專利名稱：一種落新婦苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中藥材黃杞葉(Engelhardria roxburghiana Wall)中制備落新婦苷的方法。
背景技術(shù)：
落新婦苷(astilbin)3，3，4’，5，7-pentahydroxyflavanone3-(6-deoxy-(L-mannopyranoside))是一種黃酮類化合物，1950年由KozoHayashi和Kazuhiko Ouchi首次從植物落新婦中提取得到。落新婦苷的結(jié)構(gòu)式如下 文獻(xiàn)報(bào)道，落新婦苷具有殺蟲(Pest Manag.Sci.2002；58503-507)、抑制輔酶A還原酶(Zhonghua Yi Xue Za Zhi(Taipei)2001；64382-387)、抑制醛糖還原酶(Biosci.Biotechnol.Biochem.1997；61651-654，)、肝保護(hù)(Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids 1997；56331-334)、鎮(zhèn)痛、抗水腫(Arzneimittelforschung 2000；50281-285)、抗氧化(Biosci.Biotechnol.Biochem.1996；60513-515)等活性，落新婦苷還能顯著改善免疫性肝損傷(Eur.J.Pharmacol.1999；37793-100；J.Pharm.Pharmacol.2004，56495-502)，誘導(dǎo)PHA活化的Jurkat細(xì)胞凋亡(Pharmacol.Res.2001；44135-139)，通過抑制活化T淋巴細(xì)胞的功能來抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)和治療小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎(Inflamm Res.2003；52(8)334-40.J.Pharm.Pharmacol.2003；55691-696)等。
目前落新婦苷的主要來源是從中藥材土茯苓或落新婦中提取，土茯苓中落新婦苷的含量由于品種、產(chǎn)地、產(chǎn)收季節(jié)的不同，含量在0.1％-2.0％不等。而在中國廣西、貴州等地生長的黃杞樹，其樹葉中所含的落新婦苷量，均數(shù)倍于土茯苓中的含量，而黃杞樹葉在當(dāng)?shù)亻L期僅被作為茶葉使用，顯然浪費(fèi)了寶貴的資源。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供一種可大量獲得落新婦苷的簡單易行的可用于工業(yè)化生產(chǎn)的落新婦苷的制備方法。
2、技術(shù)方案本發(fā)明所述的落新婦苷的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)將黃杞葉藥材粉碎后依次經(jīng)過濃度為90％-95％(重量)的乙醇與濃度為20％-80％(重量)的乙醇滲漉提取；(2)將步驟(1)中用90％-95％的乙醇提取所得提取液經(jīng)石油醚脫脂后濃縮成浸膏，浸膏醇沉；(3)將步驟(2)中所得母液與步驟(1)中用20％-80％的乙醇提取所得提取液合并濃縮后，用乙酸乙酯或含乙醇的乙酸乙酯萃取，萃取物進(jìn)行醇沉；(4)將步驟(2)與步驟(3)所得沉淀物合并溶解后，過大孔吸附樹脂或聚酰胺柱，用濃度為20％-80％(重量)的乙醇水溶液洗脫，洗脫液揮干溶劑得落新婦苷粗品，再經(jīng)重結(jié)晶得落新婦苷純品；(5)將所得重結(jié)晶母液再次過大孔吸附樹脂或聚酰胺柱，用20％-80％(重量)的乙醇水溶液洗脫，洗脫液揮干溶劑后再經(jīng)重結(jié)晶得落新婦苷純品。
在步驟(1)中，提取前將藥材粉碎成粗粉；所用90％-95％的乙醇水溶液，其用量是所用藥材重量的13倍至20倍，優(yōu)選15倍；所用20％-80％的乙醇水溶液，其用量是所用藥材重量的5倍至15倍，優(yōu)選7倍；藥材的浸泡時(shí)間是2-12小時(shí)，滲漉提取時(shí)間是1-12小時(shí)，優(yōu)選3-10小時(shí)，更優(yōu)選5-8小時(shí)。
在步驟(2)中，石油醚用量是所用藥材重量的1-4倍重量，優(yōu)選2-3倍重量，最優(yōu)選2倍重量；浸膏醇沉中所用乙醇是各種濃度的乙醇水溶液，加入乙醇水溶液沉淀后，混合液中的乙醇最終濃度可以是0-95％重量，優(yōu)選20％-80％重量，最優(yōu)選50％重量。
在步驟(3)中，濃縮液的體積是所用藥材體積的0.2-1倍，優(yōu)選0.5倍；萃取用乙酸乙酯液可以是含0％-20％(體積)乙醇的乙酸乙酯液，最優(yōu)選含10％(體積)乙醇的乙酸乙酯溶液；乙酸乙酯或含乙醇的乙酸乙酯的用量是所用藥材重量的1-4倍，優(yōu)選2-3倍，最優(yōu)選2.5倍。
在步驟(4)中，所用吸附樹脂是聚酰胺或各種型號(hào)的大孔吸附樹脂，優(yōu)選大孔吸附樹脂，更優(yōu)選非極性大孔吸附樹脂；洗脫液是濃度20％-80％(重量)的乙醇水溶液，優(yōu)選20％-70％的乙醇水溶液，最優(yōu)選30％重量；重結(jié)晶所用溶劑可以采用水或有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑可以采用乙醇、甲醇、氯仿或乙酸乙酯等各種常用有機(jī)溶劑，優(yōu)選乙醇水溶液，最優(yōu)選50％重量乙醇水溶液；重結(jié)晶的次數(shù)可以是1-5次，優(yōu)選兩次。
3、有益效果采用本發(fā)明的落新婦苷提取方法，(1)從黃杞葉中提取落新婦苷，提取得率在50％以上，落新婦苷的純度在90％以上。(2)采用本發(fā)明方法所得的落新婦苷，經(jīng)按《中華人民共和國藥典》2005版一部高效液相色譜法進(jìn)行測定，結(jié)果表明，提取物中落新婦苷的含量高于90％，表明本發(fā)明工藝可行。(3)本發(fā)明的落新婦苷提取方法，具有提取工藝簡單，成本低，提取率高，提取得到的落新婦苷單體純度高等特點(diǎn)，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面是本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明不僅限于所述實(shí)施例。
實(shí)施例1將黃杞葉藥材粉碎成粗粉，用藥材重量10倍的95％乙醇與15倍量的80％乙醇分別滲漉提取，收集滲漉液。95％乙醇提取液用石油醚脫脂后，濃縮至浸膏，加入乙醇使溶液濃度為20％的乙醇水溶液，溶解后放置析沉淀，分取沉淀，母液與80％乙醇提取液合并，濃縮至每毫升3克生藥，用相當(dāng)于生藥2倍量的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物濃縮至浸膏，加入乙醇水溶液使溶液濃度為20％的乙醇水溶液，溶解后放置析沉淀。分取沉淀，將兩次醇沉所得沉淀合并，水溶解后過聚酰胺柱，用蒸餾水洗滌柱床，用60％重量乙醇水溶液洗脫，洗脫液揮去溶劑后，20％重量乙醇水溶液重結(jié)晶得落新婦苷，重結(jié)晶后母液揮去醇后再過聚酰胺柱，60％重量乙醇水溶液洗脫，洗脫液揮去溶劑后再用20％重量乙醇水重結(jié)晶。得落新婦苷，提取率為51.4％，落新婦苷含量為90％。
實(shí)施例2將黃杞葉藥材粉碎成粗粉，用藥材重量15倍90％乙醇與10倍量的60％乙醇分別滲漉提取，收集90％乙醇提取液與60％乙醇提取液，90％乙醇提取液用石油醚脫脂后將提取液濃縮至浸膏，加入乙醇使溶液濃度為60％重量的乙醇水溶液，溶解，放置析沉淀，60％乙醇提取液與前述醇沉后母液合并，濃縮后用含5％乙醇的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物濃縮至浸膏后加入乙醇使乙醇濃度為60％，溶解后放置析沉淀，將兩次醇沉所得沉淀合并，水溶解后過LSA-10大孔樹脂(西安蘭深生產(chǎn))柱，用70％乙醇溶液洗脫，洗脫液揮去溶劑后，60％乙醇重結(jié)晶得落新婦苷單體，重結(jié)晶后母液揮去醇后再過LSA-7大孔樹脂柱，70％乙醇洗脫，洗脫液揮去溶劑后再用60％乙醇重結(jié)晶。得落新婦苷，含量為90％，提取率為53.5％。
實(shí)施例3黃杞葉藥材粉碎，用藥材重量20倍95％乙醇與8倍量20％乙醇梯度滲漉提取，分別收集95％乙醇提取液與40％乙醇提取液，95％乙醇提取液用石油醚脫脂后將提取液濃縮至浸膏，水溶解后放置析沉淀，40％乙醇提取液與前述醇沉后母液合并濃縮后用含20％乙醇的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部位濃縮至浸膏后加入乙醇使乙醇濃度為80％，溶解后放置，將兩次醇沉所得沉淀合并，水溶解后過聚酰胺柱，用50％乙醇溶液洗脫，洗脫液揮去溶劑后，70％乙醇重結(jié)晶得落新婦苷單體，重結(jié)晶后母液揮去醇后再過聚酰胺柱，50％乙醇洗脫，洗脫液揮去溶劑后再用70％乙醇重結(jié)晶。得含量為90％的落新婦苷，提取率為52.8％。
實(shí)施例4落新婦苷純度測定實(shí)驗(yàn)。取上述提取方法制備得到的落新婦苷單體適量，甲醇溶解定容于容量瓶中，微孔濾膜過濾后，注入高效液相色譜儀中，用《中華人民共和國藥典》2005年一部高效液相色譜法測定含量。
色譜條件Water 600高效液相色譜儀，Waters 2487紫外檢測器；色譜柱∶Symmetry C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相∶甲醇-冰醋酸-水(45∶1∶54)；檢測波長291nm；柱溫30℃；流速1ml/min；進(jìn)樣量5μl。
對(duì)照品落新婦苷，自制，無色針狀結(jié)晶，mp182～186℃，經(jīng)UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等測定，其數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，鑒定為落新婦苷。TLC圖譜上為單一斑點(diǎn)，HPLC檢測為單峰，歸一化含量在99％以上。
按上述方法測定，提取物中落新婦苷的含量在90％以上。
綜上所述，本發(fā)明的落新婦苷提取方法，能有效地從含落新婦苷的藥材中提取得到落新婦苷，提取物中落新婦苷含量均高于90％以上，而且工藝簡單可行，成本低，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
如上描述了本發(fā)明所公開的落新婦苷的提取方法。但需理解其中包含了本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的變化和改變。這些變化和改變也包含在權(quán)利要求所限定的本
權(quán)利要求
1.一種落新婦苷的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)將黃杞葉藥材粉碎后依次經(jīng)過濃度為90％-95％(重量)的乙醇與濃度為20％-80％(重量)的乙醇滲漉提??；(2)將步驟(1)中用90％-95％的乙醇提取所得提取液經(jīng)石油醚脫脂后濃縮成浸膏，浸膏醇沉；(3)將步驟(2)中所得母液與步驟(1)中用20％-80％的乙醇提取所得提取液合并濃縮后，用乙酸乙酯或含乙醇的乙酸乙酯萃取，萃取物進(jìn)行醇沉；(4)將步驟(2)與步驟(3)所得沉淀物合并溶解后，過大孔吸附樹脂或聚酰胺柱，用濃度為20％-80％(重量)的乙醇水溶液洗脫，洗脫液揮干溶劑得落新婦苷粗品，再經(jīng)重結(jié)晶得落新婦苷純品；(5)將所得重結(jié)晶母液再次過大孔吸附樹脂或聚酰胺柱，用20％-80％(重量)的乙醇水溶液洗脫，洗脫液揮干溶劑后再經(jīng)重結(jié)晶得落新婦苷純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(1)中，所用90％-95％的乙醇水溶液，其用量是所用藥材重量的13-20倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(1)中，所用20％-80％的乙醇水溶液，其用量是所用藥材重量的5-15倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(1)中，藥材的浸泡時(shí)間是2-12小時(shí)，滲漉提取時(shí)間是1-12小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(2)中，石油醚用量是所用藥材重量的1-4倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(3)中，濃縮液的體積是所用藥材體積的0.2-1倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(3)中，乙酸乙酯或含乙醇的乙酸乙酯的用量是所用藥材重量的1-4倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(4)中，所用吸附樹脂是聚酰胺或各種型號(hào)的大孔吸附樹脂。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(4)中，洗脫液是濃度20％-80％(重量)的乙醇水溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種落新婦苷的制備方法，其特征在于在步驟(4)中，重結(jié)晶所用溶劑可以采用水或有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑可以采用乙醇、甲醇、氯仿或乙酸乙酯有機(jī)溶劑；重結(jié)晶的次數(shù)可以是1-5次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含落新婦苷的制備方法，該方法的步驟是將藥材粉碎，經(jīng)過兩種濃度乙醇水溶液分別滲漉提取，90％－95％重量的乙醇水提取液經(jīng)石油醚脫脂后濃縮成浸膏，浸膏醇沉后，其母液與20％－80％重量乙醇水提取液合并，濃縮后用含乙醇的乙酸乙酯液萃取，萃取物經(jīng)醇沉后與前述沉淀混合，溶解后過大孔吸附樹脂或聚酰胺柱，20％－80％重量乙醇水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)重結(jié)晶后得落新婦苷。采用本發(fā)明方法，從黃杞葉中提取落新婦苷，提取得率在50％以上，落新婦苷的含量在90％以上；本方法具有簡便，成本低，得率高，提取得到的落新婦苷純度高，適用于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/00GK1724552SQ20051004094
公開日2006年1月25日 申請日期2005年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月8日
發(fā)明者陳婷, 姚毅, 徐強(qiáng) 申請人:南京大學(xué)