專利名稱：：放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的制備方法。更具體地說，涉及對(duì)通過正電子發(fā)射斷層掃描檢測(cè)胂瘤的放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的制備方法。
背景技術(shù)：
：由正電子發(fā)射斷層掃描術(shù)(以下稱為PET)和單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層術(shù)(以下稱為SPECT)代表的核醫(yī)學(xué)檢查在診斷包括心臟病和癌癥的各種疾病中是有效的。這些技術(shù)包括對(duì)患者給予用特定的放射性同位素標(biāo)記的藥物(以下簡(jiǎn)稱"放射性藥物")，然后檢測(cè)由該藥物直接或間接發(fā)射的Y-射線。與其它檢查技術(shù)相比，核醫(yī)學(xué)檢查的特征在于其不僅對(duì)疾病具有高的特異性和靈敏度，而且具有提供關(guān)于病變官能性方面的信息的優(yōu)點(diǎn)。例如，[18F]2-氟-2-脫氧-D-葡萄糖(以下簡(jiǎn)稱"rF]-FDG")是一種用于PET檢查的放射性藥物，其傾向于富集在糖代謝-域，從而可以特異性檢測(cè)其中的糖代謝旺盛的腫瘤。核醫(yī)學(xué)檢查是通過追蹤所給予的放射性藥物的分布來進(jìn)行的，并且所得到的數(shù)據(jù)隨放射性藥物的性質(zhì)而改變。因此，已經(jīng)開發(fā)了不同的放射性藥物用于不同的疾病，并且其中的一些已經(jīng)應(yīng)用于臨床。已經(jīng)開發(fā)了例如各種胂瘤診斷劑、血流診斷劑和受體繪圖劑(receptormappingagent)。近年來，已經(jīng)設(shè)計(jì)了包括[18F]l-氨基-3-氟環(huán)丁烷甲酸(以下簡(jiǎn)稱[18F]FACBC)的一系列放射性卣素標(biāo)記的氨基酸化合物作為新的放射性藥物，并且正在考察它們的臨床應(yīng)用(專利文獻(xiàn)l，非專利文獻(xiàn)l和2)。["F]FACBC作為用于高度增殖的腫瘤的診斷劑被認(rèn)為是有效的，因?yàn)槠渚哂斜话被徂D(zhuǎn)運(yùn)蛋白特異性地?cái)z取的性質(zhì)。對(duì)于制備["F]FACBC的方法，公開的方法包括提供l-(N-(叔丁氧基羰基)氨基)-3-[((三氟甲基)磺酰基)氧基]-環(huán)丁垸-l-甲酸酯作為標(biāo)記前體，用放射性的氟取代該前體的3位上的三氟甲磺酸酯基團(tuán)，將其以溶液的方式賦予酸性條件而進(jìn)行脫酯基和脫Boc基的反應(yīng)(專利文獻(xiàn)l，非專利文獻(xiàn)1和2)。對(duì)于[18F]-FDG的制備，公開了以固相進(jìn)行脫保護(hù)步驟的合成方法，這使得合成時(shí)間縮短、所用試劑數(shù)量減少、和制備裝置的組件數(shù)量減少(專利文獻(xiàn)2)。專利文獻(xiàn)l:特表2000-500442號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2:特表平11-508923號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)1:JonathanMcConathy等人，"Improvedsynthesisofanti-["F〗FACBC:improvedpreparationoflabelingprecursorandautomatedradiosynthesis.，，AppliedRadiationandIsotopes,(Netherlands),2003，58，p.657-666。非專利文獻(xiàn)2:TimothyM.Shoup等人，"SynthesisandEvaluationof[8F]l-Amino-3-fluorocyclobutane-l-carboxy1icAcidtoImageBrainTumors."TheJournalofNuclearMedicine,1999，40，p.331-338。
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的問題到目前為止公開的制備["F]FACBC的方法實(shí)現(xiàn)了12-24%的產(chǎn)品收率(J.McConathy等人，AppliedRadiationandIsotopes,200358，p.657-666),但從工業(yè)生產(chǎn)的角度看，這不能算作是足夠高的產(chǎn)品收率。也就是說，為了工業(yè)生產(chǎn)["F]FACBC，期望使用可以穩(wěn)定地提供更高收率的制備方法或條件。["F]FACBC的制備主要包括向標(biāo)記前體中加入放射性氟的放射性氟化步驟；將放射性氟化步驟制備的中間化合物進(jìn)行脫酯化和脫保護(hù)的脫酯化和脫保護(hù)步驟。本發(fā)明人等為提高產(chǎn)品收率，對(duì)放射性氟化步驟進(jìn)行了研究，確立了可以將根據(jù)常規(guī)方法為24.16%的氟化步驟收率提高到最高達(dá)73.79%的技術(shù)。結(jié)果，本發(fā)明人等使得有可能將["F]FACBC的產(chǎn)品收率最大改善為54.8±4.8%(N=15)。然而，本發(fā)明人等進(jìn)行詳細(xì)研究的結(jié)果顯示，所得["F]FACBC水溶液中存在大量的非放射性雜質(zhì)(參見后述的比較例)。對(duì)于藥物來說，必須要將其中的雜質(zhì)含量降低到規(guī)定水平以下。因此，如果在反應(yīng)結(jié)束后雜質(zhì)以規(guī)定水平以上存在，則必須在隨后的步驟中除去雜質(zhì)。然而，追加另一個(gè)用于減少雜質(zhì)的純化步驟引起在放射性氟標(biāo)記后的制備步驟所需時(shí)間延長(zhǎng)。因?yàn)榉派湫苑陌胨テ谳^短，只有約110分鐘，從工業(yè)化生產(chǎn)放射性氟標(biāo)記化合物的觀點(diǎn)出發(fā)，不適宜延長(zhǎng)放射性氟標(biāo)記后的步驟時(shí)間。本發(fā)明正是考慮到上述情況作出的，本發(fā)明的目的是提供可以減少非放射性雜質(zhì)產(chǎn)生量的制備[18F]FACBC的方法。解決課題的方法作為調(diào)查研究的結(jié)果，發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，通過在反相固相柱中進(jìn)行作為羧基保護(hù)基的酯基團(tuán)的脫酯化步驟，可以簡(jiǎn)便而有效地減少目標(biāo)產(chǎn)物中雜質(zhì)的量，從而完成了本發(fā)明。以往，固相脫保護(hù)方法通常主要用于縮短制備時(shí)間(參見例如，特表平11-508923公報(bào))。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過使用固相脫保護(hù)方法，可以實(shí)現(xiàn)降低目標(biāo)產(chǎn)物中雜質(zhì)的量的新的效果，并且對(duì)其進(jìn)行了應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明，提供了放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的制備方法，該制備方法包括在反相柱中保留下式(1)所示的化合物，向該柱中填充堿溶液，使上述化合物脫酯化，然后從該柱中排出該堿溶液，由此得到下式(2)所示的化合物的脫酯化步驟，式中，！^是直鏈或支鏈的C廣d。烷基鏈或芳香族取代基，112是保護(hù)基；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(2)式中，X是鈉或鉀，r是保護(hù)基；以及，將在脫酯化步驟中得到的化合物的氨基保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)，以得到下式(3)所示的化合物的脫保護(hù)步驟。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(3)在上述式中，W是直鏈或支鏈的d-d。烷基鏈或芳香族取代基，優(yōu)選選自甲基、乙基、叔丁基、和苯基中的取代基。在上述式中，W是保護(hù)基，對(duì)其沒有特別的限制，只要其可以阻止放射性氟和氨基之間的反應(yīng)即可。具體地，可以使用選自各種氨基甲酸酯取代基、各種酰胺取代基、各種酰亞胺取代基、和各種胺取代基的保護(hù)基。優(yōu)選地，可使用選自以下的保護(hù)基C廣C7直鏈或支鏈的烷氧基羰基取代基；C3-C,直鏈或支鏈的烯氧基羰基取代基；可具有修飾基團(tuán)的C廣d2千氧羰基取代基；C2-C7的烷基二硫代氧基羰基取代基；d-Ce直鏈或支鏈的烷基酰胺取代基；C廣C6直鏈或支鏈的烯基酰胺取代基；可具有修飾基團(tuán)的C6-Cu的苯甲酰胺取代基；Crd。的環(huán)狀酰亞胺取代基；可具有取代基的Ce-Cu的芳香族亞胺取代基；C廣Cs直鏈或支鏈的烷基胺取代基；C廣C6直鏈或支鏈的烯基胺取代基；和可具有修飾基團(tuán)的c6-cu千基胺取代基。更優(yōu)選地，可使用選自叔丁氧羰基、烯丙氧羰基、鄰苯二甲酰亞胺基、和N-苯亞曱基胺取代基中的保護(hù)基，最優(yōu)選地，可使用叔丁氧羰基或鄰苯二甲酰亞胺基。在上述式中，X是包含在用于脫酯化步驟的堿中的陽離子，可根據(jù)堿的類型來選擇。例如，使用氬氧化鈉時(shí)，X是鈉，使用氬氧化鉀時(shí)，X是鉀。在脫酯化步驟中，反相柱可以使用其中的填充劑的官能團(tuán)是苯基、環(huán)己基和烷基等疏水性基團(tuán)的各種柱。優(yōu)選使用填充劑具有C2-ds烷基鏈通過硅連接于栽體的結(jié)構(gòu)的反相柱。反相柱的具體實(shí)例包括具有十八烷基曱硅烷基作為官能團(tuán)的反相柱。上述式(1)的化合物在反相柱中的保留可以通過多種方法進(jìn)行。具體地，可以使用將通過放射性氟化步驟得到的上述式(l)的化合物的溶液用水稀釋、使所得溶液通過反相柱的方法。稀釋用的水可以以足以使上述式(1)的化合物固定在反相柱上的量使用。作為堿溶液，可以使用多種溶液，但優(yōu)選使用氫氧化鈉溶液。所用的堿溶液的量?jī)?yōu)選等于或大于上述固相柱的填充容量。對(duì)于堿溶液的濃度沒有限制，只要可以將所述堿以足以進(jìn)行脫酯化的量引入柱中即可。然而必需要注意的是，如果堿的量過大，需要在隨后的脫保護(hù)步驟中使用更大量的酸。在脫酯化步驟中，將保持上迷式(l)化合物的反相柱在填充有堿溶液的狀態(tài)下保持一段時(shí)間。對(duì)于反相柱保持填充有堿溶液的時(shí)間沒有具體限制，只要其有充足時(shí)間進(jìn)行脫酯化反應(yīng)即可。在將堿溶液從上述柱排出時(shí)，上述式(2)所示的化合物隨堿溶液一起被排出。這時(shí)，可以在排出堿溶液后進(jìn)一步使水通過柱，以便將殘留的上述化合物(2)洗出來。這個(gè)洗出操作可以進(jìn)一步改善上述化合物(2)的收率。脫保護(hù)步驟可以使用公知的方法進(jìn)行，例如使用在文獻(xiàn)"J.McConathy等人，AppliedRadiationandIsotopes,2003，58，p.657-666"中描述的方法，具體地，可以使用向經(jīng)過脫酯化步驟后的反應(yīng)溶液賦予酸性條件的方法。放射性氟化步驟可以使用公知的方法或?qū)⒐椒ㄅc發(fā)明人等確立的條件組合的方法。具體地可釆用如下方法將下式(4)所示的化合物和惰性有機(jī)溶劑添加到含有相轉(zhuǎn)移催化劑和18F離子和鉀離子的混合物中，調(diào)制反應(yīng)溶液，對(duì)該反應(yīng)溶液施加加熱攪拌等反應(yīng)條件。(4)在式(4)中，Ri和W與上述定義相同；W為選自直鏈或支鏈的d-C1Q卣代烷基磺酸取代基、直鏈或支鏈的d-d。烷基磺酸取代基、氟磺酸取代基、和芳香族磺酸取代基中的取代基。優(yōu)選使用選自甲磺酸、甲苯磺酸、硝基苯磺酸、苯磺酸、三氟甲磺酸、氟磺酸、和全氟烷基磺酸中的取代基。在放射性氟化步驟中，可以使用各種惰性有機(jī)溶劑，但是應(yīng)該使用兩性有機(jī)溶劑。具體地，可以使用選自四氫呋喃、1，4-二氧雜環(huán)己烷、丙酮、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、和乙腈中的溶劑，特別優(yōu)選使用乙腈。優(yōu)選調(diào)節(jié)要使用的惰性有機(jī)溶劑的量，使放射性氟化反應(yīng)時(shí)反應(yīng)溶液中的標(biāo)記前體濃度為40mmol/L以上，以^使顯著改善放射性氟化反應(yīng)的收率。在放射性氟化步驟中可以使用各種條件作為反應(yīng)條件；例如可以使用將反應(yīng)溶液加熱攪拌的條件。此時(shí)的加熱溫度一定不能高于被添加到反應(yīng)溶液中的惰性有機(jī)溶劑的蒸發(fā)溫度；例如，在使用乙腈作為惰性有機(jī)溶劑時(shí)，加熱溫度可為70~90匸。發(fā)明效果本發(fā)明的制備方法能夠降低在制備放射性氟標(biāo)記的氨基酸化合物例如rF]FACBC時(shí)所產(chǎn)生的非放射性雜質(zhì)的量，并且其作為放射性氟標(biāo)記的氨基酸化合物的純化方法也是有用的。圖1是順式-l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-千氧基-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯的合成路線圖。圖2是順式-l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-羥基-環(huán)丁烷-1-甲酸乙酯的合成路線圖。圖3是順式-l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-[((三氟甲基)磺?；?氧基]-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯的合成路線圖。具體實(shí)施例方式以下，詳細(xì)描述本發(fā)明的放射性氟標(biāo)記的氨基酸的制備方法。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的制備方法包括以下步驟(l)使標(biāo)記前體與含有相轉(zhuǎn)移催化劑、18F離子、和鉀離子的混合物反應(yīng)，以便用放射性氟標(biāo)記要標(biāo)記的前體，從而產(chǎn)生放射性氟標(biāo)記的前體酯(放射性氟化步驟)；(2)在固相柱中將放射性氟標(biāo)記的前體酯脫酯化(脫酯化步驟)；和(3)將在脫酯化步驟中得到的化合物的氨基保護(hù)基脫保護(hù)(脫保護(hù)步驟)。放射性氟可以通過公知的方法獲得，例如可以通過將富含H"0的水用作靶而暴露于質(zhì)子轟擊的方法獲得。此時(shí)，放射性氟存在于作為靶的富含H2180的水中。使含有該放射性氟的富含H2180的水通過陰離子交換柱，使放射性氟被吸附和收集在柱上，從而與富含H2180的水分離。其后，使碳酸鉀溶液流過該柱以洗脫放射性氟，向洗脫液補(bǔ)充相轉(zhuǎn)移催化劑并蒸干，得到含有相轉(zhuǎn)移催化劑、"F離子和鉀離子的混合物。此處使用的碳酸鉀的量，按鉀離子計(jì)，應(yīng)該等于或大于用于隨后放射性氟化步驟中的標(biāo)記前體的量；然而過量的碳酸鉀不是優(yōu)選的，因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物可能會(huì)受到碳酸根離子的影響而分解。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)碳酸鉀溶液的濃度和量，使得鉀離子的量約等于標(biāo)記前體的量。可以將具有能與18F離子之間形成包合物的性質(zhì)的各種化合物用作相轉(zhuǎn)移催化劑。具體地，可以使用能用于制備放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的各種化合物；可以使用18-冠醚-6和其它各種氨基聚醚。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以使用4，7，13，16，21，24-六氧雜-1，IO-二氮雜雙環(huán)[8.8.8]二十六烷。相轉(zhuǎn)移催化劑的量越大，則收率較高；但是過量則不優(yōu)選，因?yàn)檫^量加入的相轉(zhuǎn)移催化劑的除去不易充分進(jìn)行。在優(yōu)選實(shí)施方案中，相轉(zhuǎn)移催化劑的總量可以是0.2mmo1以下；例如，在要使用的標(biāo)記前體的量是80pmo1時(shí)，相轉(zhuǎn)移催化劑與標(biāo)記前體的摩爾比為2.5以下。在得到含有相轉(zhuǎn)移催化劑、18F離子和鉀離子的混合物后，通過使標(biāo)記前體和18F離子反應(yīng)進(jìn)行放射性氟化。放射性氟化步驟可以采用各種方法。例如，可以使用如下方法將l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-[((三氟甲基)磺酰基)氧基]-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯和惰性有機(jī)溶劑添加到上述混合物中以制備反應(yīng)溶液，然后向反應(yīng)溶液施加反應(yīng)條件例如加熱攪拌，以產(chǎn)生[18F]1-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-氟環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯(以下稱為"["F]Boc-FACBC")。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以在將標(biāo)記前體1-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-[((三氟甲基)磺酰基)氧基]-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯添加到混合物中之前將其溶解于惰性有機(jī)溶劑中。可以將與["F]氟離子、相轉(zhuǎn)移催化劑、鉀離子、和標(biāo)記前溶劑；并且優(yōu)選地，可以使用選自四氫吹喃、1，4-二喝烷、丙酮、二甲基曱酰胺、二甲基亞砜、和乙腈的溶劑，特別優(yōu)選乙腈。優(yōu)選調(diào)節(jié)要使用的惰性有機(jī)溶劑的量，使得放射性氟化反應(yīng)時(shí)反應(yīng)溶液中的標(biāo)記前體濃度是40mmol/L以上，以便顯著改善放射性氟化反應(yīng)的收率?？梢允褂酶鞣N條件作為放射性氟化步驟的反應(yīng)條件；例如可以使用將反應(yīng)溶液加熱攪拌的條件。此時(shí)的加熱溫度優(yōu)選不高于被添加到反應(yīng)溶液中的惰性有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)；例如，在使用乙腈作為惰性有機(jī)溶劑時(shí)，加熱溫度可為70~90匸。反應(yīng)時(shí)間取決于反應(yīng)溫度；例如，在反應(yīng)溫度是83X:時(shí)，充足的反應(yīng)時(shí)間是3分鐘以上。反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng)，則放射性氟標(biāo)記反應(yīng)進(jìn)行得更進(jìn)一步，但是需要注意的是，放射性氟的衰變也在同時(shí)進(jìn)行。在放射性氟化步驟完成后，進(jìn)行脫酯化步驟，以制備["F]l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-氟環(huán)丁烷-l-甲酸(以下簡(jiǎn)稱"[18F]DE-Boc-FACBC")。本發(fā)明的特征在于上述步驟中的脫酯化反應(yīng)是在固相柱中進(jìn)行的。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過用水稀釋在放射性氟化步驟中得到的含有[18F]Boc-FACBC的反應(yīng)溶液并且使得到的溶液作為樣品通過固相柱而將要脫酯化的樣品[18F]Boc-FACBC捕集到固相柱上。反應(yīng)溶液的稀釋是為了防止在樣品通過固相柱時(shí)，[18F]Boc-FACBC洗脫而不被捕集在柱上而進(jìn)行的操作。因此，稀釋所用的水可以以足夠使[18F]Boc-FACBC被捕集在固相柱的填充劑上的量使用，在反應(yīng)溶液的溶劑是乙腈時(shí)，足夠的水量是溶劑的量的5倍。用于脫酯化步驟的固相柱必須使用填充有反相填充劑的固相柱。優(yōu)選地，柱的填充劑具有疏水性官能團(tuán)例如苯基、環(huán)己基和烷基；更優(yōu)選具有C廣Cu烷基通過硅連接在載體上的結(jié)構(gòu)。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以使用用具有十八烷基甲硅烷基作為官能團(tuán)的填力/,,填充的柱。此外，使用的柱的填充劑優(yōu)選具有在含水反應(yīng)條件下和在長(zhǎng)時(shí)間的脫酯化反應(yīng)過程中官能團(tuán)不易從載體脫離的結(jié)構(gòu)。在樣品捕集在固相柱上后，向該柱添加堿溶液。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，堿溶液的填充通過如下操作進(jìn)行將堿溶液直接引入到柱中，當(dāng)確認(rèn)堿溶液開始從柱的出口漏出后，停止堿溶液的加入，并且將柱的出口封閉。此處使用的堿的實(shí)例包括氫氧化鈉和氫氧化鉀，考慮到本發(fā)明的目標(biāo)產(chǎn)物是用于注射劑的，因此優(yōu)選使用氫氧化鈉。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，堿溶液的體積約等于柱的容積。此時(shí)，必須注意的是，如果使用的堿溶液的體積過量，則先前已脫酯化的樣品可能會(huì)隨廢液一起排出，從而引起收率降低。對(duì)于使用的堿溶液的濃度沒有限制，只要可以將堿以足夠進(jìn)行脫酯化的量引入到柱中即可。在考慮堿溶液的可用體積和堿的必要量的情況下決定堿溶液的濃度。此時(shí)，必須注意的是，如果使用的堿過量，則在隨后的脫保護(hù)步驟中必須使用更大量的酸來中和。在將堿溶液添加到固相柱后，將柱保持靜置一段時(shí)間，以便使柱中的樣品脫酯化。此時(shí)，無需特別地控制柱的溫度，操作可以在室溫下進(jìn)行。柱保持靜置的持續(xù)時(shí)間可以是足以進(jìn)行脫酯化的時(shí)間。持續(xù)時(shí)間越長(zhǎng)，則脫酯化反應(yīng)進(jìn)行得更進(jìn)一步，但是需要注意的是，放射性氟的衰變也在同時(shí)進(jìn)行，例如，在將["F]Boc-FACBC保持在含有400mg樹脂的ODS柱中并且將0.8mL的4mol/L氫氧化鈉溶液注入柱中以進(jìn)行脫酯化時(shí)，1-5分鐘的時(shí)間就足夠了。在脫酯化完成后，將柱的出口打開，從而使得通過脫酯化得到的[18F]DE-Boc-FACBC隨堿溶液一起排出。在堿溶液已經(jīng)排出后，可以再向柱添加堿溶液，重復(fù)如上操作，由此使得殘留在反相柱中的[18F]Boc-FACBC可以更徹底地脫酯化，從而改善收率。從進(jìn)一步改善收率出發(fā)，優(yōu)選在排出后用水沖洗柱，以便排出柱中殘留的[18F]DE-Boc-FACBC，。在脫酯化步驟完成后，進(jìn)行脫保護(hù)步驟，對(duì)氨基保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)，從而得到本發(fā)明的目標(biāo)產(chǎn)物["F]FACBC。脫保護(hù)步驟可以根據(jù)公知的方法例如在文獻(xiàn)"J.McConathy等人，AppliedRadiationandIsotopes,2003，58，p.657-666"中描述的方法進(jìn)行。在優(yōu)選實(shí)施方案中，脫保護(hù)步驟可以通過賦予含有[18F]DE-Boc-FACBC的反應(yīng)溶液酸性條件來進(jìn)行。酸性條件可以通過各種方法賦予，例如采用將酸添加到含有[18F]DE-Boc-FACBC的溶液中的方法。此時(shí)，對(duì)于此處所使用的酸沒有特別限制，但是優(yōu)選使用選自如下的酸無機(jī)酸例如鹽酸、硫酸和硝酸；有機(jī)酸例如全氟烷基羧酸(例如三氟乙酸)。要加入的酸的量應(yīng)該足夠使含有["F]DE-Boc-FACBC的溶液的pH變?yōu)?以下。具體地，酸的量應(yīng)該使得在脫酯化步驟中得到的[18F]DE-Boc-FACBC溶液中的堿被中和，并且賦予樣品溶液以充分的酸性條件。例如，在[18F]Boc-FACBC經(jīng)過重復(fù)兩次使用0.8mL的4mol/L氬氣化鈉溶液的脫酯化時(shí)，可以將2.2mL的6mol/L鹽酸添加到洗脫的反應(yīng)液中。在脫保護(hù)步驟中，優(yōu)選將反應(yīng)溶液加熱，以便使反應(yīng)更迅速地進(jìn)行。反應(yīng)時(shí)間取決于反應(yīng)溫度等條件，但是當(dāng)上述條件下的脫保護(hù)反應(yīng)在60^C進(jìn)行時(shí)，充足的反應(yīng)時(shí)間是5分鐘。予以說明，在脫保護(hù)步驟中得到的["F]FACBC溶液可以任選地使用離子阻滯柱、氧化鋁柱、或反相柱來純化。實(shí)施例以下通過實(shí)施例和比較例更具體地說明本發(fā)明；但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限制。參考例1順式-l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-[((三氟甲基)磺酰基)氧基]—環(huán)丁烷-1-甲酸乙酯的合成順式-乙內(nèi)酰脲的水解(圖1，步驟l)將250mL的飽和氫氧化鋇水溶液添加到6.15g(相當(dāng)于25mmo1)的順式-5-(3-千氧基環(huán)丁烷)乙內(nèi)酰脲中，并將混合物在油浴中在加熱回流24小時(shí)以上。然后，使用兩種類型的系統(tǒng)作為展開劑進(jìn)行TLC分析，所述兩種類型的系統(tǒng)為氯仿曱醇=5:l(順式-乙內(nèi)酰脲的Rf值=約0.6)和氯仿甲醇=95:1(順式-乙內(nèi)酰脲的Rf值=約0.3)，然后通過確認(rèn)UV和磷鉬酸顯色來確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束。在確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后，將得到的反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入約24mL的lmol/mL硫酸，中和反應(yīng)溶液。中和后，將反應(yīng)溶液再在室溫下攪拌5分鐘，過濾生成的沉淀。然后，將濾液濃縮，得到5.67g的順式-l-氨基-3-千氧基環(huán)丁烷-l-甲酸，為白色結(jié)晶。乙基酯化(圖1，步驟2)將已充分干燥而除去水分的5.67g的順式-l-氨基-3-芐氧基環(huán)丁烷-l-甲酸溶解于200mL乙醇中。向該溶液中加入9.5mL(相當(dāng)于"mmol)的三乙胺，并將混合物在-78X:冷卻20分鐘，然后加入4.6mL(相當(dāng)于62.5mmol)的亞疏酰氯。將反應(yīng)溶液在OC攪拌1小時(shí)并在室溫下攪拌1小時(shí)，然后在油浴中在951C加熱回流過夜。然后，通過TLC分析確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束(確認(rèn)是基于UV和磷鉬酸顯色進(jìn)行的)，所述TLC分析使用氯仿曱醇-95:1(目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值-約0.6)作為展開劑。在確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后，將得到的反應(yīng)液減壓濃縮，得到7.64g的順式-l-氨基-3-爺氧基環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯，為白色結(jié)晶。Boc化(圖1,步驟3)將7.64g的順式-l-氨基-3-千氧基環(huán)丁烷-1-甲酸乙酯溶解于250mL的乙醇三乙胺-9:1的混合溶液中。將得到的溶液在冰浴中冷卻15分鐘，然后向其中加入8.6mL(相當(dāng)于37,5mmol)的二碳酸二叔丁酯，并將該混合物在室溫下攪拌過夜。然后，通過TLC分析確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束(確認(rèn)是基于UV和磷鉬酸顯色進(jìn)行的)，所述TLC分析使用己烷乙酸乙酯=1:1(目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值=約0.6)作為展開劑。在確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后，將得到的反應(yīng)液減壓濃縮，得到作為殘留物的白色結(jié)晶。向殘留物中加入150mL的冷乙酸乙酯和150mL的0.5mol/L的冷鹽酸，并將混合物在室溫下攪拌5分鐘，然后靜置分離。將有機(jī)層依次用150mL的水萃取.洗滌兩次、用150mL的飽和碳酸氫鈉水溶液萃取.洗滌、用150mL的水萃取洗滌兩次、用150mL的飽和食鹽水萃取.洗滌兩次，將萃取物用無水硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮，得到黃色油狀物。另外，將水層依次用150mL的乙酸乙酯萃取洗滌兩次，用150mL的水萃取.洗滌兩次、用150mL的飽和食鹽水萃取洗滌，將萃取物用無水硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮，由此得到少量的黃色油狀物。這一系列的操作得到8.82g的淺黃色油狀物。通過硅膠柱色譜法分離純化殘留物(己烷乙酸乙酯-l:1)，得到8.04g(相當(dāng)于23mmol)的順式-1-(N-(叔丁氧羰基)氨基)—3-節(jié)氧基-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯，為白色結(jié)晶。脫千基化(圖2，步驟4)將150mL乙醇添加到8.04g(相當(dāng)于23mmo1)的順式-l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-芐氧基-環(huán)丁烷-1-甲酸乙酯中，然后加入960mg的鈀-活性炭(10%鈀)，用氬氣排空，并將該混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)后，使用硅藻土濾出鈀-活性炭并將得到的濾液減壓濃縮，得到5.74g的白色結(jié)晶作為殘留物。反應(yīng)通過TLC分析追蹤(追蹤基于UV和茚三酮顯色進(jìn)行)，以確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，所述TLC分析使用己烷乙酸乙酯-l:l(目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值=約0.2)作為展開劑。然后，通過硅膠柱色傳法分離純化殘留物(己烷乙酸乙酯-l:l、己烷乙酸乙酯=4:1)，得到5.36g(相當(dāng)于20.7mmol)的順式-l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-羥基-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯，為白色結(jié)晶。三氟甲磺酸化(圖3，步驟5)將2.07g(8mmo1)的順式-l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-羥基-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯溶解于26mL的吡啶中，并將該溶液在冰浴中攪拌20分鐘。向其中加入2.0mL(相當(dāng)于12mmol)的無水三氟甲烷磺酸，直接攪拌30分鐘。反應(yīng)通過TLC分析追蹤(追蹤基于茚三酮顯色進(jìn)行)，以確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束，所述TLC分析使用己烷乙醚=1:1(目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值=約0.6)作為展開劑。在確認(rèn)反應(yīng)結(jié)束后，將100mL水和100mL乙醚添加到反應(yīng)液中，并依次用100mL的lmol/L鹽酸萃取洗滌兩次，用100mL的水萃取.洗滌兩次、用100mL的飽和食鹽水萃取.洗滌兩次。得到的萃取液用無水硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮，得到2.78g的淺黃色結(jié)晶。將該反應(yīng)混合物通過硅膠柱色譜法分離純化(己烷乙醚=3:1),得到白色結(jié)晶，將得到的白色結(jié)晶再次用戊烷乙醚重結(jié)晶，得到1.84g(相當(dāng)于4.7mmo1)的順式-l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-[((三氟甲基)磺酰基)氧基]-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯。比較例使含有[18F]氟化物離子(13-182GBq)的H2180通過陰離子交換柱，使得["F]氟化物離子被吸附并捕集在柱上。然后使碳酸鉀溶液通過該柱，以洗脫["F]氟化物離子，然后將該柱用水沖洗，并將洗滌液與洗脫液合并。向得到的溶液中加入4，7，13，16，21，24-六氧雜-1，10-二氮雜雙環(huán)[8.8.8]二十六烷(商品名Kryptofix222，默克^^司制)的乙腈溶液，并將混合物加熱蒸千。向蒸干后的混合物中加入將32mg的1-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-[((三氟甲基)磺?；?氧基]-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯溶解于lmL乙腈而得的溶液，并將得到的混合物在83C攪拌3分鐘，以便進(jìn)行放射性氟化反應(yīng)。然后將該混合物在室溫下冷卻5分鐘，向其中加入4mL乙醚。將所得混合物通過SilicaSep-Pak(Waters有限公司的注冊(cè)商標(biāo)，或來自日本W(wǎng)aters林式會(huì)社的商品名)，得到[18F]Boc-FACBC的乙腈/乙醚溶液。向得到的[18F]Boc-FACBC的乙腈/乙醚溶液中加入1.5mL的4mol/L鹽酸，在120t:加熱15分鐘，進(jìn)行脫保護(hù)。然后將得到的產(chǎn)物依次通過離子阻滯柱(商品名AG11A8，日本Bio—RadLaboratories公司制)、氧化鋁柱(商品名Sep-Pak(注冊(cè)商標(biāo)，WatersInvestmentsLimited公司制)lightALUMN，日本W(wǎng)aters林式會(huì)社制)、反相柱(商品名OasisHLBPlusEXTRACTIONCartridgeColumn,日本W(wǎng)aters林式會(huì)社制)進(jìn)行純化，得到[18F]FACBC溶液。["F]FACBC溶液的產(chǎn)量為9.4~13.4mL。將得到的[18F]FACBC在下述條件下進(jìn)行TLC分析，根據(jù)以下方程式(l)計(jì)算放射化學(xué)純度。TLC分析條件展開相乙腈/曱醇/水/乙酸=20/5/5/1TLC板SilicaGel60F254(商品名，膜厚0.25mm，默克/>司制)展開長(zhǎng)度10cmTLC掃描器RitaStar(由Raytest/>司制)放射仆學(xué)鄉(xiāng)產(chǎn)P/"-["F]FACBC峰的放射性活度(i)放射化子純度(/。)-TLc板上的總放射性活度、1J另外，使用由下述條件下的HPLC分析確認(rèn)的各雜質(zhì)的峰面積值(以下簡(jiǎn)稱"校正面積值，，)根據(jù)以下方程式(2)進(jìn)行校正得到的值來比較目標(biāo)產(chǎn)物中的非放射性雜質(zhì)的量。將供HPLC分析用的樣品溶液用生理鹽水適當(dāng)稀釋(稀釋倍率=2.1~9.9)。校正面積值=各雜質(zhì):^^l條面積x稀釋倍率X「F]尸JC^C溶液的產(chǎn)量o、進(jìn)樣量HPLC測(cè)定條件柱CAPCELLPAKC18MG(商品名，林式會(huì)社資生堂制，尺寸5ym,4.6mmI.D.x250mm)柱溫室溫(約25X:)流動(dòng)相使用含有5腿ol/L辛基磺酸鈉的磷酸鹽緩沖液(pH2.1)作為溶液A，使用乙腈作為溶液B，通過如表1中所示改變?nèi)芤篈和B的混合比例進(jìn)行濃度梯度控制。表1.HPLC分析中的流動(dòng)相<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>流動(dòng)相流速1.OmL/分鐘進(jìn)樣量10"L柱后衍生物化條件反應(yīng)液0.3mol/L硼酸緩沖液(pH10.4)、6mmol/L的鄰苯二醛、6mmol/LN-乙?；?L-半胱氨酸反應(yīng)液流速1.0mL/分鐘反應(yīng)溫度50X:檢測(cè)器熒光檢測(cè)器(型號(hào)Waters2475型(日本W(wǎng)aters株式會(huì)社制；激發(fā)波長(zhǎng)330nm;熒光波長(zhǎng)430nm)將比較例的實(shí)驗(yàn)重復(fù)19次。制得的[18F]FACBC的放射化學(xué)純度為98.8±0.4%。在HPLC圖譜上確認(rèn)的雜質(zhì)峰的定義如表2所示。各雜質(zhì)峰的校正面積值示于表3中。表2.每種雜質(zhì)的命名<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)施例1和2使含有["F]氟化物離子(7-36GBq)的H2180通過陰離子交換柱，使[18F]氟化物離子被吸附和捕集在柱上。然后使碳酸鉀溶液通過該柱，洗脫["F]氟化物離子，再用水沖洗該柱，并將洗滌液與洗脫液合并。向所得溶液中加入4,7，13，16，21，24-六氧雜-1，10-二氮雜雙環(huán)[8.8.8]二十六烷(商品名Kryptofix222,默克公司制)的乙腈溶液，并將混合物加熱并蒸千。向蒸干的混合物中加入將32mg的l-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-3-[((三氟甲基)磺酰基)氧基]-環(huán)丁烷-l-甲酸乙酯溶于lfflL乙腈而得的溶液，并將得到的混合物在攪拌下在83C加熱3分鐘。將所得反應(yīng)液在室溫下冷卻5分鐘，然后用14mL水稀釋，并使得到的溶液通過如表4所示的Sep-Pak(注冊(cè)商標(biāo)，Waters<&司制)柱(日本W(wǎng)aters林式會(huì)社制)，再將該柱用10mL水洗滌。表4.用于每個(gè)實(shí)施例的固相柱<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>使空氣通過固相柱將其干燥，然后向該柱添加0.8mL的4mol/L氫氧化鈉溶液，然后關(guān)閉柱的出口。經(jīng)過3分鐘后，打開柱的出口，從固相柱洗脫堿溶液，并將洗脫液回收于小瓶中。再向該柱填充0.8mL的4mol/L氫氧化鈉溶液，重復(fù)上述操作。然后將固相柱用3mL水洗滌，并將洗滌液與先前回收的堿溶液合并，向上述回收的溶液中加入2.2mL的6mol/L鹽酸，在60匸進(jìn)行5分鐘脫保護(hù)反應(yīng)。然后將得到的產(chǎn)物依次通過離子阻滯柱(商品名AG11A8,曰本Bio-RadLaboratories公司制)、氧化鋁柱(商品名Sep-Pak(注冊(cè)商標(biāo)，Waters乂/^司制)lightALUMN，日本W(wǎng)aters林式會(huì)社制)、和反相柱(商品名OasisHLBPlusEXTRACTIONCartridgeColumn,日本W(wǎng)aters林式會(huì)社制)進(jìn)行純化，得到「F]FACBC溶液。["F]FACBC溶液的產(chǎn)量為11.9~17.0mL。在和比較例相同的條件下對(duì)所得["F]FACBC溶液評(píng)價(jià)[18F]FACBC的放射化學(xué)純度和各雜質(zhì)的校正面積值。予以說明，將供HPLC分析用的樣品溶液使用生理鹽水適當(dāng)稀釋(稀釋倍率-3.0~4.7)。實(shí)施例1和2制備的["F]FACBC的放射化學(xué)純度分別是99.4%和99.3%。表5顯示了各雜質(zhì)的峰的校正面積值。如表5所示，實(shí)施例1和2的樣品，與根據(jù)常規(guī)方法制備的樣品(比較例l)相比，除了雜質(zhì)D之外的所有非放射性雜質(zhì)的量都降低了，并且所有雜質(zhì)的校正面積值的總量減少到一半以下。該結(jié)果確認(rèn)，通過采用本發(fā)明的[18F]FACBC的制備方法可以降低非放射性雜質(zhì)的量。表5.各雜質(zhì)的校正面積值<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>權(quán)利要求1.放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的制備方法，其包括在反相柱中保留下式(1)所示的化合物，向該柱中填充堿溶液，使上述化合物脫酯化，然后從該柱中排出該堿溶液，由此得到下式(2)所示的化合物的脫酯化步驟，式中，R1是直鏈或支鏈的C1-C10烷基鏈或芳香族取代基，R2是保護(hù)基；式中，X是鈉或鉀，R2是保護(hù)基；以及，將在脫酯化步驟中得到的上述化合物的氨基保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)，得到下式(3)所示的化合物的脫保護(hù)步驟，2.權(quán)利要求1所述的放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的制備方法，其中，用于脫酯化步驟的反相柱中含有的填充劑具有d-"烷基鏈通過硅連接于載體上的結(jié)構(gòu)。3.權(quán)利要求1或2所述的放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的制備方法，其中，用于脫酯化步驟的堿溶液是氫氧化鈉水溶液。全文摘要本發(fā)明提供了[¹⁸F]FACBC的制備方法，其可以降低雜質(zhì)的產(chǎn)生量。公開了放射性氟標(biāo)記有機(jī)化合物的制備方法，該方法包括在反相柱中保留下式(1)所示的化合物，向該柱中填充堿溶液，使上述化合物脫酯化，然后從該柱中排出該堿溶液，由此得到下式(2)所示的化合物的脫酯化步驟，(式(1)中，R¹是直鏈或支鏈的C₁-C₁₀烷基鏈或芳香族取代基，R²是保護(hù)基)；(式(2)中，X是鈉或鉀)；以及，將在脫酯化步驟中得到的化合物的氨基保護(hù)基進(jìn)行脫保護(hù)，得到式(3)所示的化合物的脫保護(hù)步驟(式(1)至(3)見右上)。文檔編號(hào)C07C229/48GK101443307SQ20078001712公開日2009年5月27日申請(qǐng)日期2007年5月7日優(yōu)先權(quán)日2006年5月11日發(fā)明者外山正人,新村俊幸,林明希男,金子惠美,黑崎文枝申請(qǐng)人:日本醫(yī)事物理股份有限公司