重明、阿部正和編著，醫(yī)學(xué)書院，1995；《今日治療指南》，多賀須幸男、尾形悅朗編著，醫(yī)學(xué)書院，2000；或《今日嬰兒治療指南》，矢田純一、柳澤正義、山口規(guī)容子、大關(guān)武彥編著，醫(yī)學(xué)書院，2000)中描述的所有疾病和病理狀態(tài)。當(dāng)然，即使將來出現(xiàn)原因不明的器質(zhì)性疾病，并且如果這樣的疾病引起活體組織的病理組織學(xué)變化，則這些疾病也包括在本發(fā)明的器質(zhì)性疾病的范圍內(nèi)。
以下將詳細(xì)描述本發(fā)明的醫(yī)藥組合物和獸醫(yī)藥組合物的實(shí)施方案。本發(fā)明很自然地涉及獸醫(yī)藥組合物，但在下文的描述中，僅使用醫(yī)藥組合物這個(gè)術(shù)語，有時(shí)不提獸醫(yī)藥組合物這個(gè)術(shù)語。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物是通過促進(jìn)表皮、真皮、真皮乳頭、皮下組織、結(jié)締組織、毛乳頭、毛囊、皮脂腺、立毛肌、汗腺、末梢神經(jīng)和血管的再生和/或重構(gòu)作用或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用，預(yù)防、處置或治療引起皮膚組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的組合物，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供了使用所述組合物預(yù)防、處置或治療的方法，以及用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的用途。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物是促進(jìn)皮膚組織再生和/或重構(gòu)的組合物，且本發(fā)明的一個(gè)目的是提供使用所述的組合物預(yù)防、處置或治療的方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的用途。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物是通過促進(jìn)受損傷部位的再生和/或重構(gòu)以及促進(jìn)治愈的作用，預(yù)防、處置或治療由粘膜組織的損傷、咬傷、創(chuàng)傷、灼傷、外傷或缺損引起的疾病以及引起粘膜組織如口腔粘膜的病理組織學(xué)變化的所有疾病的組合物。且本發(fā)明的一個(gè)目的是提供使用所述的組合物預(yù)防、處置或治療方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物是促進(jìn)具有病理組織學(xué)變化的活體組織的細(xì)胞或組織的再生和/或重構(gòu)的組合物，且本發(fā)明的一個(gè)目的是提供使用所述的組合物預(yù)防、處置或治療的方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物是通過具有病理組織學(xué)變化的活體組織的細(xì)胞或組織的再生和/或重構(gòu)，促進(jìn)器質(zhì)性疾病治愈的組合物，且本發(fā)明的一個(gè)目的是提供使用所述的組合物預(yù)防、處置或治療的方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明的藥用或獸醫(yī)藥組合物是皮膚外用或局部用的組合物，或是粘膜外用或局部用組合物，用于預(yù)防、改善或治療皮膚組織或粘膜組織的老化癥狀，以及本發(fā)明的目的是提供用所述組合物預(yù)防、處置或治療的方法，以及用人參皂甙、其代謝物或其鹽制備該組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物是通過促進(jìn)表皮、粘膜固有層、唾液腺、粘液腺、混合腺、結(jié)締組織、肌肉組織、血管、末梢神經(jīng)的再生和/或重構(gòu)，或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用，預(yù)防、處置或治療粘膜組織特別是口腔粘膜組織的疾病。且本發(fā)明的一個(gè)目的是提供使用所述的組合物預(yù)防、處置或治療的方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的應(yīng)用。
另外，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物是用于促進(jìn)上述口腔粘膜構(gòu)成組織及粘膜組織的表皮細(xì)胞、腺細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、膠原纖維、彈性纖維或網(wǎng)狀纖維再生和/或重構(gòu)的組合物，且本發(fā)明的一個(gè)目的是提供使用所述的組合物預(yù)防、處置或治療的方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的應(yīng)用。
作為本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物中的有效成分的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們鹽的例子有，上述的人參皂甙、含有人參皂甙的天然產(chǎn)物或其提取物、通過化學(xué)修飾制備的人參皂甙衍生物。
人參皂甙的優(yōu)選例子是天然的人參皂甙Rb1。
人參皂甙Rb1由上述的化學(xué)式表示，且可以按照柴田等(Shibata，S.等，Economic and medicinal plant research，World Scientific，Philadelphia，217-284頁，1985)的方法分離和提純。由此方法分離的產(chǎn)物的純度經(jīng)薄層色譜法和NMR光譜確定為大于98％(Kawashima，Y.andSamukawa，K.，J.Med.Pharmacol.Soc.，Wakan-Yaku，3，235-236，1986)。
其他的人參皂甙可通過公知的方法獲得。
本發(fā)明的人參皂甙可以是天然物質(zhì)或其提取物。天然物質(zhì)或其提取物的例子為含有人參皂甙的任何天然植物，例如，人參、西洋參、三七人參、竹節(jié)人參、喜馬拉雅人參、田七人參。這些天然物質(zhì)可以直接使用，或可以通過提取、濃縮、提純或制劑化處理制備的提取物、提取的制劑、液體制劑、片劑、級(jí)分或提純物的形式使用。例如，人參的粗皂角甙級(jí)分可以通過以下常規(guī)方法制取用甲醇提取紅參，將提取物懸浮在水中，用乙醚洗滌，并用水飽和的丁醇振搖出。收率為約8％。另外，人參提取物的產(chǎn)率為約35-45％。在以下實(shí)施例中使用的人參皂甙Rb1和粗皂角甙級(jí)分與本發(fā)明人(阪中)在先發(fā)表的論文(Wen，T.-C.等，Acta Neuropathol.，91，15-22，1996)中使用的物質(zhì)(凍干結(jié)晶產(chǎn)物)相同。關(guān)于用于提取粗皂角甙級(jí)分的天然產(chǎn)物，不僅是人參，而且竹節(jié)參、Tochiba人參、喜馬拉雅人參、三七人參、西洋參和田七人參中的任何一種均可以使用。
本發(fā)明組合物中的有效成分—人參皂甙可以是通過上述對(duì)天然人參皂甙進(jìn)行化學(xué)修飾的方法而制備的人參皂甙衍生物。這樣的人參皂甙衍生物的例子有下述的二氫人參皂甙Rb1及其他。二氫人參皂甙Rb1可通過還原天然人參皂甙Rb1而得。
本發(fā)明的人參皂甙可以游離形式使用，但也可以合適的鹽的形式使用。其溶劑化物如水化物也可使用。
另外，對(duì)這些人參皂甙的部分化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行改性以制備前藥，并且也可以選擇任何給藥途徑和任何給藥方法。例如，通過對(duì)人參皂甙Rb1的一個(gè)或多個(gè)羥基進(jìn)行酯化制備前藥，施用前藥，并通過內(nèi)因性酯酶加水分解，使人參皂甙Rb1在活體組織內(nèi)起作用。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物優(yōu)選含有低濃度的人參皂甙，如人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽。
按照本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用人參皂甙Rb1作為皮膚組織再生和/或重構(gòu)促進(jìn)劑的靜脈內(nèi)給用量與使用所述的化合物作為腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑的給藥量類似(日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550，含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)。從該事實(shí)判斷，用作皮膚組織或粘膜組織再生和重構(gòu)促進(jìn)劑的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度優(yōu)選為日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550(含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中所述的低濃度，更具體地，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在病變部位中的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低。本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1用作靜脈內(nèi)給藥制劑或皮膚外用劑或皮膚局部用劑時(shí)，含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1和的制劑優(yōu)選被調(diào)節(jié)，使所述的化合物在患者病變部位的細(xì)胞外液濃度在上述水平范圍內(nèi)。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物和制劑即使在病變部位的細(xì)胞外液濃度為約1-100fg/ml或更低(例如0.01fg/ml)時(shí)也能夠達(dá)到足夠的效果。即，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1被認(rèn)為當(dāng)其在病變部位的細(xì)胞外液濃度為0.01-100fg/ml或更低時(shí)，表現(xiàn)出優(yōu)良的效果和效能。另外，通過使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為化妝品或保健藥物組合物，為實(shí)現(xiàn)預(yù)防、治療和/或改善皮膚和粘膜的老化癥狀，應(yīng)調(diào)節(jié)混入化妝品或保健藥物中的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的量，以使人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在皮膚或粘膜的局部區(qū)域的細(xì)胞外液濃度保持以上所述的低濃度。
如下所述，人參皂甙盡管可以如美國專利5,663,160或WO99/07338所述的其他化妝品組合物一起混合制成化妝品，但本發(fā)明的組合物的特征是使用比美國5,663,160或WO 99/07338所述的更低的濃度。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以與任何其他化妝品組合物或健康藥物組合物一起混入每種化妝品或健康藥物中，且與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1一起使用的其他化妝品組合物或健康藥物組合物的濃度優(yōu)選低于前述參考文獻(xiàn)和專利說明書中所述的濃度。
從以下所述的實(shí)施例明顯可以看出，當(dāng)以日劑量12-60μg向具有皮膚切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷或缺損的大鼠(體重約300g)靜脈內(nèi)施用人參皂甙Rb1時(shí)，通過皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用和創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用，可以獲得前所未有的優(yōu)良治療效果。另外，將含有濃度為0.0001重量％、0.00001重量％、0.000001重量％、0.0000001重量％或0.00000001重量％的人參皂甙Rb1的皮膚外用劑施用于大鼠的開放式創(chuàng)傷時(shí)，創(chuàng)傷治愈和皮膚組織再生和/或重構(gòu)被明顯促進(jìn)，且開放式創(chuàng)傷部位的面積減小到對(duì)照或載體組的約1/2～1/4。含有0.00001重量％人參皂甙Rb1的粘膜外用劑也對(duì)人口腔粘膜的咬傷具有優(yōu)良的效果。但是，由于0.01重量％人參皂甙Rb1對(duì)大鼠的開放式創(chuàng)傷的治療效果很小，應(yīng)優(yōu)選在皮膚外用劑或皮膚局部用劑、或粘膜外用劑或粘膜局部用劑中混入濃度為0.001重量％或更低或濃度低于0.001重量％的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。
這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明本發(fā)明的人參皂甙在低濃度使用時(shí)是有效的。
基于上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)計(jì)算，患有由皮膚組織或粘膜組織損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損引起的疾病或患有引起皮膚或粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病的病人或脊椎動(dòng)物(估計(jì)體重60kg)的靜脈內(nèi)給用最佳藥劑(人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1)量為每天2.4mg至12mg。因此，使用本發(fā)明的醫(yī)藥組合物預(yù)防、處置或治療人皮膚疾病或粘膜疾病時(shí)，每天的全身給藥量盡管因患者的個(gè)人差異和疾病而有所不同，但該量為0.01mg或更高，優(yōu)選0.1mg或更高，更優(yōu)選10mg或更高。但是，由于一般情況下每千克體重的必要給藥量隨動(dòng)物的體重增加而減少，因此對(duì)人而言，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1用量的1/10或更低就可能表現(xiàn)出足夠的效果和效能。盡管本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的副作用很小，且醫(yī)藥組合物可設(shè)定為相當(dāng)大的量作為預(yù)防、處置或治療上述皮膚疾病的給藥量上限，但每天為1g或更低，優(yōu)選每天0.1g或更低。在10g皮膚外用劑或皮膚局部用劑或粘膜外用劑或粘膜局部用劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的量可以為0.1mg或更低，優(yōu)選0.001mg或更低，更優(yōu)選0.0001mg或更低。即，患有皮膚疾病或粘膜疾病的人每天的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的皮膚或粘膜外用給藥量盡管取決于個(gè)人差異或病狀，但通常為0.1mg或更低，優(yōu)選0.001mg或更低，更優(yōu)選0.0001mg或更低。
當(dāng)使用天然產(chǎn)物或其提取物作為本發(fā)明的人參皂甙作用時(shí)，由于通常認(rèn)為人參皂甙的粗皂角甙級(jí)分在病變部位的最佳細(xì)胞外液濃度為人參皂甙Rb1的最佳細(xì)胞外液濃度的14.5倍，因此可以使用14.5倍的量。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物優(yōu)選是以腸胃外給藥的形式，如靜脈內(nèi)給用、粘膜給藥或皮膚外給藥。更具體地，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物優(yōu)選以含有低濃度人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的腸胃外給用制劑、粘膜外用或局部用制劑、皮膚外用或皮膚局部用噴霧劑的形式使用。
因此，本發(fā)明提供優(yōu)選以低濃度含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，用于預(yù)防、處置或治療上述疾病的腸胃外制劑，優(yōu)選靜脈內(nèi)或血管內(nèi)給藥制劑、粘膜或皮膚外用或局部用藥劑。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物優(yōu)選為靜脈內(nèi)給藥制劑、粘膜外用劑、皮膚外用劑或皮膚外用涂布、外用噴霧劑；另外，可以選擇病變部位局部外用劑、病變部位局部注射劑、經(jīng)口給用制劑、點(diǎn)鼻藥、滴耳藥、眼軟膏、栓劑、皮下注射藥、皮內(nèi)注射藥、肌肉內(nèi)注射藥、吸入藥、舌下片劑、人工唾液、關(guān)節(jié)內(nèi)給用、經(jīng)皮吸收藥等任意的給用途徑。另外也可以使用緩釋劑。
另外，本發(fā)明提供包括上述靜脈內(nèi)給藥制劑、粘膜外用劑、皮膚外用劑、保健藥或化妝品等，用于對(duì)皮膚疾病或粘膜疾病的長期治療、預(yù)防或處置劑、皮膚組織或粘膜的再生和/或重構(gòu)促進(jìn)劑、創(chuàng)傷治愈促進(jìn)劑或抑制皮膚或粘膜的老化癥狀的化妝品或保健藥。
本發(fā)明的靜脈內(nèi)給藥制劑可以直接用于血管內(nèi)、優(yōu)選靜脈內(nèi)，也可以在溶解于生理鹽水、蒸餾水、磷酸鹽緩沖液、葡萄糖溶液、脂質(zhì)體或脂肪乳劑中后，作為單次靜脈內(nèi)注入用制劑或靜脈內(nèi)連續(xù)輸注制劑使用。另外，通過添加到點(diǎn)滴用組合物等的靜脈內(nèi)給藥制劑中使用的制劑也是優(yōu)選的。
本發(fā)明的含有人參皂甙，特別是人參皂甙Rb1的、用于預(yù)防、處置或治療引起活體組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的皮膚外用劑或粘膜外用劑，可以通過將人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，優(yōu)選以低濃度混入任意的基質(zhì)如水溶性基質(zhì)、乳劑性基質(zhì)、組合藥物(基質(zhì))或脂溶性基質(zhì)(軟膏基質(zhì))中制備而成。另外，與阿氟他(aphtouch)一樣，也可以將低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1混入粘附在粘膜上的制劑中。具體地，每100g水溶性基質(zhì)(霜?jiǎng)┑?、乳劑性基質(zhì)、組合藥物(基質(zhì))或脂溶性基質(zhì)(軟膏基質(zhì))如眼科用白凡士林(propet)中混入濃度為100mg(0.1重量％)或更低，優(yōu)選10mg(0.01重量％)或更低，更優(yōu)選1mg(0.001重量％)或更低，以及1fg(10-15重量％)或更高的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1后，得到的制劑可作為用于預(yù)防、處置或治療上述疾病的皮膚外用劑或粘膜外用劑使用。
當(dāng)然，在上述皮膚或粘膜外用或局部用制劑中，也可混入人參皂甙特別人參皂甙Rb1以外的任何醫(yī)藥組合物(例如，葡萄糖、抗生素、維生素E、維生素E衍生物、維生素D、維生素D衍生物、維生素類、抗病毒劑、免疫抑制劑、抗過敏劑、類固醇、人參成分、天然物質(zhì)成分等)。當(dāng)人參皂甙Rb1與其他醫(yī)藥組合物或皮膚和/或粘膜外用組合物混合使用時(shí)，人參皂甙Rb1的濃度上限優(yōu)選設(shè)定為少于0.00002重量％，而非不是少于0.001重量％。特別地，對(duì)于特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎或花粉癥等的過敏性皮膚粘膜疾病，將常用量以下或少于在先專利說明書中所揭示的用量的類固醇(制劑)、抗過敏藥物組合物(制劑)或免疫抑制組合物(制劑)混入到含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的皮膚外用劑或粘膜外用劑中可以獲得優(yōu)良的效果。另外，含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的皮膚外用劑或粘膜外用劑也可以與含有其他任意醫(yī)藥組合物的皮膚外用劑或粘膜外用劑混合使用。用于預(yù)防、處置或治療上述疾病的皮膚外用劑或粘膜外用劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度上限為10重量％或更低，優(yōu)選為1重量％或更低。
皮膚切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷或缺損發(fā)生后，通過靜脈內(nèi)連續(xù)施用本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1一周，每天或連日向皮膚局部外用涂布或噴霧，可以促進(jìn)受損皮膚組織的再生和/或重構(gòu)，加速創(chuàng)傷的治愈。在口腔粘膜咬傷后5天左右，在創(chuàng)傷部位每日1～10次外用涂布本發(fā)明的人參皂甙Rb1，可以促進(jìn)脫落的口腔粘膜組織的再生和/或重構(gòu)，加速創(chuàng)傷治愈。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物的給藥方法優(yōu)選為血管內(nèi)給藥，特別是靜脈內(nèi)給藥，可以連續(xù)地以上述劑量給藥。本發(fā)明的有效成分—人參皂甙特別是人參皂甙Rb1是一種皂角甙，由常規(guī)方法制劑。例如，通過將本發(fā)明的水溶性醫(yī)藥組合物的凍于結(jié)晶溶解于生理鹽水、蒸餾水、磷酸鹽緩沖液或葡萄糖溶液中，可以進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥。當(dāng)然，在如上所述的溶解后，也可以將本發(fā)明的藥物組合物添加到點(diǎn)滴用組合物等靜脈內(nèi)給藥制劑中使用。另外，也可以作為脂肪乳劑、脂質(zhì)體制劑或緩釋制劑使用。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在靜脈內(nèi)給藥制劑中的濃度只要不是很高，可以任意調(diào)節(jié)，例如，0.001～100mg/ml，優(yōu)選0.01～10mg/ml，更優(yōu)選0.1～1mg/ml。當(dāng)利用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為預(yù)防、處置或治療上述疾病的皮膚外用劑或粘膜外用劑時(shí)，上文所述的任意基質(zhì)，例如水溶性基質(zhì)、乳劑性基質(zhì)、軟膏基質(zhì)、組合藥物(基質(zhì))或脂溶性基質(zhì)中混入的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度為0.1重量或更低，優(yōu)選0.01重量％或更低，更優(yōu)選0.001重量％或更低，或低于0.001重量％，或10-15重量％或更高。但是，當(dāng)含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的皮膚外用劑被長期施用或向患有輕度皮膚創(chuàng)傷的患者施用時(shí)，其濃度可減至10-20重量％。上述皮膚外用劑或粘膜外用劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度上限是10重量％或更低，優(yōu)選1重量％或更低。含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的皮膚外用劑可以涂布的形式用于皮膚局部，或以噴霧的形式施用。
另外，本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的藥劑的特定特征是沒有表現(xiàn)出明顯的副作用，這一點(diǎn)不容忽視。實(shí)際上，由于腹腔內(nèi)施用人參皂甙Rb1的LD50據(jù)報(bào)道為1110mg/kg(Kaku，T.等，Arzneim.Forsch.Drug Res.，25，539-547，1975)，因此如后面的實(shí)施例所示，向體重約300g的大鼠以每天12～60μg的量連續(xù)靜脈內(nèi)給藥，直接治療或處置皮膚切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷和/或缺損時(shí)，人參皂甙Rb1被認(rèn)為是極為安全的醫(yī)藥組合物。作為皮膚外用劑或粘膜外用劑使用的人參皂甙Rb1的給藥量比靜脈內(nèi)給藥量遠(yuǎn)遠(yuǎn)地低。當(dāng)然，在本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)施用了人參皂甙Rb1的動(dòng)物仔細(xì)觀察時(shí)，沒有發(fā)現(xiàn)副作用或有病的跡象。
由于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物作為外用、外部涂布或局部使用的藥劑對(duì)于預(yù)防、改善和/或治療引起皮膚組織或粘膜組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病是有效，因此本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以作用適用皮膚組織或粘膜組織的化妝品、化學(xué)去皮劑、生發(fā)育發(fā)劑等的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物而使用。例如，可以經(jīng)外用或外部涂布用于預(yù)防、改善和/或處置皮膚的老化癥狀(例如，皮膚萎縮、易感染性松弛、頭屑、脫發(fā)、白發(fā)、灰發(fā)、瘙癢、粗糙、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、龜裂、皸裂、雀斑、皺紋、再生不良、色素沉著、干燥等)和脫毛癥。
如上述的實(shí)驗(yàn)例所示的，在皮膚的開放式創(chuàng)傷(缺損)中，毛囊很自然地迅速脫落，但通過皮膚外用施用低用量的人參皂甙Rb1，明顯觀察到促進(jìn)了開放式創(chuàng)傷部位的毛發(fā)生長和/或生發(fā)劑作用。從這些結(jié)果判斷，皮膚外施用低用量或低劑量的人參皂甙Rb1時(shí)，在開放式創(chuàng)傷(皮膚缺損)制作后通過促進(jìn)毛發(fā)生長和/或生發(fā)劑的作用，可以說創(chuàng)傷部位被人參皂甙Rb1再生和/或重構(gòu)至接近健康組織的狀態(tài)。即，說明了低用量或低劑量的人參皂甙Rb1等的人參皂甙可以作為毛發(fā)生長和/或生發(fā)促進(jìn)劑或防止脫毛的藥劑使用。
如上所述，皮膚外用涂布人參皂甙Rb1促進(jìn)皮膚的表皮組織、真皮的結(jié)締組織、真皮乳頭、皮下組織、血管、立毛肌、皮脂腺、汗腺、毛乳頭、毛囊等的再生/或重構(gòu)的這樣一個(gè)事實(shí)，證明皮膚外用涂布人參皂甙特別是人參皂甙Rb1很自然地促進(jìn)表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、黑素細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、真皮以及皮下組織的成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、間葉細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞、膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維、細(xì)胞外基質(zhì)的再生和/或重構(gòu)。即，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1被認(rèn)為促進(jìn)構(gòu)成皮膚組織的所有細(xì)胞及其分泌作用的再生和/或重構(gòu)。再一方面，伴隨老齡化的皮膚諸癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、瘙癢、粗糙、龜裂、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、雀斑、皺紋、白發(fā)、灰發(fā)、脫毛、頭屑、色素沉著、曬斑、再生不良、干燥等)被認(rèn)為是由于因紫外線損傷或活體的老化使構(gòu)成皮膚組織的上述細(xì)胞發(fā)生漸漸死亡或機(jī)能不全，和/或細(xì)胞不能再生到原始健康狀態(tài)而產(chǎn)生的。例如，伴隨老齡化或老化的粗糙、干燥、脫毛、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、龜裂、皮脂缺乏、瘙癢等被認(rèn)為是由于皮膚的汗腺、毛囊以及皮脂腺的細(xì)胞在發(fā)生機(jī)能不全或進(jìn)入死亡狀態(tài)后不能再生或再生不良而產(chǎn)生的。
另外，曬斑、色素沉著、雀斑等可能是由于日光或紫外線照射使皮膚細(xì)胞發(fā)生死亡而不能再生至原始狀態(tài)或再生不足而產(chǎn)生的。另外，可以說，皮膚的萎縮、松弛、皺紋等是由于真皮和皮下組織中的成纖維細(xì)胞或間葉細(xì)胞隨老化發(fā)生機(jī)能不全或數(shù)量減少，由此真皮或皮下組織不能保持足夠的膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維和/或細(xì)胞外基質(zhì)而產(chǎn)生的。另一方面，由于黑素細(xì)胞的機(jī)能障礙，白發(fā)或灰發(fā)看起來增加。另外，由于朗氏細(xì)胞的機(jī)能不全，免疫功能降低，產(chǎn)生易感染性。由于本發(fā)明的低濃度、低用量或低劑量的人參皂甙Rb1可以促進(jìn)構(gòu)成皮膚組織的所有細(xì)胞及其分泌器官的再生和/或重構(gòu)，如果將人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為化妝品組合物使用，就可以預(yù)防、減輕或改善因伴隨老化的皮膚構(gòu)成細(xì)胞減少(細(xì)胞死亡)、機(jī)能障礙引起的諸癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、瘙癢、粗糙、龜裂、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、雀斑、皺紋、白發(fā)、灰發(fā)、脫毛、頭屑、色素沉著、曬斑、再生不良、干燥等)。另外，在本發(fā)明人之一(阪中)的在先專利申請(qǐng)(日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550，含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中，人參皂甙Rb1被認(rèn)為增加細(xì)胞死亡抑制基因產(chǎn)物BcL-xL的表達(dá)，并保護(hù)包括表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞即角質(zhì)細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、立毛肌、血管平滑肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等的皮膚細(xì)胞，因此，其能夠防止伴隨老化的皮膚構(gòu)成細(xì)胞的死亡和功能障礙。
如上所述，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1被認(rèn)為保護(hù)所有的皮膚構(gòu)成細(xì)胞。另外，即使皮膚細(xì)胞一旦發(fā)生死亡或機(jī)能不全，認(rèn)為通過人參皂甙引起的皮膚細(xì)胞的再生也可以預(yù)防、改善或減輕伴隨老齡化的皮膚老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、瘙癢、粗糙、龜裂、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、雀斑、皺紋、白發(fā)、灰發(fā)、脫毛、頭屑、色素沉著、曬斑、再生不良、干燥等)。即，可以說人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過兩種作用—細(xì)胞保護(hù)作用和組織和細(xì)胞再生促進(jìn)作用，改善、預(yù)防和減輕伴隨老齡的皮膚老化癥狀。另外，如本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果所證明的，以及上述在先專利申請(qǐng)所述(日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550)，當(dāng)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在病變組織和/或皮下組織中的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低，優(yōu)選為10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低時(shí)，表現(xiàn)出細(xì)胞保護(hù)作用和組織及細(xì)胞再生促進(jìn)作用。當(dāng)然，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為用于預(yù)防、改善或減輕粘膜老化癥狀(萎縮、上皮剝離、粘膜剝離、再生不良、發(fā)育不全、龜裂、干燥等)的健康藥物組織物或粘膜外用或局部用組合物。
因此，本發(fā)明提供以低濃度或低用量、優(yōu)選在組合物中含有低于0.001重量％人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們鹽的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物。
本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物可適用于化妝品、生發(fā)育發(fā)劑、衛(wèi)生用品、化學(xué)去皮組合物、健康用品等組合物的外用產(chǎn)品。
本發(fā)明還提供使用上述的本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物的預(yù)防方法、改善方法或處置方法。
另外，本發(fā)明提供使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，制備上述的本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物。另外，本發(fā)明提供了人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們鹽的應(yīng)用，應(yīng)用所述組合物和其產(chǎn)品對(duì)上述癥狀或疾病預(yù)防、改善或治療的方法。
以下列舉本發(fā)明的皮膚外用或局部用組合物或粘膜外用或局部用組合物的更詳細(xì)的實(shí)施方案。
本發(fā)明的皮膚外用或局部用組合物或粘膜外用或局部用組合物提供用于預(yù)防、改善或治療皮膚老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭屑、脫毛、白發(fā)、灰發(fā)、瘙癢、粗糙、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、雀斑、皺紋、黃褐斑、再生不良、色素沉著或干燥等或粘膜的萎縮、再生不良、剝離、上皮剝離、龜裂或干燥等)的化妝品組合物，使用該組合物的預(yù)防方法、改善方法或治療方法、化妝方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物提供用于預(yù)防、處置、改善皮膚或粘膜的老化癥狀的化妝品、健康藥、健康食品，使用所述的組合物的預(yù)防方法、改善方法或處置方法，化妝方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物。
本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物提供用于預(yù)防、處置、改善粘膜特別是口腔粘膜和食道粘膜的老化癥狀(萎縮、粘膜剝離、龜裂、上皮剝離、再生不良、干燥)的健康藥組合物，使用該組合物的預(yù)防方法、改善方法或治療方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們鹽制備該組合物。
本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物提供生發(fā)、育發(fā)用組合物，使用該組合物的預(yù)防方法、改善方法或治療方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物提供化學(xué)去皮組合物，使用該組合物的預(yù)防方法、改善或治療方法，以及使用人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽制備該組合物。
本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物提供化妝品或衛(wèi)生用品。
按照本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用人參皂甙Rb1作為皮膚組織再生、生構(gòu)促進(jìn)劑時(shí)的靜脈內(nèi)給藥量與使用相同化合物作為腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑時(shí)靜脈內(nèi)的給用量類似(日本專利申請(qǐng)?zhí)柶?0-365560、PCT/JP99/02550，含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)。從該結(jié)果判斷出，本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為皮膚組織或口腔粘膜組織的再生、重構(gòu)促進(jìn)劑發(fā)揮作用的濃度，與日本專利申請(qǐng)?zhí)柶?0-365560號(hào)、PCT/JP99/02550(含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中所述的一樣優(yōu)選低濃度，更具體地，病變部位的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低的濃度。本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1用作靜脈內(nèi)給用制劑或皮膚外用或局部用劑使用時(shí)，也優(yōu)選按照使患者患部組織中的細(xì)胞外液濃度為前述的濃度而調(diào)節(jié)制劑。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物和制劑即使患部組織的細(xì)胞外液濃度為1～100fg/ml或更低(如0.01fg/ml)，也能獲得充分的效果。即，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在患部組織中細(xì)胞外液濃度為0.01-100fg/ml或1～10000fg/ml時(shí)，也被認(rèn)為能發(fā)揮最優(yōu)效果和效能。
另外，為預(yù)防、治療、改善皮膚和粘膜的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭屑、脫毛、白發(fā)、灰發(fā)、瘙癢、粗糙、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、雀斑、皺紋、黃褐斑、再生不良、色素沉著或干燥等或粘膜的萎縮、再生不良、剝離、上皮剝離、龜裂或干燥等)使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為化妝品、健康藥組合物時(shí)，為使皮膚局部或粘膜局部的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在的細(xì)胞外液濃度為上述的濃度，有必要調(diào)節(jié)化妝品或健康藥中混入的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的量。當(dāng)然，盡管人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以與美國專利5,663,160或WO 99/07338描述的其他化妝品組合物一起混入化妝品中，但本發(fā)明的組合物的特征是以比美國專利5,663,160或WO 99/07338所述的更低的濃度使用它。另外，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以與其他任意化妝品組合物或健康藥組合物一起混入每種化妝品或健康藥中，但與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1一起使用的其他任意化妝品組合物或健康藥組合物的濃度應(yīng)優(yōu)選低于在先參考文獻(xiàn)和專利說明書中記載的濃度。
因此，本發(fā)明的化妝品組合物或健康藥組合物不僅包括常規(guī)的化妝品，而且包括所有的物品，這些物品直接或間接與活體表皮或包括口腔粘膜的粘膜接觸，例如，準(zhǔn)藥品如牙膏、香波和健康用品。
因此，當(dāng)在每種化妝品或健康藥(美容洗劑(潤膚洗液)、乳液、美容液、按摩劑、包裝劑、乳劑、粉底霜、潤手霜、凝膠、洗劑、乳劑、粉末、染發(fā)劑、修發(fā)劑、冷霜、眼影膏、清潔霜、清潔泡沫、夜霜、美白霜、錠劑、止咳糖、撲面粉、口紅、洗浴凝膠、美容香皂、健康飲料水、等滲性水、酒精水稀釋用冰、凍果汁露、冰激凌、酒精飲料、洗眼劑、眼藥水、清潔液、漱口劑、香波、洗發(fā)水、牙粉、牙膏、唇霜、打底化妝品、UV打底液、粉底等)中混入微量人參皂甙特別是人參皂甙Rb1并維持皮膚局部或粘膜局部中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度為上述的低濃度時(shí)，對(duì)皮膚和粘膜老化癥狀(萎縮、易感染性、松弛、頭屑、脫毛、白發(fā)、灰發(fā)、瘙癢、粗糙、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、雀斑、皺紋、黃褐斑、再生不良、色素沉著或干燥等)發(fā)揮優(yōu)異的效果。
例如，僅伴隨老齡或老化的缺乏皮膚脂肪(即皮脂)也引起皮膚的粗糙、瘙癢、龜裂、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角層剝離、龜裂、干燥等，但通過在每種化妝品中混入低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，認(rèn)為皮脂腺的保護(hù)或再生、重構(gòu)被促進(jìn)，伴隨老齡的皮膚老化癥狀被預(yù)防、改善或減輕。由于含有低濃度人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的任意化妝品不僅保護(hù)表皮細(xì)胞(表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞)，而且也促進(jìn)其再生，因此通過促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞間脂質(zhì)(即各個(gè)硬質(zhì)化或角質(zhì)化細(xì)胞間的脂質(zhì))和天然保濕因子的產(chǎn)生和分泌，抑止了皮膚的干燥和粗糙，給皮膚提供了自然的水分。另外，通過在礦泉水等中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、人參提取物、或人參的粗皂角甙級(jí)分，可以改善、預(yù)防、處置因酒精飲料或高溫刺激引起的口腔粘膜和消化道粘膜(特別是食道粘膜)的損傷。低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以在化學(xué)去皮中，用作促進(jìn)皮膚組織的再生和/或重構(gòu)的組合物。通過使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為護(hù)理設(shè)施、溫泉保養(yǎng)設(shè)施、醫(yī)院等的浴劑，可預(yù)防、改善、處置皮膚的老化和疾病。通過在敷劑(dressing agent)、消毒藥、洗凈劑、絆創(chuàng)膏、涂覆劑等中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以促進(jìn)創(chuàng)傷的治愈，防止其惡化。基于本發(fā)明的皮膚外用或局部用組合物和其他組合物，是可以結(jié)合的，這已進(jìn)行了描述。
本發(fā)明的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物用作生發(fā)、育發(fā)或生發(fā)劑組合物時(shí)，在任意或公知的基質(zhì)中混合有效成分后，混合物可單獨(dú)使用或可與其他有效或醫(yī)藥組合物(例如血流促進(jìn)組合物、局部刺激用組合物、毛囊激活組合物、抗男性激素、抗皮脂溢組合物、角質(zhì)溶解用組合物、抗生素、草藥提取物、維生素、氨基酸等)并用。此時(shí)，人參皂甙Rb1的濃度上限優(yōu)選設(shè)定為不足0.00002重量％。具體地，對(duì)斑禿、男性型脫毛癥、以及慢性脫毛癥來說，靜脈內(nèi)給用或局部外用涂布低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可能是有效的。
當(dāng)在液狀化品，如通常的UV打底液(liquid foundation)混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，其濃度被調(diào)節(jié)為1000ng/ml或更低，優(yōu)選10ng/ml或更低，更優(yōu)選0.01fg/ml～100pg/ml；如果連日向皮膚外用涂布或外用噴霧，皮膚局部人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度如上所述維持低濃度，則可以改善皮膚的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、瘙癢、脫毛頭屑、白發(fā)、灰發(fā)癥、粗糙、龜裂、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、皸裂、干燥、雀斑、皺紋、色素沉著、再生不良、曬斑等)或預(yù)防其發(fā)展，或預(yù)防其惡化。另外，在固形、凝膠狀或膏狀化妝品中，例如通常的粉底霜(makeup base)或晚霜中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，每1g膏劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的混入量為1000ng或更低，優(yōu)選10ng或更低，更優(yōu)選0.01fg～100pg；如果連日皮膚外用涂布，則可以預(yù)防、改善或處置皮膚的老化癥狀(萎縮、易感染性、松弛、頭屑、脫毛、白發(fā)、灰發(fā)、瘙癢、粗糙、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、雀斑、皺紋、黃褐斑、再生不良、色素沉著或干燥等)。
但是，當(dāng)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1混入任意化妝品中并極長期地使用時(shí)，每克化妝品的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的含量可以減低至0.0000001fg。為預(yù)防、改善、處置皮膚老化癥狀而在上述化妝品中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，其濃度上限為對(duì)液狀化妝品為10μg/ml或更低；對(duì)固體、凝膠狀或膏狀化妝品為10μg/g或更低。換句話說，以0.001重量％或更低，優(yōu)選不足0.001重量％的濃度在上述化妝品中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。如果不是這樣，可能損害皮膚的正常細(xì)胞膜。即，在長期使用的化妝品或健康藥中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，使人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度比本發(fā)明前述的預(yù)防、處置、治療皮膚疾病和/或粘膜疾病的外用劑更低被認(rèn)為是安全的。當(dāng)然，如上所述，含有微量人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的化妝品，不僅可以外用涂布、外用噴霧到面部，而且也可以外用涂布或外傷噴霧到受日光頻繁照射的其他皮膚組織(如四肢、軀干、頸部、頭部等)上。如所述的，當(dāng)長期使用含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的化妝品或健康藥時(shí)，可以預(yù)防或改善伴隨老齡的癥狀(萎縮、易感染性、松弛、頭屑、脫毛、白發(fā)、灰發(fā)、瘙癢、粗糙、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、雀斑、皺紋、黃褐斑、再生不良、色素沉著或干燥等)。但是，當(dāng)皮膚外用劑、粘膜外用劑、健康或化妝品中混入的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的量為試驗(yàn)性量時(shí)，實(shí)際上應(yīng)調(diào)整人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的的配入量，以使皮膚或粘膜中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度保持1ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低。
當(dāng)然，通過在健康藥(例如含漱劑、洗眼藥等)中混入低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以預(yù)防、改善或減輕粘膜的老化癥狀(萎縮、上皮風(fēng)化或剝離、再生不良、粘膜剝離、龜裂、干燥等)。當(dāng)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或后述的人參粗皂角甙級(jí)分、人參皂甙提取物或人參皂甙用作健康飲料食品、含漱劑、洗浴凝膠、洗眼藥等健康藥物組合物時(shí)，優(yōu)選以低于0.001重量％的濃度制成健康藥的原液，使用時(shí)將原液進(jìn)行稀釋，以使人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或人參皂甙粗皂角甙、人參皂甙提取物或人參的濃度為1ng/ml或更低或14.5ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低或145pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低或1450fg/ml或更低。當(dāng)然，將上述原液凍干后，也可以用作粉末狀的健康藥的原末。在凍干原液而成為粉末時(shí)，很自然地，所述粉末的健康藥組合物的重量％增加，但是在使用時(shí)可將凍干粉末稀釋至上述的健康藥組合物的低濃度。一般地認(rèn)為，病變部位中人參皂甙的粗皂角甙級(jí)分的最佳細(xì)胞外液濃度為人參皂甙Rb1的最佳細(xì)胞外液濃度的14.5倍。
通過前述的栽培實(shí)驗(yàn)可以證明，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物不僅可以適用于人而且可以適用于植物、家畜和寵物等的活體組織，能夠調(diào)節(jié)動(dòng)物或植物生長。
因此，本發(fā)明提供含有人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，優(yōu)選含有人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分、人參皂甙或它們的鹽，用于促進(jìn)植物或動(dòng)物組織或細(xì)胞的新生、再生、生長、重構(gòu)、分化、保存、營養(yǎng)或栽培的生長調(diào)節(jié)組合物。
另外，本發(fā)明提供使用上述的本發(fā)明的生長調(diào)節(jié)組合物的植物的栽培方法、以及動(dòng)物的飼養(yǎng)方法。
本發(fā)明的生長調(diào)節(jié)組合物包括用于促進(jìn)植物組織或細(xì)胞的新生、再生、生長、重構(gòu)、分化、保存、營養(yǎng)或栽培的植物生長調(diào)節(jié)組合物，以及海產(chǎn)品、海產(chǎn)資源、水產(chǎn)品、水產(chǎn)資源、海產(chǎn)動(dòng)物、水產(chǎn)動(dòng)物、寵物或家畜的生長、飼養(yǎng)、保護(hù)或養(yǎng)殖的動(dòng)物生長調(diào)節(jié)組合物。
更詳細(xì)地，本發(fā)明的生長調(diào)節(jié)組合物的例子有植物的生長促進(jìn)劑、肥料添加劑、肥料組合物等，動(dòng)物的生長促進(jìn)劑、飼料添加劑、飼料組合物等。
本發(fā)明的低濃度、低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以用于預(yù)防、治療和/或處置不僅是人而且還包括寵物和家畜的疾病、外傷或創(chuàng)傷。
另外，低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以用于海產(chǎn)品(魚貝類、甲殼類、鰻魚、海鰻、海膽、牡蠣、裙帶菜、珍珠貝等)以及水產(chǎn)品的養(yǎng)殖和農(nóng)作物的栽培。當(dāng)然，也可用于保護(hù)、飼養(yǎng)和/或養(yǎng)殖在水族館和其他水域中培養(yǎng)的魚貝類。此時(shí)，認(rèn)為人參皂甙特別是人參皂甙Rb1保護(hù)海洋資源和農(nóng)作物免受內(nèi)泌攪亂物質(zhì)、毒素、外傷、微生物、生長危害、環(huán)境污染等。另外，在水栽培中，將人參皂甙特別是人參皂甙Rb1加到栽培用水中以增加蔬菜的產(chǎn)量。
下面將給出本發(fā)明的生長調(diào)節(jié)組合物的實(shí)施方案。
本發(fā)明提供用于促進(jìn)植物組織的再生、新生或重構(gòu)的組合物、生長調(diào)節(jié)組合物或肥料組合物，這些組合物含有人參皂甙或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，優(yōu)選含有人參或其提取物或人參成分或它們的代謝產(chǎn)物或它們的鹽。
本發(fā)明提供用于預(yù)防、處置、修復(fù)或治療植物組織的損傷、外傷、切斷或缺損的肥料添加劑或肥料組合物，植物組織再生、新生或重構(gòu)的人參皂甙或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，優(yōu)選含有人參或其提取物或人參成分或它們代謝產(chǎn)物或它們的鹽。
本發(fā)明提供對(duì)植物組織例如黃金葛的莖、枝等插條或水栽培有用的、含有人參皂甙或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽，優(yōu)選含有人參或其提取物或人參成分或它們的代謝產(chǎn)物或它們的鹽的肥料添加劑或肥料組合物。
本發(fā)明提供含有人參皂甙或其代謝產(chǎn)的或它們的鹽，優(yōu)選含有人參或其提取物或人參成分或它們的代謝產(chǎn)物或它們的鹽的動(dòng)物飼料添加劑或飼料組合物。
更詳細(xì)地，本發(fā)明涉及對(duì)植物組織例如黃金葛的莖、枝等插條或水栽培有用的、低濃度的人參粗皂角甙人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。即，本發(fā)明提供對(duì)植物的栽培、生長、保存、改良，鮮花的保存，水栽培，農(nóng)作物栽培、生長，蔬菜的栽培、生長，果實(shí)、果樹的栽培、生長，煙草的栽培、生長，園藝植物的栽培、生長、改良，藥用植物的栽培，菌類的栽培，茶葉的栽培、生長等有用的、含有人參皂甙或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽、優(yōu)選含有人參或其提取物或人參成分或它們的代謝產(chǎn)物或它們的鹽的生根、發(fā)芽、生長促進(jìn)組合物或肥料添加劑。
本發(fā)明的肥料添加劑或肥料組合物優(yōu)選含有低濃度的人參或其提取物或人參成分或它們的代謝產(chǎn)物或它們的鹽。當(dāng)人參成分如人參皂甙特別是人參皂甙Rb1單獨(dú)用作或與其他有效萬分一起用作肥料組合物時(shí)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在水栽培溶液中的濃度調(diào)節(jié)為1ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低。本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1即使其濃度為約0.01fg/ml，也能充分地促進(jìn)水栽培植物組織的生根、發(fā)芽、生長、分化、再生、新生或重構(gòu)，可用于包括蔬菜、果實(shí)、鮮花等在內(nèi)的農(nóng)作物、植物的保存、生長、栽培或改良。另外，在任意的固形肥料、凝膠狀肥料、液狀肥料、液體肥料、粉末狀肥料(例如單肥，土壤改良材料或肥料，育苗肥料，水稻，麥用肥料，緩釋性肥料，高度化學(xué)合成肥料，低度化學(xué)合成肥料，有機(jī)化合物肥料，NK-PK-PM化合物肥料，有機(jī)混合肥料，液肥等)中添加或混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，其濃度與用于化妝品時(shí)一樣，優(yōu)選設(shè)定為0.001重量％或更低，10-20重量％或更高。作為肥料組合物，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度上限是0.1重量％或更低，優(yōu)選0.001重量％或更低。當(dāng)本發(fā)明的人參的粗皂角甙級(jí)分用作肥料添加劑或肥料組合物或單獨(dú)用于水栽培中時(shí)，水栽培溶液中粗皂角甙級(jí)分的濃度調(diào)節(jié)為14.5ng/ml或更低，優(yōu)選145pg/ml或更低，更優(yōu)選1450fg/ml或更低。本發(fā)明的人參粗皂角甙級(jí)分即使在0.145fg～1450fg/ml濃度范圍時(shí)也能充分促進(jìn)水栽培植物組織的生根、發(fā)芽、生長、再生、新生或重構(gòu)，可用于包括蔬菜、果實(shí)、鮮花等在內(nèi)的農(nóng)作物、植物的保存、生長、栽培。另外，人參的粗皂角甙級(jí)分添加到或混入任意固形肥料、凝膠狀肥料、液狀肥料、液體肥料、粉末狀肥料(例如單肥、土壤改良材料或肥料、育苗肥料、水稻或麥用肥料、緩釋性肥料、高度化學(xué)合成肥料、低度化學(xué)合成肥料、有機(jī)化合物肥料、NK-PK-PM化合物肥料、有機(jī)混合肥料、液肥等)中時(shí)，其濃度也與用于化妝品時(shí)一樣為0.01重量％或更低，優(yōu)選0.001重量％或更低，更優(yōu)選0.0001重量％或更低，以及10-20重量％或更高。當(dāng)然，與人參的粗皂角甙級(jí)分同量或其5～6倍量以下的人參提取物也可用作肥料組合物。作為肥料組合物，人參的粗皂角甙級(jí)分或人參提取物的濃度上限為1重量％或更低。
如下面的實(shí)驗(yàn)所示，當(dāng)在含有100fg/ml的人參皂甙或1450fg/ml人參皂甙粗皂角甙級(jí)分的水中栽培植物組織例如黃金葛的插條時(shí)，與對(duì)照的插條相比，明顯地促進(jìn)了根的新生(即生根、生長)。從此現(xiàn)象可以判斷出，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、含有人參粗皂角甙級(jí)分的人參提取物或人參可以促進(jìn)不僅動(dòng)物組織而且植物組織的新生、再生或重構(gòu)。
另外，在本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)，促進(jìn)植物組織的新生、再生或重構(gòu)的人參皂甙Rb1或粗皂角甙級(jí)分的細(xì)胞外液濃度與再生、重構(gòu)動(dòng)物組織(皮膚組織、口腔粘膜組織)的情況一樣，也是極低的。因此，人參、人參提取物、人參粗皂角甙、人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可用于植物的栽培、生長、保存、鮮花的保存、栽培、生長、水栽培、農(nóng)作物的栽培、生長、蔬菜的栽培、生長、果實(shí)的栽培、生長、煙草的栽培、生長、菌類的栽培、生長、藥用植物的栽培、茶葉的栽培、生長等，含有上述的人參、人參提取物、人參粗皂角甙級(jí)分或人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的肥料添加劑或肥料組合物可以優(yōu)選以低濃度混入任意的肥料中，也可單獨(dú)用作植物組織的生根、發(fā)芽、新生、再生、生長、重構(gòu)促進(jìn)劑。
人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或人參的粗皂角甙級(jí)分不僅促進(jìn)動(dòng)物組織(皮膚組織、口腔粘膜組織)、而且促進(jìn)植物組織的新生、再生或重構(gòu)這樣一個(gè)事實(shí)說明，人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分或人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以促進(jìn)所有活體組織的新生、再生和/或重構(gòu)。因此，人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分或人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以用作家畜、養(yǎng)殖魚貝類、寵物的飼料添加劑，即飼料組合物。例如，在養(yǎng)殖魚貝類、甲殼類、鰻魚、海鰻、海膽、珍珠貝等時(shí)，如果將人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分或人參皂甙特別是人參皂甙Rb1與通常的飼料一起添加到海水或淡水中，則認(rèn)為促進(jìn)這些水產(chǎn)或海產(chǎn)資源的生長。當(dāng)然，人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分或人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過其細(xì)胞保護(hù)作用，可以保護(hù)魚貝類、甲殼類、鰻魚、海鰻等水產(chǎn)、海產(chǎn)資源免受外作、創(chuàng)傷、病原微生物、生物危害、內(nèi)分泌攪亂物質(zhì)、環(huán)境污染、毒素等。即，本發(fā)明的飼料添加劑或飼料組合物對(duì)于使人類免于即將到來的糧食危機(jī)是必須的。如上所述，人參的粗皂角甙級(jí)分、人參提取物、人參或人參皂甙可以在10-20重量％～0.1重量％的濃度范圍內(nèi)用作生長調(diào)節(jié)組合物。
另外，人參皂甙如人參皂甙Rb1或粗皂角甙級(jí)分能夠促進(jìn)植物組織的再生、新生或重構(gòu)的這樣一個(gè)事實(shí)支持，低濃度的粗皂角甙級(jí)分或含有粗皂角甙級(jí)分的人參提取物或人參通過促進(jìn)皮膚組織的再生或重構(gòu)，可以用作化學(xué)去皮組合物、化妝品組合物、健康藥組合物、生發(fā)育發(fā)組合物、醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明前述的各組合物，即醫(yī)藥組合物、獸醫(yī)藥組合物、皮膚外用組合物、粘膜外用組合物、健康藥組合物、化妝品組合物、生發(fā)育發(fā)組合物、生長調(diào)節(jié)組合物等優(yōu)選含有低濃度的人參皂甙如人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽。
本發(fā)明的這些組合物可以靜脈內(nèi)給用、粘膜給藥和皮膚外用給藥等腸胃外給用形式給用。更準(zhǔn)確地說，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物、獸醫(yī)藥組合物、健康藥組合物或化妝品組合物優(yōu)選為含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物或它們鹽在低濃度的腸胃外給用制劑、粘膜外用或局部用涂布、外用噴霧制劑或皮膚外用或局部用涂布、外用噴霧制品。
另外，本發(fā)明提供優(yōu)選以低濃度含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽、用于預(yù)防、處置或治療活體組織的病理組織學(xué)變化的疾病的腸胃外給用制劑，優(yōu)選靜脈內(nèi)或血管內(nèi)給用制劑、粘膜外用或局部用劑或皮膚外用或局部用劑。
另外，本發(fā)明提供用于預(yù)防、處置、改善皮膚或粘膜的老化癥狀的化妝品或健康藥，其優(yōu)選以低濃度含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物或它們的鹽。
本發(fā)明的這些組合物優(yōu)選包含在靜脈內(nèi)給用制劑、粘膜外用或局部用劑、皮膚外用或局部用劑或皮膚外用涂布、外用噴霧劑中，也可以選擇病變部位局部外用劑、病變部位局部注射劑、經(jīng)品給用制劑、點(diǎn)鼻藥、點(diǎn)耳藥、點(diǎn)眼藥、眼軟膏、栓劑、皮下注射劑、皮內(nèi)注射劑、肌肉注射劑、吸入藥、舌下藥、人工唾液、關(guān)節(jié)內(nèi)給用劑、經(jīng)皮吸收劑等，以及任意的給藥途徑。另外也可使用緩釋劑。
如上所述，靜脈內(nèi)給用、粘膜外用給用或皮膚外給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，被認(rèn)為通過皮膚組織或粘膜組織的再生、重構(gòu)促進(jìn)作用或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用，表現(xiàn)出預(yù)防、處置、治療前述的所有皮膚疾病和口腔疾病的效果、效能。因此，能夠再生和/或重構(gòu)受損的皮膚組織或粘膜組織至接近受損前的狀態(tài)的、低濃度和/或低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1被認(rèn)為是人類歷史上的第一次。
即，我們首次發(fā)現(xiàn)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物具有皮膚組織或粘膜組織的再生和/或重構(gòu)促進(jìn)作用、特別是皮膚的切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷或缺損后的皮膚組織再生、重構(gòu)的促進(jìn)作用、人口腔粘膜的咬傷后的粘膜組織再生、重構(gòu)促進(jìn)作用、創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用和/或皮膚、真皮、真皮乳頭、皮下組織、粘膜固有層、肌肉組織、結(jié)締組織、毛囊、毛乳頭、立毛肌、皮脂腺、汗腺、唾液腺、粘液腺、混合腺、末梢神經(jīng)、血管、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、黑素細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維或細(xì)胞外基質(zhì)的再生、重構(gòu)促進(jìn)作用。
因此，本發(fā)明提供使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，用以研究或篩選用于預(yù)防、處置或治療前述的皮膚組織及口腔組織或其他器官或組織的疾病的有效成分。另外，在通過對(duì)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的一部分化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾制備前藥后，可以選擇任意給用途徑。另外，通過鑒定人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、或其代謝產(chǎn)物的目標(biāo)分子，目的在于通過合成修飾目標(biāo)分子功能的新型化合物，開發(fā)皮膚疾病治療藥，創(chuàng)傷治愈促進(jìn)劑，皮膚組織再生，重構(gòu)促進(jìn)劑，口腔疾病治療藥，粘膜組織再生，重構(gòu)促進(jìn)劑，抑止皮膚或粘膜的老化癥狀用化妝品。
本發(fā)明提供用作研究或篩選預(yù)防、處置或治療上述的這些疾病的新的有效成分的先導(dǎo)化合物的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、其代謝產(chǎn)物。當(dāng)然，通過利用人參或其提取物或含有人參皂甙Rb1的人參成分或它們的代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，也可開發(fā)用于促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、生長、分化、新生、再生或重構(gòu)的新組合物或肥料組合物。
因此，今后，通過利用人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，可以制備大量用于預(yù)防、處置或治療由皮膚組織或口腔粘膜的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損引起的疾病，或引起皮膚、口腔及其他器官或粘膜的病理組織學(xué)變化的藥劑。
即，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物對(duì)于預(yù)防、處置或治療所有的皮膚組織疾病極為有效。因此，本發(fā)明涉及以人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、或其代謝產(chǎn)物為先導(dǎo)化合物、研究或篩選用于預(yù)防、處置或治療皮膚疾病或后述的口腔粘膜疾病或全部粘膜疾病的有效成分。另外，本發(fā)明涉及使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，用于研究或篩選對(duì)于預(yù)防、處置或治療皮膚組織或粘膜疾病的其他有效成分或化合物。本發(fā)明還涉及通過前述的方法獲得的對(duì)皮膚組織或口腔粘膜疾病的預(yù)防、處置或治療劑。
接下來，將列出以本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物為先導(dǎo)化合物、創(chuàng)制新型衍生物的實(shí)施例。該實(shí)施例涉及通過對(duì)人參皂甙Rb1的氫還原進(jìn)行化學(xué)改性而得的二氫人參皂甙Rb1。
我們首次發(fā)現(xiàn)人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物具有促進(jìn)皮膚組織的再生或重構(gòu)的作用、特別是皮膚產(chǎn)生開放式創(chuàng)傷或缺損后促進(jìn)皮膚組織的再生或重構(gòu)的作用、創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用、或促進(jìn)表皮、真皮、真皮乳頭、皮下組織、粘膜固有層、肌肉組織、結(jié)締組織、毛囊、毛乳頭、立毛肌、皮脂腺、汗腺、唾液腺、粘液腺、混合腺、末梢神經(jīng)、血管、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腺細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、黑素細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維或細(xì)胞外基質(zhì)的再生、重構(gòu)的作用。因此本發(fā)明證明可以使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，用來研究或篩選預(yù)防、處置、或治療上述的皮膚組織或口腔組織及其他器官或組織的疾病的其他有效成分。另外，在通過對(duì)人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的一部分化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行改性作成前藥后，可以選擇任意的給用途徑。當(dāng)然，本發(fā)明說明，通過利用人參或其提取物或含有人參皂甙Rb1的人參成分或它們的代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，可以開發(fā)出用于促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、生長、分化、新生、再生或重構(gòu)的生長調(diào)節(jié)組合物或肥料組合物。
本發(fā)明的二氫人參皂甙Rb1由下面的結(jié)構(gòu)式表示 在PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中揭示，二氫人參皂甙Rb1可以通過下面的方面制備。首先，稱量10.2mg 10％的Pd/c(披鈀木炭)，將其倒入帶有活塞的二口燒瓶中。加入1ml甲醇(特級(jí))使懸浮。在燒瓶上附加氫氣球(約1.1大氣壓)并在0℃下活化催化劑30分鐘。將溶于甲醇(1ml)中的人參皂甙Rb1(19.9g)通過注射器注入燒瓶。在0℃下使用磁力攪拌器劇烈攪拌混合物10.5小時(shí)。使用濾紙及孔徑0.45μm的濾膜過濾反應(yīng)混合物。減壓除去甲醇。將產(chǎn)物溶于純水(10ml)并凍干得19.1mg白色粉末狀二氫人參皂甙Rb1(收率97％)。二氫人參皂甙Rb1的熔點(diǎn)為193～195℃。偶然地人參皂甙Rb1的熔點(diǎn)為197～198℃(參考值)。二氫人參皂甙Rb1的NMR譜圖見PCT/JP00/04102。通過NMR光譜和HPLC確定如此制得的二氫人參皂甙Rb1的純度為98％以上。另外，人參皂甙Rb1以外的人參皂甙可以通過類似還原方法進(jìn)行二氫化。
本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以PCT/JP00/04102所述的游離形式使用，但也可以與適當(dāng)?shù)柠}一起使用。這些也可以以溶劑化物的形式使用如水化物。本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以與人參皂甙Rb1同樣的方式、優(yōu)選以低濃度，混入任何化妝品或健康藥(美容洗劑(潤膚洗液)、乳液、美容液、按摩劑、包裝劑、乳劑、粉底霜、潤手霜、凝膠、洗劑、乳劑、粉末、染發(fā)劑、修發(fā)劑、冷霜、眼影膏、清潔霜、清潔泡沫、夜霜、美白霜、錠劑、止咳糖、撲面粉、口紅、洗浴凝膠、美容香皂、健康飲料水、等滲性水、酒精水稀釋用冰、凍果汁露、冰激凌、酒精飲料、洗眼劑、眼藥水、清潔液、漱口劑、香波、洗發(fā)水、牙粉、牙膏、唇霜、打底化妝品、UV打底液、粉底等)中。人參皂甙衍生物的基質(zhì)以及可以并用的皮膚外用或局部用組合物也與人參皂甙Rb1一樣。按照本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，二氫人參皂甙Rb1用作細(xì)胞保護(hù)劑的細(xì)胞外液濃度為100ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低。在下面的實(shí)施例中明示，含有濃度為0.00001重量％(10-5重量％)至0.0000001重量(10-7重量％)的二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用或局部用劑顯著地縮小了開放式創(chuàng)傷。另外，濃度為0.00001重量％的二氫人參皂甙Rb1被認(rèn)為與約100ng/g或100ng/ml的二氫人參皂甙Rb1幾乎等價(jià)。從這些事實(shí)判斷出，本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1發(fā)揮皮膚組織的再生、重構(gòu)促進(jìn)劑的濃度優(yōu)選為與PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)的描述同樣的低濃度，更具體地，二氫人參皂甙Rb1在病變部位的細(xì)胞外液濃度為100ng/ml或更低，優(yōu)選為10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低。使用本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1用作靜脈內(nèi)給用制劑或皮膚外用劑使用時(shí)，優(yōu)選調(diào)整制劑，以使患者的患部組織中的細(xì)胞外液濃度為前述的濃度。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或制劑即使在患部組織的細(xì)胞外液濃度為0.01～100fg/ml或其以下的濃度(例如，0.00001fg/ml)也能獲得充分的效果。另外，通過將人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1用作化妝品或健康藥組合物，為預(yù)防、治療或改善皮膚或粘膜的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1在皮膚局部或粘膜局部中的細(xì)胞外液濃度保持上述的低濃度。當(dāng)然，盡管人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以與美國專利5,663,160所述的其他化妝品組合物一起混入化妝品中，但所述的其他化妝品組合物的特征是其使用的濃度比美國專利5,663,160中描述的濃度低。盡管人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以與其他化妝品組合物或健康組合物一起混入每種化妝品或健康藥中，但與人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1一起使用的所述的化妝品組合物或所述健康藥學(xué)組合物應(yīng)優(yōu)選使用比在先的參考文獻(xiàn)和專利說明書中所述的濃度低。
因此，本發(fā)明的化妝品組合物或健康藥組合物可包含在每種產(chǎn)品中，所述的產(chǎn)品不僅包括常規(guī)的化妝品，而且包括準(zhǔn)藥物如牙膏和香波及直接或間接接觸活體表皮或口腔粘膜等粘膜的健康用品。
如下面的實(shí)施例所示，二氫人參皂甙Rb1以幾乎與人參皂甙Rb1同樣的低濃度和低濃度范圍抑制神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡，并通過外部或局部給藥促進(jìn)皮膚的開放式創(chuàng)傷的治愈。另外，如PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)所發(fā)明的，含有二氫人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用制劑以與含有人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用制劑幾乎相同的用量，具有優(yōu)良的腦梗塞治療效果。即，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的效果、效能和用途，與人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1類似?；谶@樣的推測，本發(fā)明中所明示的人參皂甙Rb1的效果、效能和用途可以適用于人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1在。因此，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣，可以用作植物組織的生根、發(fā)芽、生長、新生、分化、再生或重構(gòu)促進(jìn)劑或肥料組合物、魚貝類、海產(chǎn)資源、水產(chǎn)資源、家畜或?qū)櫸锏纳L、保護(hù)或養(yǎng)殖用的組合物或生長調(diào)節(jié)組合物。很自然地，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可用作前述的靜脈內(nèi)給用制劑或粘膜外用或局部用劑。以下將對(duì)此進(jìn)行描述。
本發(fā)明的含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用制劑，可以直接血管內(nèi)、優(yōu)選靜脈內(nèi)給用，以溶解于生理鹽水、蒸餾水、磷酸鹽緩沖液、葡萄糖溶液、脂質(zhì)體、脂肪乳劑等中后，可以作為單次靜脈內(nèi)注入用制劑或靜脈內(nèi)連續(xù)給用制劑。另外，也可以添加到點(diǎn)滴用的組合物等靜脈內(nèi)給用制劑中制成的劑型使用。另外，可對(duì)人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的部分化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行改性，制備前藥，并且可以選擇任意給用途徑。例如，通過酯化二氫人參皂甙Rb1的一個(gè)羥基制備前藥后，通過內(nèi)因性酯酶加水分解，可以使其發(fā)揮二氫人參皂甙Rb1在活體組織中的作用。含有本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1、用于預(yù)防、處置或治療引起活體組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的皮膚外用或局部用劑或粘膜外用或局部用劑，可通過將優(yōu)選低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1混入任意基質(zhì)如水溶性基質(zhì)(霜?jiǎng)┑?、乳劑基質(zhì)、配合劑或脂溶性基質(zhì)(軟膏基質(zhì))中制成。另外，與阿氟他(aphtouch)一樣，低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以混入粘附在粘膜上的制劑中。具體地，在每100g水溶性基質(zhì)、乳劑性基質(zhì)、配合劑或軟膏基質(zhì)(脂溶性基質(zhì))例如眼科用白凡士林(propet)中混入濃度為1g(1重量％)或更低、優(yōu)選10mg(0.01重量％)或更低、更優(yōu)選0.1mg(0.0001重量％)或更低、及1fg(10-15重量％)或更高的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1后，所得的制劑可以作為預(yù)防、處置或治療前述疾病的皮膚外用或局部用劑或粘膜外用或局部用劑使用。當(dāng)然，在前述的皮膚外用或局部用劑或粘膜外用或局部用劑中，也可以混入除人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1以外的其他任意醫(yī)藥組合物(例如，葡萄糖、抗生素、維生素E、維生素E衍生物、維生素D、維生素D衍生物、維生素類、抗病毒劑、免疫抑制劑、抗過敏劑、類固醇、人參成分、天然物質(zhì)成分等)。特別是對(duì)于過敏性皮膚粘膜疾病如特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎或花粉癥，如果在含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用或局部用劑或粘膜外用或局部用劑中混入常用量以下或低于過去的專利說明書中公開的用量的類固醇(劑)、抗過敏醫(yī)藥組合物(劑)或免疫抑制醫(yī)藥組合物(劑)，可以獲得優(yōu)良的效果。另外，含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑或粘膜外用劑可以與含有其他任意的醫(yī)藥組合物的皮膚外用劑或粘膜外用劑并用。用于預(yù)防、處置、治療前述疾病的皮膚外用劑或粘膜外用劑中人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的濃度上限為10重量％或更低，優(yōu)選1重量％或更低。
當(dāng)在液狀化妝品例如通常的UV打底液中混入人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1時(shí)，其濃度被調(diào)節(jié)為100μg/ml或更低，優(yōu)選10ng/ml或更低，更優(yōu)選0.01fg/ml，并且如果將該混合物連日向皮膚外用涂布或外用噴霧，皮膚局部中人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度如前所述維持低濃度。這樣該混合物可用于改善皮膚的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)、預(yù)防其發(fā)展或預(yù)防其惡化。當(dāng)在固形、凝膠狀或霜狀化妝品如通常的粉底霜或晚霜中混入人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1時(shí)，其在每g霜?jiǎng)┲械幕烊肓空{(diào)整為100μg或更低，優(yōu)選10ng或更低，更優(yōu)選0.01fg-100pg，然后如果該混合物被連日向皮膚外用噴霧，可用于預(yù)防、改善或處置皮膚的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)。但是，當(dāng)在任意化妝品中混入人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1并極長期地使用時(shí)，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的含量可以減少至每g化妝品0.0000001fg。在上述用于預(yù)防、改善或處置皮膚的老化癥狀的化妝品中混入的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的濃度上限是對(duì)液狀化妝品是10mg/ml或更低，對(duì)固形、凝膠狀或霜狀化妝品是10mg/g或更低，即1重量％或更低。但是，象1重量％這樣的高濃度的人參皂甙衍生物可以損害皮膚中的正常細(xì)胞膜。即，當(dāng)在長期使用的化妝品或健康藥中混入人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1時(shí)，與本發(fā)明的前述的用于預(yù)防、處置或治療皮膚疾病和粘膜疾病的外用劑中的濃度相比，降低最佳濃度被認(rèn)為是安全的。當(dāng)然，如前所述，含有微量人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的化妝品可以外用涂布或噴霧到面部，也可以向頻繁受日光照射的皮膚區(qū)域(例如，四肢、軀干、頸、頭等)外用涂布或外用噴霧。如所述的，當(dāng)含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的化妝品或健康藥經(jīng)常被長期使用時(shí)，伴隨皮膚老化的癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)可被預(yù)防或改善。但是，混入皮膚外用劑或粘膜外用劑、健康藥或化妝品中的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的量是試驗(yàn)值，實(shí)際上應(yīng)調(diào)整人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的混入量，以使人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度保持在100ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低。當(dāng)然，粘膜的老化(萎縮、上皮剝離、粘膜剝離、再生不良、發(fā)育不全、龜裂、干燥等)可通過在健康藥(例如，含漱劑、洗眼液、健康飲料水、健康飲料食品等)中混入低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1得到預(yù)防、改善或減輕。
本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣，通過向皮膚切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷或缺損發(fā)病后靜脈內(nèi)連續(xù)給用一周或單次或連日向皮膚局部外用涂布、噴霧，被認(rèn)為促進(jìn)脫落的皮膚組織的再生、重構(gòu)，加速創(chuàng)傷治愈。本發(fā)明的二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣，通過在口腔粘膜咬傷后一周左右向創(chuàng)傷部位每日1～10次外用涂布，被認(rèn)為促進(jìn)脫落的口腔粘膜組織的再生、重構(gòu)，加速創(chuàng)傷治愈。因此，靜脈內(nèi)給用、粘膜外用給用或皮膚外用給用人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣，通過促進(jìn)皮膚組織和粘膜組織的再生、重構(gòu)的作用或促進(jìn)創(chuàng)傷治愈的作用，顯示出預(yù)防、治療、處置前述的所有皮膚疾病或口腔粘膜疾病的效果、效能。通過使用二氫人參皂甙Rb1完成的本發(fā)明說明，今后通過利用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，可制備成大量預(yù)防、治療或處置由皮膚組織或口腔粘膜的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損引起的疾病或引起皮膚、口腔及其他器官或粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病的藥劑。
另外，靜脈內(nèi)連續(xù)給用、口腔粘膜外用給用或皮膚外用給用人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，被認(rèn)為通過促進(jìn)受到損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損的皮膚組織或口腔粘膜組織的再生、重構(gòu)，促進(jìn)創(chuàng)傷的治愈。基于這一事實(shí)，靜脈內(nèi)給用或局部給用人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，被認(rèn)為對(duì)于因腹部或胸部的內(nèi)器官、頭頸部器官、及骨、關(guān)節(jié)、韌帶、肌肉、血管、神經(jīng)的損傷、外傷、創(chuàng)傷或缺損引起的疾病或引起同樣的器官的病理組織學(xué)變化的所有疾病，與皮膚組織或口腔粘膜組織的損傷、創(chuàng)傷、外傷、缺損的場合一樣，通過組織再生、重構(gòu)的促進(jìn)作用或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用，發(fā)揮效果、效能。因此，對(duì)于外科處置及手術(shù)中器官切斷縫合部恢復(fù)的促進(jìn)；縫合不全的防止；消化性潰瘍病變的預(yù)防、治療、處置；肝、腎、脾、胰、肺、腸、消化器官、泌尿生殖器、內(nèi)分泌腺、外分泌腺、子宮、膀胱、膽的切除手術(shù)后器官的再生、重構(gòu)的促進(jìn)；骨、關(guān)節(jié)、韌帶、腱、末梢神經(jīng)、髓膜的再建手術(shù)(整形外科及腦神經(jīng)外科手術(shù))中該組織的再生、重構(gòu)的促進(jìn)；肝、腎、脾、胰、肺、腸、泌尿生殖器等器官的損傷、創(chuàng)傷、外傷、缺損的預(yù)防、治療、處置，低用量、低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用、手術(shù)中局部給用、點(diǎn)鼻給用、直腸內(nèi)給用等也是有效的。另外，對(duì)于引起前述器官、組織的病理組織學(xué)變化的內(nèi)因性、外因性疾病，低用量、低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也是有效的。這樣的疾病，包括在書籍(《今日治療指南》，日野原重明、阿部正和編著，醫(yī)學(xué)書院；1995；《今日治療指南》，多賀須幸男、尾形悅朗編著，醫(yī)學(xué)書院；2000；或今日整形外科治療指南第4版，二ノ宮節(jié)夫、富士川恭輔、國分正一編著，醫(yī)學(xué)書院；2000)中記載的所有疾病或病理狀態(tài)。本發(fā)明的低濃度、低用量的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1不僅可用于人，而且可用于寵物和家畜的疾病、創(chuàng)傷或外傷的預(yù)防、治療或處置。另外，低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可用于海產(chǎn)物(魚貝類、甲殼類、鰻魚、海鰻、牡蠣、裙帶菜、珍珠貝等)及水產(chǎn)物的養(yǎng)殖或農(nóng)作物的栽培。此時(shí)，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1被認(rèn)為能保護(hù)海洋資源或農(nóng)作物免受內(nèi)分泌攪亂物質(zhì)、毒素、外傷、微生物、生物危害、環(huán)境污染等。另外，在水栽培中，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以加到栽培用水中，以增加蔬菜的產(chǎn)量。
另外，本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的一個(gè)不能忽視的特征是它們不表現(xiàn)明顯的副作用或有害影響。實(shí)際上，如PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)所示，對(duì)于目的在于通過對(duì)體重約300g的大鼠每天6μg靜脈內(nèi)連續(xù)給用以處理或治療腦梗塞，二氫人參皂甙Rb1被認(rèn)為是非常安全的醫(yī)藥組合物。作為皮膚外用劑或粘膜外用劑使用的人參皂甙Rb1的給用量，遠(yuǎn)比靜脈內(nèi)給用量少。當(dāng)然，在本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)中，仔細(xì)觀察皮膚外用給用了本發(fā)明的二氫人參皂甙Rb1的動(dòng)物時(shí)，沒有檢出副作用。
如后述的實(shí)施例所示，通過向大鼠的開放式創(chuàng)傷涂布含有0.00001重量％(10-5重量％)、0.000001重量％(10-6重量％)或0.0000001重量％(10-7重量％)的二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑，明顯地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈及皮膚組織再生、重構(gòu)，開放式創(chuàng)傷的面積的平均值縮小至對(duì)照組的約1/2～1/4。但是，0.0001重量％(10-4重量％)濃度的二氫人參皂甙Rb1的大鼠開放式創(chuàng)傷治療效果很輕微，所以人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1優(yōu)選應(yīng)以0.0001重量％以下或更低的濃度混入皮膚外用劑中。這些事實(shí)說明，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1對(duì)于預(yù)防、治療或處置顯示皮膚組織損傷、缺損、變性脫落的疾病(皮膚的潰瘍、外傷、灼傷、凍傷、紫外線損傷、放射線損傷、電擊傷、褥瘡、創(chuàng)傷、水皰性皮膚疾病等)以及引起皮膚病理組織學(xué)變化的疾病(例如，今日皮膚疾病治療指南第2版，池田重雄、今村貞夫、大城戶宗男、荒田次朗編著，醫(yī)學(xué)書院；1996記載的疾病，以及創(chuàng)傷、燙傷、灼傷、放射線損傷、凍傷、紫外線損傷、電擊傷、外傷、皮膚潰瘍、褥瘡、接觸性皮炎、水皰性皮炎、特應(yīng)性皮炎、干皮癥、糖尿病性皮膚潰瘍、自體敏感性皮炎、紅皮病、剝脫性皮炎、表皮水皰癥、光線過敏癥、進(jìn)行性色素病(Schamberg病)、嬰兒苔癬、螫傷、蟲咬、癢疹、多形性紅斑、環(huán)形紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎、掌足膿皰癥、牛皮癬、扁平苔癬、魚鱗癬、毛發(fā)苔癬、黃瘤癥、皮膚淀粉樣變性、單純皰疹、病毒性疣、觸染性軟疣、膿皮病、皮膚結(jié)核、皮膚非典型分支桿菌病、癬、發(fā)癬菌疹、發(fā)癬菌癥、皮膚或口腔念珠菌病、疥瘡、毛虱病、虱病、梅毒、瘢痕瘤、肥厚性瘢痕、血管瘤、淋巴瘤、痣、尋常性白斑、雀斑、黃褐斑、黑皮病、汗皰疹、栗疹、尋常性痤瘡、酒糟鼻(紅斑痤瘡)、酒糟鼻(紅斑痤瘡)樣皮炎、口腔粘膜損傷、口腔炎、口周皮炎、皮膚的老化癥狀、脫發(fā)癥、指甲周圍疾病、嵌甲等)是有用的。很自然地，顯示皮膚組織的損傷、缺損、變性脫落的疾病也包括在引起皮膚的病理組織學(xué)變化的疾病當(dāng)中。當(dāng)然，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與低濃度、低用量的人參皂甙Rb1一樣，對(duì)于預(yù)防、處置或治療引起粘膜組織包括口腔粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病，如齲齒、牙髓炎、邊緣性牙周炎、口腔炎、舌炎、復(fù)發(fā)性口瘡性口炎、口腔內(nèi)口瘡、口臭、口腔觸物感痛、牙原性感染、口腔粘膜咬傷、舌咬傷、口腔粘膜灼傷、舌灼傷、舌損傷、口腔粘膜損傷、牙齦炎、牙槽膿溢、卡他性口炎、壞疽性口炎、文森特口炎、口瘡性口炎、急性皰疹性齦口炎、皰疹性咽峽炎、帶狀皰疹、口腔粘膜糜爛、口腔粘膜潰瘍、褥瘡、放射性口炎、天皰瘡、口腔念珠菌病、扁平苔癬、雷弗病(Riga-Fede disease)、光舌、紅平舌、角膜腐蝕、角膜潰瘍、干眼病、斯約格林綜合癥(Sjgren’s syndrome)等是有用的。
在PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中，我們(阪中和田中)發(fā)現(xiàn)以6μg/天-60μg/天的劑量向患有腦梗塞的大鼠(體重約300g)靜脈內(nèi)給用二氫人參皂甙Rb1，對(duì)腦梗塞顯示優(yōu)良的治療效果。另外，以用樣的劑量靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1時(shí)，也表現(xiàn)出對(duì)腦梗塞的優(yōu)良治療效果、創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用或皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用。因此，以與前述同樣的劑量靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1時(shí)，可能表現(xiàn)出優(yōu)良的創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用或皮膚再生和重構(gòu)促進(jìn)作用?；谏鲜龅倪@些實(shí)驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)計(jì)算，對(duì)于患有由皮膚組織或粘膜組織的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損引起的疾病或引起皮膚或粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病的病人或脊椎動(dòng)物(體重估計(jì)為60kg)的靜脈內(nèi)最佳給藥(人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1)量為每天1.2mg至12mg。因此，本發(fā)明的醫(yī)藥用于預(yù)防、治療或處置人的皮膚疾病或粘膜疾病時(shí)，每天的全身給藥量隨因患者的個(gè)人差異而有所不同，但為0.001mg或更高，優(yōu)選0.1mg或更高，更優(yōu)選1mg或更高，進(jìn)一步優(yōu)選10mg以上。但是，由于一般隨動(dòng)物的體重增加，每千克體重的必須給藥量降低，所以對(duì)于人，存在該劑量的1/10或更低的劑量也能顯示充分的效果、效能的可能性。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的副作用少，且對(duì)于預(yù)防、處置或治療上述的皮膚疾病的給用量上限可以設(shè)定得很高，但每天為1g或更低，優(yōu)選每天0.1g或更低。另外，在10g皮膚外用劑或粘膜外用劑中含有的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的量也可為100mg或更低，優(yōu)選1mg或更低，更優(yōu)選0.001mg或更低，進(jìn)一步更優(yōu)選0.00001mg或更低。即，對(duì)于患有皮膚疾病或粘膜疾病的人的每天的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的皮膚或粘膜外用給藥量因癥狀或個(gè)人差異而有所不同，但通常為100mg或更低，優(yōu)選1mg或更低，更優(yōu)選0.001mg或更低，進(jìn)一步優(yōu)選0.00001mg或更低。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物的給用方法優(yōu)選血管內(nèi)給用特別靜脈內(nèi)給用，也可以將前述的給藥量斷續(xù)地或連續(xù)地給用。本發(fā)明的有效成分一人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1是一種皂角甙，可通過常規(guī)的方法進(jìn)行制劑化。例如，將本發(fā)明的水溶性醫(yī)藥組合物的凍干結(jié)晶溶解于生理鹽水、蒸餾水、磷酸鹽緩沖液、葡萄糖溶液等中，可以進(jìn)行靜脈內(nèi)給用。當(dāng)然，也可以在前述的溶解后，添加到點(diǎn)滴用的組合物等靜脈內(nèi)給用制劑中使用。另外，其也可用作脂肪乳劑、脂質(zhì)體制劑、緩釋劑。靜脈內(nèi)給用時(shí)的制劑的濃度只要不是太高，可以任意調(diào)整濃度，例如0.001-100mg/ml，優(yōu)選0.01-10mg/ml，更優(yōu)選0.1-1mg/ml。當(dāng)利用人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1作為前述疾病的預(yù)防、處置或治療用的皮膚外用劑或粘膜外用劑時(shí)，可在任意基質(zhì)如水溶性基質(zhì)、乳劑性基質(zhì)、軟膏基質(zhì)、配合劑或脂溶性基質(zhì)中混入濃度為1重量％或更低、優(yōu)選0.01重量％或更低、更優(yōu)選0.0001重量％或更低、進(jìn)一步更優(yōu)選0.000001重量％或更低，以及10-15重量％或更高的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，如上所述。但是，長期給用含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑時(shí)，或向患有輕度皮膚創(chuàng)傷的患者給用時(shí)，其濃度可以減至10-20重量％。前述皮膚外用劑或粘膜外用劑中人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的濃度上限是10重量％或更低。含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑可以是皮膚局部涂布的形式或噴霧的形式。人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以混入任意常規(guī)的化妝品和含有任意活性成分的新型化妝品中，且化妝品中人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的濃度優(yōu)選保持低于0.001重量％(10-3重量％)，和10-15重量％或更高。但是如果含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的化妝品或健康藥被極長期使用，其濃度可減至10-20重量％。另外，含有前述的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑、粘膜外用劑、健康藥或化妝品，如果在病變局部或皮膚局部中人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度保持為100ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低，不僅可以單次皮膚或粘膜外用給用，而且可以連日皮膚或粘膜外用給用，或者也可以外用涂布或外用噴霧。
人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣，通過靜脈內(nèi)連續(xù)給用可以顯示優(yōu)良的效果，但實(shí)際上在一般的門診部治療患有由皮膚組織的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損引起的疾病或引起皮膚的病理組織學(xué)變化的疾病時(shí)，可以每天靜脈內(nèi)給用連續(xù)數(shù)天，直至觀察到效果。另外，連日將人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與點(diǎn)滴用組合物混合并靜脈內(nèi)給用約1小時(shí)，直到觀察到效果。當(dāng)然，在患有皮膚的創(chuàng)傷、切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷、褥瘡、潰瘍、灼傷、外傷、凍傷、放射線損傷、紫外線損傷、電擊傷、水皰性皮炎、接觸性皮炎、特應(yīng)性皮炎、干皮癥、自體敏感性皮炎、紅皮癥、花粉癥、剝脫性皮炎、表皮水皰癥、光線過敏癥、進(jìn)行性色素病(Schamberg病)、嬰兒苔癬、螫傷、蟲咬、癢疹、多形性紅斑、環(huán)形紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎、掌足膿皰癥、牛皮癬、扁平苔癬、魚鱗癬、毛發(fā)苔癬、黃瘤癥、皮膚淀粉樣變性、單純皰疹、病毒性疣、觸染性軟疣、膿皮病、皮膚結(jié)核、皮膚非典型分支桿菌病、癬、發(fā)癬菌疹、發(fā)癬菌癥、皮膚或口腔念珠菌病、疥瘡、毛虱病、虱病、梅毒、瘢痕瘤、肥厚性瘢痕、血管瘤、淋巴瘤、痣、尋常性白斑、雀斑、黃褐斑、黑皮病、汗皰疹、栗疹、尋常性痤瘡、酒糟鼻(紅斑痤瘡)、酒糟鼻(紅斑痤瘡)樣皮炎、口腔粘膜損傷、口腔炎、口周皮炎、皮膚的老化癥狀、脫發(fā)癥、指甲周圍疾病、嵌甲等的患者中，對(duì)于需要長期入院治療的人，可以以例如過營養(yǎng)(IVH)制劑中添加人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的、同上的化合物超過一個(gè)月時(shí)間長期靜脈內(nèi)給物。當(dāng)然，為預(yù)防、處置或治療前述的疾病，將含有人參皂甙特別是二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑或粘膜外用劑連日在病變局部涂布或噴霧必要的次數(shù)(1天1～10次)也可以。
本發(fā)明也首次在世界上報(bào)道，低劑量和低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1將受到開放式創(chuàng)傷(缺損)的皮膚的表皮組織、真皮的結(jié)締組織、真皮的乳頭、皮下組織、毛囊、毛乳頭、立毛肌、汗腺、皮脂腺、末梢神經(jīng)、血管迅速地再生和重構(gòu)至接近受損前的狀態(tài)。人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1促進(jìn)表皮(上皮)組織、結(jié)締組織、血管、末梢神經(jīng)和腺組織的再生和/或重構(gòu)的事實(shí)說明，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1對(duì)于再生和/或重構(gòu)不僅皮膚而且其他的組織(例如，中樞神經(jīng)組織、肝、腎、脾、造血組織、消化道、肺、胰、角膜、內(nèi)分泌腺、外分泌腺、唾液腺、性腺、膀胱等)是有效的。即，靜脈內(nèi)給用、直腸內(nèi)給用、手術(shù)中局部給用、點(diǎn)鼻給用或病變部位局部給用人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，對(duì)于再生和/重構(gòu)肝炎、肝切除及肝局部缺血再灌流后的肝組織再生和/或重構(gòu)；神經(jīng)外傷(頭部外傷、脊髓損傷)后中樞神經(jīng)的再生和/或重構(gòu)；切斷指趾的再生、重構(gòu)或固著；腎炎或急性腎小管壞死后的腎組織再生和/或重構(gòu)；脾、胰、肺切除后的再生和/重構(gòu)；移植骨髓的再生和/或固著；鼓膜損傷、角膜損傷、角膜糜爛、角膜潰瘍、指甲損傷或疾病、消化性潰瘍的預(yù)防、治療、處置；外科手術(shù)(胸腹部外科手術(shù)、整形外科手術(shù)、美容外科手術(shù)、產(chǎn)婦外科手術(shù)、泌尿器外科手術(shù)、眼科手術(shù)、頭頸部外科手術(shù)、牙科口腔外科手術(shù)、五官科手術(shù)、獸醫(yī)學(xué)手術(shù)、腦神經(jīng)外科手術(shù))后受到損傷或損害的該器官、組織的再生和/或重構(gòu)是有效的。當(dāng)然，除上述的疾病和外傷以外，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1通過組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用，對(duì)引起所有器官和組織的病理組織學(xué)變化的預(yù)防、處置或治療具有效果和效能。期待人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1適應(yīng)的疾病和病理狀態(tài)，看來是包括在書籍(《今日治療指南》，日野原重明、阿部正和編著，醫(yī)學(xué)書院；1995；《今日治療指南》，多賀須幸男、尾形悅朗編著，醫(yī)學(xué)書院，2000)中記載的所有疾病和病理狀態(tài)。當(dāng)然，即使將來出現(xiàn)原因不明的新的器質(zhì)性疾病，如果這樣的疾病是引起活體組織的病理組織學(xué)變化的疾病，則期待人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的適用。如上所述，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的效果、效能和用途與人參皂甙Rb1的效果、效能和用途一致。另外，如后述的實(shí)施例所示，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1能夠抑制神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞等的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡。因此，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1對(duì)伴隨有細(xì)胞死亡的所有疾病都表現(xiàn)出效果和效能。引起細(xì)胞死亡的疾病在PCT/JP00/04102中有記載。另外，在PCT/JP00/04102中有記載，二氫人參皂甙Rb1通過靜脈內(nèi)給用，對(duì)腦中風(fēng)和腦梗塞也表現(xiàn)出優(yōu)良的治療效果。
另外，在皮膚的開放式創(chuàng)傷(缺損)中，很自然地毛囊迅速脫落，但通過皮膚外用給用低用量或低濃度的二氫人參皂甙Rb1，明顯促進(jìn)開放式創(chuàng)傷部位的毛發(fā)修復(fù)、毛發(fā)生長和/或生發(fā)。從該事實(shí)可以判斷出，皮膚外用給用低用量或低濃度的二氫人參皂甙Rb1通過促進(jìn)開放式創(chuàng)傷(皮膚的缺損)出現(xiàn)后相同部位的毛發(fā)修復(fù)、毛發(fā)生長和/生發(fā)，可以說再生、重構(gòu)、修復(fù)和/或恢復(fù)創(chuàng)傷部位至接近原始健康的狀態(tài)。即，說明了低用量或低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以用作毛發(fā)修復(fù)和生發(fā)作用促進(jìn)劑、或用作脫毛進(jìn)行預(yù)防劑。當(dāng)然，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1在混入任意基質(zhì)或載體后可以單獨(dú)用作生毛、育毛組合物，或可以與其他的醫(yī)藥組合物(例如，血流促進(jìn)組合物、局部刺激用組合物、毛囊激活組合物、抗男性激素、抗皮脂溢組合物、角質(zhì)溶解用組合物、抗生素、草藥提取物、維生素、氨基酸等)結(jié)合使用。具體地，靜脈內(nèi)給用或局部外用涂布低用量或低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1看來對(duì)斑禿、男性型脫毛癥、慢性脫毛癥有效。另外，在皮膚的開放式創(chuàng)傷(缺損)中，盡管分布在皮膚中的末梢神經(jīng)和血管被破壞或切斷，但通過靜脈內(nèi)給用或皮膚外給用人參皂甙Rb1，這些末梢神經(jīng)和血管可被明顯再生、重構(gòu)、修復(fù)和/或恢復(fù)至接近原始的健康狀態(tài)。因此，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可用作促進(jìn)神經(jīng)組織和血管組織的再生和/或重構(gòu)的醫(yī)藥組合物。即，在糖尿病性神經(jīng)病、椎間盤突出、脊椎管狹窄、脊椎分離、脊椎前移、頸椎病、頸部脊椎性脊髓癥、脊髓病性神經(jīng)根癥、后韌帶骨化癥、面部神經(jīng)麻痹、脊髓損傷、末梢神經(jīng)病、壓迫性神經(jīng)病、頭損傷、神經(jīng)外傷、神經(jīng)痛、神經(jīng)變性疾病、末梢神經(jīng)麻痹和腦中風(fēng)中，靜脈內(nèi)給用、局部給用、點(diǎn)鼻給用、直腸給用等人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，看來通過促進(jìn)一次受損的神經(jīng)組織的再生和/或重構(gòu)發(fā)揮效果和效能。另一方面，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1看來通過促進(jìn)血管的再生和/或重構(gòu)，對(duì)主要癥狀為血流障礙的疾病(主動(dòng)脈炎綜合癥、膠原病、末梢動(dòng)脈閉塞癥、閉塞性血栓血管炎、閉塞性動(dòng)脈硬化癥、血栓性靜脈炎、糖尿病性皮膚潰瘍、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、視網(wǎng)膜中心動(dòng)靜脈閉塞癥、雷諾氏病、雷諾氏綜合癥、心肌梗塞、褥瘡、痔疾、肛周炎、骨壞死、骨端癥、變性治愈骨折、延遲治愈骨折等)表現(xiàn)出效果和效能。上述的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的效果、效能和用途與人參皂甙Rb1的效果、效能和用途一致。
如上所述，二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用涂布促進(jìn)皮膚的表皮組織、真皮結(jié)締組織、真皮乳頭、皮下組織、血管、立毛肌、皮脂腺、汗腺、毛乳頭、毛囊等的再生和/或重構(gòu)的這樣一個(gè)事實(shí)很自然地證明，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用涂布促進(jìn)表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、黑素細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、真皮及皮下組織的成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、間葉細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞、膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維、細(xì)胞外基質(zhì)等的再生和/或重構(gòu)。即，人參皂甙衍生物特別二氫人參皂甙Rb1被認(rèn)為促進(jìn)構(gòu)成皮膚組織的所有細(xì)胞或其分泌成分的再生和/或重構(gòu)。另一方面，伴隨老齡的各種皮膚癥狀(皮膚的萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)被認(rèn)為是由于上述組織構(gòu)成細(xì)胞受到紫外線或伴隨活體老化漸漸死亡或機(jī)能不全、并且不能再生至原始的健康狀態(tài)而發(fā)生的。例如，伴隨老齡和老化的皮膚粗糙、干燥、脫毛、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角層剝離、龜裂、皮脂缺乏、瘙癢等被認(rèn)為由于汗腺、毛囊及脂腺的細(xì)胞發(fā)生機(jī)能障礙或死亡后再生不良引起的。另外，曬斑、色素沉著、雀斑、黃褐斑可能是由于即使被日光或紫外線照射的皮膚細(xì)胞死亡后細(xì)胞不能充分再生至原始狀態(tài)而產(chǎn)生的。另外，可以說皮膚的皺紋、松弛、萎縮是由于真皮和皮下組織中的成纖維細(xì)胞和間葉細(xì)胞隨老齡數(shù)量減少，且真皮或皮下組織不能保持足夠的膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀/或細(xì)胞外基質(zhì)而產(chǎn)生和。另一方面，白發(fā)或灰發(fā)的增加可能是由于黑素細(xì)胞的機(jī)能障礙引起的。另外，由于朗氏細(xì)胞機(jī)能障礙，皮膚的免疫功能減弱而產(chǎn)生易感染性。由于本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1能夠促進(jìn)構(gòu)成皮膚組織所有細(xì)胞及其分泌成分的再生/或重構(gòu)，因此如果人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1用作化妝品組合物，伴隨老化的皮膚構(gòu)成細(xì)胞的減少(細(xì)胞死亡)、機(jī)能障礙引起的諸癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)可以被預(yù)防、減輕或改善。另外，二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣，被認(rèn)為保護(hù)所有皮膚細(xì)胞，包括表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞即黑素細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、血管平滑細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等，因此，其可能可以預(yù)防伴隨老齡或老化的皮膚構(gòu)成細(xì)胞的死亡或機(jī)能障礙。如上所述，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1不僅保護(hù)所有構(gòu)成皮膚的細(xì)胞，而且一旦皮膚細(xì)胞發(fā)生死亡或機(jī)能障礙，能夠促進(jìn)細(xì)胞的再生和/或重構(gòu)。因此，其能夠預(yù)防、改善或減輕伴隨老齡的皮膚老化癥狀(皮膚的收縮或萎縮、易受感染性、松弛、龜裂、瘙癢、裂紋、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞或角質(zhì)化細(xì)胞的脫落、角質(zhì)層的脫落、皺紋、雀斑、皺紋、灰發(fā)、頭屑、脫毛、色素沉著、再生不充分、曬斑、發(fā)育不全、干燥等)。即，可以說人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以通過兩種作用預(yù)防、改善或減輕伴隨老齡的皮膚老化癥狀細(xì)胞保護(hù)作用及組織和細(xì)胞再生促進(jìn)作用。另外，如本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果所證明的，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙當(dāng)在病變細(xì)胞和皮膚組織的細(xì)胞外液濃度為100ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低時(shí)表現(xiàn)出細(xì)胞保護(hù)作用及組織和細(xì)胞再生促進(jìn)作用。當(dāng)然，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣，作為預(yù)防、改善或減累粘膜的老化癥狀(萎縮、粘膜剝離、上皮剝離、再生不良、龜裂、干燥等)的健康藥組合物也是有用的。
因此，在每種化妝品或健康藥物(美容洗劑(潤膚洗液)、乳液、美容液、按摩劑、包裝劑、乳劑、粉底霜、潤手霜、凝膠、洗劑、乳劑、粉末、染發(fā)劑、修發(fā)劑、冷霜、眼影膏、清潔霜、清潔泡沫、夜霜、美白霜、錠劑、止咳糖、撲面粉、口紅、洗浴凝膠、美容香皂、健康飲料水、等滲性水、酒精水稀釋用冰、凍果汁露、冰激凌、酒精飲料、洗眼劑、眼藥水、清潔液、漱口劑、香波、洗發(fā)水、牙粉、牙膏、唇霜、打底化妝品、UV打底液、粉底等)中混入微量人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1并用來保持人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1在皮膚局部或粘膜局部中的細(xì)胞外液濃度為上述的低濃度，可以對(duì)伴隨老齡的皮膚老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)表現(xiàn)出優(yōu)良的效果。例如，即使僅僅是伴隨老齡的皮膚脂肪(即皮脂)缺乏，也會(huì)引起皮膚的粗糙、瘙癢、龜裂、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角層剝離、皺裂、干燥等，但通過在每種化妝品中混入低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，可以認(rèn)為皮脂腺的保護(hù)或再生和/或重構(gòu)被促進(jìn)，預(yù)防、改善或減輕了前述的伴隨老齡的皮膚老化癥狀。另外，由于含有低濃度人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的任何化妝品不僅保護(hù)表皮細(xì)胞(表皮角化細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞)，而且促進(jìn)它們的再生，因此通過促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞間脂質(zhì)或天然保濕因子的產(chǎn)生或分泌，該化妝品可以抑制皮膚干燥和粗糙，在皮膚中提供自然的水分。在化學(xué)去皮中，低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1作為促進(jìn)皮膚組織的再生和/或重構(gòu)的組合物，可以混入在化學(xué)去皮的全過程(前、中、后)使用的試劑或給用劑的一種或兩種以上中。人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1通過用作護(hù)理設(shè)施、溫泉保養(yǎng)設(shè)施、醫(yī)院中的浴劑，可用于預(yù)防、處置和/或改善皮膚的老化癥著。通過在敷劑、消毒藥、洗凈劑、絆創(chuàng)膏、涂覆劑中混入人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，可以促進(jìn)創(chuàng)傷的治愈，防止其惡化。至于二氫人參皂甙Rb1的基質(zhì)及可以并用的皮膚外用組合物，與人參皂甙Rb1一樣。
本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣，可以促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、新生、生長、再生或重構(gòu)。作為肥料組合物或生長調(diào)節(jié)組合物，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1單獨(dú)、或與其他有效成分一起用于水栽培時(shí)，水栽培溶液中人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的濃度(即植物組織的細(xì)胞外液濃度)調(diào)節(jié)為100ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低。本發(fā)明的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1即使在約0.0001～0.01fg/ml的濃度范圍也能充分促進(jìn)水栽培植物組織的生根、發(fā)芽、生長、分化、再生、新生或重構(gòu)，可用于包括蔬菜、果實(shí)、鮮花在內(nèi)的農(nóng)作物、植物的保存、生長、栽培、改良。另外，在任意的固形肥料、凝膠狀肥料、液狀肥料、液體肥料、粉末狀肥料(例如單肥、土壤改良材料或肥料、育苗肥料、水稻、麥用肥料、緩釋性肥料、高度化學(xué)合成肥料、低度化學(xué)合成肥料、有機(jī)化合物肥料、NK-PK-PM化合物肥料、有機(jī)混合肥料、液肥等)中添加或混入人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1時(shí)，其濃度與用于化妝品時(shí)一樣，優(yōu)選設(shè)定為0.001重量％或更低，10-20重量％或更高。作為肥料組合物，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度上限是0.1重量％或更低。
如上所述，可以說促進(jìn)植物組織的新生、再生或重構(gòu)的二氫人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度與促進(jìn)動(dòng)物組織(皮膚組織)再生或重構(gòu)的情況一樣，也是極低的。因此，低劑量、低用量和/或低濃度的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可用于植物栽培、生長、保存、鮮花的保存、栽培、生長、水栽培、農(nóng)作物栽培、生長、蔬菜的栽培、生長、果實(shí)的栽培和/或生長、煙草的栽培和/或生長、菌類栽培、藥用植物的栽培、茶葉的栽培和/或生長等。含有人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的肥料組合物可以優(yōu)選以低濃度混入任意的肥料中，也可以單獨(dú)用作植物的生根、發(fā)芽、新生、再生、生長、重構(gòu)促進(jìn)劑。
人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1一樣不僅促進(jìn)動(dòng)物組織(皮膚組織、粘膜組織)、而且促進(jìn)植物組織的生根、發(fā)芽、新生、再生或重構(gòu)的推測說明，包括二氫人參皂甙Rb1的人參皂甙衍生物促進(jìn)所有活體組織的新生、再生或重構(gòu)。因此，人參皂甙衍生物是二氫人參皂甙Rb1可以用作家畜、養(yǎng)殖用魚貝類、寵物用飼料的添加劑，即可以用作飼料組合物或生長調(diào)節(jié)組合物。例如，養(yǎng)殖魚貝類、甲殼類、鰻魚、海鰻、牡蠣、珍珠貝等時(shí)，如果將人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1與通常的飼料一起加入海水或淡水中，被認(rèn)為促進(jìn)這些水產(chǎn)或海產(chǎn)資源的生長。當(dāng)然，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1可以保護(hù)魚貝類、甲殼類、鰻魚、海鰻等免受外傷、創(chuàng)傷、病原微生物、生物危害、內(nèi)分泌攪亂物質(zhì)、環(huán)境污染、毒素等。即，本發(fā)明的飼料添加劑對(duì)于使人類擺脫即將到來的糧食危機(jī)是必要的。
接下來，將詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施方案。
本發(fā)明提供用于預(yù)防、治療、處置皮膚或粘膜的損傷或缺損引起的疾病或引起皮膚或粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病的醫(yī)藥組合物，包括低濃度人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用制劑、粘膜外用劑或皮膚外用劑。由皮膚的損傷或缺損引起的疾病的例子有外傷、凍傷、挫傷、crushed傷、創(chuàng)傷、灼傷、放射線損傷、紫外線損傷、電擊傷、皮膚潰瘍、切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷、褥瘡、水皰性皮膚疾病、干皮癥等。另外，引起皮膚的病理組織學(xué)變化的疾病的例子有創(chuàng)傷、燙傷、灼傷、放射線損傷、凍傷、紫外線損傷、電擊傷、外傷、皮膚潰瘍、褥瘡、接觸性皮炎、水皰性皮炎、特應(yīng)性皮炎、干皮癥、糖尿病性皮膚潰瘍、自體敏感性皮炎、紅皮病、剝脫性皮炎、表皮水皰癥、光線過敏癥、進(jìn)行性色素病(Schamberg病)、嬰兒苔癬、螫傷、蟲咬、癢疹、多形性紅斑、環(huán)形紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎、掌足膿皰癥、牛皮癬、扁平苔癬、魚鱗癬、毛發(fā)苔癬、黃瘤癥、皮膚淀粉樣變性、單純皰疹、病毒性疣、觸染性軟疣、膿皮病、皮膚結(jié)核、皮膚非典型分支桿菌病、癬、發(fā)癬菌疹、發(fā)癬菌癥、皮膚或口腔念珠菌病、疥瘡、毛虱病、虱病、梅毒、瘢痕瘤、肥厚性瘢痕、血管瘤、淋巴瘤、痣、尋常性白斑、雀斑、黃褐斑、黑皮病、汗皰疹、栗疹、尋常性痤瘡、酒糟鼻(紅斑痤瘡)、酒糟鼻(紅斑痤瘡)樣皮炎、口腔粘膜損傷、口腔炎、口周皮炎、皮膚的老化癥狀、脫發(fā)癥、指甲周圍疾病、嵌甲等。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的上述優(yōu)良的預(yù)防、處置或治療效果可以通過皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用提供。對(duì)糖尿病患者、高齡者、免疫不全病患者、艾滋病患者、低營養(yǎng)患者、癌癥患者等進(jìn)行外科手術(shù)時(shí)，如果在手術(shù)前后靜脈內(nèi)連續(xù)給用或皮膚外用給用本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，將促進(jìn)手術(shù)創(chuàng)傷的治愈、促進(jìn)組織的再生或重構(gòu)，并防止縫合不全，從而將期待早日恢復(fù)。當(dāng)然，一般狀態(tài)良好的患者也可以在手術(shù)前后接受靜脈內(nèi)給用或皮膚局部給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。在手術(shù)中皮膚局部給用低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1將是非常有用的?？谇徽衬さ膿p傷、咬傷、創(chuàng)傷、灼傷、外傷或缺損引起的疾病或引起口腔粘膜的病理組織學(xué)變化的疾病或病理狀態(tài)的例子有齲齒、牙髓炎、牙周病、邊緣性牙周炎、口腔炎、舌炎、復(fù)發(fā)性口瘡、口內(nèi)口瘡、口臭、口腔觸物感痛、牙原性感染、口腔粘膜咬傷、舌咬傷、口腔灼燒、舌灼燒、口腔粘膜損傷、齒齦炎、牙槽膿溢、卡他性口炎、壞疽性口炎、文森特口炎、口瘡性口炎、急性皰疹性齦口炎、皰疹性咽峽炎、帶狀皰疹、口腔粘膜糜爛、口腔粘膜潰瘍、褥瘡、放射性口炎、天皰瘡、口腔念珠菌病、扁平苔癬、雷弗病(Riga-Fededisease)、光舌、紅平舌、角膜腐蝕、角膜潰瘍、干眼病、斯約格林綜合癥(Sjgren’s syndrome)等，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1對(duì)于預(yù)防、治療或處置所有的這些疾病和病理狀態(tài)是有用的。當(dāng)然，人參、人參提取物、人參粗皂角甙級(jí)分、人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也具有與本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1一樣的效果、用途和效能。
另外，本發(fā)明的低濃度、低劑量和/或低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用、口腔粘膜或皮膚外用給用被認(rèn)為通過促進(jìn)受到損傷、外傷、創(chuàng)傷或缺損的皮膚組織或口腔粘膜組織的再生、重構(gòu)加速治愈創(chuàng)傷，基于這樣的一個(gè)事實(shí)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用對(duì)于腹部或胸部的內(nèi)臟器官、腦神經(jīng)、頭頸部器官、及骨、關(guān)節(jié)、肌肉、血管、神經(jīng)的損傷、外傷、創(chuàng)傷或缺損，與皮膚組織的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損的情況一樣，也通過組織再生、重構(gòu)促進(jìn)作用、創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用，發(fā)揮效果和效能。因此，對(duì)于外科手術(shù)中器官切斷縫合部恢復(fù)的促進(jìn)；縫合不全的防止；消化性潰瘍病變的預(yù)防、治療、處置；肝、腎、脾、胰、肺、腸、子宮、膀胱、膽的切除手術(shù)后器官的再生、重構(gòu)的促進(jìn)；骨、關(guān)節(jié)、韌帶、腱、末梢神經(jīng)的再建手術(shù)(整形外科手術(shù))中該組織的再生、重構(gòu)的促進(jìn)；肝、腎、脾、胰、肺、腸、泌尿生殖器等器官的損傷、創(chuàng)傷、外傷、缺損的預(yù)防、治療、處置，人參皂甙衍生物特別是人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用、點(diǎn)鼻給用、點(diǎn)耳給用、舌下給用、吸入給用、局部給用、直腸內(nèi)給用等也是有效的。例如，在指尖損傷中，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以促進(jìn)皮膚、指甲、結(jié)締組織、骨、血管或神經(jīng)的再生。當(dāng)然，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用，對(duì)引起所有器官和組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病表現(xiàn)出效果和效能。另外，含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的人參、人參提取物、人參粗皂角甙級(jí)分以及人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也具有人參皂甙Rb1同樣的效果、效能和用途。
本發(fā)明在世界上首次報(bào)道通過靜脈內(nèi)連續(xù)給用或粘膜外用給用或皮膚外用給用低用量、低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以將口腔粘膜的表皮組織、上皮組織、真皮結(jié)締組織、真皮乳頭、皮下組織、粘膜固有層、立毛肌、毛囊、唾液腺、毛乳頭、汗腺、混合腺、脂腺、肌肉組織、末梢神經(jīng)、血管迅速地再生和重構(gòu)到接近受損前的狀態(tài)。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1促進(jìn)表皮(復(fù)層扁平上皮)、結(jié)締組織、末梢神經(jīng)、腺組織的再生、重構(gòu)的這樣一個(gè)事實(shí)說明，人參皂甙Rb1對(duì)于再生和/或重構(gòu)不僅皮膚而且其他組織和器官(例如，肝、腎、脾、造血組織、腦、脊髓、末梢神經(jīng)、消化道、肺、胰、角膜、唾液腺、性腺、泌尿器官等)是有效的。即，靜脈內(nèi)給用、手術(shù)中局部給用、直腸給用、舌下給用、吸入給用、皮膚外用給用、粘膜外用給用、點(diǎn)鼻給用或病變部位局部給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，對(duì)于肝炎、肝切除和肝局部缺血和再灌注后的肝再生和重構(gòu)；腎炎、急性尿道壞死后的腎的再生和重構(gòu)；脾切除后的脾再生和重構(gòu)；切斷指、趾的再生、重構(gòu)和固著；移植器官、組織、細(xì)胞、骨髓的再生和固著；鼓膜損傷后的再生和重構(gòu)；角膜損傷后的再生和重構(gòu)；角膜糜爛、角膜潰瘍、角膜皰疹、指甲損傷、及疾病的預(yù)防、治療、處置；消化性潰瘍的預(yù)防、治療、處置；更年期癥狀、外科手術(shù)(胸、腹部外科手術(shù)、整形外科手術(shù)、美容外科手術(shù)、產(chǎn)婦外科手術(shù)、泌尿器手術(shù)、眼科手術(shù)、頭頸部外科手術(shù)、五官科手術(shù)、獸醫(yī)學(xué)手術(shù)、口腔外科手術(shù)、腦神經(jīng)外科手術(shù)等)時(shí)受到損傷的器官、組織的再生、重構(gòu)等也是有效的。特別地，認(rèn)為人參皂甙特別是人參皂甙Rb1對(duì)于縫合不全的防止效果很大。當(dāng)然，低濃度、低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1不僅對(duì)于人，而且可以作為獸醫(yī)藥組合物向患有上述疾病的寵物、家畜、脊椎動(dòng)物等給用。另外，含有人參皂甙的人參、人參提取物、人參粗皂角甙級(jí)分及人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也具有與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1同樣的效果、效能和用途。
另外，在皮膚的開放式創(chuàng)傷(缺損)中，很自然地毛囊迅速脫落，但通過靜脈內(nèi)給用或皮膚外用給用低用量、低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，明顯地促進(jìn)了毛發(fā)的生長和/或生發(fā)。從該事實(shí)判斷出，靜脈內(nèi)給用或皮膚外用給用低用量、低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，通過促進(jìn)開放式創(chuàng)傷(皮膚缺損)部位的生毛、育毛，可以說將創(chuàng)傷部位恢復(fù)和修復(fù)至接近原始健康的狀態(tài)。即，低用量、低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以作為生毛、育毛促進(jìn)劑或脫毛進(jìn)行預(yù)防劑使用。更具體地，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用或局部給用、外用涂布、外用噴霧，對(duì)于斑禿、男性型脫毛癥、慢性脫毛癥的預(yù)防、治療和處置是有效的。另外，在皮膚的開放式創(chuàng)傷(缺損)和口腔咬傷中，盡管分布在皮膚或粘膜受損區(qū)域的末梢神經(jīng)和血管被破壞和切斷，但通過靜脈內(nèi)給用或皮膚外用給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，這些末梢神經(jīng)和血管可被明顯地再生、重構(gòu)和恢復(fù)至接近原始的健康狀態(tài)。因此，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可用作促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞和血管組織的再生和/或重構(gòu)的醫(yī)藥組合物。即，在糖尿病性神經(jīng)病、椎間盤突出、脊椎管狹窄、脊椎分離、脊椎前移、頸椎病、后韌帶骨化癥、面部神經(jīng)麻痹、脊髓損傷、頭損傷、神經(jīng)外傷、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)痛和腦中風(fēng)的任一種病理狀態(tài)中，靜脈內(nèi)給用、點(diǎn)鼻給用、直腸給用或局部給用人參皂甙如人參皂甙Rb1可以通過促進(jìn)一次受損的神經(jīng)組織的再生和/或重構(gòu)發(fā)揮效果和效能。另一方面，通過血管的再生和/或重構(gòu)促進(jìn)作用，看來人參皂甙特別是人參皂甙Rb1對(duì)于以血流障礙為主要癥狀的疾病(主動(dòng)脈炎綜合癥、膠原病、末梢動(dòng)脈閉塞癥、閉塞性血栓血管炎、閉塞性動(dòng)脈硬化癥、血栓性靜脈炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、視網(wǎng)膜中心動(dòng)脈閉塞癥、雷諾氏病、雷諾氏綜合癥、心肌梗塞、褥瘡、末梢循環(huán)不全、狹心癥、肝、腎、心局部缺血再灌流障礙、痔瘡、腦血管疾病等)具有效能。
當(dāng)然，如日本專利申請(qǐng)平10-365560號(hào)及PCT/JP99/02550(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中所述，在以血流障礙為主要癥狀的疾病中中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的效能是抑制暴露于血流障礙中的組織中的細(xì)胞死亡。因此，在不論以血流障礙為主要癥狀的中樞或末梢疾病中，人參皂甙Rb1通過至少兩種作用減少暴露于血流障礙中的組織或細(xì)胞的損害。另外，含有人參皂的人參、人參提取物、人參粗皂角甙級(jí)分及人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也具與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1同樣的效果、效能和用途。
如日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)所述，人參皂甙Rb1被認(rèn)為增加細(xì)胞死亡抑制基因產(chǎn)物BcL-xL的表達(dá)而表現(xiàn)出組織和細(xì)胞保護(hù)作用。從該事實(shí)判斷出，低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1對(duì)于保護(hù)、保存和/或維持皮膚移植用的角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)片是有效的。另外，人參皂甙特別人參皂甙Rb1看來對(duì)于保存、保護(hù)和/或維持制作培養(yǎng)皮膚用的細(xì)胞、保存、保護(hù)和/或維持用于制作人工器官的干細(xì)胞、及保存、保護(hù)和/或維持移植用器官、組織或細(xì)胞(肝、腎、心臟、胰、肺、髓膜、骨、關(guān)節(jié)、韌帶、消化道、角膜、皮膚、血管、末梢神經(jīng)等)是有用的。另外，在培養(yǎng)皮膚的移植中，如果結(jié)合向皮膚外用涂布人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，則會(huì)改進(jìn)移植的結(jié)果。當(dāng)然，通過在移植手術(shù)前、中或后以任意方法向受體給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以促進(jìn)移植用器官、組織或細(xì)胞的再生、重構(gòu)或新生。另外，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1對(duì)于輸血用血球成分、血小板的保護(hù)、維持、再生、新生、凍結(jié)細(xì)胞(精子、卵子、干細(xì)胞等)或凍結(jié)的培養(yǎng)皮膚片的保存、保護(hù)、維持、再生、重構(gòu)、新生也是有效的。這樣，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可用于促進(jìn)以再生醫(yī)學(xué)為目標(biāo)的組織工程中器官、組織或細(xì)胞的增殖、再生、分化、固著等。具有強(qiáng)大的細(xì)胞保護(hù)作用及組織再生保護(hù)作用的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，如前所述，對(duì)于海產(chǎn)物(魚貝類、甲殼類、鰻魚、海鰻等)的養(yǎng)殖或農(nóng)產(chǎn)物的栽培也是有用的。此時(shí)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1被認(rèn)為保護(hù)海產(chǎn)資源和農(nóng)產(chǎn)物免受內(nèi)分泌攪亂物質(zhì)、毒素、外傷、微生物、生物危害、環(huán)境污染等的侵害。另外，低濃度和/或低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可用作預(yù)防、改善或處置粘膜的老化癥狀(萎縮、上皮剝離、粘膜剝離、龜裂、再生不良、發(fā)育不全、干燥等)的健康藥物。含有人參皂甙的人參、人參提取物或粗皂角甙和人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也具與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1同樣的效果、效能和用途。
由于本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1能夠促進(jìn)受到創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷、切開創(chuàng)傷或損傷而變性脫落的皮膚組織的再生、重構(gòu)，很自然地認(rèn)為也能將受到紫外線照射而變性脫落的皮膚再生、重構(gòu)至接近健康狀態(tài)。一般地，皮膚的老化公認(rèn)為是由于伴隨紫外線照射或老齡的皮膚細(xì)胞的脫落和/或機(jī)能障礙而引起的；其結(jié)果是，皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等隨老齡而惡化。因此，靜脈內(nèi)給用或皮膚外用涂布、噴霧低用量、低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過促進(jìn)伴隨紫外線照射或老齡的變性脫落的皮膚組織的再生或重構(gòu)，對(duì)于預(yù)防、處置、治療伴隨老齡或老化的皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等是有效的。即，低濃度的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以用作每種化妝品的原材料和/或組合物。另外，靜脈內(nèi)給用、局部給用、局部涂布和噴霧低濃度和低用量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可用作促進(jìn)化學(xué)去皮后皮膚組織再生和/或重構(gòu)的組成物。含有人參皂甙的人參、人參提取物、粗皂角甙級(jí)分以及人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也具有與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1同樣的效果、效能和用途。
本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1不僅可用作靜脈內(nèi)給用劑而且可用作外用劑和病變部位局部注射劑，只要人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在病變部位的細(xì)胞外液濃度保持在低水平即可。另外，給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的方法，可以選擇皮下注射、肌肉注射、點(diǎn)眼、眼軟膏、點(diǎn)鼻、點(diǎn)耳、耳軟膏、吸入、直腸給用、經(jīng)口給用、舌下給用、經(jīng)皮給用等任意途徑。但是，當(dāng)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為經(jīng)口給用劑使用時(shí)，不能期待單獨(dú)給用人參皂甙的效果。因此，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1混入、封入抑止人參皂甙在消化道內(nèi)分解的載體(例如，蟲膠、脫乙酰殼多糖膠囊、白明膠、油層等)或促進(jìn)在消化道內(nèi)吸收的載體中或與它們結(jié)合時(shí)，經(jīng)口給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1是必要的。另外，如果在人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的代謝產(chǎn)物中，鑒定有與人參皂甙同等效力或比其更有效的物質(zhì)，這樣的活性代謝產(chǎn)物可以通過常規(guī)的方法給用，以對(duì)抗上述可期待使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的疾病。另外，將本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物與高分子化合物作成分散體后，將分散體噴霧干燥以選擇任意的給用途徑。另外，將人參皂甙特別是人參皂甙Rb1涂在高分子化合物的微粒子上后，可以選擇任意的給用途徑。含有人參皂甙的人參、人參提取物、粗皂角甙級(jí)分以及人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也具有與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1同樣的效果、效能和用途。
含有本發(fā)明的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用制劑、粘膜外用劑或皮膚外用劑，通過皮膚組織再生、重構(gòu)促進(jìn)作用、口腔粘膜組織再生、重構(gòu)促進(jìn)作用或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用，對(duì)于預(yù)防、治療和/或處置由皮膚的損傷、創(chuàng)傷、外傷或缺損引起的疾病，表現(xiàn)出歷史上未曾有過的劃時(shí)代的效能。的確，通過給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以“可靠地、迅速地治療創(chuàng)傷”。因此，通過使用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物，期待今后開發(fā)出大量的引起皮膚損傷、創(chuàng)傷、外傷、缺損的疾病的治療藥。為支持這一事實(shí)，在本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)，通過使用人參皂甙Rb1作為先導(dǎo)化合物制備的二氫人參皂甙Rb1顯示優(yōu)良的皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用。通過鑒定人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的目標(biāo)分子，也可以合成改進(jìn)靶分子功能的新型化合物。另外，通過修飾人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的一部分化學(xué)結(jié)構(gòu)作成前藥，可以選擇如上所述的任意的給用途徑和給用方法。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物只要使用低濃度和/或低劑量，幾乎沒有副作用，因此本發(fā)明提供高度安全的藥物。
以下將詳細(xì)解釋人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為化妝品組分對(duì)皮膚老化癥狀的預(yù)防。
伴隨老齡的皮膚或粘膜老化主要是由皮膚或粘膜構(gòu)成細(xì)胞的減少(死亡)、機(jī)能障礙、再生不良或紫外線照射引起的，表現(xiàn)為皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等癥狀。當(dāng)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在病變組織的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選100fg/ml或更低時(shí)，人參皂甙Rb1促進(jìn)皮膚組織或粘膜組織以及其構(gòu)成細(xì)胞的再生和/或重構(gòu)，并促進(jìn)細(xì)胞死亡抑制基因產(chǎn)物BcL-xL的表達(dá)，從而保護(hù)皮膚或粘膜的細(xì)胞，包括表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、上皮細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、黑素細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、唾液腺細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、粘液細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、漿液腺細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等(日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550，含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)。因此，當(dāng)在每種化妝品或健康藥物(美容洗劑(潤膚洗液)、乳液、美容液、按摩劑、包裝劑、乳劑、粉底霜、潤手霜、凝膠、洗劑、乳劑、粉末、染發(fā)劑、修發(fā)劑、冷霜、眼影膏、清潔霜、清潔泡沫、夜霜、美白霜、錠劑、止咳糖、撲面粉、口紅、洗浴凝膠、美容香皂、健康飲料水、等滲性水、酒精水稀釋用冰、凍果汁露、冰激凌、酒精飲料、洗眼劑、眼藥水、清潔液、漱口劑、香波、洗發(fā)水、牙粉、牙膏、唇霜、打底化妝品、UV打底液、粉底等)中混入微量人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，如果維持皮膚局部或粘膜局部中細(xì)胞外液濃度為前述的低濃度，則對(duì)皮膚或粘膜的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)發(fā)揮優(yōu)良的效果。
當(dāng)在液狀化妝品如通常的UV打底液中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，其濃度被調(diào)節(jié)為1000ng/ml或更低，優(yōu)選10ng/ml或更低，更優(yōu)選0.01fg/ml-100fg/ml，并且如果混合物每天向皮膚外用涂布或外作噴霧，在皮膚局部的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度可以維持如上所述的低濃度。則其可用于皮膚的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)的改善、發(fā)展的預(yù)防或惡化的預(yù)防。另外，在固形、凝膠狀或霜狀化妝品例如通常的粉底霜或晚霜中混入人參皂甙特別是人參皂甙時(shí)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的混入量被控制為每克霜?jiǎng)?000ng或更低，優(yōu)選10ng或更低，更優(yōu)選0.01fg-100fg，然后連日向皮膚外用涂布或噴霧該混合物。由此，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在皮膚局部的細(xì)胞外液濃度維持在如上所述的低濃度，然后該混合物(即，化妝品)可用于皮膚的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)的改善、發(fā)展的預(yù)防或惡化的預(yù)防。為預(yù)防、改善、處置皮膚的老化癥狀而在任意化妝品中混入人參皂甙特別人參皂甙Rb1的濃度上限為對(duì)液狀化妝品為10μg/ml或更低；對(duì)固形、凝膠狀或霜狀化妝品為10μg/g或更低。換句話說，優(yōu)選以0.001重量％或以下的濃度在上述的化妝品中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。否則，皮膚的正常細(xì)胞膜會(huì)受到損害。即，在長期使用的化妝品或健康藥中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，比本發(fā)明上述的預(yù)防、處置、治療皮膚疾病的外用劑更低的濃度被認(rèn)為是安全的。如上所述，由于向皮膚的開放式創(chuàng)傷部位外用給用濃度為0.00000001重量％的人參皂甙Rb1可以表現(xiàn)出充分的效果，因此化妝品中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度一般優(yōu)選低于該值。因此，當(dāng)人參、人參提取物或人參的粗皂角甙級(jí)分用作化妝品組成物時(shí)，其優(yōu)選濃度為低于0.001重量％，優(yōu)選0.00001重量％或更低，更優(yōu)選0.0000001重量％或更低。當(dāng)然，如上所述，含有微量人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的化妝品可以外用涂布或噴霧到面部，并且也可外用涂布或噴霧到頻繁受日光照射的其他皮膚(例如，四肢、軀干、頸部、頭部等)。通過在護(hù)理設(shè)施、溫泉保養(yǎng)設(shè)施、醫(yī)院等中的浴劑中混入微量人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以預(yù)防、改善、處置皮膚的老化癥狀，也可以預(yù)防、處置、治療高齡者或臥床不起患者的皮膚疾病(褥瘡、潰瘍等)。當(dāng)為預(yù)防、治療或處置粘膜的老化癥狀而將人參皂甙特別是人參皂甙Rb1用作健康藥物組成物或粘膜外用組合物時(shí)，使用上述的低濃度是必要的。
如所述的，當(dāng)含有低濃度人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的化妝品或健康藥通常長期使用時(shí)，皮膚或粘膜的老化伴隨的癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)或粘膜的老化癥狀(或粘膜的皺縮或萎縮、裂紋、龜裂、皺裂、發(fā)育不全、再生不良、干燥等)可被預(yù)防或改善。當(dāng)然，低濃度的人參粗皂角甙、人參或人參提取物代替人參皂甙特別是人參皂甙Rb1使用時(shí)，也可以預(yù)防、改善或減輕皮膚或粘膜的老化癥狀。
人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以混入每種已知的化妝品或健康藥中，只要其濃度為低就可。另外，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可與迄今為止所有的化妝品組分一起混入化妝品中?？梢耘c人參皂甙特別是人參皂甙Rb1一起使用的化妝品組分在美國專利5,663,160和WO99/07338中有描述。但是，可與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1一起使用的化妝品組分的濃度優(yōu)選比美國專利5,663,160和WO 99/07338中的低。當(dāng)然，新開發(fā)含有任意有效成分的化妝品或健康藥的基質(zhì)時(shí)，以前述的低濃度向其中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1時(shí)，也可以預(yù)防、處置、改善皮膚或粘膜老化引起的各癥狀。另外，促進(jìn)在化學(xué)去皮中皮膚組織的再生、重構(gòu)時(shí)，在化學(xué)去皮劑中混入上述低濃度(0.001重量％或更低，優(yōu)選0.00001重量％或更低，更優(yōu)選0.00000001重量％(10-8重量％)或更低，10-20重量％或更高)的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，主要在化學(xué)去皮后立即使用。當(dāng)任意其他化妝品組分與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1一起結(jié)合使用時(shí)，其他化妝品組分的濃度優(yōu)選設(shè)定得比以前低。
另外，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過與化妝品的場合一樣的方法優(yōu)選以低濃度(0.001重量％或更低，優(yōu)選0.00001重量％或更低，更優(yōu)選0.00000001重量％或更低，10-20重量％或更高)混入已知的生毛、育毛劑或含有任意的有效成分的新型生毛、育毛劑中，可以用于生毛、育毛、防止脫毛惡化、防止脫毛發(fā)展等。當(dāng)然，含有人參皂甙Rb1的天然物質(zhì)、天然提取物、天然物質(zhì)的提取物、人參、人參提取物、人參的粗皂角甙等代替人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以混入每種化妝品、生毛劑、育毛劑或脫毛發(fā)展防止劑中，如果人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的最終的含量維持前述的低濃度，可以用于皮膚或粘膜老化癥狀或脫毛的改善、預(yù)防或處置。但是，在上述的化妝品或生毛劑、育毛劑、脫毛發(fā)展防止劑中混入的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度是試驗(yàn)值，實(shí)際上為使皮膚局部的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低、優(yōu)選10pg/ml或更低、更優(yōu)選100fg/ml或更低，應(yīng)調(diào)整化妝品、健康藥(包括浴劑)、生毛劑、育毛劑、脫毛發(fā)展防止劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1以及含有人參皂甙的天然物質(zhì)的混入量。如上所述，當(dāng)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、人參、人參提取物或人參粗皂角甙作為化妝品成分、生毛、育毛用成分、健康藥成分使用時(shí)，其在化妝品、生毛、育毛劑、健康藥中的濃度即使低至10-20重量％也可以觀察到效果。
當(dāng)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1被注射到皮膚的局部病變部位或其周邊以治療或處置褥瘡、皮膚潰瘍、創(chuàng)傷或用以促進(jìn)皮膚組織再生或重構(gòu)時(shí)，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1在局部注射液中的濃度應(yīng)調(diào)整為10μg/ml或更低、優(yōu)選100ng/ml或更低、更優(yōu)選1fg～1000pg/ml。局部注射液中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度上限為10mg/ml或更低、優(yōu)選100μg/ml或更低。含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的皮膚局部注射劑的溶劑，與將人參皂甙Rb1用作靜脈內(nèi)給用制劑使用時(shí)一樣，可以是選自生理鹽水、蒸餾水、磷酸鹽緩沖液、葡萄糖溶液、脂質(zhì)體、脂肪乳劑等中的任意一種。當(dāng)然，上述的局部注射液不僅可以注射到皮膚中而且可以注射到所有器官或組織(包括移植器官)中，并可用作點(diǎn)眼藥、點(diǎn)耳藥。另外，局部注射液中人參皂甙的濃度是試驗(yàn)值，實(shí)際上為使皮膚局部中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低、優(yōu)選10pg/ml或更低、更優(yōu)選100fg/ml或更低，應(yīng)調(diào)整局部注射劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的混入量。
當(dāng)人參皂甙特別是人參皂甙Rb1作為褥瘡治療、皮膚潰瘍治療、創(chuàng)傷治療、皮膚組織再生促進(jìn)等的皮膚外用劑使用時(shí)，可以在任意的基質(zhì)中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，且其濃度應(yīng)調(diào)整為每100克或毫升基質(zhì)中100mg(0.1重量％)或更低、優(yōu)選10mg(0.01重量％)或更低、更優(yōu)選1mg(0.001重量％)或更低。將人參皂甙混入前述的預(yù)防、治療、處置皮膚疾病的皮膚外用劑中時(shí)的濃度上限認(rèn)為應(yīng)為約10重量％或更低，優(yōu)選1重量％或更低。
但是，皮膚疾病治療外用劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的含量是試驗(yàn)值，實(shí)際上以皮膚局部人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度為指標(biāo)，應(yīng)調(diào)整人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的混入量。
以下通過引入本發(fā)明者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，詳細(xì)地解釋PCT/JP00/04102中記載的粗皂角甙級(jí)分，與人參皂甙Rb1一樣，對(duì)皮膚組織再生和重構(gòu)是有效的。本發(fā)明人(阪中)已發(fā)現(xiàn)了顯著的效果和效能，即靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)可以使患有脊髓損傷的且久病不起的大鼠(體重約300g)站立(日本專利申請(qǐng)平11-243378、PCT/JP99/06804，含有人參皂甙Rb1的腦血管再生、重構(gòu)促進(jìn)劑及神經(jīng)組織二次變性抑止劑)。另外，本發(fā)明的(阪中和田中)發(fā)現(xiàn)連續(xù)靜脈內(nèi)給用低用量的人參的粗皂角甙級(jí)分(870μg/天)，與連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)一樣，可以使患有脊髓損傷的且久病不起的大鼠(體重約300g)站立(PCT/JP00/04102，含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)。
如這樣的使用脊髓損傷的大鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果所顯示的，靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參的粗皂角甙級(jí)分(870μg/天)具有與靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)同樣的效果。這說明如果連續(xù)給用約為人參皂甙Rb1的14.5倍的粗皂角甙級(jí)分，在患部組織的細(xì)胞外液中可以維持有效的粗皂角甙的濃度。本發(fā)明人之一(阪中)證明了人參皂甙Rb1當(dāng)其在病變部位的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低、優(yōu)選10pg/ml或更低、更優(yōu)選100fg/ml或更低時(shí)發(fā)現(xiàn)效果和效能(日本專利申請(qǐng)平10-365560和PCT/JP99/02550，含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)。因此，低用量的粗皂角甙級(jí)分當(dāng)其在病變部位的細(xì)胞外液濃度為14.5ng/ml或更低、優(yōu)選145pg/ml或更低、更優(yōu)選1450fg/ml或更低時(shí)，可能具有優(yōu)越的細(xì)胞保護(hù)作用。另外，由于人參皂甙Rb1能夠在病變部位的細(xì)胞外液濃度為1-100fg/ml或更低時(shí)表現(xiàn)出優(yōu)良的效果，因此，含有粗皂角甙級(jí)分的醫(yī)藥組合物或制劑看來即使當(dāng)其在病變部位的細(xì)胞外液濃度為14.5-1450fg/ml或其1/100時(shí)也能表現(xiàn)充分的效果。
如本發(fā)明人之一(阪中)在日本專利申請(qǐng)平10-365560和PCT/JP99/02550(含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中所證明的，靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)對(duì)腦中風(fēng)和腦梗塞具有優(yōu)良的治療效果。另外，基于使用患脊髓損傷的大鼠所作的上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明了連續(xù)靜脈內(nèi)給用粗皂角甙級(jí)分(870μg/天)以與連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)同樣的方式，對(duì)脊髓損傷具有優(yōu)良的治療效果?；谶@些事實(shí)，可以推測連續(xù)靜脈內(nèi)給用粗皂角甙級(jí)分(870μg/天)以與連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)同樣的方式，對(duì)腦中風(fēng)和腦梗塞具有優(yōu)良的治療效果。另外，由于以6μg/天的劑量連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1也對(duì)腦中風(fēng)和腦梗塞表現(xiàn)出優(yōu)良的效果(日本專利申請(qǐng)平10-365560和PCT/JP99/02550，含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)，因此，認(rèn)為以87μg/天的劑量連續(xù)靜脈內(nèi)給用粗皂角甙級(jí)分也對(duì)腦中風(fēng)和腦梗塞表現(xiàn)出優(yōu)良的效果。即，以87μg/天-870μg/天的劑量對(duì)體重約300g的大鼠連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參的粗皂角甙級(jí)分，可以表現(xiàn)出優(yōu)良的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用。因此，通過連續(xù)靜脈內(nèi)給用劑量為2.9mg/kg/天-0.29mg/kg/天的粗皂角甙級(jí)分可以獲得優(yōu)良的腦細(xì)胞保護(hù)作用或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用。但是，這僅僅是對(duì)體重約300g的大鼠的粗皂角甙給用量的試驗(yàn)值，向人靜脈內(nèi)給用粗皂角甙級(jí)分時(shí)，每1kg的體重的給用量應(yīng)設(shè)定為上述值的1/2-1/20。即，當(dāng)向人連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參的粗皂角甙級(jí)分時(shí)，盡管根據(jù)病人狀態(tài)和個(gè)人差異給用量有所不同，但給用量優(yōu)選設(shè)定為1450μg/kg/天或更低，以及14.5μg/kg/天或更高。
另外，由于在日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550(含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)中，本發(fā)明人之一(阪中)發(fā)現(xiàn)靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)，使腦組織和神經(jīng)組織中的細(xì)胞死亡抑制因子，即BcL-xL基因的表達(dá)增加，因此連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參的粗皂角甙級(jí)分(870μg/天)也被認(rèn)為促增加BcL-xL基因的表達(dá)。即，人參的粗皂角甙級(jí)分當(dāng)其在病變部位的細(xì)胞外液濃度為14.5ng/ml或更低、優(yōu)選145pg/ml或更低、更優(yōu)選1450fg/ml或更低時(shí)，可以促進(jìn)腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞中BcL-xL基因的表達(dá)。
另外，低用量的粗皂角甙級(jí)分的靜脈內(nèi)連續(xù)給用對(duì)脊髓損傷、腦梗塞、腦中風(fēng)的預(yù)防、治療、處置是有效的這樣一個(gè)事實(shí)說明，粗皂角甙級(jí)分中所含的任何一種成分都明顯地表現(xiàn)出對(duì)腦疾病和神經(jīng)疾病的優(yōu)良效果和效能。當(dāng)然，人參的粗皂角甙級(jí)分中的多種成分可能對(duì)腦、神經(jīng)疾病顯示優(yōu)良的效果和效能。粗皂角甙級(jí)分中所含的化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的精制皂角甙或人參皂甙為人參皂甙Ro、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rc、人參皂甙Rd、人參皂甙Re、人參皂甙Rf、人參皂甙Rg1、人參皂甙Rg2、人參皂甙Rg3、人參皂甙Rh1、人參皂甙Rh2、人參皂甙Ra1、人參皂甙Ra2、人參皂甙Ra3、三七人參皂甙R4、西洋參皂甙(quinquenoside)R1、malonylginsenoside(丙二酰基人參皂甙)Rb1、人參皂甙Rs1、丙二?；藚⒃磉癛b2、人參皂甙Rs2、丙二?；藚⒃磉癛c、丙二酰基人參皂甙Rd、人參皂甙Rb3、(20S)-人參皂甙Rg3、20-葡糖人參皂甙Rf、三七人參皂甙R1、(20R)-人參皂甙Rg2、(20R)-人參皂甙Rh1等。其中，已知人參皂甙Rb1的含量為其他精制皂角甙的2倍或多倍?？紤]到人參皂甙Rb1當(dāng)其細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低、優(yōu)選10pg/ml或更低、更優(yōu)選100fg/ml或更低時(shí)表現(xiàn)出神經(jīng)細(xì)胞或腦細(xì)胞保護(hù)作用的這樣一個(gè)事實(shí)，其他的精制皂角甙，即人參皂甙，可能在與其相同的濃度范圍內(nèi)或其濃度的1/10-1/100的濃度范圍內(nèi)保護(hù)腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞。但是，人參的粗皂角甙級(jí)分中的成分不限于上述的精制皂角甙即人參皂甙。
如上所述，人參的粗皂角甙級(jí)分或其任一種成分以與人參皂甙Rb1同樣的方式，表現(xiàn)出優(yōu)良的神經(jīng)細(xì)胞或腦細(xì)胞保護(hù)作用，或?qū)顾钃p傷、頭部損傷或神經(jīng)外傷具有優(yōu)良的治療效果。因此，低濃度和/或低用量的人參粗皂角甙級(jí)分或其任一種成分可以表現(xiàn)出人參皂甙Rb1的效果、效能或用途，這已被本發(fā)明人之一(阪中)所描述(日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550，含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑；日本專利申請(qǐng)平11-340850、PCT/JP99/06804，含有人參皂甙Rb1的腦血管再生、重構(gòu)促進(jìn)劑及神經(jīng)組織二次變性抑止劑)。即，低濃度或低用量的人參粗皂角甙級(jí)分或其任一種成分與人參皂甙Rb1一樣，可以增加細(xì)胞死亡抑制基因產(chǎn)物BcL-xL的表達(dá)，抑制神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡，并在末梢組織中表現(xiàn)出優(yōu)良的細(xì)胞保護(hù)作用。
除指出連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)對(duì)于包括腦中風(fēng)和神經(jīng)外傷在內(nèi)的腦和神經(jīng)疾病的預(yù)防、處置或治療極為有效、以及表現(xiàn)出優(yōu)良的細(xì)胞保護(hù)作用的在先專利申請(qǐng)(日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550；日本專利申請(qǐng)平11-243378、PCT/JP99/06804)外，本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)，靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參皂甙Rb1(60μg/天或12μg/天)通過皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用對(duì)皮膚疾病表現(xiàn)出優(yōu)良的治療效果。因此，基于上述的關(guān)于連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1(60μg/天)表現(xiàn)出與連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參粗皂角甙級(jí)分(870μg/天)類似的效果和效能的推測，連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參粗皂角甙級(jí)分(870μg/天)可能通過組織再生促進(jìn)作用或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)作用對(duì)皮膚疾病表現(xiàn)出優(yōu)良的治療效果。即，在本發(fā)明中新發(fā)現(xiàn)的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的效果、效能和用途全部與低濃度或低用量的人參粗皂角甙級(jí)分的效果、效能和用途一樣。事實(shí)上，如上所述，在使用黃金葛的插條中發(fā)現(xiàn)，人參的粗皂角甙級(jí)分與人參皂甙Rb1一樣，促進(jìn)植物組織的再生、新生和/或重構(gòu)。
另外，關(guān)于人參粗皂角甙級(jí)分或其成分的給用方法，與人參皂甙Rb1一樣，如果在病變組織的細(xì)胞外液濃度可維持在上述的低水平，則可選擇任意的給用途徑。具體地，人參粗皂角甙級(jí)分或其成分不僅可用作靜脈內(nèi)給用劑，而且可用作外用劑或病變部位局部給用劑。另外，關(guān)于粗皂角甙級(jí)分或其任一種成分的給用方法，可選擇任意的途徑，如皮下注射、肌肉注射、點(diǎn)眼、點(diǎn)鼻、點(diǎn)耳、吸入、直腸給用、經(jīng)口給用、舌下給用、經(jīng)皮給用。當(dāng)然，將粗皂角甙級(jí)分制劑化時(shí)的溶劑或基質(zhì)也使用與人參皂甙Rb1一樣的任意溶劑或基質(zhì)。但是，當(dāng)人參的粗皂角甙級(jí)分或其任一成分用作經(jīng)口給用劑時(shí)，如果單獨(dú)給用粗皂角甙級(jí)分或其任一成分，存在不表現(xiàn)出如此之好的效果的可能性。此時(shí)，在阻止在消化道內(nèi)分解的載體或促進(jìn)在消化道內(nèi)吸收的載體中將人參的粗皂角甙級(jí)分或其任一成分混入、封入或與其結(jié)合。另外，在粗皂角甙級(jí)分或其任一成分的任何一種代謝產(chǎn)物中，如果經(jīng)鑒定，具有與粗皂角甙級(jí)分或其任一成分同等或更好的效果和效能，則這樣的活性代謝產(chǎn)物可以通過常規(guī)的方法，向患有上述期待使用低濃度、低用量的粗皂角甙級(jí)分或其任一成分的疾病的患者給用。另外，將粗皂角甙級(jí)分或其任一成分用高分子化合物制成分散體后，所述的分散體被噴霧干燥，然后經(jīng)任意的途徑給用。另外，用粗皂角甙級(jí)分或其任一成分涂覆到高分子化合物的微粒上后，可以選擇任意的給用途徑。當(dāng)然，使用人參的粗皂角甙級(jí)分或其任一成分制成前藥后，可以選擇任意的給用途徑。
另外，低濃度和低用量的人參粗皂角甙級(jí)分或其任一成分與人參皂甙Rb1一樣，可用作改善伴隨老齡的免疫功能下降、皮膚功能下降、循環(huán)功能下降、消化功能下降、骨代謝功能下降、肌力下降、關(guān)節(jié)功能下降、性功能下降等諸癥狀的健康藥。另外，低濃度和/或低用量的人參粗皂角甙級(jí)分或其任一成分用作化妝品組合物時(shí)，可用于預(yù)防、治療或處置伴隨老齡的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)。
以下將詳細(xì)說明作為化妝品組合物的人參粗皂角甙級(jí)分。通常，人參的粗皂角甙級(jí)分是通過用甲醇提取紅參，將其提取物(收率35-45％)懸浮于水中，用乙醚洗滌并用水飽和的丁醇振搖而獲得的，收率為約8％。但是，本發(fā)明中的人參的粗皂角甙級(jí)分不限于從紅參中獲得的，而是包括從其他人參(例如，三七人參、田七人參、喜馬拉雅人參、西洋參、竹節(jié)人參等)是獲得的物質(zhì)。
伴隨老齡的皮膚老化主要是由于紫外線照射、皮膚細(xì)胞死亡或其機(jī)能障礙造成的，有皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等癥狀。由于人參的粗皂角甙級(jí)分被認(rèn)為在病變部位的細(xì)胞外液濃度為14.5ng/ml或更低、優(yōu)選145pg/ml或更低、更優(yōu)選1450fg/ml或更低時(shí)，表現(xiàn)出皮膚和粘膜細(xì)胞保護(hù)作用及所述的細(xì)胞的再生和重構(gòu)促進(jìn)作用，這些細(xì)胞包括表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、上皮細(xì)胞、黑素細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、唾液腺細(xì)胞、混合腺細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、粘液腺細(xì)胞、肌細(xì)胞、立毛肌細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、成纖維纖維、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等，如果向每種化妝品或健康藥(美容洗劑(潤膚洗液)、乳液、美容液、按摩劑、包裝劑、乳劑、粉底霜、潤手霜、凝膠、洗劑、乳劑、粉末、染發(fā)劑、修發(fā)劑、冷霜、眼影膏、清潔霜、清潔泡沫、夜霜、美白霜、錠劑、止咳糖、撲面粉、口紅、洗浴凝膠、美容香皂、健康飲料水、等滲性水、酒精水稀釋用冰、凍果汁露、冰激凌、酒精飲料、洗眼劑、眼藥水、清潔液、漱口劑、香波、洗發(fā)水、牙粉、牙膏、唇霜、打底化妝品、UV打底液、粉底等)中混入微量的人參的粗皂角甙級(jí)分，并用來使皮膚局部的細(xì)胞外液濃度保持上述的低濃度，則可以表現(xiàn)出對(duì)于伴隨老齡的皮膚老化癥狀的優(yōu)良效果。人參粗皂角甙級(jí)分的基質(zhì)及可以并用的皮膚外用組合物與人參皂甙Rb1的一樣。
當(dāng)向液狀化妝品如通常的UV打底液中混入人參的粗皂角甙級(jí)分時(shí)，其濃度調(diào)整為14.5ng/ml或更低、優(yōu)選145pg/ml或更低、更優(yōu)選0.145fg/ml-1450fg/ml，并將該混合物連日向皮膚外用涂布或外用噴霧以保持粗皂角甙級(jí)分在皮膚局部的細(xì)胞外液濃度為如上所述的低水平，則其可用于改善、預(yù)防皮膚老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)或防止其發(fā)展或惡化。當(dāng)在固形、凝膠狀或霜狀化妝品例如通常的粉底霜或晚霜中混入粗皂角甙級(jí)分時(shí)，粗皂角甙級(jí)分的混入量為每g霜?jiǎng)?4.5ng或更低、優(yōu)選145pg或更低、更優(yōu)選0.145fg-1450fg。然后，將該混合物連日向皮膚外用涂布或外用噴霧時(shí)，可以預(yù)防、治療、處置皮膚的老化癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)。為預(yù)防、改善或處置皮膚的老化癥狀而在上述化妝品中混入的粗皂角甙級(jí)分的濃度上限為對(duì)液狀化妝品為145μg/ml；對(duì)固形、凝膠狀或霜狀化妝品為145μg/g。換句話說，粗皂角甙優(yōu)選以0.0145重量％或更低的濃度混入上述的化妝品。否則，皮膚的正常細(xì)胞膜會(huì)受到損害。即，當(dāng)人參的粗皂角甙級(jí)分混入長期使用的化妝品或健康藥時(shí)，降低其濃度是安全的。從人參皂甙Rb1以0.00000001重量％(10-8重量％)的低濃度表現(xiàn)出優(yōu)良的創(chuàng)傷治愈效果這一事實(shí)判斷出，將在下面詳細(xì)說明的人參粗皂角甙級(jí)分和人參提取物或人參的濃度，以與人參皂甙同樣的方式，優(yōu)選為0.001重量％或更低。當(dāng)然，如上所述，含有微量人參粗皂角甙級(jí)分的化妝品可以外用涂布或外用噴霧到面部，也可以外用涂布或外用噴霧到受日光頻繁照射的其他皮膚部位(例如，四肢、軀干、頸部、頭部等)上。如所述的，當(dāng)含有低濃度粗皂角甙級(jí)分的皮膚外用化妝品或制劑通常被長期使用時(shí)，伴隨皮膚老化的癥狀(皮膚萎縮、易感染性、松弛、頭皮屑、脫毛、禿頭癥、白發(fā)癥、灰發(fā)、瘙癢、皮膚干燥、粗糙、皮脂分泌減少、皮脂缺乏癥、角質(zhì)細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、角化細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞或角質(zhì)層的剝離、龜裂、裂紋、皺裂、雀斑、斑點(diǎn)、皺紋、雀斑、色素沉著、干燥等)可被預(yù)防、減輕或改善。為預(yù)防、減輕或改善粘膜的老化癥狀(萎縮、龜裂、干燥等)可以使用低濃度的人參粗皂角甙級(jí)分作為健康藥組合物。已經(jīng)描述了低濃度的人參粗皂角甙級(jí)分與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1一樣，可用于海產(chǎn)物的養(yǎng)殖、農(nóng)產(chǎn)物的栽培、護(hù)理設(shè)施或溫泉保養(yǎng)設(shè)施中的浴劑。
如果在化妝品或皮膚外用劑中混入幾乎與人參皂甙特別是人參皂甙Rb1同等量的人參粗皂角甙級(jí)分的成分取代人參粗皂角甙，可以預(yù)防多種伴隨皮膚老化的癥狀。人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、人參的粗皂角甙、或其除人參皂甙外的成分，可以混入通常的化妝品和皮膚外用劑中，即使在低濃度。當(dāng)然，在開發(fā)含有任意有效成分的化妝品基質(zhì)時(shí)，通過將基質(zhì)與低濃度的人參皂甙、人參皂甙Rb1、人參的粗皂角甙級(jí)分、或其除人參皂甙外的成分混合，可以預(yù)防、處置和改善各種由皮膚和粘膜的老化引起的癥狀。另外，如前所述，通過將低濃度的人參皂甙、人參皂甙Rb1、人參的粗皂角甙級(jí)分或人參粗皂角甙級(jí)分的任一成分進(jìn)行多種組合并混入通常的化妝品、健康或皮膚外用劑中，或混入含有任意有效成分的新型化妝品基質(zhì)中，可以制備用于預(yù)防、治療或改善由老齡引起的各種癥狀的化妝品、健康藥或皮膚外用劑。當(dāng)?shù)蜐舛鹊娜藚⒃磉疤貏e是人參皂甙Rb1、人參的粗皂角甙級(jí)分、人在粗皂角甙級(jí)分的一種成分的多種組合物混入化妝品、健康藥或皮膚外用劑時(shí)，可選擇任何濃度，只要每種物質(zhì)在化妝品或皮膚外用劑中的濃度為前述的低濃度即可。另外，促進(jìn)化學(xué)去皮中皮膚組織的再生、重構(gòu)時(shí)，可以在化學(xué)去皮劑中混入前述低濃度的人參粗皂角甙級(jí)分、人參粗皂角甙級(jí)分的成分、人參、人參提取物或人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。
另外，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、人參的粗皂角甙級(jí)分、人參粗皂角甙級(jí)分的成分通過與混入化妝品時(shí)同樣方法以低濃度混入通常的生毛、育毛劑或含有任意的有效成分的新型生毛、育毛劑中，可以用于生毛、育毛、防止脫毛發(fā)展、防止脫毛惡化。另外，代替在化妝品、生毛劑或育毛劑中混入的人參的粗皂角甙級(jí)分時(shí)，可使用幾乎與粗皂角甙級(jí)分等量或比其高5-6倍的量的人參提取物或人參。當(dāng)然，將人參的粗皂角甙級(jí)分與人參提取物并用并混入上述的化妝品、生毛、育毛劑或防脫劑中時(shí)，只要以低濃度使用。另外，在各種化妝品、生毛、育毛劑、或防脫劑中混入含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的天然產(chǎn)物或天然組合物；結(jié)果是，如果人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、或其他人參成分可被維持在如前所述的低濃度，其可被用于改善、預(yù)防、或處置皮膚的老化癥狀或脫毛。已經(jīng)描述了人參提取物或人參粗皂角甙級(jí)分的成分只要以與人參皂甙Rb1同樣的低濃度，就可用于海產(chǎn)物的養(yǎng)殖、農(nóng)產(chǎn)物的栽培、護(hù)理設(shè)施或溫泉保養(yǎng)設(shè)施中的浴劑中。
為治療褥瘡、治療皮膚潰瘍、治療創(chuàng)傷、促進(jìn)皮膚組織再生等向皮膚的病變部位或其周邊局部注射人參粗皂角甙級(jí)分時(shí)，局部注射液內(nèi)的粗皂角甙級(jí)分的濃度調(diào)整為145μg/ml或更低、優(yōu)選1.45μg/ml或更低、更優(yōu)選0.145fg/ml～14.5ng/ml。局部注射液中粗皂角甙級(jí)分的濃度上限為14.5mg/ml或更低、優(yōu)選1.45mg/ml或更低。含有粗皂角甙級(jí)分的皮膚局部注射劑的溶劑與將人參皂甙Rb1用作皮膚局部注射劑或靜脈內(nèi)給用制劑時(shí)一樣，可以選擇生理鹽水、蒸餾水、磷酸鹽緩沖液、葡萄糖溶液、脂質(zhì)體、脂肪乳劑等中的任意一種。當(dāng)然，上述的局部注射劑不僅可注入皮膚、而且可注入所有的器官和組織中，也可以用作點(diǎn)眼藥、點(diǎn)耳藥。另外，局部注射劑中粗皂角甙級(jí)分的濃度是試驗(yàn)值，實(shí)際上應(yīng)調(diào)整局部注射劑中粗皂角甙級(jí)分的混入量，以使皮膚局部粗皂角甙級(jí)分的細(xì)胞外液濃度為14.5ng/ml或更低、優(yōu)選145pg/ml或更低、更優(yōu)選1450fg/ml或更低。
為治療褥瘡、治療皮膚潰瘍、治療創(chuàng)傷、促進(jìn)皮膚組織再生、重構(gòu)等利用人參的粗皂角甙級(jí)分作為皮膚外用劑時(shí)，可以在任意基質(zhì)中混入粗皂角甙級(jí)分，但其濃度應(yīng)調(diào)整為每100g或100ml基質(zhì)145mg(0.145重量％)或更低、優(yōu)選1.45mg/ml(0.00145重量％)或更低。為預(yù)防、治療、處置前述的皮膚疾病而在皮膚外用劑中混入粗皂角甙級(jí)分時(shí)的濃度上限為約1.45％。但是如上所述，由于人參皂甙Rb1在濃度為0.00000001重量％(10-8重量％)時(shí)可以處置或治愈開放式創(chuàng)傷，所以人參、人參提取物或人參粗皂角甙級(jí)分在皮膚外用劑中的濃度也可優(yōu)選設(shè)定為0.001重量％或更低。
當(dāng)然，皮膚疾病治療外用劑中的前述人參粗皂角甙級(jí)分的含量是試驗(yàn)值，實(shí)際上將皮膚局部粗皂角甙級(jí)分的細(xì)胞外液濃度作為指標(biāo)，應(yīng)調(diào)整外用劑中粗皂角甙級(jí)分的混入量。
最后，本發(fā)明中使用的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1或人參的粗皂角甙級(jí)分為已知的人參成分，是副作用極小的醫(yī)藥組成物、粘膜外用組成物、健康藥組成物、生毛、育毛用組成物、獸醫(yī)藥組成物、化學(xué)去皮用組成物、生長調(diào)節(jié)用組成物或化妝品組成物。另外，在本發(fā)明中已經(jīng)描述了人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的效果、效能、用途與具有BcL-xL表達(dá)增強(qiáng)作用的前皂角甙關(guān)聯(lián)肽(日本專利申請(qǐng)平11-185155)和其他通過腦室內(nèi)給用具有腦細(xì)胞保護(hù)作用的化合物的效果、效能和用途是同樣的。
如上所述，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物、化妝品組合物、化學(xué)去皮用組合物、健康藥組合物、肥料組合物、飼料組合物、粘膜外用組合物、生長調(diào)節(jié)組合物、獸醫(yī)藥組合物及生毛、育毛組合物對(duì)活體活體組織(動(dòng)物組織、植物組織)及病變組織的再生和/或重構(gòu)表現(xiàn)出優(yōu)良的作用。因此，本發(fā)明提供了使用前述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，通過細(xì)胞或組織的再生和/或重構(gòu)治療或處治器質(zhì)性疾病的方法。另外，本發(fā)明提供使用本發(fā)明的化妝品組合物的化妝方法、使用本發(fā)明的化學(xué)去皮組合物的化學(xué)去皮方法、以及使用本發(fā)明的生發(fā)、育發(fā)組合物的生發(fā)、育發(fā)方法。另外，本發(fā)明提供使用本發(fā)明的肥料組合物或飼料組合物的食品原料增產(chǎn)方法。
另外，本發(fā)明提供了用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1制備的包括本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物的醫(yī)藥制劑和獸藥制劑。另外，本發(fā)明提供了與人參皂甙Rb1具有類似的效果、效能和用途的人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1的應(yīng)用。實(shí)施例以下將通過具體的實(shí)驗(yàn)例詳細(xì)說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些具體實(shí)施例的限制。實(shí)施例1(通過靜脈內(nèi)注入人參皂甙Rb1治療切開創(chuàng)傷)使用體重約300g的雄性Wistar大鼠。在動(dòng)物以1212小時(shí)明暗循環(huán)的室內(nèi)飼養(yǎng)，并自由攝取水及飼料。在吸入麻醉狀態(tài)下在每只動(dòng)物的背部作成長約3cm的切開創(chuàng)傷，并使用尼龍線縫合，1小時(shí)后，靜脈內(nèi)注入一次溶解于生理鹽水中的人參皂甙Rb1(60μg)。之后，利用Alza滲透微型真空泵連續(xù)靜脈內(nèi)注入人參皂甙Rb1(60μg/天)7天。
對(duì)制作了類似的切開創(chuàng)傷并用尼龍線縫合的對(duì)照動(dòng)物僅靜脈內(nèi)給用等量的生理鹽水。
在完成靜脈內(nèi)連續(xù)注入人參皂甙Rb1或生理鹽水2天后，用用戊巴比妥對(duì)動(dòng)物實(shí)施麻醉并固定，經(jīng)心灌注含有4％多聚甲醛的0.1M磷酸鹽緩沖劑。然后，采集包含切開縫合部位的皮膚組織，后固定后嵌入石蠟中。制作厚度為5μm的石蠟切片，供蘇木精-曙紅染色(HE)用。結(jié)果如圖1所示。圖1A顯示施用人參皂甙Rb1的情況，圖1B顯示施用生理鹽水的情況。圖中“S”表示瘢痕或疤痕。
如圖1A所示，施用人參皂甙Rb1與圖1B施用生理鹽水相比，在切開創(chuàng)傷局部的鄰近處疤痕或肉芽形成明顯較少，且觀察到汗腺、皮脂腺和毛囊等許多皮膚附屬物。另外，施用人參皂甙Rb1時(shí)，與施用生理鹽水的情況不同，除創(chuàng)傷局部外的表皮、真皮和皮下組織被再生、重構(gòu)或恢復(fù)到接近正常的狀態(tài)。實(shí)施例2(通過靜脈內(nèi)注入人參皂甙Rb1治療開放性創(chuàng)傷或皮膚缺損)使用體重約300g的雄性Wistar大鼠。在吸入麻醉的狀態(tài)下在動(dòng)物的背部皮膚區(qū)域進(jìn)行直徑6mm的穿刺活檢以產(chǎn)生開放式創(chuàng)傷，并原樣放置。約1小時(shí)后，靜脈內(nèi)施用溶于生理鹽水中的人參皂甙Rb1(12μg)一次，然后利用Alza滲透微型真空泵連續(xù)靜脈內(nèi)灌注人參皂甙Rb17天(12μg/天)。
在制作了同樣的開放式創(chuàng)傷并原樣放置的對(duì)照動(dòng)物中，靜脈內(nèi)施用了等量的生理鹽水。
結(jié)束連續(xù)靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1或生理鹽水2天后，用戊巴比妥將動(dòng)物麻醉并固定，經(jīng)心灌流含有4％多聚甲醛的0.1M磷酸鹽緩沖劑。此后，采集包含開放式創(chuàng)傷的皮膚組織、后固定后嵌入石蠟中。切下厚5μm的石蠟切片并用蘇木精-曙紅(HE)染色。結(jié)果如圖2所示。圖2A顯示了給用人參皂甙Rb1的情況，圖2B顯示了給用生理鹽水的情況。圖2A和圖2B中箭頭的左側(cè)是健康區(qū)域；圖2A中箭頭的右側(cè)是再生皮膚組織；圖2B中箭頭的右側(cè)主要顯示了瘢痕或肉芽組織。在圖2A的再生皮膚組織中，在表皮下的結(jié)締組織(真皮或皮下組織)中觀察到許多毛囊、毛乳頭、皮脂腺和立毛肌，在再生和重構(gòu)的皮膚組織下面觀察到少量的瘢痕或肉芽。
如圖2A所示，在給用人參皂甙Rb1的情況下，與圖2B中給用生理鹽水的情況相比，瘢痕或肉芽形成明顯少且發(fā)生了充分的上皮形成或上皮化，并且具有乳頭的真皮的結(jié)締組織和皮下組織的再生和/或重構(gòu)進(jìn)行到接近正常的狀態(tài)。另外，給用人參皂甙Rb1的情況與給用生理鹽水的情況不同，在開放式創(chuàng)傷后再生的皮膚組織中觀察到大量的皮膚附屬物如毛囊、毛乳頭、皮脂腺、立毛肌、汗腺等，并且血管網(wǎng)絡(luò)也再生、重構(gòu)和/或恢復(fù)到接近正常組織的狀態(tài)。實(shí)施例3(通過靜脈內(nèi)預(yù)先注入人參皂甙Rb1對(duì)開放式創(chuàng)傷或皮膚缺損的改善效果)在吸入麻醉狀態(tài)下向雄性Wistar大鼠(體重約300g)靜脈內(nèi)給用溶于生理鹽水中的人參皂甙Rb1(12μg)，然后使用Alza滲透微型真空泵靜脈內(nèi)連續(xù)注入人參皂甙Rb14天(12μg/天)。之后，在吸入麻醉下在動(dòng)物的背部皮膚區(qū)域進(jìn)行直徑6mm的穿刺活檢以制作皮開放創(chuàng)傷，同時(shí)靜脈內(nèi)連續(xù)注入人參皂甙Rb13天。
在制作了同樣的開放式創(chuàng)傷并原樣放置的對(duì)照動(dòng)物中，靜脈內(nèi)給用了等量的生理鹽水。
結(jié)束靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參皂甙Rb1或生理鹽水2天后(即，制作皮開創(chuàng)傷后的第5天)，用戊巴比妥將動(dòng)物麻醉并固定，經(jīng)心灌注含有4％多聚甲醛的0.1M磷酸鹽緩沖劑。然后，采集包含開放創(chuàng)傷的皮膚組織，后固定后按照常規(guī)方法嵌入石蠟中。切取5μm厚的石蠟切片并用蘇木精-曙紅(HE)染色。結(jié)果如圖3所示。圖3A顯示了給用人參皂甙Rb1的情況，圖3B顯示了給用生理鹽水的情況?！癷”代表焦痂，“ep”代表表皮的復(fù)層扁平上皮，“bv”代表血管。
如圖3A所示，在給用人參皂甙Rb1的情況下，在制作開放性創(chuàng)傷后第5天，焦痂下面表皮(復(fù)層扁平上皮)明顯地再生和重構(gòu)，并且在緊接表皮(復(fù)層扁平上皮)的下面分布著充滿紅血球的密集再生的血管或新生的血管，同時(shí)在真皮的結(jié)締組織或皮下組織中，觀察到從所述的血管分枝出來的較細(xì)的血管密集地存在。另一方面，如圖3B所示，在給用生理鹽水的情況下，即使在制作開放性創(chuàng)傷后的第5天，焦痂下面表皮(復(fù)層扁平上皮)的再生也極為不完全，并且在緊接非常薄的真皮下面再生的血管明顯比給用人參皂甙Rb1時(shí)的細(xì)。因此，在被認(rèn)為將來變成瘢痕或肉芽的、表皮下的結(jié)締組織中觀察到少量極細(xì)的血管。因此，通過靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1，明顯地促進(jìn)了皮膚組織的再生和重構(gòu)，并且一次斷裂和切斷的血管的再生、新生和重構(gòu)受到了靜脈內(nèi)給用人參皂甙Rb1的促進(jìn)。
按照該實(shí)施例，可以說人參皂甙Rb1表現(xiàn)出優(yōu)良的皮膚組織再生和重構(gòu)促進(jìn)作用，即使在制作開放式創(chuàng)作之前靜脈內(nèi)給用或制作開放式創(chuàng)傷之后靜脈內(nèi)給用。實(shí)施例4(用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1對(duì)縫合不全的預(yù)防、治療或處置)糖尿病患者、高齡者、免疫缺陷疾病患者、低營養(yǎng)患者、癌癥患者等的外科手術(shù)后發(fā)生縫合不全的很多，因此最好事先預(yù)防。除通常治療之外，如果以每天以0.02mg或更高、優(yōu)選0.2mg或更高、更優(yōu)選10mg或更高的劑量靜脈內(nèi)連日單次注入或連續(xù)注入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，手術(shù)后發(fā)生縫合不全的發(fā)病率降低，手術(shù)創(chuàng)傷的恢復(fù)加快。另外，靜脈內(nèi)注入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的同時(shí)，在水溶性基質(zhì)、軟膏基質(zhì)、脂溶性基質(zhì)等任選基質(zhì)中混入低濃度的人參皂甙Rb1制成皮膚外用劑(霜、凝膠、噴霧劑或軟膏等)，直至創(chuàng)傷治愈涂布于手術(shù)創(chuàng)傷及其周邊部位之前。另外，優(yōu)選在手術(shù)中局部給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。此時(shí)，為使人參皂甙Rb1在局部的細(xì)胞外液濃度保持1ng/ml或更低、優(yōu)選10pg/ml或更低、更優(yōu)選100fg/ml或更低，調(diào)整局部給藥制劑和基質(zhì)中人參皂甙Rb1的混入量。即，皮膚外用劑中人參皂甙Rb1的混入量優(yōu)選為低于0.001重量％的水平。實(shí)施例5(用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1治療、處置放射線損傷或灼傷)重癥的放射線損傷患者或灼傷患者的皮膚組織發(fā)生大范圍的變性脫落，即使通過移植皮膚培養(yǎng)片也不能獲得充分的效果，且可能危及預(yù)后患者的生命。對(duì)于這類患者，為促進(jìn)從移植培養(yǎng)片的皮膚組織再生，以及通過健康皮膚組織構(gòu)成細(xì)胞的分裂、增殖、向病變部位的移動(dòng)、分化而再生病變組織，以每天0.02mg或更高、優(yōu)選0.2mg或更高、更優(yōu)選10mg或更高的劑量每日一次或持續(xù)靜脈內(nèi)注入，直到觀察到癥狀改善。當(dāng)然，靜脈內(nèi)注入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的同時(shí)，在水溶性基質(zhì)或脂溶性基質(zhì)等任意基質(zhì)中混入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1制成皮膚外用劑(霜、凝膠、洗劑、噴霧劑或軟膏等)，涂布于手術(shù)創(chuàng)傷及其周邊部位直至創(chuàng)傷治愈。另外，優(yōu)選在手術(shù)中局部給用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。此時(shí)，為使人參皂甙Rb1在局部的細(xì)胞外液濃度保持1ng/ml或更低、優(yōu)選10pg/ml或更低、更優(yōu)選100fg/ml或更低，調(diào)整局部基質(zhì)中人參皂甙Rb1的混入量。皮膚外用劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度優(yōu)選低于0.001重量％。如果放射線損傷或灼傷較輕時(shí)，也可以僅給用上述的皮膚外用劑。實(shí)施例6(用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1預(yù)防、治療或處置褥瘡)臥床不起的患者及高齡者的褥瘡是可能惡化全身狀態(tài)和QOL(生活質(zhì)量)的皮膚疾病。早期的褥瘡觀察到病變部位的皮膚發(fā)紅，且即使在此時(shí)，既沒有涂布在病變部位及其周邊并顯示出效果和效能的外用劑，也沒有通過靜脈內(nèi)給用制劑表現(xiàn)出效果和效能的藥劑。這是皮膚科領(lǐng)域的大問題。當(dāng)然，皮膚組織缺損的褥瘡部位的治療也極為困難。
人參皂甙特別是人參皂甙Rb1可以混入含有或不含有葡萄糖的水溶性基質(zhì)或脂溶性基質(zhì)中，制成皮膚外用劑(霜?jiǎng)┗蜍浉?。將制劑連續(xù)涂布在褥瘡部位局部及其周邊部位，直到褥瘡病變被治愈或減小。皮膚外用劑中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度優(yōu)選低于0.001重量％。此時(shí)為使局部中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度保持1ng/ml或更低、優(yōu)選10pg/ml或更低、更優(yōu)選100fg/ml或更低，可調(diào)整基質(zhì)中人參皂甙Rb1的混入量。另外在必要時(shí)，按照實(shí)施例4和實(shí)施例5所述，可同時(shí)用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的靜脈內(nèi)給用。如日本專利申請(qǐng)平10-365560、PCT/JP99/02550(含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)所述，人參皂甙Rb1通過強(qiáng)大的細(xì)胞保護(hù)作用抑制褥瘡病變的擴(kuò)展，并通過促進(jìn)皮膚組織的再生和/或重構(gòu)，對(duì)皮膚組織發(fā)生一次缺損的褥瘡病變發(fā)揮優(yōu)良的治療效果。實(shí)施例7(用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1治療消化道潰瘍)作為胃潰瘍或十二脂腸潰瘍的藥物治療手段，主要使用H2受體抑制劑、中子泵抑制劑、消化道粘膜保護(hù)劑等，但即使?jié)儾∽兺ㄟ^藥物被暫時(shí)治愈，給藥中止時(shí)潰瘍病變經(jīng)常復(fù)發(fā)。另外，經(jīng)常在被認(rèn)為是固疾的克羅恩氏病和潰瘍性大腸炎中觀察到潰瘍病變，成為患者的預(yù)后惡化的原因。在胃潰瘍、十二指腸潰瘍、潰瘍性大腸炎、克羅恩氏病發(fā)病后，在施用通常的治療手段的同時(shí)盡可能早地通過靜脈內(nèi)輸注、直腸內(nèi)給藥、滴耳或通過內(nèi)窺鏡粘膜外給藥施用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，然后在通過內(nèi)窺鏡確認(rèn)病變治愈或改善之前繼續(xù)治療。實(shí)施例8(用人參皂甙特別是人參皂甙Rb1治療糖尿病性皮膚潰瘍)糖尿病性皮膚潰瘍是伴隨病變部位的血流障礙或皮膚組織的缺損等的難治性疾病，但是如果靜脈內(nèi)給用、局部注入或外用涂布具有促進(jìn)血管或皮膚組織再生和/或重構(gòu)作用的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，可以獲得效果。即，對(duì)于患有糖尿病性皮膚潰瘍的患者，在進(jìn)行常規(guī)的治療的同時(shí)，以每天0.02mg或更高、優(yōu)選0.2mg或更高、更優(yōu)選10mg或更高的劑量向靜脈內(nèi)每日一次注入或持續(xù)注入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1。另外根據(jù)需要，可以按照實(shí)施例4所述，向病變部位及其周邊涂布含有人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的皮膚外用劑，或可以向病變部位局部注入人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的生理鹽水溶液。此時(shí)，為使病變部位人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度保持1ng/ml或更低、優(yōu)選10pg/ml或更低、更優(yōu)選100fg/ml或更低，可調(diào)整基質(zhì)中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的混入量或含有人參皂甙Rb1的生理鹽水(溶劑)的局部注射劑中量。實(shí)施例9(用含有人參皂甙Rb1的皮膚外用劑治療開放式創(chuàng)傷或皮膚缺損)使用雄性Wistar大鼠(體重約300g)，在吸入麻醉下將動(dòng)物的背部剃毛后進(jìn)行直徑6mm的穿刺活檢，制作3處開放式創(chuàng)傷。其中，在兩個(gè)部位上每天涂布一次含有0.01重量％或0.001重量％的人參皂甙Rb1的眼科白凡士林(Propet)0.1g，在剩下的一處開放式創(chuàng)傷中，涂布等量的白凡士林(Propet)。制作開放式創(chuàng)傷后的第9天，對(duì)包含創(chuàng)傷部位的皮膚進(jìn)行照相。另外，我們(本發(fā)明人)用同樣的方法考查了皮膚外用或局部涂布0.0001重量％、0.00001重量％或0.000001重量％人參皂甙Rb1的效果。照相之前剛剛對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用麻醉方法實(shí)施了安樂死，照相后采集創(chuàng)傷部位或采集創(chuàng)傷部位后進(jìn)行照相。此后，將創(chuàng)傷部位組織保存在固定液中。結(jié)果如圖5和圖6所示。
在圖5中，從上面數(shù)第一個(gè)創(chuàng)傷是在制作了開放式創(chuàng)傷后僅外部給用(外部涂布)了propet的情況，顯示了明顯的紅色創(chuàng)傷(在照片中的黑色開放式創(chuàng)傷)。圖5中，從上面數(shù)第二個(gè)創(chuàng)傷是外部涂布(皮膚外部給藥)含有0.001重量％的人參皂甙Rb1的propet的情況，并且開放式創(chuàng)傷面積與僅外部涂布或局部涂布了propet的第一個(gè)創(chuàng)傷相比，開放式創(chuàng)傷的面積略微減小。用含有0.01重量％人參皂甙Rb1的propet進(jìn)行外部或局部涂布的第三個(gè)開放式創(chuàng)傷顯示與作為對(duì)照的第一個(gè)創(chuàng)傷相比沒有差別。如圖6所示，從上面數(shù)的第二個(gè)和第三個(gè)，含有0.00001重量％(10-5重量％)或0.000001重量％(10-6重量％)人參皂甙Rb1的propet與含有0.0001重量％人參皂甙Rb1的propet相比具有優(yōu)良的效果。另外，皮膚外用給藥0.000001重量％人參皂甙Rb1的結(jié)果是，從再生的開放式創(chuàng)傷上觀察到明顯的毛發(fā)恢復(fù)或毛發(fā)生長。這說明，在向開放式創(chuàng)傷外用涂布或外用噴霧含有人參皂甙Rb1的皮膚外用劑時(shí)，可以獲得與靜脈內(nèi)連續(xù)給用人參皂甙Rb1幾乎相同的效果和效能。實(shí)施例10(用人參皂甙Rb1治療人口腔粘膜咬傷No.1)
接下來，本發(fā)明人之一(阪中)自己確認(rèn)了含有低濃度人參皂甙Rb1的propet對(duì)口腔粘膜的咬傷是否有效。在2000年5月2日，牙科治療后的約下午2點(diǎn)，在三叉神經(jīng)的左第三分枝和牙周麻醉醒來之前，由于很餓阪中開始吃遲的午飯。他咬了自己的左唇粘膜三次，并感到口腔中有鐵腥味(血液)，使用鏡子確認(rèn)其咬傷的結(jié)果是，他發(fā)現(xiàn)了至少五個(gè)口腔粘膜的糜爛或缺損區(qū)，在一個(gè)點(diǎn)上發(fā)現(xiàn)了另外的血囊腫或血腫。由于他斷定如果讓它(即口腔粘膜的咬傷)按照原樣放置數(shù)日，將并發(fā)口瘡性口腔炎，需要1周至10天才完全治愈，因此將少量通過本發(fā)明人的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已確認(rèn)具有效果和效能的、含有低濃度(0.00001重量％)人參皂甙Rb1的propet涂布到有口腔粘膜糜爛或缺損的5個(gè)部位上及一個(gè)血囊腫或血腫部位。飯前和飯后以及在飯間飲食后進(jìn)行外部涂布或局部涂布。即，在嘴唇粘膜的咬傷部位上外部涂布或局部涂布含有0.00001重量％人參皂甙Rb1的propet每天6-10次。咬傷后96小時(shí)時(shí)嘴唇粘膜的照片如圖7所示。
如圖7的照片所示，盡管在咬傷后96小時(shí)時(shí)，如白箭頭所示，仍有血囊腫或血腫，但是如黑箭頭所示的嘴唇粘膜的咬傷部位(即，糜爛或缺損的口腔粘膜)僅有輕微地發(fā)紅并差不多完全上皮化，并且創(chuàng)傷被認(rèn)為明顯治愈。另外，在咬傷部位上外部涂布或局部涂布含有0.00001重量％人參皂甙Rb1的propet后，創(chuàng)傷部位的疼痛明顯減輕。實(shí)施例11(用人參皂甙Rb1治療口腔粘膜咬傷No.2)之后，本發(fā)明的發(fā)明人之一(阪中)在2000年5月26日午飯時(shí)再次咬了左下嘴唇粘膜，并向咬傷的部位局部或外部涂布了含有0.00001重量％人參皂甙Rb1的propet。咬傷后立即拍攝的照片如圖8的左邊所示，咬傷后72小時(shí)時(shí)拍攝的照片如圖8的右邊所示。
如圖8所示，如果在粘膜上外部或局部涂布低濃度的人參皂甙Rb1時(shí)，發(fā)現(xiàn)咬傷迅速地治愈且沒有并發(fā)口瘡性口炎。實(shí)施例12(通過人參皂甙Rb1對(duì)黃金葛插條的新生和/或再生的促進(jìn)作用)我們考查了人參皂甙特別是人參皂甙Rb1能否不僅促進(jìn)皮膚組織或口腔粘膜組織，而且可以促進(jìn)植物組織的新生、再生或重構(gòu)。為此，選擇了一種有葉植物——黃金葛(Epipremunum aureum，goldenpothos)。本發(fā)明人之一(田中)從室內(nèi)的黃金葛母體植物上取了6個(gè)相同的插條。其中，3個(gè)插條僅用水進(jìn)行水培養(yǎng)，其余的3個(gè)插條在含有濃度為100fg/ml人參皂甙Rb1的水中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)第13日的插條的照片如圖9所示。圖9照片的左側(cè)是僅用水培養(yǎng)的插條(黃金葛的莖和枝)，圖9照片的右側(cè)是用含有濃度為100fg/ml人參皂甙Rb1的水進(jìn)行培養(yǎng)的插條。在用含有低濃度人參皂甙Rb1(100fg/ml)的水對(duì)黃金葛進(jìn)行水培養(yǎng)時(shí)，根的生長被促進(jìn)。
然后，我們進(jìn)一步用水培養(yǎng)上述插條，在第22天，再次拍照。結(jié)果如圖10所示。圖10的左側(cè)為僅用水培養(yǎng)了22天的黃金葛的插條的照片，圖10的右側(cè)是用含有低濃度的人參皂甙Rb1(100fg/ml)的水培養(yǎng)的插條的照片。含有或不含有人參皂甙Rb1的插栽用水一周更換一次。
如圖10所示，當(dāng)用含有低濃度的人參皂甙Rb1(100fg/ml)的水培養(yǎng)插條22天時(shí)，與僅用水培養(yǎng)的黃金葛相比，新生或再生了多條生長到接觸用于水栽培的玻璃容器的根。因此，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明了低濃度、低用量和/或低劑量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1不僅促進(jìn)皮膚組織和人口腔粘膜組織，而且促進(jìn)植物組織的新生、再生或重構(gòu)。實(shí)施例13(人參粗皂角甙級(jí)分對(duì)插條新生和再生的促進(jìn)作用)后來，我們考查了人參的粗皂角甙級(jí)分能否象低濃度的人參皂甙Rb1那樣促進(jìn)黃金葛插條的新生、再生或重構(gòu)。為此，從黃金葛的母體植物上取兩條相同的插條。其中的一條插條僅用水培養(yǎng)，剩余的一條用含有濃度為1450fg/ml的人參的粗皂角甙級(jí)分的水培養(yǎng)。培養(yǎng)第14天插條的照片如圖11所示。圖11的照片左側(cè)是僅用水培養(yǎng)的插條，圖11的照片右側(cè)是用含有人參的粗皂角甙級(jí)分(1450fg/ml)的水培養(yǎng)的插條。在用含有低濃度的人參粗皂角甙級(jí)分(1450fg/ml)水培養(yǎng)黃金葛的插條時(shí)，與僅用水培養(yǎng)相比，根的生長被促進(jìn)。即，人參的粗皂角甙級(jí)分以與人參皂甙Rb1同樣的方式，促進(jìn)植物組織的新生、再生或重構(gòu)。很自然，含有粗皂角甙的人參提取物和人參也具有相同的作用。即，可以說人參、人參提取物、人參的粗皂角甙和人參皂甙特別是人參皂甙Rb1能夠促進(jìn)所有活體組織(動(dòng)物和植物組織)的再生、新生和重構(gòu)。實(shí)施例14(用含有10-4重量％～10-8重量％的人參皂甙Rb1的propet治療開放式創(chuàng)傷)在吸入麻醉狀態(tài)下在每只動(dòng)物的6個(gè)背部區(qū)域上施行直徑6mm的穿刺活檢，制作開放式創(chuàng)傷。之后，在各創(chuàng)傷上外部涂布0.1g含有濃度分別為0.0001重量％(10-4重量％)、0.00001重量％(10-5重量％)、0.000001重量％(10-6重量％)、0.0000001重量％(10-7重量％)、0.00000001重量％(10-8重量％)人參皂甙Rb1的propet(眼科白凡士林)一天一次，涂布9天。在對(duì)照動(dòng)物中僅用等量的propet外部或局部涂布。然后，通過麻醉施行安樂死后立即取下含有開放式創(chuàng)傷的皮膚并拍照。取下的皮膚組織保存在固定劑中。結(jié)果如圖12所示。
如圖12所示，即使當(dāng)含有濃度為10-6重量％至10-8重量％的人參皂甙Rb1(即，人參皂甙Rb1的濃度為10ng/g至100pg/g)的propet被外部涂布或局部涂布到開放式創(chuàng)傷上時(shí)，和含有10-5重量％人參皂甙Rb1的propet一樣，與僅用propet外部涂布或局部涂布開放式創(chuàng)傷相比，也顯著地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈。因此，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1用作皮膚外用劑或皮膚局部涂布劑時(shí)，外用劑或局部涂布劑中的濃度優(yōu)選設(shè)定為約10-8重量％或更低。因此，人參皂甙特別是人參皂甙Rb1、人參的粗皂角甙級(jí)分、人參的提取物或人參用作化妝品組合物、或健康藥物組合物時(shí)，其在化妝品、化學(xué)去皮劑或健康藥中的濃度應(yīng)設(shè)定為低于0.001重量％、優(yōu)選為0.00001重量％(10-5重量％)或更低、更優(yōu)選0.00000001重量％(10-8重量％)或更低。
在上述說明性實(shí)驗(yàn)中，將僅用propet外部涂布的開放式創(chuàng)傷區(qū)域(發(fā)紅區(qū))被設(shè)定為分母，用以濃度為10-4重量％至10-8重量％的人參皂甙Rb1外部涂布的開放式創(chuàng)傷區(qū)設(shè)定為分子，并計(jì)算出其比值。結(jié)果如圖13所示。如圖13所示，向開放式創(chuàng)傷部位外部涂布或局部涂布低濃度的人參皂甙Rb1時(shí)，顯著地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈。按照ANOVA(變異數(shù)分析)+謝弗事后檢驗(yàn)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。*P＜0.05，**P＜0.01。由于局部或外部涂布濃度約10-8重量％的人參皂甙Rb1將開放式創(chuàng)傷的面積減小到對(duì)照組的約1/4，因此通過外部或局部給用低濃度的人參皂甙Rb1，開放式創(chuàng)傷的體積看起來減小到約1/8。實(shí)施例15(用含有低濃度人參皂甙Rb1的propet治療口腔粘膜灼傷或口瘡性口炎)當(dāng)熱的食物或飲料急速地放入口腔內(nèi)，舌粘膜、口唇粘膜、硬顎粘膜或軟顎粘膜受到灼傷，經(jīng)常引起粘膜上皮脫落或粘膜發(fā)紅。當(dāng)然，這樣的灼傷通常伴隨疼痛。另外，口腔粘膜咬傷或灼傷后，或由于未明原因經(jīng)常發(fā)生口瘡性口炎時(shí)，結(jié)果是，通?？谇恢袝?huì)在約1周至10天感到疼痛，且經(jīng)常難以治愈。如果將含有濃度低于10-3重量％、優(yōu)選濃度為10-5重量％或更低、更優(yōu)選10-7重量％或更低人參皂甙Rb1的軟膏涂布到上述的口腔粘膜的灼傷或口瘡性口炎上，每天3-10次，特別是飯前或飯后，將減輕疼痛且促進(jìn)粘膜缺損或創(chuàng)傷治愈。至于將人參皂甙特別是人參皂甙Rb1用作口腔粘膜外用劑時(shí)的基質(zhì)，可以使用與地塞米松軟膏和丙酮化去炎松同樣的基質(zhì)?？谇徽衬ね庥脛┲兴娜藚⒃磉疤貏e是人參皂甙Rb1的最佳濃度應(yīng)考慮為比人參皂甙Rb1在皮膚外用劑中的濃度高10-1000倍。實(shí)施例16(用含有二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑治療開放式創(chuàng)傷)
接下來，我們考查了人參皂甙衍生物能否象人參皂甙Rb1一樣，以低濃度、低用量或低劑量促進(jìn)組織再生和/或重構(gòu)。為此，我們選擇了二氫人參皂甙Rb1作為人參皂甙衍生物之一，并考查了所述化合物的創(chuàng)傷治愈作用。二氫人參皂甙Rb1的詳細(xì)情況在PCT/JP00/04102(含有人參的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)的說明書中描述。在吸入麻醉狀態(tài)下在大鼠(n＝4)背部的5處進(jìn)行6mm的穿刺活檢，制作開放式創(chuàng)傷。其后，在各開放式創(chuàng)傷上外部或局部涂布0.1g含有濃度分別為0.0001重量％(10-4重量％)、0.00001重量％(10-5重量％)、0.000001重量％(10-6重量％)或0.0000001重量％(10-7重量％)二氫人參皂甙Rb1的propet，一天一次，涂布9天。在對(duì)照動(dòng)物中僅用等量的propet涂布。然后，在通過麻醉施行安樂死后立即采集含有開放式創(chuàng)傷的皮膚并拍照。取下的皮膚組織保存在固定劑中。結(jié)果如圖14所示。
如圖14所示，在開放式創(chuàng)傷上外部或局部涂布含有濃度為0.00001重量％(10-5重量％)至0.0000001重量％(10-7重量％)(即，二氫人參皂甙Rb1的濃度為100ng/g至1ng/g)的二氫人參皂甙Rb1的propet時(shí)，與僅用propet外部或局部涂布的開放式創(chuàng)傷相比，明顯地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈。在外部或局部給用低濃度的二氫人參皂甙Rb1時(shí)，在創(chuàng)傷治愈的部位明顯觀察到毛發(fā)生長。因此，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1用作皮膚外用劑或皮膚局部用劑時(shí)，外用或局部用劑中的濃度被認(rèn)為優(yōu)選設(shè)定為約0.0000001重量％(10-7重量％)或更低。因此，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1也用作化妝品組合物時(shí)，化妝品或保健藥物中的濃度應(yīng)設(shè)定為低于0.001重量％的水平，優(yōu)選為0.00001重量％(10-5重量％)或更低，更優(yōu)選0.0000001重量％(10-7重量％)或更低。
在上述說明的實(shí)驗(yàn)例中，僅用propet(眼科白凡士林)外部涂布的開放式創(chuàng)傷區(qū)域(上火區(qū))被設(shè)定為分母，用以濃度為0.0001重量％(10-4重量％)至0.0000001重量％(10-7重量％)的二氫人參皂甙Rb1外部涂布的開放式創(chuàng)傷區(qū)設(shè)定為分子，并計(jì)算出其比值。結(jié)果如圖15所示。如圖15所示，在開放式創(chuàng)傷上外部或局部給用濃度為0.00001重量％(10-5重量％)或更少的二氫人參皂甙Rb1促進(jìn)了皮膚組織的再生和/或重構(gòu)，并顯著地促進(jìn)了創(chuàng)傷治愈。特別地，外部或局部給用濃度為0.00001重量％(10-5重量％)或更低的二氫人參皂甙Rb1，即100ng/g或更低或100ng/ml或更低的二氫人參皂甙Rb1顯著地減小了開放式創(chuàng)傷的這樣一個(gè)事實(shí)，有力地支持當(dāng)病變部位中二氫人參皂甙Rb1的細(xì)胞外液濃度為100ng/ml或更低時(shí)，促進(jìn)了活體組織的新生、再生或重構(gòu)。按照ANOVA+Fisher的PLSD進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，*P＜0.05。實(shí)施例17(用二氫人參皂甙Rb1保護(hù)培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞)接下來，為確認(rèn)二氫人參皂甙Rb1與人參皂甙Rb1具有相同的效果、效能和用途，我們使用了培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。
我們(阪中和田中)曾報(bào)告說當(dāng)培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞或神經(jīng)元受到短時(shí)間的硝普鈉的作用時(shí)，可引發(fā)神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡(Toku，K.等，J.Neurosci.Res.，53，415-425，1998)。使用該培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，我們已發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低的人參皂甙Rb1抑制神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性死亡樣細(xì)胞死亡(日本專利申請(qǐng)平10-365560，含有人參皂甙Rb1的腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑)。我們使用同樣的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)考查了二氫人參皂甙Rb1的神經(jīng)保護(hù)作用。
使用胰島素EDTA，從妊娠17天的大鼠胎仔的大腦皮質(zhì)中分離神經(jīng)細(xì)胞，并接種到涂有聚左旋賴氨酸的24孔板中。在含有10％胎牛血清的Dulbecco氏改性的伊氏培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)細(xì)胞16小時(shí)后，用含有胰島素、鐵傳遞蛋白等、用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基取代該培養(yǎng)基，并培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞3或4天。在培養(yǎng)的第3或第4天，向神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基中加入濃度為300μm硝普鈉(SNP)并溫育10分鐘。然后，用含有二氫人參皂甙Rb1(0-1ng/ml)和牛血清白蛋白的伊氏(Eagle′s)極限必需培養(yǎng)基代替原培養(yǎng)基。加入SNP 16小時(shí)后，用Laemmli電泳用樣品緩沖液溶解神經(jīng)細(xì)胞，并進(jìn)行聚丙烯酰胺電泳。將經(jīng)電泳的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜后，利用神經(jīng)細(xì)胞元特異的蛋白質(zhì)MAP2的抗體進(jìn)行免疫印跡(immunoblotting)。以定量神經(jīng)細(xì)胞的存活率，通過密度測定法分析免疫染色的MAPL帶。結(jié)果如圖16和圖17所示。作為參考，圖18顯示了二氫人參皂甙Rb1的NMR圖譜(400MHz，CD3OD)。
圖16的照片顯示了代替圖片的微管關(guān)聯(lián)蛋白2(MAP2)的免疫染色的結(jié)果。左側(cè)的第一泳道表示對(duì)照神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)果，顯示了清晰的MAP2帶(即，神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記的帶)。當(dāng)進(jìn)行SNP處理時(shí)，大量的神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡，并且從左數(shù)第二泳道中觀察到MAP2帶顯著被減弱。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入濃度為0.01fg/ml(泳道3)至1ng/ml(泳道7)的二氫人參皂甙Rb1時(shí)，由SNP引起的神經(jīng)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡被顯著地抑制，結(jié)果是，觀察到神經(jīng)細(xì)胞存活的標(biāo)記—強(qiáng)MAP2帶。
上述的MAP的免疫印跡實(shí)驗(yàn)重復(fù)了5次，并通過密度測量法分析結(jié)果(圖17)。如圖17所示，濃度為0.01fg/ml至1ng/ml的二氫人參皂甙Rb1明顯地抑制了神經(jīng)細(xì)胞或神經(jīng)元的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡。即，二氫人參皂甙Rb1對(duì)細(xì)胞，特別是對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有良好作用的濃度范圍稍寬于人參皂甙Rb1。因此，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1，當(dāng)其在病變組織中的細(xì)胞外液濃度為100ng/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選0.0001fg/ml-100fg/ml時(shí)，通過抑制細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡或編程性細(xì)胞死亡樣細(xì)胞死亡，表現(xiàn)出優(yōu)良的細(xì)胞保護(hù)作用，*P＜0.001，**P＜0.0001。
從上述含有0.00001重量％(10-5重量％)二氫人參皂甙Rb1的皮膚外用劑或局部涂布用劑表現(xiàn)出優(yōu)良的開放式創(chuàng)傷治愈作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以判斷出，當(dāng)在病變組織中的細(xì)胞外液濃度為100fg/ml或更低，優(yōu)選10pg/ml或更低，更優(yōu)選0.0001fg/ml-100fg/ml時(shí)，人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1對(duì)活體組織具有再生和重構(gòu)作用。
工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供含有人參的已知成分—人參皂甙特別是人參皂甙Rb1，具有極低副作用的醫(yī)藥組合物、皮膚外用組合物、粘膜外用組合物、健康藥組合物、化學(xué)去皮用組合物、化妝品組合物、肥料組合物、飼料組合物、生長調(diào)節(jié)組合物、或生毛、育毛組合物，其中人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的濃度較以前更低，并且新發(fā)現(xiàn)了其促進(jìn)活體組織的再生和/或重構(gòu)的優(yōu)良效果。這些優(yōu)良效果在含有人參皂甙Rb1的常規(guī)組合物中不可能被發(fā)現(xiàn)。低濃度和/或低劑量的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1通過活體組織的再生、重構(gòu)促進(jìn)作用，可用于引起病理組織學(xué)變化的所有器質(zhì)性疾病的預(yù)防、治療或處置，以及農(nóng)作物或海產(chǎn)品的栽培、生長、養(yǎng)殖。另外，在本發(fā)明中，發(fā)現(xiàn)人參皂甙衍生物特別是二氫人參皂甙Rb1、人參、人參提取物或人參的粗皂角甙級(jí)分具有與前述的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1同樣的效果、效能和用途。另外，本發(fā)明中所記載的人參皂甙特別是人參皂甙Rb1的效果、效能和用途可以同樣地適用于前皂角甙關(guān)聯(lián)肽(日本專利申請(qǐng)平11-185155)以及通過腦室內(nèi)給藥顯示腦細(xì)胞保護(hù)作用的其他化合物。
權(quán)利要求
1.用于預(yù)防、處置或治療引起活體組織病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中含有人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的含量低于組合物總重量的0.001％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽在病變部位的細(xì)胞外液濃度被調(diào)整為1ng/ml或更低。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽在病變部位的細(xì)胞外液濃度為0.01-100fg/ml或1-10,000fg/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽是人參皂甙Rb1或二氫人參皂甙Rb1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5的任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽存在于天然產(chǎn)物的提取物、其級(jí)分或其精制級(jí)分中。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們鹽是通過化學(xué)方法修飾天然產(chǎn)物而得的衍生物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中化學(xué)方法為還原。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中化學(xué)修飾的衍生物為二氫人參皂甙Rb1。
10.根據(jù)權(quán)利要求6的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中天然產(chǎn)物的提取物、其級(jí)分或其精制級(jí)分為人參、人參提取物或人參的粗皂角甙級(jí)分。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參、人參提取物或人參的粗皂角甙級(jí)分的含量為低于0.001重量％。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參、人參提取物或人參的粗皂角甙級(jí)分在病變部位的細(xì)胞外液濃度被調(diào)整為14.5ng/ml或更低。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中人參、人參提取物或人參的粗皂角甙級(jí)分在病變部位的細(xì)胞外液濃度為0.145-1,450fg/ml或14.5-145,000fg/ml。
14.一種靜脈內(nèi)給藥或靜脈內(nèi)注射制劑，其中包含權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的靜脈內(nèi)給藥或靜脈內(nèi)注射制劑，其中所述制劑為一次注射制劑或連續(xù)靜脈內(nèi)給藥制劑。
16.一種皮膚外用制劑，其中包含權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
17.一種粘膜外用制劑，其中包含權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-17的任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中所述的病理組織學(xué)變化是由創(chuàng)傷引起的。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中創(chuàng)傷為切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷、咬傷或缺損。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中創(chuàng)傷為外科手術(shù)后的縫合不全。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-20的任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中發(fā)生病理組織學(xué)變化的活體組織的預(yù)防、處置或治療包括促進(jìn)細(xì)胞的再生和/或重構(gòu)。
22.根據(jù)權(quán)利要求1-20的任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中發(fā)生病理組織學(xué)變化的活體組織的預(yù)防、處置或治療是由所述組織的再生和/或重構(gòu)引起的。
23.根據(jù)權(quán)利要求1-22的任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中組合物促進(jìn)器質(zhì)性疾病的治愈。
24.根據(jù)權(quán)利要求1-23的任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中活體組織為皮膚組織或包括口腔粘膜組織的粘膜組織。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中發(fā)生病理組織學(xué)變化的皮膚組織或包括口腔粘膜組織的粘膜組織的預(yù)防、處置或治療是由粘膜的表皮、上皮、真皮、真皮乳頭、皮下組織、結(jié)締組織、粘膜固有層、肌肉組織、唾液腺、混合腺、汗腺、皮脂腺、粘液腺、漿液腺、毛乳頭、毛囊、立毛肌、血管或末梢神經(jīng)的再生和/或重構(gòu)引起的。
26.根據(jù)權(quán)利要求24或25的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中包括促進(jìn)發(fā)生病理組織學(xué)變化的皮膚組織或包括口腔粘膜的粘膜組織的上皮化。
27.根據(jù)權(quán)利要求24-26任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中發(fā)生病理組織學(xué)變化的皮膚組織或包括口腔粘膜的粘膜組織的預(yù)防、處置或治療是由皮膚組織或包括口腔粘膜的粘膜組織的表皮細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞、上皮細(xì)胞、梅克爾細(xì)胞、黑素細(xì)胞、朗氏細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、干細(xì)胞、間葉細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、皮脂腺細(xì)胞、唾液腺細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、汗腺細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、粘液腺細(xì)胞、漿液腺細(xì)胞、混合腺細(xì)胞、肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞或毛囊細(xì)胞、或膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)的再生和/或重構(gòu)引起的。
28.根據(jù)權(quán)利要求24-26任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中發(fā)生病理組織學(xué)變化的皮膚組織或包括口腔粘膜的粘膜組織的預(yù)防、處置或治療是由發(fā)生病理組織學(xué)變化的皮膚組織中的生發(fā)生長或毛發(fā)營養(yǎng)化引起的。
29.根據(jù)權(quán)利要求24-26任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中發(fā)生病理組織學(xué)變化的皮膚組織或包括口腔粘膜的粘膜組織的預(yù)防、處置或治療是用于預(yù)防、治療或改善皮膚或粘膜的老化癥狀。
30.根據(jù)權(quán)利要求1-29任一項(xiàng)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中活體組織為移植的器官或組織。
31.皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中含有濃度為低于組合物重量0.001％的人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的皮膚外用組合物，其中皮膚外用組合物為化妝品組合物。
33.根據(jù)權(quán)利要求31的皮膚外用組合物，其中皮膚外用組合物為化學(xué)去皮組合物。
34.根據(jù)權(quán)利要求31的皮膚外用組合物，其中皮膚外用組合物為生發(fā)和/或毛發(fā)營養(yǎng)組合物。
35.根據(jù)權(quán)利要求31-34任一項(xiàng)的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽在皮膚組織或粘膜組織中的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的濃度為0.01-100fg/ml或1-10,000fg/ml。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中人參皂甙為人參皂甙Rb1。
38.根據(jù)權(quán)利要求31-36的任一項(xiàng)的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽存在于天然產(chǎn)物的提取物、其級(jí)分或其精制級(jí)分中。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中天然產(chǎn)物的提取物、其級(jí)分或其精制級(jí)分為人參、人參提取物或人參的粗皂角甙級(jí)分。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中人參的粗皂角甙級(jí)分、人參提取物、人參或它們的代謝產(chǎn)物在皮膚組織或粘膜組織中的細(xì)胞外液濃度為14.5ng/ml或更低。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中人參、人參提取物或人參的粗皂角甙級(jí)分的濃度為0.145-1,450fg/ml或14.5-145,000fg/ml。
42.根據(jù)權(quán)利要求31-36的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽是通過化學(xué)方法修飾天然產(chǎn)物而得的衍生物。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中化學(xué)修飾的衍生物為二氫人參皂甙Rb1。
44.根據(jù)權(quán)利要求31-43的任一項(xiàng)的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中皮膚外用組合物或粘膜外用組合物用于保護(hù)皮膚細(xì)胞或粘膜細(xì)胞，或用于預(yù)防、治療或改善皮膚或粘膜的老化癥狀。
45.根據(jù)權(quán)利要求44的皮膚外用組合物或粘膜外用組合物，其中皮膚或粘膜的老化癥狀為皮膚的萎縮、易感染性、松弛、頭屑、脫毛、瘙癢、粗糙、白發(fā)、龜裂、皮脂缺乏、角質(zhì)細(xì)胞剝離、角質(zhì)層剝離、皺裂、黃褐斑、皺紋、雀斑、曬斑、再生不良、色素沉著、干燥等，或粘膜的萎縮、剝離、上皮剝離、再生不良、龜裂、皺裂或干燥。
46.一種研究或篩選預(yù)防、處置或治療皮膚組織或粘膜組織疾病的有效成分的方法，包括使用人參皂甙或其代謝產(chǎn)物作為先導(dǎo)化合物。
47.根據(jù)權(quán)利要求46的方法，其中皮膚組織或粘膜組織的疾病為引起皮膚組織或粘膜組織的病理組織學(xué)變化。
48.根據(jù)權(quán)利要求46或47的方法，其中皮膚組織或粘膜組織的疾病為皮膚的切開創(chuàng)傷、開放式創(chuàng)傷或缺損，或口腔粘膜組織的咬傷。
49.一種研究或篩選促進(jìn)組織的再生或組織的重構(gòu)的新物質(zhì)的方法，包括使用人參皂甙作為靶分子。
50.根據(jù)權(quán)利要求46-49任一項(xiàng)的方法，其中人參皂甙為人參皂甙Rb1或二氫人參皂甙Rb1。
51.用于預(yù)防、處置或治療皮組織或粘膜組織疾病的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中包含根據(jù)權(quán)利要求46-50的方法研究的物質(zhì)。
52.人參皂甙或其代謝產(chǎn)物的用途，作為研究或篩選預(yù)防、處置或治療皮膚或粘膜疾病的有效成分的先導(dǎo)化合物。
53.人參皂甙或其代謝產(chǎn)物的用途，作為研究或篩選促進(jìn)引起病理組織學(xué)變化的組織再生促進(jìn)劑或組織重構(gòu)促進(jìn)劑。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的用途，其中發(fā)生病理組織學(xué)變化的活體組織為切開創(chuàng)傷或開放式創(chuàng)傷的皮膚，或被咬傷的口腔粘膜。
55.人參皂甙、其代謝產(chǎn)物或它們的鹽的用途，為用于制備預(yù)防、處置或治療引起皮膚組織或粘膜組織的病理組織學(xué)變化的器質(zhì)性疾病的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物。
56.根據(jù)權(quán)利要求52-55任一項(xiàng)的用途，其中人參皂甙為人參皂甙Rb1或二氫人參皂甙Rb1。
57.一種用于大量生產(chǎn)人參皂甙或其代謝產(chǎn)物的方法，包括使用產(chǎn)生人參皂甙的培養(yǎng)細(xì)胞或植物株。
58.一種生長調(diào)節(jié)組合物，用于促進(jìn)植物或動(dòng)物的組織或細(xì)胞的新生、再生、生長、重構(gòu)、分化、保鮮、保存、營養(yǎng)或培養(yǎng)，其含有人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分、人參皂甙或它們的鹽。
59.根據(jù)權(quán)利要求58的生長調(diào)節(jié)組合物，其中生長調(diào)節(jié)組合物為用于促進(jìn)植物或動(dòng)物的組織或細(xì)胞的新生、再生、生長、重構(gòu)、分化、保鮮、保存、營養(yǎng)或培養(yǎng)的植物生長調(diào)節(jié)組合物。
60.根據(jù)權(quán)利要求59的植物生長調(diào)節(jié)組合物，其中生長調(diào)節(jié)組合物為肥料組合物。
61.根據(jù)權(quán)利要求59或60的植物生長調(diào)節(jié)組合物，其中植物的組織或細(xì)胞為水栽培的植物。
62.根據(jù)權(quán)利要求61的植物生長調(diào)節(jié)組合物，其中水栽培的植物為黃金葛的插條。
63.根據(jù)權(quán)利要求58的生長調(diào)節(jié)組合物，其中生長調(diào)節(jié)組合物為用于營養(yǎng)、保護(hù)或培養(yǎng)海產(chǎn)品、海產(chǎn)資源、水產(chǎn)品、水產(chǎn)資源、海產(chǎn)動(dòng)物、水產(chǎn)動(dòng)物、寵物或家畜的動(dòng)物生長調(diào)節(jié)組合物。
64.根據(jù)權(quán)利要求63的生長調(diào)節(jié)組合物，其中動(dòng)物生長調(diào)節(jié)組合物為飼料組合物。
65.根據(jù)權(quán)利要求58-64任一項(xiàng)的生長調(diào)節(jié)組合物，其中人參、人參提取物、人參的粗皂角甙級(jí)分或人參皂甙為天然物的提取液或固體提取物。
66.根據(jù)權(quán)利要求58-65生長調(diào)節(jié)組合物，其中人參皂甙為人參皂甙Rb1或二氫人參皂甙Rb1。
67.用于研究或篩選促進(jìn)活體組織的再生、新生、生根、發(fā)芽、生長、分化或重構(gòu)的新型物質(zhì)的方法，其中包括在動(dòng)物腦室內(nèi)施用被檢物質(zhì)，測定腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。
68.根據(jù)權(quán)利要求67的方法，其中腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用是在腦室內(nèi)施用的被檢物質(zhì)的細(xì)胞外液濃度為1ng/ml或更低，或0.5nM或更低時(shí)測定時(shí)。
69.根據(jù)權(quán)利要求67的方法，其中腦室內(nèi)施用的被檢物質(zhì)的細(xì)胞外液濃度為0.01-100fg/ml或0.005-50fM，或1-10,000fg/ml或0.5-5,000fM。
70.一種用于促進(jìn)活體組織的再生、新生、生長、分化或重構(gòu)的醫(yī)藥組合物或獸醫(yī)藥組合物，其中含有根據(jù)權(quán)利要求67-69任一項(xiàng)的方法進(jìn)行腦室內(nèi)給藥時(shí)表現(xiàn)出腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的化合物或它們的鹽。
71.一種用于促進(jìn)體組織的再生、新生、生長、分化或重構(gòu)的皮膚外用組合物，其中含有根據(jù)權(quán)利要求67-69任一項(xiàng)的方法進(jìn)行腦室內(nèi)給藥時(shí)表現(xiàn)出腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的化合物或它們的鹽。
72.一種用于促進(jìn)活體組織的再生、新生、生根、發(fā)芽、生長、分化或重構(gòu)的生長調(diào)節(jié)組合物，其中含有根據(jù)權(quán)利要求67-69任一項(xiàng)的方法進(jìn)行腦室內(nèi)給藥時(shí)表現(xiàn)出腦細(xì)胞或神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的化合物或它們的鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供有效的靜脈內(nèi)給藥制劑、皮膚外用劑、粘膜外用劑或化妝品，其中含有可用作皮膚組織再生/重構(gòu)促進(jìn)劑或創(chuàng)傷治愈促進(jìn)劑的人參皂甙特別是人參皂甙Rb
文檔編號(hào)C07J17/00GK1452629SQ00819602
公開日2003年10月29日 申請(qǐng)日期2000年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月31日
發(fā)明者阪中雅廣, 橋本公二, 田中潤也, 仲田公彥 申請(qǐng)人:科學(xué)技術(shù)振興事業(yè)團(tuán)