專利名稱：一種紅曲素、安卡紅曲黃素純品的液相色譜制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為色素純品的制備方法，特別涉及一種用于色素純品的液相色譜制備 技術(shù)，適用于紅曲色素中紅曲素、安卡紅曲黃素的液相色譜分離制備。
技術(shù)背景近年來，隨著人們對食品安全要求的提高及分析檢測、質(zhì)量控制對多種純 品需求的增加，各種單組分純品的制備技術(shù)研究也越來越廣泛。色譜技術(shù)可以 分離性質(zhì)差別很小的化合物，是從混合物中分離不同組分的重要方法。常規(guī)的 色譜技術(shù)，如薄層色譜、柱層析色譜等具有操作復(fù)雜、分離組分純度低、重復(fù) 性不好等缺陷，氣相色譜只能分離分析能夠氣化或在分析溫度下有足夠蒸汽壓 的物質(zhì)， 一般分析型液相色譜主要適用于混合物的分離分析，由于進樣量很小 而不能收集到較大量的單組分分離物。因此對于單組分純品的制備，以上常規(guī)的色譜分離技術(shù)均有一定的限制。 因而液相色譜作為一種制備分離技術(shù)(制備型液相色譜)的研究應(yīng)用日益受到 重視。所謂制備型液相色譜技術(shù)是分析型液相色譜的放大級，即通過放大進樣 器、色譜柱等設(shè)備條件，在保證混合物分離的基礎(chǔ)上，提高樣品量，收集分離 所得組分。作為一種色譜分離技術(shù)，制備型液相色譜技術(shù)具有快速、高效、條 件溫和、操作簡單、產(chǎn)品純度高、批處理量較大等優(yōu)點。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于應(yīng)用制備型液相色譜對紅曲色素進行分離純化，制備生 產(chǎn)紅曲素、安卡紅曲黃素純品，可用作分析檢測的標準品。該分離制備技術(shù)具有工藝簡單、操作方便、分離速度快，同時制備兩種色素純品、產(chǎn)品純度高等 優(yōu)點。其方法在于稱取紅曲米粉置索氏提取器中，加入正己烷8(TC回流提取， 至提取液無色，收集提取液濾紙過濾，減壓濃縮成膏狀，得到紅曲色素粗提物。以甲醇復(fù)溶粗提物，經(jīng)0.45pm濾膜過濾，得樣品溶液。取樣品溶液手動進樣分 離制備紅曲素、安卡紅曲黃素純品；所用制備型液相色譜條件為C18色譜柱， 柱溫為室溫，檢測波長233nm或394nm，流動相甲醇水(8: 2)，進樣量lmL， 流速5mL/min，收集保留時間為37.733min (紅曲素)、68.100min (安卡紅曲黃 素)的目標組分，將其在3(TC—5(TC的真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中減壓濃縮，氮氣吹干， 最后得到黃色的紅曲素、安卡紅曲黃素純品。本發(fā)明技術(shù)適用于從不同色價的 紅曲米粉、紅曲色素粉等含有紅曲素、安卡紅曲黃素的紅曲色素制品中分離制 備紅曲素、安卡紅曲黃素純品。本項發(fā)明確定了制備液相的最佳分離條件，進樣量lmL，流速為5mL/min 時分離度較好，可以達到所需兩組分的分離制備，產(chǎn)品純度分別為96.761%、 99.234%，出峰時間分別為37.733min、 68.100min， 80分鐘內(nèi)即可制備兩種純品。本項分離制備技術(shù)同時制備紅曲素、安卡紅曲黃素，條件溫和、工藝簡單、 操作方便、產(chǎn)品純度高、制備量較大。其原理為紅曲素、安卡紅曲黃素極性 較弱，采用反相色譜法(即流動相的極性大于固定相的極性)進行分離，由于 樣品液中不同組分極性不同，在色譜柱和流動相中的吸附分配特性不同，采用 非極性鍵合固定相(硅膠《181137，簡稱C18)色譜柱，以強極性的甲醇、水按8: 2的比例混合作為流動相洗脫，極性大的組分先流出，極性小的后流出，從而得 到分離，紅曲素、安卡紅曲黃素由于結(jié)構(gòu)上的差異在色譜柱上顯示出不同的保 留時間，根據(jù)二者對紫外光的特征吸收性能，通過檢測器檢測兩個組分的不同流出時間，在不同組分流出時間進行接收即得到兩組分。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本技術(shù)具有以下優(yōu)點(1) 工藝和操作流程簡單，操作方便，可與自動進樣器、自動收集器等配 套，實現(xiàn)自動連續(xù)生產(chǎn)，機械化程度高。(2) 流動相采用甲醇水為8: 2的簡單配比，等度恒速洗脫，條件簡單， 且流動相可回收循環(huán)利用。(3) 條件溫和，稍微采取避光措施就不會造成光敏性紅曲的紅曲素、安卡 紅曲黃素的破壞損失。(4) 產(chǎn)品純度高，制備量較大，且可根據(jù)不同需要適當調(diào)整條件制備不同 純度的產(chǎn)品。


圖1為紅曲素紫外可見光譜圖。圖2為安卡紅曲黃素組分紫外可見光譜圖。圖3為安卡紅曲黃素的一級質(zhì)譜圖。圖4為紅曲素的一級質(zhì)譜圖。圖5為安卡紅曲黃素二級質(zhì)譜圖。圖6為紅曲素的二級質(zhì)譜圖。附儀器型號液相色譜Agilent 1100 germany，色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18， 5um， 4.6xl50mm， madeinUSA，質(zhì)譜API 3000 toronto canada。
具體實施方式
實施例——使用色價800的紅曲米粉制備紅曲素、安卡紅曲黃素純品(1)稱取紅曲米粉10g置索氏提取器，加入正己垸80。C回流提取，至提取液無色，收集提取液濾紙過濾，減壓濃縮成膏狀，得到紅曲色素粗提物。(2) 以甲醇復(fù)溶粗提物，至50ml容量瓶定容，經(jīng)0.45pm濾膜過濾，得樣 品溶液。(3) 打開制備液相儀，設(shè)置色譜條件(C18色譜柱，柱溫為室溫，檢測波 長233nm)，配制甲醇水(8: 2)流動相，超聲脫氣，沖洗色譜柱，穩(wěn)定基線， 取樣品溶液手動進樣開始制備，進樣量lmL，流速5mL/min，收集保留時間為 37.733min (紅曲素)、68.100min (安卡紅曲黃素)的目標組分。(4) 將收集的組分在真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中減壓濃縮(4(TC)，氮氣吹干，得到黃 色的紅曲素、安卡紅曲黃素純品。紅曲素、安卡紅曲黃素是指紅曲菌發(fā)酵過程屮產(chǎn)生的兩種黃色調(diào)單一色素， 制備得的兩種色素的甲醇溶液在200-600nm范圍內(nèi)進行紫外、可見光掃描，其 具有圖1、 2所示的特征吸收。在甲醇水(80: 20)的等度洗脫液相色譜條件下，對制備的純品做正離子 質(zhì)譜，結(jié)果如圖3、 4所示。在以下質(zhì)譜條件下NEB: 8.00， CUR: 12.00， IS: 4000.00， TEM: 300.00， AD: 6.00， DP: 50.00 (安卡紅曲黃素)，20.00 (紅曲素)，F(xiàn)P: 400.00， EP: 10.00， CE: 35.00， CXP: 14.00，分別有如圖5、 6所示二級質(zhì)譜結(jié)果。
權(quán)利要求
1. 一種紅曲素、安卡紅曲黃素純品的液相色譜制備方法，其特征在于稱取紅曲米粉置索氏提取器，加入正己烷80℃回流提取，至提取液無色，收集提取液濾紙過濾，減壓濃縮成膏狀，得到紅曲色素粗提物；以甲醇復(fù)溶粗提物，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，得樣品溶液；取樣品溶液手動進樣開始制備，液相色譜條件為C18色譜柱，柱溫為室溫，檢測波長233nm或394nm，流動相甲醇∶水8∶2，進樣量1mL，流速5ml/min，收集保留時間為37.733min紅曲素、68.100min安卡紅曲黃素的目標組分，將其在30℃-50℃的真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中減壓濃縮，氮氣吹干，最后得到黃色的紅曲素、安卡紅曲黃素純品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述一種紅曲素、安卡紅曲黃素純品的液相色譜制備方 法，其特征在于采用進樣量lml，流速為5ml/min的條件，在80min內(nèi)可完成 兩種色素的制備，產(chǎn)品純度分別達到96.761%、 99.234%。
全文摘要
本發(fā)明紅曲素、安卡紅曲黃素純品的液相色譜制備方法屬純品制備生產(chǎn)方法，它采用制備型液相色譜儀，C18色譜柱，柱溫為室溫，檢測波長233nm或394nm，流動相甲醇∶水(8∶2)，進樣量1mL，流速5ml/min，收集保留時間為37.733min(紅曲素)、68.100min(安卡紅曲黃素)的目標組分，同時與自動進樣器、自動收集器等技術(shù)配套，可實現(xiàn)連續(xù)生產(chǎn)。該技術(shù)可應(yīng)用于不同色價的紅曲米粉、紅曲色素粉、膏狀紅曲色素等含有紅曲素、安卡紅曲黃素的紅曲色素制品。該制備工藝簡單、操作方便、快速高效、自動化程度高，可同時制備兩種色素純品，產(chǎn)品純度高，制備量較大。
文檔編號C07D493/04GK101255168SQ200810103599
公開日2008年9月3日 申請日期2008年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月9日
發(fā)明者莉 崔, 張德權(quán), 李慶鵬, 李淑榮, 胡曉丹 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所