專利名稱：趨化因子受體活性的氨基環(huán)戊基吡啶并吡嗪酮調(diào)節(jié)劑的制作方法
背景技術(shù)：
趨化因子是具有強力趨化活性的小的(70-120個氨基酸)促炎細胞因子的家族。趨化因子是由多種細胞釋放以吸引各種細胞例如單核細胞、巨噬細胞、T細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和中性粒細胞至炎癥位點的趨化性細胞因子(Schall，Cytokine，3，165-183(1991)和Murphy，Rev.Immun.，12，593-633(1994)中綜述)。這些分子最初通過四種保守的半胱氨酸定義并基于第一個半胱氨酸對的排布分為兩個亞家族。在CXC-趨化因子家族中，它包括IL-8、CROα、NAP-2和IP-10，這兩種半胱氨酸被單一氨基酸分開，而在CC-趨化因子家族中，它包括RANTES、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MIP-1α、MIP-1β和嗜酸細胞活化趨化因子，這兩個殘基是相鄰的。
α-趨化因子例如白介素-8(IL-8)、嗜中性白細胞活化蛋白-2(NAP-2)以及黑素瘤生長刺激活性蛋白(MGSA)主要趨化于嗜中性白細胞，而β-趨化因子例如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、MCP-2、MCP-3和eotaxin趨向于巨噬細胞、單核細胞、T-細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞(Deng，等人，Nature，381，661-666(1996))。趨化因子通過多種細胞類型分泌并且與存在于白細胞和其它細胞上的特異性G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)結(jié)合(在Horuk，Trends Pharm.Sci.，15，159-165(1994)中綜述)。這些趨化因子受體形成GPCR的亞家族，其目前由15個已鑒定的成員和多個孤兒受體組成。不像混棲化學引誘物例如C5a、fMLP、PAF和LTB4的受體那樣，趨化因子受體更選擇性地在白細胞亞組上表達。因此，特異性趨化因子的生成提供特殊白細胞亞組的募集機制。
在結(jié)合它們的關(guān)聯(lián)配體上，趨化因子受體通過相關(guān)的三聚化G蛋白傳導(dǎo)胞內(nèi)信號，導(dǎo)致細胞內(nèi)鈣濃度迅速增加。至少有7種人趨化因子受體結(jié)合具有下面已確證類型的β-趨化因子或者對其有反應(yīng)CCR-1(或“CKR-1”或“CC-CKR-1”)[MIP-1α、MIP-1β、MCP-3、RANTES](Ben-Barruch，等人，J.Biol.Chem.，270，22123-22128(1995)；Beote，等人，Cell，72，415-425(1993))；CCR-2A和CCR-2B(或“CKR-2A”/”CKR-2A”或“CC-CKR-2A”/”CC-CKR-2A”)[MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4]；CCR-3(或“CKR-3”或“CC-CKR-3”)[Eotaxin、Eotaxin2、RANTES、MCP-2、MCP-3](Rollins，等人，Blood，90，908-928(1997))；CCR-4(或“CKR-4”或“CC-CKR-4”)[MIP-1α、RANTES、MCP-1](Rollins，等人，Blood，90，908-928(1997))；CCR-5(或“CKR-5”或“CC-CKR-5”)[MIP-1α、RANTES，MIP-1β](Sanson，等人，Biochemistry，35，3362-3367(1996))；和Duffy血型抗原[RANTES、MCP-1](Chaudhun，等人，J.Biol.Chem.，269，7835-7838(1994))。β-趨化因子包括eotaxin、MIP(“巨噬細胞炎性蛋白”)、MCP(“單核細胞趨化蛋白”)和RANTES(“向上調(diào)節(jié)活化，正常T細胞表達和分泌”)等其它趨化因子。
趨化因子受體，比如CCR-1、CCR-2、CCR-2A、CCR-2B、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CXCR-3、CXCR-4已作為重要的介質(zhì)參與炎性和免疫調(diào)節(jié)性病癥和疾病，包括哮喘、鼻炎和變應(yīng)性疾病，以及自身免疫病癥例如類風濕性關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化。對于在CCR-5基因上的32-堿基對缺失純合的人似乎對類風濕性關(guān)節(jié)炎不太易感(Gomez，等人，Arthritis & Rheumatism，42，989-992(1999))。嗜酸性粒細胞在變應(yīng)性炎癥中的作用的綜述由Kita，H.，等人，J.Exp.Med.183，2421-2426(1996)提供。趨化因子在變應(yīng)性炎癥中的作用的一般綜述由Lustger，A.D.，New England J.Med.，338(7)，426-445(1998)提供。
一個亞組的趨化因子為單核細胞和巨噬細胞的有效化學誘導(dǎo)物。這些中鑒定最充分的為MCP-1(單核細胞化學誘導(dǎo)物蛋白-1)，其初級受體為CCR2。各種物種，包括嚙齒動物和人，在對炎性刺激的反應(yīng)中，會在多種細胞類型中產(chǎn)生MCP-1，并且刺激單核細胞和一個亞組的淋巴細胞中的趨化性。具體地說，MCP-1產(chǎn)生與炎癥部位的單核細胞和巨噬細胞浸潤相關(guān)。通過小鼠體內(nèi)同源重組消除MCP-1或者CCR2導(dǎo)致對巰基乙酸注射和單核細胞增生李司忒氏菌(Listeriamonocytogenes)感染的應(yīng)答的單核細胞募集的顯著減弱(Lu等人，J.Exp.Med.，187，601-608(1998)；Kurihara等人J.Exp.Med.，186，1757-1762(1997)；Boring等人J.Clin.Invest.，100，2552-2561(1997)；Kuziel等人Proc.Natl.Acad.Sci.，94，12053-12058(1997))。另外，這些動物顯示由注射血吸蟲或者分枝桿菌抗原誘導(dǎo)的單核細胞浸潤進入肉芽腫性病變部位的減少(Boring等人J.Clin.Invest.，100，2552-2561(1997)；Warmington等人Am J.Path.，154，1407-1416(1999))。這些數(shù)據(jù)提示MCP-1誘導(dǎo)的CCR2激活在單核細胞對炎癥部位的募集中起主要作用，并且這種活性的拮抗作用應(yīng)產(chǎn)生足夠的免疫應(yīng)答抑制以在免疫炎性疾病和自身免疫疾病中產(chǎn)生治療效果。
因此，調(diào)節(jié)趨化因子受體例如CCR-2受體的活性劑在這樣的病癥和疾病中應(yīng)是有用的。
另外，單核細胞對血管壁上炎性病變的反射增進是致動脈粥樣化斑塊形成的主要原因。在高膽固醇血癥中血管壁損傷后，MCP-1通過內(nèi)皮細胞和血管內(nèi)膜平滑肌細胞產(chǎn)生和分泌。作為對釋放的MCP-1的應(yīng)答，對損傷部位募集的單核細胞浸潤血管壁并分化為泡沫細胞。目前幾個小組已證實與維持高脂肪食物喂飼的APO-E-/-、LDL-R-/-或者ApoB轉(zhuǎn)基因小鼠回交的MCP-1-/-或者CCR-2-/-小鼠中主動脈損害大小、巨噬細胞含量和壞死均減弱或減小(Boring等人Nature，394，894-897(1998)；Gosling等人J.Clin.Invest.，103，773-778(1999))。因此，通過修復(fù)單核細胞募集和動脈壁上的分化，CCR2拮抗劑可以抑制動脈粥樣硬化性損害形成和病變的發(fā)展。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及式I和式II化合物
(其中A、E、j、k、m、n、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R15、R16、R17、R18、R19、R24、R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、X、Y和Z如本文所定義)，所述化合物是趨化因子受體活性的調(diào)節(jié)劑并且用于預(yù)防或者治療某些炎性和免疫調(diào)節(jié)性病癥和疾病、變應(yīng)性疾病、特異反應(yīng)性疾病，包括過敏性鼻炎、皮炎、結(jié)膜炎和哮喘，以及自身免疫病理學疾病例如類風濕性關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化。本發(fā)明也涉及含有這些化合物的藥物組合物以及這些化合物和組合物在預(yù)防或者治療其中趨化因子受體參與的此類疾病中的應(yīng)用。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及式I和式II化合物 其中A選自-CH2-、-O-、-N(R20)-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(SO2R14)-和-N(COR13)-；E獨立地選自N和C；X是O、N、S、SO2或C；Y選自-O-、-N(R20)-、-S-、-SO-、-SO2-和-C(R21)(R22)-、-N(SO2R14)-、-N(COR13)-、-C(R21)(COR11)-、-C(R21)(OCOR14)-和-CO-；
Z選自C、N或O；R1選自氫、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-SO-C1-6烷基、-SO2-C1-6烷基、-SO2NR12R12、-NR12-SO2-NR12R12、-(C0-6烷基)-(C3-7環(huán)烷基)-(C0-6烷基)、-CN、-NR12R12、-NR12COR13、-NR12SO2R14、-COR11、-CONR12R12、-NR12CONR12R12、-O-CO-C1-6烷基、-O-CO2-C1-6烷基、羥基、雜環(huán)和苯基，其中所述烷基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-7個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、未取代或者被1-6個氟取代的-O-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的C1-6烷基、-CONR12R12、-NR12CONR12R12、-COR11、-SO2R14、-NR12COR13、-NR12SO2R14、-雜環(huán)、＝O、-CN、苯基、-SO2NR12R12、-NR12-SO2-NR12R12、未取代或者被1-6個氟取代的-S-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-SO-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-SO2-C1-6烷基和-O-COR13，其中所述苯基和雜環(huán)是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基，所述C1-3烷基和C1-3烷氧基是未取代的或者被1-6個氟取代；當Z是O時，R2和R3不存在；當Z是N時，R2不存在，且R3是氫或C1-3烷基；當Z是C時，R2和R3獨立地為氫或未取代或者被1-3個氟取代的C1-3烷基；當E是C時，R4選自氫、未取代或者被1-3個氟取代的C1-3烷基、未取代或者被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基、羥基、氯、氟、溴、苯基和雜環(huán)；當E是C時，R5選自氟、氯、溴、-雜環(huán)、-CN、-COR11、C4-6環(huán)烷基、-O-C4-6環(huán)烷基、未取代或者被1-6個氟或羥基或氟和羥基取代的C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-O-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-CO-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-S-C1-6烷基，未取代或者被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-吡啶基，未取代或者被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-苯基，未取代或者被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-O-苯基，未取代或者被1-6個氟取代的-C3-6環(huán)烷基，和未取代或者被1-6個氟取代的-O-C3-6環(huán)烷基；當E是C時，R6選自氫、羥基、氯、氟、溴、苯基、雜環(huán)、未取代或者被1-3個氟取代的C1-3烷基和未取代或者被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基；當E是N時，R4和R6獨立地選自不存在或O(以形成N-氧化物)；當X是N或C時，R7選自氫、(C0-6烷基)-苯基、(C0-6烷基)-雜環(huán)、(C0-6烷基)-C3-7環(huán)烷基、(C0-6烷基)-COR11、(C0-6烷基)-(鏈烯烴)-COR11、(C0-6烷基)-SO3H、(C0-6烷基)-W-C0-4烷基、(C0-6烷基)-CONR12-苯基和(C0-6烷基)-CONR23-V-COR11，其中W選自單鍵、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-CO2-、-CONR12-和-NR12-，其中V選自C1-6烷基或苯基，其中R23是氫或C1-4烷基，或者R23是與V的一個碳原子連接以形成環(huán)的具有1-5個碳原子的連接基團，其中所述C0-6烷基是未取代的或者被1-5個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-C0-6烷基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和-C0-2烷基-苯基，其中所述苯基、雜環(huán)、環(huán)烷基和如果存在的話C0-4烷基是未取代的或者被1-5個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、三氟甲基、羥基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-C0-3-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-C0-3-雜環(huán)，或者其中所述苯基或雜環(huán)與另一雜環(huán)稠合，所述另一雜環(huán)是未取代的或者被1-2個獨立地選自下列的取代基取代羥基、鹵素、-COR11和-C1-3烷基，并且其中所述鏈烯烴是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、三氟甲基、C1-3烷基、苯基和雜環(huán)；當X是O、S或SO2時，R7不存在；當X是C時，R8選自氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CONR12R12和-CN；當X是O、S、SO2或N時，或者當雙鍵連接R7和R10所連接的碳原子時，R8不存在；或者，R7和R8連接以形成選自下列的環(huán)1H-茚、2，3-二氫-1H-茚、2，3-二氫-苯并呋喃、1，3-二氫-異苯并呋喃、2，3-二氫-苯并噻吩、1，3-二氫-異苯并噻吩、6H-環(huán)戊二烯并[d]異唑-3-醇、環(huán)戊烷和環(huán)己烷，其中所述環(huán)是未取代的或者被1-5個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、三氟甲基、羥基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-C0-3-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-C0-3烷基-雜環(huán)；R9和R10獨立地選自氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、鹵素；或者R9和R10一起是O(其中O經(jīng)由雙鍵與環(huán)連接)；或者，R7與R9或者R8與R10連接以形成是苯基或雜環(huán)的稠合環(huán)，其中所述稠合環(huán)是未取代的或者被1-7個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、三氟甲基、羥基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CN、-NR12R12和-CONR12R12；R11獨立地選自羥基、氫、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基、C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R12選自氫、C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；或者，當兩個單獨的R12基團位于同一碳原子或相鄰碳原子上時，所述兩個R12基團任選經(jīng)由C1-7烷基連接基團連接而形成3-9元環(huán)，所述連接基團是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R13選自氫、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R14選自羥基、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R15是氫或C1-6烷基，其中所述烷基是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-CO2H、-CO2C1-6烷基和-O-C1-3烷基；R16選自氫、氟、C3-6環(huán)烷基、-O-C3-6環(huán)烷基、羥基、-COR11、-OCOR14，未取代或者被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代的C1-6烷基，和未取代或者被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基；或者，R15和R16一起是C2-4烷基或C0-2烷基-O-C1-3烷基，形成環(huán)，所述環(huán)是5-7元環(huán)；R17選自氫、COR11、羥基，未取代或者被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代的-O-C1-6烷基，和未取代或者被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代的C1-6烷基，或者，如果R28是經(jīng)由雙鍵與環(huán)碳連接，則R17不存在；或者，R16和R17一起是C1-4烷基或C0-3烷基-O-C0-3烷基，形成環(huán)，所述環(huán)是3-7元環(huán)；R18選自氫、氟、-O-C3-6環(huán)烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-O-C1-3烷基和未取代或者被1-6個氟取代的C1-6烷基；或者，R16和R18一起是C2-3烷基，由此形成5-6元環(huán)，其中所述烷基是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基；或者，R16和R18一起是C1-2烷基-O-C1-2烷基，由此形成6-8元環(huán)，其中所述烷基是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基；或者，R16和R18一起是-O-C1-2烷基-O-，由此形成6-7元環(huán)，其中所述烷基是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R19選自氫、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和未取代或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代的C1-3烷基；R20選自氫、C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R21和R22獨立地選自氫、羥基、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基可以是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R24選自氫、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和C1-3烷基，其中所述烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代；或者，R24和R17一起是C1-3烷基橋；R25和R26獨立地選自＝O(其中R25和/或R26是氧并且經(jīng)由雙鍵連接)、氫、苯基和C1-6烷基，所述烷基是未取代的或者被1-6個選自-COR11、羥基、氟、氯和C1-3烷基的取代基取代；R27選自氫、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和C1-3烷基，其中所述烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代；R28選自氫、羥基、鹵素、未取代或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代的C1-3烷基、-NR12R12、-COR11、-CONR12R12、-NR12COR13、-OCONR12R12、-NR12CONR12R12、-雜環(huán)、-CN、-NR12-SO2-NR12R12、-NR12-SO2-R14、-SO2-NR12R12和＝O(其中R28經(jīng)由雙鍵與環(huán)連接，在這種情況下，在同一位置上的R17不存在)；R29和R33選自氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和鹵素，或者，如果取代位點是不飽和的，R29或R33獨立地不存在；或者，R29和R16一起是C1-3烷基橋；R30和R31獨立地選自羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、鹵素和氫，其中所述烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代；或者，R30和R31一起是-C1-4烷基-、-C0-2烷基-O-C1-3烷基-或-C1-3烷基-O-C0-2烷基-，其中所述烷基是未取代的或者被1-2個選自下列的取代基取代氧基(其中氧經(jīng)由雙鍵與橋連接)、氟、羥基、甲氧基、甲基或三氟甲基；R32和R34獨立地選自氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和鹵素；j是0、1或2；k是0、1或2；m是0、1或2；n是1或2；虛線代表任選的單鍵；及其可藥用鹽和單獨的非對映體。
另外的本發(fā)明化合物包括式Ia化合物 其中R1、R5、R15、R16、R18和Y如本文所述，及其可藥用鹽和單獨的非對映體。
其它本發(fā)明化合物還包括式Ib化合物 其中R1和R16如本文所述，及其可藥用鹽和單獨的非對映體。
一些本發(fā)明實施方案還包括其中A是CH2的那些；其中Y是O或CH2的那些，其中Y是O的那些，其中E是C的那些和/或其中Z是C的那些。
本發(fā)明另外的實施方案包括定義如下的那些，其中R1選自-C1-6烷基、-C0-6烷基-O-C1-6烷基、雜環(huán)和-(C0-6烷基)-(C3-7環(huán)烷基)-(C0-6烷基)，其中所述烷基、雜環(huán)和環(huán)烷基是未取代的或者被1-7個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-O-C1-3烷基、三氟甲基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-NCOR13。本發(fā)明還包括其中R1選自C1-6烷基、被羥基取代的C1-6烷基和被1-6個氟取代的C1-6烷基的實施方案。還包括其中R1選自-CH(CH3)2、-C(OH)(CH3)2、-CH(OH)CH3、-CH2CF3的實施方案。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R2是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R3是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R4是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R5選自被1-6個氟取代的C1-6烷基、被1-6個氟取代的-O-C1-6烷基、氯、溴和苯基。還包括其中R5是三氟甲基的本發(fā)明實施方案。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R15是甲基或氫。還包括其中R15是氫的實施方案。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R16選自氫、未取代或者被1-6個氟取代的C1-3烷基、-O-C1-3烷基、氟和羥基。在本發(fā)明的一些其它實施方案中，R16選自氫、三氟甲基、甲基、甲氧基、乙氧基、乙基、氟和羥基。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R17是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R18選自氫、甲基和甲氧基。在本發(fā)明的一些其它實施方案中，R18是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R16和R18一起是-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-，由此形成環(huán)戊基環(huán)或環(huán)己基環(huán)。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R19是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R24是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R25是氫，并且是經(jīng)由單鍵連接的。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R26是O，并且是經(jīng)由雙鍵連接的。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R27是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R28是氫。
在本發(fā)明的一些實施方案中，R29是氫。
如本領(lǐng)域已知的，通過在此公開的方法學的合適改進，可以實現(xiàn)非對映體和對映體的獨立合成或者它們的色譜分離。如果必要，用含已知絕對構(gòu)型的不對稱中心的試劑，通過它們衍生的結(jié)晶產(chǎn)物或者結(jié)晶中間體的X-射線結(jié)晶學，可以測定它們的絕對立體化學。
如本領(lǐng)域已知的，通過在此公開的方法學的合適改進，可以實現(xiàn)非對映體和對映體的獨立合成或者它們的色譜分離。如果必要，用含已知絕對構(gòu)型的不對稱中心的試劑，通過它們衍生的結(jié)晶產(chǎn)物或者結(jié)晶中間體的X-射線結(jié)晶學，可以測定它們的絕對立體化學。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，本文所用的鹵素或鹵原子意在包括氯、氟、溴和碘。
如本文所用的術(shù)語“烷基”是指不具有雙鍵或三鍵的直鏈、支鏈和環(huán)狀碳結(jié)構(gòu)。如C1-8烷基中的C1-8被定義為以直鏈或支鏈排列的具有1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子的基團，如C1-8烷基具體包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基和辛基。更廣義地，Ca-b烷基(其中a和b代表整數(shù))被定義為以直鏈或支鏈排列的具有a-b個碳原子基團。如C0烷基中的C0被定義為存在直接的共價鍵?！碍h(huán)烷基”是這樣的烷基，其一部分或全部形成3或更多個碳原子的環(huán)。
如本文所用的術(shù)語“雜環(huán)“意在包括下列基團苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋喃基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氫吲哚基、吲哚基、吲嗪基、吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異唑基、萘啶基、二唑基、唑基、氧雜環(huán)丁烷基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氫吡喃基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、1，4-二烷基、六氫氮雜基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫吲哚基、二氫異唑基、二氫異噻唑基、二氫二唑基、二氫唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫三唑基、二氫氮雜丁烷基、亞甲二氧基苯甲?；?、四氫呋喃基和四氫噻吩基及其N-氧化物。
在此使用的術(shù)語“可藥用的”指這些化合物、材料、組合物和/或劑型，它們在合理的醫(yī)學判斷的范圍內(nèi)，適用于與人體和動物組織接觸而沒有過度的毒性、刺激性、變應(yīng)性應(yīng)答或者其它的問題或者復(fù)雜性，與合適的效益/風險比相匹配。
如在此使用的，“可藥用鹽”指衍生物，其中通過制備它們的酸性或者堿性鹽修飾母體化合物?？伤幱玫柠}的實例包括膽不限于堿性殘基例如胺的礦物酸或者有機酸鹽、酸性殘基例如羧酸的堿或者有機鹽等?？伤幱玫柠}包括所形成母體化合物例如非毒性無機或者有機酸的常規(guī)非毒性鹽或者季銨鹽。例如，這樣的常規(guī)非毒性鹽包括衍生自無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些鹽；和由有機酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸等制備的鹽。
通過常規(guī)化學方法，自含堿性或者酸性部分的母體化合物可制備本發(fā)明的可藥用的鹽。通常，在水或者在有機溶劑中，或者在兩者的混合物中，通過使這些化合物的游離的酸或者堿形式與化學計算量的合適的堿或者酸反應(yīng)，可制備這樣的鹽；通常，非水介質(zhì)例如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或者乙腈為優(yōu)選。合適的鹽從參見例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，17th ed.，Mack PublishingCompany，Easton，PA，1985，p.1418。
使用實施例和此處公開的化合物舉例說明本發(fā)明。
本發(fā)明中的具體的化合物包括選自實施例的標題化合物的化合物及其可藥用鹽鹽和它們單獨的非對映體。
本發(fā)明化合物可用于調(diào)節(jié)需要這樣調(diào)節(jié)的患者體內(nèi)趨化因子受體活性的方法，所述方法包括給予有效量的所述化合物。
本發(fā)明涉及前述化合物作為趨化因子受體活性調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用。具體地說，這些化合物用作趨化因子受體尤其是CCR-2的調(diào)節(jié)劑。
通過本領(lǐng)域已知的方法學，例如由Van Riper，等人，J.Exp.Med.，177，851-856(1993)公開的趨化因子結(jié)合試驗，其可方便地適用于測量CCR-2結(jié)合，可以證實作為趨化因子受體活性的調(diào)節(jié)劑的本發(fā)明化合物的應(yīng)用。
通過測量125I-MCP-1對包括單核細胞、THP-1細胞在內(nèi)的各種細胞類型的內(nèi)源性CCR-2受體的抑制作用，或者在真核細胞內(nèi)的已克隆受體異種表達后，來測定CCR-2結(jié)合試驗中的受體親和力。把細胞懸浮于結(jié)合緩沖液(50mM HEPES，pH7.2，5mM MgCl2，1mMCaCl2，和0.50％BSA)中并在室溫下于1小時內(nèi)加入到受試化合物或者DMSO及125I-MCP-1中以使結(jié)合。然后在GFB濾器上收集細胞，用25mM含500mM NaCl的HEPES緩沖液沖洗并定量確定細胞結(jié)合的125I-MCP-1。
在趨化性試驗中，采用分離自靜脈全血或者leukophoresed的血的排除了PBMC的T細胞進行趨化性并且通過Picoll-Hypaque離心純化，隨后用神經(jīng)氨酸酶處理的綿羊紅細胞進行玫瑰花瓣試驗。一旦分離后，用含0.1mg/ml BSA的HBSS沖洗細胞并以1×107個細胞/m1懸浮。于37℃在暗處用2μM Calcien-AM(分子探針)熒光標記細胞30分鐘。把已標記的細胞沖洗兩次并在RPMI 1640中以5×106個細胞/ml用含0.1mg/ml BSA的L-谷氨酰胺(無酚紅)懸浮。把在相同的培養(yǎng)基中于10ng/ml稀釋的MCP-1(Peprotech)或者培養(yǎng)基單獨加入到底部孔(27μl)中。用DMSO或者用各種濃度的受試化合物預(yù)溫育15分鐘后，將單核細胞(150000個細胞)加入到濾膜(30μl)的頂部。將等濃度的受試化合物或者DMSO加入到底部孔中以防止通過擴散稀釋。于37℃在5％CO2下溫育60分鐘后，移去濾器并用含0.1mg/ml BSA的HBSS沖洗頂部以除去未遷移至濾膜上的細胞。在化學引誘物不存在下測量自發(fā)遷移(化學激活現(xiàn)象)。
具體地說，在上面提到的試驗中，下面實施例的化合物具有結(jié)合CCR-2受體的活性，通常具有約小于1μM的IC50。這樣的結(jié)果是在用作趨化因子受體活性調(diào)節(jié)劑的化合物內(nèi)在活性的指標。
哺乳動物趨化因子受體提供用于干擾或者促進哺乳動物例如人體內(nèi)嗜酸性粒細胞和/或淋巴細胞功能的靶標。抑制或者促進趨化因子受體功能的化合物特別適用于調(diào)節(jié)治療目的的嗜酸性粒細胞和/或淋巴細胞功能。因此，抑制或者促進趨化因子受體功能的化合物將適用于治療、預(yù)防、改善、控制或者減少廣泛種類的炎性和免疫調(diào)節(jié)性病癥和疾病、變應(yīng)性疾病、包括過敏性鼻炎、皮炎、結(jié)膜炎和哮喘在內(nèi)的特異反應(yīng)性疾病以及自身免疫病理學例如類風濕性關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化的風險。
例如，可以給予其抑制哺乳動物趨化因子受體(例如人趨化因子受體)一種或者更多種功能的本發(fā)明化合物以抑制(即減少或者預(yù)防)炎癥。結(jié)果，一種或者更多種炎癥過程，例如白細胞遷移、趨化、胞吐作用(例如，酶、組胺的胞吐作用)或者炎性介質(zhì)釋放受到抑制。
除靈長類例如人以外，按照本發(fā)明的方法可治療各種其他的哺乳動物。例如，可治療哺乳動物，包括但不限于牛、綿羊、山羊、馬、犬、貓、豚鼠、大鼠或者其他的牛、綿羊、馬、犬、貓、嚙齒動物或者海洋動物物種。然而，這一方法也可在其他的物種中實踐，例如鳥類(例如，雞)。
使用本發(fā)明的化合物可治療與炎癥和感染有關(guān)的疾病和病癥。在一個優(yōu)選的實施方案中，疾病和病癥是一種為調(diào)節(jié)炎性應(yīng)答而淋巴細胞的作用被抑制或者促進的疾病。
可用趨化因子受體功能抑制劑治療的人或其它物種的疾病或狀況包括但不限于炎性或變應(yīng)性疾病和病情，包括呼吸道變應(yīng)性疾病如哮喘(特別是支氣管哮喘)、變應(yīng)性鼻炎、過敏性肺疾病、過敏性肺炎、嗜酸性肺炎(例如呂弗勒氏綜合征、慢性嗜酸性肺炎)、遲發(fā)型過敏、間隙肺疾病(ILD)(例如特發(fā)性肺纖維化或與類風濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的ILD、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、關(guān)節(jié)強硬性脊椎炎、全身性硬皮癥、斯耶革倫氏綜合征、多肌炎或皮膚肌炎)；全身性過敏反應(yīng)或過敏性應(yīng)答、藥物過敏(例如對青霉素、頭孢菌素過敏)、昆蟲蟄傷性過敏；自身免疫疾病例如類風濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無力、青少年糖尿病發(fā)作；腎小球性腎炎、自身免疫性甲狀腺炎、貝切特氏疾??；移植排斥(例如在移植術(shù)中)，包括同種異體移植物排斥或移植物抗宿主疾??；炎性腸疾病例如克朗氏病和潰瘍性結(jié)腸炎；椎關(guān)節(jié)?。挥财げ?；牛皮癬(包括T-細胞介導(dǎo)的牛皮癬)和炎性皮膚病例如皮炎、濕疹、特異反應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、蕁麻疹；脈管炎(例如引起壞死的、皮膚的和過敏性脈管炎)；嗜酸性肌炎、嗜酸性筋膜炎；伴有皮膚或器官白血球浸潤的癌癥。其中不合需要的炎性應(yīng)答被抑制的其它疾病或病征可被治療，包括但不限于再灌注損傷、動脈粥樣硬化、某些血液學惡性病變、細胞因子誘導(dǎo)的毒性(例如膿毒性休克、嗜伊紅趨化原性休克)、多肌炎、皮膚肌炎。
人或其它物種的可用趨化因子受體功能調(diào)節(jié)劑治療的疾病或狀況包括但不限于免疫抑制，例如在患有免疫缺陷綜合征如AIDS或其它的病毒感染的個體，經(jīng)歷引起免疫抑制放射療法、化學療法、用于自身免疫疾病的療法或藥物療法(例如皮質(zhì)類固醇療法)的個體中；由于先天性的受體功能缺陷或其它原因引起的免疫抑制；和感染疾病例如牛皮癬病，包括但不限于蠕蟲感染例如線蟲(園線蟲)、(鞭蟲病、蟯蟲病、蛔蟲病、鉤蟲、類圓線蟲病、旋毛蟲病、絲蟲病)、吸蟲(吸蟲)(恤吸蟲病、華支睪吸蟲病)、絳蟲(絳蟲)(棘球蚴病、午肉絳蟲病、囊尾蚴病)、內(nèi)臟蠕蟲、內(nèi)臟蚴蟲偏頭痛(例如弓蛔蟲)、嗜酸性胃腸炎(例如異尖屬、Phocanemasp.)和皮膚幼蟲偏頭痛(巴西鉤口線蟲、犬鉤口線蟲)。另外，上述炎性、變應(yīng)性和自身免疫疾病的治療也期待趨化因子受體功能的促進劑，如果人們期待傳遞足夠的化合物以通過誘導(dǎo)趨化因子受體內(nèi)在化引起在細胞上的受體表達減少或者以導(dǎo)致細胞遷移的錯誤指向的方式傳遞化合物。
本發(fā)明化合物因此可用于治療、預(yù)防、改善、控制或減少廣泛范圍的炎性和免疫調(diào)節(jié)性病癥和疾病、變應(yīng)性疾病、特異反應(yīng)性疾病以及自身免疫病理學的風險。在具體的實施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明化合物用于治療、預(yù)防、改善、控制或減少自身免疫疾病例如類風濕性關(guān)節(jié)炎或牛皮癬關(guān)節(jié)炎的風險的應(yīng)用。
在另一個方面，本發(fā)明可用于評價趨化因子受體包括CCR-2的推定的特異性激動劑或拮抗劑。因此，本發(fā)明涉及這些化合物在制備和實施調(diào)節(jié)趨化因子受體活性的化合物的篩選實驗中的應(yīng)用。例如，本發(fā)明的化合物用于分離受體突變體，后者是優(yōu)越的篩選更有效化合物的工具。另外，本發(fā)明的化合物用于建立或確定其它的化合物與趨化因子受體的結(jié)合位點，例如通過競爭性抑制。本發(fā)明的化合物也用于評價趨化因子受體包括CCR-2的推定的特異性調(diào)節(jié)劑。如本領(lǐng)域所認識到的，以上趨化因子受體的特異性激動劑和拮抗劑的充分評價因缺乏可利用的對這些受體具有高結(jié)合親和力的非肽基(代謝抗性)化合物而受到阻礙。因此，本發(fā)明化合物是用于這些目的的可以購買獲得的商業(yè)產(chǎn)品。
本發(fā)明另外涉及用于制備在人和動物中調(diào)節(jié)趨化因子受體活性的藥物的方法，所述方法包括使本發(fā)明的化合物與藥用載體或稀釋劑混合。
發(fā)明另外涉及本發(fā)明化合物在治療、預(yù)防、改善、控制或減少由逆轉(zhuǎn)錄病毒，特別是皰疹病毒或人免疫缺陷病毒(HIV)引起的感染的風險和治療及延遲跟著發(fā)生的病理疾病例如AIDS的發(fā)作中的應(yīng)用。治療AIDS或者預(yù)防或治療由HIV引起的感染被定義為包括但不限于治療范圍廣泛的HIV感染狀態(tài)AIDS、ARC(AIDS相關(guān)并發(fā)癥)、有癥狀和無癥狀兩者、實際上或潛在地暴露于HIV。例如，本發(fā)明化合物用于治療在被懷疑經(jīng)例如血液輸入、器官移植、體液置換、咬合、意外針狀物刺入或者在手術(shù)期間暴露于患者血液引起的暴露于HIV后由HIV引起的感染。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選方面，本發(fā)明化合物可用于抑制靶細胞的趨化因子結(jié)合于趨化因子受體比如CCR-2的方法，所述方法包括使靶細胞與一定量的有效抑制趨化因子與趨化因子受體結(jié)合的化合物接觸。
用以上方法治療的受治療者為哺乳動物，優(yōu)選為人，男性或女性，其中趨化因子受體活性的調(diào)節(jié)是需要的。如在此使用的“調(diào)節(jié)”打算包括拮抗作用、激動作用、部分拮抗作用、反向激動作用和/或部分激動作用。在本發(fā)明的一個優(yōu)選方面，調(diào)節(jié)指趨化因子受體活性的拮抗作用。術(shù)語“治療有效量”意欲被研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其他臨床醫(yī)師探尋的對組織、系統(tǒng)、動物或人產(chǎn)生生物學或醫(yī)學反應(yīng)的本發(fā)明化合物的量。
如在此使用的術(shù)語“組合物”打算包括包含以特定量存在的特定成分的產(chǎn)物以及直接或間接由以特定量存在的特定成分的組合產(chǎn)生的任何產(chǎn)物?！翱伤幱玫摹币庵篙d體、稀釋劑或賦形劑，必須與制劑中的其它成分相適配并且對其接受者無害。
術(shù)語“給藥”和/或“給予”化合物應(yīng)理解為意指需要治療的個體提供本發(fā)明的化合物。
如在此使用的，術(shù)語“治療”指治療和預(yù)防或預(yù)防性治療以上提及的疾病。
調(diào)節(jié)趨化因子受體活性因而用于治療、預(yù)防、改善、控制或減少炎性和免疫調(diào)節(jié)性病癥和疾病，包括哮喘和變應(yīng)性疾病，以及自身免疫病理學如類風濕性關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化和以上指出的那些病理學的風險的聯(lián)合療法通過本發(fā)明化合物和已知用于這些應(yīng)用的其它化合物的聯(lián)合來闡述。
例如，在治療、預(yù)防、改善、控制或減少炎癥的風險中，本發(fā)明化合物可與抗炎或鎮(zhèn)痛藥例如阿片激動劑、脂氧合酶抑制劑如5-脂氧合酶的抑制劑、環(huán)加氧酶抑制劑如環(huán)加氧酶-2抑制劑、白介素抑制劑如白介素-1抑制劑、NMDA拮抗劑、氧化氮抑制劑或氧化氮合成的抑制劑、非甾體抗炎藥或抑制細胞因子的抗炎藥一起使用，例如，與化合物如對乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因、依那西普(embrel)、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛、酮咯酸、嗎啡、萘普生、非那西丁、吡羅昔康、甾體鎮(zhèn)痛藥、舒芬太尼、舒林酸、替尼達普等一起使用。相似地，本發(fā)明化合物可與疼痛緩解藥；增效劑如咖啡因、H2-拮抗劑、西甲硅油、氧化鋁或氫氧化鎂；減充血藥如去氧腎上腺素、苯丙醇胺、偽麻黃堿、羥甲唑啉、腎上腺素、萘甲唑啉、賽洛唑啉、丙己君或左-脫氧-麻黃堿；鎮(zhèn)咳藥如可待因、氫可酮、卡拉美芬、噴托維林或右美沙芬(dextramethorphan)；利尿藥和鎮(zhèn)靜性或非鎮(zhèn)靜性抗組胺藥一起給藥。
同樣地，本發(fā)明化合物可與用于治療/預(yù)防/抑制或改善本發(fā)明化合物是有用的疾病或狀況的其它藥物聯(lián)合使用。這樣的其它藥物可以通過途徑和以常規(guī)使用的量，與本發(fā)明化合物同時或連續(xù)給藥。當本發(fā)明化合物與一種或更多種其它藥物同時使用時，除本發(fā)明化合物以外，還包含這樣的其它藥物的藥物組合物為優(yōu)選。因此，本發(fā)明的藥物組合物包括除包含本發(fā)明化合物以外，還包含一種或更多種其它活性成分的那些藥物組合物。
可與本發(fā)明化合物聯(lián)合給藥(或者分開給藥或者以在相同的藥物組合物中給藥)的其它活性成分的實例包括但不限于(a)VLA-4拮抗劑，例如在US 5510332、WO 95/15973、WO 96/01644、WO96/06108、WO 96/20216、WO 96/22966、WO 96/31206、WO 96/40781、WO 97/03094、WO 97/02289、WO 98/42656、WO 98/53814、WO98/53817、WO 98/53818、WO 98/54207和WO 98/58902中描述的那些；(b)甾體類例如倍氯米松、甲潑尼龍、倍他米松、潑尼松、地塞米松和氫化可的松；(c)免疫抑制劑例如環(huán)胞菌素、他克莫司、雷帕霉素和其它的FK-506型免疫抑制劑；(d)抗組胺藥(H1-組胺拮抗劑)例如溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯馬斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羥嗪、甲地嗪、異丙嗪、阿利馬嗪、阿扎他定、賽庚啶、安他唑啉、非尼拉明、美吡拉敏、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、地氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、去乙氧羰基氯雷他定(descarboethoxyloratadine)等；(e)非甾體抗哮喘藥例如β2-激動劑(特布他林、奧西那林、非諾特羅、異他林、沙丁胺醇、比托特羅和吡布特羅)、茶堿、色甘酸二鈉、阿托品、異丙托溴銨、白三烯拮抗劑(乙魯司特、孟魯司特、普侖司特、伊拉司特、泊比司特、SKB-106203)、白三烯生物合成抑制劑(齊留通、BAY-1005)；(f)非甾體抗炎藥(NSAID)例如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯嗯洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、嗯丙嗪、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、瘞洛芬酸和硫嗯洛芬)、乙酸衍生物(吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、環(huán)氯茚酸、雙氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋羅芬酸、異丁芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齊多美辛和佐美脧)、滅酸類衍生物(氟芬那酸、甲氧芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、聯(lián)苯羧酸衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、昔康類(伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康和替諾昔康)、水楊酸酯類(乙酰水楊酸、柳氮磺吡啶)和吡唑酮類(阿扎丙宗、bezpiperylon、非普拉宗、莫非布宗、羥布宗、保泰松)；(g)環(huán)加氧酶-2(COX-2)抑制劑；(h)磷酸二酯酶IV(DE-IV)抑制劑；(i)趨化因子受體尤其是CCR-1、CCR-2、CCR-3、CXCR-3和CCR-5的其它的拮抗劑；(j)降低膽固醇藥物例如HMG-CoA還原酶抑制劑(洛伐他汀、辛伐他汀和普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、羅蘇伐他汀和其它的他汀類)、螯合劑(考來烯胺和考來替泊)、膽固醇吸收抑制劑(依澤替米貝)、煙酸、非諾貝酸衍生物(吉非貝齊、氯貝丁酯、非諾貝特和苯扎貝特)和丙丁酚；(k)抗糖尿病藥例如胰島素、磺酰脲類、雙胍類(二甲雙胍)、α-葡萄糖苷酶抑制劑(阿卡波糖)和格列酮類(曲格列酮和吡格列酮)；(l)干擾素β的制劑(干擾素β-1α、干擾素β-1β)；(m)其它的化合物例如5-氨基水楊酸和它們的前藥、抗代謝藥例如硫唑嘌呤和6-巰基嘌呤以及細胞毒的癌化學治療藥物。
本發(fā)明化合物與第二種活性成分的重量比例可以變化并且依每一種成分的有效劑量而定。通常使用每一種成分的有效劑量。因此，例如，當本發(fā)明的化合物與NSAID聯(lián)合時，本發(fā)明化合物與NSAID的重量比例通常在約1000∶1-1∶1000，優(yōu)選為約200∶1-1∶200的范圍內(nèi)。本發(fā)明的化合物與其它活性成分的聯(lián)合通常也在上述范圍內(nèi)，但是在每一種情況中，應(yīng)使用每一種活性成分的有效劑量。
在這樣的聯(lián)合中，本發(fā)明的化合物與其它活性藥物可以分開或一起給藥。另外，一種成分可在給予其它藥物之前、同時或隨后給藥。
本發(fā)明化合物可通過口服、胃腸外(例如肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、ICV、腦池內(nèi)注射或灌輸、皮下注射或埋入)，通過吸入噴霧、鼻、陰道、直腸、舌下或局部給藥途徑給藥，并且可單獨或一起，以包含常規(guī)非毒性可藥用的載體、佐劑和適合于每一種給藥途徑的媒介物的合適的劑量單位制劑配制。除了治療溫血動物例如小鼠、大鼠、馬、牛、綿羊、狗、貓、猴等，本發(fā)明的化合物有效用于人中。
用于給予本發(fā)明的化合物的藥物組合物可便利地以劑型存在并且可通過藥學領(lǐng)域熟知的任何方法制備。所有的方法包括使活性成分與構(gòu)成一種或更多種輔助成分的載體混合在一起的步驟。通常，通過使活性成分與液體載體或細分的固體載體或兩者均勻和緊密地混合在一起，然后如果必要，使產(chǎn)物成型為所需的制劑來制備藥物組合物。除了藥物組合物以外，活性的本發(fā)明化合物以足以對疾病的過程或狀況產(chǎn)生所需作用的量被包括在內(nèi)。如在此使用的，術(shù)語“組合物”打算包括包含以具體量存在的具體成分的產(chǎn)物以及其直接或間接由以具體量存在的具體成分的組合產(chǎn)生的任何產(chǎn)物。
含活性成分的藥物組合物可以適合于口服應(yīng)用，例如作為片劑、糖錠劑(boches)、錠劑、含水或油混懸劑、可分散粉劑或顆粒劑、乳劑、硬或軟膠囊或者糖漿劑或酏劑的形式存在。按照對藥物組合物制備領(lǐng)域已知的任何方法可制備打算用于口服應(yīng)用的組合物，并且這樣的組合物可包含一種或更多種選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的物質(zhì)，以提供藥學上精致的和適口的制劑。片劑包含與非毒性可藥用的適合于制備片劑的賦形劑混合在一起的活性成分。這些賦形劑可為例如惰性稀釋劑如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒和崩解劑例如玉米淀粉或藻酸；粘合劑例如淀粉、明膠或阿拉伯膠和潤滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。片劑可為未包衣的或者它們可通過已知技術(shù)包衣以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，開且因此提供較長時間的持續(xù)作用。例如，可使用時間延遲原料如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它們也可通過在美國專利4256108、4166452和4265874號中描述的技術(shù)包衣，以形成用于控制釋放的滲透治療片劑。
用于口服應(yīng)用的制劑也可作為其中活性成分與惰性固體稀釋劑如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合在一起的硬明膠膠囊，或作為其中活性成分與水或油介質(zhì)例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合在一起的軟明膠膠囊存在。
含水懸浮液包含與適合于制備含水懸浮液的賦形劑混合在一起的活性原料。這樣的賦形劑為懸浮劑，例如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或甜味劑可為天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或者環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物例如十七碳乙烯氧基十六烷醇的縮合產(chǎn)物，或者環(huán)氧乙烷與衍生于脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯，或者環(huán)氧乙烷與衍生于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物例如聚乙烯山梨糖單油酸酯。含水懸浮液也可包含一種或更多種防腐劑例如乙基或正丙基、對羥基苯甲酸酯，一種或更多種著色劑、一種或更多種矯味劑和一種或更多種甜味劑例如蔗糖或糖精。
通過把活性成分懸浮于植物油例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油中，或懸浮于礦物油例如液體石蠟中，可配制油狀懸浮液。油狀懸浮液可包含增稠劑例如黃蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入例如以上闡述的那些甜味劑和矯味劑以提供可口的口服制劑。通過加入抗氧化劑例如抗壞血酸，這些組合物可被防腐。
適合于通過加入水制備含水懸浮液的可分散粉劑和顆粒劑提供與分散劑或潤濕劑、懸浮劑和一種或更多種防腐劑混合在一起的活性成分。合適的分散或潤濕劑和懸浮劑通過以上已經(jīng)提及的那些舉例說明。另外的賦形劑，例如甜味劑、矯味劑和著色劑，也可存在。
本發(fā)明的藥物組合物也可以以水包油乳劑的形式存在。油相可為植物油例如橄欖油或花生油，或者礦物油例如液體石蠟或這些油的混合物。合適的乳化劑可為天然存在的樹膠例如阿拉伯膠或黃蓍膠、天然存在的磷脂例如豆油、卵磷脂和衍生于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯例如山梨醇單油酸酯，和所述部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物例如脫水聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯。乳劑也可包含甜味劑和矯味劑。
糖漿劑和酏劑也可用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制。這樣的制劑也可包含濕潤劑、防腐劑和矯味劑及著色劑。
藥物組合物可以以滅菌可注射含水或油狀懸浮液的形式存在。按照已知技術(shù)，使用以上已經(jīng)提及的那些合適的分散劑或甜味劑和懸浮劑可配制這個懸浮液。滅菌可注射制劑也可為在非毒性非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的滅菌可注射溶液劑或懸浮液，例如作為在1，3-丁二醇中的溶液劑。在可接受的媒介物和溶劑中，可使用的為水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的固定油被常規(guī)用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，任何品牌的固定油可被使用，包括合成的單-或二甘油酯。另外，脂肪酸例如油酸發(fā)現(xiàn)在注射劑的制備中具有應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物也可以用于直腸給藥的栓劑形式給藥。通過把藥物與合適的非刺激性賦形劑混合可制備這些組合物，該賦形劑在常溫下為固體但是在直腸溫度下為液體并且因此在直腸熔化以釋放藥物。這樣的原料為可可脂和聚乙二醇。
對于局部使用，使用包含本發(fā)明的化合物的霜劑、軟膏劑、凝膠劑、溶液劑或懸浮液等。(為了這個應(yīng)用的目的，局部應(yīng)用應(yīng)包括口腔洗劑和漱口水)本發(fā)明的藥物組合物和方法可另外包括如在此指出的通常用于治療這樣病理疾病的其它的治療活性化合物。
在治療、預(yù)防、改善、控制或減少需要趨化因子受體調(diào)節(jié)的疾病的風險中，合適的劑量水平通常為約每天0.01-500mg/kg患者體重，其可以單或多劑量給藥。優(yōu)選地，劑量水平為每天約0.1-250mg/kg，或者為每天約0.5-100mg/kg。合適的劑量水平可為每天約0.01-250mg/kg、約每天0.05-100mg/kg，或每天約0.1-50mg/kg。在這個范圍內(nèi)，劑量范圍可為每天0.05-0.5、0.5-5或5-50mg/kg。為了口服給藥，組合物優(yōu)選以包含1.0-1000mg的活性成分，優(yōu)選2.0-500，更優(yōu)選3.0-200，特別是1、5、10、15、20、25、30、50、75、100、125、150、175、200、250、300、400、500、600、750、800、900和1000mg活性成分的片劑形式提供，根據(jù)癥狀調(diào)節(jié)給予所治療患者的劑量?；衔锟砂凑彰刻?-4次，優(yōu)選每天一或兩次的方案給藥。
然而，應(yīng)理解對于任何具體患者的具體的劑量水平和給藥頻率可以改變并且將依多種因素而定，包括所使用的具體化合物的活性、所述化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時間長度、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥方式和次數(shù)、排泄速率、藥物聯(lián)合、具體病癥的嚴重性和宿主經(jīng)歷的療法。
下面的反應(yīng)方案和實施例中描述了制備本發(fā)明化合物的幾種方法。原料是通過已知方法或者如下所示制得的。
上述趨化因子活性調(diào)節(jié)劑1-4可通過兩種幾本途徑中的一種成功地合成。根據(jù)其中的一種途徑，在合適的活化后，將保護的純手性(Eliel，E.E.，Wilen，S.H.，Stereochemistry of Organic Compounds，John Wiley & Sons，Inc.，New York)氨基酸1-1與8-三氟甲基-1，2，3，4-四氫-6H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-6-酮(1-2，中間體3，或其類似物)偶聯(lián)，然后除去保護基(Greene，T.，Wuts，P.G.M.，Protective Groups inOrganic Chemistry，John Wiley & Sons，Inc.，New York，NY 1991)。該途徑如反應(yīng)方案1A.所示。
反應(yīng)方案1A
在另一方法，反應(yīng)方案1B中，將完全裝配的純手性3-氨基-取代的環(huán)戊烷甲酰胺1-6用酮1-5還原烷基化，如果需要的話，通過合適的色譜法或通過其它物理方法來分離所形成的非對映體。該環(huán)戊烷甲酰胺還可能攜帶3-氧代-基團(1-8)，通過用合適的，如果需要的話，純手性胺1-7進行還原胺化，可類似地將其轉(zhuǎn)化成所需終產(chǎn)物。后一方法可不變地生成非對映體混合物，可通過合適的色譜法或其它物理方法來分離這些非對映體混合物。
反應(yīng)方案1B 這兩種一般方法都具有它們的優(yōu)點和缺點反應(yīng)方案1A中描述的合成途徑的優(yōu)點在于，手性合成步驟以及非對映體分離可以以大規(guī)模用易于獲得的材料進行。酰胺形成是作為倒數(shù)第二個步驟進行的，減少了合成操作的數(shù)目，在所述合成操作中必須進行敏感的吡啶酮操作。另一方面，在反應(yīng)方案1B中描述的合成途徑使得在合成中有更大的可變性，并且通常更短。然而，該途徑需要非對映體分離作為最后的步驟。
反應(yīng)方案2中描繪了第一種一般合成途徑的實例。當R1基團是簡單的或支鏈烷基例如異丙基，并且胺攜帶沒有任何取代基的簡單的脂環(huán)族基團時(R16＝H)，該合成順序可以最成功地施用。
根據(jù)該方法，將商購獲得的(1R，4S)-4-氨基環(huán)戊烯甲酸的氨基用例如叔丁氧基羰基保護(Greene，T.，Wuts，P.G.M.，ProtectiveGroups in Organic Chemistry，John Wiley & Sons，Inc.，New York，NY 1991)，然后將包含在5元環(huán)內(nèi)的雙鍵飽和(2-3)。酯2-4可以通過用芐基溴將合適的酸式鹽烷基化來生成，但是其它方法也是合適的。在標準酸性條件下除去保護基，形成了二苯甲酮席夫堿(2-6)，以隨后幫助引入R1基團。堿介導(dǎo)的2-6的C1-烷基化可從與氨基在同一側(cè)發(fā)生，生成反式異構(gòu)體，或者可從相反一側(cè)發(fā)生(主產(chǎn)物)，生成順式異構(gòu)體2-7。這些異構(gòu)體可通過柱色譜法容易地進行，并且用所需的順式異構(gòu)體繼續(xù)進行以后的操作。
反應(yīng)方案2
為了幫助分離和純化2-8，在酸催化的席夫堿裂解之后，進行標準BOC-保護(2-8)，在合適的保護之后，在常用條件下除去BOC-基團。通過例如用合適的酮進行還原烷基化，可完成該分子的胺部分，獲得2-10。必須保護2-11中的仲胺，三氟乙酰基是特別合適的?？赏ㄟ^多種方法將芐基酯裂解，發(fā)現(xiàn)可采用鈀催化的氫解，以獲得2-12。
反應(yīng)方案2中還描繪了稍短一些的制備2-12的方法。根據(jù)該方法，如上所述將在2-13中的BOC保護基除去，在2-14與合適的酮例如四氫吡喃-4-酮之間進行還原胺化，生成完全的胺部分。然后將仲胺保護，例如作為三氟乙酰胺保護起來，在“一勺燴”鈀催化的氫化中除去包含在該分子的環(huán)戊烷核內(nèi)的雙鍵以及芐基酯，獲得2-12。
當R16代表氫以外的取代基時，就產(chǎn)生另外的手性中心。這進一步增加了必須在合成操作期間分離的非對映體的數(shù)目。施用在反應(yīng)方案1A中描繪的一般操作仍然是有利的。有關(guān)合成操作的順序和特征類似于反應(yīng)方案2描述的那些，并且方法描述在反應(yīng)方案3中。根據(jù)該方法，將不飽和芐基酯2-14用合適的酮(在該實例中是3-甲基-四氫吡喃-4-酮)還原烷基化，獲得3-1。該胺代表非對映體混合物，其分離在該階段相當困難。因此，將混合物3-1通過C1-烷基化步驟，其中連接上R1取代基。這是通過堿介導(dǎo)的烯醇化物形成，然后用低級鹵代烷烴烷基化來完成的?？墒褂枚喾N堿來產(chǎn)生烯醇化物，六甲基二硅氮烷鉀是特別有用的。因為烷化劑可以從與胺在相同或相反的一側(cè)接近烯醇化物，所以由此形成了兩種異構(gòu)體產(chǎn)物(3-2)。在該階段，將該混合物分離成各個成分是一個問題，因此，讓該化合物直接進入下一步驟是有利的。通過將3-2與三氟乙酸酐在合適的堿創(chuàng)造性反應(yīng)，將仲胺以三氟乙酰胺形式保護起來。在該階段，可通過硅膠柱色譜法將在烯醇化物烷基化步驟中產(chǎn)生的各順式和反式異構(gòu)體分離成兩種非對映體。然后將順式產(chǎn)物3-3氫化成飽和雙鍵以及除去芐基酯保護基，獲得3-4，或者通過制備手性柱色譜法將其分離成單獨異構(gòu)體(3-5和3-6)。制備手性柱色譜法可使用Chiralpak AD柱(Diacel)和乙醇與己烷的混合物作為洗脫劑來容易地進行。如在3-3的情況下，在“一勺燴”氫化中除去芐基酯保護基和雙鍵。或者，將不飽和芐基酯2-14在堿性氮上作為氨基甲酸叔丁酯3-9保護起來，然后如上所述經(jīng)由其烯醇化物來烷基化，獲得順式/反式異構(gòu)體混合物?？赏ㄟ^上述硅膠柱色譜法將其分離成單獨的非對映體。然后將各自的順式異構(gòu)體3-10脫保護，把使得胺3-11進行還原烷基化。然后如上所述將仲胺3-12作為三氟乙酰胺3-3保護起來。
反應(yīng)方案3 對映體純的樣本3-7也可以通過這樣的合成方法獲得，其中使用合適的酮將芐基酯2-9還原烷基化，在該實例中，合適的酮是3-甲基-四氫吡喃-4-酮，獲得3-12，反應(yīng)方案3。將該異構(gòu)體混合物轉(zhuǎn)化成各自的三氟乙酰胺，通過小心進行的硅膠色譜分離將其分離。然后將3-13進行簡單的例如氫解脫芐基化，獲得酸中間體3-7。
其制備描述在該文件中的更大數(shù)目的中間體和實例可按照反應(yīng)方案1B中描繪的一般方法來合成，根據(jù)該方法，用酮1-5將完全裝配的氨基衍生物1-6還原烷基化，或者，將3-氧代-衍生物1-8還原胺化，獲得所需產(chǎn)物。前一方法易于適用于這樣的情況，其中R1是低級烷基例如三氟乙基，并且酰胺鍵可通過簡單的偶聯(lián)方法產(chǎn)生。相關(guān)化學步驟總結(jié)在反應(yīng)方案4中。
反應(yīng)方案4 根據(jù)該方法，將可商購獲得的(1S)-(+)-2-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(4-1)氫化，以把5元環(huán)內(nèi)存在的雙鍵飽和，并且在酸性條件下將內(nèi)酰胺水解打開。酸催化的酯化引入甲基酯(4-3)，并且可以如上所述將氨基以席夫堿形式保護起來?？梢允褂脧妷A例如二異丙基氨基鋰形成酯烯醇化物，然后用合適的鹵代烷烴烷基化。前一步驟使得在環(huán)戊烷環(huán)的C1上的立體化學混亂，因為烷化劑可從與C3的氨基在相同一側(cè)(生成反式產(chǎn)物)或相反一側(cè)(生成順式產(chǎn)物)接近烯醇化物。然后可用酸將亞胺保護基裂解，然后用叔丁氧基羰基再保護(4-5)。在該階段，可使用柱色譜法將兩種異構(gòu)體容易地分離，然后用所需的順式異構(gòu)體進一步操作。堿催化的酯水解將釋放羧基，標準酰胺鍵形成將獲得異喹啉酮1-2。然后可用酸除去BOC-保護基，獲得1-6。
在這種情況下，當結(jié)構(gòu)1-4中的R1基團代表更復(fù)雜的取代的烷基時，或者，當其含有手性中心時，通過完全裝配的中間體1-1來合成上述趨化因子活性調(diào)節(jié)劑，反應(yīng)方案1A。反應(yīng)方案5中描述了該方法的一個實例。在這種情況下，R1基團代表1-苯甲?；?1-乙基。根據(jù)該方法，將3-氧代環(huán)戊烷甲酸(Stetter，H.，Kuhlmann，H.，LiebigsAnn.Chem.，1979，7，944-9)轉(zhuǎn)化成其叔丁酯?？墒褂枚喾N方法來進行該轉(zhuǎn)化。在較小規(guī)模，使用O-叔丁基-N，N’-二異丙基脲是特別有利的。然后將3-氧代基團作為縮醛保護起來，烯醇化物(用強堿形成的)與乙醛之間的Claisen縮合就形成所希望的C1-羥基乙基中間體5-3。該縮合可用多種同系醛和酮成功地進行。在該階段，有利的是，除去縮醛保護基(酸性條件)，然后用例如苯甲?；Ｗo側(cè)鏈的羥基(5-6)。該中間體含有兩個手性中心，因此由兩個非對映體對(蘇型和赤型)組成。這些非對映體可使用硅膠柱色譜法來成功地分離，然后使用含有C1-(S)-絕對立體化學的非對映體對(5-6)進一步操作。然后通過用手性或如果可能的話純手性胺(1-7)進行還原烷基化來完成氨基。使用硅膠柱分離所需的順式非對映體，將并且使用半制備chiralcel OD柱將該側(cè)鏈非對映體的混合物分離出單獨的對映體。為了保證胺和羧基都可以正交操作，將仲胺以三氟乙酰胺形式保護起來(5-8)。這時可除去酯保護基，并且這將提供倒數(shù)第二個酸5-9。
反應(yīng)方案5
在這種情況下，當希望保留包含在環(huán)戊烷核內(nèi)的雙鍵時，經(jīng)由反應(yīng)方案1B中描繪的途徑來進行是有利的。根據(jù)該方法(反應(yīng)方案6)，將純手性不飽和4(S)-氨基環(huán)戊烷甲酸甲酯(6-1)以2，5-二甲基吡咯的形式保護起來，將可通過將胺與2，5-戊二酮在高溫下反應(yīng)來獲得(6-2)。然后將用強堿形成的烯醇化物用合適的鹵代烷烴，在該實例中用2-碘丙烷烷基化。然后再一次使用柱色譜法分離出所希望的順式產(chǎn)物，并且在該合成中進一步進行?？稍诙喾N條件下將該酯裂解，在該實例中，可成功地使用高溫下堿催化的水解。酰胺鍵形成需要酸的活化，可通過形成混合酸酐，在該實例中使用甲磺酰氯形成混合酸酐來實現(xiàn)酸的活化。根據(jù)胺的性質(zhì)，活化的酸將在室溫或稍高溫度下反應(yīng)以形成所需的酰胺。在該制備階段，可使用例如羥基胺鹽酸鹽溶液于高溫下除去胺保護基。
反應(yīng)方案6
最終的趨化因子活性調(diào)節(jié)劑可通過將這些預(yù)先獲得的中間體與胺或酮根據(jù)一般反應(yīng)方案1A和1B反應(yīng)來合成。用于這些轉(zhuǎn)化的簡單的胺或酮可商購獲得或者通過下述方法獲得。
關(guān)鍵的8-三氟甲基-1，2，3，4-四氫-6H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-6-酮的制備描述在反應(yīng)方案7中。根據(jù)其中一個開發(fā)的方法(反應(yīng)方案7A)，將商購獲得的2，6-二氯-4-三氟甲基吡啶與叔丁醇鉀反應(yīng)。在該轉(zhuǎn)化中，起始吡啶中存在的一個氯原子被醇鹽置換，形成掩蔽的吡啶基團。在下一步中，第二個氯被氰化物基團置換，該轉(zhuǎn)化最好使用Pd0催化來進行。腈的氫化生成氨基甲基，然后與鄰硝基苯磺酰氯反應(yīng)，生成7-5。由于磺酰胺基團的酸性特征，可使用弱堿(例如碳酸鉀)來用1，2-二溴乙烷進行所希望的N-烷基化，并且由于掩蔽的吡啶基團，烷化劑可大大過量使用。使用酸進行吡啶的去掩蔽，堿介導(dǎo)的閉環(huán)完成第二個環(huán)，7-8。最好用苯硫酚鉀來進行磺酰胺的除去，并且為了幫助產(chǎn)物分離，在標準條件下使用BOC2O將粗產(chǎn)物保護。這時可通過例如快速柱色譜法純化產(chǎn)物，并且標準酸催化的BOC-裂解完成該合成。
反應(yīng)方案7A
另一方法描述在反應(yīng)方案7B中。在標準條件下使用NBS將商購獲得的4-三氟甲基-6-氯-2-甲基吡啶進行側(cè)鏈溴化。然后用疊氮基置換鹵化物(7-13)，將其還原成各自的胺。之后可如上所述進行磺酰胺形成和隨后的烷基化。隨后的芳環(huán)氯置換依賴于通過分子內(nèi)閉環(huán)的鄰近氮的活化。形成該吡啶物質(zhì)7-17之后，在高溫下使用水來影響所希望的置換。這避免了不希望的副反應(yīng)，在該轉(zhuǎn)化期間采用酸性條件。加入抗氧化劑例如L-抗壞血酸來保持高產(chǎn)率是有利的。然后如上所述進行最后一組操作。
反應(yīng)方案7B
反應(yīng)方案7C中描述了另一種合成方案，通過該方案，可合成吡啶酮7-10。根據(jù)該方法，二二取代的乙炔在一系列分子內(nèi)親核加成中環(huán)合，在一連串過程中形成環(huán)系。根據(jù)該方法，將單保護的乙二胺7-19與硝基苯磺酰氯7-18如上所述進行反應(yīng)。將酸性磺酰胺基團在弱堿例如碳酸鉀存在下用炔丙基溴進行烷基化。然后β-碘γ-三氟丙酸乙酯的Pd0催化的偶聯(lián)引入吡啶環(huán)的構(gòu)成單元。這時除去BOC-保護基，然后加入氯化汞(II)以引起環(huán)合。隨后的步驟如上所述。
反應(yīng)方案7C
在這些合成操作中經(jīng)常使用2，3，5，6-四氫吡喃-4-酮的某些3-取代的類似物。這些化合物是購買的或者根據(jù)已知方法制備的。然而，為了制備某些尤其是純手性物質(zhì)，必須獨立地開發(fā)合成方法。反應(yīng)方案8A和8B顯示了這些方法的實例。
手性3-甲氧基四氫吡喃-4-酮的制備描述在反應(yīng)方案8A中。根據(jù)該反應(yīng)方案，將商購獲得的2，3，5，6-四氫吡喃-4-酮用強堿處理，以形成各自的烯醇化物，可將烯醇化物酰化，以獲得各自的O-苯甲酰基烯醇醚8-2。手性環(huán)氧化可以用L-Epoxone成功地進行，次要的不希望的對映體可以通過手性HPLC(Chiralpak AD)容易地分離。純手性環(huán)氧-酯的酸催化的甲醇分解，生成3-羥基-4，4-二甲氧基-四氫吡喃8-4。
反應(yīng)方案8
其各自的甲基醚可以通過標準Williamson醚化來形成。顯然，該方法也適于制備外消旋體。
3-甲基-2，3，5，6-四氫吡喃-4-酮和相應(yīng)的對映體純的4(S)-氨基-3(R)-甲基-2，3，5，6-四氫吡喃的制備描述在反應(yīng)方案8B中。
反應(yīng)方案8B 該合成方案用上述四氫吡喃酮8-1開始，使用六甲基二硅氮烷鋰將其轉(zhuǎn)化成其烯醇化物，用甲基碘進行烷基化?？赏ㄟ^用二苯甲胺進行還原胺化，然后催化裂解掉二苯甲基來引入氮。然后可用例如芐氧基羰基將所得胺8-8保護，可使用柱色譜法分離出不希望的(次要)反式異構(gòu)體。各個單獨的異構(gòu)體可使用Chiralpak AD柱，通過制備手性HPLC分離來獲得。芐氧基羰基的裂解可使用披鈀炭作為催化劑通過氫來容易地進行。
可使用其制備如上所述的中間體，按照反應(yīng)方案1A和1B中描繪的一般合成途徑來制備最終的趨化因子活性調(diào)節(jié)劑。
下面是用于制備在下列實施例中使用的化合物或可用來代替不能商購獲得的在下列實施例中使用的化合物的化合物的代表性方法。
在某些情況下，為了有助于反應(yīng)或避免不希望的反應(yīng)產(chǎn)物，可改變進行上述反應(yīng)方案的順序。提供下列實施例僅是為了舉例說明，并且不是限制本發(fā)明。
溶液的濃縮通常在減壓下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進行?？焖偕V法在硅膠(230-400目)上進行。除非另有說明，在CDCl3溶液中獲得NMR光譜。偶合常數(shù)(J)的單位為赫茲(Hz)?？s寫二乙基醚(乙醚)、三乙胺(TEA)、N，N-二異丙基乙胺(DIEA)、飽和水溶液(sat′d)、室溫(rt)、小時(h)、分鐘(min)。
中間體1 方法A步驟A 將叔丁醇鉀(13.16g，117.29mmol)在無水二甲基甲酰胺(60mL)中的溶液冷卻至0℃，滴加2，6-二氯-4-三氟甲基吡啶(Lancaster，12184)(16.89g，78.20mmol)在二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液，繼續(xù)在0℃攪拌2小時。通過倒入飽和氯化銨溶液(100mL)內(nèi)來中止反應(yīng)，用己烷(3×100mL)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機相干燥(無水硫酸鎂)并將溶劑蒸發(fā)至干。通過梯度硅膠柱色譜進一步純化產(chǎn)物，使用乙酸乙酯/己烷混合物作為洗脫劑，將乙酸乙酯濃度逐漸從0增加至10％，獲得了16.54g(65.21mmol，84％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)7.04(s，1H)，6.80(s，1H)，1.62(s，9H).
步驟B 將得自前一步驟的氯化物(11.14g，44mmol)、氰化鋅(10.33g，88mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(3.90g，3.52mmol)在無水二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物通過氮氣/真空循環(huán)來充分脫氣，在95℃攪拌過夜。通過倒入200mL水內(nèi)來中止反應(yīng)，把產(chǎn)物萃取到己烷內(nèi)。經(jīng)由硅藻土塞過濾有機層，蒸發(fā)至干，獲得了12.10g含有三苯基膦作為主要污染物的粗產(chǎn)物。將該殘余物溶解在四氫呋喃(50mL)中。加入過氧化氫水溶液(10mL，30％)，將該混合物在室溫攪拌30分鐘。將溶劑蒸發(fā)至干，通過在步驟A中描述的柱色譜法(乙酸乙酯在己烷中的混合物，0-5％)將產(chǎn)物與三苯基膦氧化物分離開。根據(jù)該方法，獲得了4.59g(18.79mmol，43％)純產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)7.40(s，1H)，7.09(s，1H)，1.63(s，9H).
步驟C 將得自步驟B的腈(4.39g，18mmol)和阮內(nèi)鎳(27g)在乙醇(160mL)與氫氧化銨水溶液(40mL)的混合物中的溶液在帕爾搖動器內(nèi)于50psi的壓力下氫化4小時。過濾出催化劑，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。所得粗產(chǎn)物(4.01g)不用進一步純化直接用于下一步驟。
步驟D
將得自前一步驟的胺(997mg，4.01mmol)和二異丙基乙胺(1.40mL，8.03mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液冷卻至0℃，通過注射器加入2-硝基苯磺酰氯(Aldrich)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。將該反應(yīng)混合物在沒有冷卻的情況下攪拌30分鐘，用水中止反應(yīng)。用二氯甲烷(3×30mL)萃取粗產(chǎn)物，將合并的有機萃取液干燥(硫酸鎂)，并將溶劑蒸發(fā)至干。將殘余物(1.9261g)通過如上所述的硅膠柱進行純化，使用0-80％的乙酸乙酯進行梯度洗脫。通過該方法獲得了964mg(2.15mmol，53％)純產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)8.08(dd，J＝7.3，1.1Hz，1H)，7.84(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70(m，2H)，6.92，(s，1H)，6.73(s，1H)，6.25(bt，J＝5.26Hz，1H)，4.40(d，J＝6.0Hz，2H)，1.58(s，9H).
步驟E 將其合成描述在步驟D中的磺酰胺(333mg，0.769mmol)、碳酸鉀(1.29g，15.38mmol)在二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物用二溴乙烷(1.44g，7.69mmol)處理，在60℃加熱2小時。將該反應(yīng)混合物倒入30mL水內(nèi)，用己烷(3×30mL)萃取。將合并的有機相用鹽水回洗，用無水硫酸鎂干燥，蒸發(fā)至干，獲得了336.8mg(0.623mmol，82％)純產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)8.02(dd，J＝7.8，1.0Hz，1H)，7.70(bm，3H)，6.94(s，1H)，6.79(s，1H)，4.68(s，2H)，3.82(t，J＝7.3Hz，2H)，3.38(t，J＝7.6Hz，2H)，1.58(s，9H).
步驟F 向得自前一步驟的叔丁基醚(330mg，0.611mmol)在二氯甲烷(9mL)內(nèi)的溶液中加入三氟乙酸(1.0mL)，將該混合物在室溫攪拌15分鐘。將溶劑蒸發(fā)至干，用己烷稀釋殘余物，蒸發(fā)幾次，獲得了367mg灰白色固體形式的粗產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，DMSO-D6))8.07(d，J＝8.01Hz，1H)，7.97(d，J＝J＝7.78Hz，1H)，7.86(t，J＝7.6Hz，1H)，7.79(t，J＝7.78Hz，1H)，4.55(s，2H)，3.81(t，J＝6.86Hz，2H)，3.56(t，J＝6.87Hz，2H).
步驟G 將得自前一步驟的溴化物(164mg，0.338mmol)在THF(12mL)中的溶液和無水碳酸鉀(140mg，1.014mmol)通過氮氣/真空循環(huán)來充分脫氣，在室溫攪拌3小時。將該反應(yīng)混合物用乙醚(50mL)稀釋，用含有3％L-抗壞血酸的10％檸檬酸水溶液中止反應(yīng)。將水層再萃取3次，合并有機相，用無水硫酸鎂干燥，真空除去溶劑，獲得了108.3mg(0.269mmol，80％)純產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)8.09(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，7.75(m，4H)，6.77(s，1H)，6.29(s，1H)，4.60(s，2H)，4.23(t，J＝5.8Hz，2H)，3.78(t，J＝6.0Hz，2H).
方法B步驟A
將2-氯-6-甲基-4-三氟甲基吡啶(21.18g，108.3mmol，MaybridgeCD 10452)、N-溴琥珀酰亞胺(21.20g，119.2mmol，Aldrich)在四氯甲烷(200mL)中的溶液于輕微回流下攪拌，同時滴加2，2’-偶氮二異丁腈(1.87mL)在四氯甲烷(50mL)中的溶液。繼續(xù)加熱3小時，然后讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(4×100mL)洗滌，用無水硫酸鎂干燥并蒸發(fā)至干。將粗產(chǎn)物(34g)通過硅膠柱純化，使用乙酸乙酯/己烷混合物洗脫，其中乙酸乙酯濃度從0％逐漸增加至分離結(jié)束時的5％。以該方式獲得了9.6g 2-(α，α-二溴甲基)-6-氯-4-三氟甲基吡啶，13.1g所需的2-(α-溴甲基)-6-氯-4-三氟甲基吡啶(44％)和9.03g未反應(yīng)的原料。
2-(α，α-二溴甲基)-6-氯-4-三氟甲基吡啶1H NMR(500MHz，CDCl3)7.95(s，1H)，7.53(s，1H)，6.62(s，1H).2-(α-溴甲基)-6-氯-4-三氟甲基吡啶1H NMR(500MHz，CDCl3)7.62(s，1H)，7.51(s，1H)，4.55(s，2H).
步驟B 將得自前一步驟的溴化物(3.78g，13.62mmol)和疊氮化鈉(8.85g，136.2mmol)在二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物于室溫和氮氣下攪拌24小時。加入水(50mL)，用己烷∶乙醚/9∶1(3×50mL)混合物萃取產(chǎn)物。將合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，真空除去溶劑。如步驟1中所述進一步純化殘余物(3.75g)，但是在純化結(jié)束時乙酸乙酯的濃度達到20％。以該方式可獲得2.51g(78％)純產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)7.55(s，1H)，7.53(s，1H)，4.61(s，2H).
步驟C 將得自前一步驟的疊氮化物(10.4g，44.25mmol)和三苯基膦(13.93g，53.11mmol)在含有10mL水的THF(200mL)中的溶液于室溫攪拌過夜，然后將其在60℃加熱1小時。將溶劑真空蒸發(fā)，把殘余物溶解在100mL 2N HCl中。將非堿性副產(chǎn)物用二氯甲烷(4×50mL)萃取，將合并的有機萃取液用2N HCl回洗。將合并的有機相經(jīng)由硅藻土過濾，并蒸發(fā)至干，獲得了鹽酸鹽形式的粗產(chǎn)物。其不用任何進一步純化直接用于下一步驟。
步驟D 將胺鹽酸鹽(6.07g，24.57mmol)和2-硝基苯磺酰氯(5.44g，24.57mmol)在甲苯(100mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)的混合物中的溶液劇烈攪拌3小時。分離出有機層，用二氯甲烷萃取水層。將合并的有機萃取液用無水硫酸鎂干燥，真空除去溶劑。通過硅膠柱快速色譜法進一步純化粗產(chǎn)物(11.05g)，使用二氯甲烷(100％)作為洗脫劑，獲得了6.13g(63％)純產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)8.01(dd，J＝7.8，1.4Hz，1H)，7.91(dd，J＝7.8，1.1Hz，1H)，7.73(dt，J＝7.6，1.4Hz，1H)，7.67(dt，J＝7.8，1.4Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.38(s，1H)，6.46(t，J＝6.2Hz，1H)，4.56(d，J＝6.5Hz，2H).
步驟E
將得自前一步驟的酰胺(3.0g，7.58mmol)、二溴乙烷(3.3mL，37.9mmol)和無水碳酸鉀(10.47g，75.8mmol)在DMF(25mL)中的溶液于60℃攪拌2小時。讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，通過倒入10％檸檬酸水溶液(200mL)來中止反應(yīng)。將產(chǎn)物用己烷和乙醚的混合物(4∶1，4×100mL)萃取。將合并的有機萃取液用無水硫酸鎂干燥，真空除去溶劑。將粗產(chǎn)物(5.91g)通過硅膠柱色譜進一步純化，使用二氯甲烷(100％)作為洗脫劑。以該方式獲得了1.876g(49％)純產(chǎn)物。其不耽擱直接用于下一反應(yīng)。1H NMR(500MHz，CDCl3)8.07(dd，J＝7.8，1.6Hz，1H)，7.70(bm，3H)，7.49(s，1H)，7.44(s，1H)，4.82(s，2H)，3.82(t，J＝7.3Hz，2H)，3.50(t，J＝7.1Hz，2H).
步驟F 將得自前一步驟的溴化物(1.87g，3.72mmol)和L-抗壞血酸(1.1g，6.23mmol)在乙酸(25mL)和水(25mL)的混合物中的溶液于110℃攪拌1小時。將溶劑蒸發(fā)至干，把殘余物水(100mL)與二氯甲烷(100mL)之間分配。將水相用DCM萃取4次，濃縮(2.51g)并如上所述通過梯度色譜法純化，使用0-100％的乙酸乙酯梯度。將產(chǎn)物(952mg，67％)通過用乙醚研制來脫色，獲得了899mg灰白色固體。該化合物的光譜和色譜特性都與標準樣品匹配。
方法C步驟A
于0℃，將10.0g(60.2mmol)4，4，4-三氟-2-丁酸乙酯在乙醚(150ml)中的溶液用HI(80.0mmol，10.01mL，57％水溶液)處理，將該混合物在0℃攪拌1小時。在室溫反應(yīng)1小時后，用硫代硫酸鈉水溶液中止反應(yīng)，用碳酸氫鈉水溶液萃取。將有機層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并真空濃縮。獲得了本標題產(chǎn)物(不用進一步純化)，為黃色油狀物，14.6g(82％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.11(s，1H)，4.24-4.30(q，2H)，1.29-1.33(t，3H).
步驟B 于0℃和氮氣氛下，向10.0g(62.4mmol)N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯在無水DCM(200ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入26.0ml(187.2mmol)三乙胺，然后以少量多次的方式加入2-硝基苯磺酰氯。然后將所得澄清黃色溶液在0℃攪拌30分鐘，之后在室溫攪拌2小時。將溶劑蒸發(fā)，把所得油狀物用乙醚稀釋，用水(×2)萃取。將合并的有機層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮。獲得了本標題產(chǎn)物21.49g(100％)，為油狀物，不用進一步純化。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ8.14-8.16(m，1H)，7.88-7.90(m，1H)7.75-7.78(m，2H)，4.86(b，1H)，3.28-3.31(t，2H)，3.24-3.26(t，2H)，1.44(s，9H).LC-MSC13H19N3O6S[M+H]+的計算值346.10，實測值346.25.
步驟C
將21.40g(61.96mmol)磺酰胺中間體(其制備描述在步驟B中)和碳酸鉀(17.10g，123.9mmol)在無水DMF(200ml)中的懸浮液冷卻至0℃，通過注射器緩慢地加入炔丙基溴。將該混合物在0℃攪拌30分鐘，在室溫攪拌2小時。將所得混合物用乙酸乙酯稀釋，用水萃取。將合并的有機層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并真空濃縮。通過快速色譜法純化(洗脫劑是20％乙酸乙酯/己烷)，獲得了本標題化合物(22.76g，96％)，為固體。1H NMR(CDCl3400MHz)δ8.01-8.04(m，1H)，7.60-7.68(m，3H)，4.47(b，1H)，4.22(s，2H)，3.48-3.52(t，2H)，3.33-3.35(t，2H)，2.14(s，1H)，1.39(s，9H).
步驟D 在氮氣氛下，向火焰干燥的250ml三頸圓底燒瓶內(nèi)加入14.6g(49.65mmol)碘代中間體(其合成描述在步驟A中)、0.895g(4.51mmol)碘化銅(I)、2.62g(2.26mmol，5mole％)[(Ph3P)3]4Pd和24.95g(180.56mmol)碳酸鉀。加入無水THF(125ml)，然后加入17.3g(45.14mmol)得自步驟C的炔烴，將所得混合物在70℃攪拌5小時。過濾出過量碳酸鉀，將所得黑色濾液濃縮。通過快速色譜法純化(洗脫劑是15-25％乙酸乙酯/己烷)，獲得了17.69g(71％)本標題產(chǎn)物，為油狀物。1H NMR(CDCl3400MHz)δ8.00-8.02(m，1H)，7.64-7.59(m，3H)，6.55(s，1H)，4.69(b，1H)，4.52(s，2H)，4.18(q，2H)，3.55-3.58(t，2H)，3.36-3.38(t，2H)，1.39(s，9H)，1.24-1.30(t，3H).LC-MSC22H26F3N3O8S[M+H]+的計算值550.14，實測值450.05，(m-100).
步驟E 在0℃，將得自前一步驟的BOC-保護的胺(17.69g，32.19mmol)在EtOAc(100ml)中的溶液用200ml EtOAc/HCl的飽和溶液處理，將該混合物攪拌2小時。將溶劑蒸發(fā)，獲得了14.70g本標題化合物，為黃褐色固體結(jié)晶(HCl鹽)。LC-MSC17H18F3N3O6S[M+H]+的計算值450.09，實測值450.05.
步驟F 在室溫和氮氣氛下，將得自前一步驟的炔烴(14.6g，30.04mmol)在無水1，4-二氧雜環(huán)己烷(100ml)內(nèi)的攪拌著的溶液用0.81g(3.00mmol)氯化汞(II)和8.22mL(60.08mmol)三乙胺處理。將所得懸浮液于室溫攪拌5分鐘，然后在65℃攪拌30分鐘，將溶劑蒸發(fā)。通過快速色譜法純化(用15-35％乙酸乙酯/甲基叔丁基醚洗脫)，獲得了10.09g(83％)本標題化合物(用乙醚研制的)。1H NMR(CDCl3500MHz)δ8.09-8.12(dd，1H)，7.72-7.80(m，3H)，6.79(s，1H)，6.29(s，1H)，4.61(s，2H)，4.24-4.26(t，2H)，3.78-3.80(t，2H).LC-MSC15H12F3N3O5S[M+H]+的計算值404.04，實測值404.05.
中間體2
向250mL反應(yīng)燒瓶內(nèi)加入碳酸鉀(8.55g，61.88mmol)，在高度真空下進行火焰干燥。讓其在氮氣氛下冷卻至室溫。向其中加入固體中間體1(8.32g，20.63mmol)，將該反應(yīng)燒瓶置于靜態(tài)氮氣氛下，通過注射器加入DMF(50mL)。通過真空/氮氣循環(huán)將該懸浮液脫氣，在室溫通過注射器加入苯流酚(2.65mL，25.8mmol)。繼續(xù)在室溫攪拌1小時，之后HPLC分析證實磺酰胺原料消失。加入固體BOC2O(13.50g，61.88mmol)，將該懸浮液于室溫再攪拌3小時。將該反應(yīng)混合物用乙醚(300mL)稀釋，通過倒入檸檬酸(100g)和L-抗壞血酸(25g)在500mL水中的溶液內(nèi)來中止反應(yīng)。用乙醚(5×100mL)萃取產(chǎn)物，將合并的萃取液用無水硫酸鈉干燥，真空除去溶劑。將殘余物(22g)通過梯度MPLC純化，使用乙酸乙酯-己烷混合物(0-100％乙酸乙酯)作為洗脫劑，獲得了4.95g(75％)純產(chǎn)物。1HNMR(CDCl3，500MHz)6.76(s，1H)，6.24(s，1H)，4.55(s，2H)，4.22(t，J＝5.7Hz，2H)，3.70(bt，J＝5.3Hz，2H)，1.42(s，9H).LC-MSC14H17F3N2O3[M+H+]的計算值319.12實測值319.10.
中間體3 將中間體2(4.54g，14.26mmol)在20mL 4N HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液中的溶液于室溫攪拌2小時。真空除去溶劑，將殘余物與甲苯一起共蒸餾幾次，在高度真空下干燥直至不再有進一步的重量損失。獲得了鹽酸鹽形式的所需產(chǎn)物(3.65g，100％)。把該固體在室溫用50mL乙醚研制并過濾，實現(xiàn)了進一步的純化(2.87g，79％，灰白色粉末)。LC-MSC9H9F3N2O[M+H+]的計算值219.07，實測值219.05.
中間體4 方法A步驟A 將(1R，4S)-4-氨基-環(huán)戊-2-烯甲酸(127g，1.0mol)、水(250mL)、碳酸氫鈉(168g，2.0mol)和THF(750mL)的混合物攪拌30分鐘，然后加入固體Boc2O(230g，1.05mol)。繼續(xù)攪拌一個周末，過濾并蒸發(fā)以除去THF。在0℃，向殘余物中加入2N鹽酸(～500mL)直至pH＝3.0。通過過濾收集所得沉淀，用水洗滌，并真空干燥過夜。以該方式獲得了白色固體形式的酸需要的酸(227g，100％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)5.95(m，1H)，5.79(m，1H)，4.80(br s，1H)，3.45(m，1H)，2.50(m，1H)，1.79(m，1H)，1.44(s，9H).
步驟B 將酸(步驟A，方法A，中間體4)(227g，1.0mol)和10％Pd/C(5.0g)在500mL甲醇中的溶液于50lb氫氣下氫化1小時。通過過濾除去催化劑，將濾液蒸發(fā)至干。把殘余物溶解在二氯甲烷中，用無水硫酸鈉干燥。將濾液蒸發(fā)至干，并真空干燥。獲得了本標題化合物，為淺黃色固體(226.0g，99％)。LC-MSC11H19NO4[M+H+]的計算值230，實測值230.13718080890步驟C 向酸(步驟B，方法A，中間體4)(226.0g，1.0mol)在500mLDMF內(nèi)的機械攪拌著的溶液中加入固體碳酸鉀(210g，1.5mol)。將所得混合物攪拌20分鐘，然后一次性加入純凈的芐基溴(118mL，1.0mol)。觀察到放熱反應(yīng)。于室溫攪拌3小時后，將整個混合物倒入冰水混合物(1000mL)內(nèi)，用乙醚(2×800mL)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機層用水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)，獲得了黃色固體。將該固體與4N HCl/二氧雜環(huán)己烷(400mL)混合，攪拌過夜并濃縮。通過過濾收集所得固體，用乙醚洗滌，并真空干燥。獲得了鹽酸鹽形式的本標題產(chǎn)物(140g，55％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)5.15(s，2H)，3.65(m，1H)，3.02(q，J＝8Hz，1H)，2.50(m，1H)，2.15(m，1H)，2.05(m，2H)，1.90(m，1H)，1.75(m，1H).
步驟D 將氨基芐基酯鹽酸鹽(步驟C，方法A，中間體4)(127g，0.5mol)懸浮在500mL二氯甲烷中。加入二苯甲酮亞胺(91g，0.5mol)。將所得混合物攪拌過夜，過濾以除去無機鹽。將濾液用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在200mL甲苯中，再次蒸發(fā)。將該操作再重復(fù)一次。獲得了(1S，3R)-3-[(二苯基亞甲基)氨基]環(huán)戊烷甲酸芐酯(178g)，為棕色油狀物，不用進一步純化用于下一步驟。1H NMR(400MHz，CDCl3)1.80(m，1H)，1.95(m，2H)，2.15(m，2H)，2.50(m，1H)，2.89(m，1H)，3.61(m，1H)，5.20(s，2H)，7.18(d，2H)，7.38(m，8H)，7.47(m，3H)，7.64(d，2H)。
步驟E 在氮保護氣氛下，將在300mL THF中的席夫堿(步驟D，方法A，中間體2)(76.6g，200mmol)冷卻至-78℃。在攪拌下，用20分鐘加入LDA(2.0M，110mL，220mmol)在庚烷中的溶液。將該混合物在-78℃攪拌30分鐘，加入68mL異丙基碘(440mmol)在50mL THF中的溶液。繼續(xù)攪拌30分鐘。通過移去冷卻浴讓反應(yīng)溫度升至0℃。攪拌2小時后，將該反應(yīng)混合物蒸發(fā)以除去THF。將殘余物溶解在乙醚(1000mL)中，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物溶解在500mL THF中，與400mL 1N HCl混合，攪拌1小時，在50℃蒸發(fā)以除去THF。將水溶液用己烷(3×)萃取，用飽和碳酸鈉水溶液堿化(pH＞9)，與Boc2O(53g)在500mL二氯甲烷中的溶液混合，攪拌30分鐘。分離出有機相，用二氯甲烷(3×)萃取水相。將合并的有機相用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)。通過快速色譜法純化殘余物(10％EtOAc/己烷)，獲得了本標題化合物，為順式和反式異構(gòu)體的混合物(～1∶1，24g)。在MPLC上進一步純化(5％EtOAc/己烷)，獲得了單獨的順式異構(gòu)體(快洗脫下來的，5.0g)和反式異構(gòu)體(慢洗脫下來的，4.3g)。ESI-MS，C21H31NO4的計算值361；實測值362(M+H)+.
步驟F 將上述順式-Boc氨基酯(1.25g，3.45mmol)與20mL 4N HCl/二氧雜環(huán)己烷一起攪拌1小時，蒸發(fā)并在高度真空下干燥，獲得了(1S，3R)-3-氨基-1-異丙基環(huán)戊烷甲酸芐酯鹽酸鹽(1.05g，100％).ESI-MS，C16H23NO2的計算值261；實測值262(M+H)+.
步驟G 將上述氨基酯(HCl salt，1.05g，3.45mmol)、四氫-4H-吡喃-4-酮(1.0g，10mmol)、分子篩(4，1.0g)、DIEA(0.78g，6mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(1.33g，6mmol)在30mL二氯甲烷中的混合物攪拌過夜。用飽和碳酸鈉水溶液中止反應(yīng)，過濾并除去不溶物。將粗產(chǎn)物萃取到二氯甲烷內(nèi)，用無水硫酸鈉干燥，蒸發(fā)并在高度真空下干燥。粗產(chǎn)物不用進一步純化直接用于下一步驟.
步驟H 向氨基酯粗產(chǎn)物(步驟G，方法A，中間體4)(6.85g，19.84mmol)、Et3N(5.6mL，39.68mmol)和DCM(50mL)的混合物中緩慢地加入TFAA(6.91mL，49.6mmol)。將該反應(yīng)于室溫攪拌1小時。將其用1N HCl和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，并真空濃縮。粗產(chǎn)物通過MPLC純化(20/80，EtOAc/己烷)，獲得了本標題化合物(3.7g，42.2％)。LC-MSC23H31F3NO4[M+H+]的計算值442.21，實測值442.3.
步驟I
將酰胺(步驟H，方法A，中間體2)(4.7g，10.7mmol)、10％Pd/C(500mg)和MeOH(50mL)的混合物在氫氣囊下攪拌2小時，然后經(jīng)由硅藻土過濾，并真空濃縮，獲得了目標酸(3.92g，99％).LC-MSC16H25F3NO4[M+H+]的計算值352.17，實測值352.15.
方法B步驟A 向Boc-氨基酸(步驟A，方法A，中間體4)(159g，0.7mol)在500mL DMF內(nèi)的機械攪拌著的溶液中加入固體碳酸鉀(138g，1.0mol)。將所得混合物攪拌20分鐘，一次性加入純凈的芐基溴(84mL，0.7mol)。觀察到放熱反應(yīng)。在室溫攪拌過夜后，將整個混合物倒入冰水混合物(1000mL)內(nèi)。將粗產(chǎn)物用乙酸乙酯(2×800mL)萃取。將合并的有機層用水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)，獲得了棕色油狀物。將該油狀物與4N HCl/二氧雜環(huán)己烷(350mL)混合，攪拌直至不再觀察到氣體釋放。加入乙醚(500mL)，通過過濾收集沉淀，用乙醚和己烷洗滌。獲得了鹽酸鹽形式的所需產(chǎn)物(164g，93％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)7.38(m，5H)，6.25(m，1H)，5.94(m，1H)，5.20(s，2H)，4.32(br s，1H)，3.80(br s，1H)，2.67(m，1H)，2.14(m，1H).
步驟B 向氨基酯HCl鹽(步驟A，方法B，中間體4)(38g，150mmol)、四氫-4-H-吡喃-4-酮(15g，150mmol)、DIEA(20.6g，160mmol)和分子篩(4，20g)在200mL二氯甲烷內(nèi)的混合物中以少量多次的方式加入三乙酰氧基硼氫化鈉(42.4g，200mmol)。加入完成后，將該混合物在室溫攪拌過夜，用飽和碳酸鈉水溶液中止反應(yīng)，經(jīng)由硅藻土過濾。將粗產(chǎn)物萃取到二氯甲烷(3×)內(nèi)，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。通過快速色譜法純化殘余物(NH4OH水溶液+MeOH/1∶9)/DCM(1∶9))。合并所需級份并蒸發(fā)。將殘余物與THF混合并蒸發(fā)，溶解在攪拌中，蒸發(fā)并真空干燥，獲得了淺棕色油狀物(38g，84％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)7.38(m，5H)，5.98(m，1H)，5.85(m，1H)，3.98(m，3H)，3.54(m，1H)，3.40(m，2H)，2.82(m，1H)，2.44(m，1H)，1.90(m，1H)，1.79(m，2H)，1.70(m，1H)，1.44(m，2H).
步驟C 在氮氣氛下，向含有二-(三甲基甲硅烷基)氨基鉀(30g，151mmol)的圓底燒瓶中加入500mL無水THF，在-78℃冷卻。用20分鐘加入氨基酯(步驟B，方法B，中間體4)(38g，126mmol)在100mL THF中的溶液。將干冰-丙酮浴替換為干冰-水(～-15℃)。將該混合物在-15℃攪拌1小時，再次冷卻至-78℃。加入異丙基碘的純凈溶液(65mL，378mmol)。將燒瓶置于-15℃浴內(nèi)。幾分鐘后，觀察到形成了大量白色沉淀。將該反應(yīng)混合物再攪拌1小時，倒入冰水混合物內(nèi)，用乙醚(3×)萃取。將乙醚層用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。將殘余物溶解在二氯甲烷中，再次用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)。把粗產(chǎn)物在二氯甲烷(200mL)中的溶液冷卻至0℃。向該溶液中滴加吡啶(33mL，400mmol)和三氟乙酸酐(27mL，190mmol)。1小時后，用水中止該反應(yīng)。分離出有機相，用2N鹽酸、水和鹽水洗滌。通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物(20％EtOAc/己烷)，獲得了淺棕色油狀物(41g，74％)。1H-NMR表明5∶1的順式/反式異構(gòu)體混合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)順式-異構(gòu)體6.06(m，1H)，5.68(m，1H)，反式5.92(m，0.2H)，5.79(m，0.2H).LC-MSC23H28F3NO4[M+H+]的計算值440，實測值440.
步驟D 將不飽和芐基酯(步驟C，方法B，中間體4)(41g)和10％Pd/C(2.0g)在乙酸乙酯(100mL)50psi氫氣下氫化過夜。通過經(jīng)由硅藻土墊過濾除去催化劑。將濾液蒸發(fā)，溶解在二氯甲烷中，蒸發(fā)并且真空干燥過夜。獲得了所需的酸，為樹膠狀白色固體(32.5g，100％)。LC-MSC16H24F3NO4[M+H+]的計算值352，實測值352.
中間體5 方法A步驟A 在16℃(水浴)，用60分鐘經(jīng)由插管向Bz2O(58.8g，259.8mmol)、DMAP(1.3g，10.8mmol)、THP酮(20mL，216.5mmol)在THF(600mL)中的溶液加入KHMDS(0.5M在甲苯中的溶液，520mL)。加入后，將懸浮液再攪拌1小時，然后真空濃縮至約200mL。然后用飽和NaHCO3水溶液(500mL)中止該反應(yīng)。將該混合物在己烷與水之間分配。分離出水層，用己烷(3×400mL)萃取。合并有機層，用無水Na2SO4干燥并濃縮。將所需產(chǎn)物1(21g，47％)從剩余油狀物中蒸餾出來(115-118℃，1.0mmHg)。H1NMR(500MHz，CDCl3)δ8.09(d，J＝15Hz，1H))，7.75-7.40(m，3H)，5.61(bs，1H)，4.30(bs，2H)，3.99(t，J＝11Hz，2H)，2.45(bs，2H).
步驟B 使用機械攪拌器，將得自步驟A的烯醇醚(12.34g，60.5mmol)、Bu4HSO4(820mg，2.42mmol)、CH3CN(750mL)、緩沖溶液(500mL0.05M Na2B4O7在4×10-4M Na2EDTA中)和D-Epoxone(4.7g，18.1mmol)的混合物在冰浴中攪拌。同時在冰浴中，使用兩個加液漏斗用1.5小時向該冰冷混合物中加入Oxone(52g，84.7mmol)在250mL4×10-4M Na2EDTA溶液和K2CO3(48.5g，350mmol)在水(250mL)中的溶液。加入后，將該混合物再攪拌0.5小時，然后在乙醚(1.5L)與H2O(1L)之間分配。分離出水層，進一步用乙醚(3×1L)萃取。合并有機相，用無水Na2SO4干燥，濃縮并通過快速色譜法純化(15％EtOAc/己烷)，獲得了所需的環(huán)氧化物2(6～7g，50～60％，80％ee)。某些原料可能與產(chǎn)物一起洗脫出來。手性HPLC分離(AD柱)后可除去該雜質(zhì)。Rf＝0.2(50％EtOAc/己烷).NMR(500MHz，CDCl3)H1δ8.05(d，J＝8Hz，1H)，7.65-7.20(m，3H)，4.05(dd，J＝13.7Hz，2.1Hz 1H)，3.94(d，J＝13.7Hz，1H)，3.62(m，2H)，3.45(d，J＝1.5Hz)，2.52(m，1H)，2.28(m，1H)；C13δ200.4，165.0，133.7，129.9，128.6，80.9，64.8，62.4，56.6，29.0.
步驟C 于室溫，向得自前一步驟的環(huán)氧化物(11g，100％ee，50mmol)在CH2Cl2(120mL)和無水甲醇(38mL)內(nèi)的溶液中加入CSA(580mg，2.5mmol)。4小時后，將該反應(yīng)用三乙胺(1.05mL)中止反應(yīng)，然后濃縮至油狀物。將該油狀物直接在MPLC上純化(50-60％EtOAc/己烷)，獲得了3(8g，99％)。H1NMR(500MHz，CDCl3)δ3.85-3.80(m，2H)，3.74-3.68(m，2H)，3.50(dt，J＝14，1.8Hz，1H)，3.29(s，3H)，3.28(s，3H)，2.0-1.95(m，1H)，1.85-1.78(m，1H).
步驟D 在冰浴內(nèi)，向NaH(2.37g of 95％，98.8mmol)在THF(200mL)內(nèi)的懸浮液中非常緩慢地加入得自步驟C的醇(8g，49.4mmol)在THF(30mL)中的溶液。當氣體釋放停止后，移去冰浴，加入MeI(9.2mL，98.8mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌過夜。TLC表明反應(yīng)完全。然后用濃鹽酸(2mL of 37％，～20mmol)處理該反應(yīng)直至PH～7。加入水(5mL)。再加入2mL濃鹽酸以使得PH～1。將該反應(yīng)再攪拌1小時，TLC表明該二甲基醚完全水解。把該溶液直接負載到大的硅膠柱上，用乙酸乙酯洗脫，獲得了所需的甲氧基酮5(5.5-6g，85％-90％)。
中間體6 步驟A 將(1S)-(+)-2-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(10.3g，94.4mmol)在乙酸乙酯(200mL)和10％Pd/C(0.5g)的混合物于室溫氫化。24小時后，將該混合物過濾并蒸發(fā)，獲得了10.4g(100％)粗產(chǎn)物。將其置于250mL甲醇中，加入HCl(12M，6mL)。將所得混合物在室溫攪拌直至反應(yīng)完全(72小時)。將溶劑蒸發(fā)，把粗產(chǎn)物在高度真空下干燥，獲得了本標題化合物，為灰白色固體(16.0g，96％)。1HNMR(500MHz，D2O)δ3.70(s，3H)，3.01(m，1H)，2.38(m，1H)，2.16-1.73(m，6H)。
步驟B To a suspension of the ester中間體from向得自步驟A的酯中間體(10.2g，56.8mmol)在無水二氯甲烷(200mL)內(nèi)的懸浮液中加入二苯甲酮亞胺(10.2g，56.8mmol)，將所得混合物于室溫攪拌24小時。將該反應(yīng)混合物過濾，將濾液蒸發(fā)。把剩余油狀物用乙醚(100mL)研制，過濾并蒸發(fā)。過濾出氯化銨沉淀，該操作重復(fù)再2次以保證產(chǎn)物不含氯化銨。將所得油狀物在真空下充分干燥，獲得了本標題化合物(18.03g，＞100％)，無需進一步純化。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.5-7.18(m，10H)，3.75(m，1H)，3.7(s，3H)，2.78(m，1H)，2.26-1.71(m，6H)。
步驟C 向火焰干燥的1000mL圓底燒瓶中加入400mL無水四氫呋喃，置于氮氣下并且使用丙酮/干冰浴冷卻至-78℃。通過注射器加入二異丙基胺(27.4mL，195mmol)。將所得溶液緩慢地用正丁基鋰(55mL，140mmol，2.5M在己烷中的溶液)處理。攪拌5分鐘后，通過注射器滴加在100mL四氫呋喃中的其制備描述在步驟B中的亞胺(40g，130mmol)，將所得混合物在-78℃攪拌2小時。然后通過注射器滴加2-碘-1，1，1-三氟乙烷(47mL，480mmol)，將所得混合物攪拌過夜，讓其緩慢地溫熱至室溫。用飽和氯化銨溶液(400mL)中止反應(yīng)，分離出有機層。用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水層，將有機萃取液合并，用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。粗產(chǎn)物不用進一步純化直接用于下一步驟。LC-MSC22H22F3NO2的計算值389.26，實測值[M+H+]390.4。
步驟D 向得自步驟C的產(chǎn)物(130mmol，假定100％轉(zhuǎn)化)在200mL四氫呋喃內(nèi)的溶液中加入200mL 2N鹽酸，將所得混合物于室溫攪拌過夜。將該溶液真空濃縮以除去大部分四氫呋喃，用二氯甲烷(300mL)稀釋。在劇烈攪拌下，通過緩慢地加入5N氫氧化鈉將水層的平衡調(diào)節(jié)至10。分離出有機層，用二氯甲烷(2×150mL)萃取水層。合并有機萃取液，用無水硫酸鈉干燥，并過濾。向濾液中加入二異丙基乙胺(22.7mL，130mmol)和二碳酸二叔丁酯(32.7g，150mmol)，將所得溶液在室溫攪拌過夜。用1N鹽酸洗滌該混合物，然后用飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。將有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)至干。通過MPLC純化(分幾批，每次運轉(zhuǎn)約5g)，獲得了5.87g(14％)所需的順式(R，S)異構(gòu)體和12.31g(29％)反式(S，S)異構(gòu)體以及5.22g(12％)兩種非對映體的1∶1混合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ(第一種所需異構(gòu)體)5.05 and 4.40(單峰，1H)，3.76(s，3H)，2.73(ddd，J＝11.0，12.8，14.8Hz，1H)，2.38(ddd，J＝10.7，12.8，15.0Hz，1H)2.32-2.26(m，1H)，2.21(br dd，J＝3.6，14.5Hz，1H)，2.18-2.11(m，1H)，2.02(dd，J＝8.8，14.4Hz，1H)，1.61(dd，J＝7.8，13.2Hz，1H)1.52(br s，10H).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ(第二種異構(gòu)體)4.52 and 4.06(單峰，1H)，3.72(s，3H)，2.72(dd，J＝7.1，13.5Hz，1H)，2.66(ddd，J＝10.6，12.8，15.0Hz，1H)，2.53(ddd，J＝11.0，12.8，14.9Hz，1H)2.26(app dd，J＝7.1，13.5Hz，1H)，2.18-2.07(m，1H)，1.78(dd，J＝8.6，13.5Hz，1H)，1.57-1.48(m，2H)1.46(s，9H)。
步驟E 向其制備描述在前一步驟中的順式(R，S)產(chǎn)物(4.0g，12mmol)在四氫呋喃/甲醇/水的1∶1∶1溶液(84mL)內(nèi)的混合物中加入固體LiOH(2.60g，62.0mmol)，將所得溶液在60℃攪拌18小時。讓該混合物冷卻至室溫，濃縮以除去有機溶劑。通過加入6N鹽酸將水層酸化(pH4-5)，用二氯甲烷(3×100mL)萃取產(chǎn)物。合并有機層，用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸發(fā)，獲得了中間體6(3.86g，99％)，為黃色油狀物。
步驟F 向其合成描述在前一步驟中的酸中間體(46mg，0.1475mmol)、中間體3(49mg，0.1475作為三氟乙酸鹽)、二異丙基乙胺(26μL，0.1475mmol)和催化量的二甲基氨基吡啶二氯甲烷(4mL)中的溶液用1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC，85mg，0.4425mmol)處理，在室溫攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋，用水(2×)萃取。將合并的水萃取液用DCM回洗，將有機萃取液合并，干燥(無水硫酸鈉)并真空除去溶劑。通過制備TLC純化粗產(chǎn)物(131mg)，獲得了18mg純產(chǎn)物。LC-MSC22H27F6N3O3[M+H-BOC]+的計算值412.19，實測值412.50。
步驟G
將得自前一步驟的BOC-中間體(18mg，0.0352mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液用三氟乙酸(1mL)處理，繼續(xù)在室溫攪拌4小時。真空除去溶劑，粗產(chǎn)物鹽不用進一步純化直接用于下面的還原胺化。LC-MSC22H27F6N3O3[M+H]+的計算值412.19，實測值412.10.
中間體7 該制備是用6批同時進行的，將這6批合并進行后處理將500mL火焰干燥的反應(yīng)燒瓶置于靜態(tài)氮氣氛下，加入150mL無水THF。通過注射器加入純凈的二異丙基胺(8.76mL，62.5mmol)，將該溶液冷卻至-78℃。通過注射器向該溶液中加入正丁基鋰(25mL，2.5M在己烷中的溶液，62.5mmol)，然后加入無水HMPA(8.70mL)，繼續(xù)冷攪拌15分鐘。然后通過注射器加入純凈的四氫-4H-吡喃-4-酮(5g，50mmol)，讓陰離子在-50℃形成2小時。加入甲基碘(12.45mL，200mmol)，讓該溶液溫熱至室溫并保持過夜。用飽和氯化銨溶液(50mL)中止該反應(yīng)，將所有6批反應(yīng)合并。將粗產(chǎn)物用乙醚(4×250mL)萃取。將合并的有機萃取液在Vigreaux柱上于常壓下濃縮。通過梯度色譜法純化殘余物，使用乙醚與戊烷的混合物洗脫(開始用10％乙醚，最后乙醚濃度是40％)。合并含有純產(chǎn)物的級份，再次使用Vigreaux蒸餾柱于常壓下除去溶劑。通過將該殘余物在常壓下蒸餾來獲得純產(chǎn)物(11.05g，33％)，沸點為169-171℃。
中間體8
步驟A 按照類似于文獻中描述的方法(Allergretti，M.，Berdini，V.，Cesta，M.C.，Curti，R.，Nicolini，L.，和Topai，A.，Tetrahedron Lett.，2001，42，(25)，4257-9)由3-甲基四氫吡喃-4-酮(中間體7)獲得3-甲基-4-氨基-四氫吡喃的順式-外消旋體。
步驟B 在氮氣氛下于室溫，將得自前一步驟的胺(1.54g，10.3mmol)和二異丙基乙胺(4.46mL，25.6mmol)在無水二氯甲烷中的溶液用純凈的芐氧羰基氯(1.61mL，11.3mmol)處理，將所得混合物于室溫攪拌2小時。將其用二氯甲烷稀釋，用10％檸檬酸水溶液萃取。將水相用二氯甲烷反萃取，將合并的有機萃取液用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。干燥(無水硫酸鎂)后，真空除去溶劑，通過柱色譜法純化(硅膠，乙酸乙酯∶己烷/2∶3)，獲得了1.8347g(72％)純產(chǎn)物。使用ChiralPakAD半制備柱，通過手性HPLC獲得各個對映體。通過將游離胺衍生化，然后進行NMR光譜測定以及單晶下-射線衍射分析表明，較快洗脫下來的異構(gòu)體(Tr＝13.0分鐘，己烷∶EtOH/93∶7，9mL/分鐘)的絕對構(gòu)型是(3R，4S)。1H NMR(500MHz，CDCl3)7.47(bm，5H)，5.12(bs，2H)，4.65(bd，J＝8.7Hz，1H)，3.98(dd，J＝11.44，3.43Hz，1H)，3.87(dd，J＝11.4，4.3Hz，1H)，3.45(m，2H)，3.08(t，J＝11.40Hz，1H)，1.95(d，J＝11.60Hz，1H)，1.50(m，2H)，0.90(d，J＝6.63Hz，3H)。
步驟C 將得自前一步驟的CBZ-保護的胺(284mg，1.14mmol)在乙醇(15mL)中的溶液使用133mg Pd/C(10％)于氣囊的常壓氫氣下氫化30分鐘。過濾出催化劑，將溶液真空濃縮，獲得了158mg(91％)所需產(chǎn)物。
中間體9 方法A步驟A 將(1R，4S)-1-氨基-4-芐氧基羰基-環(huán)戊-2-烯鹽酸鹽(8.94g，35.0mmol)(其制備描述在中間體4，步驟A-C下面)、酮中間體8(7.04g，69.91mmol)在50mL二氯乙烷中的溶液用粉碎的4分子篩(10g)、二異丙基乙胺(6.1 mL，35mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(29.5g，140mmol)處理，將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌36小時。加入二氯甲烷(300mL)，用飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)中止反應(yīng)。將水層用DCM再萃取3次，將合并的有機相干燥，過濾，并真空除去溶劑。該異構(gòu)體的粗制混合物(15.0711g)不用進一步純化直接用于下一反應(yīng)步驟。
步驟B 向火焰干燥的500mL反應(yīng)燒瓶中加入六甲基二硅氮烷鉀(9.07g，45.50mmol)，置于靜態(tài)氮氣氛下。通過套管加入四氫呋喃(300mL)，將該溶液冷卻至-78℃。然后通過注射器加入得自前一步驟的酯粗產(chǎn)物(15.07g)在四氫呋喃(20mL)中的溶液，繼續(xù)冷攪拌90分鐘。然后加入純凈的異丙基碘(10.48mL，105.0mmol)，繼續(xù)在-78℃攪拌30分鐘，然后讓其溫熱至-40℃。將該反應(yīng)混合物倒入飽和氯化銨溶液(200mL)內(nèi)，用二氯甲烷(4×150mL)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾，并真空除去溶劑，獲得了異構(gòu)體的粗制混合物。在這時不進行任何純化，將該混合物以所獲得的形式用于下一步驟。
步驟C 在0℃，將其制備描述在前一步驟中的胺(11.74g，max.32.9mmol)和二異丙基乙胺(28.6mL，164.2mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液用三氟乙酸酐(13.8mL，65.8mL)處理。移去冷卻浴，繼續(xù)攪拌2小時。用飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)中止該反應(yīng)，用二氯甲烷(4×100mL)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機萃取液干燥(無水硫酸鈉)并真空除去溶劑、粗產(chǎn)物通過梯度色譜法純化(0％-30％乙酸乙酯在己烷中的混合物)，獲得了9.93g(66％，三步)。在這些條件下，主要的環(huán)戊烷-順式-異構(gòu)體可以與次要的反式異構(gòu)體成功地分離開。該產(chǎn)物仍然是在四氫吡喃環(huán)上的異構(gòu)體的混合物。LC-MSC24H30F3NO4[M+H]+的計算值424.21，實測值454.10.
方法B步驟A 將(1R，4S)-4-叔丁氧基羰基氨基-環(huán)戊-2-烯甲酸(15.0g，66.0mmol)(其制備描述在中間體4，步驟A下面)、芐基溴(7.85g，66mmol)在DMF(30mL)中的溶液和碳酸鉀(13.7g，99mmol)于室溫劇烈攪拌2小時。將該反應(yīng)混合物用己烷(200mL)稀釋，用水(100mL)中止反應(yīng)。分離出有機相，萃取再重復(fù)3次。將合并的有機相干燥(無水硫酸鈉)并真空除去溶劑。通過梯度色譜法純化粗產(chǎn)物，使用乙酸乙酯和己烷的混合物作為洗脫劑。將乙酸乙酯的濃度從0％逐漸增加至最終的40％。這獲得了19.39g(93％)所需產(chǎn)物。LC-MSC18H23NO4[M+Na]+的計算值340.20，實測值340.10.1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.35 to 7.40(m，5H)，5.90(bs，2H)，5.16(s，2H)，3.54(dd，J＝8.7，4.4Hz，1H)，2.53(ddd，J＝14.0，8.5，8.5Hz，1H)，1.92(ddd，J＝14.0，4.1，4.1Hz，1H)，1.46(s，9H).13C NMR(500MHz，CDCl3)δ155.1，135.6，134.9，131.0，128.6，128.3，128.0，66.7，55.7，49.3，34.5，28.4。
步驟B 向火焰干燥的500mL燒瓶中加入六甲基二硅氮烷鋰(10.9g，65.18mmol)，置于靜態(tài)氮氣氛下。通過套管加入THF(40mL)，將該溶液冷卻至-78℃。然后通過注射器加入得自前一步驟的酯(9.40g，29.63mmol)在THF(20mL)中的溶液，讓陰離子形成30分鐘。然后通過注射器加入純凈的異丙基碘(3.55mL，35.56mmol)，將該反應(yīng)混合物在-40℃攪拌30分鐘，然后在-15℃攪拌3小時。用10％檸檬酸水溶液中止反應(yīng)，用乙醚(3×150mL)萃取產(chǎn)物。將合并的溶劑干燥(無水硫酸鈉)并真空除去溶劑。通過梯度色譜法純化粗產(chǎn)物，使用乙酸乙酯和己烷的混合物作為洗脫劑。在純化期間，乙酸乙酯的濃度從0％逐漸增加至35％。以該方式獲得了4.1211g(39％)純的順式異構(gòu)體。LC-MSC21H29NO4[M+Na]+的計算值382.21，實測值382.25.1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.36(bm，5H)，5.80(m，2H)，5.13(ABq，J＝12.3Hz，2H)，2.30(m，2H)，2.03(m，1H)，1.46(s，9H)，0.83(d，J＝6.6Hz，3H)，0.8(d，J＝6.6，3H).
步驟C 將得自前一步驟的BOC-保護的胺中間體(4.66g，13.0mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液用三氟乙酸(2.0mL)處理，在室溫攪拌6小時。真空除去溶劑，所獲得的胺—三氟乙酰胺(6.1g)不用進一步純化直接用于隨后的步驟。LC-MSC16H21NO2[M+H]+的計算值260.16，實測值260.15.
步驟D 將得自前一步驟的胺(6.12g，12.96mmol)、中間體7(2.76g，24.18mmol)、二異丙基乙胺(2.26mL，12.96mmol)、粉碎的4分子篩(5.0g)和三乙酰氧基硼氫化鈉(8.25g，38.88mmol)在二氯甲烷(40mL)中的混合物于室溫攪拌過夜。將其倒入飽和碳酸氫鈉溶液內(nèi)，用二氯甲烷萃取粗產(chǎn)物。將合并的萃取液用無水硫酸鈉干燥，過濾，并真空除去溶劑，獲得了4.66g(100％，2步)異構(gòu)體混合物形式的所需產(chǎn)物。其不用進一步純化直接用于隨后的步驟。LC-MSC22H31NO3[M+H]+的計算值358.23，實測值358.25.
步驟E 將其制備描述在前一步驟中的胺(2.51g，7.04mmol)和二異丙基乙胺(6.13mL，35.21mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液冷卻至0℃，用三氟乙酸酐(1.98mL，14.08mmol)處理。將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌30分鐘，用10％檸檬酸水溶液(50mL)中止反應(yīng)。用二氯甲烷萃取產(chǎn)物，將合并的有機萃取液用無水硫酸鈉干燥，并真空除去溶劑。將該粗產(chǎn)物(3.81g)通過梯度色譜法進一步純化(乙酸乙酯-己烷s，0 to 50％ of乙酸乙酯)，獲得了2.49g(78％)所需產(chǎn)物，為四氫吡喃衍生的異構(gòu)體的混合物。LC-MSC24H30F3NO4[M+H]+的計算值424.21，實測值454.10.
中間體10 具有所指定的絕對立體化學的單獨異構(gòu)體，中間體10是使用ChiralPak AD半制備柱通過色譜分離而由中間體9獲得的，是作為較快洗脫下來的主要異構(gòu)體分離出來。洗脫劑由己烷與乙醇的比例為4∶1的混合物組成，采用的流速為9mL/分鐘。在類似分析柱上(流速為1.0mL/分鐘)的保留時間為8.58分鐘。NMR(500MHz，CDCl3)δ7.38bs，5H，6.01(dd，J＝5.5，2.1Hz，1H)，5.76，bs 1H，5.21s，2H，5.0s，1H，3.85(d，J＝8.7Hz，1H)，3.60(d，J＝11.2Hz，1H)，2.30(m，3H)，1.74bs，1H)，1.20m，5H，0.84m，6H.
中間體11 中間體11是使用分離中間體10所述的條件，從異構(gòu)體混合物(該異構(gòu)體混合物的制備描述在中間體9下面)獲得的，是作為較慢洗脫下來的主要異構(gòu)體分離出來。該異構(gòu)體在分析ChiralPak AD柱上的保留時間為9.55分鐘，保持1.0mL/分鐘的流速。
中間體12 將芐基酯中間體9(9.93g，21.89mmol)在乙醇(100mL)中的溶液和披鈀炭(520mg，10％)一起在帕爾搖動器上于50psi氫化4小時。過濾出催化劑，真空除去溶劑，獲得了所需產(chǎn)物(8.21g，定量)，為在四氫吡喃環(huán)上的異構(gòu)體混合物。LC-MSC17H26F3NO4[M+H]+的計算值366.18，實測值366.20.
中間體13
方法A 將中間體10(650mg，1.43mmol)在乙醇中的溶液(50mL)在帕爾搖動器上于Pd/C(10％，200mg)存在下在50psi壓力下氫化4小時。過濾出催化劑，并將溶劑蒸發(fā)至干，獲得了白色固體(512mg，98％)。LC-MSC17H27F3NO4[M+H]+的計算值366.18，實測值366.05.
方法B步驟A 將(1R，4S)-4-氨基-環(huán)戊-2-烯甲酸(130g，1.0mol)、水(250mL)、碳酸氫鈉(170g，2.0mol)和四氫呋喃(750mL)的混合物攪拌30分鐘，然后加入二碳酸二叔丁酯(230g，1.05mol)。將該混合物攪拌一個周末，過濾以除去不溶物，蒸發(fā)以除去四氫呋喃，并冷卻至0℃。向該殘余物中加入2N鹽酸直至pH達到3(～500mL)。通過過濾收集使得沉淀，用水洗滌，并真空干燥過夜。獲得了所需的酸，為白色固體(230g，100％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ5.95(m，1H)，5.79(m，1H)，4.80(br s，1H)，3.45(m，1H)，2.50(m，1H)，1.79(m，1H)，1.44(s，9H).
步驟B 將在500mL甲醇中的步驟A中制備的酸(230g，1.0mol)和10％Pd/C(5.0g)放置在帕爾裝置上，于50psi氫氣下氫化1小時。通過過濾除去催化劑，將濾液蒸發(fā)。把殘余物溶解在二氯甲烷中，用無水硫酸鈉干燥。過濾后，將濾液蒸發(fā)，真空干燥。獲得了本標題化合物，為淺黃色固體(230g，99％)。LC-MSC11H19NO4的計算值229，實測值[M+H]+230.
步驟C 向在步驟B中制得的酸、中間體9(230g，1.00mol)在500mL N，N-二甲基甲酰胺內(nèi)的機械攪拌著的溶液中加入固體碳酸鉀(210g，1.5mol)。將使得混合物攪拌20分鐘，一次性加入純凈的芐基溴(120mL，1.0mol)。觀察到放熱反應(yīng)，在室溫攪拌3小時后，將整個混合物倒入冰水混合物(1000mL)內(nèi)。用乙醚(2×800mL)萃取粗產(chǎn)物。將合并的乙醚層用水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)，獲得了黃色固體。將該固體與4N HCl在二氧雜環(huán)己烷中的溶液(400mL)混合，攪拌過夜，并濃縮。通過過濾收集使得固體，用乙醚洗滌并真空干燥。獲得了本標題產(chǎn)物，為鹽酸鹽(140g，55％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ5.15(s，2H)，3.65(m，1H)，3.02(q，J＝8Hz，1H)，2.50(m，1H)，2.15(m，1H)，2.05(m，2H)，1.90(m，1H)，1.75(m，1H).
步驟D 將在步驟C中制得的氨基芐基酯HCl鹽(130g，0.50mol)懸浮在500mL二氯甲烷中。加入二苯甲酮亞胺(91g，0.50mol)。將使得混合物攪拌過夜，過濾以除去無機鹽。將濾液用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)。將殘余物溶解在200mL甲苯中，并蒸發(fā)。該操作再重復(fù)一次。獲得了本標題化合物(178g)，為棕色油狀物，其不用進一步純化直接用于下一步驟。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.80(m，1H)，1.95(m，2H)，2.15(m，2H)，2.50(m，1H)，2.89(m，1H)，3.61(m，1H)，5.20(s，2H)，7.18(d，2H)，7.38(m，8H)，7.47(m，3H)，7.64(d，2H).
步驟E 在氮氣下，將在300mL四氫呋喃中的得自步驟D的席夫堿芐基酯(76.6g，200mmol)冷卻至-78℃。在攪拌下用20分鐘加入二異丙基氨基鋰(2.0M，110mL，220mmol)在庚烷中的溶液。將該混合物在-78℃攪拌30分鐘，然后加入68mL異丙基碘(440mmol)在50mL四氫呋喃中的溶液，讓該混合物攪拌30分鐘。通過移去冷卻浴將該反應(yīng)混合物升至0℃。攪拌2小時后，將整個混合物蒸發(fā)以除去四氫呋喃。把殘余物溶解在乙醚(1000mL)中，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)。將該粗產(chǎn)物溶解在500mL四氫呋喃中，與400mL 1N鹽酸混合，攪拌1小時，并在50℃蒸發(fā)以除去四氫呋喃。將該水溶液用己烷(3×)萃取，用飽和碳酸鈉水溶液堿化(pH＞9)，用二碳酸二叔丁酯(53g)在500mL二氯甲烷中的溶液處理。將所得反應(yīng)混合物攪拌30分鐘。分離出有機相，用二氯甲烷(3×)萃取水相。將合并的有機相用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)。通過快速色譜法純化殘余物(硅膠，10％乙酸乙酯/己烷)，獲得了本標題化合物的混合物，為順式和反式異構(gòu)體的混合物(～1∶1，24g)。通過MPLC進一步純化(8％乙酸乙酯/己烷)，獲得了所需的單獨順式異構(gòu)體(較快洗脫下來的，7.3g)和不希望的反式異構(gòu)體(較慢洗脫下來的)。ESI-MSC21H31NO4的計算值361；實測值[M+H]+362.1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.36(m，5H)，5.14(s，2H)，4.77(m，1H)，4.01(d，J＝5.0Hz，1H)，2.17(m，1H)，1.99-1.53(m，5H)，1.42(m，9H)，0.85(d，J＝7.0Hz，6H)。
步驟F
于室溫，將在二氯甲烷(100mL)中的BOC-保護的胺(15.73g，43.52mmol)用三氟乙酸(25mL)處理，在室溫攪拌2小時。真空除去溶劑，將殘余物再與甲苯共蒸餾2次。減壓除去溶劑，獲得了純的鹽酸鹽形式的所需的胺。
步驟G 將其制備描述在前一步驟中的胺鹽酸鹽(1.82g，6.11mmol)、酮中間體7(697mg，6.11mmol)、粉碎的4分子篩(3.2g)、二異丙基乙胺(1.0mL，6.11mmol)在無水二氯甲烷中的溶液用三乙酰氧基硼氫化鈉(3.9g，18.33mmol)處理，在室溫攪拌過夜。通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)來中止反應(yīng)，用二氯甲烷(4×100mL)萃取。將合并的有機萃取液用鹽水回洗，用無水硫酸鈉干燥并真空除去溶劑。獲得了2.54g粗產(chǎn)物，其不用另外的純化直接用于下一反應(yīng)步驟。ESI-MSC22H33NO3的計算值359.25；實測值[M+H]+360.25.
步驟H 將粗產(chǎn)物(2.54g)溶解在無水二氯甲烷(40mL)中，加入二異丙基乙胺(3.7mL，21.21mmol)，將該混合物冷卻至0℃。向該冷溶液中加入純凈的三氟乙酸酐(1.20mL，8.49mmol)，將該反應(yīng)混合物冷攪拌30分鐘。將其倒入1N鹽酸內(nèi)，分離出有機層，將水層用二氯甲烷再萃取3次。將合并的有機萃取液干燥并真空除去溶劑。通過小心地進行梯度快速硅膠色譜，使用乙酸乙酯和己烷的混合物，其中乙酸乙酯的濃度從開始時的0％逐漸增加至洗脫結(jié)束時的40％，來獲得具有所需覺得立體化學的特定對映體。在這些條件下，首先洗脫下來所需的順式異構(gòu)體(910mg)。
步驟I 將其制備描述在前一步驟中的芐基酯中間體(3.20g，8.90mmol)和披鈀炭(520mg，10％)在乙醇(250mL)中的溶液于常壓下氫化2小時。過濾出催化劑，并真空除去溶劑。獲得了2.27g(70％)所需的酸。
中間體14步驟A 方法A將3-氧代-環(huán)戊烷甲酸(Stetter，H.，Kuhlmann，H.Liebigs Ann.Chem.，1979，7，944-9)(5.72g，44.6mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液用N，N’-二異丙基-O-叔丁基-異脲(21.2mL，89.3mmol)處理，將該反應(yīng)混合物于室溫攪拌過夜。過濾出沉淀的N，N’-二異丙基脲，將濾液真空濃縮，通過蒸餾來純化殘余物(bp125-129℃@18mmHg)，獲得了4.74g(58％)純產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ3.02(p，J＝7.8Hz，1H)，2.05-2.50(m，6H)，1.45(s，9H).13CNMR(125MHz，CDCl3)δ217.00，173.47，80.99，41.88，41.14，27.94，26.57。
方法B向2L RBF內(nèi)加入無水硫酸鎂(113g，940mmol)和二氯甲烷(940mL)。在攪拌下，將該懸浮液用濃硫酸(12.5mL，235mmol)處理，然后用15分鐘加入3-氧代-環(huán)戊烷甲酸(30.1g，235mmol)。攪拌15分鐘后，加入叔丁醇(87g，1.2mol)。用塞子將該反應(yīng)容器密封，以幫助保留異丁烯，在室溫攪拌72小時。經(jīng)由硅藻土塞過濾出固體，把濾液的體積降至約500mL，用飽和碳酸氫鈉溶液(2×150mL)洗滌。將有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾，并通過減壓蒸餾(180mmHg)除去溶劑。通過蒸餾來純化粗產(chǎn)物，獲得了39.12g(90％)純產(chǎn)物。
步驟B 在對甲苯磺酸(400mg)存在下，將3-氧代環(huán)戊烷甲酸叔丁酯(11.54g，62.64mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液用原甲酸三甲酯(41.4mL，251mmol)處理，在室溫攪拌48小時。將該深色反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉溶液內(nèi)，用二氯甲烷萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機萃取液用無水硫酸鎂干燥，真空除去溶劑，通過蒸餾來純化粗產(chǎn)物(bp.104℃@4mmHg)，獲得了12.32g(85％)所需產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ3.21(s，3H)，3.20(s，3H)，2.80(m，1H)，2.10 to 1.80(bm，6H)，1.46(s，9H).13C NMR(125MHz，CDCl3)δ174.9，111.2，80.3，67.8，49.2，42.5，37.4，33.8，28.3，22.0.
步驟C 向火焰干燥的500mL園底燒瓶中加入100mL無水THF，置于氮氣下，使用丙酮/干冰浴冷卻至-78℃。通過注射器向冷卻的溶劑中加入二異丙基胺(7.9mL，56mmol)，然后緩慢地加入2.5M正丁基鋰在己烷中的溶液(22.6mL，56.45mmol)。攪拌5分鐘后，通過注射器滴加在50mL THF中的縮醛(描述在步驟B中，中間體6，10.0g，43.4mmol)，將所得混合物在-78℃攪拌2小時。然后通過注射器滴加乙醛(7.3mL，130mmol)，將所得混合物在-78℃攪拌2小時。通過將該混合物倒入10％檸檬酸溶液(300mL)來中止該反應(yīng)，然后用二氯甲烷(2×150mL)萃取。合并有機層，用無水硫酸鎂干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)。在反應(yīng)或后處理期間有某些縮醛水解為酮，因此，粗產(chǎn)物混合物不用純化直接用于下一步驟。
步驟D 將中間體粗產(chǎn)物(描述在步驟C中，中間體6，56.45mmol，假定步驟C是100％轉(zhuǎn)化)用10％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液處理，將所得混合物在室溫攪拌過夜。將該反應(yīng)真空濃縮，然后用水稀釋，用二氯甲烷萃取。合并有機層，用無水硫酸鎂干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)，獲得了8.04g(83％)粗產(chǎn)物，其不用純化直接使用。
步驟E 將得自前一步驟的醇(2.86g，12.529mmol)、苯甲酸(1.54g，13.782mmol)、DMAP(300mg)在二氯甲烷(50mL)中的溶液用EDC處理，將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。用水(50mL)中止反應(yīng)，把粗產(chǎn)物萃取到二氯甲烷(4×50mL)內(nèi)。將合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾，并真空除去溶劑(4.92g)。各赤型和蘇型非對映體對可易于使用梯度柱色譜法分離開，使用乙酸乙酯和己烷的混合物作為洗脫劑。將乙酸乙酯的濃度從開始分離時的0％增加到結(jié)束時的50％。以該方式，可獲得1.309g(32％)較高洗脫下來的和1.322g較低洗脫下來的非對映體對。使用半制備手性柱色譜將較低洗脫下來的非對映體對進一步分離成其成分Chiralcel OD，己烷+乙醇(98∶2)，流速9.0mL/分鐘。在這些條件下，活性異構(gòu)體第二個被洗脫下來，獲得了518mg純產(chǎn)物。其在類似分析條件(1.0mL/分鐘流速)的保留時間第一個異構(gòu)體以10.01分鐘的保留時間被洗脫下來，而所需的第二個異構(gòu)體以11.39分鐘的保留時間被洗脫下來。LC-MSC19H24O5[M+H+Na]+的計算值355.15，實測值355.10.
步驟F 將得自前一步驟的酮(500mg，1.5043mmol)、中間體8(228mg鹽酸鹽，1.5043mmol)、粉碎的4分子篩(2.5g)、二異丙基乙胺(263μL，1.5043mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氫化鈉(956mg，4.51mmol)處理，在室溫攪拌72小時。然后將該反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)內(nèi)，用二氯甲烷(4×50mL)萃取產(chǎn)物。將合并的有機相干燥(無水硫酸鎂)，過濾，并真空除去溶劑。將殘余物(590mg)通過制備TLC純化(二氯甲烷+甲醇+氫氧化銨/90+9+1)，獲得了538mg所需產(chǎn)物，為環(huán)戊烷衍生的順式和反式異構(gòu)體的混合物。該混合物不用進一步純化直接用于下一步驟。LC-MSC25H37NO5[M+H]+的計算值432.27，實測值432.20.
步驟G
將得自前一步驟的胺(478mg，1.1mmol)、三乙胺(460mg，3.3mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液冷卻至0℃，在攪拌下通過注射器加入三氟乙酸酐(253μL，1.66mmol)。繼續(xù)在0℃攪拌30分鐘，通過倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL)來中止反應(yīng)。用二氯甲烷萃取產(chǎn)物(4×30mL)，將合并的有機萃取液干燥(無水硫酸鎂)，減壓除去溶劑。將殘余物(676mg)通過梯度色譜法純化(乙酸乙酯∶己烷/0-60％乙酸乙酯)，獲得了460mg所需產(chǎn)物，為環(huán)戊烷衍生的順式和反式異構(gòu)體的混合物。順式異構(gòu)體是通過半制備手性色譜法，使用Chiralcel OD柱，并且使用己烷和乙醇(98∶2)的混合物作為洗脫劑獲得的。在這些條件下，反式異構(gòu)體是首先洗脫下來的(在分析柱上的保留時間是6.36分鐘，流速1.0mL/分鐘)(38％)，順式異構(gòu)體是第二個洗脫下來，分析保留時間是9.34分鐘(68％)。該分離獲得了240mg單獨異構(gòu)體形式的所需產(chǎn)物。LC-MSC23H28F3NO6[M+H-tBuO-]+的計算值454.18，實測值432.454.10.
步驟H 將得自前一步驟的酯(159mg，0.3016mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液用三氟乙酸(2mL)處理，在室溫攪拌90分鐘。真空除去溶劑，粗產(chǎn)物不用進一步純化直接用于隨后的步驟。LC-MSC23H28F3NO6[M-OH]+的計算值454.18，實測值432.454.10.
中間體15
步驟A 在20℃于氮氣下，將固體氨基環(huán)戊烯甲酯鹽(1.076kg，6.059mol)溶解在MeOH(3L，2M)中。加入二異丙基乙胺(DIEA，0.78kg，6.059mol)，然后加入丙酮基丙酮(0.711kg，6.241mol)。該混合物具有放熱，使得溫度增加至32-35℃。然后將該反應(yīng)混合物在25℃老化16天。將該混合物用IPAc(9-10L)稀釋，用10％NH4Cl(2×3L)和5％鹽水(2×3L)洗滌。將該IPAc混合物用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至油狀物。使用THF(3L)作為沖洗液，再次濃縮至油狀物。將該空氣敏感的吡咯-保護的氨基環(huán)戊烯甲酸酯(1189g，92％產(chǎn)率)在氮氣下于5-7℃貯存直至用于烷基化步驟。
步驟B 在-20℃，用40分鐘將溶解在THF(1.2L)中的吡咯甲基酯(1189g)滴加到1M六甲基二硅氮烷鋰(LHMDS)在THF(8.65L，8.650mol)內(nèi)的溶液中。將該反應(yīng)混合物老化30分鐘，用1小時加入2-碘丙烷。將該反應(yīng)混合物老化1小時，然后用2小時讓其溫熱至20℃，在20℃老化直至通過HPLC表明反應(yīng)完全(＜0.5％原料)。將該反應(yīng)混合物倒入6％NH4Cl溶液(10L)內(nèi)。加入IPAc(20L)，分離各層。將有機層用6％NH4Cl水溶液(10L)、5％鹽水(2×10L)洗滌，濃縮至油狀物。將該空氣敏感的烷基化吡咯甲基酯(1419g，98％產(chǎn)率)在氮氣下于5-7℃貯存直至進行皂化。
步驟C
將烷基化吡咯甲基酯(1.38kg，5.197mol)溶解在MeOH(7.7L)中。加入DI水(2.5L)，然后加入10N NaOH(2.08L，20.786mol)。將該反應(yīng)混合物在65℃加熱16小時。將該混合物冷卻至10℃。通過用濃鹽酸將pH調(diào)節(jié)至4.5來將產(chǎn)物結(jié)晶。將該漿液老化1小時，向該混合物中加入DI水(15L)。將該漿液在20-25℃老化18小時。過濾該固體，用10％MeOH/DI水洗滌，在真空烘箱中干燥(40-50℃，25-26”Hg)，獲得了烷基化吡咯環(huán)戊烯酸(1223g，95％產(chǎn)率)。
步驟D 將得自前一步驟的酸(1.50g，6.05mmol)、二異丙基乙胺(2.11mL，12.1mmol)在THF(20mL)中的溶液冷卻至0℃，在攪拌下加入純凈的甲磺酰氯(468μL，6.05mmol)。移去該冷卻浴，在室溫繼續(xù)攪拌45分鐘。將反應(yīng)混合物的少量樣本用甲醇中止反應(yīng)，然后進行HPLC分析，證實完全轉(zhuǎn)化成甲基酯。LC-MSC16H23NO2[M+H]+(甲基酯)的計算值262.17，實測值262.10。該混合酸酐的溶液不用進一步延遲直接用于酰胺形成步驟。
步驟E 將中間體3(鹽酸鹽，1.54g，6.05mmol)和二異丙基乙胺(2.11mL，12.10mmol)在四氫呋喃(10mL)中的溶液冷卻至0℃，通過注射器加入得自前一步驟的混合酸酐溶液。移去冷卻浴，繼續(xù)在室溫攪拌1小時。這時通過上述甲醇處理不能檢測到任何活性混合酸酐，并且觀察到出現(xiàn)了與所需產(chǎn)物相對應(yīng)的新峰。加入水(50mL)，用二氯甲烷(4×50mL)萃取產(chǎn)物。將合并的有機萃取液干燥，并真空除去溶劑。將粗產(chǎn)物(3.76g)通過梯度色譜法進一步純化(硅膠，乙酸乙酯/己烷，0％-100％的乙酸乙酯)，獲得了2.51g(93％)所需產(chǎn)物。LC-MSC24H28N3O2[M+H]+的計算值448.21，實測值448.20。1H NMR(500MHz，CDCl3)6.80(s，1H)，6.26(s，1H)，6.20(dd，J＝5.7，2.5Hz，1H)，6.02(dd，J＝6.0，2.1Hz，1H)，5.75(s，2H)，5.31(m，1H)，4.81(bs，1H)，4.65(bs，1H)，4.24(m，2H)，4.13(m，2H)，3.93(m，2H)，2.68(dd，J＝13.5，8.7Hz，1H)，2.20(bm，7H)，2.05(s，1H)，1.28()m，1H)，0.96(d，J＝6.64，3H)，0.94(d，J 6.9Hz，3H).
步驟F 將得自前一步驟的吡咯(2.51g，5.61mmol)在乙醇(80mL)中的溶液用羥基胺鹽酸鹽(7.8g，112.2mmol)處理，然后加入氫氧化鈉水溶液(11.2mL，5N，水溶液)，將該反應(yīng)混合物在輕微回流條件下攪拌過夜。真空除去溶劑，將殘余物置于50mL碳酸氫鈉水溶液內(nèi)，用氯仿與異丙醇的混合物(85∶15，6×100mL)萃取產(chǎn)物。將合并的萃取液干燥，減壓除去溶劑。該產(chǎn)物不用進一步純化直接用于隨后的還原胺化步驟。
實施例1
步驟A 將酸中間體4(289mg，0.8225mmol)在無水二氯甲烷(6mL)中的溶液冷卻至0℃，通過注射器加入純凈的草酰氯(215μL，2.47mmol)，然后加入3滴無水DMF。移去冷卻浴，將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。真空除去溶劑，將殘余物使用kugelrohr裝置蒸餾(250℃@0.01mmHg)，獲得了303mg(100％)不穩(wěn)定的氯化物，其不用任何延遲直接在下一反應(yīng)步驟中反應(yīng)。用甲醇處理后分析樣本LC-MSC17H26F3NO4(甲基酯)[M+H]+的計算值365.18，實測值366.20.
步驟B 將中間體3的鹽酸鹽(142mg，0.5561mmol)在無水二氯甲烷(8mL)中的懸浮液用二異丙基乙胺(773μL，4.44mmol)處理，冷卻至0℃。在攪拌下，通過注射器加入其合成描述在步驟A中的酰氯(302mg，0.8166mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液。將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌30分鐘，用二氯甲烷(50mL)稀釋，倒入飽和碳酸氫鈉水溶液內(nèi)。分離出有機層，用含有10％檸檬酸和3％L-抗壞血酸的溶液洗滌。將有機相干燥，真空除去溶劑，獲得了具有令人滿意純度的所需產(chǎn)物(302mg，100％)。LC-MSC25H31F6N3O4[M+H]+的計算值551.22，實測值366.20.
步驟C
將得自前一步驟的酰胺(150mg，0.278mmol)在乙醇(12mL)中的溶液用硼氫化鈉(210mg，5.56mmol)在2個小時的時間內(nèi)分幾批處理。將溶劑蒸發(fā)至干，用飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)處理殘余物，用氯仿萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機相用無水硫酸鈉干燥，真空除去溶劑，將殘余物(135.6mg)通過制備TLC純化，使用乙酸乙酯、乙醇和氫氧化銨(90∶8∶2)的混合物作為洗脫劑，獲得了純的所需產(chǎn)物(60.4mg 47％)。LC-MSC23H32F3N3O3[M+H]+的計算值456.24，實測值456.20.
實施例2 將中間體6(28mg，0.0352mmol)、四氫吡喃-4-酮(10.6mg，0.106mmol)、二異丙基乙胺(6.1μL)在4mL二氯甲烷中的溶液用粉碎的4分子篩(170mg)和三乙酰氧基硼氫化鈉(37mg，0.176mmol)處理，在室溫攪拌過夜。用飽和碳酸氫鈉中止該反應(yīng)，用二氯甲烷萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機萃取液用無水硫酸鈉干燥，過濾并真空除去溶劑。將剩余粗產(chǎn)物(47.5mg)通過制備TLC進一步純化，使用乙酸乙酯/乙醇/氫氧化銨(90∶8∶2)的混合物作為洗脫劑。以該方式獲得了22mg純產(chǎn)物。LC-MSC22H27F6N3O3[M+H]+的計算值496.20，實測值496.10。
實施例3
由中間體6(85mg，0.1171mmol)和外消旋形式的中間體5(91mg，0.6992)開始，按照類似于制備實施例2所述的方法，制得了在本實施例下面描述的最終化合物。LC-MSC23H29F6N3O4[M+H]+的計算值526.21，實測值526.30。兩種順式-THP非對映體是使用ChiralcelOD半制備手性柱分離的，使用己烷/乙醇(85∶15)混合物，流速為9mL/分鐘。
實施例4 方法A步驟A 將酸中間體12(757mg，2.17mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液冷卻至0℃，用草酰氯(568μL，6.52)處理，然后加入3滴DMF。移去冷卻浴，將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時，然后用甲醇中止反應(yīng)，HPLC分析證實了酸全部轉(zhuǎn)化成了酰氯。真空除去反應(yīng)溶劑，將殘余物進行Kugelrohr蒸餾(250℃，0.1mmHg)，獲得了純的酰氯(730mg，87％)。LC-MSC18H28F3NO4[M+H]+(甲基酯)的計算值380.20，實測值380.15.
步驟B 在0℃，將胺中間體3(248mg，0.974mmol鹽酸鹽)和二異丙基乙胺(678μL，3.896mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用得自前一步驟的酰氯(448mg，1.169mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液處理。移去冷卻浴，將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。碳酸氫鈉(飽和水溶液，40mL)中止反應(yīng)，用二氯甲烷萃取粗產(chǎn)物(654mg)。通過制備TLC純化，使用乙酸乙酯和己烷(1∶1)的混合物作為洗脫劑，獲得了309mg(47％)所需產(chǎn)物，為四氫吡喃環(huán)衍生的異構(gòu)體的混合物。LC-MSC26H33F6N3O4[M+H]+的計算值566.24，實測值566.20.
步驟C 將得自前一步驟的三氟乙酰胺中間體(310mg，0.5484mmol)在乙醇(15mL)中的溶液用硼氫化鈉(207mg，5.48mmol)分幾批處理。用飽和碳酸氫鈉水溶液中止反應(yīng)，用氯仿萃取產(chǎn)物。將合并的有機萃取液干燥(無水硫酸鈉)，真空除去溶劑，獲得了粗產(chǎn)物(246mg)，該粗產(chǎn)物含有兩種主要的四氫吡喃-順式-異構(gòu)體以及各種部分飽和的六氫異喹啉酮的混合物。
步驟D
The respective isomers were separated using a使用Chiralpak AD半制備手性柱分離各個異構(gòu)體，用己烷和乙醇(85∶15)的混合物作為洗脫劑，流速為9.0mL/分鐘。獲得了本標題化合物，為較快洗脫下來的異構(gòu)體(Tr＝10.70分鐘，m＝24.4mg).LC-MSC24H34F3N3O3[M+H]+的計算值470.26，實測值470.15.
方法B步驟A步驟B 將酸中間體13(120mg，0.328mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液于氮氣的惰性氣氛下冷卻至0℃，通過注射器加入草酰氯(85μL，0.9852mmol)，然后加入3滴DMF。移去冷卻浴，將該反應(yīng)混合物攪拌3小時。真空除去溶劑，通過如本實施例方法A步驟A中所述的Kugelrohr蒸餾進一步純化酰氯粗產(chǎn)物，獲得了170mg所需的酰氯。所得酰氯立即使用。
步驟C 將中間體3(鹽酸鹽形式，84mg，0.328mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液用二異丙基乙胺(285μL，1.64mmol)處理，向該溶液中加入其制備描述在前一步驟中的酰氯溶液。將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜，然后通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)來中止反應(yīng)。用二氯甲烷(3×30mL)萃取粗產(chǎn)物，將合并的有機萃取液濃縮(212mg)，通過制備TLC純化(100％乙酸乙酯作為洗脫劑)，獲得了70mg(37％)純產(chǎn)物。LC-MSC26H33F6N3O4[M+H]+的計算值566.24，實測值566.22.1H NMR(500MHz，CDCl3)6.79(s，1H)，6.25(s，1H)，4.73(m，2H)，4.20，(m，2H)，3.91(m，3H)，3.71(dd，(J＝11.4，3.0Hz，1H)，3.50(dd，J＝11.4，2.5Hz，1)，3.42(dt，J＝11.0，3.0Hz，1H)，3.09(bs，1H)，2.90(bs，1H)，2.54(bs，1H)，2.1(m，1H)，1.92(bm，4H)，1.60(m，3H)，1.0(d，J＝6.9H，3H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.86(d，J＝6.6Hz，3H)。
步驟D 將得自前一步驟的三氟乙酰胺(70mg，0.1238mmol)在乙醇(6mL)中的溶液用硼氫化鈉(46mg，1.24mmol)在3小時期間內(nèi)分幾批處理。真空除去溶劑，把殘余物置于飽和碳酸氫鈉水溶液內(nèi)，用二氯甲烷萃取幾次。將合并的有機萃取液干燥(無水硫酸鈉)，過濾，并真空濃縮。把殘余物(47mg)通過制備TLC純化(DCM+(MeOH+NH4OH/9∶1)/9∶1)，獲得了31.3mg(54％)純產(chǎn)物。其光譜和色譜特性與本實施例方法A步驟C中描述的較快洗脫下來的異構(gòu)體相同。
方法C步驟A
將中間體13(487mg，1.33mmol)和二異丙基乙胺(923μL，2.66mmol)在無水THF中的溶液冷卻至0℃，通過注射器加入純凈的甲烷磺酰氯。通過定期對反應(yīng)混合物取樣并且比較起始酸與通過最小處理所產(chǎn)生的甲基酯的峰強度來監(jiān)測反應(yīng)進程。在室溫1小時后，酸酐的形成完全。該中間體不用任何進一步的后處理或純化、不用任何不必要的延遲而用于下面的步驟。
步驟B 向其制備描述在前一步驟中的中間體酸酐的溶液中加入含有二異丙基乙胺(923μL，2.66mmol)的中間體3(380mg，1.59mmol)的二氯甲烷溶液中。將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌1小時，然后將其倒入飽和碳酸氫鈉溶液內(nèi)。把粗產(chǎn)物萃取到二氯甲烷內(nèi)，合并有機萃取液，干燥并真空除去溶劑。如本實施例方法步驟C中所述進一步純化粗產(chǎn)物，獲得了793mg純產(chǎn)物。
步驟C 將得自前一步驟的三氟乙酰胺(790mg，1.44mmol)在乙醇(10mL)中的溶液用硼氫化鈉(550mg，14.4mmol)分幾批處理。2小時后，真空除去溶劑，加入碳酸氫鈉水溶液(10mL)，用氯仿與異丙醇的混合物(4∶1，3×30mL)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機萃取液干燥，并真空除去溶劑。如本實施例方法B步驟D所述進一步純化，或者使用Chralcel OD柱通過制備色譜法進一步純化，使用己烷與乙醇的混合物(95∶5)作為洗脫劑。光譜和色譜特性與標準樣本相同。
方法D步驟A 將中間體15(684mg，1.156mmol)、BOC2O(510mg，2.31mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)處理，并在室溫劇烈攪拌2小時。分離出有機層，將水層用二氯甲烷(3×20mL)萃取。將合并的有機層用鹽水回洗，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并真空除去溶劑。通過梯度硅膠色譜法純化殘余物，使用乙酸乙酯-己烷混合物作為洗脫劑。乙酸乙酯的濃度從0逐漸增加至100％。以該方式獲得了304mg(56％)所需產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)6.8(s，1H)，6.3(s，1H)，6.07(dd，J＝5.7，1.8Hz，1H)，5.80(dd，5.7，1.8Hz，1H)，4.75(m，4H)，4.2(bt，J＝5.3Hz，2H)，3.91(bt，5.7Hz，2H)，2.68(dd，J＝13.0，7.8Hz，1H)，2.1(m，1H)，1.86(dd，J＝13.0，4.8Hz，1H)，1.43(s，9H)，0.88(d，J＝6.9Hz，3G)，0.82(d，J＝6.9Hz，3H).
步驟B 將得自前一步驟的烯烴(84mg，0.1789mmol)和Pd/C(83mg，10％)在乙醇(10mL)中的溶液于常壓下氫化2小時。過濾出催化劑，減壓除去溶劑，獲得了84mg粗產(chǎn)物。使用制備TLC進一步純化(乙酸乙酯+己烷/4∶1)，獲得了10.4mg純凈的產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)6.8(s，1H)，6.2(s，1H)，4.84(m，2H)，4.65(m，2H)，4.2(m，2H)，3.91(m，2H)，2.68(m，1H)，2.24(m，2H)，2.1(m，4H)，1.86(m，2H)，1.43(s，9H)，0.82(m 7H).
步驟C 將得自前一步驟的BOC-保護的胺(275mg，0.584mmol)溶解在4N HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液中，在室溫攪拌2小時。真空除去溶劑，獲得了240.6mg鹽酸鹽形式的純產(chǎn)物。LC-MSC18H24F3N3O2[M+H]+的計算值382.18，實測值382.4.
步驟D 將其制備描述在前一步驟中的胺(240.6mg，0.584mmol)、酮中間體7(200mg，1.752mmol)、4分子篩(1.7g)、二異丙基乙胺(100μL，0.584mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氫化鈉(618mg，2.92mmol)處理，在室溫攪拌24小時。將該反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉溶液內(nèi)，用二氯甲烷(4×50mL)萃取產(chǎn)物。將合并的萃取液干燥(無水硫酸鈉)并真空除去溶劑。把殘余物通過制備TLC純化，使用二氯甲烷+甲醇+氫氧化銨/90∶9∶1混合物作為洗脫劑。該非對映體混合物在反相色譜分析上顯示單峰，該峰的質(zhì)譜分析證實了預(yù)計的分子量LC-MSC24H34F3N3O3[M+H]+的計算值470.26，實測值470.50.
步驟E
使用Chiralcel OD柱，通過半制備手性色譜法獲得了該單獨的異構(gòu)體，使用己烷與乙醇的87∶13混合物，以9.0mL/分鐘的流速洗脫。在這些條件下，本標題化合物作為第三個色譜峰洗脫下來，其分析(分析Chiralcel柱，相同洗脫劑，流速為1.0mL/分鐘)保留時間為47.4分鐘。該樣本的所有光譜以及所記錄的色譜參數(shù)與獨立地合成的標準樣本匹配。
實施例5 方法A本標題化合物是使用半制備Chiralpak AD柱，通過色譜分離而由異構(gòu)體混合物獲得的，所述異構(gòu)體混合物的制備描述在實施例4步驟A-C下面。采用在實施例4步驟C下面描述的條件，并且本標題化合物是作為較慢洗脫下來的異構(gòu)體獲得的(Tr＝12.01分鐘，m＝25.4mg)。
方法B步驟A 該酸是按照類似于中間體13方法A中描述的方法由酯中間體11制得的。
步驟B
本標題化合物是按照與實施例4方法B步驟A-C中描述的相同方法，但是使用中間體11作為原料合成的。其光譜和色譜特性與較慢洗脫下來的異構(gòu)體(其制備描述在實施例4步驟C中)相同。
方法C使用Chiralcel OD柱，通過半制備手性色譜法獲得了該單獨的異構(gòu)體，使用己烷與乙醇的87∶13混合物，以9.0mL/分鐘的流速洗脫。在這些條件下，本標題化合物作為第四個色譜峰洗脫下來，其分析(分析Chiralcel柱，相同洗脫劑，流速為1.0mL/分鐘)保留時間為47.4分鐘。該樣本的所有光譜以及所記錄的色譜參數(shù)與獨立地合成的標準樣本匹配。
實施例6 將得自實施例4的胺(22.7mg，0.0483mmol)、甲醛(100μL，0.96mmol)、二異丙基乙胺(9μL，0.0483mmol)和粉碎的4分子篩(400mg)在二氯甲烷(6mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氫化鈉(53mg，0.24mmol)處理，在室溫攪拌過夜。通過倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)來中止反應(yīng)，用二氯甲烷(4×10mL)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機萃取液干燥，并真空除去溶劑。通過制備TLC進一步純化(二氯甲烷∶甲醇∶氫氧化銨(90∶9∶1)，獲得了7.2mg所需產(chǎn)物。LC-MSC25H36F3N3O3[M+H]+的計算值484.27，實測值484.60.
實施例7
步驟A 將胺中間體15(2.00g，5.41mmol)、酮中間體7(1.00g，8.13mmol)、粉碎的4分子篩(4g)在二氯甲烷(20mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氫化鈉(3.44g，16.22mmol)處理，在室溫攪拌24小時。將該反應(yīng)混合物倒入飽和碳酸氫鈉溶液(80mL)內(nèi)，用氯仿(5×80mL)萃取產(chǎn)物。將合并的有機萃取液干燥，減壓除去溶劑。將殘余物(2.72g，濃油狀物)通過柱色譜法純化(硅膠，二氯甲烷+甲醇+氫氧化銨(90∶9∶1)，獲得了1.2979g兩種順式非對映體的非對映體混合物。
步驟B 通過手性半制備Chiralcel OD柱，使用己烷與乙醇的混合物(9∶1)作為洗脫劑，并且使用9.0mL/分鐘的流速，將兩種順式非對映體的混合物分離成本標題(THP-3S，4S)異構(gòu)體。在U類似分析條件下(1.0mL流速，相同柱)，本標題異構(gòu)體第一個洗脫下來，Tr＝23.30分鐘，而THP-3R，4R異構(gòu)體(實施例8)第二個洗脫下來，Tr＝25.65分鐘。
實施例8
本標題化合物是在實施例7描述的分離中，作為第二個洗脫下來的異構(gòu)體獲得的。
實施例9 本標題化合物是按照類似于制備實施例7中描述的方法，由中間體15和中間體5合成的。使用類似于實施例8中描述的手性半制備HPLC分離，可以分離出少量其它非對映THP-順式異構(gòu)體(結(jié)構(gòu)參見實施例10)。LC-MSC24H32F3N3O4[M+H]+的計算值484.23，實測值484.50.1H NMR(500MHz，CDCl3)6.80(s，1H)，6.28(s，1H)，6.03(dd，J＝6.0，1.8Hz，1H)，5.91(dd，J 6.0，1.8Hz，1H)，4.75(s，2H)，4.26(m，1H)，4.13(m，1H)，4.03(dd，J＝12.1，3.4Hz，1H)，3.95(m，4H)，3.34(m，6H)，2.80(m，1H)，2.44(dd，J＝13.3，7.8Hz，1H)，2.14(m，1H)，1.8(bm，7H)，1.3(m，1H)，0.87(m，.7H)。
實施例10 通過如實施例9所述的半制備手性色譜分離，可以獲得少量該異構(gòu)體。LC-MSC24H32F3N3O4[M+H]+的計算值484.23，實測值484.50.
實施例11
將得自實施例9的烯烴(69mg，0.144mmol)和Pd/C(51mg，10％)在乙醇中的溶液于常壓和常溫下氫化。過濾出催化劑，將濾液真空蒸發(fā)至干。如果需要的話，可以通過半制備手性HPLC柱(Chiralcel OD，80％烷，20％醇)來除去異構(gòu)體污染物。LC-MSC24H34F3N3O4[M+H]+的計算值486.25，實測值486.55.
實施例12 該單獨的異構(gòu)體是通過半制備手性色譜法，使用Chiralcel OD柱，用己烷與乙醇的87∶13混合物洗脫，使用9.0mL/分鐘的流速，由異構(gòu)體混合物(其制備描述在實施例4方法D中)獲得的。在這些條件下，本標題化合物作為第一個色譜峰洗脫下來，其分析(分析Chiralcel柱，相同洗脫劑，1.0mL/分鐘的流速)保留時間為29.4分鐘。
實施例13 該單獨的異構(gòu)體是通過半制備手性色譜法，使用Chiralcel OD柱，用己烷與乙醇的87∶13混合物洗脫，使用9.0mL/分鐘的流速，由異構(gòu)體混合物(其制備描述在實施例4方法D中)獲得的。在這些條件下，本標題化合物作為第二個色譜峰洗脫下來，其分析(分析Chiralcel柱，相同洗脫劑，1.0mL/分鐘的流速)保留時間為34.2分鐘。
實施例14 步驟A 將酸中間體14(171mg，0.3016mmol)、二異丙基乙胺(105μL，0.6032mmol)在THF中的溶液冷卻至0℃，加入純凈的甲磺酰氯(302μL，0.3016mmol)。繼續(xù)在0℃攪拌，直至用甲醇進行微處理，HPLC表明完全形成甲基酯，這是表示完全形成了混合酸酐的信號。向該溶液中加入中間體3(77mg，0.3016mmol，作為鹽酸鹽)、三乙胺(105μL，0.6032mmol)在THF(2mL)中的混合物，移去冷卻浴。繼續(xù)在室溫攪拌1小時。真空除去溶劑，加入水(20mL)，將產(chǎn)物萃取到二氯甲烷(4×20mL)內(nèi)。將合并的有機萃取液干燥(無水硫酸鈉)，過濾并減壓除去溶劑。通過制備TLC純化殘余物，獲得了24mg純的所需產(chǎn)物。LC-MSC32H35F6N3O6[M+H]+的計算值672.24，實測值672.25.
步驟B
將得自前一步驟的三氟乙酰胺(25mg，0.0372mmol)在乙醇(6mL)中的溶液以少量多次的方式用硼氫化鈉(38mg，1mmol)處理，在室溫攪拌2小時。真空除去溶劑，通過制備TLC純化殘余物，使用二氯甲烷∶甲醇∶氫氧化銨(90∶9∶1)作為洗脫劑。以該方式獲得了15.4mg純產(chǎn)物。LC-MSC30H36F3N3O5[M+H]+的計算值576.26，實測值576.30。
實施例15 將得自實施例14的酯(15mg，0.0261mmol)在甲醇(3.0mL)中的溶液用氫氧化鋰水溶液(600μL，1N)處理，在室溫攪拌3小時。減壓除去揮發(fā)物，用二氯甲烷萃取產(chǎn)物。將合并的有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾，并將溶劑真空蒸發(fā)。通過制備TLC純化殘余物，使用二氯甲烷∶甲醇∶氫氧化銨(90∶9∶1)作為洗脫劑。以該方式獲得了5.4mg所需產(chǎn)物。LC-MSC23H32F3N3O4[M+H]+的計算值472.23，實測值472.25.
雖然已經(jīng)描述了本發(fā)明，并且用一些其具體實施方案舉例說明了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，在不背離本發(fā)明的實質(zhì)和范圍的情況下，可以進行方法和方案的各種適應(yīng)性改變、改動、修飾、替換、刪除或加入。例如，對于任何適應(yīng)癥，作為進行治療的哺乳動物對于上述本發(fā)明化合物的反應(yīng)性的改變的結(jié)果，可以采用在本文提出的特定劑量之外的有效劑量。同樣，所觀察到的特定藥理反應(yīng)可根據(jù)和依賴于所選擇的特定活性化合物或者是否存在藥物載體以及采用的制劑類型和給藥方式而改變，并且這樣的預(yù)計的結(jié)果改變或不同根據(jù)本發(fā)明的目的和實施是可以涉及的。因此，本發(fā)明應(yīng)當通過權(quán)利要求書來限定，并且這樣的權(quán)利要求書應(yīng)當做最寬的合理解釋。
權(quán)利要求
1.式I或式II化合物 其中A選自-CH2-、-O-、-N(R20)-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(SO2R14)-和-N(COR13)-；E獨立地選自N和C；X是O、N、S、SO2或C；Y選自-O-、-N(R20)-、-S-、-SO-、-SO2-和-C(R21)(R22)-、-N(SO2R14)-、-N(COR13)-、-C(R21)(COR11)-、-C(R21)(OCOR14)-和-CO-；Z選自C、N或O；R1選自氫、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-S-C1-6烷基、-SO-C1-6烷基、-SO2-C1-6烷基、-SO2NR12R12、-NR12-SO2-NR12R12、-(C0-6烷基)-(C3-7環(huán)烷基)-(C0-6烷基)、-CN、-NR12R12、-NR12COR13、-NR12SO2R14、-COR11、-CONR12R12、-NR12CONR12R12、-O-CO-C1-6烷基、-O-CO2-C1-6烷基、羥基、雜環(huán)和苯基，其中所述烷基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-7個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、未取代或者被1-6個氟取代的-O-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的C1-6烷基、-CONR12R12、-NR12CONR12R12、-COR11、-SO2R14、-NR12COR13、-NR12SO2R14、-雜環(huán)、＝O、-CN、苯基、-SO2NR12R12、-NR12-SO2-NR12R12、未取代或者被1-6個氟取代的-S-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-SO-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-SO2-C1-6烷基和-O-COR13，其中所述苯基和雜環(huán)是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基，所述C1-3烷基和C1-3烷氧基是未取代的或者被1-6個氟取代；當Z是O時，R2和R3不存在；當Z是N時，R2不存在，且R3是氫或C1-3烷基；當Z是C時，R2和R3獨立地為氫或未取代或者被1-3個氟取代的C1-3烷基；當E是C時，R4選自氫、未取代或者被1-3個氟取代的C1-3烷基、未取代或者被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基、羥基、氯、氟、溴、苯基和雜環(huán)；當E是C時，R5選自氟、氯、溴、-雜環(huán)、-CN、-COR11、C4-6環(huán)烷基、-O-C4-6環(huán)烷基、未取代或者被1-6個氟或羥基或氟和羥基取代的C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-O-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-CO-C1-6烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-S-C1-6烷基，未取代或者被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-吡啶基，未取代或者被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-苯基，未取代或者被一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-4烷基和COR11的取代基取代的-O-苯基，未取代或者被1-6個氟取代的-C3-6環(huán)烷基，和未取代或者被1-6個氟取代的-O-C3-6環(huán)烷基；當E是C時，R6選自氫、羥基、氯、氟、溴、苯基、雜環(huán)、未取代或者被1-3個氟取代的C1-3烷基和未取代或者被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基；當E是N時，R4和R6獨立地選自不存在或O(以形成N-氧化物)；當X是N或C時，R7選自氫、(C0-6烷基)-苯基、(C0-6烷基)-雜環(huán)、(C0-6烷基)-C3-7環(huán)烷基、(C0-6烷基)-COR11、(C0-6烷基)-(鏈烯烴)-COR11、(C0-6烷基)-SO3H、(C0-6烷基)-W-C0-4烷基、(C0-6烷基)-CONR12-苯基和(C0-6烷基)-CONR23-V-COR11，其中W選自單鍵、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-CO2-、-CONR12-和-NR12-，其中V選自C1-6烷基或苯基，其中R23是氫或C1-4烷基，或者R23是與V的一個碳原子連接以形成環(huán)的具有1-5個碳原子的連接基團，其中所述C0-6烷基是未取代的或者被1-5個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-C0-6烷基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和-C0-2烷基-苯基，其中所述苯基、雜環(huán)、環(huán)烷基和如果存在的話C0-4烷基是未取代的或者被1-5個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、三氟甲基、羥基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-C0-3-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-C0-3-雜環(huán)，或者其中所述苯基或雜環(huán)與另一雜環(huán)稠合，所述另一雜環(huán)是未取代的或者被1-2個獨立地選自下列的取代基取代羥基、鹵素、-COR11和-C1-3烷基，并且其中所述鏈烯烴是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、三氟甲基、C1-3烷基、苯基和雜環(huán)；當X是O、S或SO2時，R7不存在；當X是C時，R8選自氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CONR12R12和-CN；當X是O、S、SO2或N時，或者當雙鍵連接R7和R10所連接的碳原子時，R8不存在；或者，R7和R8連接以形成選自下列的環(huán)1H-茚、2，3-二氫-1H-茚、2，3-二氫-苯并呋喃、1，3-二氫-異苯并呋喃、2，3-二氫-苯并噻吩、1，3-二氫-異苯并噻吩、6H-環(huán)戊二烯并[d]異唑-3-醇、環(huán)戊烷和環(huán)己烷，其中所述環(huán)是未取代的或者被1-5個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、三氟甲基、羥基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-C0-3-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-C0-3烷基-雜環(huán)；R9和R10獨立地選自氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、鹵素；或者R9和R10一起是O(其中O經(jīng)由雙鍵與環(huán)連接)；或者，R7與R9或者R8與R10連接以形成是苯基或雜環(huán)的稠合環(huán)，其中所述稠合環(huán)是未取代的或者被1-7個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、三氟甲基、羥基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CN、-NR12R12和-CONR12R12；R11獨立地選自羥基、氫、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基、C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R12選自氫、C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；或者，當兩個單獨的R12基團位于同一碳原子或相鄰碳原子上時，所述兩個R12基團任選經(jīng)由C1-7烷基連接基團連接而形成3-9元環(huán)，所述連接基團是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R13選自氫、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R14選自羥基、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R15是氫或C1-6烷基，其中所述烷基是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-CO2H、-CO2C1-6烷基和-O-C1-3烷基；R16選自氫、氟、C3-6環(huán)烷基、-O-C3-6環(huán)烷基、羥基、-COR11、-OCOR14，未取代或者被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代的C1-6烷基，和未取代或者被1-3個氟取代的-O-C1-3烷基；或者，R15和R16一起是C2-4烷基或C0-2烷基-O-C1-3烷基，形成環(huán)，所述環(huán)是5-7元環(huán)；R17選自氫、COR11、羥基，未取代或者被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代的-O-C1-6烷基，和未取代或者被1-6個選自氟、C1-3烷氧基、羥基和-COR11的取代基取代的C1-6烷基，或者，如果R28是經(jīng)由雙鍵與環(huán)碳連接，則R17不存在；或者，R16和R17一起是C1-4烷基或C0-3烷基-O-C0-3烷基，形成環(huán)，所述環(huán)是3-7元環(huán)；R18選自氫、氟、-O-C3-6環(huán)烷基、未取代或者被1-6個氟取代的-O-C1-3烷基和未取代或者被1-6個氟取代的C1-6烷基；或者，R16和R18一起是C2-3烷基，其中所述烷基是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基；或者，R16和R18一起是C1-2烷基-O-C1-2烷基，其中所述烷基是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基；或者，R16和R18一起是-O-C1-2烷基-O-，其中所述烷基是未取代的或者被1-3個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-COR11、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R19選自氫、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和未取代或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代的C1-3烷基；R20選自氫、C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R21和R22獨立地選自氫、羥基、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、芐基、苯基和C3-6環(huán)烷基，其中所述烷基、苯基、芐基和環(huán)烷基可以是未取代的或者被1-6個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、-CO2H、-CO2-C1-6烷基和三氟甲基；R24選自氫、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和C1-3烷基，其中所述烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代；或者，R24和R17一起是C1-3烷基橋；R25和R26獨立地選自＝O，其中R25和/或R26是氧并且經(jīng)由雙鍵連接，氫、苯基和C1-6烷基，所述烷基是未取代的或者被1-6個選自-COR11、羥基、氟、氯和C1-3烷基的取代基取代；R27選自氫、COR11、SO2R14、SO2NR12R12和C1-3烷基，其中所述烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代；R28選自氫、羥基、鹵素、未取代或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代的C1-3烷基、-NR12R12、-COR11、-CONR12R12、-NR12COR13、-OCONR12R12、-NR12CONR12R12、-雜環(huán)、-CN、-NR12-SO2-NR12R12、-NR12-SO2-R14、-SO2-NR12R12和＝O，其中R28經(jīng)由雙鍵與環(huán)連接，并且在同一位置上的R17不存在；R29和R33選自氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和鹵素，或者，如果取代位點是不飽和的，R29或R33獨立地不存在；或者，R29和R16一起是C1-3烷基橋；R30和R31獨立地選自羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、鹵素和氫，其中所述烷基是未取代的或者被1-6個獨立地選自氟和羥基的取代基取代；或者，R30和R31一起是-C1-4烷基-、-C0-2烷基-O-C1-3烷基-或-C1-3烷基-O-C0-2烷基-，其中所述烷基是未取代的或者被1-2個選自下列的取代基取代氧基，其中氧經(jīng)由雙鍵與橋連接，氟、羥基、甲氧基、甲基或三氟甲基；R32和R34獨立地選自氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷基-COR11、C1-6烷基-羥基、-O-C1-3烷基、三氟甲基和鹵素；j是0、1或2；k是0、1或2；m是0、1或2；n是1或2；虛線代表任選的單鍵；及其可藥用鹽和單獨的非對映體。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式Ia化合物 及其可藥用鹽和單獨的非對映體。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式Ib化合物 及其可藥用鹽和單獨的非對映體。
4.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中A是CH2。
5.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中Y是O或CH2。
6.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中E是C。
7.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中Z是C。
8.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R1選自-C1-6烷基、-C0-6烷基-O-C1-6烷基、雜環(huán)和-(C0-6烷基)-(C3-7環(huán)烷基)-(C0-6烷基)，其中所述烷基、雜環(huán)和環(huán)烷基是未取代的或者被1-7個獨立地選自下列的取代基取代鹵素、羥基、-O-C1-3烷基、三氟甲基、C1-3烷基、-O-C1-3烷基、-COR11、-CN、-NR12R12、-CONR12R12和-NCOR13。
9.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R1選自C1-6烷基、被羥基取代的C1-6烷基和被1-6個氟取代的C1-6烷基。
10.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R1選自-CH(CH3)2、-C(OH)(CH3)2、-CH(OH)CH3和-CH2CF3。
11.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R2、R3和R4中的一個或多個是氫。
12.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R5選自被1-6個氟取代的C1-6烷基、被1-6個氟取代的-O-C1-6烷基、氯、溴和苯基。
13.權(quán)利要求12的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R5是三氟甲基。
14.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R15是甲基或氫。
15.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R16選自氫、未取代或者被1-6個氟取代的C1-3烷基、-O-C1-3烷基、氟和羥基。
16.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R16選自氫、三氟甲基、甲基、甲氧基、乙氧基、乙基、氟和羥基。
17.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R17是氫。
18.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R18選自氫、甲基和甲氧基。
19.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R16和R18一起是-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-。
20.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R19、R24和R25當中的一個或多個是氫。
21.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R26是O。
22.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽和單獨的非對映體，其中R27、R28和R29當中的一個或多個是氫。
23.選自下列的化合物 及其可藥用鹽和單獨的非對映體。
24.包含惰性載體和權(quán)利要求1的化合物的藥物組合物。
25.調(diào)節(jié)哺乳動物中趨化因子受體活性的方法，所述方法包括施用有效量的權(quán)利要求1的化合物。
26.治療、改善、控制炎性和免疫調(diào)節(jié)性病癥或疾病或者降低炎性和免疫調(diào)節(jié)性病癥或疾病危險性的方法，所述方法包括給患者施用有效量的權(quán)利要求1的化合物。
27.治療、改善、控制類風濕性關(guān)節(jié)炎或者降低類風濕性關(guān)節(jié)炎危險性的方法，所述方法包括給患者施用有效量的權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
式I和式II化合物(其中A、E、j、k、m、n、R
文檔編號C07D471/04GK1913778SQ200580003340
公開日2007年2月14日 申請日期2005年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月28日
發(fā)明者G·布托拉, D·圭亞迪恩, S·科坦達拉曼, M·麥科斯, S·G·米爾斯, 楊立虎 申請人:默克公司