專利名稱：具有脲結(jié)構(gòu)的新型吡啶羧酸(2-氨基苯基)酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由對患者給與有效量的本發(fā)明化合物構(gòu)成的組蛋白去乙酰化酶抑制方法，以及由對患者給與有效量的本發(fā)明化合物構(gòu)成的組蛋白去乙?；敢种苿┯行У募膊〉念A(yù)防或治療方法。
本發(fā)明化合物的給藥量可以根據(jù)癥狀、年齡、劑型等適當(dāng)?shù)剡x擇進行使用。例如，口服劑通常每1日0.01～1000mg、優(yōu)選為1～100mg，1次或分成數(shù)次給與。另外，滴眼劑通常1次或分成數(shù)次給與濃度為0.0001％～10％(w/v)、優(yōu)選為0.01％～5％(w/v)的制劑。
以下，給出本發(fā)明化合物的制造例、制劑例及藥理試驗的結(jié)果。需要說明的是，這些示例用于更好地理解本發(fā)明，并不限定本發(fā)明的范圍。
[制造例] 參考例1 2-氨基苯基氨基甲酸叔丁基酯(參考化合物1-1) 在鄰苯二胺(22g、200mmol)和三乙胺(30mL、210mmol)的THF(150mL)溶液中滴入二碳酸二叔丁酯(44g、200mmol)的THF(50mL)溶液，在室溫下攪拌15小時。濃縮反應(yīng)液，將所得的固體用乙酸乙酯濾取，在減壓下干燥固體，得到21g為白色固體的標(biāo)題參考化合物。另外，濃縮濾液，用乙酸乙酯濾取所得的固體，在減壓下干燥，由此得到11g為白色固體的標(biāo)題參考化合物(收率76％)。
[表1]
參考例2 N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-甲氧基羰基吡啶-2-甲酰胺(參考化合物2-1) 在2-氨基苯基氨基甲酸叔丁基酯(參考化合物1-1、10g、50mmol)、5-甲氧基羰基吡啶-2-甲酸(10g、55mmol)及N-甲基嗎啉(11mL、100mmol)的DMF(100mL)溶液中，加入HATU(21g、55mmol)，在室溫下攪拌20小時。加入水(300mL)，用乙酸乙酯(300mL)萃取3次。用飽和食鹽水(200mL)洗滌有機層后，用無水硫酸鎂干燥。在減壓下蒸餾除去溶劑，濾取析出的固體，由此得到15g為淡褐色固體的標(biāo)題參考化合物(收率79％)。
[表2]
參考例3 N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-羥基甲基吡啶-2-甲酰胺(參考化合物3-1) 在冰冷下在N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-甲氧基羰基吡啶-2-甲酰胺(參考化合物2-1、38g、100mmol)的THF(400mL)溶液中加入硼氫化鋰(2.1g、100mmol)，攪拌3小時。在冰冷下加入水(200mL)、1.0M鹽酸(300mL)，用乙酸乙酯(300mL)萃取，用水(500mL)、飽和食鹽水(400mL)洗滌有機層。用無水硫酸鎂干燥后，在減壓下蒸餾除去溶劑。殘渣中加入乙酸乙酯(20mL)、己烷(30mL)，濾取析出的固體，由此得到18g為白色固體的標(biāo)題參考化合物(收率53％)。
[表3]
參考例4 N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-甲磺酰基氧基甲基吡啶-2-甲酰胺(參考化合物4-1) 在冰冷下，在N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-羥基甲基吡啶-2-甲酰胺(參考化合物3-1、16g、45mmol)和三乙胺(16mL、110mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中加入甲磺酰氯(4.2mL、54mmol)，攪拌1小時。加入水(400mL)，用乙酸乙酯(500mL)萃取5次。用水(500mL)洗滌有機層，用無水硫酸鎂干燥后，在減壓下蒸餾除去溶劑。殘渣中加入己烷(80mL)、乙酸乙酯(20mL)，濾取析出的固體，由此得到18g為白色固體的標(biāo)題參考化合物(收率94％)。
[表4]
參考例5 N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-(3-二甲基氨基丙基氨基甲基)吡啶-2-甲酰胺(參考化合物5-1) 在N，N-二甲基-1，3-丙二胺(3.0mL、24mmol)和碳酸鉀(3.3g、24mmol)的DMF(40mL)懸浮液中加入N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-甲磺?；趸谆拎?2-甲酰胺(參考化合物4-1、4.9g、12.0mmol)，在室溫下攪拌6小時。加入飽和碳酸氫鈉水(100mL)，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次。用水(100mL)洗滌有機層3次，用無水硫酸鎂干燥后，在減壓下蒸餾除去溶劑。殘渣用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇)精制，由此得到1.9g為黃色無定形的標(biāo)題參考化合物(收率38％)。
[表5]
以下使用選自參考化合物4-1及市售化合物的化合物，按照參考化合物5-1的制造方法，得到參考化合物5-2～5-19。另外，使用選自參考化合物11-1及市售化合物的化合物，按照參考化合物4-1及5-1的制造方法，得到參考化合物5-20。
[表6-1]
[表6-2]
[表6-3]
[表6-4]
[表6-5]
[表6-6]
參考例6 N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-苯乙基脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺(參考化合物6-1) 在N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-(3-二甲基氨基丙基氨基甲基)吡啶-2-甲酰胺(參考化合物5-1、27mg、0.060mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液中加入異氰酸苯乙基酯(15μL、0.11mmol)，在室溫下攪拌2小時。濃縮反應(yīng)液，用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇)精制殘渣，由此得到32mg無色無定形的標(biāo)題參考化合物(收率88％)。
[表7]
以下，使用選自參考化合物5-1～5-20、市售化合物及已知化合物中的化合物，按照參考化合物6-1的制造方法，得到參考化合物6-2～6-141。
[表8-1]
[表8-2]
[表8-3]
[表8-4]
[表8-5]
[表8-6]
[表8-7]
[表8-8]
[表8-9]
[表8-10]
[表8-11]
[表8-12]
[表8-13]
[表8-14]
[表8-15]
[表8-16]
[表8-17]
[表8-18]
[表8-19]
[表8-20]
[表8-21]
[表8-22]
[表8-23]
[表8-24]
[表8-25]
[表8-26]
[表8-27]
[表8-28]
[表8-29]
[表8-30]
[表8-31]
[表8-32]
[表8-33]
[表8-34]
[表8-35]
[表8-36]
[表8-37]
[表8-38]
[表8-39]
[表8-40]
參考例7 5-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基)-1-(3-二甲基氨基丙基)脲基甲基]-N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)吡啶-2-甲酰胺(參考化合物7-1) 在冰冷下向N，N’-羰基二咪唑(98mg、0.60mmol)的THF(3.0mL)溶液中加入2-氨基-1，3-苯并噻唑(100mg、0.60mmol)，攪拌2小時。進一步加入N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-(3-二甲基氨基丙基氨基甲基)吡啶-2-甲酰胺(參考化合物5-1、90mg、0.20mmol)，在60℃下攪拌3小時。加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，用水(30mL)、飽和食鹽水(30mL)洗滌有機層。用無水硫酸鎂干燥后，在減壓下蒸餾除去溶劑，由此得到220mg白色無定形的含有標(biāo)題參考化合物的混合物。
[表9]
以下，使用選自參考化合物5-1～5-20及市售化合物中的化合物，按照參考化合物7-1的制造方法，得到參考化合物7-2～7-49。
[表10-1]
[表10-2]
[表10-3]
[表10-4]
[表10-5]
[表10-6]
[表10-7]
[表10-8]
[表10-9]
[表10-10]
[表10-11]
[表10-12]
[表10-13]
[表10-14]
參考例8 6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯N-氧化物(參考化合物8-1) 在6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯(3.0g、20mmol)中加入30％過氧化氫水溶液(5.7mL、50mmol)和鎢酸鈉2水合物(270mg、0.80mmol)，在60℃下攪拌70分鐘、在80℃下攪拌4.5小時。冰冷卻，加入甲醇(10ml)和氧化錳(0.51g、6.0mmol)，恢復(fù)至室溫，攪拌16小時。用硅藻土濾去不溶物，濃縮濾液，由此得到3.2g為淺茶色固體的標(biāo)題參考化合物(收率98％)。
[表11]
參考例9 6-乙酰氧基甲基吡啶-3-甲酸甲酯(參考化合物9-1) 在6-甲基吡啶-3-甲酸甲酯N-氧化物(參考化合物8-1、2.1g、13mmol)的乙酸(14mL)溶液中加入N，N-二異丙基乙基胺(2.2mL、13mmol)和乙酸酐(3.5mL、38mmol)，在120℃下攪拌135分鐘。放冷后，加入飽和碳酸氫鈉水(100mL)，進一步加入碳酸氫鈉直至不起泡。用乙酸乙酯(100mL、50mL)萃取，用無水硫酸鎂干燥有機層，在減壓下蒸餾除去溶劑。用硅膠柱色譜法(己烷-乙酸乙酯)精制殘渣，使用己烷和乙酸乙酯濾取所得的固體，由此得到1.2g為淺黃色固體的標(biāo)題參考化合物(收率48％)。
[表12]
參考例10 6-羥基甲基吡啶-3-甲酸(參考化合物10-1) 在冰冷下，在6-乙酰氧基甲基吡啶-3-甲酸甲酯(參考化合物9-1、0.60g、2.9mmol)的甲醇(6.0mL)溶液中加入2N氫氧化鈉水溶液(3.0mL)，在冰冷下攪拌40分鐘，在室溫下攪拌4小時。在冰冷下加入2N鹽酸(3.1mL)，在減壓下蒸餾除去溶劑，由此得到為橙色固體的標(biāo)題參考化合物。
[表13]
參考例11 N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-6-羥基甲基吡啶-3-甲酰胺(參考化合物11-1) 將參考例10中得到的6-羥基甲基吡啶-3-甲酸(參考化合物10-1)懸浮于DMF(10mL)中，加入2-氨基苯基氨基甲酸叔丁基酯(參考化合物1-1、0.60g、2.9mmol)，N，N-二異丙基乙基胺(1.5mL、8.6mmol)，HATU(1.1g、2.9mmol)，攪拌2小時。加入水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL、50ml)萃取，用飽和食鹽水(100mL)洗滌有機層2次。用無水硫酸鎂干燥后，在減壓下蒸餾除去溶劑。用硅膠柱色譜法(己烷-乙酸乙酯)精制殘渣，由此得到0.66g為褐色油狀物的標(biāo)題參考化合物(收率67％(2個步驟))。
[表14]
實施例1 N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-苯乙基脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺(化合物1-1) 在N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-苯乙基脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺(參考化合物6-1、31mg、0.060mmol)的甲醇(2.0mL)溶液中加入4.0M氯化氫-乙酸乙酯(1.0mL)，在室溫下攪拌4小時。加入飽和碳酸氫鈉水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取3次。用無水硫酸鎂干燥有機層后，在減壓下蒸餾除去溶劑，用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇)精制殘渣，由此得到24mg黃色無定形的標(biāo)題化合物(收率84％)。
[表15]
以下，使用選自參考化合物6-2～6-141、參考化合物7-1～7-49中的化合物，按照化合物1-1的制造方法，得到化合物1-2～1-190。
[表16-1]
[表16-2]
[表16-3]
[表16-4]
[表16-5]
[表16-6]
[表16-7]
[表16-8]
[表16-9]
[表16-10]
[表16-11]
[表16-12]
[表16-13]
[表16-14]
[表16-15]
[表16-16]
[表16-17]
[表16-18]
[表16-19]
[表16-20]
[表16-21]
[表16-22]
[表16-23]
[表16-24]
[表16-25]
[表16-26]
[表16-27]
[表16-28]
[表16-29]
[表16-30]
[表16-31]
[表16-32]
[表16-33]
[表16-34]
[表16-35]
[表16-36]
[表16-37]
[表16-38]
[表16-39]
[表16-40]
表[16-41]
[表16-42]
[表16-43]
[表16-44]
[表16-45]
[表16-46]
[表16-47]
[表16-48]
[表16-49]
[表16-50]
[表16-51]
[表16-52]
[表16-53]
[表16-54]
實施例2 N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-二甲基氨基苯基)-1-[3-(嗎啉-4-基)丙基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺(化合物2-1) 在N-(2-叔丁氧基羰基氨基苯基)-5-[3-(嗎啉-4-基)丙基氨基甲基)]吡啶-2-甲酰胺(參考化合物5-10、25mg、0.053mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液中加入4-二甲基氨基苯基異氰酸酯(23mg、0.14mmol)，在室溫下攪拌2小時。用NH基修飾硅膠柱色譜法(己烷-乙酸乙酯)精制反應(yīng)液，由此得到無色的化合物。將所得的化合物溶解于甲醇(0.5mL)中，加入4.0M氯化氫-乙酸乙酯(1.0mL)溶液，在室溫下攪拌4小時。加入飽和碳酸氫鈉水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取。用無水硫酸鎂干燥有機層，在減壓下蒸餾除去溶劑，由此得到27mg無色無定形的標(biāo)題化合物(77％) [表17]
以下使用選自參考化合物5-1、5-2、5-6、5-7、5-9及5-10中的化合物，按照化合物2-1的制造方法，得到化合物2-2～2-15。
[表18-1]
[表18-2]
[表18-3]
[表18-4]
[表18-5]
實施例3 N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-羥基苯基)-1-[5-(嗎啉-4-基)戊基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺(化合物3-1) 在氮氣氛下，在N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-芐基氧基苯基)-1-[5-(嗎啉-4-基)戊基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺(化合物1-182，45mg、0.072mmol)的乙酸乙酯(2.0ml)和甲醇(3.0ml)的混合溶液中加入10％鈀-碳(30mg)后，在氫氣氛下，于室溫下攪拌2小時。用硅藻土濾去不溶物，濃縮濾液。用硅膠柱色譜法(氯仿-甲醇)精制殘渣，得到32mg為黃色油狀物質(zhì)的標(biāo)題化合物(收率84％)。
[表19]
[制劑例] 以下給出本發(fā)明化合物的代表制劑例。
1)片劑(150mg中) 本發(fā)明化合物1mg 乳糖100mg 玉米淀粉40mg 羧甲基纖維素鈣 4.5mg 羥丙基纖維素4mg 硬脂酸鎂0.5mg 使用3mg包衣劑(例如，羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇、有機硅樹脂等常用的包衣劑)，對上述處方的片劑進行包衣，可以得到目標(biāo)片劑。另外，通過適當(dāng)改變本發(fā)明化合物及添加物的種類及/或添加物的量，也可以得到所期望的片劑。
2)膠囊劑(150mg中) 本發(fā)明化合物5mg 乳糖135mg 羧甲基纖維素鈣 4.5mg 羥丙基纖維素4mg 硬脂酸鎂1.5mg 通過適當(dāng)改變本發(fā)明化合物及添加劑的種類及/或添加劑的量，可以得到所期望的膠囊劑。
3)滴眼劑(100ml中) 本發(fā)明化合物 100mg 氯化鈉900mg 聚山梨酸酯80 500mg 氫氧化鈉 適量 鹽酸 適量 滅菌精制水適量 通過適當(dāng)改變本發(fā)明化合物及添加物的種類及/或添加物的量，可以得到所期望的滴眼劑。
[藥理試驗] 1.HDAC抑制活性評價試驗 使用HDAC Fluorimetric Assay/Drug Discovery Kit(BIOMOL公司制)，按照試劑盒的操作說明進行本發(fā)明化合物的HDAC抑制活性的評價。試劑盒中包含緩沖液、HeLa細(xì)胞核提取液(含有HDAC)、底物(substrate)、顯象劑(developer)及曲古抑菌素A(HDAC Inhibitor)。
(受試化合物溶液的配制) 將受試化合物溶解于二甲基亞砜(以下稱為“DMSO”)中，配制2mg/mL溶液，將其用含有5％DMSO的緩沖液稀釋，配制150μM的受試化合物溶液。
(試驗方法及測定方法) 1)在384孔培養(yǎng)板中每1孔平均添加2μL受試化合物溶液。
2)每1孔平均添加3μL用緩沖液稀釋了30倍的HeLa細(xì)胞核提取液，在37℃下培養(yǎng)2小時。
3)每1孔平均添加5μL用緩沖液稀釋了500倍的底物，在37℃下培養(yǎng)10分鐘(受試化合物濃度30μM)。
4)每1孔平均添加10μL用緩沖液稀釋了20倍的顯影劑(含有2μM曲古抑菌素A)，在室溫下培養(yǎng)15分鐘。
5)使用多標(biāo)計數(shù)儀(multilabel counter)ARVO(Wallac公司制)，測定各孔的熒光強度(激發(fā)波長360nm、熒光波長460nm)。
6)使用含有5％DMSO的緩沖液代替受試化合物溶液，除此之外進行與上述1～5)同樣的操作，將其結(jié)果作為對照。
7)使用含有5％DMSO的緩沖液代替受試化合物溶液，另外使用緩沖液代替HeLa細(xì)胞核提取液，除此之外進行與上述1～5)同樣的操作，將其結(jié)果作為空白。
(酶抑制率的計算式) 酶抑制率(％)由下式算出。
酶抑制率(％)＝100×{1-(受試化合物溶液的熒光強度-空白的熒光強度)/(對照的熒光強度-空白的熒光強度)} (試驗結(jié)果) 表I給出作為受試化合物使用化合物1-2、化合物1-3、化合物1-4、化合物1-6、化合物1-8、化合物1-10、化合物1-13、化合物1-14、化合物1-20、化合物1-21、化合物1-24、化合物1-25、化合物1-27、化合物1-30、化合物1-31、化合物1-38、化合物1-40、化合物1-41、化合物1-42、化合物1-44、化合物1-46、化合物1-51、化合物1-53、化合物1-55、化合物1-56、化合物1-58、化合物1-63、化合物1-68、化合物1-79、化合物1-90、化合物1-96、化合物1-115、化合物1-116、化合物1-141、化合物2-1、化合物2-3及化合物2-10時的酶抑制率。
[表1]
需要說明的是，100％以上的抑制率記為100％。
2.對小梁細(xì)胞的形態(tài)變化作用的評價試驗 作為評價細(xì)胞的形態(tài)變化的方法之一，臨床研究雜志，103，1141-1150(1999)中報道了以Cell Shape Index(以下，稱為“CSI”)為指標(biāo)的評價體系。因此，根據(jù)上述文獻記載的方法，評價本發(fā)明化合物對小梁細(xì)胞的形態(tài)變化作用。
(使用細(xì)胞) 使用《眼科研究與視力學(xué)》(Investigative Ophthalmology&VisualScience)，43，151-161(2002)中報道的、人小梁細(xì)胞株(以下，稱為“TM-1細(xì)胞”)。
(試劑的配制) 培養(yǎng)液1向Dulbecco’s Modified Eagle Medium(以下，稱為“D-MEM”)中加入胎牛血清(10％)、L-谷氨酰胺(2mM)、兩性霉素B(2.5μg/mL)及慶大霉素(25μg/mL)，作為培養(yǎng)液1。
培養(yǎng)液2向D-MEM中加入胎牛血清(3％)、L-谷氨酰胺(2mM)、兩性霉素B(2.5μg/mL)及慶大霉素(25μg/mL)，作為培養(yǎng)液2。
細(xì)胞染色液將Calcein-AM溶液(細(xì)胞質(zhì)染色試劑、DOJINDO公司制)及Hoechst 33342溶液(核染色試劑、DOJINDO公司制)用添加有L-谷氨酰胺(2mM)、兩性霉素B(2.5μg/mL)及慶大霉素(25μg/mL)的D-MEM進行稀釋，配制Calcein-AM(16μM)、Hoechst 33342(40μM)的混合液。
(細(xì)胞的配制) 在下述的藥物處理之前24小時，將在37℃、8％二氧化碳?xì)夥障聜鞔囵B(yǎng)的TM-1細(xì)胞用胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05％胰蛋白酶、0.53mM乙二胺四乙酸四鈉)進行處理，播種在96孔培養(yǎng)板上。細(xì)胞的傳代培養(yǎng)中使用培養(yǎng)液1。培養(yǎng)板播種后的細(xì)胞培養(yǎng)中使用培養(yǎng)液2。
(受試化合物溶液的配制) 將受試化合物溶解于DMSO，配制5mM溶液，將所得溶液用培養(yǎng)液2稀釋，配制200μM的受試化合物溶液。
(陽性對照化合物溶液的配制) 《眼科研究與視力學(xué)》，42，137-144(2001)中指出作為Rho激酶抑制劑的Y-27632誘導(dǎo)小梁細(xì)胞的形態(tài)變化。因此，以Y-27632(根據(jù)國際公開第90/05723號說明書中記載的方法進行制造)為陽性對照，與受試化合物相同地將Y-27632溶解于二甲基亞砜，配制5mM溶液，將所得溶液用培養(yǎng)液2稀釋，配制200μM的溶液的陽性對照化合物溶液。
(試驗方法及測定方法) 1)向96孔培養(yǎng)板中每1孔平均加入95μL(1.5×104個細(xì)胞)調(diào)制為1.6×104個細(xì)胞/mL的TM-1細(xì)胞。
2)在8％二氧化碳?xì)夥障?，?7℃下培養(yǎng)24小時。
3)每1孔平均加入5μL受試化合物溶液或陽性對照化合物溶液(受試化合物或陽性對照化合物的最終濃度10μM)。另外，作為對照，每1孔平均加入5μL含有DMSO(4％)的培養(yǎng)液2。
4)在8％二氧化碳?xì)夥障?，?7℃下培養(yǎng)24小時。
5)每1孔平均加入10μL細(xì)胞染色液。
6)在8％二氧化碳?xì)夥障?，?7℃下培育1小時，將細(xì)胞染色。
7)每1孔平均加入10μL的37％甲醛溶液。
8)在室溫下培育1小時，固定細(xì)胞。
9)用磷酸緩沖生理食鹽液進行洗滌。
10)使用Array Scan Vti HCS reader(Cellomics公司制)，用20倍的物鏡，每1個受試化合物添加組從80個視野(10個視野×8孔)中獲取染色細(xì)胞的圖像。
11)計算各細(xì)胞的CSI，分別求出各受試化合物添加組的平均值。
(CSI的計算式) CSI根據(jù)下式計算。
CSI＝4π×細(xì)胞的面積/(細(xì)胞周長)2 (試驗結(jié)果) 表II給出作為受試化合物使用化合物1-2、化合物1-3、化合物1-4、化合物1-6、化合物1-8、化合物1-10、化合物1-13、化合物1-14、化合物1-20、化合物1-21、化合物1-24、化合物1-25、化合物1-27、化合物1-30、化合物1-31、化合物1-38、化合物1-40、化合物1-41、化合物1-42、化合物1-44、化合物1-46、化合物1-51、化合物1-53、化合物1-55、化合物1-56、化合物1-58、化合物1-63、化合物1-68、化合物1-79、化合物1-90、化合物1-96、化合物1-115、化合物1-116、化合物1-141、化合物2-1、化合物2-3、化合物2-10及Y-27632時的CSI。
[表II] 3.降眼壓作用的評價試驗 為了評價本化合物的降低眼壓的作用，使用雄性日本白色家兔通過前房內(nèi)給與本發(fā)明化合物進行眼壓降低作用的評價試驗。
(受試化合物給與液的配制) 使受試化合物溶解于含有0.5％DMSO的生理食鹽液中，配制1mM的受試化合物給與液。
(試驗方法及測定方法) 向雄性日本白色家兔的雙眼中各滴入1滴0.4％鹽酸羥丁普魯卡因(oxybuprocaine hydrochloride)滴眼液，局部麻醉后，用壓平眼壓計測定眼壓。然后，用配備30G針的注射器，通過前房內(nèi)給藥方式向一只眼中給與受試化合物給與液(20μL)。作為對照，通過前房內(nèi)給藥方式給與20μL受試化合物的溶劑(含有0.5％DMSO的生理食鹽液)。給與受試化合物或溶劑后，經(jīng)一定時間后，向給藥眼中各滴入1滴0.4％鹽酸羥丁普魯卡因滴眼液，局部麻醉后，使用壓平眼壓計，測定眼壓。
(眼壓降低率的計算式) 通過計算眼壓降低率，評價受試化合物的眼壓降低作用。眼壓降低率(％)利用下式計算。
眼壓降低率(％)＝100×(對照組的眼壓的平均值-各受試化合物給與組的眼壓的平均值)/對照組的眼壓的平均值 (試驗結(jié)果及考察) 表III給出作為受試化合物使用化合物1-96時的眼壓降低率。需要說明的是，以下的眼壓降低率是給與各受試化合物9小時后的數(shù)值(每一組6例)。
[表III] 如表I所示，本發(fā)明化合物具有優(yōu)異的HDAC抑制活性，期待作為HDAC抑制劑有效的疾病例如癌、自身免疫疾病、炎癥性疾病、神經(jīng)變性疾病、感染癥、造血障礙、纖維癥、循環(huán)系統(tǒng)疾病、與血管新生相關(guān)的疾病的預(yù)防及/或治療劑。另外，如表II所示，所述化合物對小梁細(xì)胞有與作為陽性對照的Y-27632同等或更優(yōu)異的細(xì)胞形態(tài)變化作用(需要說明的是，在表II中CSI越小，表示細(xì)胞形態(tài)變化越大)。進而如表III所示，所述化合物在實際的動物模型試驗中也具有優(yōu)異的眼壓降低作用，因此期待所述化合物作為與房水循環(huán)及/或眼壓相關(guān)的疾病的預(yù)防及/或治療劑有用，特別是作為青光眼、高眼壓癥等的預(yù)防及/或治療劑也有用。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性 本發(fā)明化合物具有HDAC抑制活性，作為HDAC抑制劑有效的疾病的預(yù)防及/或治療劑有用，特別是作為癌、自身免疫疾病、炎癥性疾病、神經(jīng)變性疾病、感染癥、造血障礙、纖維癥、循環(huán)系統(tǒng)疾病、與血管新生相關(guān)的疾病的預(yù)防及/或治療劑有用。另外，本發(fā)明化合物具有小梁細(xì)胞形態(tài)變化作用及眼壓降低作用，因此作為與房水循環(huán)及/或眼壓相關(guān)的疾病例如青光眼、高眼壓癥等的預(yù)防及/或治療劑有用。
權(quán)利要求
1、下述通式(1)表示的化合物或其鹽，
R1及R2相同或不同，表示氫原子、可以具有取代基的低級烷基、可以具有取代基的低級鏈烯基、可以具有取代基的低級炔基或下述通式(2)表示的基團；
R3表示羥基、可以具有取代基的低級烷氧基、可以具有取代基的低級環(huán)烷基氧基、可以具有取代基的芳基氧基、羧基、可以具有取代基的低級烷氧基羰基、-OCONRaRb、-NRcRd或下述通式(3)表示的基團；
R4及R5相同或不同，表示鹵原子、可以具有取代基的低級烷基、羥基或可以具有取代基的低級烷氧基；
R6表示鹵原子、可以具有取代基的低級烷基、可以具有取代基的低級環(huán)烷基、可以具有取代基的芳基、可以具有取代基的雜環(huán)基、羥基、可以具有取代基的低級烷氧基、可以具有取代基的低級環(huán)烷基氧基、可以具有取代基的芳基氧基、巰基、可以具有取代基的低級烷基硫基、可以具有取代基的低級環(huán)烷基硫基、可以具有取代基的芳基硫基、甲?；⒖梢跃哂腥〈牡图壨榛驶?、羧基、可以具有取代基的低級烷氧基羰基、硝基、氰基或-NReRf；
R7表示可以具有取代基的低級烷基、可以具有取代基的低級環(huán)烷基、可以具有取代基的芳基、羥基、可以具有取代基的低級烷氧基、可以具有取代基的低級環(huán)烷基氧基或可以具有取代基的芳基氧基；
Ra、Rb相同或不同，表示氫原子、可以具有取代基的低級烷基、可以具有取代基的低級環(huán)烷基、可以具有取代基的芳基或可以具有取代基的雜環(huán)基；
Rc、Rd、Re及Rf相同或不同，表示氫原子、可以具有取代基的低級烷基、可以具有取代基的低級環(huán)烷基或可以具有取代基的芳基；
環(huán)A表示環(huán)式烴或雜環(huán)；
環(huán)B表示環(huán)內(nèi)具有選自氮原子及氧原子中的1個或多個雜原子的雜環(huán)；
X表示可以具有取代基的低級亞烷基；
Y及Z相同或不同，表示單鍵或可以具有取代基的低級亞烷基；
W1-W2表示N-C或C-N；
l、m、n及o相同或不同，表示0、1、2或3。
2、如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，在通式(1)中，
R1及R2相同或不同，表示氫原子、低級烷基、具有鹵原子作為取代基的低級烷基、具有甲氧基作為取代基的低級烷基、具有甲硫基作為取代基的低級烷基、具有氰基作為取代基的低級烷基、具有甲基氨基羰基作為取代基的低級烷基、具有二異丙基氨基作為取代基的低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基或下述通式(2)表示的基團；
R3表示羥基、低級烷氧基、低級環(huán)烷基氧基、芳基氧基、羧基、低級烷氧基羰基、-OCONRaRb、-NRcRd或下述通式(3)表示的基團；
R4及R5相同或不同，表示鹵原子、低級烷基、羥基或低級烷氧基；
R6表示鹵原子、低級烷基、具有鹵原子作為取代基的低級烷基、具有氰基作為取代基的低級烷基、低級環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基、羥基、低級烷氧基、具有鹵原子作為取代基的低級烷氧基、具有芳基作為取代基的低級烷氧基、低級環(huán)烷基氧基、芳基氧基、巰基、低級烷基硫基、低級環(huán)烷基硫基、芳基硫基、甲?；?、低級烷基羰基、羧基、低級烷氧基羰基、硝基、氰基或-NReRf；
R7表示低級烷基、低級環(huán)烷基、芳基、羥基、低級烷氧基、低級環(huán)烷基氧基或芳基氧基；
Ra及Rb相同或不同，表示氫原子、低級烷基、低級環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基；
Rc、Rd、Re及Rf相同或不同，表示氫原子、低級烷基、低級環(huán)烷基或芳基；
環(huán)A表示環(huán)式烴或雜環(huán)；
環(huán)B表示環(huán)內(nèi)具有選自氮原子及氧原子中的1個或多個雜原子的雜環(huán)；
X表示低級亞烷基；
Y及Z相同或不同，表示單鍵、低級亞烷基或具有氧基作為取代基的低級亞烷基；
W1-W2表示N-C或C-N；
l、m、n及o相同或不同，表示0、1、2或3。
3、如權(quán)利要求1或2所述的化合物或其鹽，在通式(1)中，
R1表示低級烷基、具有鹵原子作為取代基的低級烷基、具有甲氧基作為取代基的低級烷基、具有甲硫基作為取代基的低級烷基、具有氰基作為取代基的低級烷基、具有甲基氨基羰基作為取代基的低級烷基、具有二異丙基氨基作為取代基的低級烷基、低級炔基或下述通式(2)表示的基團；
R2表示氫原子；
R3表示羥基、羧基、低級烷氧基羰基、-OCONRaRb、-NRcRd或下述通式(3)表示的基團；
R6表示鹵原子、低級烷基、具有鹵原子作為取代基的低級烷基、具有氰基作為取代基的低級烷基、芳基、嗎啉代基、羥基、低級烷氧基、具有鹵原子作為取代基的低級烷氧基、具有芳基作為取代基的低級烷氧基、低級烷基硫基、低級烷基羰基、硝基、氰基或-NReRf；
R7表示低級烷基或低級烷氧基；
Ra及Rb相同或不同，表示氫原子或雜環(huán)基；
Rc、Rd、Re及Rf表示低級烷基；
環(huán)A表示環(huán)式烴或雜環(huán)；
環(huán)B表示環(huán)內(nèi)具有選自氮原子及氧原子中的多個雜原子的雜環(huán)；
X及Y表示低級亞烷基；
Z表示單鍵、低級亞烷基或被氧基取代的低級亞烷基；
W1-W2表示C-N或N-C；
l及m表示0；
o表示0或1；
n表示0、1或2。
4、如權(quán)利要求1～3中任一項所述的化合物或其鹽，在通式(1)中，環(huán)A表示苯、茚滿、噻吩、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、2，3-二氫苯并呋喃、1H-苯并咪唑、異噁唑、噻唑、苯并噻唑、2，3-二氫苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯或吡啶。
5、如權(quán)利要求1～3中任一項所述的化合物或其鹽，在通式(1)中，環(huán)B表示吡咯烷或嗎啉。
6、選自下述化合物中的化合物或其鹽，
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(2，3-二氫苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-6-基)-1-(3-二甲基氨基丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-二甲基氨基苯基)-1-(3-(嗎啉-4-基)丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-(嗎啉-4-基)丙基)-3-苯乙基脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(3，4-二氟苯基)-1-(3-二甲基氨基丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(4-甲氧基苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-二乙基氨基苯基)-1-(3-二甲基氨基丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(3-氟苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(3-氟-4-甲基苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(4-氟-3-甲基苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-氰基苯基)-1-(3-二甲基氨基丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-1-(3-羥丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-二甲基氨基苯基)-1-(2-乙氧基羰基乙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基)-1-(3-二甲基氨基丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1-(3-二甲基氨基丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(2，3-二氫-1-苯并呋喃-5-基)-1-(3-(嗎啉-4-基)丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(2，3-二氫苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-6-基)-1-(2-羥乙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(苯基羰基甲基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(1，3-噻唑-2-基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(6-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2-基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(6-氟-1，3-苯并噻唑-2-基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二乙基氨基丙基)-3-(3，4-二氟苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-(嗎啉-4-基)丙基)-3-(吡啶-3-基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(噻吩-3-基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(3-氯-4-氟苯基)-1-(3-二乙基氨基丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-二乙基氨基丙基)-3-(4-氟-3-硝基苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(2，3-二氫苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-6-基)-1-(2-二甲基氨基乙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(2-二甲基氨基乙基)-3-(3-甲氧基苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(2-二甲基氨基乙基)-3-(3-氟苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(2-二甲基氨基乙基)-3-(噻吩-3-基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(吡啶-3-基)-1-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(3-(嗎啉-4-基)丙基)-3-(苯基羰基甲基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(3-氯苯基)-1-(3-(嗎啉-4-基)丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-氟苯乙基)-1-(3-(嗎啉-4-基)丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(4-氰基苯基)-1-(3-羥丙基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(3-氟苯基)-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(2，3-二氫苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-6-基)-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(2-二甲基氨基乙基)-3-(3-甲基苯基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(2，3-二氫苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯-6-基)-1-[4-(嗎啉-4-基)丁基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[1-(2-二甲基氨基乙基)-3-(噻唑-2-基)脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(2-甲氧基苯基)-1-[4-(嗎啉-4-基)丁基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-(3-甲基苯基)-1-[3-(4-甲基哌啶-1-基)丙基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺、及
·N-(2-氨基苯基)-5-[3-環(huán)戊基-1-[5-(嗎啉-4-基)戊基]脲基甲基]吡啶-2-甲酰胺。
7、一種藥物組合物，含有選自權(quán)利要求1～6所述的化合物或其鹽中的至少一種。
8、一種組蛋白去乙?；敢种苿羞x自權(quán)利要求1～6所述的化合物或其鹽中的至少一種作為有效成分。
9、一種組蛋白去乙?；敢种苿┯行У募膊〉念A(yù)防或治療劑，含有選自權(quán)利要求1～6所述的化合物或其鹽中的至少一種作為有效成分。
10、一種組蛋白去乙酰化酶抑制方法，所述方法是向患者給與有效量的選自權(quán)利要求1～6所述的化合物或其鹽中的至少一種。
11、一種組蛋白去乙?；敢种苿┯行У募膊〉念A(yù)防或治療方法，所述方法是向患者給與有效量的選自權(quán)利要求1～6所述的化合物或其鹽中的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于研究具有新型脲結(jié)構(gòu)的新型吡啶羧酸(2-氨基苯基)酰胺衍生物的合成并發(fā)現(xiàn)該衍生物的藥理作用。本發(fā)明提供式(1)表示的化合物或其鹽。式中，R1及R2表示氫原子、低級烷基等，R3表示羥基、低級烷氧基、低級環(huán)烷基氧基、芳基氧基、羧基、低級烷氧基羰基、-OCONRaRb、-NRcRd等，R4及R5表示鹵原子、低級烷基、羥基、低級烷氧基等，Ra、Rb表示氫原子、低級烷基、低級環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基等，Rc及Rd表示氫原子、低級烷基、低級環(huán)烷基、芳基等，X表示低級亞烷基，Y表示單鍵、低級亞烷基，W1-W2表示N-C、C-N，1及m表示0、1、2或3。
文檔編號C07D213/81GK101646651SQ200880010370
公開日2010年2月10日 申請日期2008年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月28日
發(fā)明者茂木寬幸, 田島久嗣, 三品紀(jì)子, 山崎裕輔, 米田信次, 渡邊克彥, 藤河順子, 山本實 申請人:參天制藥株式會社