專利名稱：：抗cd20抗體和使用方法抗CD20抗體和使用方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及能夠結(jié)合CD20的抗體、使用所述抗體的方法以及用于治療與表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)的疾病的方法。
背景技術(shù)：
：抗CD20分子(也稱為人B-淋巴細(xì)胞-限制性-分化抗原或Bp35)是位于前B淋巴細(xì)胞和成熟B淋巴細(xì)胞上的具有大約35kD的分子量的疏水性跨膜蛋白(Valentine等人(1989)J.Biol.Chem.264(19):11282-11287;和Einfield等人(1988)EMBOJ.7(3):311-717)。在超過90%的來自外周血或淋巴樣器官的B細(xì)胞表面上發(fā)現(xiàn)CD20，其在早期前B細(xì)胞發(fā)育過程中表達(dá)并且保持直至漿細(xì)胞分化。CD20存在于正常B細(xì)胞以及惡性B細(xì)胞上。特別地，CD20在超過90。/。的B細(xì)胞非非何杰金(氏)淋巴瘤(NHL)上表達(dá)(Anderson等人(1984)Blood63(6):1424-1433)，但未在造血干細(xì)胞、前B細(xì)胞、正常漿細(xì)胞或其他正常組織中發(fā)現(xiàn)(Tedder等人(1985)J.Immunol.135(2):973-979)。CD20蛋白的85個氨基酸羧基端區(qū)域位于細(xì)胞質(zhì)中。該區(qū)域的長度與其他B細(xì)胞特異性表面結(jié)構(gòu)例如分別具有3、3、28、15和16個氨基酸的相對短的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)區(qū)域的IgM、IgD和IgG重鏈或組織相容性抗原II類的ct或P鏈形成對比(Komaromy等人(1983)NAR11:6775-6785)。在最后61個羧基端氨基酸中，21個是酸性殘基，雖然只有2個是堿性的，表明該區(qū)域具有強凈負(fù)電荷。GenBank登錄號是NP—690605。據(jù)認(rèn)為，CD20可能參與調(diào)控B細(xì)胞的活化和分化過程中的早期步驟(Tedder等人(1986)Eur.J.Immunol.16:881-887)和可用作鉤離子通道(Tedder等人(1990)J.Cell.Biochem.14D:195)。盡管還不明確CD20在促進(jìn)B細(xì)胞的增殖和/或分化中的實際功能，但其提供了抗體介導(dǎo)的療法的重要靶標(biāo)，以控制或殺傷參與癌癥和自身免疫性病癥的B細(xì)胞。特別地，CD20在腫瘤細(xì)胞例如NHL上的表達(dá)使其成為抗體介導(dǎo)的療法的重要靶標(biāo)，所述療法將治療劑特異性靼向CD20陽性的贅生性細(xì)胞。然而，雖然迄今為止獲得的結(jié)果明確地將CD20確立為免疫療法的有用靶標(biāo)，但它們也顯示出目前可獲得的鼠抗體和嵌合抗體不構(gòu)成理想的治療劑。發(fā)明概述提供了用于治療與CD20相關(guān)的疾病的組合物和方法，所述疾病包括淋巴瘤、自身免疫性疾病和移植排斥。組合物包括能夠結(jié)合位于表達(dá)人CD20的細(xì)胞表面上的人CD20抗原的抗CD20抗體，其中所述抗體與利妥昔單抗相比具有增加的補體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(CDC)。組合物還包括單克隆抗體的抗原結(jié)合片段、變體和衍生物、產(chǎn)生這些抗體組合物的細(xì)胞系以及編碼抗體的氨基酸序列的分離的核酸分子。本發(fā)明還包括在藥學(xué)上可接受的載體中的、包含本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體、衍生物的藥物組合物。本文中公開的單克隆抗體具有對于CD20的強親和力并且特征在于與利妥昔單抗相比提高的CDC功能。本發(fā)明的抗體介導(dǎo)對表達(dá)CD20的細(xì)胞的殺傷。本發(fā)明的抗體能夠特異性結(jié)合在人細(xì)胞表面上表達(dá)的人CD20抗原并且特征在于在抗CD20重鏈和/或抗CD20輕鏈中具有至少一個最優(yōu)化的互補決定區(qū)(CDR)。最優(yōu)化的CDR已進(jìn)行了修飾并且包括SEQIDNO:1-8中任一個所示的序列。公開了在抗CD20重鏈的至少一個CDR中和輕鏈的CDR3中具有改變的特定抗體序列。本發(fā)明的組合物包含含有至少一個最優(yōu)化的CDR的、抗CD20抗體和其抗原結(jié)合抗體片段、變體和衍生物。在本發(fā)明的一個實施方式中，治療方法包括對患者施用治療有效劑量的藥物組合物，所述藥物組合物包含合適的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。與表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)的疾病包括自身免疫性疾病、癌癥以及器官和組織移植物排斥。可通過本發(fā)明的方法治療或預(yù)防的淋巴瘤包括非何杰金氏淋巴瘤(高度淋巴瘤、中度淋巴瘤和低度淋巴瘤)、何杰金氏病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病(急性淋巴母細(xì)胞白血病)、骨髓瘤、慢性淋巴細(xì)胞性白血病和成髓細(xì)胞性白血病(myeloblastsleukemias)。使用本發(fā)明的方法治療的特定免疫疾病包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、銀屑病、自身免疫性血小板減少性紫癜、多發(fā)性硬化癥、強直性脊柱炎、重癥肌無力和尋常天皰瘡。此類抗體還可通過抑制自身免疫反應(yīng)來用于預(yù)防器官和組織移植的排斥，用于通過靶向和殺傷B淋巴細(xì)胞來治療淋巴瘤以及用于以特殊的方式將毒素遞送至具有CD20的細(xì)胞。附圖概述圖1顯示原始人源化鼠抗CD20單克隆抗體(mAb1097)的H1286可變重鏈結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:29)和L373可變輕鏈結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:10)的氨基酸序列。以下劃線標(biāo)示組成各可變結(jié)構(gòu)域的互補決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3)的殘基。圖2顯示在人源化鼠抗CD20mAb1097的H1286可變重鏈結(jié)構(gòu)域的CDR3內(nèi)(該CDR3稱為"271")進(jìn)行的產(chǎn)生1236(SEQIDNO:1)、1237(SEQIDNO:2)和1238(SEQIDNO:3)最優(yōu)化的CDR3的置換(參見實施例1)。271CDR3序列(SEQIDNO:30)與稱為C2B8(利妥昔單抗)的嵌合鼠/人抗CD20抗體的重鏈內(nèi)的可變結(jié)構(gòu)域的CDR3的序列等同。圖3顯示最優(yōu)化的H1569(SEQIDNO:12)、H1570(SEQIDNO:13)和H1571(SEQIDNO:14)可變重鏈結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。H1569包括最優(yōu)化的1236CDR3(SEQIDNO:1);H1570包括最優(yōu)化的1237CDR3(SEQIDNO:2),以及H1571包括最優(yōu)化的1238CDR3(SEQIDNO:3)。將這些最優(yōu)化的可變重鏈結(jié)構(gòu)域的每一個與L373可變輕鏈結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:10)配對來產(chǎn)生最優(yōu)化的mAb1236、mAb1237和mAb1238。分別以下劃線標(biāo)示組成各可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2和CDR3的殘基。圖4顯示最優(yōu)化的H1569(SEQIDNO:19)、H1570(SEQIDNO:20)和H1571(SEQIDNO:21)可變重鏈結(jié)構(gòu)域的編碼序列。圖5顯示L373可變輕鏈結(jié)構(gòu)域的氨基酸(SEQIDNO:IO)和編碼(SEQIDNO:23)序列。分別以下劃線標(biāo)示CDR1、CDR2和CDR3的殘基和編碼序列。圖6A-6D顯示與mAb271(具有與利妥昔單抗相同的序列)相比，最優(yōu)化的人源化mAb1236、mAbl237和mAb1238的結(jié)合特異性的結(jié)果。通過焚光孩i容量測定#支術(shù)(FlurometricMicrovolumeAssayTechnology)(FMAT)測定這些最優(yōu)化的mAb對于表達(dá)CD20的CHO細(xì)胞(圖6A)、CD20+EB1細(xì)胞(圖6B)、CD2(TCH0載體(圖6C)和CD20_NS0(圖6D)的結(jié)合特異性。參見實施例2。NS0是不表達(dá)人CD20的小鼠骨髓瘤細(xì)胞系。圖7顯示測定與mAb271相比，最優(yōu)化的mAb1236、1237和1238的表位識別的鼠2H7阻斷測定的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb全都識別與mAb271相同的表位。參見實施例2。圖8顯示測定與mAb271相比，最優(yōu)化的mAb1236、1237和1238的補體依賴細(xì)胞毒性(CDC)的CDC-mAb解離率(off-rate)測定的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb具有與對于mAb271觀察到的CDC功能活性相比增加的CDC功能活性。參見實施例2。圖9顯示測定與mAb271相比，抗Daudi耙細(xì)胞的最優(yōu)化mAb1236、1237和1238的依賴抗體的細(xì)胞毒性(ADCC)活性的ADCC測定的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb具有至少等于對于mAb271觀察到的ADCC活性的ADCC活性。參見實施例2。圖10顯示測定與用作同種型對照的mAb271和mAbll相比，抗Ramos(NHL)細(xì)胞的最優(yōu)化mAb1236、1237和1238的凋亡活性的直接凋亡測定(不依賴于CDC和ADCC活性)的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb在誘導(dǎo)凋亡方面與mAb271—樣有效。參見實施例2。圖11顯示對于最優(yōu)化的mAb1589的H1639可變重鏈結(jié)構(gòu)域(SEQIDN0:16)和L373可變輕鏈結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:IO)的氦基酸序列。以下劃線標(biāo)示組成各可變結(jié)構(gòu)域的互補決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3)的殘基。圖12分別顯示最優(yōu)化的mAb1589的重鏈和輕鏈內(nèi)的H1639可變重鏈結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:22)和L373可變輕鏈結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:23)的編碼序列。分別以下劃線標(biāo)示可變重鏈和可變輕鏈結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2和CDR3的密碼子。圖13顯示測定與mAb271、陰性對照抗體mAbll、最優(yōu)化的mAb1237和利妥昔單抗(RUuxai^)相比，最優(yōu)化的mAb1588、1589、1590、1652和1692的表位識別的鼠2H7阻斷測定的結(jié)果。除了陰性對照外，所有受試mAb識別相同的或重疊的表位。參見實施例4。圖14顯示測定與對于mAb271、11和最優(yōu)化的mAb1237觀察到的CDC活性相比，抗耙Daudi(NHL)細(xì)胞的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的CDC活性的CDC測定的結(jié)果。所有最優(yōu)化的mAb通常介導(dǎo)比niAb271介導(dǎo)的更大的CDC功能活性。參見實施例4。圖15A和15B顯示測定與對于mAb271、mAb11和最優(yōu)化的mAb1237所觀察到的CDC活性相比，抗兩個耙B-CLL細(xì)胞系、EHEB細(xì)胞(圖15A)和MEC-1細(xì)胞(圖15B)的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的CDC活性的CDC測定的結(jié)果。所有最優(yōu)化的mAb具有與mAb271相比增加的CDC功能活性。參見實施例4。圖16顯示測定與mAb271和最優(yōu)化的mAb1237相比，最優(yōu)化的mAb1588、1590、1652和1692的CDC活性的CDC-mAb解離率測定的結(jié)果。所有最優(yōu)化的mAb具有與對于mAb271所觀察到的CDC功能活性相比增加的CDC功能活性。參見實施例4。圖17A和17B顯示測定與對于mAb271、最優(yōu)化的mAb1237和陰性對照mAbll(在這些圖中稱為"NEG，，)相比，抗兩個靶NHL細(xì)胞系，Daudi細(xì)胞(圖17A)和WIL2-S細(xì)胞(圖17B)的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的CDC活性的非放射性CDC測定的結(jié)果。參見實施例4。圖18A和18B顯示測定與對于mAb271、最優(yōu)化的mAb1237和陰性對照mAbll(在這些圖中稱為"NEG")相比，抗兩種靶B-CLL細(xì)胞系，EHEB細(xì)胞(圖18A)和MEC-1細(xì)胞(圖18B)的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的CDC活性的非放射性CDC測定的結(jié)果。參見實施例4。圖19A和19B顯示測定與對于mAb271、最優(yōu)化的mAb1237和陰性對照mAbll(在這些圖中稱為"NEG")所觀察到的CDC活性相比，抗兩種耙EBV-轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞系("正常"B細(xì)胞)、SSBLCL細(xì)胞(圖19A)和MelKBLCL細(xì)胞(圖19B)的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的CDC活性的非放射性CDC測定的結(jié)果。參見實施例4。圖20顯示測定與mAb271、最優(yōu)化的mAb1237和對照IgG相比，抗Daudi(NHL)細(xì)胞的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的ADCC活性的ADCC測定的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb具有與對于mAb271觀察到的ADCC活性相似的ADCC活性。參見實施例4。圖21顯示測定與mAb271、最優(yōu)化的mAb1237和對照IgG相比，抗MEC-1(B-CLL)細(xì)胞的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的ADCC活性的ADCC測定的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb具有與對于mAb271的所觀察到的ADCC活性相似的ADCC活性。參見實施例4。圖22顯示測定與用作同種型對照的mAb271和mAb11相比，抗Ramos(NHL)細(xì)胞的最優(yōu)化mAb1236、1237和1238的凋亡活性的直接凋亡測定(不依賴于CDC和ADCC活性)。最優(yōu)化的mAb在誘導(dǎo)凋亡方面與mAb271—樣有效。參見實施例4。圖23顯示測定與mAb271和最優(yōu)化的mAb1237相比，抗Daudi(NHL)細(xì)胞的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的細(xì)胞殺傷活性的全血測定的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb具有與mAb271相比，相等的或更好的對這些細(xì)胞的裂解作用。參見實施例4。圖24A和24B顯示測定與mAb271和最優(yōu)化的mAb1237相比，抗兩種耙B-CLL細(xì)胞系，EHEB細(xì)胞(圖24A)和MEC-1細(xì)胞(圖24B)的最優(yōu)化mAb1588、1589、1590、1652和1692的細(xì)胞殺傷活性的全血測定的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb具有與mAb271相比，相等的或更好的對這些細(xì)胞的裂解作用。參見實施例4。圖25顯示測定與mAb271和最優(yōu)化的mAb1237相比，抗EBV-轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞系MelKBLCL("正常"B細(xì)胞)的最優(yōu)化mAb1588、l589、1590、1652和1692的ADCC活性的ADCC全血測定的結(jié)果。最優(yōu)化的mAb具有與mAb271相比，相等的或更好的對這些細(xì)胞的裂解作用。參見實施例4。圖26顯示在Daudi細(xì)胞異種移植(xenograft)模型中，測定mAb1589的活性的最優(yōu)化的人源化抗小鼠CD20單克隆抗體1589的體內(nèi)測試的結(jié)果。mAb1589抗體有效延長具有Daudi細(xì)胞異種移植物的小鼠的存活。參見實施例5。發(fā)明詳述I.定義要注意，術(shù)語"一"或"一個"實體是指一個或多個該實體；例如"一個抗CD20抗體"理解為代表一個或多個抗CD20抗體。這樣，術(shù)語"一"("一個，，)、"一個或多個"、和"至少一個"可在本文中互換使用。如此處所使用的，術(shù)語"腫瘤"是指所有贅生性細(xì)胞生長和增殖，無論是惡性的還是良性的，以及所有的癌前細(xì)胞和組織。術(shù)語"癌癥"和"癌性的"是指或描述特征在于不受控制細(xì)胞生長的哺乳動物中的生理狀況。癌癥的實例包括但不限于淋巴瘤或白血病o如此處所使用的，術(shù)語"多肽"意欲包括單個"多肽"以及多個"多肽"，并且是指由通過酰胺鍵(也稱為肽鍵)線性連接的單體(氨基酸)組成的分子。術(shù)語"多肽"是指兩個或更多個氨基酸的任何鏈，24但不指特定長度的產(chǎn)物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、"蛋白質(zhì)"、"氨基酸鏈，，或用于表示兩個或更多個氨基酸的鏈的任何其他術(shù)語包括在"多肽"的定義內(nèi)，術(shù)語"多肽"可被這些術(shù)語的任一個替代或互換。術(shù)語"多肽"也意指多肽的表達(dá)后修飾的產(chǎn)物，包括但不限于糖基化、?；⒘姿峄Ⅴ０坊?、通過已知的保護(hù)/封閉基團產(chǎn)生的衍生化、蛋白質(zhì)水解切割或通過非天然的氨基酸產(chǎn)生的修飾。多肽可來源于天然生物源或通過重組技術(shù)產(chǎn)生，但不必從指定的核酸序列翻譯而來。其可以以任何方式，包括通過化學(xué)合成來產(chǎn)生。本發(fā)明的多肽可以是大約3或更多個、5個或更多個、IO個或更多個、20個或更多個、25個或更多個、50個或更多個、75個或更多個、IOO個或更多個、200個或更多個、500個或更多個、l，OOO個或更多個或者2，000個或更多個氨基酸的大小。多肽可具有確定的三維結(jié)構(gòu)，盡管它們不必具有這樣的結(jié)構(gòu)。具有確定的三維結(jié)構(gòu)的多肽稱為折疊的，不具有確定的三維結(jié)構(gòu)而采用大量不同的構(gòu)象的多肽稱為非折疊的。如此處所使用的，術(shù)語糖蛋白是指與至少一個糖部分偶聯(lián)的蛋白質(zhì)，所述糖部分通過氨基酸殘基例如絲氨酸殘基或天冬酰胺殘基的含氧或含氮側(cè)鏈與蛋白質(zhì)連接。"分離的"多肽或其片段、變體或衍生物意指不存在于其天然環(huán)境中的多肽。不需要特定的純化水平。例如，可從其天然或自然環(huán)境中取出分離的多肽。宿主細(xì)胞中表達(dá)的重組產(chǎn)生的多肽或蛋白質(zhì)對于本發(fā)明的目的被認(rèn)為是分離的，已通過任何合適的技術(shù)分離的、分級分離的或部分或大體上純化的天然或重組多肽也被認(rèn)為是分離的。也包括為本發(fā)明的多肽的是上述多肽的片段、衍生物、類似物或變體以及其任何組合。術(shù)語"片段"、"變體"、"衍生物"和"類似物"，當(dāng)指本發(fā)明的抗CD20抗體或抗體多肽時，包括保留本發(fā)明的相應(yīng)抗體或抗體多肽的至少一些抗原結(jié)合性質(zhì)的任何多肽。除了本文其他地方描述的特定抗體片段外，本發(fā)明的多肽的片段包括蛋白水解片段以及缺失片段。本發(fā)明的抗CD20抗體和抗體多肽的變體包括上述片段，還有由于氨基酸置換、缺失或插入而具有改變的氨基酸序列的多肽。變體可以是天然的或是非天然的。非天然的變體可使用本領(lǐng)域內(nèi)已知的誘變技術(shù)產(chǎn)生。變體多肽可包括保守的或非保守的氨基酸置換、缺失或添加。本發(fā)明的抗CD20抗體和抗體多肽的衍生物是已被改肽。實例包括融合蛋白。變體多肽在本文中還可稱為"多肽類似物"。如此所使用的，抗CD20抗體或抗體多肽的"衍生物"是指具有一個或多個通過功能側(cè)基的反應(yīng)化學(xué)衍生的殘基的受試多肽。"衍生物"也包括包含一個或多個20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的天然的氨基酸衍生物的那些多肽。例如，4-羥脯氨酸可置換脯氨酸；5-羥賴氨酸可置換賴氨酸；3-曱基組氨酸可置換組氨酸；高絲氨酸可置換絲氨酸；以及鳥氨酸可置換賴氨酸。術(shù)語"多核苷酸"意欲包括單個核酸以及多個核酸，并且指分離的核酸分子或構(gòu)建體，例如，信使RNA(mRNA)或質(zhì)粒DNA(pDNA)。多核苷酸可包括常規(guī)磷酸二酯鍵或非常規(guī)鍵(例如，酰胺鍵，例如見于肽核酸(PNA)中的酰胺鍵)。術(shù)語"核酸"是指存在于多核苷酸中的任一種或多種核酸片段，例如DNA或RNA片段。"分離的"核酸或多核苷酸意指已從其天然環(huán)境取出的核酸分子，DNA或RNA。例如，載體中包含的編碼抗CD20抗體的重組多核苷酸對于本發(fā)明的目的被認(rèn)為是分離的。分離的多核苷酸的其他實例包括保持在異源宿主細(xì)胞中的重組多核苷酸或溶液中的純化的(部分或大體上)多核苷酸。分離的RNA分子包括本發(fā)明的多核苷酸的體內(nèi)或體外RNA轉(zhuǎn)錄物。根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷酸或核酸還包括合成產(chǎn)生的此類分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可以包括調(diào)控元件例如啟動子、核糖體結(jié)合位點或轉(zhuǎn)錄終止子。如本文中所使用的，"編碼區(qū)"是由翻譯成氨基酸的密碼子組成的核酸的部分。盡管"終止密碼子"(TAG、TGA或TAA)不被翻譯成氨基酸，但其可被認(rèn)為是編碼區(qū)的一部分，但任何側(cè)翼序列，例如啟動子、核糖體結(jié)合位點、轉(zhuǎn)錄終止子、內(nèi)含子等不是編碼區(qū)的部分。本發(fā)明的兩個或更多個編碼區(qū)可存在于單個多核苷酸構(gòu)建體中，例如存在于單個載體中或存在于單獨的多核苷酸構(gòu)建體中，例如存在于單獨的(不同的)載體中。此外，任何載體可包含單個編碼區(qū)，或可包含兩個或更多個編碼區(qū)，例如單個載體可單獨編碼免疫球蛋白重鏈可變區(qū)和免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)。此外，本發(fā)明的載體、多核苷酸或核酸可編碼異源編碼區(qū)(融合或未融合至編碼抗CD20抗體或其片段、變體或衍生物的核酸的)。異源編碼區(qū)包括但不限于具體的元件或基序，例如分泌信號肽或異源功能結(jié)構(gòu)域。在某些實施方式中，多核苷酸或核酸是DNA。在DNA的情況下，包含編碼多肽的核酸的多核苷酸可包括與一個或多個編碼區(qū)有效連接的啟動子和/或其他轉(zhuǎn)錄或翻譯控制元件。有效連接是當(dāng)基因產(chǎn)物例如多肽的編碼區(qū)與一個或多個調(diào)控序列以如將基因產(chǎn)物的表達(dá)置于調(diào)控序列的影響或控制之下的方式的方式連接時的連接。如果啟動子功能的誘導(dǎo)導(dǎo)致編碼期望的基因產(chǎn)物的mRNA轉(zhuǎn)錄和如果兩個DNA片段之間的連接的性質(zhì)不干擾表達(dá)調(diào)控序列指導(dǎo)基因產(chǎn)物表達(dá)的能力或不干擾DNA模板被轉(zhuǎn)錄的能力，那么兩個DNA片段(例如編碼多肽的區(qū)域和與其連接的啟動子)是"有效連接的"。因此，如果所述啟動子能夠影響該核酸的轉(zhuǎn)錄，啟動子區(qū)域可與編碼多肽的核酸有效連接。啟動子可以是只在預(yù)先確定的細(xì)胞中指導(dǎo)DM充分轉(zhuǎn)錄的細(xì)胞特異性啟動子。其他轉(zhuǎn)錄控制元件，除了啟動子以外，例如增強子、操縱子、抑制子和轉(zhuǎn)錄終止信號可與指導(dǎo)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄的多核苷酸有效連接。本文中公開了合適的啟動子和其他轉(zhuǎn)錄控制區(qū)。許多轉(zhuǎn)錄控制區(qū)對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。此類轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包括但不限于在脊推動物細(xì)胞中起作用的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)，例如但不限于來自巨細(xì)胞病毒(與內(nèi)含子-A連接的立即早期啟動子)、猿猴病毒40(早期啟動子)和逆轉(zhuǎn)錄病毒(例如勞斯肉瘤病毒)的啟動子和增強子片段。其他轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包括來源于脊推動物基因例如肌動蛋白、熱激蛋白、牛生長激素和兔子P-珠蛋白的控制區(qū)以及能夠在真核細(xì)胞中控制基因表達(dá)的其他序列。其他合適的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包括組織特異性啟動子和增強子以及淋巴因子(lymphokine)誘導(dǎo)型啟動子(例如，由干擾27素或白細(xì)胞介素誘導(dǎo)的啟動子)。類似地，許多翻譯控制元件對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。此類控制元件包括但不限于核糖體結(jié)合位點、翻譯起始和終止密碼子以及來源于微小RNA病毒的元件(特別是內(nèi)核糖體進(jìn)入位點或IRES，也稱為CITE序列)。在其他實施方式中，本發(fā)明的多核苷酸是例如以信使RNA(mRNA)的形式存在的RNA。本發(fā)明的多核苷酸和核酸編碼區(qū)可與編碼分泌肽或信號肽的其他的編碼區(qū)連接，所述分泌或信號肽指導(dǎo)由本發(fā)明的多核苷酸編碼的多肽的分泌。根據(jù)信號假說，由哺乳動物細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)具有信號肽或分泌前導(dǎo)序列，所述信號肽或分泌前導(dǎo)序列在起始生長蛋白質(zhì)鏈外運穿過粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)后被從成熟蛋白質(zhì)切割。本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識到，由脊推動物細(xì)胞分泌的多肽通常具有融合至所述多肽的N末端的信號肽，所述信號肽從完全或"全長"多肽切割，從而產(chǎn)生所述多肽的分泌的或"成熟的"形式。在某些實施方式中，使用天然信號肽例如免疫球蛋白重鏈或輕鏈信號肽，或該序列的功能性衍生物(其保持指導(dǎo)與其有效連接的多肽的分泌的能力)。備選地，可使用異源哺乳動物信號肽或其功能衍生物。例如，野生型前導(dǎo)序列可置換為人組織纖溶酶原激活劑(TPA)或小鼠P-葡糖苷酸酶的前導(dǎo)序列。本發(fā)明涉及某些抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。除非特別地提及全長大小的抗體例如天然的抗體，術(shù)語"抗CD20抗體"包括全長大小的抗體以及這樣的抗體的抗原結(jié)合片段、變體、類似物或衍生物，例如天然的抗體或免疫球蛋白分子或改造的抗體分子或以與抗體分子相似的方式結(jié)合抗原的片段。術(shù)語"抗體"和"免疫球蛋白"在本文中可互換使用?？贵w或免疫球蛋白包含至少重鏈的可變結(jié)構(gòu)域，并且通常包含至少重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域。脊推動物系統(tǒng)中的基本免疫球蛋白結(jié)構(gòu)相對詳盡地為人理解。參見例如，Harlow等人(1988)Antibodies:ALaboratoryManual(2nded.;ColdSpringHarborLaboratoryPress)。術(shù)語"免疫球蛋白"包括可以通過生物化學(xué)方式區(qū)分的種類廣泛的多肽，這將在下文中進(jìn)行更詳細(xì)的討論。本領(lǐng)域的技術(shù)人員知道重鏈可以分為gamma、mu、alpha、delta或epsilon，(y、P、a、5、s)，并且其中還有一些亞類(例如yl-Y4)。該鏈的性質(zhì)將抗體的"類別"分別確定為IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亞類(同種型)(例如Igd、IgG2、IgG3、IgG4、IgAi等)是經(jīng)過充分表征的，并且已知其賦予了功能特異性。根據(jù)本公開，這些類別和同種型的抗體中的每個的修飾形式對于技術(shù)人員而言都是易于辨別的，因此它們都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。所有免疫球蛋白類別清楚地在本發(fā)明的范圍內(nèi)，以下討論總體上針對免疫球蛋白分子的IgG類別。關(guān)于IgG,其是標(biāo)準(zhǔn)的免疫球蛋白分子，包含兩條分子量為約23，OOO道爾頓的相同的輕鏈多肽和兩條分子量為53，000-70，000的相同的重鏈多肽。四條鏈通常通過二硫鍵以"Y，，的構(gòu)型連接，其中輕鏈在"Y"的開口處開始括住重鏈并延續(xù)至整個可變區(qū)。輕鏈可以分類為kappa或lambda(k，A)。每種類別的重鏈都可以與k或入輕鏈結(jié)合?？傮w而言，當(dāng)免疫球蛋白是由雜交瘤細(xì)胞、B細(xì)胞或遺傳改造的宿主細(xì)胞產(chǎn)生時，輕鏈和重鏈以共價方式彼此鍵合，并且兩條重鏈的"尾"部通過共價二硫鍵連接或非共價連接彼此鍵合。在重鏈中，氨基酸序列是由位于Y構(gòu)型的叉狀末端的N末端開始直至位于各條鏈底端的C末端。輕鏈和重鏈均被分成結(jié)構(gòu)和功能同源的區(qū)域。術(shù)語"恒定的"和"可變的"是就功能而言來使用的。在這一點上，應(yīng)該理解輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域(VL)部分和重鏈的可變結(jié)構(gòu)域(VH)部分決定了抗原的識別和特異性。相反，輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域(CL)和重鏈的恒定結(jié)構(gòu)域(CH1，CH2或CH3)賦予了諸如分泌、經(jīng)胎盤的靈活性、Fc受體的結(jié)合、補體的結(jié)合等等的重要的生物性質(zhì)。根據(jù)慣例，隨著恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域與抗體的抗原結(jié)合位點或氨基末端的距離越遠(yuǎn)，該結(jié)構(gòu)域的數(shù)量增加。N末端部分為可變區(qū)，而C末端部分為恒定區(qū)；CH3和CL結(jié)構(gòu)域?qū)嶋H上分別包含重鏈和輕鏈的羧基末端。如上文所述，可變區(qū)允許抗體選擇性地識別并特異性地結(jié)合抗原上的表位。換言之，抗體的VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域、或者互補決定區(qū)(CDR)的亞區(qū)相結(jié)合，從而形成定義了三維抗原結(jié)合位點的可變區(qū)。這種四元抗體結(jié)構(gòu)在Y構(gòu)型的各個臂的末端處形成了抗原結(jié)合位點。更具體而言，抗原結(jié)合位點是由每個VH和VL鏈的三個CDR來定義的。在一些情況下，例如衍生自駱駝科物種(camelidspecies)或者基于駱駝科動物免疫球蛋白改造的某些免疫球蛋白分子，完整的免疫球蛋白分子可以僅由重鏈構(gòu)成而不具有輕鏈。例如參見Hamers-Castermanetal.(1993)，Nature363:446-448。在天然抗體中，存在于各抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的6個"互補決定區(qū)"或"CDR"是短的、非鄰近的氨基酸序列，當(dāng)所述的抗體在水性環(huán)境中呈現(xiàn)其三維構(gòu)型時，所述的氨基酸序列特異性地定位，從而形成抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域中的其余氨基酸(稱為"框架"區(qū)域)顯示為低的分子內(nèi)可變性。框架區(qū)主要采用P片構(gòu)型，而CDR形成與P片結(jié)構(gòu)相連的環(huán)，并且在某些情況下所述的環(huán)形成了P片結(jié)構(gòu)的一部分。因此，框架區(qū)起到了形成支架的作用，其中所述的支架使得CDR通過鏈內(nèi)非共價作用以正確的方向定位。由定位的CDR形成的抗原結(jié)合位點定義了與位于免疫反應(yīng)性抗原上的表位互補的表面。這種互補的表面促進(jìn)了抗體與其同源的表位的非共價結(jié)合。對于任何給定的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，本領(lǐng)域的任何普通技術(shù)人員都可以容易地分別鑒定含CDR區(qū)域和框架區(qū)的氨基酸，這是因為這些氨基酸已經(jīng)被精確地定義(參見"SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,"Kabat，E.，etal.(1983)，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,;以及ChothiaandLesk,J.(1987)Mol.Biol.，196:901-917，在此，這些文獻(xiàn)均以引用方式全文并入本文)。在本領(lǐng)域使用和/或接受的術(shù)語具有兩個或多個定義的情況下，本文所用的術(shù)語的定義旨在包括了所有的這些含義，除非明確地做出了相反的說明。具體實例為術(shù)語"互補決定區(qū)"("CDR")的使用，該術(shù)語描述的是在重鏈多肽和輕鏈多肽的可變區(qū)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的非連續(xù)的抗原結(jié)合位點。該特定的區(qū)域已經(jīng)由Kabat等人(1983)，U.S.Dept.ofHealthandHumanServices,"SequencesofProteinsofImmunologicalInterest"和Chothia等人(1987),J.Mol.Biol.196:901-917描述，在此將上述文獻(xiàn)以引用方式并入本文，其中在將該區(qū)域彼此對比時，其定義包括氨基酸殘基的重疊或亞區(qū)。但是，關(guān)于抗體或其變體的CDR的定義應(yīng)用均在本文所定義和使用的術(shù)語的范圍內(nèi)。包括了由上述各引用文獻(xiàn)所定義的CDR的合適的氨基酸殘基均列于下表l中，以用于比較。包括了特定CDR的確切的殘基數(shù)將隨著CDR的序列和大小的變化而改變。根據(jù)抗體的可變區(qū)的氨基酸序列，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以通過常規(guī)方式確定哪些殘基包含特定的CDR。表l.CDR定義KabatChothiaVCDRl31-3526-32VCDR250-6552-58VCDR395-10295-102VLCDRl24-3426-32VLCDR250-5650-52^CDR389-9791-96!表1中所示的所有CDR定義的編號是根據(jù)由Kabat等人提出的編號慣例而來的(參見下文)。Kabat等人還定義了用于任何抗體的可變結(jié)構(gòu)域序列的編號系統(tǒng)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以明確地將該"Kabat編號"系統(tǒng)指定用于任何可變結(jié)構(gòu)域序列，而無需依靠序列本身以外的任何試驗數(shù)據(jù)。如本文所用，"Kabat編號"是指由Kabat等人U.S.Dept.ofHealthandHumanServices,"SequenceofProteinsofImmunologicalInterest"(1983)提出的編號系統(tǒng)。除非另作說明，否則關(guān)于本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物中的特定氨基酸殘基位置的編號均是根據(jù)Kabat編號系統(tǒng)而來的。在駱駝科物種中，被稱為VHH的重鏈可變區(qū)形成了完整的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。駱駝科動物VHH可變區(qū)與由常規(guī)抗體衍生得到的可變區(qū)(VH)之間的主要差異包括(a)與VHH的輕鏈接觸表面相比，VH的輕鏈接31觸表面中含有更多的疏水性氨基酸；(b)VHH中的CDR3更長；以及(c)VHH中CDR1和CDR3之間的二硫鍵頻繁形成。本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物包括，但不限于多克隆、單克隆、多特異性、人、人源化、靈長類源化或嵌合抗體；單鏈抗體；表位結(jié)合片段，例如Fab、FaM、F(aV)2、Fd、Fvs、單鏈Fvs(scFv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的Fvs(sdFv)、包含VL或VH結(jié)構(gòu)域的片段、由Fab表達(dá)庫形成的片段；以及抗獨特型(抗Id)抗體(例如包括抗本文公開的抗CD2Q抗體的抗Id抗體；此外例如參見Hudson,PJ.andCouriau，C，NatureMed.9:129-134(2003);美國專利公開序號20030148409;美國專利序號5，837，242)。例如，scFv分子是本領(lǐng)域已知的并且在例如美國專利5,892,019中有所描述。本發(fā)明的免疫球蛋白或抗體分子可以為任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類別(例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞類的免疫球蛋白分子。區(qū)與以下的全部或部分的組合鉸鏈區(qū)、(U結(jié)構(gòu)域、Ch2結(jié)枸域和Ch3結(jié)構(gòu)域。此外，本發(fā)明還包括抗原結(jié)合片段，該片段還包含可變區(qū)與鉸鏈區(qū)、CH1結(jié)構(gòu)域、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域的任意的組合。用于本文所公開的診斷和治療方法中的抗體或其免疫特異性片段可以來自包括鳥和哺乳動物在內(nèi)的任何動物來源。優(yōu)選地，所述的抗體為人、鼠、驢、兔、山羊、豚鼠、駱駝、美洲駝羊、馬或雞的抗體。在另一個實施方式中，所述的可變區(qū)可以condricthoidinorigin(例如得自簠魚)。如本文所用，"人"抗體包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體，并且包括由人免疫球蛋白庫中或由對于一種或多種人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因的動物中分離得到的抗體，其中所述的動物轉(zhuǎn)基因不表達(dá)內(nèi)源免疫球蛋白，如下文和例如Kucherlapati等人的美國專利序號5,939,598所述。如本文所用，術(shù)語"重鏈部分"包括衍生自免疫球蛋白重鏈的氨基酸序列。包含重鏈部分的多肽包含以下中的至少一種Ch1結(jié)枸域、鉸鏈(例如上游鉸鏈區(qū)、中游鉸鏈區(qū)和/或下游鉸鏈區(qū))結(jié)構(gòu)域、Ch2結(jié)構(gòu)域、Ch3結(jié)枸域、或者它們的變體或片段。例如，用于本發(fā)明的結(jié)合多肽可以包括包含Ch1結(jié)構(gòu)域的多肽鏈；包含Ch1結(jié)枸域、鉸鏈結(jié)構(gòu)域的至少一部分和CH2結(jié)構(gòu)域的多肽鏈；包含CJ結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域的多肽；包含Ch1結(jié)構(gòu)域、鉸鏈結(jié)構(gòu)域的至少一部分和CH3結(jié)構(gòu)域的多肽鏈；或者包含CHl結(jié)構(gòu)域、鉸鏈結(jié)構(gòu)域的至少一部分、Ch2結(jié)枸域和"3結(jié)構(gòu)域的多肽鏈。在另一個實施方式中，本發(fā)明的多肽包括包含CH3結(jié)構(gòu)域的多肽鏈。此外，用于本發(fā)明的結(jié)合多肽可以缺乏CH2結(jié)構(gòu)域的至少一部分(例如CH2結(jié)構(gòu)域的全部或部分)。如上文所述，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員都應(yīng)該理解這些結(jié)構(gòu)域(例如重鏈部分)可以被修飾使得它們的氨基酸序列由天然的免疫球蛋白分子發(fā)生了改變。在本文所公開的某些抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物中，多聚體的一條多肽鏈的重鏈部分與該多聚體的第二條多肽鏈的重鏈部分相同。備選地，本發(fā)明的包含重鏈部分的單體是不同的。例如，各種單體可以包含不同的目標(biāo)結(jié)合位點，從而形成例如雙特異性抗體。用于本文所公開的診斷和治療方法中的結(jié)合多肽的重鏈部分可以衍生自不同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的重鏈部分可以包含衍生自IgGl分子的CH1結(jié)構(gòu)域、以及衍生自IgG3分子的鉸鏈區(qū)。在另一實例中，重鏈部分可以包含部分衍生自IgGl分子和部分衍生自IgG3分子的鉸鏈區(qū)。在另一實例中，重鏈部分可以包含部分衍生自IgGl分子和部分衍生自IgG4分子的嵌合鉸鏈。如本文所用，術(shù)語"輕鏈部分，，包含衍生自免疫球蛋白輕鏈的氨基酸序列。優(yōu)選地，所述的輕鏈部分包含至少一個Vl或(^結(jié)構(gòu)域。可以根據(jù)抗原(例如抗體可以識別或特異性結(jié)合的粑多肽(C20))的表位或部分來描述或詳細(xì)說明本文所公開的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。可以與抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性相互作用的靶多肽部分為"表位"或"抗原決定簇"。靶多肽可以包含單一表位，但是通常包含至少兩個表位，并且可以包含任意數(shù)量的表位，這取決于抗原的大小、構(gòu)型和類型。此外，應(yīng)該注意靶多肽上的"表位，，可以為或者可以包含非多肽元件，例如表位可以包含糖側(cè)鏈。認(rèn)為用于抗原的肽或多肽的最小大小為約4至5個氨基酸。肽或多肽表位優(yōu)選包含至少7個、更優(yōu)選為至少9個、最優(yōu)選為約15至約30個氨基酸。由于CDR以三級結(jié)構(gòu)形式識別抗原性肽或多肽，所以具有表位的氨基酸不需要是相鄰的，并且在某些情況下，這些氨基酸甚至可以不在相同的肽鏈上。在本發(fā)明中，被本發(fā)明的抗CD20抗體識別的肽或多肽表位包含C20序列的至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、更優(yōu)選地至少8個、至少9個、至少10個、至少15個、至少20個、至少25個、或者約15至約30個相鄰或不相鄰的氨基酸。"特異性結(jié)合"通常是指抗體通過其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與表位結(jié)合，并且這種結(jié)合需要抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與表位之間一定的互補性。根據(jù)這個定義，當(dāng)抗體通過其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域比該抗體與隨意的、無關(guān)的表位結(jié)合得更容易與表位結(jié)合時，認(rèn)為抗體與表位"特異性的結(jié)合"。術(shù)語"特異性"在本文中用于對某種抗體與某種表位結(jié)合的相對親和力進(jìn)行定性。例如，對于給定的表位，可以認(rèn)為抗體"A"比抗體"B"具有更高的特異性；或者與相關(guān)的表位"D"相比，可以認(rèn)為抗體"A，，與表位"C"的結(jié)合具有更高的特異性。"優(yōu)先結(jié)合"是指與相關(guān)的、相似的、同源的或類似的表位相比，抗體更容易與表位特異性結(jié)合。因此，與相關(guān)的表位相比，與給定表位"優(yōu)先結(jié)合"的抗體更可能與所述的給定表位結(jié)合，盡管該抗體與所述的相關(guān)表位可以發(fā)生交叉反應(yīng)。通過非限定性實例，如果抗體以一定的解離常數(shù)(KD)與第一表位結(jié)合，而該解離常數(shù)小于該抗體與第二表位的K。，則可認(rèn)為該抗體優(yōu)先與第一表位結(jié)合。在另一非限定性實例中，如果抗體以一定的親和力與第一表位結(jié)合，而該親和力比該抗體與第二表位的K。小至少一個數(shù)量級，則可認(rèn)為該抗體優(yōu)先與第一表位結(jié)合。在另一非限定性實例中，如果抗體以一定的親和力與第一表位結(jié)合，而該親和力比該抗體與第二表位的K。小至少兩個數(shù)量級，則可認(rèn)為該抗體優(yōu)先與第一表位34結(jié)合。在另一非限定性實例中，如果抗體以一定的解離速率(k(off))與第一表位結(jié)合，而該解離速率小于該抗體與第二表位的k(off)，則可認(rèn)為該抗體優(yōu)先與第一表位結(jié)合。在另一非限定性實例中，如果抗體以一定的親和力與第一表位結(jié)合，而該親和力比該抗體與第二表位的k(off)小至少一個數(shù)量級，則可認(rèn)為該抗體優(yōu)先與第一表位結(jié)合。在另一非限定性實例中，如果抗體以一定的親和力與第一表位結(jié)合，而該親和力比該抗體與第二表位的k(off)小至少兩個數(shù)量級，則可認(rèn)為該抗體優(yōu)先與第一表位結(jié)合?？梢哉J(rèn)為本文所公開的抗體或者抗原結(jié)合片段、變體或衍生物以一定的解離速率(k(off))與本文所公開的靶多肽、或其片段或變體結(jié)合，其中所述的解離速率小于或等于5X10_2secf1、10—2sec—\5Xl(Tsec^或l(T3sec—\更優(yōu)選地，可以認(rèn)為本發(fā)明的抗體以一定的解離速率(k(off))與本文所公開的粑多肽、或其片段或變體結(jié)合，其中所述的解離速率小于或等于5X10—4sec_1、10—4sec_、5Xl(T5sec_1、l(T5sec—1、5X106sec1、l(T6sec_1、5XIO畫7sec—'或10—7sec—1?？梢哉J(rèn)為本文所公開的抗體或者抗原結(jié)合片段、變體或衍生物以一定的結(jié)合速率(k(on))與本文所公開的耙多肽、或其片段或變體結(jié)合，其中所述的結(jié)合速率大于或等于103M_1sec1、5X103M—1sec—\104M_1sec^或5X104M—1sec_1。更優(yōu)選地，可以認(rèn)為本發(fā)明的抗體以一定的結(jié)合速率(k(on))與本文所公開的靶多肽、或其片段或變體結(jié)合，其中所述的結(jié)合速率大于或等于105M—1sec_1、5X105Nrsec一1、106M畫1sec畫1、5X106M—1sec^或107M_1sec一1。如果抗體優(yōu)先結(jié)合給定的表位，其程度使得該抗體在一定程度上阻斷了參照抗體與該表位的結(jié)合，則認(rèn)為該抗體竟?fàn)幮缘匾种屏藚⒄湛贵w與所述的表位的結(jié)合。可以通過本領(lǐng)域中任何已知的方法(例如竟?fàn)幮訣LISA分析)來確定竟?fàn)幮砸种?。可以認(rèn)為抗體竟?fàn)幮缘匾种屏藚⒄湛贵w與給定表位的結(jié)合至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50°/0。如本文所用，術(shù)語"親和力"是指個別表位與免疫球蛋白分子的CDR的結(jié)合強度的量度。例如參見Harlowetal.，Antibodies:ALaboratoryManual,(ColdSpringHarborLaboratoryPress,2nded.1988)，第27-28頁。術(shù)語"親合性"是指免疫球蛋白與抗原群體之間的復(fù)合物的總體穩(wěn)定性，即，免疫球蛋白與抗原形成的混合物的功能性結(jié)合強度。例如參見Harlow,第29-34頁。親合性與所述群體中個別免疫球蛋白分子與特定表位的親和力有關(guān)，并且還與免疫球蛋白與抗原的效價有關(guān)。例如，二價單克隆抗體與具有高度重復(fù)表位結(jié)構(gòu)(例如聚合物)的抗原之間的相互作用是一種高親合性。此外，可以根據(jù)本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的交叉反應(yīng)性來對它們進(jìn)行描述或詳細(xì)說明。如本文所用，術(shù)語"交叉反應(yīng)性"是指對一種抗原具有特異性的抗體與第二種抗原發(fā)生反應(yīng)的能力；其為兩種不同的抗原性物質(zhì)之間的相關(guān)性的量度。因此，如果抗體除了與誘導(dǎo)其構(gòu)造的一種表位結(jié)合外，還與另一種表位結(jié)合，則該抗體具有交叉反應(yīng)性。交叉反應(yīng)性表位通常包含與誘導(dǎo)表位相同的許多互補性結(jié)構(gòu)特征，并且在某些情況下，交叉反應(yīng)性表位實際上可以比原始的表位更合適。例如，某些抗體具有一定程度的交叉反應(yīng)性，這是因為它們與相關(guān)的但卻不同的表位結(jié)合，例如與參照表位具有至少95%、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%、至少70%、至少65%、至少60%、至少55%、以及至少50%的一致性(其可以采用本領(lǐng)域已知的方法和本文所述的方法來計算)的表位。如果抗體不能結(jié)合與參照表位的一致性(其可以采用本領(lǐng)域已知的方法和本文所述的方法來計算)小于95%、小于90%、小于85%、小于亂小于75%、小于70%、小于65%、小于60%、小于55%、和小于50%的表位，則可認(rèn)為該抗體幾乎不具有或不具有交叉反應(yīng)性。如果抗體不能與某種表位的任何其他類似物、直向同源物或同源物結(jié)合，則可認(rèn)為該抗體對該表位具有"高度特異性"。此外，可以根據(jù)本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體優(yōu)選的結(jié)合親和力包括解離常數(shù)或Kd小于5x10—2M、1(T2M、5x10—3M、10_3M、5x10_4M、10_4M、5xl(T5M、105M、5x10_6M、10"M、5x1(T7M、1(T7M、5x10—8M、10—8M、5x1(T9M、10_9M、5x10_1°M、1(T10M、5xIO畫11M、IO畫11M、5x10—12M、10—12M、5x10畫13M、10畫13M、5x10—14M、l(T"M、5x1015M、或l(T15M的那些。本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以是"多特異性的"，例如雙特異性的、三特異性的、或者更多的多特異性，這是指其同時識別并結(jié)合存在于一個或多個不同的抗原(例如蛋白質(zhì))上的兩個或更多個不同的表位。因此，不論抗CD20抗體是"單特異性的"或"多特異性的"(例如雙特異性的)，均是指與結(jié)合多肽發(fā)生反應(yīng)的不同表位的數(shù)量。多特異性抗體可以對本文所述的靶多肽的不同表位具有特異性，或者可以對靶多肽以及異源表位(例如異源多肽或固體支持材料)具有特異性。如本文所用，術(shù)語"效價"是指存在于抗CD2Q抗體中、結(jié)合多肽或抗體上的潛在結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)的數(shù)目。每個結(jié)合結(jié)構(gòu)域都特異性地與一個表位結(jié)合。當(dāng)抗CD20抗體、結(jié)合多肽或抗體包含多于1個的結(jié)合結(jié)構(gòu)域時，每個結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以特異性地結(jié)合相同的表位，對于具有兩個結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體而言，其被稱為"二價單特異性，，；或者每個結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以與不同的表位結(jié)合，對于具有兩個結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體而言，其被稱為"二價雙特異性"。就各種特異性而言，抗體還可以是雙特異性且二價的(其被稱為"雙特異性四價抗體，，)。在另一個實施方式中，可以制備四價微型抗體或結(jié)構(gòu)域缺失抗體。雙特異性二價抗體及其制備方法在(例如)美國專利序號5,731,168、5，807，706、5,821,333、以及美國公開序號2003/020734和2002/0155537中有所描述，所有這些文獻(xiàn)的公開內(nèi)容均以引用方式并入本文。雙特異性四價抗體及其制備方法在(例如)WO02/096948和WO00/44788中有所描述，這兩份文獻(xiàn)的公開內(nèi)容均以引用方式并入本文。通?？蓞⒁奝CT公開WO93/17715;WO92/08802;WO91/00360;WO92/05793;Tuttetal.，J.Immunol.147:60-69(1991);美國專利序號4,474,893;4，714，681;4,925,648;5,573,920;5,601,819;Kostelnyetal.(1992)，J.Immunol.148:1547-1553。如之前所述，多種免疫球蛋白類別的恒定區(qū)的亞單元結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是公知的。如本文所用，術(shù)語"VH結(jié)構(gòu)域"包括免疫球蛋白重鏈的氨基末端可變結(jié)構(gòu)域，而術(shù)語"CJ結(jié)構(gòu)域"包括免疫球蛋白重鏈的第一(大部分的氨基末端)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域。CH1結(jié)構(gòu)域與VH結(jié)構(gòu)域相鄰，并且在免疫球蛋白重鏈分子的鉸鏈區(qū)的氨基末端。如本文所用，術(shù)語"CH2結(jié)構(gòu)域"包括例如采用常規(guī)的編號方案由抗體的約第244個殘基延伸至第360個殘基(第244個殘基至第360個殘基，Kabat編號系統(tǒng)；第231-340個殘基，EU編號系統(tǒng)，參見KabatEAetal.在引文中列舉)的重鏈分子部分。CH2結(jié)構(gòu)域是獨特的，這是因為它沒有與另一結(jié)構(gòu)域緊密成對。而是，兩條N連接的分枝糖鏈插入在完整的天然IgG分子的兩個CH2結(jié)構(gòu)域之間。此外，已經(jīng)清楚證明了CH3結(jié)構(gòu)域由CH2結(jié)構(gòu)域延伸至IgG分子的C末端，并且包含大約108個殘基。如本文所用，術(shù)語"鉸鏈區(qū)"包括將CH1結(jié)構(gòu)域與CH2結(jié)構(gòu)域連接的重鏈分子的部分。該鉸鏈區(qū)包含大約25個殘基，并且是柔性的，由此使得兩個N末端抗原結(jié)合區(qū)域可以獨立地移動。鉸鏈區(qū)可以被分為三個不同的結(jié)構(gòu)域上游、中部和下游鉸鏈結(jié)構(gòu)域(Rouxetal.(1998)，J.Immunol.161:4083)。如本文所用，術(shù)語"二硫鍵"包括在兩個硫原子之間形成的共價鍵。氨基酸半胱氨酸具有巰基，該巰基可以與第二個巰基形成二硫鍵或橋。在大部分天然的IgG分子中，CH1和CL區(qū)域通過二硫鍵連接，并且兩條重鏈在對應(yīng)于采用Kabat標(biāo)號系統(tǒng)的239和242的位置(采用EU編號系統(tǒng)的226或229的位置)處通過二硫鍵連接。如本文所用，術(shù)語"嵌合抗體"被用于指其中免疫反應(yīng)性區(qū)域或位點得自或衍生自第一種物種，而恒定區(qū)(其可以是完整的、部分的或是根據(jù)本發(fā)明修飾的)得自第二種物種的任何抗體。在優(yōu)選的實施方式中，耙標(biāo)結(jié)合區(qū)域或位點來自非人來源(例如小鼠或靈長類動物)而恒定區(qū)是人的。如本文所用，術(shù)語"基因工程抗體"是其中重鏈和/或輕鏈中的可變區(qū)通過以下方式被改變的抗體通過使用來自特異性已知的抗體的一個或多個CDR的至少部分替代，以及如果需要的話，通過部分框架區(qū)替代和序列變化。雖然，CDR可以衍生自與衍生出框架區(qū)的抗體相同類別、甚至亞類的抗體，但是應(yīng)該想到是CDR衍生自不同類別的抗體，并且優(yōu)選地衍生自來自不同物種的抗體。其中來自特異性已知的非人抗體的一個或多個"供體"CDR被移植到人重鏈或輕鏈框架區(qū)中的基因工程抗體在本文中被稱為"人源化的抗體"。并非必需使用來自供體可變區(qū)的完整CDR來替代所有的CDR，以將一個可變區(qū)的抗原結(jié)合能力轉(zhuǎn)移給另一個可變區(qū)。而是僅需要轉(zhuǎn)移保持靶標(biāo)結(jié)合位點的活性所必需的那些殘基。進(jìn)一步承認(rèn)，人源化抗體的重鏈或輕鏈或兩者中的可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的框架區(qū)可以只包含人來源的殘基，在該情況下，人源化抗體的這些框架區(qū)稱為"完全人框架區(qū)"。備選地，如果必需保持與CD20抗原適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合或增強的結(jié)合，則可在人源化抗體的重鏈或輕鏈或兩者的可變結(jié)構(gòu)域的人框架區(qū)的相應(yīng)位點內(nèi)對供體可變結(jié)構(gòu)域的框架區(qū)的一個或多個殘基進(jìn)行改造。已通過該方式改造的人框架區(qū)從而包含人和供體構(gòu)架殘基的混合物，在本文中稱為"部分人框架區(qū)，，。根據(jù)例如美國專利5，585，089、5,693,761、5,693，762和6，180，370中所示的解釋，通過進(jìn)行常規(guī)實驗或通過試錯檢測(trialanderrortesting)來獲得功能性改造的或人源化抗體完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)。例如，可基本上按照Winter和同事(Jones等人(1986)Nature321:522-525;Riechmann等人(1988)Nature332:323-327;Verhoeyen等人(1988)Science239:1534-1536)的方法，通過用嚙齒目動物或突變的嚙齒目動物的CDR序列置換人抗CD20抗體的相應(yīng)序列來進(jìn)行抗CD20抗體的人源化。也參見美國專利5，225，539、395，585，089、5,693,761、5,693,762、5,859,205，通過引用合并入本文。所得的人源化抗CD20抗體可在人源化抗體的重鏈和/或輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域的全長人框架區(qū)內(nèi)包含至少一個嚙齒目動物或突變的嚙齒目動物的CDR。在一些情況下，人源化抗CD20抗體的一個或多個可變結(jié)構(gòu)域的框架區(qū)內(nèi)的殘基由相應(yīng)的非人(例如，嚙齒目動物)殘基取代(參見，例如，美國專利5，585，089、5,693,761、5,693,762和6,180,370)，在該情況下，所得的人源化抗CD20抗體可在重鏈和/或輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)包含部分人框架區(qū)。此外，人源化抗體可包括未在受體抗體或在供體抗體中發(fā)現(xiàn)的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改善抗體性能(例如，以獲得期望的親和力)。一般地，人源化抗體將包括幾乎所有至少一個，通常兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或幾乎所有CDR相應(yīng)于非人免疫球蛋白的CDR，并且所有或幾乎所有框架區(qū)是人免疫球蛋白序列的框架區(qū)。人源化抗體任選也包括免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)，通常人免疫球蛋白的恒定區(qū)的至少部分。關(guān)于更詳細(xì)的內(nèi)容參見Jones等人(1986)Nature331:522-525;Riechmann等人(1988)Nature332:323-329;和Presta(1992)Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596;通過引用合并入本文。因此，此類"人源化"抗體可包括這樣的抗體，在所述抗體中，顯著小于完整的人可變結(jié)構(gòu)域已被來自非人物種的相應(yīng)序列置換。實際上，人源化抗體通常是其中一些CDR殘基和可能地一些框架區(qū)殘基被來自嚙齒目動物抗體中的相似位點的殘基置換的人抗體。參見，例如，美國專利5,225,539、5,585,089、5,693,761、5，693，762、5,859,205。也參見美國專利6,180,370，和國際公開號W001/27160，其中公開了人源化抗體和用于產(chǎn)生具有提高的對預(yù)先確定的抗原的親和力的人源化抗體的技術(shù)。如本文所用，術(shù)語"適當(dāng)折疊的多肽"包括如下多肽(例如抗CD20抗體)，其中包含所述多肽的所有功能性結(jié)構(gòu)域都具有明確的活性。如本文所用，術(shù)語"非適當(dāng)折疊的多肽"包括如下多肽，其中所述多肽的至少一個功能性結(jié)構(gòu)域不具有活性。在一個實施方式中，適當(dāng)折疊的多肽包括通過至少一個二硫鍵連接的多肽鏈，相反地，非適當(dāng)折疊的多肽包括沒有通過至少一個二硫鍵連接的多肽鏈。如本文所用，術(shù)語"改造的(engineered)"包括通過合成方法(例如通過重組技術(shù)、體外肽合成、通過肽的酶或化學(xué)偶聯(lián)或者這些技術(shù)的某些組合)對核酸或多肽分子進(jìn)行操作。如本文所用，術(shù)語"連接的，，、"融合的"或"融合"可交換使用。這些術(shù)語是指通過包括化學(xué)綴合或重組方法在內(nèi)的任何方法將兩個或多個元件或成分連接在一起。"符合讀框融合(in-framefusion)"是指將兩個或多個多核苷酸開放閱讀框(0RF)連接起來，從而以保持原始0RF的正確翻譯閱讀框的方式形成連續(xù)的并且更長的0RF。因此，重組融合蛋白質(zhì)是單--種蛋白質(zhì)，其包含與原始0RF所編碼的多肽相對應(yīng)的兩個或多個節(jié)段(這些節(jié)段在天然條件下通常不會連接)。雖然由此制得了在整個融合節(jié)段中連續(xù)的閱讀框，但是這些節(jié)段可以通過例如符合讀框連接體序列以物理地或空間地分離。例如，可以將編碼免疫球蛋白可變區(qū)的CDR的多核苷酸符合讀框融合，但是通過編碼至少一個免疫球蛋白框架區(qū)或其他的CDR區(qū)域的多核苷酸分開，只要"融合的"CDR作為連續(xù)多肽的一部分進(jìn)行共翻譯即可。在關(guān)于多肽的內(nèi)容中，"線性序列"或"序列"是指多肽中由氨基末端至羧基末端方向的氨基酸的次序，其中在所述的序列中彼此相鄰的殘基在所述多肽的一級結(jié)構(gòu)中是相鄰的。如本文所用，術(shù)語"表達(dá)"是指如下過程，通過該過程基因產(chǎn)生了生物化學(xué)物質(zhì)，例如多肽。所述的過程包括在細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)基因功能的任何表現(xiàn)，包括，但不限于基因敲減、以及瞬時表達(dá)和穩(wěn)定表達(dá)。表達(dá)包括，但不限于將基因轉(zhuǎn)錄成信使RNA(mRNA)，以及將該mRNA翻譯成多肽。如果最終需要的產(chǎn)物為生物化學(xué)物質(zhì)，則表達(dá)包括形成該生物化學(xué)物質(zhì)及其任何前體?；虻谋磉_(dá)產(chǎn)生了"基因產(chǎn)物"。如本文所用，基因產(chǎn)物可以為核酸(例如通過基因轉(zhuǎn)錄而產(chǎn)生的信使RNA)或多肽(其由轉(zhuǎn)錄本經(jīng)翻譯而得到)。本文所述的基因產(chǎn)物進(jìn)一步包括經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后修飾(例如聚腺苷酸化)的核酸或者經(jīng)過翻譯后修飾(例如甲基化、糖基化、加入脂質(zhì)、與其他蛋白質(zhì)亞單元連接、蛋白水解切割等)的多肽。如本文所用，術(shù)語"治療"或"處理"是指治療性處理、和預(yù)防性或防護(hù)性措施，其中對受試者預(yù)防或減慢(減輕)不需要的生理學(xué)變化或紊亂，例如多發(fā)性硬化的進(jìn)展。有益的或所需要的臨床效果包括，但不限于緩解癥狀、減輕疾病的程度、穩(wěn)定(即，不惡化)疾病的狀態(tài)、延遲或減慢疾病的進(jìn)程、改善或減輕疾病的狀態(tài)、以及消除(部分或全部)疾病的狀態(tài)，而無論這些是可檢測的或不可檢測的。與在未接受治療下所期望的存活相比，"治療"還可以指延長的存活。需要治療的對象包括已經(jīng)患有癥狀或紊亂的那些、以及傾向于患有癥狀或紊亂的那些或者其中癥狀或紊亂有待預(yù)防的那些。"受試者"或"個體，，或"動物"或"患者"或"哺乳動物"是指需要診斷、預(yù)后或治療的任何受試者，特別是哺乳動物受試者。哺乳動物受試者包括人，家畜，農(nóng)業(yè)動物，以及動物園、運動竟技或?qū)櫸飫游铮绻?、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、奶牛等。如本文所用，短語例如"受益于施用抗CD20抗體的受試者"和短語"需要治療的動物"包括如下受試者，例如哺乳動物受試者，該受試者受益于所用的抗CD20抗體的施用(例如用于檢測C35多肽(例如用于診斷過程))和/或受益于使用抗CD20抗體的治療(即，減輕或預(yù)防疾病)。如本文更詳細(xì)描述那樣，抗CD20抗體可以以非綴合方式使用或者可以以綴合與例如藥品、藥物前體或同位素綴合。II.輩S多肽的描述Bl(CD20)分子是人B淋巴細(xì)胞表面上的大約35，000道爾頓的磷蛋白，其可通過調(diào)節(jié)B細(xì)胞增殖和分化在體液免疫應(yīng)答中起中心作用。編碼CD20分子的DNA序列已被分離并且CD20的氨基酸序列已經(jīng)確定。參見，Tedder等人(1988)Proc.Natl.Acad.Scl.USA85:208-212。CD20的別名，如本領(lǐng)域內(nèi)所公認(rèn)的，包括B-淋巴細(xì)胞抗原CD20、B-、淋巴細(xì)胞表面抗原B1、Leu-16、Bp35、BM5和LF5。本發(fā)明的抗體具有對CD20人B細(xì)胞表面抗原的結(jié)合特異性?？乖嵌嚯幕虬ū籆lark等人(1985)Proc.Natl.Acad.Scl.U.S.A.82:1766-1770中描述的2H7單克隆抗體結(jié)合的多肽。該抗原是已命名的磷蛋白(Bp35(CD20))，其只在B細(xì)胞譜系的細(xì)胞上表達(dá)。之前已制備了針對該抗原的鼠單克隆抗體，其描述于Clark等人，同上中；也參見Stashenko等人(1980)J.Immunol.125:1678-1685。III.抗CD20抗體在一個實施方式中，本發(fā)明涉及抗CD20抗體，包括其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。本發(fā)明的抗體是已就增強的活性進(jìn)行最優(yōu)化的抗CD2Q抗體。如本文中所使用的，術(shù)語"抗CD2Q抗體"是特異性識別大約35,000道爾頓的、通常命名為人B淋巴細(xì)胞限制性分化抗原Bp35(humanB-lymphocyterestricteddifferentiationantigenBp35)(通常稱為CD20)的細(xì)胞表面非糖基化磷蛋白的抗體。所述抗原在超過90%的B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤上表達(dá)，但未見于造血干細(xì)胞、前B細(xì)胞、正常血漿細(xì)胞或其他正常組織。CD20調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化的活化過程中的早期步驟。更特別地，本發(fā)明的抗體結(jié)合與被上述2H7單克隆抗體結(jié)合的表位相同的表位?；诿绹鴮＠?,736,137和(Reff等人(1994)Blood83:435-445)(通過引用合并入本文)中公開的單克隆抗體(mAb)C2B8、嵌合鼠/人抗CD20抗體最優(yōu)化本發(fā)明的抗體。本發(fā)明的抗體序列包括經(jīng)修飾的CDR，所述經(jīng)修飾的CDR,當(dāng)通過改造導(dǎo)入可變結(jié)構(gòu)域抗CD20抗體的輕鏈和重鏈的可變結(jié)構(gòu)域時，與利妥昔單抗相比，導(dǎo)致抗體的CDC活性增強，保持結(jié)合特異性和介導(dǎo)凋亡的能力。如所指出的，本發(fā)明的抗CD20抗體展示與利妥昔單抗相比增強的CDC活性。利妥昔單抗是嵌合鼠/人抗CD20單克隆抗體(IDEC-C2B8;IDECPharmaceuticalCorp.,SanDiego,California;以商品名Rituxan⑧商購獲得)，其包含人IgGl和k恒定區(qū)以及從鼠抗CD20單克隆抗體IDEC-2B8變區(qū)。利妥昔單抗用于治療復(fù)發(fā)性B細(xì)胞低度淋巴瘤或濾泡非何杰金氏淋巴瘤(匪L)。雖然不束縛于任何作用機制，但抗CD20抗體結(jié)合CD20介;的一細(xì)胞毒(ADCC)。因此，發(fā)現(xiàn)具有與利妥昔單抗(本文中也:為Rituxan⑧)相比，更高的CDC和/或ADCC活性和/或增加的結(jié)合親和力的抗CD20抗體將潛在地改進(jìn)B細(xì)胞淋巴瘤特別地B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤的癌癥療法。將抗體在測定中以等量進(jìn)行比較。本發(fā)明的抗CD20抗體和利妥昔單抗的"等量，，意指對于各抗體使用相同的劑量。用CDC解離率測定法觀察到的結(jié)合親力相比，增加至少大約50%、大約75°/。、大約100%、大約125%。在非放射性CDC測定中，需要比使用本發(fā)明的抗CD20抗體時所需要的抗體量多至少大約2倍、大約3倍至大約4倍的利妥昔單抗以介導(dǎo)相同水平的對三種不同NHL系的殺傷。本發(fā)明的抗CD20抗體包含至少一個最優(yōu)化的互補決定區(qū)(CDR)。"最優(yōu)化的CDR"意指CDR已被修飾，并且基于被賦予包含最優(yōu)化的CDR的抗CD20抗體的提高的結(jié)合親和力和/或提高的CDC活性選擇最優(yōu)化的序列。修飾包括CDR內(nèi)氨基酸殘基的替換，以使抗CD20抗體保持對于CD20抗原的特異性并具有提高的結(jié)合親和力和/或提高的CDC活性。在美國申請公開號2004/0167319Al(通過引用合并入本文)中描述的功能測定中，與rituxamab相比，本發(fā)明的抗CD20抗體的CDC活性得到提高。本發(fā)明的新型抗CD20抗體、其合適的抗原結(jié)合片段、變體和衍生物也展示至少與利妥昔單抗展示的ADCC和凋亡活性相似的ADCC和凋亡活性，如在標(biāo)準(zhǔn)測定法例如美國申請公開號2004/0167319Al中描述的測定法中所測量的。本發(fā)明的最優(yōu)化的CDR分別用于抗CD20抗體的重鏈和輕鏈的Vh和Vl結(jié)枸域。本發(fā)明的抗CD20抗體的實例包含括選自SEQIDNO:12-18(分別稱為H1569、H1570、H1571、H1638、H1639、H1640、H1670)的Vh結(jié)枸域和/或逸自SEQIDNO:10和11(分別稱為L373和L419)的Vl結(jié)枸域。在特定的實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含最優(yōu)化的CDR。即，本發(fā)明的抗CD20抗體包含至少一個選自SEQIDNO:1-8或具有與選自SEQIDNO:1-8的序列至少大約65%、大約70%、大約75°/、大約80%、大約85%、大約90%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%或100%序列同一性的氨基酸序列的最優(yōu)化的CDR氨基酸序列。即，最優(yōu)化的CDR包含SEQIDNO:1-8中所示的序列和具有至少1、2、3、4或5個氨基酸置換(取決于涉及的CDR)的SEQIDNO:l-8的序列。因此，在一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含具有至少一個選自下列的最優(yōu)化的CDR的Vh結(jié)枸域(a)包含SEQIDNO:7中所示的氨基酸序列的CDRl;(b)包含具有與SEQID:7中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR1，其中CDRl在相應(yīng)于SEQIDNO:7的殘基7的位點上包含苯丙氨酸(Phe)殘基；(c)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的CDR2;(d)包含具有與SEQID:5或SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR2，其中CDR2在相應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的殘基8的位點上分別包含丙氨酸(Ala)或亮氨酸(Leu)殘基；(e)包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列的CDR3;(f)包含具有與SEQIDN0:1中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(g)包含具有與SEQIDNO:2中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(h)包含具有與SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基12的位點上的天冬氨酸(Asp)殘基；(i)包含具有與SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基11的位點上的甘氨酸(Gly)殘基；和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(j)包含具有與SEQIDNO:7中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR1，其中CDR1在相應(yīng)于SEQIDNO:7的殘基7的位點上包含作為苯丙氨酸(Phe)的保守性氨基酸置換的殘基；(k)包含具有與SEQIDNO:5中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR2,其中CDR2在相應(yīng)于SEQIDNO:5的殘基8的位點上包含作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基；(1)包含具有與SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR2，其中CDR2在相應(yīng)于SEQIDNO:6的殘基8的位點上包含作為亮氨酸(Leu)的保守性氨基酸置換的殘基；(m)包含具有與SEQIDN0:1中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3,其中CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基9的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基12的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；(n)包含具有與SEQIDNO:2中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基5的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，其中保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(n)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基9的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基12的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；(o)包含具有與SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列至少85°/。序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基5的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，其中保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基9的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基12的位點上的作為天冬氨酸(Asp)的保守性氨基酸置換的殘基；和(p)包含具有與SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基5的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，其中保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基9的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基11的位點上的作為甘氨酸(Gly)的保守性氨基酸置換的殘基；和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基12的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含具有至少一個選自下列的CDR的、結(jié)構(gòu)域(a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;(b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含谷氨酰胺(Gln)殘基，和(c)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3,其中CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含作為谷氨酰胺(Gin)的保守性氨基酸置換的殘基，和(d)包含SEQIDN0:9中所示的序列的CDR2。在這些實施方式的一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含具有SEQIDNO:9中所示的序列的CDR2和選自下列CDR3的CDR3的、結(jié)構(gòu)域(a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;和(b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含谷氨酰胺(Gin)殘基。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含具有選自上面(a)至(p)項中所述的最優(yōu)化CDR的Vh結(jié)枸域；和具有至少一個選自下列CDR的CDR的、結(jié)構(gòu)域(a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;(b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含谷氨酰胺(Gln)殘基；(c)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85°/。序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含作為谷氨酰胺(Gin)的保守性氨基酸置換的殘基；和(d)包含SEQIDNO:9中所示的氨基酸序列的CDR2。在這些實施方式中的一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含具有CDR2和CDR3的Vl結(jié)枸域，所述CDR2包含SEQIDNO:9中所示的序列，所述CDR3選自(a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;和(b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85。/。序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含谷氨酰胺(Gln)殘基。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含具有選自上面(a)至(p)項中所述的最優(yōu)化CDR的Vh結(jié)枸域和具有SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列的W結(jié)構(gòu)域。在一些實施方式中，包含至少一個本發(fā)明的最優(yōu)化CDR的抗CD20抗體是IgGlk免疫球蛋白。在這樣的實施方式中，IgGlk免疫球蛋白可在免疫球蛋白的重鏈內(nèi)包含人IgGl恒定區(qū)和在免疫球蛋白的輕鏈內(nèi)包含人K恒定區(qū)。在特定的實施方式中，IgGlK免疫球蛋白在重鏈的可變區(qū)內(nèi)和輕鏈的可變區(qū)內(nèi)包含全部或部分人框架區(qū)。在其他實施方式中，IgGlK免疫球蛋白在重鏈的可變區(qū)內(nèi)和輕鏈的可變區(qū)內(nèi)包含鼠框架區(qū)。在本發(fā)明的另外的實施方式中，本發(fā)明的抗CD2G抗體包含具有選自SEQIDNO:12-18的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域和/或l結(jié)構(gòu)域，所述VL結(jié)構(gòu)域具有選自SEQIDNO:10和11的氨基酸序列或具有與SEQIDNO:10-18中所示的序列至少大約80%、85%、大約90%、大約91%、大約92%、大約93°/。、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%，、大約98°/。、大約99%或100%序列同一性的氨基酸序列。在本發(fā)明的其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域選自(a)包含具有與選自SEQIDNO:12-18的氨基酸序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域；(b)包含具有與SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(c)包含具有與SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(d)包含具有與SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基110的位點上的天冬氨酸(Asp)殘基；(e)包含具有與SEQIDNO:15中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基31的位點上的苯丙氨酸(Phe)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(f)包含具有與SEQIDNO:16中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(U相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基57的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(g)包含具有與SEQIDNO:17中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基57的位點上的亮氨酸(Leu)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(h)包含具有與SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基109的位點上的甘氨酸(Gly)殘基；和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(i)包含具有與SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基107的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基110的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；(j)包含具有與SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基103的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，其中所述保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基107的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基，和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基110的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；(k)包含具有與SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基103的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，其中所述保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基107的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基，和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基110的位點上的作為天冬氨酸(Asp)的保守性氨基酸置換的殘基(1)包含具有與SEQIDNO:15中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基31的位點上的作為苯丙氨酸(Phe)的保守性氨基酸置換的殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基103的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，其中所述保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基107的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基110的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；(m)包含具有與SEQIDNO:16中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基57的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基103的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，其中所述保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基107的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基110的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；(n)包含具有與SEQIDNO:17中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基57的位點上的作為亮氨酸(Leu)的保守性氨基酸置換的殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基103的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，其中所述保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基107的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基110的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基；和(o)包含具有與SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列至少85°/序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基103的位點上的作為丙氨酸(Ala)的保守性氨基酸置換的殘基，中所述保守性氨基酸置換不是甘氨酸，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基107的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基109的位點上的作為甘氨酸(Gly)的保守性氨基酸置換的殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基110的位點上的作為天冬酰胺(Asn)的保守性氨基酸置換的殘基。在一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含選自上面(a)至(o)項中所述的Vh結(jié)枸域；和包含可變輕鏈(Vl)結(jié)構(gòu)域，其中Vl結(jié)枸域選自(a)包含SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列的Vl結(jié)枸域；(b)包含具有與SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域；(c)包含具有與SEQIDNO:10中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域，其中W結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:9中所示的CDR2;(d)包含具有與SEQIDNO:11中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域；其中Vl結(jié)枸域包含至少一個(i)SEQIDNO:9中所示的CDR2，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:11的殘基91的位點上的谷氨酰胺(Gin)殘基；和(e)包含具有與SEQIDNO:11中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域；其中Vl結(jié)枸域包含至少一個(i)SEQIDNO:9中所示的CDR2,和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:11的殘基91的位點上的谷氨酰胺(Gin)的保守性氨基酸置換。在這些實施方式的一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:10中所示的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:10中所示的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域。在某些其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:10中所示的氨基酸序列的W結(jié)構(gòu)域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:15中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:10中所示的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:16中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:10中所示的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域。在另外的實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:17中所示的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:10中所示的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域。在另外的實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:10中所示的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域。在某些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域。在某些其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的Vl結(jié)構(gòu)域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:15中所示的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:16中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:17中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域和含有SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含含有具有與SEQIDNO:12-18中所示的任一序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域。在這些實施方式中的一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體還包含含有SEQIDNO:IO或SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含SEQIDNO:29中所示的VH結(jié)構(gòu)域(命名為H1286)或具有與SEQIDNO:"中所示的VH結(jié)構(gòu)域至少大約80%、大約85%、大約90%、大約91%、大約92%、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%或100%序列同一性的Vh結(jié)枸域。在這些實施方式中的一些實施方式中，這些抗CD20抗體還包含選自SEQIDNO:10和11的1結(jié)構(gòu)域(分別命名為L373和L419)。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含選自下列的Vh結(jié)構(gòu)域(a)SEQIDNO:29中所示的Vh結(jié)枸域，和(b)具有與SEQIDNO:29中所示的VH結(jié)構(gòu)域至少大約80%、大約85%、大約90%、大約91%、大約92%、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%或100%序列同一性的Vh結(jié)枸域；和具有至少一個選自下列CDR的Vt結(jié)構(gòu)域(a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;(b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸的CDR3,其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘4的位點上包含谷氨酰胺(Gln)殘基；和(c)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含作為谷氨酰胺(Gln)的保守性氨基酸置換的殘基。此類抗CD20抗體可任選地包含含有SEQIDNO:9中所示的序列的CDR2。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD2Q抗體包含選自下列的VH:(a)SEQIDNO:29中所示的VH結(jié)構(gòu)域，和(b)具有與SEQIDNO:29中所示的VH結(jié)構(gòu)域至少大約80%、大約85%、大約90%、大約91%、大約92%、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98°/。、大約99%或100%序列同一性的Vh結(jié)枸域；和具有至少一個選自下列CDR的的W結(jié)構(gòu)域(a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;(b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸的CDR3,其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘4的位點上包含谷氨酰胺(Gln)殘基；(c)包含具有與SEQIDNO:558中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3,其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含作為谷氨酰胺(Gln)的保守性氨基酸置換的殘基；和(d)包含SEQIDNO:9中所示的氨基酸序列的CDR2。在這些實施方式的一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體包含選自下列的Vh結(jié)枸域(a)SEQIDNO:29中所示的Vh結(jié)枸域，和(b)具有與SEQIDNO:29中所示的、結(jié)構(gòu)域至少大約80%、大約85%、大約90°/。、大約91%、大約92%、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%或100%序列同一性的Vh結(jié)枸域；和可變輕鏈(VJ結(jié)構(gòu)域，其中所述、結(jié)構(gòu)域選自(a)包含SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列的、結(jié)構(gòu)域；(b)包含具有與SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的l結(jié)構(gòu)域；(c)包含具有與SEQIDNO:10中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域，其中所述Vl結(jié)枸域包含SEQIDNO:9中所示的CDR2;(d)包含具有與SEQIDNO:ll中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含至少一個(i)SEQIDNO:9中所示的CDR2，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:11的殘基91的位點上的谷氨酰胺(Gln)殘基；和(e)包含具有與SEQIDNO:11中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域，其中所述^結(jié)構(gòu)域包至少一個(i)SEQIDNO:9中所示的CDR2，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:11的殘基91的位點上的谷氨酰胺(Gin)的保守性氨基酸置換?？笴D20抗體序列在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。參見，例如，美國專利5，736，137、5,776,456、5,843,439、5,500,362、5,677,180、5,693,493、5,721,108、5,736,137、6，120，767、5，843，685、5,576,184、6，399，061和美國申請公開號2004/0167319;其全部通過引用合并入本文。已認(rèn)識到，可對本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何抗CD20抗體或其組合產(chǎn)生本文中描述的修飾。因此本發(fā)明包括包含至少一個本文中描述的最優(yōu)化CDR的鼠抗CD20抗體、嵌合抗CD20抗體和人源化抗CD20抗體。可通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的和本文中描述的測定法就增強的活性檢測使用這些修飾和組合改造的抗CD20抗體。用于測量抗CD20抗體結(jié)合特異性的方法包括但不限于標(biāo)準(zhǔn)竟?fàn)幗Y(jié)合測定法、用于監(jiān)視B細(xì)胞的免疫球蛋白分泌的測定法、B細(xì)胞增殖測定法、Banchereau-樣B細(xì)胞增殖測定法、用于抗體產(chǎn)生的T細(xì)胞輔助細(xì)胞測定法(Tcellhelperassaysforantibodyproduction)、B細(xì)胞增殖的共刺激觀'J定法和用于B細(xì)胞激活標(biāo)記的上調(diào)的測定法。參見，例如，WO00/75348和美國專利6，087，329中公開的此類測定法。關(guān)于CDC、ADCC和凋亡測定法，參見，例如，Subbramanian等人(2002)J.Clin.Microbiol.40:2141-2146;Ahman等人(1994)J.Immunol.Methods36:243-254;Brezicka等人(2000)CancerIm麵o1.I畫noiher.49:235-242;Gazzano-Santoro等人(1997)J.Immunol.Methods202:163-171;Prang等人(2005)BritishJ.Cancer92:342-349;Shan等人(1998)Blood92:3756-3771;Ghetie等人(2001)Blood97:1392-1398;和Mathas等人(2000)CancerResearch60:7170-7176;其全部通過引用合并入本文。本發(fā)明的特定抗CD20抗體包括以任何組合與具有SEQIDNO:10或11的氨基酸序列的VL結(jié)構(gòu)域或其變體配對的具有選自SEQIDNO:12-18的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域或其變體。本發(fā)明的抗CD20抗體包括包含具有選自SEQIDNO:12-18的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域和具有選自SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的氨基酸序列的Vt結(jié)構(gòu)域的抗體?？笴D20抗體的適當(dāng)?shù)纳锘钚宰凅w可用于本發(fā)明的方法。此類變體將保持期望的親本抗CD20抗體的結(jié)合性質(zhì)。制備抗體變體的方法通?？稍诒绢I(lǐng)域內(nèi)獲得。例如，可通過編碼目的氨基酸序列的克隆的DNA序列中的突變制備本文中描述的抗CD20抗體、抗體區(qū)域例如CDR(SEQIDNO:1-8)或重鏈或輕鏈的抗體可變結(jié)構(gòu)域例如SEQIDNO:12-18的任一個中所示的Vw結(jié)構(gòu)域或SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的Vt結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列變體。用于誘變和核苷酸序列改變的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。參見，例如，Walker和Gaastra,eds.(1983)TechniquesinMolecularBiology(MacMillanPublishingCompany,NewYork);Kunkel(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:488-492;Kunkel等人(1987)MethodsEnzymol.154:367-382;Sambrook等人(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual(ColdSpringHarbor,NewYork);美國專利4，873，192;和本文中引用的參考文獻(xiàn)；通過引用合并入本文。關(guān)于不影響目的多肽的生物學(xué)活性的適當(dāng)?shù)陌被嶂脫Q的指導(dǎo)可見于Dayhoff等人(1978)在AtlasofProteinSequenceandStructure(Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,D.C)，pp.345-352(通過以其全文引用合并入本文)的模型中。Dayhoff等人的模型使用可接受點突變(PointAcceptedMutation)(PAM)氨基酸相似性矩陣(PAM250矩陣)來確定合適的保守性氨基酸置換。保守性置換，例如一個氨基酸用具有相似性質(zhì)的另一個氨基酸來置換，可以是優(yōu)選的。由Dayhoff等人的模型的PAM250矩陣教導(dǎo)的保守性氨基酸置換的實例包括但不限于Gly<=>Ala、Val<=>Ile<=>Leu、Asp<=>Glu、Lys<=>Arg、AsrK—Gln和Phe<=>Trp<=>Tyr。在構(gòu)建目的抗CD2Q抗體多肽的變體中，這樣產(chǎn)生修飾，以使變體繼續(xù)具有期望的性質(zhì)，即能夠特異性結(jié)合在人細(xì)胞的表面上表達(dá)的人CD20抗原并具有增強的功能，特別地增加的CDC活性和/或增加的對CD20抗原的結(jié)合親和力，如本文中所描述的。顯然，編碼變體多肽的DNA中產(chǎn)生的任何突變必需不能將序列置于閱讀框架之外，優(yōu)選將不產(chǎn)生可產(chǎn)生二級mRNA結(jié)構(gòu)的互補區(qū)域。參見EP專利申請公開號75,444。此外，可通過許多方法突變抗CD20抗體的恒定區(qū)來改變效應(yīng)子作用。例如參見美國專利6，737，056B1和美國專利申請公開號2004/0132101A1,其公開了最優(yōu)化結(jié)合Fc受體的抗體的Fc突變。優(yōu)選，參照抗CD20抗體的變體具有氨基酸序列，所述氨基酸序列具有與參照抗CD2Q抗體分子的氨基酸序列或與參照抗體分子的更短部分至少大約80、大約85%、大約88%、大約90%、大約91°/。、大約92%、大約93°/。、大約94%或大約95%序列同一性的氨基酸序列。更優(yōu)選，所述分子共有至少大約96%、大約97%、大約98%或大約99%序列同一性。當(dāng)在本文中描述時，任何特定的多肽，包括本文中公開的CDR、VH結(jié)構(gòu)域和Vt結(jié)構(gòu)域，與另一個多肽至少大約65%、大約70°/。、大約75%、大約80%、大約85%、大約90%、大約91%、大約92°/。、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%或甚至大約100%的同一性，可使用本領(lǐng)域內(nèi)已知的方法和計算機程序/軟件來測定，例如，但不限于BESTFIT程序(WisconsinSequenceAnalysisPackage,Version8forUnix,GeneticsComputerGroup,UniversityResearchPark,575ScienceDrive,Madison,WI53711)。BESTFIT使用Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2:482-489的局部同源性比對來發(fā)現(xiàn)兩個序列之間的同源性的最佳區(qū)段。當(dāng)使用BESTFIT或任何其他序列比對程序來確定特定序列是否與根據(jù)本發(fā)明的參照序列例如95%的同一性時，當(dāng)然，設(shè)置參數(shù)以使在參照多肽序列的全長上計算同一性的百分?jǐn)?shù)和允許同源性中缺口達(dá)到參照序列的氨基酸總數(shù)的5%。為了本發(fā)明的目的，使用缺口開放罰分為12和缺口延伸罰分為2的仿射性缺口搜尋(affinegapsearch)，62的BLOSUM矩陣，利用Smith-Waterman同源性搜尋算法測定百分?jǐn)?shù)序列同一性。在Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2:482-489中教導(dǎo)了Smith-Waterman同源性搜尋算法。變體可以例如與參照抗CD20抗體相異少至1至15個氨基酸殘基，少至1至10個氨基酸殘基，例如6至10個，少至5個，少至4、3、2或甚至1個氨基酸殘基。至于兩個氨基酸序列的最優(yōu)比對，相對于參照氨基序列，變體氨基酸序列的連續(xù)區(qū)段可具有其他的氨基酸殘疾或缺失的氨基酸殘基。用于與參照氨基酸序列比較的連續(xù)區(qū)段將包含至少20個連續(xù)氨基酸殘基，并且可以是30、40、50或更多個氨基酸殘基?？蛇M(jìn)行關(guān)于與保守性殘基置換或缺口相關(guān)的序列同一性的校正(參見Smith-Waterman同源性搜尋算法)。當(dāng)將任何兩個多肽序列最優(yōu)比對以進(jìn)行比較時，公認(rèn)比對中出現(xiàn)在彼此相對的殘基占據(jù)它們各自多肽中彼此相應(yīng)的位置。這樣的位點在本文中稱為"相應(yīng)位點"，相應(yīng)位點上的殘基稱為"相應(yīng)的殘基"或相互"相應(yīng)"的殘基。因此，例如，當(dāng)將目的多肽對具有例如10個殘基的參照多肽序列進(jìn)行最佳比對時，目的多肽內(nèi)顯現(xiàn)參照序列的相對的殘基5的殘基稱為參照序列的"相應(yīng)于殘基5的位點上的殘基"。能夠特異性結(jié)合CD20和保留期望的CDC活性的增加和/或增加的對CD20抗原的結(jié)合親和力的多肽的精確化學(xué)結(jié)構(gòu)取決于許多因素。由于可電離的氨基和羧基存在于分子中，因此特定多肽可以以酸鹽或堿鹽或以中性形式獲得。當(dāng)置于合適的環(huán)境條件中時保持它們的生物學(xué)活性的所有此類制劑包括在本文中所使用的抗CD20抗體的定義內(nèi)。此外，多肽的一級氨基酸序列可通過使用糖部分的衍生(糖基化)或通過其他補充分子例如脂質(zhì)、磷酸、乙?；葋碓黾?。其還可以通過與糖綴合來增加。這樣的增加的某些方面通過生產(chǎn)宿主的翻譯后加工系統(tǒng)來完成；可體外導(dǎo)入其他此類修飾。無論如何，此類修飾包括在本文中使用的抗CD20抗體的定義之內(nèi)，只要不破壞抗CD20抗體的期望的性質(zhì)。預(yù)期此類修飾可在不同的測定中通過增強或減小多肽的活性來在數(shù)量上或質(zhì)量上影響活性。此外，鏈中單個氨基酸殘基可通過氧化、還原或其他衍生化來修飾，多肽可進(jìn)行切割以獲得保持活性的片段。不破壞期望的性質(zhì)(即，對CD20的結(jié)合特異性和增加的CDC活性和/或增加的對CD20抗原的結(jié)合親和力)的此類改變不將所述多肽序列排除在如本文中所使用的目的抗CD20抗體的定義外。現(xiàn)有技術(shù)提供了關(guān)于多肽變體的制備和用途的詳盡指導(dǎo)。在制備抗CD20抗體變體中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定對天然蛋白質(zhì)核苷酸或氨基酸序列的修飾，所述修飾產(chǎn)生適合用作用于本發(fā)明的方法的藥物組合物的治療活性成分的變體。在某些抗CD20抗體中，可使用本領(lǐng)域內(nèi)已知的技術(shù)對Fc部分進(jìn)行突變以減少效應(yīng)子作用。例如，恒定區(qū)的缺失或失活(通過點突變或其他方法)可減少循環(huán)的經(jīng)修飾抗體的Fc受體結(jié)合，從而增加腫瘤定60位。在其他情況下，符合本發(fā)明的恒定區(qū)的修飾可能減小補體結(jié)合，從而減少血清半衰期和綴合的細(xì)胞毒素的非特異性結(jié)合。恒定區(qū)的其他修飾可用于修飾二硫鍵或寡糖部分，所述二硫鍵或寡糖部分由于增加的抗原特異性或抗體柔性而允許增強定位。所得的修飾的生理學(xué)特征、生物利用度和其他生物化學(xué)效應(yīng)例如腫瘤定位、生物擾動和血清半衰期可使用熟知的免疫技術(shù)容易地測量和定量而無需過度實驗。本發(fā)明的抗CD2Q抗體還包括例如通過將任何類型的分子共價連結(jié)合)來修飾的衍生物。例如，但不以限于，抗體衍生物包括已通過例如糖基化、?；?、PEG化、磷酸化、酰胺化、使用已知的保護(hù)/封閉基團的衍生化、蛋白水解切割、至細(xì)胞配體或其他蛋白的連接等修飾的抗體?？赏ㄟ^已知的技術(shù)進(jìn)行許多化學(xué)修飾的任一種，所述技術(shù)包括但不限于特異性化學(xué)切割、?；?、曱酰化、衣霉素的代謝合成等。此外，所述衍生物可包含一種或多種非經(jīng)典氨基酸。"保守性的氨基酸置換"是其中氨基酸殘基被具有帶相同電荷的側(cè)鏈的氨基酸殘基所代替。本領(lǐng)域已經(jīng)定義具有帶相同電荷的側(cè)鏈的氨基酸殘基家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈的氨基酸(例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、具有酸性側(cè)鏈的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不帶電荷的極性側(cè)鏈的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非極性側(cè)鏈的氨基酸(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、具有P分枝側(cè)鏈的氨基酸(例如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和具有芳香側(cè)鏈的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。備選地，可以通過例如飽和突變來在編碼序列的全部或一部分隨機引入突變，并且可以針對生物活性來對所得的突變體進(jìn)行篩選，從而鑒定出保留活性(例如結(jié)合抗CD20多肽的能力)的突變體。例如，可以只在抗體分子的框架區(qū)或只在抗體分子的CDR區(qū)域引入突變。所引入的突變可以是沉默突變或中性的錯義突變，即，對抗體結(jié)合抗原的能力不具有影響或幾乎不具有影響。這些類型的突變可用于優(yōu)化密碼子選擇或者提高雜交瘤抗體的產(chǎn)量。備選地，非中性的錯義突變可以改變抗體結(jié)合抗原的能力。大部分沉默突變和中性的錯義突變的位置可能位于框架區(qū)中，而大部分非中性的錯義突變的位置可能位于CDR中，但這不是絕對必需的。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠設(shè)計和測試具有所需性質(zhì)(例如抗原結(jié)合活性沒有改變或者結(jié)合活性發(fā)生改變(例如抗原結(jié)合活性中的親和力成熟或優(yōu)化或者其他改善，或者抗體特異性的變化))的突變體分子。突變后，可以按常規(guī)方式表達(dá)所編碼的蛋白質(zhì)，并且可以采用本文所述的技術(shù)或通過本領(lǐng)域已知的常規(guī)修改的技術(shù)來測定編碼蛋白質(zhì)的功能活性和/或生物活性(例如免疫特異性結(jié)合CD20多肽的至少一個表位的能力)。IV.編碼抗CD20抗體的多核苷酸本發(fā)明還提供了編碼本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的核酸分子。在一個實施方式中，本發(fā)明提供了分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH結(jié)構(gòu)域)的核酸組成，其中VH結(jié)構(gòu)域的至少一個CDR具有氨基酸序列，所述氨基酸序列為SEQIDNO:1-7的任一個的至少大約80%、大約85%、大約90°/。、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%相同或與之相同。在其他實施方式中，本發(fā)明提供了分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼免疫球蛋白VH結(jié)構(gòu)域的核酸組成，其中Vh結(jié)構(gòu)域的至少一個CDR選自(a)包含SEQIDNO:7中所示的氨基酸序列的CDR1;(b)包含具有與SEQID:7中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR1，其中所述CDR1在相應(yīng)于SEQIDNO:7的殘基7的位點包含苯丙氨酸(Phe)殘基；(c)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的CDR2;(d)包含具有與SEQID:5或SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR2，其中所述CDR2在相應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的殘基628的位點上分別包含丙氨酸(Ala)或亮氨酸(Leu)殘基；(e)包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列的CDR3;(f)包含具有與SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(g)包含具有與SEQIDNO:2中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(h)包含具有與SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基12的位點上的天冬氨酸(Asp)殘基；和(i)包含具有與SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基11的位點上的甘氨酸(Gly)殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；其中包含編碼的VH結(jié)構(gòu)域的抗CD20抗體特異性或優(yōu)先結(jié)合CD20。在一些實施方式中，本發(fā)明提供了分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼免疫球蛋白VH結(jié)構(gòu)域的核酸組成，其中Vh結(jié)構(gòu)域的至少一個CDR選自(a)包含SEQIDNO:7中所示的序列的CDR1;(b)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6中所示的序列的CDR2;和(c)包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4中所示的序列的CDR3。在特定的實施方式中，編碼免疫球蛋白Vh結(jié)枸域的分離的多核苷酸包含至少一個編碼CDR的序列，所述編碼CDR的序列選自SEQIDNO:24(編碼SEQIDNO:1的最優(yōu)化的CDR3)、SEQIDNO:25(編碼SEQIDNO:2的最優(yōu)化的CDR3)、SEQIDNO:26(編碼SEQIDNO:3的最優(yōu)化的CDR3)和SEQIDNO:27(編碼SEQIDNO:5的最優(yōu)化的CDR2)。在另外的實施方式中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼VH結(jié)構(gòu)域的核酸組成，所述Vh結(jié)枸域具有與參照VH結(jié)構(gòu)域多肽序列至少大約80%、大約85%、大約90%、大約91%、大約92%、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%或100%的同一性的氨基酸序列，所述參照Vh結(jié)枸域多肽序列選自SEQIDNO:12-18和29，其中包含編碼的VH結(jié)構(gòu)域的抗CD20抗體特異性或優(yōu)先結(jié)合CD20。在其他實施方式中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼免VH結(jié)構(gòu)域的核酸組成，所述VH結(jié)構(gòu)域選自(a)包含具有與選自SEQIDNO:12-18和29的氨基酸序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域；(b)包含具有與SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vf,結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(c)包含具有與SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(d)包含具有與SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基110的位點上的天冬氨酸(Asp)殘基；(e)包含具有與SEQIDNO:15中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基31的位點上的苯丙氨酸(Phe)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(f)包含具有與SEQIDNO:16中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基57的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；(g)包含具有與SEQIDNO:17中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(i)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基57的位點上的亮氨酸(Leu)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和(h)包含具有與SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基(U相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基，(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基，(iii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基109的位點上的甘氨酸(Gly)殘基，和(iv)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基。在另外的實施方式中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼VH結(jié)構(gòu)域的核酸組成，其中所述核酸具有序列，所述序列具有與選自SEQIDN0:19-22的核苷酸序列至少大約80%、大約85%、大約90%、大約91%、大約92%、大約93%、大約94%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%或100%序列同一性，其中包含編碼的VH結(jié)構(gòu)域的抗CD2Q抗體特異性或優(yōu)先結(jié)合抗CD20。在其他實施方式中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vl結(jié)構(gòu)域)的核酸組成，其中、結(jié)構(gòu)域包含具有與SEQIDN0:8中所示的CDR序列至少大約80%、大約85%、大約90%、大約95%、大約96%、大約97%、大約98%、大約99%或100%的同一性的氨基酸序列的CDR。在另外的實施方式中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼免疫球蛋白輕鏈的VL結(jié)構(gòu)域的核酸組成，其中所述Vl結(jié)枸域包含至少一個CDR，所述CDR選自(a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;(b)包含具有與SEQID:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3,其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點包含谷氨酰胺(Gln)殘基和(c)具有SEQIDNO:9中所示的氨基酸序列的CDR2。在這些實施方式的一些實施方式中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼免疫球蛋白輕鏈的VL結(jié)構(gòu)域的核酸組成，其中Vl結(jié)枸域包含具有SEQIDNO:9中所示的氨基酸序列的CDR2和CDR3，所述CDR3選自(a)包含SEQIDN0:8中所示的氨基酸序列的CDR3;和(b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含谷氨酰胺(Gin)殘基。在另外的實施方式中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼W結(jié)構(gòu)域的核酸組成，所述Vl結(jié)枸域具有與SEQIDNO:11中所示的參照W結(jié)構(gòu)域多肽序列至少大約80°/。、大約85%、大約90%、大約95%、大約96°/d、大約97%、大約98°/。、大約99%或100%的同一性的氨基酸序列，其中包含編碼的VL結(jié)構(gòu)域的抗CD20抗體特異性或優(yōu)先結(jié)合CD20。在其他實施方式中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含、大體上由或由編碼VL結(jié)構(gòu)域的核酸組成，所述VL結(jié)構(gòu)域選自(a)包含SEQIDNO:IO或SEQIDNO:11中所示的序列的、結(jié)構(gòu)域；(b)包含具有與SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域；(c)包含具有與SEQIDNO:10中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:9中所示的CDR2;和(d)包含具有與SEQIDNO:11中所示的序列至少85°/。序列同一性的氨基酸序列的W結(jié)構(gòu)域，其中所述W結(jié)構(gòu)域包含至少一個(i)SEQIDNO:9中所示的CDR2，和(ii)相應(yīng)于SEQIDNO:11的殘基91的位點上的谷氨酰胺(Gin)殘基。上述多核苷酸的任一個還可包括編碼例如指導(dǎo)編碼的多肽分泌的信號肽、本文中描述的抗體恒定區(qū)或本文中描述的其他異源多肽的其他的核酸。同樣，如在本文的其他地方更詳細(xì)地描述的，本發(fā)明包括含有多核苷酸的組合物，所述多核苷酸包含一個或多個上述多核苷酸。在一個實施方式中，本發(fā)明包括包含第一多核香酸和第二多核苷酸的組合物，其中所述第一多核苷酸編碼本文中描述的Vh結(jié)枸域，其中所述第二多核苷酸編碼本文中描述的、結(jié)構(gòu)域。特別地，組合物包含、大體上由或由編碼VH結(jié)構(gòu)域的多核苷酸(如SEQIDNO:19-22的任一個中所示的)，和編碼、結(jié)構(gòu)域的多核苷酸，例如，編碼SEQIDNO:IO或SEQIDNO:11中所示的、結(jié)構(gòu)域的多核苷酸組成。本發(fā)明還包括本發(fā)明的多核苷酸的片段，如其他地方所描述的。此外，本發(fā)明還包括如本文中所描述的編碼融合多肽、Fab片段和其他衍生物的多核苷酸。多核苷酸可通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何方法產(chǎn)生或制備。例如，如果抗體的核苷酸序列是已知的，編碼抗體的多核苷酸可從化學(xué)合成的寡核苷酸裝配(例如，Kutmeier等人(1994)BioTechniques17:242中所描述的)，簡而言之，這涉及包含編碼抗體的序列部分的重疊寡核67苷酸的合成，這些寡核苷酸的退火和連接，然后通過PCR擴增連接的寡核苷酸。備選地，編碼抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的多核苷酸可從來自適合來源的核酸產(chǎn)生。如果包含編碼特定抗體的核酸的克隆不可獲得，但抗體的序列已知，那么編碼該抗體的核酸可化學(xué)合成或通過如下方法從合適的來源(例如抗體cDNA文庫或從任何表達(dá)抗體或其他抗CD20抗體的組織或細(xì)胞(例如選擇以表達(dá)抗體的雜交瘤細(xì)胞)產(chǎn)生的cDNA文庫、從任何表達(dá)抗體或其他抗CD20抗體的組織或細(xì)胞分離的核酸，優(yōu)選polyA+RNA)獲得，所述方法是通過使用可與序列的3'和5'末端雜交的合成引物的PCR擴增或通過使用對于待鑒定的特定基因序列是特異性的寡核苷酸探針的克隆(例如，來自編碼其他抗CD20抗體的抗體的cDNA文庫的cDNA克隆)。然后可使用本領(lǐng)域內(nèi)熟知的任何方法將由PCR產(chǎn)生的擴增的核酸克隆入可復(fù)制的克隆載體。在確定抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的核苷酸序列和相應(yīng)的氨基酸序列后，可使用本領(lǐng)域內(nèi)熟知的用于制備核苷酸序列的方法操作其核普酸序列來產(chǎn)生具有不同氨基酸序列的抗體，例如產(chǎn)生氨基酸置換、缺失和/或插入，所述方法是例如，重組DNA技術(shù)、定向資變、PCR等(參見Sambrook等人(1990)MolecularCloning,ALaboratoryManual(第2版；ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY)和A應(yīng)bel等人，eds.(1998)CurrentProtocolsinMolecularBiology(JohnWiley&Sons,NY)(以其全文通過引用合并入本文)中描述的技術(shù)。編碼抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的多核苷酸可由任何多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸組成，其可以是未經(jīng)修飾的RNA或DNA或者經(jīng)^f務(wù)飾的RNA或DNA。例如，編碼抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的多核苷酸可由單鏈和雙鏈DNA、單鏈和雙鏈區(qū)域的混合物的DNA、單鏈和雙鏈RNA和單鏈和雙鏈區(qū)域的混合物的RNA、包含DNA和RNA的可以是單鏈或更常見地雙鏈或單鏈和雙鏈區(qū)域的混合物的雜種分子組成。此外，編碼抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的多核苷酸可由包含RNA或DNA或者RNA和DNA兩者的三鏈區(qū)域組成。編碼抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的多核苷酸還可包含一個或多個經(jīng)修飾的堿基或者因穩(wěn)定性或其他原因而修飾的DNA或RNA主鏈。"經(jīng)修飾的，，堿基包括，例如，三苯甲基堿基和稀有堿基例如肌苷?？蓪NA和RNA產(chǎn)生多種修飾；從而，"多核苷酸"包括化學(xué)、酶促或代謝修飾的形式。編碼來源于免疫球蛋白的多肽(例如，免疫球蛋白重鏈部分或輕鏈部分)的非天然變體的分離的多核苷酸可通過將一個或多個核苷酸置換、添加或缺失導(dǎo)入免疫球蛋白的核苷酸序列來產(chǎn)生，這樣一個或多個氨基酸置換、添加或缺失被導(dǎo)入編碼的蛋白質(zhì)。突變可通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)例如定點誘變和PCR介導(dǎo)的誘變來導(dǎo)入。優(yōu)選，在一個或多個非必需氨基酸殘基上產(chǎn)生保守性氨基酸置換。V.融合蛋白和抗體綴合物如本文其他處更詳細(xì)討論的，本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以進(jìn)一步在N末端或C末端與異源多肽重組融合，或者化學(xué)綴合(包括共價綴合和非共價綴合)至多肽或其他組合物。例如，抗CD20抗體可以重組融合或綴合至作為檢測測定法中的標(biāo)記物的分子、以及效應(yīng)器分子(例如異源多肽、藥品、放射性核素或毒素)。例如參見PCT公開WO92/08495、WO91/14438、WO89/12624、美國專利序號5，314,995和EP396,387。本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物包括修飾的衍生物，即，任何類型的分子與所述的抗體形成共價連接，使得該共價連接不會阻礙抗體與CD20的結(jié)合。例如但不限于，所述的抗體衍生物包括已經(jīng)通過例如糖基化、乙?；?、聚乙二醇化、磷?；?、磷酸化、酰胺化、通過已知的保護(hù)/封閉基團的衍生化、蛋白水解切割、與細(xì)胞配體或其他蛋白質(zhì)連接等方式而已經(jīng)被修飾的抗體?？梢葬娪靡阎募夹g(shù)進(jìn)行多種化學(xué)修飾中的任何修飾，其中所述的化學(xué)修飾包括，但不限于特異性的化學(xué)切割、乙?；⒓柞；?、衣霉素的代謝合成等等。此外，所述的衍生物可以包含一種或多種非常規(guī)的氨基酸。本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以由彼此通過肽鍵或修飾的肽鍵(即，肽的等排體)而連接的氨基酸構(gòu)成，并且可以包含除了20個基因編碼的氨基酸以外的氨基酸?？笴D20抗體可以通過天然方法(例如翻譯后加工)或者通過本領(lǐng)域公知的化學(xué)修飾技術(shù)來進(jìn)行修飾。這種修飾在基礎(chǔ)課本中和更詳細(xì)的專論中、以及在大量的研究文獻(xiàn)中都具有較好的描述。修飾可以在抗CD20抗體中的任何位置處發(fā)生，所述的位置包括肽骨架、氨基酸側(cè)鏈、氨基或羧基末端、或多個部分(例如糖)。應(yīng)該理解，在給定的抗CD20抗體中，相同類型的修飾可以以相同的程度或不同的程度存在于多個位置處。此外，給定的抗CD20抗體可以包含許多類型的修飾?？笴D20抗體可以是分枝的(例如由于泛素化所導(dǎo)致)，并且它們可以是環(huán)狀的，并具有或不具有分枝。環(huán)狀、分枝、以及分枝環(huán)狀的抗CD20抗體可以通過翻譯后的天然過程形成，或者可以通過合成方法形成。修飾包括乙酰化、?；DP-核糖基化、酰胺化、核黃素的共價連接、亞鐵血紅素部分的共價連接、核苷酸或核苷酸衍生物的共價連接、脂質(zhì)或脂質(zhì)衍生物的共價連接、磷脂酰肌醇的共價連接、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵的形成、去甲基化、共價交聯(lián)體的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、曱酰化、y羧酸化、糖基化、GPI錨的形成、羥基化、碘化、甲基化、肉豆蔻?；?、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊二烯化、外消旋化、硒化、硫化、由轉(zhuǎn)運RNA介導(dǎo)的向蛋白質(zhì)中加入氨基酸(例如精氨?；?、以及泛素化(例如參見Proteins-StructureAndMolecularPproperties，T.E.Creighton，W.H.FreemanandCompany,NewYork2ndEd.，(1993);POSTTRANSLAT顧ALC0VALENTMODIFICATIONOFPROTEINS,B.C.Johnson,Ed.，AcademicPress,NewYork,pgs.1-12(1983);Seifteretal.，MethEnzymol182:626-646(1990);Rattanetal.，AnnNYAcadSci663:48-62(1992))。本發(fā)明還提供了融合蛋白質(zhì)，其包含抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，以及異源多肽?？贵w與之融合的異源多肽可用于發(fā)揮功能或用于靶向表達(dá)C35多肽的細(xì)胞。在一個實施方式中，本發(fā)明的融合蛋白質(zhì)包含、基本上由或者由所述的多肽或其片段或變體、以及異源多肽序列構(gòu)成，其中所述的多肽具有本發(fā)明抗體的任何一個或多個VH結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列或者本發(fā)明抗體的任何一個或多個VL結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。在另一個實施方式中，用于本文所述的診斷和治療方法中的融合蛋白質(zhì)包含、基本上由或者由所述的多肽或其片段或變體、以及異源多肽序列構(gòu)成，其中所述的多肽具有抗CD20抗體或者其片段、或變體或衍生物的VH結(jié)構(gòu)域的任何一個、兩個、三個CDR的氨基酸序列或者抗CD20抗體或者其片段、或變體或衍生物的Vl結(jié)構(gòu)域的任何一個、兩個、三個CDR的氨基酸序列。在一個實施方式中，所述的融合蛋白質(zhì)包含多肽或其片段、衍生物或變體、以及異源多肽序列，其中所述的多肽具有本發(fā)明抗CD20抗體的VH結(jié)構(gòu)域的CDR3的氨基酸序列，并且所述的融合蛋白質(zhì)特異性結(jié)合CD20的至少一個表位。在另一個實施方式中，融合蛋白質(zhì)包含多肽或其片段、衍生物或變體、以及異源多肽序列，其中所述的多肽具有本發(fā)明抗CD20抗體的至少一個VH結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列和本發(fā)明抗CD20抗體的至少一個Vl結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。優(yōu)選地，所述的融合蛋白質(zhì)的Vh和VL結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)于特異性結(jié)合CD20的至少一個表位的單一來源的抗體(或者scFv或Fab片段)。在另一個實施方式中，用于本文所述的診斷和治療方法中的融合蛋白質(zhì)包含多肽或其片段或變體、以及異源多肽序列，其中所述的多肽具有抗CD20抗體的Vh結(jié)枸域的任何一個、兩個、三個或多個CDR的氨基酸序列和抗CD20抗體的Vl結(jié)枸域的任何一個、兩個、三個或多個CDR的氨基酸序列。優(yōu)選地，VH結(jié)構(gòu)域或VL結(jié)構(gòu)域的兩個、三個、四個、五個、六個或多個CDR對應(yīng)于本發(fā)明的單一來源的抗體(或者scFv或Fab片段)。本發(fā)明還包括編碼所述的融合蛋白質(zhì)的核酸分子。文獻(xiàn)中報道的示例性融合蛋白質(zhì)包括以下物質(zhì)的融合物，所述的物質(zhì)為T細(xì)胞受體(Gascoigneetal(1987)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:2936-2940);CD4(Caponetal.(1989)，Nature537:525-531;Trauneckereta"1989)，Nature339:68-70;Zettmeissletal.(1990)，DNACellBiol.USAP:347-353;和Byrnetal，Nature344:667-670(1990));L-選擇蛋白(歸巢受體)(Watsonetal(1990)，J.Cell.Biol.110:2221-2229;和Watsonetal(1991)，Nature349:164-167);CD44(Aruffoetal(1990)，Cell61:1303-1313);CD28和B7(Linsleyetal(199D，J.Exp.Med.173:721-730);CTLA-4(Lisleyetal(199D，J.Exp.Med.174:561-569);CD22(St諸enkovicetal(1991)，Cell66:1133-1144);TNF受體(Ashkenazietal(199D，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:10535-10539;Lesslaueretal(1991)，Eur.J.Immunol..27:2883-2886;和Peppeletal(1991)，J.Exp.Med.174:1483-1489);以及IgE受體(Ridgway和Gorman,J.(1991)Cell.Biol.Vol.115，AbstractNo.1448)。如本文中其他處所述，可以將本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物融合到異源多肽中，以增長所述多肽的體內(nèi)半衰期，或者用于使用本領(lǐng)域已知的方法的免疫測定。例如，在一個實施方式中，PEG可以與本發(fā)明的抗CD20抗體綴合，從而增長它們的體內(nèi)半衰期。參見Leong，S.R.，etal.(2001)，Cytokine16:106;Adv.inDrugDeliv.Rev.54:531(2002);或Weiretal.(2002)，Biochem.Soc.Transactions30:512。此外，本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以被融合到標(biāo)記物序列(例如肽)中，從而有利于它們的純化或檢測。在優(yōu)選的實施方式中，所述的標(biāo)記物氨基酸序列為六組氨酸的肽，例如pQE載體(QIAGEN，Inc.,9259EtonAvenue,Chatsworth，Calif.，91311)中提供的標(biāo)簽等，許多這種標(biāo)記物是市售可得的。例如，如Gentz等人(1989)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:821-824所述，六組氨酸提供融合蛋白質(zhì)的方便的純化方法?？捎糜诩兓钠渌臉?biāo)簽包括，但不限于"HA"標(biāo)簽，其對應(yīng)于衍生自流感血凝素蛋白質(zhì)的表位(Wilsonetal.(1984),Cell37:767)和"flag"標(biāo)簽。可以采用本領(lǐng)域公知的方法來制備融合蛋白質(zhì)(例如參見美國專利序號5，116，964和5，225，538)?？梢詰{經(jīng)驗選擇進(jìn)行融合的精確位點，從而優(yōu)化融合蛋白質(zhì)的分泌或結(jié)合特征。然后，將編碼融合蛋白質(zhì)的DNA轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中，以用于表達(dá)。本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以以非綴合的形式使用，或者可以與多種分子中的至少一種綴合，從而例如改善所述分子的治療性質(zhì)，以有助于靶標(biāo)的檢測，或者用于患者的成像或治療。當(dāng)進(jìn)行純化時，可以在純化之前或純化之后將本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物標(biāo)記或綴合。具體而言，可以將本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物綴合至治療性試劑、前體藥物、肽、蛋白質(zhì)、酶、病毒、脂質(zhì)、生物應(yīng)答修飾劑、藥物試劑或PEG。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解的是，還可以根據(jù)所選的待綴合的試劑來釆用多種技術(shù)對綴合物進(jìn)行組裝。例如，通過例如使結(jié)合多肽與生物素的活化酯(例如生物素N-羥基琥珀酸亞胺酯)發(fā)生反應(yīng)來制備具有生物素的綴合物。類似地，在偶聯(lián)劑(例如本文所列出的那些)存在下，或者通過與異硫氰酸酯(優(yōu)選為異硫氰酸熒光素)反應(yīng)來制備具有熒光標(biāo)記物的綴合物?？梢园凑疹愃频姆绞街苽浔景l(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的綴合物。本發(fā)明還包括了綴合至診斷試劑或治療性試劑的本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。所述的抗CD20抗體包括其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以在診斷中使用，例如，作為臨床檢驗過程的一部分來監(jiān)測疾病的發(fā)展或進(jìn)程，以例如確定給定的治療和/或預(yù)防方案的效果?？梢酝ㄟ^使抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物與可檢測的物質(zhì)偶聯(lián)來幫助檢測?？蓹z測物質(zhì)的實例包括多種酶、輔基、熒光材料、發(fā)光材料、生物發(fā)光材料、放射性材料、利用了各種正電子發(fā)射斷層顯像的正電子發(fā)射金屬、以及非放射性的順磁金屬離子。例如參見美國專利序號4,741,900中的金屬離子，該金屬離子可以與抗體綴合從而用于根據(jù)本發(fā)明的診斷劑。合適的酶的實例包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、p-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基復(fù)合物的實例包括鏈霉親核素/生物素、以及抗生物素蛋白/生物素；合適的熒光材料的實例包括傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯三嗪胺熒光素、丹磺酰氯或藻紅蛋白；發(fā)光材料的實例包括魯米諾(luminol);生物發(fā)光材料的實例包括熒光素酶、螢光素和發(fā)光蛋白質(zhì)；合適的放射性材料的實例包括1251、1311、min或"Tc?？笴D20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可綴合至治療性部分例如細(xì)胞毒素、治療劑或放射性金屬離子。細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒性劑包括對細(xì)胞有害的任何試劑。實例包括竭、紫杉酚、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根堿(emetine)、絲裂霉素、依托泊甙、鬼臼嚷汾戒(tenoposide)、長春新堿、長春堿、秋7JC仙堿、多柔比星、柔紅審素、二幾基'蔥二酉同(dihydroxyanthracindione)、米托'蔥敏、光神霉素、更生霉素、l-雙氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾和嘌呤霉素以及其類似物或同源物。治療劑包括但不限于，抗代謝物(例如，甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤，阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氮烯咪胺)、烷化劑(例如、氮芥(mechlorethamine)、thioepa苯丁酸氮芥、美法侖、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、cyclothosphamide、白消安、二溴甘露醇、鏈脲霉素、絲裂霉素C和順鉑(II)(DDP)順鉑)、蒽環(huán)類藥(例如、柔紅霉素daunorubicin(以前稱為柔紅霉素dau議ycin)和多柔比星)、抗生素(例如，更新霉素(以前稱為放線菌素)、博來霉素、光輝霉素和安曲霉素(AMC))以及抗裂劑(例如，長春新堿和長春堿)。本發(fā)明的綴合物可用于修飾給定的生物學(xué)反應(yīng)。藥物部分不解釋為限定于化學(xué)治療劑。例如，藥物部分可以是具有期望的生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)或多肽。此類蛋白可以包括例如毒素例如相思豆毒蛋白、蓖麻毒素A、假單胞茵外毒素或白喉毒素；蛋白質(zhì)例如腫瘤壞死因子、oc-干擾素、p-干擾素、神經(jīng)生長因子、血小板衍生的生長因子、組織纖溶酶原激活物；或生物學(xué)反應(yīng)修飾劑例如淋巴因子、白細(xì)胞介素-l("IL-1")、白細(xì)胞介素-2("IL-2")、白細(xì)胞介素-6("IL-6")、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子("GM-CSF")、粒細(xì)胞集落刺激因子("G-CSF")或其他生長因子。還可以通過將抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物與化學(xué)發(fā)光化合物偶聯(lián)來可檢測地標(biāo)記所述的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。然后，通過檢測在發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的過程中產(chǎn)生的熒光的存在來確定化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的抗CD20抗體的存在情況。具體可用的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記化合物的實例為魯米諾、異魯米諾(isoluminol)、theromatic吖，定酯、咪喳、吖咬鹽和草酸酯?？笴D2Q抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物被可檢測地標(biāo)記的一種方式是通過將所述的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物與酶連接，并在酶免疫測定(EIA)中使用所得的連接產(chǎn)物(Voller，A.，"TheEnzymeLinkedImmunosorbentAssay(ELISA)"MicrobiologicalAssociatesQuarterlyPublication,Walkersville，Md.，DiagnosticHorizons2:1-7(1978);Volleretal.，J.Clin.Pathol.31:507-520(1978);Butler,J.E.，Meth.Enrymol.73:482-523(1981);Maggio，E.(ed.)，EnzymeImmunoassay,CRCPress,BocaRaton，F(xiàn)la.，(1980);Ishikawa，E.etal.，(eds.)，EnzymeImmunoassay,KgakuShoin，Tokyo(1981))。與所述的抗CD20抗體結(jié)合的酶與合適的底物(優(yōu)選地顯色底物)反應(yīng)，以這種方式使得產(chǎn)生可以通過例如分光光度法、熒光法或目測方式檢測的化學(xué)部分。可以用于以可檢測地標(biāo)記抗體的酶包括，但不限于蘋果酸脫氫酶、金黃色葡萄球菌核酸酶、5-5-類固醇異構(gòu)酶、酵母乙醇脫氫酶、oc-磷酸甘油脫氫酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、p-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、過氧化氫酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖淀粉酶和乙酰膽堿酯酶。此外，可以通過使用酶的顯色底物的比色方法來完成所述的檢測。還可以通過將底物的酶反應(yīng)的程度與相似制備的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行目視比較來完成檢測。還可以采用多種其他免疫測定法中的任何方法來完成檢測。例如，使用放射性標(biāo)記抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，可以通過利用》文射性免疫測定(RIA)來檢測抗體(例如參見Weintraub:B.，PrinciplesofRadioimmunoassays,SeventhTrainingCourseonRadioHgandAssayTechniques,TheEndocrineSociety,(March,1986),這些文獻(xiàn)以引用方式并入本文)?？梢酝ㄟ^使用包括，但不限于Y計數(shù)器、閃爍計數(shù)器或放射自顯影術(shù)在內(nèi)的方法來檢測放射性同位素。還可以采用熒光發(fā)射金屬(例如152Eu或鑭系的其他元素)可檢測地標(biāo)記抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。利用例如二乙烯三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)的金屬的螯合基團將這些金屬與所述的抗體連接。用于將各種部分綴合至抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的技術(shù)是公知的，例如參見Arnonetal.(1985)，"MonoclonalAntibodiesForImmunotargetingOfDrugsInCancerTherapy",inMonoclonalAntibodiesAndCancerTherapy,ed，Reisfeldetal.(AlanR.Liss，Inc.),pp.243-56;Hellstrometal.，(1987)"AntibodiesForDrugDelivery",inControlledDrugDeliveryed，Robinsonetal.(2ndeds.，MarcelDekker，Inc.)，pp.623-53;Thorpe(1985)，"AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview",inMonoclonalAntibodies'84:BiologicalAndCIinicalApplications,Pincheraetal.ed，pp.475-506;"Analysis,Results,AndFutureProspectiveOfTheTherapeuticUseOfRadiolabeledAntibodyInCancerTherapy",inMonoclonalAntibodiesForCancerDetectionAndTherapy,ed.Baldwinetal.，AcademicPresspp.303-16(1985),以及Thorpeetal.(1982),"ThePreparationAndCytotoxicPropertiesOfAntibody-ToxinConjugates",Immunol.Rev.62:119-58。VI.抗體多肽的表達(dá)可按照熟知的方法使用逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶同時或分開地制備編碼抗體的輕鏈和重鏈的DNA序列。可以根據(jù)所公開的重鏈和輕鏈DNA以及氨基酸序列，通過共有的恒定區(qū)引物或通過更具有特異性的引物來開始PCR。如上文所討論的那樣，還可以利用PCR來分離編碼抗體輕鏈和重鏈的DNA克隆。在這種情況下，可以使用共有引物或更大的同源探針(例如小鼠恒定區(qū)探針)篩選文庫?？梢圆捎帽绢I(lǐng)域已知的技術(shù)從細(xì)胞中分離DM,通常為質(zhì)粒DM，然后根據(jù)詳細(xì)闡明(例如在關(guān)于重組DM技術(shù)的現(xiàn)有文獻(xiàn)中)的標(biāo)準(zhǔn)的公知的技術(shù)來制作限制性圖譜并測序。當(dāng)然，可以在分離過程或隨后的分析過程中的任何時間點，根據(jù)本發(fā)明合成DNA。在對用于提供本發(fā)明的C35抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的分離的基因材料進(jìn)行處理后，通常將編碼C35抗體的多核苷酸插入到用于引入宿主細(xì)胞中的表達(dá)載體中，其中所述的宿主細(xì)胞可以用于產(chǎn)生所需量的C35抗體。與本文所述的靶分子(例如C35)結(jié)合的抗體或者其片段、衍生物或類似物(例如抗體的重鏈或輕鏈)的重組表達(dá)需要構(gòu)建包含編碼所述抗體的多核普酸的表達(dá)載體。編碼本發(fā)明的抗體分子或者抗體的重鏈或輕鏈、或者其部分(優(yōu)選包含重鏈或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域)的多核苷酸一經(jīng)獲得，便可以釆用本領(lǐng)域公知的技術(shù)通過重組DM技術(shù)制備用于產(chǎn)生所述的抗體分子的載體。因此，本文描述了通過表達(dá)包含編碼抗體的核苷酸序列的多核苷酸來制備蛋白質(zhì)的方法。可以使用本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的方法來構(gòu)建表達(dá)載體，所述的表達(dá)載體包含抗體編碼序列、以及合適的轉(zhuǎn)錄和反應(yīng)的調(diào)控信號。這些方法包括例如體內(nèi)重組DNA技術(shù)、合成技術(shù)和體內(nèi)基因重組。因此，本發(fā)明提供了可77復(fù)制的載體，其包含與啟動子可操作地連接的、編碼本發(fā)明抗體分子或者其重鏈或輕鏈、或重鏈或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列。這種載體可以包含編碼所述的抗體分子的恒定區(qū)的核苷酸序列(例如參見PCT公開WO86/05807;PCT公開WO89/01036;和美國專利序號5，122，464),并且所述抗體的可變結(jié)構(gòu)域可以被克隆到這種載體中，以用于表達(dá)完整的重鏈或輕鏈。術(shù)語"載體"或"表達(dá)載體"在本文中用于指根據(jù)本發(fā)明使用的、作為用于引入到宿主細(xì)胞中并在宿主細(xì)胞中表達(dá)所需的基因的媒介物的載體。如本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知道的那樣，這種載體可以容易地選自質(zhì)粒、噬菌體、病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒。通常，與本發(fā)明相容的載體包含選擇標(biāo)記物、有助于克隆所需基因的合適的限制性位點、以及進(jìn)入真核或原核細(xì)胞和/或在真核或原核細(xì)胞中復(fù)制的能力。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，可以使用多種表達(dá)載系統(tǒng)統(tǒng)。例如，一種類別的載體使用了衍生自動物病毒(例如牛乳頭瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、桿狀病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒(RSV、MMTV或M0MLV)或SV40病毒)的DNA元件。其他涉及使用具有內(nèi)部核糖體結(jié)合位點的多順反子系統(tǒng)。此外，可以通過引入可對轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞進(jìn)行選擇一種或多種標(biāo)記物來選擇將所述DNA整合到其染色體中的細(xì)胞。所述的標(biāo)記物可以提供針對營養(yǎng)缺陷型宿主的原營養(yǎng)、生物殺滅劑的抗性(例如抗生素)或者對重金屬(例如銅)的抗性?？蛇x擇的標(biāo)記物基因可以直接與待表達(dá)的DNA序列相連，或者通過共轉(zhuǎn)化而被引入到相同的細(xì)胞中。還需要其他元件用于mRM的最佳合成。這些元件包括信號序列、拼接信號、以及轉(zhuǎn)錄啟動子、增強子和終止信號。在特別優(yōu)選的實施方式中，將克隆的可變區(qū)基因與按照上文所述合成的重鏈和輕鏈恒定區(qū)基因(優(yōu)選為人的)一起插入到表達(dá)載體中。當(dāng)然，本發(fā)明可以使用能夠在真核細(xì)胞中引發(fā)表達(dá)的任何表達(dá)載體。合適的載體的實例包括，但不限于質(zhì)粒pcDNA3、pHCMV/Zeo、pCR3.1、pEFl/His、pIND/GS、pRc/HCMV2、pSV40/Zeo2、pTRACER-HCMV、pUB6/V5-His、pVAXl和pZeoSV2(來自Invitrogen,SanDiego，CA)以及質(zhì)粒pCI(來自Promega，Madison，WI)。通常，就表達(dá)了適當(dāng)高水平的免疫球蛋白重鏈和輕鏈的細(xì)胞篩選大量轉(zhuǎn)化細(xì)胞為常規(guī)試驗，其可以通過(例如)自動系統(tǒng)來進(jìn)行。更通常的是，一旦制備出編碼抗CD20抗體的單體亞單元的載體或DNA序列，便可以將表達(dá)載體引入到合適的宿主細(xì)胞中?？梢圆捎帽绢I(lǐng)域的技術(shù)人員公知的多種技術(shù)來完成質(zhì)粒向宿主細(xì)胞中的引入。這些技術(shù)包括，但不限于轉(zhuǎn)染(包括電穿孔)、原生質(zhì)體融合、磷酸鉤沉淀、使用包膜DNA的細(xì)胞融合、顯微注射以及使用完整病毒進(jìn)行感染。參見Ridgway，(1988)"MammalianExpressionVectors"Vectors,ed.Rodriguez和Denhardt(Butterworths，Boston,Mass.)Chapter24.2,pp.470-472。通常，向宿主中引入質(zhì)粒是通過電穿孔進(jìn)行的。使包含表達(dá)構(gòu)建體的宿主細(xì)胞在適于產(chǎn)生輕鏈和重鏈的條件下生長，并就重鏈和/或輕鏈蛋白質(zhì)的合成進(jìn)行測試。示例性的測試技術(shù)包括酶聯(lián)免疫吸附測試(ELISA)、放射性免疫測定(RIA)、熒光激活細(xì)胞分揀儀分析(FACS)、免疫組織化學(xué)等。通過常規(guī)技術(shù)將表達(dá)載體轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中，然后通過常規(guī)技術(shù)培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，從而產(chǎn)生在本文所述的方法中使用的抗體。因此，本發(fā)明包括宿主細(xì)胞，其包含編碼與異源啟動子可操作地連接的、本發(fā)明抗體或其重鏈或輕鏈的多核苷酸。在用于表達(dá)雙鏈抗體的優(yōu)選實施方式中，可以將既編碼重鏈又編碼輕鏈的載體在宿主細(xì)胞中共表達(dá)，從而表達(dá)完整的免疫球蛋白分子，如下文所述。如本文所用，"宿主細(xì)胞"是指如下細(xì)胞，其包含采用重組DNA技術(shù)構(gòu)建的并編碼至少一個異源基因的載體。在從重組細(xì)胞分離抗體的過程的描述中，除非明確作出相反的說明，否則術(shù)語"細(xì)胞"和"細(xì)胞培養(yǎng)物"可交換使用，以表示抗體的來源。換言之，從"細(xì)胞"中回收多肽可以指由經(jīng)離心的完整細(xì)胞中得到，或者由包含培養(yǎng)基和懸浮細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物中得到?？梢允褂枚喾N宿主表達(dá)載體系統(tǒng)來表達(dá)在本文所述的方法中使用的抗體分子。這種宿主表達(dá)系統(tǒng)代表了如下媒介物，通過該媒介物，可以產(chǎn)生并隨后純化目的編碼序列，而且所述的宿主表達(dá)系統(tǒng)還代表了如下細(xì)胞，當(dāng)使用合適的核苷酸編碼序列對該細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染時，其可以原位表達(dá)本發(fā)明的抗體分子。這種宿主表達(dá)系統(tǒng)包括，但不限于如下微生物使用包含抗體編碼序列的重組細(xì)菌噬菌體DM、質(zhì)粒DNA或粘粒DM表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的諸如細(xì)菌(例如大腸桿菌、枯草桿菌(B.subtilis));使用包含抗體編碼序列的重組酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的酵母(例如哞酒酵母(Saccharomyces)、畢赤酵母(pichia));使用包含抗體編碼序列的重組病毒表達(dá)載體(例如桿狀病毒)感染的昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)；使用重組病毒表達(dá)載體(例如花椰菜花葉病毒(cauliflowermosaicvirus,CaMV)、煙草花葉病毒(tobaccomosaicvirus,TMV))感染的、或者使用包含抗體編碼序列的重組質(zhì)粒表達(dá)載體(例如Ti質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)；或者包含重組表達(dá)構(gòu)建體(其包含衍生自哺乳動物細(xì)胞基因組的啟動子(例如金屬硫蛋白啟動子)或衍生自哺乳動物病毒基因組(例如腺病毒晚期啟動子、牛痘病毒7.5K啟動子)的啟動子)的哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)(例如C0S、CH0、BLK、293、3T3細(xì)胞)。優(yōu)選地使用專門用于表達(dá)完整重組抗體分子的諸如大腸桿菌之類的細(xì)菌細(xì)胞，更優(yōu)選地是真核細(xì)胞，來表達(dá)重組抗體分子。例如，諸如中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)之類的哺乳動物細(xì)胞與諸如來自人細(xì)胞巨化病毒的主要即刻早期基因啟動子之類的載體相聯(lián)合，是對于抗體的有效的表達(dá)系統(tǒng)(Foeckingetal.，(1990)Gene45:101(1986)5Cockettetal.，Bio/Technology8:2)。用于蛋白質(zhì)表達(dá)的宿主細(xì)胞系通常是哺乳動物來源的；相信本領(lǐng)域的技術(shù)人員具有優(yōu)先地確定具體的宿主細(xì)胞系的能力，所述的宿主細(xì)胞系最適合本文所述的、待表達(dá)的所需的基因產(chǎn)物。示例性的宿主細(xì)胞系包括，但不限于CH0(中國倉鼠卵巢細(xì)胞)、DG44和DUXB11(中國倉鼠卵巢細(xì)胞系，DHFR缺陷)、HELA(人子宮頸癌)、CVI(猴腎細(xì)胞系)、COS(具有SV40T抗原的CVI衍生物)、VERY、BHK(幼倉鼠腎細(xì)胞)、MDCK、293、WI38、R1610(中國倉鼠成纖維細(xì)胞)、BALBC/3T3(小鼠成纖維細(xì)胞)、HAK(倉鼠腎細(xì)胞系)、SP2/0(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)、P3x63-Ag3.653(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)、BFA-lclBPT(牛內(nèi)皮細(xì)胞)、RAJI(人淋巴細(xì)胞)和293(人腎細(xì)胞)。宿主細(xì)胞系通常來自商業(yè)機構(gòu)、美國組織培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTissueCultureCollection)或者來自公開的文獻(xiàn)。此外，可以選擇調(diào)節(jié)插入序列的表達(dá)、或者以所需的特定方式修飾并加工基因產(chǎn)物的宿主細(xì)胞林。蛋白質(zhì)產(chǎn)物的修飾(例如糖基化)和加工(例如切割)對于所述蛋白質(zhì)的功能而言是重要的。對于蛋白質(zhì)和基因產(chǎn)物的翻譯后加工和修飾而言，不同的宿主細(xì)胞具有特征性且特異性的機制?？梢赃x擇合適的細(xì)胞系或宿主系統(tǒng)，以確保所表達(dá)的外源蛋白質(zhì)的正確修飾和加工。至此，可以使用如下真核宿主細(xì)胞，其具有初始轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行適當(dāng)?shù)募庸ぃ虍a(chǎn)物進(jìn)行糖基化和磷酸化的細(xì)胞才幾制。為了長期、高產(chǎn)量地產(chǎn)生重組蛋白質(zhì)，穩(wěn)定的表達(dá)是優(yōu)選的。例如，穩(wěn)定地表達(dá)抗體分子的細(xì)胞系可以是經(jīng)改造的。不使用包含病毒來源的復(fù)制物的表達(dá)載體，可以使用由合適的表達(dá)調(diào)控元件(例如啟動子、增強子、序列、轉(zhuǎn)錄終止子、聚腺苷酸化位點等)和可選擇的標(biāo)記物調(diào)控的DNA來轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。在引入了外源DNA之后，可以使改造的細(xì)胞在富集培養(yǎng)基中生長l-2天，然后轉(zhuǎn)換到選擇性培養(yǎng)基中。重組質(zhì)粒中的可選擇標(biāo)記物賦予了選擇抗性，從而使細(xì)胞可以穩(wěn)定地將質(zhì)粒整合到其染色體中，并生長形成轉(zhuǎn)化灶(foci),該轉(zhuǎn)化灶反過來可以被克隆并擴展到細(xì)胞系中?？梢杂欣厥褂迷摲椒▉韺Ψ€(wěn)定表達(dá)抗體分子的細(xì)胞系進(jìn)行改造?？梢苑謩e在tk-、hgprt-或aprt-細(xì)胞中4吏用大量的選擇系統(tǒng)，包括，但不限于單純皰疹病毒胸苷激酶(Wigleretal.(1977)，Cell11:223)基因、次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Szybalska&Szybalski(1992)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA48:202)基因和腺噪呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Lowyetal.(1980)，Cel122:817)基因。此外，可以利用以下基因產(chǎn)生的抗代謝物的抗性來作為選擇基礎(chǔ)，所述的基因為dhfr,其賦予了對甲氨蝶呤的抗性(Wigleretal.(1980)Natl.Acad.Sci.USA77:357;O，Hareetal.(1981)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:1527);gpt,其賦予了對霉酚酸的抗性(Mul1igan&Berg，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:2072);neo，其賦予了對氨基糖苷G-418的抗性(ClinicalPharmacy12:488-505;WuandWu(1991)，Biotherapy3:87-95;Tolstoshev(1993)，Arm.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596;Mulligan(1993),Science260:926-932;以及MorganandAnderson(1993)，Ann.Rev.Biochem.62:191-217;TIBTECH11(5):155-215(May,1993);以及hygro,其賦予對潮霉素的抗性(Santerreetal.(1984)，Gene30:147)?？梢証吏用的、在重組DNA^支術(shù)領(lǐng)域中通常已知的方法在Ausubeletal.(1993)，CurrentProtocolsinMolecularBiology,(JohnWiley&Sons,NY);Kriegler(1990)，"GeneTransferandExpression"inALaboratoryManual(StocktonPress,NY);以及在Chapters12and13，Dracopolietal.(eds)(1994)，CurrentProlocolsinHumanGenetics,(JohnWiley&Sons,NY);Colberre-Garapinetal.(1981)，J.Mol.Biol.150:1中有所描述，這些文獻(xiàn)以引用方式全文并入本文?？梢酝ㄟ^載體的擴增來提高抗體分子的表達(dá)水平(綜述，參見BebbingtonandHentschel(1987)"TheuseofvectorsbasedongeneamplificationfortheexpressionofclonedgenesinmammaliancellsinDNAcloning"(AcademicPress,NY)，Vol.3.)。當(dāng)表達(dá)抗體的載體系統(tǒng)中的標(biāo)記物是可擴增的時，宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中存在的抑制劑的水平提高會增加標(biāo)記物基因的拷貝數(shù)。由于所擴增的區(qū)域與抗體基因有關(guān)，所述抗體的產(chǎn)量也增高(Grouseetal.(1983)，Mol.Cell.Biol.3:257)。在體外，可以放大產(chǎn)量，從而得到大量所需的多肽。用于在組織培養(yǎng)條件下培養(yǎng)哺乳動物細(xì)胞的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的，包括在例如氣升式反應(yīng)器或連續(xù)攪拌反應(yīng)器中的異源懸浮培養(yǎng)或者在例如中空纖維、微嚢中、瓊脂糖微珠或陶瓷筒上的固定化或截留的細(xì)胞培養(yǎng)。如果必需和/或需要，多肽溶液可以在例如優(yōu)先生物合成合成的鉸鏈區(qū)多肽之后、或者在進(jìn)行本文所述的HIC層析步驟之前或之后通過常規(guī)的層析方法(例如凝膠過濾、離子交換層析、在DEAE纖維素上層析或(免疫)親和層析)來純化。編碼本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的基因還可以被諸如細(xì)菌、酵母或植物細(xì)胞之類的非哺乳動物細(xì)胞表達(dá)。容易獲得核酸的細(xì)菌包括腸桿菌科的成員，例如大腸桿菌或沙門氏菌菌林；芽孢桿菌科的成員，例如枯草桿菌(^3C277msw6〃/");肺炎球菌屬的成員；鏈球菌屬的成員；以及流感嗜血桿菌(^3e歷o/力27ws2'"/7i/e/2zae)。應(yīng)該進(jìn)一步理解，當(dāng)異源多肽在細(xì)菌中表達(dá)時，該異源多肽通常成為包涵體的一部分。必須將異源多肽分離、純化，然后組裝到功能分子中。在需要抗體的四價形式時，可以將亞單元自組裝到四價抗體中(WO02/096948A2)。在細(xì)菌系統(tǒng)中，可以根據(jù)所計劃的表達(dá)的抗體分子的用途來有利地選擇多種表達(dá)載體。例如，當(dāng)準(zhǔn)備產(chǎn)生大量的所述蛋白質(zhì)用于制備抗體分子的藥物組合物時，指導(dǎo)了融合蛋白質(zhì)產(chǎn)物(其易于純化)高水平表達(dá)的載體是理想的。這種表達(dá)載體包括，但不限于大腸桿菌表達(dá)栽體pUR278(Rutheretal.(1983)，EMB0J.2:1791),其中可以將抗體編碼序列單獨地連接到所述載體的lacZ編碼區(qū)域的框架中，從而產(chǎn)生融合蛋白質(zhì)；pIN載體(I畫ye&Inouye(1985)，NucleicAcidsRes.13:3101-3109;VanHeeke&Schuster(1989)，J.Biol.Chem.24:5503-5509)等。還可以使用pGEX載體表達(dá)與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)形成融合蛋白質(zhì)的外源多肽。通常，這種融合蛋白質(zhì)是可溶的，并且可以通過吸附并結(jié)合到基質(zhì)谷胱甘肽瓊脂糖珠子上、然后通過在游離谷胱甘肽存在的條件下洗脫，從裂解細(xì)胞中純化。pGEX載體經(jīng)設(shè)計以包含凝血酶或因子Xa蛋白酶切割位點，使得可以從GST部分中釋放出克隆的目標(biāo)基因產(chǎn)物。除了原核生物外，還可以使用真核微生物。在真核微生物中，最通常使用的是酉良酒酵母(SaccAaro/zzycescereWae)或普通的發(fā)酵面包酵母，但是大量的其他菌抹(例如巴斯德畢赤酵母(p/c力/apa^or/s))通常也可以利用。為了在釀酒酵母(Sacc力aro邁yces)中表達(dá)，通常使用例如質(zhì)粒YRp7(Stinchcombetal.(1979)，Nature282:39;Kingsmanetal.(1979)，Gene7:141;Tschemperetal.(1980)，Gene10:157)。這種質(zhì)粒已經(jīng)包含了TRP1基因，該基因提供了缺乏在色氨酸中生長的能力的酵母突變林(例如ATCCNo.44076或PEP4-1)的選擇標(biāo)記物(Jones(1977)，Genetics85:12)。那么，作為酵母宿主細(xì)胞基因組特征的trpl病變提供了用于通過缺乏色氨酸條件中生長檢測轉(zhuǎn)化的有效環(huán)境。在昆蟲系統(tǒng)中，通常使用苜蓿銀紋夜蛾多核型多角體病毒(AcNPV)作為表達(dá)外源基因的載體。該病毒在草地貪夜蛾(era/V^/peTT/a)細(xì)胞中生長?？梢詫⒖贵w編碼序列單獨地克隆到所述病毒的非必需區(qū)域(例如多角體蛋白基因)中，并置于AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子)的調(diào)控之下。一旦本發(fā)明的抗體分子被重組表達(dá)，便可以通過用于純化免疫球蛋白分子領(lǐng)域中的任何已知的方法(例如層析(例如離子交換層析、親和層析，特別是對蛋白質(zhì)A之后的特異性抗原的親和層析)以及分子篩柱層析)、離心、差異溶解或用于純化蛋白質(zhì)的任何其他標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù))來純化該抗體分子。備選地，用于增加本發(fā)明抗體的親和力的優(yōu)選方法在US2002/0123057Al中有所公開。VII.使用治療性抗CD20抗體的療法本發(fā)明的方法涉及抗CD20抗體包括其抗原結(jié)合片段、變體和衍生物用于治療患有與表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)的疾病的患者的用途。"表達(dá)CD20的細(xì)胞"意指正常和惡性的表達(dá)CD20抗原的B細(xì)胞。用于檢測CD20表達(dá)的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的，其包括但不限于PCR技術(shù)、免疫組織化學(xué)、流式細(xì)胞計量術(shù)、Western印跡法、ELISA等。"惡性"B細(xì)胞意指任何贅生性B細(xì)胞，包括但不限來源于淋巴瘤(包括低度、84中度和高度B細(xì)胞淋巴瘤)、免疫母細(xì)胞性淋巴結(jié)瘤(immunoblasticlymphoma)、非何杰金氏淋巴瘤、何杰金氏病、EB病毒(EBV)誘導(dǎo)的淋巴瘤、AIDS相關(guān)淋巴瘤、以及B細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病、骨髓瘤、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、急性成髓細(xì)胞白血病等的B細(xì)胞。雖然下列描述提及使用本發(fā)明的抗CD2Q抗體進(jìn)行的對多種疾病或病癥的診斷方法和治療，但本文中描述的方法還可用于保持本發(fā)明的抗CD20抗體的期望的性質(zhì)(即能夠特異性結(jié)合CD20和具有增加的CDC活性和/或增加的對CD20抗原的結(jié)合親和力)的這些抗CD20抗體的抗原結(jié)合片段、變體和衍生物。"治療"在本文中定義為對患者應(yīng)用或施用抗CD20抗體，或?qū)碜曰颊叩姆蛛x的組織或細(xì)胞系應(yīng)用或施用抗CD20抗體，其中患者具有疾病、疾病的癥狀或?qū)膊〉囊赘行?，其中目的是治療、治愈、減輕、緩解、改變、補救(remedy)、改善、好轉(zhuǎn)或影響疾病、疾病的癥狀或?qū)膊〉囊赘行浴?治療"也意指對患者應(yīng)用或施用包含抗CD20抗體的藥物組合物，或?qū)碜曰加屑膊?、疾病的癥狀或?qū)膊〉囊赘行缘幕颊叩姆蛛x的組織或細(xì)胞系應(yīng)用或施用包含抗CD20抗體的藥物組合物，其中目的是治療、治愈、減輕、緩解、改變、補救、改善、好轉(zhuǎn)或影響疾病、疾病的癥狀或?qū)膊〉囊赘行浴?抗腫瘤活性"意指減小惡性的表達(dá)CD20細(xì)胞增殖或積累的速度，從而降低現(xiàn)有腫瘤的或者在現(xiàn)有贅生性(腫瘤)細(xì)胞或新形成的贅生性細(xì)胞的治療和/或破壞過程中產(chǎn)生的腫瘤的生長速度，從而減小治療過程中腫瘤的總體大小。"抗炎活性"意指炎癥的減小或預(yù)防。使用至少一種抗CD20抗體的治療引起生理反應(yīng)，所述生理反應(yīng)對于治療與人中表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)的疾病狀態(tài)是有益的。這樣，本發(fā)明的方法用于治療與異常的不受控制的B細(xì)胞增殖或積累相關(guān)的非何杰金氏淋巴瘤。為發(fā)本發(fā)明的目的，此類淋巴瘤將按照WorkingFormulation分類方案歸類，即這些B細(xì)胞淋巴瘤分類為低度、中度和高度的B細(xì)胞淋巴瘤(參見"TheNon-Hodgkin'sLymphomaPathologicClassificationProject"inCancer49:2112-2135(1982))。因此，低度B細(xì)胞淋巴瘤包括小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、濾泡性小裂細(xì)胞性淋巴瘤(Follicularsmall-cleavedcelllymphoma)和濾泡性小裂與大細(xì)胞混合型淋巴瘤(Follicularmixedsmall-cleavedandlargecelllymphomas);中度淋巴瘤包括濾泡性大細(xì)胞淋巴瘤、彌散性小裂細(xì)胞性淋巴瘤(diffusesmallcleavedcelllymphoma)、彌散性混合小和大細(xì)胞淋巴瘤(diffusemixedsmallandlargecelllymphoma)以及彌散性大細(xì)胞淋巴瘤；和高度淋巴瘤包括Burkitt's和非Burkitt's類型的大細(xì)胞免疫母細(xì)胞淋巴瘤(largecelli,unoblasticlymphoma)、淋巴母細(xì)胞性淋巴瘤(lymphoblasticlymphoma)和小型非裂開性細(xì)胞淋巴瘤(smallnon-cleavedcelllymphoma)。已認(rèn)識到，本發(fā)明的方法用于按照修正的歐洲和美國淋巴瘤分類(RevisedEuropeanandAmericanLymphomaClassification,REAL)系統(tǒng)分類的B細(xì)胞淋巴瘤的治療性處理。此類B細(xì)胞淋巴瘤包括但不限于分類為前體B細(xì)胞贅生物的淋巴瘤，例如B淋巴母細(xì)胞性白血病/淋巴瘤；夕卜周B細(xì)胞贅生物(peripheralBcellneoplasms)，包括B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病/小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、淋巴漿細(xì)胞樣淋巴瘤(lymphoplasmacytoidlymphoma)/免疫細(xì)胞瘤、夕卜套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)、濾泡性中央淋巴瘤(folliclecenterlymphoma)(濾泡)(包括彌散性小細(xì)胞淋巴瘤、彌散性混合小和大細(xì)胞淋巴瘤以及彌散性大細(xì)胞淋巴瘤)、脾邊緣帶B細(xì)胞淋巴瘤(包括結(jié)外、結(jié)和脾類型)、毛細(xì)胞性白血病、漿細(xì)胞瘤/骨髓瘤、亞型原發(fā)性縱隔(胸腺的)的彌散性大細(xì)胞B細(xì)胞淋巴瘤、Burkitt's淋巴瘤和Burkitt's樣高度B細(xì)胞淋巴瘤；急性白血??；急性淋巴細(xì)胞性白血?。惑l細(xì)胞性白血??；急性髓細(xì)胞白血??；早幼粒細(xì)胞性白血病；粒-單核細(xì)胞白血病;單核細(xì)胞白血?。患t細(xì)胞白血??；粒細(xì)胞白血病(慢性髄細(xì)胞白血病)；慢性淋巴細(xì)胞性白血??；真性紅細(xì)胞增多癥；多發(fā)性骨髓瘤；瓦爾登斯特倫巨球蛋白血；重鏈疾??；和不可分類的低度或高度B細(xì)胞淋巴瘤。已認(rèn)識到，本發(fā)明的方法可用于阻止在治療過程中產(chǎn)生的另外的腫瘤長出。本發(fā)明的方法特別適合用于治療患有低度B細(xì)胞淋巴瘤的受試者，特別是在標(biāo)準(zhǔn)化療后復(fù)發(fā)的受試者。低度B細(xì)胞淋巴瘤沒有中度和高度B細(xì)胞淋巴瘤活躍，并且特征在于復(fù)發(fā)/緩和病程(relapsing/remittingcourse)。因此，使用本發(fā)明的方法可改進(jìn)這些淋巴瘤的治療，因為復(fù)發(fā)事件在次數(shù)和嚴(yán)重度上得到減少。根據(jù)本發(fā)明的方法，至少一種本文其他地方定義的抗CD2G抗體用于促進(jìn)對惡性人B細(xì)胞的陽性治療反應(yīng)。關(guān)于癌癥治療的"陽性治療反應(yīng)"意指與這些抗體或其片段的抗肺瘤活性相關(guān)的疾病的改善，和/或與所述疾病相關(guān)的癥狀的改善。即，可觀察到抗增殖效應(yīng)、防止另外的腫瘤長出、減小腫瘤大小、減少腫瘤細(xì)胞數(shù)目和/或減少與疾病相關(guān)的一個或多個癥狀的。因此，例如，疾病的改善可表征為完全反應(yīng)。"完全反應(yīng)"意指缺乏具有任何之前異常的放射照相研究、骨髄和腦脊液(CSF)的正常化的臨床可檢測疾病。這樣的反應(yīng)必須在按照本發(fā)明的方法治療后持續(xù)至少一個月。備選地，疾病的改善可分類為是部分反應(yīng)。"部分反應(yīng)"意指在新病變不存在的情況下所有可測量的腫瘤負(fù)荷(即，存在于受試者中的腫瘤細(xì)胞的數(shù)目)減少至少大約50%,并且持續(xù)至少一個月。這樣的反應(yīng)只可用于可測量的腫瘤?？墒褂煤Y選技術(shù)例如磁共振成像(MRI)掃描、x射線成像、計算機斷層(CT)掃描、生物發(fā)光成像例如熒光素酶成像、骨掃描成像和腫瘤活組織檢查取樣包括骨髓穿刺(BMA)來就腫瘤形態(tài)學(xué)(即，總腫瘤負(fù)荷(tumorburden)、腫瘤大小等)的變化評估肺瘤反應(yīng)。除了這些陽性治療反應(yīng)外，經(jīng)歷使用抗CD20抗體治療的受試者可經(jīng)歷改善與這些疾病相關(guān)的癥狀的有益效應(yīng)。因此對于B細(xì)胞肺瘤，受試者可經(jīng)歷所謂的B癥狀即盜汗、發(fā)燒、體重減輕和/或蕁麻滲的減少。本文中描述的抗CD20抗體還可用于與表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)的炎性疾病和免疫系統(tǒng)的缺陷或病癥的治療，所述疾病包括但不限于全身性紅斑狼瘡、銀屑病、硬皮病、CREST綜合征、炎癥性肌病、斯耶格倫綜合征(Sjogren'ssyndrome)、混合結(jié)締組織病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、炎性腸疾病、急性呼吸窘迫綜合征、肺炎(pulmonaryinflammation)、特發(fā)性肺纖維化、骨質(zhì)疏松癥、遲發(fā)型超敏反應(yīng)、哮喘、原發(fā)性膽汁性肝硬化和特發(fā)性血小板減少性紫癜。炎性疾病特征在于炎癥和組織破壞或其組合。"炎性疾病"包括任何炎性免疫介導(dǎo)的過程，其中免疫反應(yīng)的起始事件或靶牽涉非自身抗原，包括例如同種抗原、異種抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原、未知抗原或變應(yīng)原。此外，為了本發(fā)明的目的，要語"炎性疾病"包括"自身免疫性疾病"。如本文中所使用的，術(shù)語"自身免疫"通常理解為包括牽涉"自身"抗原的炎性免疫介導(dǎo)的過程。在自身免疫性疾病中，自身抗原觸發(fā)宿主免疫反應(yīng)。同樣，本發(fā)明包括治療與組織移植排斥相關(guān)的炎癥。"移植排斥"或"移植物排斥"是指抗移植物(包括但不限于HLA抗原、血型抗原等)的任何宿主發(fā)動的免疫反應(yīng)。本發(fā)明還可用于治療移植物抗宿主病，例如與骨髓移植相關(guān)的移植物抗宿主病。在這樣的移植物抗宿主病中，供體骨髓包含淋巴細(xì)胞和成熟為淋巴母細(xì)胞的細(xì)胞。供體的淋巴細(xì)胞將受體的抗原識別為非自身的并且發(fā)動炎性免疫反應(yīng)。因此，如本文中所使用的，"移植物抗宿主病"或"移植物抗宿主反應(yīng)"是指其中供體淋巴細(xì)胞與宿主抗原反應(yīng)的任何T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)?？砂凑毡景l(fā)明的方法使用本文中描述的抗CD20來治療自身免疫性和/或炎性病癥，包括但不限于全身性紅斑狼疳(SLE)、盤狀狼疳、狼瘡性腎炎、結(jié)節(jié)病、炎癥性關(guān)節(jié)炎(包括幼年型關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、萊特爾綜合征、強直性脊柱炎和痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎)、器官或組織移植的排斥、超急性、急性或慢性排斥和/或移植物抗宿主病、多發(fā)性硬化癥、高IgE綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、炎性腸病、克羅恩病、乳糜瀉(谷蛋白敏感性腸病)、自身免疫性肝炎、惡性貧血、自身免疫性溶血性貧血、銀屑病、硬皮病、重癥肌無力、自身免疫性血小板減少性紫癜、自身免疫性曱狀腺炎、Graves病、橋本甲狀腺炎、免疫復(fù)合物病、慢性疲勞免疫功能紊亂綜合征(CFIDS)、多肌炎和皮肌炎、冷球蛋白血癥、血栓溶解、心肌病、尋常性天皰瘡、肺間質(zhì)纖維化、I型和II型糖尿病、1、2、3和4型延遲型超敏反應(yīng)、過敏癥或變應(yīng)性紊亂、對治療性蛋白的不想要的/不期望的免疫反應(yīng)(參見例如，美國專利申請?zhí)朥S2002/0119151和Koren，等人(20(J2)Curr.Pharm.Biotechnol.3:349-60)、哮喘、丘-施二氏綜合征(變應(yīng)性肉芽腫病)、特應(yīng)性皮炎、過敏性和刺激性接觸性皮炎、癮滲、IgE-介導(dǎo)的過敏癥、動脈硬化、血管炎、特發(fā)性炎性肌病、溶血性疾病、阿爾茨海默氏病、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)炎等。在一些其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體用于治療肺炎，包括但不限于肺移植排斥、哮喘、結(jié)節(jié)病、肺氣腫、嚢性纖維癥、特發(fā)性肺纖維化、慢性支氣管炎、過敏性鼻炎和肺的變應(yīng)性疾病例如過敏性肺炎、嗜酸粒細(xì)胞性肺炎、由于骨髓和/或肺移植或其他病因引起的閉塞性細(xì)支氣管炎、移植物動脈粥樣硬化/移植物靜脈硬化以及由膠原、血管和自身免疫性疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和紅斑狼瘡引起的肺纖維化(pulmonaryfibrosis)。根據(jù)本發(fā)明的方法，至少一種本文中其他地方定義的抗CD20抗體用于促進(jìn)對于自身免疫性疾病和/或炎性疾病的治療或預(yù)防的陽性治療反應(yīng)。關(guān)于自身免疫性疾病和/或炎性疾病的"陽性治療反應(yīng)"意指與這些抗體的抗炎活性相關(guān)疾病的改善和/或與所述疾病相關(guān)的癥狀的改善。即，可觀察到抗增殖效應(yīng)、防止表達(dá)CD20的細(xì)胞的另外增殖、減少炎癥反應(yīng)包括但不限于減少的炎性細(xì)胞因子、附著分子、蛋白酶、免疫球蛋白(在其中具有CD20的細(xì)胞是B細(xì)胞的情況下)的分泌、及其組合等等、增加抗炎性蛋白的產(chǎn)生、減少自體反應(yīng)細(xì)胞數(shù)目、增加免疫耐受性、抑制自體反應(yīng)細(xì)胞的存活和/或減少由表達(dá)CD20的細(xì)胞的刺激介導(dǎo)的一種或多種癥狀。此類陽性治療反應(yīng)不受限于施用途徑并且可包括對供體、供體組織(例如器官輸注)、宿主的施用、其任何組合等的施用。可使用篩選技術(shù)例如磁共振成像(MRI)掃描、x射線成像、計算機斷層(CT)掃描、流式細(xì)胞計量術(shù)或焚光激活細(xì)胞分選器(FACS)分析、組織學(xué)、總病理學(xué)(grosspathology)和血液化學(xué)來評估臨床反應(yīng)，包括但不限于可通過ELISA、RIA、層析等檢測的變化。除了這些陽性治療反應(yīng)外，使用抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段的治療的受試者可經(jīng)歷改善與所述疾病相關(guān)的癥狀的有益效應(yīng)。"治療有效劑量或量"或"有效量"意指當(dāng)施用時對于患有與表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)疾病的患者的治療產(chǎn)生陽性治療反應(yīng)的抗CD20的量。在本發(fā)明的一些實施方式中，抗CD20抗體的治療有效劑量在大約0.01mg/kg至大約40mg/kg、大約0.01mg/kg至大約30mg/kg、大約0.1mg/kg至大約30mg/kg、大約1mg/kg至大約30mg/kg、大約3mg/kg至大約30mg/kg、大約3mg/kg至大約25mg/kg、大約3mg/kg至大約20mg/kg、大約5mg/kg至大約15mg/kg或大約7mg/kg至大約12mg/kg的范圍內(nèi)。已認(rèn)識到，本發(fā)明的方法可包括抗CD20抗體的治療有效劑量的單次施用或抗CD20抗體的治療有效劑量的多次施用?？笴D20抗體可以與已知的化學(xué)治療劑和細(xì)胞因子組合使用以治療包括表達(dá)CD20細(xì)胞的疾病狀態(tài)。例如，本發(fā)明的抗CD2Q抗體可以與細(xì)胞因子例如白細(xì)胞介素-2組合使用。在另一個實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體可以與利妥昔單抗(IDEC-C2B8;Rituxan;IDECPharmaceuticalsCorp.,SanDiego，California)組合使用。這樣，本文中描述的抗CD2Q抗體與至少一種其他癌癥療法組合施用，所述癌癥療法包括但不限于手術(shù)或手術(shù)操作(例如脾切除術(shù)、肝切除、淋巴結(jié)切除術(shù)、白細(xì)胞生成(leukophoresis)、骨髄移植等)；放射療法；化學(xué)療法，任選地與自體骨髓移植術(shù)組合，其中合適的化學(xué)治療劑包括但不限于氟達(dá)拉濱或磷酸氟達(dá)拉濱、苯丁酸氮芥、長春新堿、噴司他丁、2-氯脫氧腺苷(克拉屈濱)、環(huán)磷酰胺、多柔比星、潑尼松和其組合，例如，包含蒽環(huán)類抗生素的方案例如CAP(環(huán)磷酰胺、多人心+潑尼松)、CHOP(環(huán)磷酰胺、長春新堿、潑尼松+多柔比星)、VAD(長春新堿、多柔比星+地塞米松)、MP(美法侖+潑尼松)，和用于化學(xué)療法的其他細(xì)胞毒性和/或治療劑例如米托蒽醌、柔紅霉素、伊達(dá)比星、天冬酰胺酶，和抗代謝物包括但不限于阿糖胞苷、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺、6-硫鳥嘌呤、6-巰基嘌呤和奈拉濱；其他抗癌單克隆抗體療法(例如，阿侖珠單抗(Campath⑧)或靶向惡性B細(xì)胞上的CD52細(xì)胞表面糖蛋白的其他抗CD52抗體；利妥昔單抗(RUuxan)、完全人抗體HuMax-CD20、R-1594、IMMU-106、TRU-015、AME-133、托西莫單抗/1-131托西莫單抗(Bexxar⑧)、替伊莫單抗(Zevalin)，或靼向惡性B細(xì)^Ji的CD20抗原的其他治療性抗CD20抗體；抗CD19抗體(例如，MT103，雙特異性抗體)；抗CD22抗體(例如，人源化單克隆抗體依帕珠單抗)；貝伐珠單抗(Avastin)或靶向人血管內(nèi)皮生長因子的其他抗癌抗體；革巴向惡性B細(xì)胞上的CD22抗原的抗CD22抗體(例如，單克隆抗體BL-22，一種otCD22毒素)；靶向巨噬細(xì)胞集落刺激因子oc-M-CSF抗體；靶向在多發(fā)性骨髓瘤中過度表達(dá)核因子kB(RANK)和其配體(RANKL)的受體激活物的抗體；靼向惡性B細(xì)胞上的CD23抗原的抗CD23抗體(例如，IDEC-152);靶向C,抗原的抗C謂抗體(例如，IDEC-114);耙向惡性B細(xì)胞上的CD38抗原的抗CD38抗體；靶向在惡性B細(xì)胞上表達(dá)的主要組織相容性復(fù)合物II類受體的抗體(抗MHC抗體)；耙向惡性B細(xì)胞上的CD40抗原的抗CD40抗體(例如，SGN-40);和耙向在許多造血來源的實體瘤和腫瘤上表達(dá)的腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡的配體受體1(TRAIL-R1)(例如，拮抗性人單克隆抗體HGS-ETR1)和TRAIL-R2的抗體；基于小分子的癌癥療法，包括但不限于微管和/或拓樸異構(gòu)酶抑制劑(例如，有絲分裂抑制劑多拉司他汀和多拉司他汀類似物；微管結(jié)合劑T900607;XL119;和拓樸異構(gòu)酶抑制劑氨基喜樹堿)、SDX-105(鹽酸苯達(dá)莫司汀)、ixabepilone(epothilone類似物，也稱為BMS-247550)、蛋白激酶C抑制劑，例如米咪妥林((PKC-412、CGP41251、N-苯甲酰星狀孢子素)、匹蒽醌、樂沙定(抗腫瘤劑)、硝酸鎵(硝酸鎵)、Thalomid(沙立度胺)、沙立度胺的免疫調(diào)節(jié)衍生物(例如，來那度胺(以前稱為revimid))、AffinitakTM(蛋白激酶C-oc的反義抑制劑)、SDX-1Q1(R-依托度酸，誘導(dǎo)惡性淋巴細(xì)胞的凋亡)、第二代嘌呤核苷類似物例如氯法拉濱、癌細(xì)胞產(chǎn)生蛋白Bc卜2的抑制劑(例如，反義試劑oblimersen和Genasense)、蛋白酶體抑制劑(例如，Velcade(硼替佐米))、小分子激酶抑制劑(例如，CHIR-258)、小分子VEGF抑制劑(例如，ZD-6474)、熱激蛋白(HSP)90的小分子抑制劑(例如，17-AAG)、組蛋白脫乙?；傅男》肿右种苿?例如，雜種/極性細(xì)胞分化HPC)試劑例如suberanilohydroxamicacid(SAHA)和FR—901228)和調(diào)亡劑例ft口Trisenox⑧(三氧化二砷)和Xcytrin(莫特沙芬釓)；基于疫苗/免疫療法的癌癥療法包括但不限于疫苗方法(例如，Id-KLH、oncophage、vitalethine)、個性化免疫療法或活性獨特型免疫療法(activeidiotypeimmunotherapy)(例如，MyVax⑧個性化免疫療法，以前稱為GTOP-99)、Promune(CpG7909，tol1樣受體9(TLR9)的合成激動劑)、干擾素ct療法、白細(xì)胞介素-2(IL-2)療法、IL-12療法、IL-15療法和IL-21療法；類固醇療法；或其他癌癥療法；其中在抗CD20抗體療法之前、期間或之后施用另外的癌癥療法。因此，當(dāng)組合療法包括將抗CD20抗體的施用與另一種治療劑例如與化學(xué)療法、放射療法、其他抗癌抗體療法、基于小分子的癌癥療法或基于疫苗/免疫療法的癌癥療法的施用組合時，本發(fā)明的方法包括使用分開的制劑或單一的藥物制劑的共施用以及以任一種順序相繼施用。當(dāng)本發(fā)明的方法包括組合治療方案時，這些療法可同時提供，即將抗CD20抗體與其他癌癥療法同時施用或在與其他癌癥療法相同的時期內(nèi)施用(即，所述療法同時進(jìn)行，但不用精確地在與其他癌癥療法相同的時間上施用抗CD20抗體)。備選地，還可在其他癌癥療法之前或之后施用本發(fā)明的抗CD20抗體。無論被治療的受試者是否對第一療程作出反應(yīng)，可進(jìn)行不同癌癥療法的相繼施用從而減少緩解或復(fù)發(fā)的可能性。當(dāng)組合療法包括抗CD20抗體的施用與細(xì)胞毒性劑的使用組合時，優(yōu)選在施用細(xì)胞毒性劑之前施用抗CD2G抗體。在本發(fā)明的一些實施方式中，將本文中描述的抗CD2G抗體與化學(xué)療法組合施用，和任選地與自體骨髓移植組合施用，其中抗體和化學(xué)治療劑可以以任何順序相繼施用或同時施用(即，共同或在相同的時期內(nèi))。合適的化學(xué)治療劑的實例包括但不限于氟達(dá)拉濱或磷酸氟達(dá)拉濱、苯丁酸氮芥、長春新堿、噴司他丁、2-氯脫氧腺苷(克拉屈濱)、環(huán)磷酰胺、多柔比星、潑尼松和其組合，例如，包含蒽環(huán)類抗生素的方案例如CAP(環(huán)磷酰胺、多柔比星+潑尼松)、CHOP(環(huán)磷酰胺、長春新堿、潑尼松+多柔比星)、VAD(長春新堿、多柔比星+地塞米松)、MP(美法侖+潑尼松)和用于化學(xué)療法的其他細(xì)胞毒性和/或治療劑例如米托蒽醌、柔紅霉素、伊達(dá)比星、天冬酰胺酶，和抗代謝物，包括但不限于阿糖胞苷、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺，6-硫鳥嘌呤、6-巰基嘌呤和奈拉濱。在一些實施方式中，在用化學(xué)治療劑治療之前施用抗CD20抗體。在備選實施方式中，在用化學(xué)治療劑治療之后施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，將化學(xué)治療劑與抗CD20抗體同時施用。因此，例如，在一些實施方式中，抗CD2Q抗體與氟達(dá)拉濱或磷酸氟達(dá)拉濱組合使用。在一個這樣的實施方式中，在施用氟達(dá)拉濱或磷酸氟達(dá)拉濱之前施用抗CD20抗體。在備選實施方式中，在使用氟達(dá)拉濱或磷酸氟達(dá)拉濱治療之后施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，氟達(dá)拉濱或磷酸氟達(dá)拉濱與抗CD20抗體同時施用。在本發(fā)明的其他實施方式中，將苯丁酸氮芥(烷化劑)與本文中描述的抗CD20抗體組合施用。在一個這樣的實施方式中，在施用苯丁酸氮芥之前施用抗CD20抗體。在備選實施方式中，在使用苯丁酸氮芥的治療后施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，將苯丁酸氮芥與抗CD20抗體同時施用。在其他實施方式中，包含蒽環(huán)類抗生素的方案例如CAP(環(huán)磷酰胺、多柔比星+潑尼松)和CHOP(環(huán)磷酰胺，長春新堿，潑尼松+多柔比星)可與本文中描述的抗CD20抗體的施用組合。在一個這樣的實施方式中，在施用包含蒽環(huán)類抗生素的方案之前施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，在使用包含蒽環(huán)類抗生素的治療方案之后施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，將包含蒽環(huán)類抗生素的治療方案與抗CD20抗體同時施用。在備選實施方式中，將本文中描述的抗CD2Q抗體與阿侖珠單抗(Campath⑧；由BerlexLaboratories,Richmond,California分酉己)組合施用。阿侖珠單抗是靶向惡性B細(xì)胞上表達(dá)的CD52抗原的重組人源化單克隆抗體(Campath-lH)。在一個這樣的實施方式中，在施用阿侖珠單抗之前施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，在使用阿侖珠單抗的治療之后施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，將阿侖珠單抗與抗CD20抗體同時施用。在備選實施方式中，將本文中描述的抗CD20抗體與靶向惡性B細(xì)胞上的CD20抗原的另一種治療性抗CD20抗體組合施用，所述另一種治療性抗CD20抗體是例如，利妥昔單抗(Rituxan)、完全人抗體HuMax-CD20、R-1594、IMMU-106、TRU-015、AME-133、托西莫單抗/1-131托西莫單抗(Bexxar勺或替伊莫單抗(Zevalin勺。在一個這樣的實施方式中，在施用其他抗CD20抗體之前施用本發(fā)明的抗CD2Q抗體。在其他實施方式中，在使用其他抗CD20抗體的治療之后施用本發(fā)明的抗CD20抗體。在其他實施方式中，將本發(fā)明的抗CD20抗體與其他抗CD20抗體同時施用。在備選實施方式中，將本文中描述的抗CD20抗體與基于小分子的癌癥療法組合施用，所述基于小分子的癌癥療法包括但不限于微管和/或拓樸異構(gòu)酶抑制劑(例如，有絲分裂抑制劑多拉司他汀和多拉司他汀類似物；微管結(jié)合劑T900607;XL119;和拓樸異構(gòu)酶抑制劑氨基喜樹堿)、SDX-105(鹽酸苯達(dá)莫司汀)、ixabepilone(epothilone類似物，也稱為BMS-247550)、蛋白激酶C抑制劑，例如米哚妥林((PKC-412、CGP41251、N-苯甲酰星狀孢子素)、匹蒽醌、樂沙定(一種抗腫瘤劑)、賄酸鎵(硝酸鎵)、Thalomid(沙立度胺)、沙立度胺的免疫調(diào)節(jié)衍生物(例如，來那度胺(以前稱為revimid))、AffinitakTM(蛋白激酶C-a的反義抑制劑)、SDX-101(R-依托度酸，誘導(dǎo)惡性淋巴細(xì)胞的凋亡)、第二代噪呤核苷類似物例如氯法拉濱、癌細(xì)胞產(chǎn)生蛋白Bcl-2的抑制劑(例如，反義試劑oblimersen和94Genasense)、蛋白酶體抑制劑(例如，Velcade(硼替佐米))、小分子激酶抑制劑(例如，CHIR-258)、小分子VEGF抑制劑(例如，ZD-6474)、熱激蛋白(HSP)90的小分子抑制劑(例如，17-AAG)、組蛋白脫乙酰基酶的小分子抑制劑(例如，雜種/極性細(xì)胞分化HPC)試劑例如suberanilohydroxamicacid(SAHA)和FR-901228)和凋亡劑例如Trisenox⑧(三氧化二砷)和Xcytrir^(莫特沙芬釓)；在一個這樣的實施方式中，在施用基于小分子的癌癥療法之前施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，在使用基于小分子的癌癥療法的治療之后，施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，將基于小分子的癌癥療法與抗CD20抗體同時施用。在其他實施方式中，本文中描述的抗CD20抗體可與基于疫苗/免疫療法的癌癥療法組合施用，所述基于疫苗/免疫療法的癌癥療法包括但不限于疫苗方法(例如，Id-KLH、oncophage、vitalethine)、個性化免疫療法或活性獨特型免疫療法(例如，MyVax⑧個性化免疫療法，以前稱為GT0P-99)、Promune(CpG7909，tol1樣受體9(TLR9)的合成激動劑)、干擾素oc療法、白細(xì)胞介素-2(IL-2)療法、IL-12療法、IL-15療法或IL-21療法；或類固醇療法。在一個這樣的實施方式中，在施用基于疫苗/免疫療法的癌癥療法之前施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，在使用基于疫苗/免疫療法的癌癥療法的治療之后施用抗CD20抗體。在其他實施方式中，將基于疫苗/免疫療法的癌癥療法與抗CD20抗體同時施用。在一個這樣的實施方式中，可將本文中描述的抗CD20抗體與IL-2組合使用。IL-2是已知的在被治療的患者中擴增天然殺傷(NK)效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)目的試劑，可在本發(fā)明的抗CD20抗體之前施用或與其共施用。這種NK效應(yīng)細(xì)胞數(shù)目的擴增可導(dǎo)致施用抗CD20抗體的增強的ADCC活性。在其他實施方式中，IL-21，當(dāng)與本文中描述的抗CDM抗體組合施用時，用作免疫治療劑來刺激NK細(xì)胞活性。本發(fā)明的抗CD20抗體可與用于自身免疫性和炎性疾病的任何已知療法組合使用，所述療法包括已知用于或已經(jīng)用于或目前用于以治療自身免疫性和炎性疾病的任何試劑或試劑的組合。此類療法和治療劑包括但不限于手術(shù)或手術(shù)操作(例如脾切除術(shù)、淋巴結(jié)切除術(shù)、曱狀腺切除術(shù)、血漿去除術(shù)、白細(xì)胞生成、細(xì)胞、組織或器官移植、腸內(nèi)手術(shù)(intestinalprocedure)、器官灌注(organperfusion)等)、放射療法、例如類固醇療法和非類固醇療法的療法、激素療法、細(xì)胞因子療法、使用皮膚病藥(例如，用于治療皮膚狀況例如過敏癥、接觸性皮炎和銀屑病的局部試劑)的療法、免疫抑制療法和其他抗炎單克隆抗體療法等。這樣，將本文中描述的抗CD20抗體與至少一種其他療法組合施用，所述其他療法包括但不限于手術(shù)、器官灌注、放射療法、類固醇療法、非類固醇療法、抗生素療法、抗真菌療法、激素療法、細(xì)胞因子療法、使用皮膚病藥(例如，用于治療皮膚病狀例如過敏癥、接觸性皮炎和銀屑病的局部試劑)的療法、免疫抑制療法、其他抗炎單克隆抗體療法、其組合等。因此，當(dāng)組合療法包括將抗CD20抗體的施用與另一種治療劑(如與類固醇類)的施用組合時，本發(fā)明的方法包括使用分開的制劑或單一的藥物制劑的共施用以及以任一種順序相繼施用。當(dāng)本發(fā)明的方法包括組合治療方案時，可同時提供這些療法，即，抗CD20抗體與其他療法同時施用或與其他療法在相同的時期內(nèi)施用(即，療法同時進(jìn)行，但不用精確地在與其他療法相同的時間上施用抗CD20抗體)。備選地，本發(fā)明的抗CD20抗體還可在其他療法之前或之后施用。無論被治療的受試者是否對第一療程作出反應(yīng)，可進(jìn)行不同癌癥療法的相繼施用從而減少好轉(zhuǎn)或復(fù)發(fā)的可能性。在本發(fā)明的一些實施方式中，將本文中描述的抗CD2G抗體與免疫抑制劑或抗炎劑組合施用，其中抗體和治療劑可以以任何順序相繼施用或同時施用(即，共同地或在相同的時期內(nèi))?？膳c本發(fā)明的抗CD20抗體組合施用的合適的免疫抑制劑的實例包括但不限于甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺、咪唑立賓、苯丁酸氮芥、環(huán)孢霉素，例如霧化的環(huán)孢霉素(參見，美國專利申請公開號US20020006901，以其全文引用合并入本文)，他克莫司(FK506;ProGrafTM)、麥考酚酸嗎乙酯和硫唑嘌呤(6-巰基噪呤)、西羅莫司(雷怕霉素)、脫氧精胍菌素、來氟米特和其malononitriloamide類似物；和免疫抑制蛋白，包4舌，例如，抗CTLA4抗體和Ig融合物、抗B淋巴細(xì)胞刺激物抗體(例如，LYMPHOSTAT-Btm)和Ig融合物(BLyS-Ig)、抗CD80抗體和依那西普(Enbrel)，以及抗T細(xì)胞抗體例如抗CD3(0KT3)、抗CD4等。合適的抗炎劑的實例包括但不限于皮質(zhì)激素例如氯倍他索、囟倍他索、氫化可的松、曲安西龍、倍他米松、氟輕木Xfluocinole)、醋酸氟輕+Xfluocinonide)、潑尼松、潑尼松龍、曱基氫化潑尼松；非類固醇類抗炎劑(NSAID)例如柳氮磺吡啶、包含5-氨基水楊酸的藥物(稱為5-ASA劑)、塞來考昔、雙氯芬酸、依托度酸、fenprofen、氟他洛芬、布洛芬、酮基布洛芬、meclofamate、美洛昔康、萘普酮、曱氧萘丙酸、噁丙噪、吡羅昔康、羅非考昔、水楊酸鹽、舒林酸和托美?。豢寡仔钥贵w例如阿達(dá)木單抗(HUMIRA,TNF-a拮抗劑)和英夫利昔單抗(Remicade⑧，TNF-a拮抗劑)等。移植排斥和移植物抗宿主病可以是超急性(體液)、急性(T細(xì)胞介導(dǎo)的)或慢性(未知的病因?qū)W)或其組合。因此，本發(fā)明的抗CD20抗體在一些實施方式中用于預(yù)防和/或改善與任何組織的超急性、急性和/或慢性移植排斥相關(guān)的排斥和/或癥狀，所述組織包括但不限于肝、腎、胰腺、胰島細(xì)胞、小腸、肺、心臟、角膜、皮膚、血管、骨、異體骨髓(heterologousbonemarrow)或自體骨髄等。移植組織可從任何供體獲得和移植入任何受體宿主，從而移植過程可包括將動物組織移植至人(例如，異種移植)，將來自一個人的組織移植至另一個人(例如，同種異體移植)，和/或?qū)⒔M織從人體的一個部分移植至另一個部分(例如，自體移植)。使用本發(fā)明的抗體的治療還可減少移植后遺癥例如發(fā)燒、厭食、血液動力異常(hemodynamicabnormality)、白細(xì)胞減少、移植的器官/組織的白細(xì)胞浸潤以及機會感染。在一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD2G抗體可單獨地或與免疫抑制劑組合使用來治療和/或預(yù)防移植排斥例如超急性，急性和/或慢性排斥和/或移植物抗宿主病。因此，在其中本發(fā)明的抗CD20抗體用于治療移植物排斥的一些實施方式中，抗體可與合適的免疫抑制劑組合使用，所述免疫抑制劑包括但不限于甲氨蝶呤；環(huán)磷酰胺；咪唑立賓；苯丁酸氮芥；環(huán)孢霉素，例如，霧化的環(huán)孢霉素(參見，美國專利申請公開號US20020006901，通過以其全文引用合并入本文)、他克莫司(FK506;ProGraf)，麥考酚酸嗎乙酯和硫唑噪呤(6-巰基噪呤)，西羅莫司(雷怕霉素)，脫氧精胍菌素，來氟米特和其malononitriloamide類似物；和免疫抑制蛋白包括例如，抗CTLA抗體和Ig融合物、抗B淋巴細(xì)胞刺激物抗體(例如，LYMPHOSTAT-BTM)和Ig融合物(BLyS-Ig)、抗CD8Q抗體和依那西普(Enbrel)以及抗T細(xì)胞抗體例如抗CD3(0KT3)、抗CD4等。這樣，特別地涉及，本發(fā)明的組合物和方法與其他藥劑組合使用以進(jìn)一步改善移植受體例如接受例如肺移植物的受體的癥狀和結(jié)果。因此，在一些實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體單獨地或與胃腸外和/不經(jīng)腸施用的環(huán)孢霉素組合用于治療移植排斥(例如，肺移植受體中的超急性、急性和/或慢性排斥或移植物抗宿主病)，所述環(huán)孢霉素包括例如口服環(huán)孢霉素，可注射的環(huán)孢霉素、霧化的(例如，吸入的)環(huán)孢霉素和其組合。在其中至少療法的一種組分是霧化的環(huán)孢霉素的一些實施方式中，通過使用例如加壓的遞送裝置或噴霧器以噴霧劑形式存在的環(huán)孢霉素來將環(huán)孢霉素遞送至受體的肺。環(huán)孢霉素可以以粉劑或濕潤形式(wetform)施用。在一些其他實施方式中，本發(fā)明的本發(fā)明的抗CD20抗體可單獨使用或與免疫抑制劑組合使用來治療和/或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。因此在其中本發(fā)明的抗CD20抗體用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一些實施方式中，抗體可與適合的免疫抑制劑組合使用，所述免疫抑制劑包括但不限于甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺、咪唑立賓、苯丁酸氮芥、環(huán)孢霉素、他克莫司(FK506;PR0GRAF)、麥考酚酸嗎乙酯和硫唑嘌呤(6-巰基嘌呤)、西羅莫司(雷怕霉素)、脫氧精胍菌素、來氟米特和其malononitriloamide類似物；和免疫抑制蛋白，包括例如，抗CTLA抗體和Ig融合物、抗B淋巴細(xì)胞刺激物抗體(例如，LYMPHOSTAT-B)和Ig融合物(BLyS-Ig)、其他抗CD20抗體(例如RITUXAN);完全人抗體HuMax-CD20、R-1594、IMMU-106、TRU-015、AME-133、托西莫單抗/I-131、托西莫單抗(Bexxar)、替伊莫單抗(Zevalii^);抗CD80抗體，和依那西普(ENBREL⑧)以及抗T細(xì)胞抗體例如抗CD3(0KT3)、抗CD4等。如上所述，治療功效可使用任何方法來評估，并且包括但不限于通過美國風(fēng)濕病學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)、歐洲風(fēng)濕聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)(EuropeanLeagueofRheumatismcriteria)或4壬4可其他沖示準(zhǔn)界定的臨床反應(yīng)測量的功效。參見例如，F(xiàn)elson等人(1995)Arthritis.Rheum.38:727-35和vanGestel等人(1996)ArthritisRheum.39:34-40。在其他實施方式中，本發(fā)明的抗CD20抗體可單獨使用或與免疫抑制劑組合使用來治療和/或預(yù)防多發(fā)性硬化癥。因此在其中本發(fā)明的抗CD20抗體用于治療多發(fā)性硬化癥的一些實施方式中，抗體可與合適的免疫抑制劑組合使用，所述免疫抑制劑包括但不限于甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺、咪唑立賓、苯丁酸氮芥、環(huán)孢霉素、他克莫司(FK506;PR0GRAF)、麥考酚酸嗎乙酯和硫唑嘌呤(6-巰基噤呤)、西羅莫司(雷怕霉素)、脫氧精胍菌素、來氟米特和其malononitriloainide類似物；和免疫抑制蛋白，包括例如，抗CTLA抗體和Ig融合物、抗B淋巴細(xì)胞刺激物抗體(例如，LYMPHOSTAT-B)和Ig融合物(BLyS-Ig)、其他抗CD20抗體(例如，RITUXAN);完全人抗體HuMax-CD20、R-1594、IMMU-106、TRU-015、AME-133、托西莫單抗/1-131、托西莫單抗(Bexxar)、ibrit頭omabtituxetan(Zevalin);抗C謂抗體，和依那西普(ENBREI^)以及抗T細(xì)胞抗體例如抗CD3(0KT3)、抗CD4等。此外，使用兩種或更多種治療劑和本文中描述的抗CD2G抗體的組合療法還可用于治療與表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)的疾病狀態(tài)，例如，B細(xì)胞相關(guān)癌癥和自身免疫性和/或炎性病癥。非限定性地，實例包括三聯(lián)療法(triplecombinationtherapy)，其中將兩種化學(xué)治療劑與本文中描述的抗CD20抗體組合施用，以及其中將化學(xué)治療劑和另一種抗癌單克隆抗體(例如，阿侖珠單抗、利妥昔單抗或抗CD23抗體)與本文中描述的抗CD20抗體組合施用。這樣的組合的實例包括但不限于氟達(dá)拉濱、環(huán)磷酰胺和抗CD20抗體的組合；以及氟達(dá)拉濱、另一種抗CD20抗體例:ft口，利妥昔單抗(Rituxan⑧；IDECPharmaceuticalsCorp.，SanDiego,California)和本發(fā)明的抗CD20抗體的組合。本發(fā)明的另外的實施方式是抗CD20抗體用于作為臨床試驗程序的部分的組織中蛋白質(zhì)水平的診斷監(jiān)測的用途，例如，測定給定的治療方案的功效?？赏ㄟ^將抗體連接至可檢測的物質(zhì)來幫助檢測?？蓹z測的物質(zhì)的實例包括各種酶、輔基、熒光材料、發(fā)光材料、生物發(fā)光材料和放射性材料。合適的酶的實例包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、p-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基復(fù)合物的實例包括鏈霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合適的熒光材料的實例包括傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯三嗪基胺(dichlorotriazinylamine)熒光素、丹磺酰氯或藻紅蛋白；發(fā)光材料的實例包括魯米諾；生物發(fā)光材料的實例包括熒光素酶、螢光素和水母熒光素；以及合適的放射性材料的實例包括125I、mI、mIn、35S或3H。VIII.藥物組合物和施用方法制備和對需要其的受試者施用本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的或由他們?nèi)菀椎拇_定。抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的施用途徑可以是例如口月良、胃腸外、通過吸入或局部施用。如本文所用，術(shù)語腸胃外包括(例如)靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、直腸或陰道給藥。雖然給藥的所有劑型都被清楚地認(rèn)為包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，但是對于注射(特別對于靜脈內(nèi)注射或動脈內(nèi)注射、或者點滴)而言，用于給藥的劑型應(yīng)該為溶液。通常，用于注射的合適的藥物組合物可以包含緩沖劑(例如醋酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖劑)、表面活性劑(例如聚山梨醇酯)、可熱選的穩(wěn)定劑(例如人清蛋白)等。但是，在與本文所教導(dǎo)的方法相容的其他方法中，可以將本發(fā)明的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物直接遞送至有害細(xì)胞群體的位置處，從而增多疾病組織在治療試劑中的暴露情況。如之前所描述的，本發(fā)明的抗CD20抗體或抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可以以用于體內(nèi)治療表達(dá)CD20的細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的藥學(xué)有效量進(jìn)行施用，所述疾病是例如SLE、PBC、ITP、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、克羅恩病、移植物排斥和B-細(xì)胞淋巴瘤。就這一點而言，應(yīng)該理解的是對本文所公開的抗體進(jìn)行配制，從而有助于給藥和活性劑的穩(wěn)定。優(yōu)選的是，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的非毒性無菌載體，例如生理鹽水、非毒性緩沖劑、防腐劑等。就本申請的目的而言，偶聯(lián)的或非偶聯(lián)的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物有效量是指這樣的量，該量足以形成與靶物的有效結(jié)合，并且足以獲得益處(例如緩解疾病或紊亂的癥狀)或者足以檢測物質(zhì)或細(xì)月包。用于本發(fā)明的藥物組合物包括藥學(xué)上可接受的載體，包括例如離子交換劑、鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋)、緩沖物質(zhì)例如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、基于纖維素的物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸鹽、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。用于胃腸外施用的制劑包括無菌水性或非水性溶液、懸浮液和乳劑。非水性溶劑的實例是丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄欖油和可注射的有機酯例如油酸乙酯。水性載體包括水、醇/水性溶液、乳劑或懸浮液，包括鹽水和緩沖的介質(zhì)。在本發(fā)明中，藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于，0.01-0.1M和優(yōu)選0.05M磷酸緩沖液或0.8%鹽溶液。其他常用的胃腸外媒介物包括磷酸鹽溶液、林格葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格液或不揮發(fā)油。靜脈注射媒介物包括流體和營養(yǎng)補充劑(nutrientreplenisher)、電解質(zhì)補充劑例如基于林格葡萄糖的電解質(zhì)補充劑等。還可存在防腐劑和其他添加劑例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體等。更特別地，適合注射的藥物組合物包括無菌水溶液(其中可溶于水的)或分散體以及用于無菌可注射溶液或分散體的臨時制備的無菌粉劑。在該情況下，組合物必須是無菌的并且應(yīng)當(dāng)具有達(dá)到容易注射的程度的流動性。其應(yīng)當(dāng)在制造和貯存條件下是穩(wěn)定的并且優(yōu)選進(jìn)行防腐處理以抗微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用。載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)和其合適的混合物的溶劑或分散介質(zhì)。可以例如通過使用包衣例如卵磷脂，在分散體的情況下通過保持所需顆粒大小和通過使用表面活性劑來保持適當(dāng)?shù)牧鲃有?。用于本文中公開的治療方法的合適的制劑描述于Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPublishingCo.)16thed.(1980)?？赏ㄟ^各種抗菌劑和抗真菌劑例如例如，對羥苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸、疏柳汞等預(yù)防微生物的作用。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包含等滲劑例如，糖、多元醇例如甘露醇、山梨醇或氯化鈉?？赏ㄟ^在組合物中包含延遲吸收的試劑例如單硬脂酸鋁和明膠來產(chǎn)生可注射組合物的延遲吸收。無論如何，可通過將活性劑(例如，抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物本身或與其他活性劑組合)以所需量與本文中例舉的成分的一種或其混合物(如果需要)整合在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，然后過濾滅菌來制備無菌可注射溶液。通常，通過將活性化合物整合入無菌媒來制備分散體。在用于無菌可注射溶液的無菌粉劑的情況下，優(yōu)選制備方法是真空干燥和冷凍干燥，其產(chǎn)生活性成分的粉劑+來自其之前無菌過濾的溶液的任何另外的期望的成分。處理用于注射的制劑，按照本領(lǐng)域內(nèi)已知的方法將其裝填入容器例如安瓿、袋子、瓶子、注射器或小瓶，并且在無菌條件下進(jìn)行封閉。此外，制劑可以以試劑盒例如共同未決的美國專利申請?zhí)?，公布?9/259，337US-2002-0102208Al(其以其全文通過引用合并入本文)中描述的試劑盒的形式包裝和銷售。此類制品優(yōu)選具有標(biāo)明相關(guān)的組合物用于治療患有疾病或病癥或?qū)λ黾膊∫赘械氖茉囌叩臉?biāo)簽或包裝說明書。胃腸外制劑可以是單次推注劑量(singlebolusdose),輸注劑量或負(fù)荷推注劑量(loadingbolusdose),然后使用維持劑量。這些組合物可以以特定的固定間隔或可變間隔例如，每天一次或基于"當(dāng)需要時的"基礎(chǔ)施用。用于本發(fā)明的某些藥物組合物可以以可接受的劑型包括例如膠嚢劑、片劑、水性懸浮劑或溶液口服施用。某些藥物組合物還可通過鼻煙霧劑或吸入施用。此類組合物可使用節(jié)醇或其他合適的防腐劑、增加生物利用度的吸收促進(jìn)劑和/或其他常規(guī)穩(wěn)定劑或分散劑制備為鹽溶液?？梢耘c載體材料組合以產(chǎn)生單次劑型的抗CD20抗體或其片段、變體或衍生物的量將取決于被治療的宿主和施用的特定模式而變化。組合物可以以單次劑量、多次劑量或在已確定的時期以輸注的形式施用。還可調(diào)整給藥方案以提供最佳的期望的反應(yīng)(例如，治療性或預(yù)防性反應(yīng))。與本公開內(nèi)容的范圍一致，可按照上述治療方法以有效地產(chǎn)生治療效果的量對人或其他動物施用本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物?？梢砸猿Ｒ?guī)劑型(按照已知的技術(shù)通過將本發(fā)明的抗體與常規(guī)藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑混合而制備的)來對這樣的人或其他動物施用發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)，藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的形式和特征取決于與其組合的活性劑的量、施用途徑和其他熟知的變量。本領(lǐng)域技術(shù)人員還認(rèn)識到，包含一種或更多種本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的混合物可證明是特別有效的。本發(fā)明的組合物用于治療表達(dá)CD20的細(xì)胞介導(dǎo)疾病(例如SLE、PBC、ITP、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、克羅恩病、移植物排斥和B細(xì)胞淋巴瘤)的有效劑量根據(jù)許多不同因素而變化，其中包括施用的方法、靶位點、患者的生理狀況、患者是人還是動物、施用的其他藥物以及治療是預(yù)防性的還是治療性的。通常，患者是人，但包括轉(zhuǎn)基因的哺乳動物的非人哺乳動物也可被治療?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法滴定治療劑量以最優(yōu)化安全性和功效。至少一種待施用的抗CD20抗體的量由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的公開內(nèi)容容易地測定而無需過度實驗。影響施用模式和至少一種抗CD20抗體、其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的各自劑量的因素包括但不限于疾病的嚴(yán)重度、病史和經(jīng)歷治療的個體的年齡、身高、體重、健康和身體狀況。類似地，待施用的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的量將取決于施用模式和受試者是否要經(jīng)歷該試劑的單次劑量還是多次劑量。待施用的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的劑量在大約0.0001至100mg/kg、0.003mg/kg至大約50mg/kg或大約0.01mg/kg至大約40mg/kg的范圍內(nèi)。因此，例如，劑量可以是0.01mg/kg、0.03mg/kg、0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、7mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg。在一些實施方式中，為了使用抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物治療表達(dá)CD20的細(xì)胞介導(dǎo)的疾病例如SLE、PBC、ITP、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、克羅恩病、移植物排斥和B細(xì)胞淋巴瘤，劑量范圍可以是例如大約0.0001至100mg/kg，更常見0.01至5mg/kg(例如，0.02mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg、1mg/kg、2mg/kg等)的宿主體重。例如，劑量可以是1mg/kg體重或10mg/kg體重或在1-10mg/kg的范圍內(nèi)，優(yōu)選至少1mg/kg。上述范圍中間的劑量也預(yù)期在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。可以以這樣的劑量每天一次、隔日、每周一次或按照經(jīng)驗分析確定的其他時間表來對受試者施用。示例性服藥日程包括在連續(xù)的日子1-10mg/kg或15mg/kg，隔曰30mg/kg或每周一次60mg/kg。在一些方法中，同時施用具有不同結(jié)合特異性的兩種或更多種單克隆抗體，在該情況下施用的各抗體的劑量落在指定的范圍之內(nèi)?？梢栽诙喾N時機施用本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。單次劑量之間的間隔可以是每天、每周、每月或每年。間隔也可以是不定期的，如通過測量患者的靶肽或靶分子的血液水平所指示的。在一些方法中，調(diào)整劑量以獲得1-1000yg/ml的血漿多肽濃度和在一些方法25-300yg/ml的血漿多肽濃度。備選地，可以以持續(xù)釋放制劑的形式施用本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，在該情況下需要更少頻率的施用。劑量和頻率根據(jù)抗體在患者中的半衰期而變化。還可通過融合至穩(wěn)定的多肽或部分(例如鋁或PEG)來延長抗CD20抗體的半衰期。通常，人源化抗體顯示最長的半衰期，然后是嵌合抗體和非人抗體。在一個實施方式中，可以以未綴合的形式施用本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在另一個實施方式中，可以以綴合的形式多次施用本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在另一個實施方式中，可以以未綴合的形式施用本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，然后以綴合的形式施用，或反之亦然。在本發(fā)明的另一個實施方式中，方法包括施用多個劑量的抗CD20抗體、或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。該方法可包括施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40或更多個治療有效劑量的、包含抗CD20抗體、或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物組合物。包含抗體分子的藥物組合物的多次劑量的施用的頻率和需過度實驗。此外，使用治療有效量的抗體治療受試者可包括單次治療或，優(yōu)選，可包括一系列治療。在優(yōu)選實施方式中，用抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物以大約0.1至20mg/kg體重之間的范圍，每周一次，進(jìn)行大約1至IO周，優(yōu)選大約2至8周，更優(yōu)選大約3至7周和更優(yōu)選大約4、5或6周來治療受試者。治療可每年進(jìn)行一次來預(yù)防復(fù)發(fā)或針對復(fù)發(fā)的適應(yīng)癥。還應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，用于治療的抗體分子的有效劑量可在特定治療的過程中增加或減少。劑量的變化可由本文中所述的診斷測定的結(jié)果造成產(chǎn)生和變得明顯。因此，在一個實施方式中，給藥方案包括在治療期的第1、7、14和21天首次施用治療有效量的至少一種抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在另一個實施方式中，給藥方案包括在治療期中的一周的第l、2、3、4、5、6和7天首次施用治療有效劑量的至少一種抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。另外的施用方案包括這樣的給藥方案，所述給藥方案在治療期的一周的第1、3、5和7天首次施用治療有效劑量的至少一種抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；給藥方案包括在治療期的一周的第1和3天首次施用治療有效劑量的至少一種抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；和優(yōu)選的給藥方案包括在治療期的一周的第l天首次施用治療有效劑量的至少一種抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。治療期可包括l周、2周、3周、l個月、3個月、6個月或1年。治療期相互之間可連續(xù)或相隔1天、l周、2周、l個月、3個月、6個月或1年。在一些實施方式中，抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的治療有效劑量的范圍為大約0.0001mg/kg至大約100mg/kg、大約0.003mg/kg至大約50mg/kg、大約0.01mg/kg至大約40mg/kg、大約0.01mg/kg至大約30mg/kg、大約0.1mg/kg至大約30mg/kg、大約0.5mg/kg至大約30mg/kg、大約1mg/kg至大約30mg/kg、大約3mg/kg至大約30mg/kg、大約3mg/kg至大約25mg/kg、大約3mg/kg至大約20mg/kg、大約5mg/kg至大約15mg/kg或大約7mg/kg至大約12mg/kg。因此，例如，任一種抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的劑量可以是0.003mg/kg、0.01mg/kg、0.03mg/kg、0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、7mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg,或落在大約0.0001mg/kg至大約100mg/kg的范圍內(nèi)的其他此類劑量。可在整個每一周的抗體給藥中施用相同治療有效劑量的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。備選地，可在整個治療期過程中使用不同治療有效劑量的抗CD2G抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的不同治療有效劑量。IX.抗CD20抗體在制備藥物中的用途本發(fā)明還提供了抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療患有特征在于贅生性B細(xì)胞生長的癌癥的患者，其中將所述藥物與使用至少一種其他癌癥療法的治療協(xié)同使用。特征在于贅生性B細(xì)胞生長的癌癥包括但限于本文上面所述的B細(xì)胞相關(guān)癌癥，例如，非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、高度B細(xì)胞淋巴瘤、中度B細(xì)胞淋巴瘤、低度惡B細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病、成髓細(xì)胞白血病、何杰金氏病、漿細(xì)胞瘤、濾泡性淋巴瘤、濾泡性小裂細(xì)胞性淋巴瘤、濾泡性大細(xì)胞性淋巴瘤、濾泡性混合小裂細(xì)胞性淋巴瘤(follicularmixedsmallcleavedlymphoma),彌散性小裂細(xì)胞性淋巴瘤、彌散性小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(diffusesmalllymphocyticlymphoma)、前淋巴細(xì)胞性白血病、淋巴漿細(xì)胞、淋巴瘤、邊緣區(qū)淋巴瘤、粘膜結(jié)合的淋巴樣組織淋巴瘤(mucosalassociatedlymphoidtissuelymphoma)、單核細(xì)胞樣B細(xì)胞淋巴瘤、脾淋巴瘤、毛細(xì)胞性白血病、彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤、縱隔大B細(xì)胞性淋巴瘤、淋巴瘤樣肉芽腫、血管內(nèi)淋巴瘤病、彌散性混合細(xì)胞淋巴瘤(diffusemixedcelllymphoma)、彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤、免疫母細(xì)胞性淋巴結(jié)瘤、伯基特淋巴瘤、AIDS-相關(guān)淋巴瘤和外套細(xì)胞淋巴瘤。"協(xié)同的"意指在使用至少一種其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后使用包含抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物。其他癌癥療法的實例包括但不限于手術(shù)；放射療法；化學(xué)療法，任選地與自體骨髓移植術(shù)組合，其中合適的化學(xué)治療劑包括但不限于氟達(dá)拉濱或磷酸氟達(dá)拉濱、苯丁酸氮芥、長春新堿、噴司他丁、2-氯脫氧腺苷(克拉屈濱)、環(huán)磷酰胺、多柔比星、潑尼松和其組合，例如，包含蒽環(huán)類抗生素的方案例如CAP(環(huán)磷酰胺、多柔比星+潑尼松)、CH0P(環(huán)磷酰胺、長春新堿、潑尼松+多柔比星)、VAD(長春新堿、多柔比星+地塞米松)、MP(美法侖+潑尼松)，和用于化學(xué)療法的其他細(xì)胞毒性和/或治療劑例如米托蒽醌、柔紅霉素、伊達(dá)比星、天冬酰胺酶，和抗代謝物包括但不限于阿糖胞苷、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺、6-硫鳥噪呤、6-巰基嘌呤和奈拉濱；其他抗癌單克隆抗體療法(例如，阿侖珠單抗(Campatl^)或靶向惡性B細(xì)胞上的CD52細(xì)胞表面糖蛋白的其他抗CD52抗體；利妥昔單抗(Rituxan)、完全人抗體HuMax-CD20、R-1594、IMMU-106、TRU-015、AME-133、托西莫單抗/1-131托西莫單抗(Bexxar)、替伊莫單抗(Zeva1in)或靶向惡性B細(xì)胞上的CD20抗原的任何其他治療性抗CD20抗體；抗CD19抗體(例如，MT103雙特異性抗體)；抗CD22抗體(例如，人源化單克隆抗體依帕珠單抗)；貝伐珠單抗(Avastin)或靶向人血管內(nèi)皮生長因子的其他抗癌抗體；單巴向惡性B細(xì)胞上的CD22抗原的抗CD22抗體(例如，單克隆抗體BL-22:ocCD22毒素)；靶向巨噬細(xì)胞集落刺激因子a-M-CSF抗體；靶向在多發(fā)性骨髓瘤中過度表達(dá)核因子kB(RANK)和其配體(RANKL)的受體激活物的抗體；耙向惡性B細(xì)胞上的CD23抗原的抗CD23抗體(例如，IDEC-152);把向惡性B細(xì)胞上的CD38抗原的抗CD38抗體；耙向在惡性B細(xì)胞上表達(dá)的主要組織相容性復(fù)合物II類受體的抗體(抗MHC抗體)；靶向惡性B細(xì)胞上的CD40抗原的抗CD40抗體(例如，SGN-40);和靼向在許多造血來源的實體瘤和胂瘤上表達(dá)的腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡的配體受體1(TRAIL-Rl)(例如，拮抗性人單克隆抗體HGS-ETR1);基于小分子的癌癥療法，包括但不限于微管和/或拓樸異構(gòu)酶抑制劑(例如，有絲分裂抑制劑多拉司他汀和多拉司他汀類似物；微管結(jié)合劑T900607;XL119;和拓樸異構(gòu)酶抑制劑氨基喜樹堿)、SDX-105(鹽酸苯達(dá)莫司汀)、ixabepilone(epothilone類似物，也稱為BMS-247550)、蛋白激酶C抑制劑，例如米咮妥林((PKC-412、CGP41251、N-苯曱酰星狀孢子素)、匹蒽醌、樂沙定(抗腫瘤劑)、硝酸鎵(硝酸鎵)、Thalomid(沙立度胺)、沙立度胺的免疫調(diào)節(jié)衍生物(例如，來那度胺(以前稱為revimid))、AffinitakTM(蛋白激酶C-ot的反義抑制劑)、SDX-101(R-依托度酸，誘導(dǎo)惡性淋巴細(xì)胞的凋亡)、第二代噪呤核苷類似物例如氯法拉濱、癌細(xì)胞產(chǎn)生蛋白Bcl-2的抑制劑(例如，反義試劑oblimersen和Genasense)、蛋白酶體抑制劑(例如，VelcadeTM(硼替佐米))、小分子激酶抑制劑(例如，CHIR-258)、小分子VEGF抑制劑(例如，ZD-6474)、熱激蛋白(HSP)90的小分子抑制劑(例如，17-AAG)、組蛋白脫乙酰基酶的小分子抑制劑(例如，雜種/極性細(xì)胞分化HPC)試劑例如suberanilohydroxamicacid(SAHA)和FR-901228)和凋亡劑例如Trisenox⑧(三氧化二砷)和Xcytrin(莫特沙芬釓)；基于疫苗/免疫療法的癌癥療法包括但不限于疫苗方法(例如，Id-KLH、oncophage、vitalethine)、個性化免疫療法或活性獨特型免疫療法(activeidiotypeiffirnunotherapy)(例如，MyVax⑧個性化免疫療法，以前稱為GTOP-99)、Promune(CpG7909，toll樣受體9(TLR9)的合成激動劑)、千擾素oc療法、白細(xì)胞介素-2(IL-2)療法、IL-12療法、IL-15療法和IL-21療法；類固醇療法；或其他癌癥療法；其中在使用包含抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物(如本文上面所指出的)的藥物治療受試者之前、期間或之后進(jìn)行使用另外的癌癥療法的治療。在一些實施方式中，本發(fā)明提供了抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者中的B細(xì)胞淋巴瘤例如非何杰金氏淋巴瘤，其中將所述藥物與使用至少一種其他癌癥療法的治療協(xié)同使用，所述癌癥療法選自化學(xué)療法、抗癌抗體療法、基于小分子的癌癥療法和基于疫苗/免疫療法的癌癥療法，其中在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后或在多種組合療法的情況下在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后使用所述藥物。因此，例如，在一些實施方式中，本發(fā)明提供了單克隆抗體1589或本發(fā)明的其他抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者中的B細(xì)胞淋巴瘤例如非何杰金氏淋巴瘤，其中將所述藥物與使用化學(xué)治療劑的治療協(xié)同使用，其中所述化學(xué)治療劑選自環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿、潑尼松和其組合，例如CHOP。在其他實施方式中，本發(fā)明提供了單克隆抗體1589或其抗原結(jié)合片段在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者中的B細(xì)胞淋巴瘤例如非何杰金氏淋巴瘤，其中將所述藥物與使用至少一種其他抗癌抗體的治療協(xié)同使用，所述抗癌抗體選自阿侖珠單抗(Campatt^)或靼向惡性B細(xì)胞上的CD52細(xì)胞表面糖蛋白的其他抗CD52抗體；利妥昔單抗(Rituxan)、完全人抗體HuMax-CD20、R-1594、IMMU-106、TRU-015、AME-133、托西莫單抗/1-131托西莫單抗(Bexxa,)、替伊莫單抗(Zevalin)或靶向惡性B細(xì)胞上的CD20抗原的任何其他治療性抗CD20抗體；抗CD19抗體(例如，MT103，雙特異性抗體)；抗CD22抗體(例如，人源化單克隆抗體依帕珠單抗)；貝伐珠單抗(Avastin)或耙向人血管內(nèi)皮生長因子的其他抗癌抗體；和其任何組合；其中在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后或在多種組合療法的情況下在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后使用所述藥物。在其他實施方式中，本發(fā)明提供了單克隆抗體1589或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者中的B細(xì)胞淋巴瘤，例如非何杰金氏淋巴瘤，其中將所述藥物與使用至少一種其他基于小分子的癌癥療法的治療協(xié)同使用，所述基于小分子的癌癥療法選自微管和/或拓樸異構(gòu)酶抑制劑(例如，有絲分裂抑制劑多拉司他汀和多拉司他汀類似物；微管結(jié)合劑T900607;XL119;和拓樸異構(gòu)酶抑制劑氨基喜樹堿)、SDX-105(鹽酸苯達(dá)莫司汀)、ixabepilone(epothilone類似物，也稱為BMS-247550)、蛋白激酶C抑制劑，例如米哚妥林((PKC-412、CGP41251、N-苯甲酰星狀孢子素)、匹蒽醌、樂沙定(抗腫瘤劑)、硝酸鎵(硝酸鎵)、Thalomid⑧(沙立度胺)、凋亡劑例如Xcytrin(莫特沙芬釓)；癌細(xì)胞產(chǎn)生蛋白Bcl-2的抑制劑(例:i口，反義試劑oblimersen和Genasense)、奈拉濱和其4壬4可纟且合；其中在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后或在多種組合療法的情況下在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后-使用所述藥物。在其他實施方式中，本發(fā)明提供了單克隆抗體l"9或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者中的B細(xì)胞淋巴瘤，例如非何杰金氏淋巴瘤，其中將所述藥物與使用至少一種其他基于疫苗/免疫療法的癌癥療法的治療協(xié)同使用，所述基于疫苗/免疫療法的癌癥療法選自疫苗方法(例如，Id-KLH、oncophage、vitalethine)、個性化免疫療法或活性獨特型免疫療法(例如，MyVax⑧個性化免疫療法，以前稱為GTOP-99)、Promune(CpG7909，tol1樣受體9(TLR9)的合成激動劑)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)療法、IL-12療法、IL-15療法和IL-21療法和其任何組合；其中在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后或在多種組合療法的情況下在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后使用所述藥物。在一些實施方式中，本發(fā)明提供了抗CD20抗體例如單克隆抗體1589或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者中的B細(xì)胞相關(guān)淋巴瘤，例如B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞性白血病(B-ALL)，其中將所述藥物與使用至少一種其他癌癥療法的治療協(xié)同使用，所述癌癥療法選自化學(xué)療法和抗代謝物療法，其中在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后或在多種組合療法的情況下在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后使用所述藥物。此類實施方式的實例包括但不限于，其中將包含抗CD20抗體例如單克隆抗體1589或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物與使用化學(xué)治療劑或抗代謝物的治療協(xié)同使用，所述化學(xué)治療劑或抗代謝物選自環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿、潑尼松、阿糖胞苷、米托蒽醌、依達(dá)比星、天冬酰胺酶、甲氨蝶呤、6-硫鳥嘌呤、6-巰基嘌呤和其組合；其中在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后或在多種組合療法的情況下在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后使用所述藥物。在一個這樣的實例中，將所述藥物與使用阿糖胞苷+柔紅霉素、阿糖胞苷+米托蒽醌和/或阿糖胞苷+依達(dá)比星的治療協(xié)同使用；其中在使用其他癌癥療法治療B-ALL受試者之前、期間或之后或在多種組合療法的情況下在使用其他癌癥療法治療受試者之前、期間或之后使用所述藥物。本發(fā)明還提供了抗CD2Q抗體例如本文中公開的單克隆抗體1589，或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者的特征在于贅生性B細(xì)胞生長的癌癥，所述癌癥包括本文上面所述的B細(xì)胞相關(guān)癌癥，其中所述藥物用于已用至少一種其他癌癥療法預(yù)治療的受試者。"預(yù)治療的"或"預(yù)治療"意指受試者在接受包含抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物之前已接受一種或多種其他癌癥療法(即，已用至少一種其他癌癥療法治療)。"預(yù)治療的"或"預(yù)治療"包括在開始使用包含抗CD20抗體例如本文中公開的單克隆抗體1589，或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物的治療之前的2年內(nèi)、18個月內(nèi)、l年內(nèi)、6個月內(nèi)、2個月內(nèi)、6周內(nèi)、l個月內(nèi)、4周內(nèi)、3周內(nèi)、2周內(nèi)、l周內(nèi)、6天內(nèi)、5天內(nèi)、4天內(nèi)、3天內(nèi)、2天內(nèi)或甚至1天內(nèi)已用至少一種其他癌癥療法治療的受試者。受試者不必是對使用先前的一種和多種癌癥療法的預(yù)治療的反應(yīng)者。因此，接受包含抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物的受試者可對使用之前的癌癥療法的預(yù)治療或?qū)σ环N或多種之前的癌癥療法(其中預(yù)治療包括多個癌癥療法)反應(yīng)或可對其反應(yīng)(即，所述癌癥是難控制的)。受試者在接受包含抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物之前可已經(jīng)接受預(yù)治療的其他癌癥療法的實例包括但不限于手術(shù)；放射療法；化學(xué)療法，任選地與自體骨髓移植術(shù)組合，其中合適的化學(xué)治療劑包括但不限于，本文上面所列的化學(xué)治療劑；其他抗癌單克隆抗體療法包括但不限于本文上面所列的抗癌抗體；基于小分子的癌癥療法包括但不限于本文上面所列的小分子；基于疫苗/免疫療法的癌癥療法包括但不限于本文上面所列的癌癥療法；類固醇療法；其他癌癥療法；或其任何組合。在本文中描述的藥物與一種或多種其他癌癥療法的協(xié)同使用的上下文中的"治療"在本文中定義為對受試者應(yīng)用或施用所述藥物或其他癌癥療法，或?qū)碜允茉囌叩姆蛛x的組織或細(xì)胞系應(yīng)用或施用所述藥物或其他癌癥療法，其中所述受試者具有特征在于贅生性B細(xì)胞生長的癌癥、與該癌癥相關(guān)的癥狀或?qū)Πl(fā)生這樣的癌癥的易感性，其中目的是治療、治愈、減輕、緩解、改變、醫(yī)治、改善、好轉(zhuǎn)或影響癌癥、所述癌癥的任何相關(guān)癥狀或?qū)Π┌Y發(fā)生的易感性。本發(fā)明還提供了抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者中的自身免疫性疾病和/或為炎性疾病，其中將所述藥物與至少一種其他療法協(xié)同使用。"協(xié)同的"意指在用至少一種用于自身免疫性疾病和/或炎性疾病的其他療法治療受試者之前、期間或之后使用所述藥物。其他療法的實例包括但不限于本文上面描述的療法，即手術(shù)或手術(shù)方法(例如脾切除術(shù)、淋巴結(jié)切除術(shù)、曱狀腺切除術(shù)、血漿去除術(shù)、白細(xì)胞生成、細(xì)胞、組織或器官移植、器官灌注、腸內(nèi)手術(shù)等)、放射療法、療法例如類固醇療法和非類固醇療法、激素療法、細(xì)胞因子療法、使用皮膚病藥(例如，用于治療皮膚狀況例如過敏癥、接觸性皮炎和銀屑病的局部試劑)的療法、免疫抑制療法和其他抗炎單克隆抗體療法等，其中在使用本文中上述的包含抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物治療受試者之前、期間或之后進(jìn)行使用另外的療法的治療。在一個這樣的實施方式中，本發(fā)明提供了單克隆抗體1589或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者中的自身免疫性疾病和/或炎性疾病，其中將所述藥物與使用至少一種本文中上述的其他療法的治療協(xié)同使用。在一些實施方式中，將包含抗CD2G抗體，例如本文中公開的單克隆抗體1589，或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物與使用兩種其他療法的治療協(xié)同使用。其中將包含抗CD20抗體的藥物與其他兩種療法協(xié)同使用，所述藥物的使用可在用兩種其他療法的任一種或兩種治療受試者之前、期間或之后。本發(fā)明還提供了抗CD20抗體，例如本文中公開的單克隆抗體1589，或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療受試者的自身免疫性疾病和/或炎性疾病，其中所述藥物用于在已用至少一種其他療法預(yù)治療的受試者。"預(yù)治療的"或"預(yù)治療"意指受試者在接受包含抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物之前已用一種或多種其他療法進(jìn)行治療。"預(yù)治療的"或"預(yù)治療"包括在開始使用包含抗CD20抗體例如本文中公開的單克隆抗體1589，或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物的治療之前的2年內(nèi)、18個月內(nèi)、l年內(nèi)、6個月內(nèi)、2個月內(nèi)、6周內(nèi)、l個月內(nèi)、4周內(nèi)、3周內(nèi)、2周內(nèi)、l周內(nèi)、6天內(nèi)、5天內(nèi)、4天內(nèi)、3天內(nèi)、2天內(nèi)或甚至1天內(nèi)已用其他療法治療的受試者。受試者不必是對使用先前的一種或多種療法的預(yù)治療的反應(yīng)者。因此，接受包含抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的藥物的受試者可對使用之前的療法的預(yù)治療或?qū)σ环N或多種之前的療法(其中預(yù)治療包括多個療法)反應(yīng)或不反應(yīng)。在本文中描述的藥物與一種或多種其他自身免疫性疾病和/或炎性疾病療法的協(xié)同使用的上下文中的"治療"在本文中定義為對受試者應(yīng)用或施用所述藥物或其他療法，或?qū)碜允茉囌叩姆蛛x的組織或細(xì)胞系應(yīng)用或施用所述藥物或其他療法，其中所述受試者具有與表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)的自身免疫性疾病和/或炎性疾病、與該疾病相關(guān)的癥狀或?qū)@樣的疾病的發(fā)生的易感性，其中目的是治療、治愈、減輕、緩解、改變、醫(yī)治、改善、好轉(zhuǎn)或影響疾病、所述疾病的任何相關(guān)癥狀或?qū)膊“l(fā)生的易感性。X.診斷學(xué)本發(fā)明還提供了在表達(dá)CD20的細(xì)胞介導(dǎo)的疾病例如SLE、PBC、ITP、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、克羅恩病、移植物排斥和B細(xì)胞淋巴瘤的診斷期間使用的診斷方法，所述方法包括測量CD20蛋白或轉(zhuǎn)錄物在來自個體的組織或其他細(xì)胞或體液中的表達(dá)水平，和將測量的表達(dá)水平與正常組織或體液中的標(biāo)準(zhǔn)CD20表達(dá)水平比較，其中與標(biāo)準(zhǔn)相比表達(dá)水平的增加預(yù)示著病癥。本發(fā)明的抗CD20抗體和抗原結(jié)合片段、變體和衍生物可用于使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的經(jīng)典免疫組織學(xué)方法(例如，參見Jalkanen等人(1985)J.Cell.Biol.101:976-985;Jalkanen等人(1987)J.CellBiol.105:3087-3096)測定生物樣品中的CD20蛋白水平。用于檢測CD2Q蛋白表達(dá)的其他基于抗體的方法包括免疫測定法例如酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、免疫沉淀或western印跡。合適的測定法更詳細(xì)地描述于本文中的其他地方。"測定CD20多肽的表達(dá)水平"意指直接(例如，通過測定或評估絕對蛋白質(zhì)水平)或相對地(例如，通過和與第二生物樣品中的多肽水平相關(guān)的疾病比較)定性或定量測量或評估第一生物樣品中CD20多肽的水平。優(yōu)選，測量或評估第一生物樣品中CD20多肽的表達(dá)水平，將其與標(biāo)準(zhǔn)CD20多肽水平比較，所述標(biāo)準(zhǔn)采自從不具有病癥的個體獲得的第二生物樣品或通過平均來自不具有病癥的個體的群體的水平來測定。如在本領(lǐng)域內(nèi)所理解的，當(dāng)知道"標(biāo)準(zhǔn)"CD20多肽水平后，其可重復(fù)用作比較的標(biāo)準(zhǔn)。"生物樣品"意指從個體、細(xì)胞系、組織培養(yǎng)物或可能表達(dá)CD20的細(xì)胞的其他來源獲得的任何生物樣品。用于獲得來自哺乳動物的活組織檢查樣品和體液的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。XL.免疫測定法可通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的任何方法就免疫特異性結(jié)合測定本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物?？梢允褂玫拿庖邷y試方法包括(但不限于)采用了多種技術(shù)的竟?fàn)幮曰蚍蔷範(fàn)幮缘臏y試體系，其中所述的技術(shù)例如有western印跡、放射性免疫測試、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測試)、"夾心"免疫測試、免疫沉淀測試、沉淀素反應(yīng)、凝膠擴散沉淀素反應(yīng)、免疫擴散測試、凝集測試、補體結(jié)合測試、免疫放射測試、熒光免疫測試、蛋白質(zhì)A免疫測試，以上列舉了一些，在此就不——列舉了。這些測試方法是常規(guī)的，并且是本領(lǐng)域7>知的(參見，例如，Ausubel等人eds，(1994)CurrentProtocolsinMolecularBiology(JohnWiley&Sons,Inc.,NY)第1巻，其以其全文通過引用合并入本文)。下文將對示例性的免疫測試法進(jìn)行概述(但并非意欲限定本發(fā)明)。免疫沉淀方案通常包括在補充有蛋白質(zhì)磷酸酶和/或蛋白酶抑制劑(例如EDTA、PMSF、抑肽酶、釩酸鈉)的諸如RIPA緩沖劑(1%NP-40或TritonX-IOO、1%脫氧膽酸鈉、0.1%SDS、0.15MNaCl、pH7.2的0.01M磷酸鈉、1%Trasylol)之類的裂解緩沖劑中，裂解細(xì)胞群體；向細(xì)胞裂解物中添加目的抗體；在4'C下溫育一段時間(例如1-4小時)；向細(xì)胞裂解物中添加蛋白質(zhì)A和/或蛋白質(zhì)G瓊脂糖珠子；在4"C下溫育大于1小時或更長時間；在裂解緩沖劑中洗滌珠子；并將珠子再次懸浮于SDS/樣品緩沖劑中?？梢酝ㄟ^(例如)western印跡分析來評價目的抗體免疫沉淀特定抗原的能力。本領(lǐng)域的任一技術(shù)人員都熟知可以進(jìn)行修飾以增強抗體與抗體的結(jié)合并減少背景(例如使用瓊脂糖珠子對細(xì)胞裂解物進(jìn)行預(yù)先凈化)的參數(shù)。關(guān)于免疫沉淀方案的進(jìn)一步討論參見例如，Ausubel等人，eds,(1994)CurrentProtocolsinMolecularBiology(JohnWiley&Sons,Inc.,NY)第1巻于10.161。western印跡分析通常包括制備蛋白質(zhì)樣品，在聚丙烯酰胺凝膠(例如8%-20%SDS-PAGE，這取決于抗原的分子量)中對該蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行電泳；將聚丙烯酰胺凝膠上蛋白質(zhì)樣品轉(zhuǎn)移至諸如硝基纖維素、PVDF或尼龍之類的膜上；將所得的膜封閉于封閉液(例如包含3%BSA或脫脂乳粉的PBS)中；在洗滌緩沖劑(例如PBS-Tween20)中洗滌膜；用稀釋于封閉緩沖劑的一級抗體(目的抗體)溫育膜；在洗滌緩沖劑中洗滌膜；用稀釋于封閉緩沖劑中的、與酶底物(例如辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)或放射性分子(例如32p或1251)偶聯(lián)的二級抗體(其識別一級抗體，例如抗人抗體)溫育膜；在洗滌緩沖劑中洗滌膜；以及檢測抗原的存在情況。本領(lǐng)域的任一技術(shù)人員都熟知可以進(jìn)行修飾以增強檢測信號并減少背景噪聲的參數(shù)。關(guān)于western印跡方案的進(jìn)一步討論參見，例如，Ausubel等人，eds，(1994)CurrentProtocolsinMolecularBiology(JohnWiley&Sons,Inc.,NY)第1巻于10.8.1。ELISA包括制備蛋白質(zhì)；用抗原涂敷96孔微孔板的孔；將與諸如酶底物(例如辣根過氧化物酶或減小磷酸酶)之類的可檢測化合物偶聯(lián)的關(guān)注抗體添加到96孔微孔板的孔中并溫育一段時間；以及檢測抗原的存在情況。在ELISA中，目的抗體并非必須與可檢測的化合物偶聯(lián)；而是可以將與可檢測化合物偶聯(lián)的第二種抗體(其識別目的抗體)添加到孔中。此外，沒有使用抗原涂敷孔，可以將抗體涂敷到孔中。在這種情況下，可以在將目的抗原添加到經(jīng)涂敷的孔中之后，添加可檢測化合物偶聯(lián)的第二種抗體。本領(lǐng)域的任一技術(shù)人員都熟知可以進(jìn)行修飾以增強檢測信號的參數(shù)以及本領(lǐng)域已知的ELISA的其他變量。關(guān)于ELISA的進(jìn)一步討論參見，例如，Ausubel等人，eds，(1994)CurrentProtocolsinMolecularBiology(JohnWiley&Sons,Inc.,NY)第1巻于11.2.1?？赏ㄟ^竟?fàn)幗Y(jié)合測定法測定抗體對抗原的結(jié)合親和力以及抗體-抗原相互結(jié)合的解離率。竟?fàn)幗Y(jié)合測定法的一個實例是這樣的放射免疫測定法，其包括在逐漸增加的量的未標(biāo)準(zhǔn)的抗原存在的情況下用目的抗體溫育標(biāo)記的抗原(例如，3H或125I)，和檢測與標(biāo)記的抗原結(jié)合的抗體。目的抗體對特定抗原的親和力和結(jié)合解離率可通過斯卡恰特作圖(scatchardplot)分析從數(shù)據(jù)測定與二抗的竟?fàn)庍€可通過4吏用放射免疫測定法來測定。在該情況下，在逐漸增加的量的未標(biāo)記的二抗存在的情況下，將抗原與綴合至標(biāo)記的化合物(例如，3H或1251)的目的抗體一起溫育。此外，本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可在組織學(xué)上(如在免疫熒光、免疫電子顯微術(shù)或非免疫學(xué)測定法中)用于癌癥抗原基因產(chǎn)物或其保守變體或肽片段的原位檢測?？赏ㄟ^從患者取出組織學(xué)標(biāo)本，對其使用標(biāo)記的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，優(yōu)選通過將標(biāo)記的抗體(或片段)覆蓋在組織樣品上來使用來進(jìn)行原位檢測。通過使用該方法，可能不僅測定CD20蛋白或保守變體或肽片段的存在，而且還可測定其在檢測的組織中的分布。通過使用本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地理解到，許多組織學(xué)方法中的任一種(例如染色法)可進(jìn)行改變以獲得這樣的原位檢測。用于CD20基因產(chǎn)物或其保守變體或肽片段的免疫測定法和非免疫測定法通常包括在能夠結(jié)合CD20或其保守變體或肽片段的可檢測標(biāo)記的抗體存在的情況下溫育樣品，例如生物流體、組織提取物、新收獲的細(xì)胞或已在細(xì)胞培養(yǎng)物中溫育的細(xì)胞的裂解物，和通過本領(lǐng)域內(nèi)熟知的許多技術(shù)的任一種檢測結(jié)合的抗體。可使生物樣品接觸和固定在固相支持物或載體，例如硝酸纖維素或能夠固定細(xì)胞、細(xì)胞顆粒或可溶性蛋白質(zhì)的其他固體支持物上。然后用合適的緩沖液洗滌支持物，然后用可檢測標(biāo)記的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物進(jìn)行處理支持物。然后固相支持物用緩沖液洗滌第二次以除去未結(jié)合的抗體。任選，隨后標(biāo)記抗體。然后可通過常規(guī)方法檢測固相支持物上結(jié)合的標(biāo)記物的量。"固相支持物或載體"是指能夠結(jié)合抗原或抗體的任何支持物。熟知的支持物或載體包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龍、淀粉酶、天然和改性纖維素、聚丙烯酰胺、輝長巖(gabbros)和磁鐵。為了本發(fā)明的目的，載體的性質(zhì)可以是在一定程度上可溶的或不溶的。支持材料事實上可具有任何可能的結(jié)構(gòu)構(gòu)型，只要偶聯(lián)的分子能夠結(jié)合抗原或抗體。因此，支持物構(gòu)型可以球形的，如珠粒，或圓柱狀的，如試管的內(nèi)側(cè)表面或棒的外表面。備選地，表面可以是扁平的例如片、試驗帶等。優(yōu)選支持物包括聚苯乙烯珠粒。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道用于結(jié)合抗體或抗原的許多其他合適的載體，或通過使用常規(guī)實驗?zāi)軌虼_定所述載體?？梢愿鶕?jù)公知的方法來測定大量給定的抗CD20抗體或者其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的結(jié)合活性。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠通過采用常規(guī)的試驗來測定用于各種測定方法的操作和最佳的測定條件。已經(jīng)存在多種用于測定抗體-抗原相互作用的親和性的方法，但是用于測定速率常數(shù)的方法相對少些。大部分的方法依賴于對抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，這不可避免地使常規(guī)的測量方法變復(fù)雜，并使得測量的量變得不可靠。在多種測量抗體-抗原相互作用的親和性的常規(guī)方法中，在BIAcore上進(jìn)行的表面等離子體共振提供多種優(yōu)點(i)無需標(biāo)記抗體或抗原；(ii)抗體無需預(yù)先純化，可以直接使用細(xì)胞培養(yǎng)物的上清液；(iii)能夠進(jìn)行實時測定，從而可以對不同單克隆抗體的相互作用進(jìn)行快速的半定量的比較，并且足以用于多種評價目的；(iv)生物特異性表面可以再生，這樣可以在相同的條件下比較一系列不同的單克隆抗體；(v)分析過程完全是自動化的，并且可以在無需使用者進(jìn)行干涉的條件下進(jìn)行大量的測量。BIAapplicationsHandbook,版本AB(重印于1998)'BIACOREcodeNo.BR-1001-86;BIAtechnologyHandbook,版本AB(重印于1998)，BIACOREcodeNo.BR-1001-84。基于SPR的結(jié)合研究要求結(jié)合對的一個成員固定在傳感器表面。被固定的結(jié)合伴侶稱為配體。溶液中的結(jié)合伴侶稱為分析物。在一些情況下，將配體通過與另一個固定的分子(其稱為捕獲分子)結(jié)合來與將其間接地附著至表面。SPR應(yīng)答反映了當(dāng)分析物結(jié)合或解離時檢測器表面上的質(zhì)量濃度的變化。當(dāng)上述情況發(fā)生時，基于SPR的實時BIAcore測量檢測器直接相互作用。該技術(shù)非常適用于測定動力學(xué)參數(shù)?？梢蕴貏e容易地對相對親和性進(jìn)行評定，并且動力學(xué)和親和常數(shù)可以由傳感圖譜數(shù)據(jù)得到。當(dāng)在穿過配體的表面上以分離脈沖的方式注入分析物時，所得的傳感圖譜可以分為三個基本的階段(i)在注入樣品期間，分析物與配體結(jié)合；(ii)在注入樣品期間的均衡或穩(wěn)定狀態(tài)，其中分析物結(jié)合的速率與復(fù)合物解離的速率平衡；(iii)在緩沖劑流過期間分析物由所述的表面上解離。結(jié)合和解離階段提供了關(guān)于分析物-配體相互作用的動力學(xué)的信息(ka和kd，復(fù)合物的形成和解離速率，kd/ka-KD)。均衡階段提供了關(guān)于分析物-配體相互作用(K。)的親和性的信息。BIA評價軟件提供了使用數(shù)值積分和整體擬合算法來進(jìn)行曲線擬合的工具。采用合適的數(shù)據(jù)分析方法，可以通過簡單的BIAcore研究獲得用于相互作用的分離速率和親和常數(shù)。通過上述技術(shù)測量的親和力的范圍非常寬，由mM至pM。表位特異性是單克隆抗體的重要特征。與采用放射性免疫、ELISA、或其他表面吸附方法的常規(guī)技術(shù)截然不同的是，使用BIAcore制作表位的圖謙不需要標(biāo)記或純化抗體，并且可以允許使用一系列的若干種單克隆抗體來進(jìn)行多位點的特異性測試。此外，可以自動地進(jìn)行大量的分析。配對結(jié)合實驗檢測兩個Mab同時結(jié)合相同抗原的能力?？狗珠_的表位的Mab將獨立地結(jié)合，然而抗相同或緊密相關(guān)的表位的Mab將干擾彼此的結(jié)合。直接進(jìn)行使用BIAcore進(jìn)行的這些結(jié)合實驗。例如，可使用捕獲分子結(jié)合第一Mab，然后相繼加入抗原和第二Mab。感應(yīng)圖鐠將顯示1.抗原結(jié)合抗體第一Mab的量，2.第二Mab結(jié)合表面附著的抗原的程度，3.如果第二Mab未結(jié)合，逆轉(zhuǎn)配對試驗的順序是否可改變結(jié)果。肽抑制是用于表位作圖的另一個技術(shù)。該方法可補充配對抗體結(jié)合研究，并且在當(dāng)抗原的一級序列已知時，可將功能性表位與結(jié)構(gòu)特征相關(guān)聯(lián)。就不同Mab與固定的抗原的結(jié)合的抑制檢測肽或抗原片段。干擾給定的Mab的結(jié)合的肽被認(rèn)為在結(jié)構(gòu)上與由該Mab界定的表位相關(guān)。除非另外指出，本發(fā)明的實施將使用在本領(lǐng)域技術(shù)范圍之內(nèi)的細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)、轉(zhuǎn)基因生物學(xué)、微生物學(xué)、重組DNA和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)。在文獻(xiàn)中詳盡地解釋了此類技術(shù)。參見，例如，Sambrook等人ed.(1989)MolecularCloningALaboratoryManual(第2版.；ColdSpringHarborLaboratoryPress);Sambrook等人ed.(1992)MolecularCloning:ALaboratoryManual,(ColdSpringsHarborLaboratory,NY);D.N.Glovered.，(1985)DNACloning,第1和2巻；Gait，ed.(1984)01igonucleotideSynthesis;Mullis等人美國專利4，683，195;HamesandHiggins，eds.(1984)NucleicAcidHybridization;HamesandHiggins，eds.(1984)TranscriptionAndTranslation;Freshney(1987)CultureOfAnimalCells(AlanR.Liss，Inc.);Immobi1izedCelIsAndEnzymes(IRLPress)(1986)jPerbal(1984)APracticalGuideToMolecularCloning;thetreatise,MethodsInEnzymology(AcademicPress,Inc.,N.Y.);Mi1lerandCaloseds.(1987)GeneTransferVectorsForMammalianCells,(ColdSpringHarborLaboratory);Wu等人eds.,MethodsInEnzymology,第154和155巻；MayerandWalker,eds.(1987)ImmunochemicalMethodsInCellAndMolecularBiology(AcademicPress,London);Weir和Blackwell，eds.，(1986)HandbookOfExperimentalImmunology,第I-IV巻；ManipulatingtheMouseEmbryo,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.，(1986);和于Ausubel等人(1989)CurrentProtocolsinMolecularBiology(JohnWiley和Sons,Baltimore,Maryland)中。抗體工禾呈的一般原理示于Borrebaeck，ed.(1995)AntibodyEngineering(第2版ed.;OxfordUniv.Press)。蛋白質(zhì)工程的一般原理示于Rickwood等人eds.(1995)ProteinEngineering,APracticalApproach(IRLPressatOxfordUniv.Press,Oxford,Eng.)。抗體和抗體-半抗原結(jié)合的一般原理示于Nisonoff(1984)MolecularImmunology(第2版；SinauerAssociates,Sunderland,MA);和Steward(1984)Antibodies,TheirStructureandFunction(ChapmanandHall，NewYork,NY)。此外，本領(lǐng)域已知的并且并非特異描述的標(biāo)準(zhǔn)的免疫學(xué)方法通?？梢愿鶕?jù)CurrentProtocolsinImmunology,JohnWiley&Sons,NewYork;Stites等人，eds.(1994)BasicandClinicalImmunology(8thed;Appleton&Lange，Norwalk，CT)以及Mishell和Shiigi(eds)(1980)SelectedMethodsinCellularImmunology(W.H.FreemanandCo.，NY)。闡明免疫學(xué)的一般原理的標(biāo)準(zhǔn)參考著作包括CurrentProtocolsinImmunology,JohnWiley&Sons,NewYork;Klein(1982)J.，Immunology:TheScienceofSelf-NonselfDiscrimination(JohnWiley&Sons,NY);Kennett等人eds.(1980)MonoclonalAntibodies,Hybridoma:ANewDimensioninBiologicalAnalyses(PlenumPress,NY);Campbell(1984)"MonoclonalAntibodyTechnology"inLaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology，ed.Burden等人(Elsevere，Amsterdam);Goldsby等人eds.(2000)KubyImmu麵logy(第4版；H.Freemand&Co.);Roitt等人(200D。Immunology(第6版；London:Mosby);Abbas等人(2005)CellularandMolecularImmunology(第5版；ElsevierHealthSciencesDivision);Kontermann和Dubel(2001)AntibodyEngineering(SpringerVerlan);Sambrook和Russell(2001)MolecularCloning:ALaboratoryManual(ColdSpringHarborPress);Lewin(2003)GenesVIII(PrenticeHall2003);Harlow和Lane(1988)Antibodies:ALaboratoryManual(ColdSpringHarborPress)，DieffenbachandDveksler(2003)PCRPrimer(ColdSpringHarborPress)。文通過引用合并入本文。通過舉例說明的方式而非限定性的方式提供下列實施例。實施例實施例1:人源化鼠抗CD20抗體的最優(yōu)化在其可變重鏈(VH;參見SEQIDNO:29)和可變輕鏈(V"參見SEQIDNO:10)結(jié)構(gòu)域的一個或多個互補決定區(qū)(CDR)內(nèi)對人源化鼠抗CD20單克隆抗體mAb1097進(jìn)行改造以產(chǎn)生最優(yōu)化的具有增加的CDC功能的mAb。初始人源化鼠抗CD20mAb是稱為利妥昔單抗(即，mAbC2B8;參見美國專利5，736，137)的嵌合鼠/人抗CD20抗體的人源化形式。人源化鼠抗CD20mAb內(nèi)的初始VH結(jié)構(gòu)域(稱為H1286)和初始VK結(jié)構(gòu)域(稱為L373)的3個CDR示于圖1。L373的CDR2(示于SEQIDNO:9)來源于人Vk而非鼠VK。最初的最優(yōu)化步驟包括對H1286Vh結(jié)枸域(參見圖2)的起始CDR3(圖1中稱為"271";SEQIDN0:30)的修飾。271CDR3序列等同于mAbC2B8的重鏈內(nèi)的可變結(jié)構(gòu)域的CDR3的序列。對271CDR3的初步修飾包括1)初始CDR3的位點9上的酪氨酸至天冬酰胺(Y—N)的置換和初始CDR3的位點12上的纈氨酸至天冬氨酸(V—N)的置換，以產(chǎn)生"1236"最優(yōu)化的CDR3(SEQIDNO:1);2)除了分別在位點9和12上的Y—N和V—N的置換夕卜，初始CDR3的位點5上的甘氨酸至丙氨酸(G—A)的置換，以產(chǎn)生"1237"最優(yōu)化的CDR3(SEQIDNO:2);或3)除了分別在位點5和9上的G—A和Y—N的置換夕卜，初始CDR3的位點12上的纈氨酸至天冬氨酸(V—D)的置換，以產(chǎn)生"1238"最優(yōu)化的CDR3(SEQIDNO:3)。最優(yōu)化的CDR3的個體編碼序列示于SEQIDNO:24(編碼1236最優(yōu)化的CDR3)、SEQIDNO:25(編碼1237最優(yōu)化的CDR3)和SEQIDNO:26(編碼1238最優(yōu)化的CDR3)。然后將這些最優(yōu)化的CDR3通過改造入H1286的初始人源化Vh結(jié)構(gòu)域框架區(qū)以產(chǎn)生下列最優(yōu)化的Vh結(jié)枸域H1569(SEQIDNO:12)，包含SEQIDNO:1的1236最優(yōu)化的CDR3;H1570(SEQIDNO:13),包含SEQIDNO:2的1237最優(yōu)化的CDR3;和H1571(SEQIDNO:14)，包含SEQIDNO:3的1238的最優(yōu)化的CDR3)(參見圖3)。這些最優(yōu)化的VH結(jié)構(gòu)域的編碼序列示于圖4中，和示于SEQIDNO:19(編碼H1569)、SEQIDN0:20(編碼H1570)和SEQIDNO:21(編碼H1571)中。然后將這些最優(yōu)化的VH結(jié)構(gòu)域的每一個與初始(L373)Vk結(jié)枸域(參見圖5;SEQIDNO:10;SEQIDNO:23中所示的編碼序列)配對來產(chǎn)生下列最優(yōu)化的人源化mAB:mAb1236、mAb1237和mAb1238。實施例2:最優(yōu)化的人源化鼠抗CD20單克隆抗體的結(jié)合和功能特征就它們各自的結(jié)合和功能特征評估實施例1中描述的最優(yōu)化的人源化mAb1236、mAb1237和mAb1238。對于每一個測定，具有與利妥昔單抗(IDEC-C2B8;Rituxan;IDECPharmaceuticalsCorp.，SanDiego，California)相同的序列的mAb271用作陽性對照。通過熒光孩i體積數(shù)字圖象測定技術(shù)(FluorometricMicrovolumeAssayTechnology)(FMAT，AppliedBiosystems8200CellularDetectionSystem)和流式細(xì)胞計量術(shù)評估結(jié)合特異性，所述流式細(xì)胞計量術(shù)列表顯示CD20陽性(CD20+)和CD20陰性細(xì)胞系上染色的平均熒光強度(MFI)。FMAT分析顯示對于CD20的結(jié)合特異性(圖6A-6D)。流式細(xì)胞計量術(shù)分析顯示這些最優(yōu)化的人源化抗CD2GmAb對CD20+Daudi和EB1細(xì)胞的結(jié)合(表2)。表2.與CD2Q膜陽性和陰性細(xì)胞系的結(jié)合<table>tableseeoriginaldocumentpage124</column></row><table>為了評估被mAb1236、mAb1237和mAb1238識別的表位，向FMAT板中加入3pg/ml的CD20特異性小鼠2H7抗體(或小鼠IS0)，然后在室溫下溫育2小時。然后加入受試mAb(30ng/ml)和抗人IgFc-Alexa647,通過FMAT檢測熒光信號。對于小鼠2H7(m2H7)信號的減少表明表位封閉。如可在圖7中看到的，并且如所預(yù)期的，mAb1236、mAb1237和mAb1238都識別與mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)識別的相同的表位。評估補體依賴細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴細(xì)胞毒性(ADCC)。對于CDC，使用抗體解離率測定法。這樣，用51Cr，200MCi裝填靶CD2(TDaudi細(xì)胞進(jìn)行2小時，然后進(jìn)行洗滌。將洗滌的Daudi細(xì)胞與10ing/ml各mAb—起在25。C下溫育15分鐘。然后充分洗滌靶Daudi細(xì)胞，并在37。C下溫育。在37。C下進(jìn)行0、2、4和6小時溫育后，將細(xì)胞與6%人血清(補體源)一起溫育45分鐘。對照包括自發(fā)和最大的51Cr釋放，所有濃度上的mAb和單獨的Daudi細(xì)胞以及血清和單獨的Daudi細(xì)胞。然后處理上清液，通過Y計數(shù)器計數(shù)釋放的51Cr。抗體特異性CDC通過扣除單獨的mAb和血清對裂解的貢獻(xiàn)來測定。如可在圖8中看到的，mAb1236、mAb1237和mAb1238具有比mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)更好的CDC功能活性。ADCC活性通過用51Cr，200pCi裝載靶Daudi細(xì)胞進(jìn)行2小時，然后進(jìn)行洗滌來測定。將洗滌的Daudi細(xì)胞與濃度已滴定的各mAb和新制備的PBMC(NK源)以50:1—起混合4小時。對照包括自發(fā)的和最大的51Cr釋放，所有濃度上的mAb和單獨的Daudi細(xì)胞以及PBMC和單獨的Daudi細(xì)胞。然后處理上清液并且通過Y計數(shù)器計數(shù)釋放的51Cr。通過扣除PBMC對裂解的貢獻(xiàn)來測定抗體特異性ADCC。如可在圖9中所看到的，對于所有受試mAb，ADCC活性隨mAb濃度的不斷增加而增加。在所有mAb濃度上，mAb1236、mAb1237和mAbl238具有與對于對照mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)觀察到的ADCC活性相同的ADCC活性。還可使用不依賴于CDC和ADCC的直接凋亡測定法評估凋亡活性。這樣，在交聯(lián)抗體(5|ig/ml山羊抗人IgGFc)存在的情況下，將Ramos細(xì)胞(NHL)與10、2、0.4或0.08jag/ml的各mAb在下一起溫育18小時。mAbll用作同種型對照。18小時后，收獲和洗滌細(xì)胞，然后將其與膜聯(lián)蛋白V-APC和碘化丙啶在25。C下一起溫育15分鐘。通過流式細(xì)胞計量術(shù)就膜聯(lián)蛋白V陽性/PI陰性細(xì)胞的存在分析細(xì)胞。如可在圖10中看到的，最優(yōu)化的人源化mAb1236、1237和1238在誘導(dǎo)凋亡上與mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)一樣有效。實施例3:mAb1237的進(jìn)一步最優(yōu)化B細(xì)胞慢性淋巴性細(xì)胞白血病(B-CLL)細(xì)胞表達(dá)比NHL(非何杰金氏淋巴瘤)細(xì)胞更低水平的CD20。測試顯示，最優(yōu)化的mAb1236、mAb1237和mAb1238顯示對B-CLL細(xì)胞弱的CDC。作為下一步驟，選擇mAb1237并且將其經(jīng)歷誘變以就親和力的提高，以及從而B-CLL細(xì)胞的裂解的提高來對其進(jìn)行篩選。親和力提高策略包括隨機Vh和L結(jié)構(gòu)域中的特定位點，選擇具有L373的突變Vh結(jié)枸域，選擇具有H1570的突變VK結(jié)構(gòu)域，組合Vh或VK中的分開的有益的突變，和將突變VH與突變VK結(jié)構(gòu)域組合。鑒定的新突變體示于表3。表3.鑒定的新突變體。Vh和、結(jié)構(gòu)域內(nèi)的殘基位點參考Kabat編號系統(tǒng)。mAbVHVK1588H1638(H1570S31F)L3731589H1639(H1570D56A)L37315卯H1640(H1570D56L)L3731652H1639(H1570D56A)L419(L373T92Q)1692H1670(H1570畫1G)L373最優(yōu)化的mAb1588包含H1638Vh結(jié)枸域(SEQIDNO:15)(其為在相應(yīng)于SEQIDNO:13中所示的H1570氨基酸序列的殘基31的H1570的Kabat編號位點31上具有S—F的置換的H1570Vh結(jié)枸域)和L373W結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:10)。該S—F置換導(dǎo)致H1638VH結(jié)構(gòu)域內(nèi)最優(yōu)化的CDR1(參見SEQIDNO:7)。最優(yōu)化的mAb1589包含H1639Vh結(jié)枸域(SEQIDNO:16)(其為在相應(yīng)于SEQIDNO:13中所示的H1570氨基酸序列的殘基57的H1570的Kabat編號位點56上具有D—A的置換的H1570Vh結(jié)枸域)和L373W結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:10)。該D—A的置換導(dǎo)致H1639Vh結(jié)枸域內(nèi)最優(yōu)化的CDR2(參見SEQIDNO:5;由SEQIDNO:27編碼)。最優(yōu)化的mAb1590包含H1640vh結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:17)(其為在相應(yīng)于SEQIDNO:13中所示的H1570氨基酸序列的殘基57的H1570的Kabat編號位點56上具有D—L的置換的H1570Vh結(jié)枸域)和L373Vl結(jié)枸域(SEQIDNO:10)。該D—L的置換導(dǎo)致H1640Vh結(jié)枸域內(nèi)最優(yōu)化的CDR2(參見SEQIDNO:6)。最優(yōu)化的mAb1652包含H1639Vh結(jié)枸域(SEQIDNO:16)和L419Vl結(jié)枸域(SEQIDNO:11)(其為在相應(yīng)于SEQIDNO:IO中所示的L373氨基酸序列的殘基91的L373的Kabat編號位點92上具有T—Q的置換的L373vl結(jié)構(gòu)域)。該T—Q的置換導(dǎo)致L419Vl結(jié)枸域內(nèi)最優(yōu)化的CDR3(參見SEQIDNO:8)。最優(yōu)化的DiAb1692包含H1670vh結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:18)(其為在相應(yīng)于SEQIDNO:13中所示的H1570氨基酸序列的殘基109的H1570的Kabat編號位點101上具有N—G的置換的H1570Vh結(jié)枸域)。該N—G的置換導(dǎo)致H1670vh結(jié)構(gòu)域內(nèi)最優(yōu)化的CDR3(參見SEQIDNO:4)。mAb1589的H1639vh結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:16)和L373W結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:10)的氨基酸序列示于圖ll，并且各自編碼序列示于圖12;也參見SEQIDNO:22(H1639的編碼區(qū))和SEQIDNO:23(L373的編碼區(qū))。實施例4:其他最優(yōu)化的人源化鼠抗CD20單克隆抗體的結(jié)合和功能特征就它們各自的結(jié)合和功能特征評估實施例1的最優(yōu)的化人源化mAb1237和實施例3中描述的其他最優(yōu)化的人源化mAb1588、1589、1590、1652和1692。對于各測定，mAb271，具有與利妥昔單抗(IDEC-C2B8;Rituxan;IDECPharmaceuticalsCorp.，SanDiego，California)相同的序列，用作陽性對照。通過列表顯示CD20陽性(CD20+)和CD20陰性細(xì)胞系上染色的平均熒光強度(MFI)的流式細(xì)胞計量術(shù)評估結(jié)合特異性。流式細(xì)胞計量術(shù)分析顯示這些最優(yōu)化的人源化抗CD20mAb與CD20結(jié)合，如可在表4中看到的。表4.與CD20膜陽性和陰性細(xì)胞系的結(jié)合<table>tableseeoriginaldocumentpage128</column></row><table>通過檢查mAb2H7阻斷結(jié)合的能力來評估表位保守性。這樣，向EB1細(xì)胞中加入小鼠2H7(或同種型Ig作為對照)，加入候選人mAb和抗人IgAlexa647。通過FMAT檢測結(jié)合。信號的減少表示阻斷和共同表位使用(usage)。如可在圖13中看到的，所有受試抗體識別相同或重疊的表位。評估補體依賴細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴細(xì)胞毒性(ADCC)。對于CDC，使用幾種測定法。第一放射性測定法包括用51Cr，200nCi裝載靶細(xì)胞進(jìn)行2小時。將洗滌的靶細(xì)胞(Daudi(NHL)和B-CLL細(xì)胞)與濃度已滴定的mAb和人血清(補體源)一起溫育4小時。對照包括自發(fā)和最大51Cr釋放、所有濃度上的mAb和單獨的細(xì)胞以及血清和單獨的細(xì)胞。處理懸浮液并且使用Y計數(shù)器計數(shù)釋放的51Cr。通過扣除單獨的mAb和血清對裂解的貢獻(xiàn)來測定抗體特異性CDC。Daudi和兩個B-CLL細(xì)胞系的結(jié)果分別示于圖14和圖15A及15B。對于Daudi細(xì)胞，最優(yōu)化的mAb通常介導(dǎo)，特別地以更低的濃度介導(dǎo)比mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)更大的CDC功能。對于B-CLL細(xì)胞，最優(yōu)化的mAb顯示超過mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)的增加的CDC功能。也使用抗體解離率測定法評估CDC功能。這樣，用51Cr，200uCi裝載耙CD20+Daudi細(xì)胞，進(jìn)行2小時，然后進(jìn)行洗滌。將洗滌的Daudi細(xì)胞與10jig/ml各mAb—起在25。C下溫育15分鐘。然后充分洗滌靶Daudi細(xì)胞，在37X:下溫育0、1、2、4和6小時后，將其與6%人血清(補體源)一起溫育45分鐘。對照包括自發(fā)和最大的51Cr釋放、所有濃度上的mAb和單獨的Daudi細(xì)胞以及血清和單獨的Daudi細(xì)胞。然后處理懸浮液并且使用Y計數(shù)器計數(shù)釋放的"Cr。通過扣除單獨的mAb和血清對裂解的貢獻(xiàn)來測定抗體特異性CDC。如在圖16所看到的，所有最優(yōu)化的mAb具有比mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)顯著更好的CDC功能活性。CDC功能也使用非放射性(AlamarBlue)CDC測定法進(jìn)行評估。這樣，使用濃度已滴定的mAb和人血清(補體源)來洗滌靶細(xì)胞(NHL、B-CLL和正常B細(xì)胞系中的兩個)。對照包括靶細(xì)胞和不含人血清的抗體(自發(fā)的細(xì)胞死亡)、靶細(xì)胞和不含抗體的血清(背景裂解)和用10%SDS(或5%的水中的TritonX100)替代抗體和血清的乾細(xì)胞的孔(用于最大細(xì)胞死亡)。2小時后向各孔中加入阿爾瑪藍(lán)(AlamarBlue),在過夜溫育后讀出熒光。在該測定中，更多的熒光更多的活細(xì)胞和更少的細(xì)胞毒性歸因于CDC的細(xì)胞毒性。AlamarBlueTM是響應(yīng)增殖細(xì)胞中的代謝活性而發(fā)熒光的氧化-還原指示劑。AlamarBlueTM與四唑鹽(MTT)相似，因為兩者可檢測細(xì)胞的代謝作用的變化，但AlamarBlueTM毒性較低并且比MTT更靈敏。將AlamarBlueTM與51Cr釋放測定法的使用相比，細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的測量中獲得的結(jié)果表明AamarBlueTM法與"Cr釋放的測定具有相同的特異性。結(jié)果示于圖17A(DaudiNHL細(xì)胞系)和17B(WIL2-SNHL細(xì)胞系)、圖18A(EHEBB-CLL細(xì)胞系)和18B(Mec-lB-CLL細(xì)胞系)以及圖19A(SSBLCL"正常"B細(xì)胞)和19B(MelKBLCL"正常，，B細(xì)胞)中。放射性測定法是4小時的測定，而非放射性測定法是18至20小時的測定。與對照相比，最優(yōu)化的mAb候選物通常在非放射性測定中產(chǎn)生更大的裂解。非放射性測定可代表與體內(nèi)環(huán)境更相似的狀況中，因為藥物在體內(nèi)環(huán)境中可以以高濃度存在大大超過4小時。概述結(jié)果，對于DaudiNHL細(xì)胞，最優(yōu)化的mAb的CDC活性至少等于mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)。最優(yōu)化的mAb在解離率CDC測定中比mAb271更好。更低的解離率表明最優(yōu)化的mAb271的親和力更高。最后，最優(yōu)化的mAb在裂解B-CLL細(xì)胞系和正常B細(xì)胞靶中比mAb271更好。通過用51Cr，200jLiCi裝載靶細(xì)胞(Daudi和B-CLL)進(jìn)行2小時，然后進(jìn)行洗滌來測定ADCC活性。將洗滌的靶細(xì)胞與濃度已滴定的各mAb和新配制的PBMC(NK源)以50:1—起溫育4小時。對照包括自發(fā)和最大的51Cr釋放、所有濃度上的mAb和單獨的靶細(xì)胞以及PBMC和單獨的耙細(xì)胞。然后處理上清液，通過Y計數(shù)器計數(shù)釋放的51Cr。通過扣除PBMC對裂解的貢獻(xiàn)來測定抗體特異性ACC。如圖20(DaudiNHL細(xì)胞)和圖21(MEC-1B-CLL細(xì)胞)中所看到的，對于所有受試mAb，ADCC的活性隨mAb濃度的逐漸增加而增加。最優(yōu)化的mAb具有與對于對照mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)觀察到的ADCC活性相似的ADCC活性。還使用不依賴于CDC和ADCC的直接凋亡測定法評估凋亡活性。這樣，在交聯(lián)抗體(5ng/ml山羊抗人IgGFc)存在的情況下，將Ramos細(xì)胞(NHL)與2、0.4或0.08mg/ml的各最優(yōu)化的mAb或?qū)φ誱Ab271一起在37。C下溫育18小時。在18小時后收獲和洗滌細(xì)胞，然后將其與膜聯(lián)蛋白V-APC和碘化丙啶在25X:下一起溫育15分鐘。通過流式細(xì)胞計量術(shù)就膜聯(lián)蛋白V陽性/PI陰性細(xì)胞的存在分析細(xì)胞。如可在圖22中看到的，最優(yōu)化的mAb在誘導(dǎo)凋亡方面與mAb271(利妥昔單抗-序列抗體序列抗體)一樣有效。也使用全血測定法評估細(xì)胞殺傷活性。該方案與CDC或ADCC測定法相似，除了使用全血而非血清(CDC)或純化的PBMC(ADCC)以外。在該測定法中，靼細(xì)胞的裂解歸因于CDC、ADCC的累積活性和凋亡。該全血測定的結(jié)果示于圖23(DaudiNHL細(xì)胞)、圖24A(EHEBB-CLL細(xì)胞)以及24B(MEC-1B-CLL細(xì)胞)和圖25(MelK"正常"B細(xì)胞)。如可在這些圖中看到的，最優(yōu)化的mAb具有與mAb271(利妥昔單抗-序列抗體)相等的或更好的抗這些各自靶細(xì)胞的裂解作用。實施例5:施用最優(yōu)化的人源化鼠抗CD20單克隆抗體1589在Daudi細(xì)胞異種移植小鼠模型中延長存活DaudiNHL細(xì)胞是在SCID小鼠中全身性生長的人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系。Daudi細(xì)胞的生長在小鼠中導(dǎo)致麻痹(Ghetie等人(1990)IntJCancer45:481-485)。進(jìn)行研究以確定本發(fā)明的抗CD20抗體是否影響具有Daudi細(xì)胞異種移植的小鼠的存活。飼養(yǎng)SCID小鼠并且將它們維持在無病原體的條件下。將DaudiNHL細(xì)胞(8x106)靜脈內(nèi)注射入3組5只SCID小鼠(總共15只小鼠)的尾靜脈內(nèi)。在腫瘤注射后第7天和第9天，通過相同的途徑用PBS、50ug人IgGl或50MgmAb1589注射小鼠。每周觀察動物3次，在第一次觀察到后肢麻瘠的體征時殺死動物。如圖26中所示，單克隆抗體1589延長具有人Daudi細(xì)胞異種移植物的小鼠的存活。實施例6:序列和抗體設(shè)計的概述不同的最優(yōu)化的CDR、包含這些最優(yōu)化的CDR的可變重鏈和可變輕鏈的結(jié)構(gòu)域、這些元件的編碼序列和初始人源化抗CD20抗體的可變重鏈結(jié)構(gòu)域的序列標(biāo)志符概述于下面。下面的表5概述了抗CD20抗體的設(shè)計。序列才示志符1.H1569的CDR3-a.a.2.H1570的CDR3-a.a.3.H1571的CDR3-a.a.1314.H1670的CDR3-a.a.5.H1639的CDR2-a.a.6.H1640的CDR2-a.a.7.H1638的CDRl-a.a.8.L419的CDR3-a.a.9.L373的CDR2-a.a.10.L373--a,a.11.L419-陽a,a.12.H1569—a,a.13.H1570一a.a.14.H1571一a,a.15.H1638一a丄16.H1639一a.a.17.H1640—a,a.18.H1670—a.a.19.H1569一ntseq20.H1570一ntseq21.H1571一ntseq22.H1639一ntseq23.L373--ntseq24.H1569的CDR3-ntseq25.H1570的CDR3-ntseq26.H1571的CDR3-ntseq27.H1639的CDR2-ntseq28.L373的CDR2-ntseq29.H1286--a,a.30.H1286的CDR3-a,a，表5.抗體i殳計<table>tableseeoriginaldocumentpage133</column></row><table>本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員清楚本文中所示的本發(fā)明的許多修飾和其他實施方式具有上述描述和相關(guān)附圖中提供的教導(dǎo)的益處。因此，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限定于公開的特定實施方式，修飾或其他實施方式旨在包括在所附權(quán)利要求和本文中公開的實施方式的列表的范圍之內(nèi)。盡管本文使用了特殊術(shù)語，但它們只在一般性和描述的意義上使用并且不為限制目的。本說明書中提及的所有出版物和專利申請表示與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員的水平。本文所提及的所有出版物、專利申請案都以引用的方式并入，其引用程度就如同將每一個別出版物、專利或?qū)＠暾埌柑囟ㄇ覀€別地以全文引用的方式并入。權(quán)利要求1.特異性結(jié)合CD20的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含至少一個最優(yōu)化的互補決定區(qū)(CDR)區(qū)域，其中所述CDR區(qū)域選自SEQIDNO1-8。2.權(quán)利要求l的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含免疫球蛋白重鏈，所述重鏈包含具有CDR的可變結(jié)構(gòu)域，所述CDR含有選自SEQIDNO:l-7的氨基酸序列。3.權(quán)利要求l的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含免疫球蛋白輕鏈，所述輕鏈包含具有CDR的可變結(jié)構(gòu)域，所述CDR含有SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列。4.權(quán)利要求1-3中任一項的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白是IgGlK免疫球蛋白。5.權(quán)利要求4的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述免疫球蛋白的重鏈內(nèi)的人IgGl恒定區(qū)和所述免疫球蛋白的輕鏈內(nèi)的人K恒定區(qū)。6.權(quán)利要求5的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述重鏈的可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的和所述輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的完全或部分人框架區(qū)。7.權(quán)利要求5的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述重鏈的可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的和所述輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的鼠框架區(qū)。8.權(quán)利要求l的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白展示與利妥昔單抗相比增加的補體依賴細(xì)胞毒性(CDC)。9.權(quán)利要求l的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含含有SEQIDNO:IO或SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的免疫球蛋白輕鏈。10.權(quán)利要求1的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含含有選自SEQIDNO:12-18的氨基酸序列的免疫球蛋白重鏈。11.權(quán)利要求1的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含含有選自SEQIDNO:12-18中所示的序列的氨基酸序列的重鏈和含有SEQIDNO:IO或SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的輕鏈。12.權(quán)利要求ll的免疫球蛋白中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ13.權(quán)利要求ll的免疫球蛋白中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ14.權(quán)利要求11的免疫球蛋白中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ15.權(quán)利要求11的免疫球蛋白中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ16.權(quán)利要求ll的免疫球蛋白中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ17.權(quán)利要求ll的免疫球蛋白中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ18.權(quán)利要求11的免疫球蛋白:中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ19.權(quán)利要求11的免疫球蛋白:中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ20.權(quán)利要求11的免疫球蛋白:其中所述重鏈包含SEQIDNO:12IDNO:10中所示的序列。其中所述重鏈包含SEQIDNO:13IDNO:10中所示的序列。其中所述重鏈包含SEQIDNO:14IDNO:10中所示的序列。其中所述重鏈包含SEQIDNO:15IDNO:10中所示的序列。其中所述重鏈包含SEQIDNO:16IDNO:10中所示的序列。其中所述重鏈包含SEQIDNO:17IDNO:10中所示的序列。其中所述重鏈包含SEQIDNO:18IDNO:10中所示的序列。其中所述重鏈包含SEQIDNO:13IDNO:11中所示的序列。其中所述重鏈包含SEQIDNO:16IDNO:11中所示的序列。中所示的序列以及所述輕鏈包含SEQ21.特異性結(jié)合CD20的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含可變重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的互補決定區(qū)(CDR):a)包含SEQIDNO:7中所示的氨基酸序列的CDRl;b)包含具有與SEQID:7中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR1，其中所述CDRl在相應(yīng)于SEQIDNO:7的殘基7的位點上包含苯丙氨酸(Phe)殘基；c)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的CDR2;d)包含具有與SEQID:5或SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR2，其中所述CDR2在相應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的殘基8的位點上分別包含丙氨酸(Ala)或亮氨酸(Leu)殘基；e)包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列的CDR3;f)包含具有與SEQIDNO:1中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和ii)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；g)包含具有與SEQIDNO:2中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3,其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；h)包含具有與SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基12的位點上的天冬氨酸(Asp)殘基;和i)包含具有與SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基11的位點上的甘氨酸(Gly)殘基；和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基。22.權(quán)利要求21的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含含有可變結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白輕鏈，所述可變結(jié)構(gòu)域具有至少一個選自下列的CDR:a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDNO:8的殘基4的位點上包含谷氨酰胺(Gln)殘基；和c)包含SEQIDNO:9中所示的氨基酸序列的CDR2。23.權(quán)利要求22的免疫球蛋白，其中所述輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:9中所示的CDR2和SEQIDNO:8中所示的CDR3。24.特異性結(jié)合CD20的免疫球蛋白，所述免疫球蛋白包含免疫球蛋白輕鏈，其中所述免疫球蛋白輕鏈包含具有選自下列的互補決定區(qū)3(CDR3)的可變結(jié)構(gòu)域a)包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3;和b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDN0:8的殘基4的位點上包含谷氨酰胺(Gin)殘基。25.權(quán)利要求24的免疫球蛋白，其中所述輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域包含具有SEQIDNO:9中所示的氨基酸序列的互補決定區(qū)2(CDR2)。26.權(quán)利要求21-25中任一項的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白是IgGlK免疫球蛋白。27.權(quán)利要求26的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述免疫球蛋白的重鏈內(nèi)的人IgGl恒定區(qū)和所述免疫球蛋白的輕鏈內(nèi)的人K恒定區(qū)。28.權(quán)利要求27的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述重區(qū)。29.權(quán)利要求27的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述重鏈的可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的和所述輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的鼠框架區(qū)。30.特異性結(jié)合CD20的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含可變重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域選自a)包含具有與選自SEQIDNO:12-18的氨基酸序列至少90°/。序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域；b)包含具有與SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列至少85°/。序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和U)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；c)包含具有與SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iii)相應(yīng)于SEQIDN0:13的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；d)包含具有與SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；和ii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基110的位點上的天冬氨酸(Asp)殘基；e)包含具有與SEQIDNO:15中所示的氨基酸序列至少85°/。序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基31的位點上的苯丙氨酸(Phe)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；f)包含具有與SEQIDNO:16中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基57的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基;和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；g)包含具有與SEQIDNO:17中所示的氨基酸序列至少8W序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基57的位點上的亮氨酸(Leu)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和h)包含具有與SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基109的位點上的甘氨酸(Gly)殘基；和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基。31.權(quán)利要求30的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含可變輕鏈(VL)結(jié)構(gòu)域，其中所述VL結(jié)構(gòu)域選自a)包含SEQIDNO:IO或SEQIDNO:11中所示的序列的、結(jié)構(gòu)域；b)包含具有與SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域；c)包含具有與SEQIDNO:10中所示的序列至少85°/。序列同一性的氨基酸序列的W結(jié)構(gòu)域，其中所述Vl結(jié)枸域包含SEQIDNO:9中所示的互補決定區(qū)2(CDR2);和d)包含具有與SEQIDNO:11中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含至少一個i)SEQIDNO:9中所示的互補決定區(qū)2(CDR2);和U)相應(yīng)于SEQIDNO:11的殘基91的位點上的谷氨酰胺(Gin)殘基。32.包含可變重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域和可變輕鏈(Vl)結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含具有與選自SEQIDNO:12-18中所示的序列至少90%同一性的氨基酸序列的多肽序列，和其中所述免疫球蛋白特異性結(jié)合CD20。33.權(quán)利要求32的免疫球蛋白，其中所述Vt結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:IO或SEQIDNO:ll中所示的序列。34.包含可變重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域和可變輕鏈(VL)結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白，其中所述、結(jié)構(gòu)域包含具有與SEQIDNO:11中所示的序列至少90%同一性的氨基酸序列的多肽序列，和其中所述免疫球蛋白特異性結(jié)合CD20。35.包含可變重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域和可變輕鏈(Vl)結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含具有選自SEQIDNO:12-18中所示的氨基酸序列的多肽，和其中所述l結(jié)構(gòu)域包含具有SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的氨基酸序列的多肽。36.權(quán)利要求1-35和67中任一項的免疫球蛋白，其還包括與其融合的異源多肽。37.權(quán)利要求l-35和67中任一項的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白綴合至選自治療劑、前體藥物、肽、蛋白質(zhì)、酶、病毒、脂質(zhì)、生物應(yīng)答調(diào)節(jié)物、藥物試劑和PEG的試劑。38.包含權(quán)利要求1-37中任一項的免疫球蛋白和載體的組合物。39.包含編碼免疫球蛋白重鏈的可變重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域的核酸的分離的多核苷酸，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的互補決定區(qū)(CDR):a)包含SEQIDNO:7中所示的氨基酸序列的CDR1;b)包含具有與SEQIDNO:7中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR1,其中所述CDR1在相應(yīng)于SEQIDNO:7的殘基7的位點上包含苯丙氨酸(Phe)殘基；c)包含SEQIDNO:5或SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的CDR2;d)包含具有與SEQID:5或SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR2,其中所述CDR2在相應(yīng)于SEQIDNO:5或SEQIDN0:6的殘基8的位點上分別包含丙氨酸(Ala)或亮氨酸(Leu)殘基；e)包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列的CDR3;f)包含具有與SEQID:1中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3,其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和ii)相應(yīng)于SEQIDNO:1的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；g)包含具有與SEQID:2中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iii)相應(yīng)于SEQIDNO:2的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；h)包含具有與SEQID:3中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iii)相應(yīng)于SEQIDNO:3的殘基12的位點上的天冬氨酸(Asp)殘基；和i)包含具有與SEQID:4中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基5的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基9的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDN0:4的殘基11的位點上的甘氨酸(Gly)殘基；和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:4的殘基12的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和其中包含所述VH結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白特異性結(jié)合CD20.40.包含編碼免疫球蛋白輕鏈的可變輕鏈(結(jié)構(gòu)域的核酸的分離的多核苷酸，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含選自下列的互補決定區(qū)3(CDR3):a)包含SEQIDN0:8中所示的氨基酸序列的CDR3;和b)包含具有與SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的CDR3，其中所述CDR3在相應(yīng)于SEQIDN0:8的殘基4的位點上包含谷氨酰胺(Gin)殘基；其中包含所述VL結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白特異性結(jié)合CD20。41.權(quán)利要求40的分離的多核苷酸，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含具有SEQIDNO:9中所示的氨基酸序列的CDR2。42.包含編碼免疫球蛋白重鏈的可變重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域的核酸的分離的多核苷酸，其中所述VH結(jié)構(gòu)域選自a)包含具有與選自SEQIDNO:12-18的氨基酸序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域；b)包含具有與SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和ii)相應(yīng)于SEQIDNO:12的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；c)包含具有與SEQIDNO:13中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；和ii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iii)相應(yīng)于SEQIDNO:13的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；d)包含具有與SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；和ii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iii)相應(yīng)于SEQIDNO:14的殘基110的位點上的天冬氨酸(Asp)殘基；e)包含具有與SEQIDNO:15中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基31的位點上的苯丙氨酸(Phe)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基;和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:15的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；f)包含具有與SEQIDNO:16中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VH結(jié)構(gòu)域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDN0:16的殘基57的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:16的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；g)包含具有與SEQIDNO:17中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基57的位點上的亮氨酸(Leu)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；iii)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基;和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:17的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；和h)包含具有與SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的Vh結(jié)枸域，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含至少一個選自下列的殘基i)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基103的位點上的丙氨酸(Ala)殘基；ii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基107的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基;和iii)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基109的位點上的甘氨酸(Gly)殘基；和iv)相應(yīng)于SEQIDNO:18的殘基110的位點上的天冬酰胺(Asn)殘基；其中包含所述VH結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白特異性結(jié)合CD20。43.權(quán)利要求42的分離的多核苷酸，其中所述VH結(jié)構(gòu)域由包含選自SEQIDNO:19-22的序列的核酸編碼。44.包含編碼免疫球蛋白輕鏈的可變輕鏈(VL)結(jié)構(gòu)域的核酸的分離的多核普酸，其中所述VL結(jié)構(gòu)域選自a)包含SEQIDNO:IO或SEQIDNO:11中所示的序列的VL結(jié)構(gòu)域；b)包含具有與SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域；c)包含具有與SEQIDNO:10中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的W結(jié)構(gòu)域，其中所述、結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:9中所示的互補決定區(qū)2(CDR2);和d)包含具有與SEQIDNO:11中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的、結(jié)構(gòu)域，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含至少一個i)SEQIDNO:9中所示的互補決定區(qū)2(CDR2);和ii)相應(yīng)于SEQIDNO:11的殘基91的位點上的谷氨酰胺(Gin)殘基；其中包含所述VL結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白特異性結(jié)合CD20。45.包含權(quán)利要求39-44中任一項的多核苷酸的組合物。46.包含權(quán)利要求39-44中任一項的多核苷酸的栽體。47.權(quán)利要求46的載體，其中所述多核苷酸與啟動子有效連接。48.載體，其包含權(quán)利要求39、42和43中任一項的多核苷酸和含有編碼免疫球蛋白輕鏈的可變輕鏈(vl)結(jié)構(gòu)域的的核酸的多核苷酸。49.權(quán)利要求48的載體，其中所述^結(jié)構(gòu)域包含具有SEQIDN0:8中所示的氨基酸序列的互補決定區(qū)3(CDR3)。50.權(quán)利要求49的載體，其中所述Vt結(jié)構(gòu)域包含具有SEQIDN0:9中所示的氨基酸序列的互補決定區(qū)2(CDR2)。51.權(quán)利要求48-50中任一項的載體，其中將編碼所述vh結(jié)構(gòu)域的所述多核苦酸和編碼所述vl結(jié)構(gòu)域的所述多核苷酸按讀框融合，使它們從與之有效連接的單個啟動子共轉(zhuǎn)錄，并且共翻譯成單鏈抗體或其抗原-結(jié)合片段。52.權(quán)利要求48-50中任一項的載體，其中將編碼所述vh結(jié)構(gòu)域的所述多核苷酸和編碼所述Vl結(jié)構(gòu)域的所述多核苷酸從與之有效連接的單個啟動子共轉(zhuǎn)錄，但分別翻譯。53.權(quán)利要求52的載體，其還包括排列在編碼所述Vh結(jié)枸域的所述多核苷酸與編碼所述vl結(jié)構(gòu)域的所述多核苷酸之間的IRES序列。54.權(quán)利要求48-50中任一項的載體，其中編碼所述vh結(jié)構(gòu)域的所述多核苷酸和編碼所述、結(jié)構(gòu)域的所述多核苷酸分別轉(zhuǎn)錄，各自與單獨的啟動子有效連接。55.權(quán)利要求54的載體，其中所述單獨的啟動子是相同啟動子的拷貝。56.權(quán)利要求54的載體，其中所述單獨的啟動子是不相同的。57.包含權(quán)利要求46-56中任一項的載體的組合物。58.包含權(quán)利要求1的免疫球蛋白的組合物。59.包含權(quán)利要求39-44中任一項的多核苷酸的宿主細(xì)胞。60.包含權(quán)利要求46-56中任一項的載體的宿主細(xì)胞。61.產(chǎn)生特異性結(jié)合CD20的免疫球蛋白的方法，該方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求59或60的宿主細(xì)胞，和回收所述免疫球蛋白。62.通過權(quán)利要求61的方法產(chǎn)生的免疫球蛋白。63.權(quán)利要求62的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白是IgGlk免疫球蛋白。64.權(quán)利要求63的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述免疫球蛋白的重鏈內(nèi)的人IgGl恒定區(qū)和所述免疫球蛋白的輕鏈內(nèi)的人K恒定區(qū)。65.權(quán)利要求64的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述重鏈的VH結(jié)構(gòu)域內(nèi)的和所述輕鏈的VL結(jié)構(gòu)域內(nèi)的完全或部分人框架區(qū)。66.權(quán)利要求64的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含所述重鏈的VH結(jié)構(gòu)域內(nèi)的和所述輕鏈的VL結(jié)構(gòu)域內(nèi)的鼠框架區(qū)。67.特異性結(jié)合CD20的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含可變輕鏈(VL)結(jié)構(gòu)域，其中所述VL結(jié)構(gòu)域選自a)包含SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列的W結(jié)構(gòu)域；b)包含具有與SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所示的序列至少90%序列同一性的氨基酸序列的Vl結(jié)枸域；c)包含具有與SEQIDNO:10中所示的序列至少85%序列同一性的氨基酸序列的VL結(jié)構(gòu)域，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:9中所示的CDR2;和d)包含具有與SEQIDNO:11中所示的序列至少85°/。序列同一性的氨基酸序列的VL結(jié)構(gòu)域，其中所述W結(jié)構(gòu)域包含至少一個i)SEQIDNO:9中所示的CDR2;和ii)相應(yīng)于SEQIDNO:11的殘基91的位點上的谷氨酰胺(Gin)殘基。68.用于治療受試者的癌癥的方法，其中所述癌癥與所述受試者中表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)，該方法包括對所述受試者施用有效量的包含權(quán)利要求1-37和67中任一項的免疫球蛋白的組合物。69.權(quán)利要求68的方法，其中所述癌癥選自非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、高度B細(xì)胞淋巴瘤、中度B細(xì)胞淋巴瘤、低度B細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病、成敏細(xì)胞白血病和4可杰金氏病。70.用于抑制正常人B細(xì)胞的生長或分化的方法，其包括將所述B細(xì)胞與有效量的權(quán)利要求1-37和67中任一項的免疫球蛋白接觸。71.用于抑制B細(xì)胞鐠系的癌細(xì)胞的生長的方法，其包括將所述癌細(xì)胞與有效量的權(quán)利要求1-37和67中任一項的免疫球蛋白接觸。72.權(quán)利要求71的方法，其中癌細(xì)胞來自選自非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、高度B細(xì)胞淋巴瘤、中度B細(xì)胞淋巴瘤、低度B細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病、成髓細(xì)月包白血病和4可杰金氏病的癌癥。73.用于治療受試者的自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，其中所述疾病與所述受試者中表達(dá)CD20的細(xì)胞相關(guān)的，該方法包括對所述受試者施用有效量的權(quán)利要求1-37和67中任一項的免疫球蛋白。74.權(quán)利要求73的方法，其中所述自身免疫性疾病或炎性疾病選自全身性紅斑狼瘡(SLE)、盤狀狼瘡、狼瘡性腎炎、結(jié)節(jié)病、幼年型關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、萊特爾綜合征、強直性脊柱炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、器官或組織移植物的排斥、移植物抗宿主病、多發(fā)性硬化癥、高IgE綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、炎性腸病、克羅恩病、乳糜瀉(谷蛋白敏感性腸病)、自身免疫性肝炎、惡性貧血、自身免疫性溶血性貧血、銀屑病、硬皮病、重癥肌無力、自身免疫性血小板減少性紫癜、自身免疫性甲狀腺炎、Graves病、橋本甲狀腺炎、免疫復(fù)合物病、慢性疲勞免疫功能紊亂綜合征(CFIDS)、多肌炎和皮肌炎、冷球蛋白血癥、血栓溶解、心肌病、尋常性天皰瘡、肺間質(zhì)纖維化、結(jié)節(jié)病、I型和II型糖尿病、1、2、3和4型遲發(fā)型超敏反應(yīng)、過敏癥或變應(yīng)性紊亂、哮喘、丘-施二氏綜合征(變應(yīng)性肉芽腫病)、變應(yīng)性皮炎、過敏性和刺激性接觸性皮炎、癮滲、IgE-介導(dǎo)的過敏癥、動脈粥樣硬化、血管炎、特發(fā)性炎性肌病、溶血性疾病、阿爾茨海默氏病和慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)炎。75.包含權(quán)利要求l-37和67中任一項的免疫球蛋白的藥物組合物。全文摘要提供了用于治療與CD20相關(guān)的疾病的組合物和方法，所述疾病包括淋巴瘤、自身免疫性疾病和移植排斥。組合物包含能夠結(jié)合位于表達(dá)人CD20的細(xì)胞表面上的人CD20抗原的抗CD20抗體，其中所述抗體具有增加的補體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(CDC)，這可通過使抗體的可變區(qū)內(nèi)具有至少一個最優(yōu)化的改造的CDR來獲得。組合物還可包括單克隆抗體的抗原結(jié)合片段、變體和衍生物、產(chǎn)生這些抗體組合物的細(xì)胞系和編碼抗體的氨基酸序列的分離的核酸分子。本發(fā)明還包括在藥學(xué)上可接受的載體中的、包含本發(fā)明的抗CD20抗體或其抗原結(jié)合片段、變體、衍生物的藥物組合物和使用這些抗CD20抗體的方法。文檔編號C07K16/28GK101583626SQ200780042866公開日2009年11月18日申請日期2007年10月10日優(yōu)先權(quán)日2006年10月10日發(fā)明者E·S·史密斯,小T·L·費施爾申請人:瓦西尼斯公司