專利名稱：2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3h-嘧啶-4-酮類衍生物及其制備方法 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種衍生物及其制備方法，具體涉及2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯節(jié)基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物及其制備方法和應(yīng)用，屬于有機(jī)化合物合成與醫(yī)藥應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
艾滋病(AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)弓l起，嚴(yán)重危害人類生命健康的重大傳染性疾病。HIV是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，逆轉(zhuǎn)錄酶在病毒生命周期中的重要作用使其成為抗病毒治療的重要靶點(diǎn)。逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑分為兩類核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)因具有高效、低毒、高選擇性等特點(diǎn)而倍受關(guān)注。但是由于耐藥毒株的蔓延使該類藥物迅速喪失臨床效價(jià)。因此新型、高效、低毒、廣譜抗耐藥的NNRTIs的研發(fā)是目前抗HIV藥物研究的重要方向之一。
迄今己報(bào)道50多類NNRTIs,其中二氫烷氧卡基嘧啶酮(Dihydro-aIkylthio-benzyl-oxopyrimidines, DABOs)衍生物是較為典型的一類。DABO類衍生物能夠提高分子構(gòu)象的柔性及在耙點(diǎn)中的位置可適應(yīng)性，有效的抑制耙點(diǎn)的突變，進(jìn)而抑制耐藥性的產(chǎn)生。隨著對(duì)DABOs的結(jié)構(gòu)改造，以硫取代C2側(cè)鏈，得到了系列2-硫基DABO類似物(5"-DABOs)，使抗HIV-1 RT活性有了顯著提高，成為一類具有開發(fā)前景的NNRTIs。目前為止，以S-DABOs嘧啶母環(huán)為基本骨架，對(duì)其C2.， C3.， C4.， C5.， C6JS行了一系列的結(jié)構(gòu)修飾，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多高活性的S-DABOs衍生物，并對(duì)其進(jìn)行了構(gòu)效關(guān)系(SAR)研究。
因此，以S-DABOs嘧啶母環(huán)為基本骨架，利用先導(dǎo)化合物構(gòu)效關(guān)系的有效信息，對(duì)其2位側(cè)鏈進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，對(duì)發(fā)現(xiàn)廣譜高效抗HIV藥物具有重要意義
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-啼卩定-4-酮類衍生物及其
制備方法，本發(fā)明還提供上述化合物的用途。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
1. 2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3/f-噴淀-4-酮類衍生物
本發(fā)明的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3W-嘧啶-4-酮類衍生物，結(jié)構(gòu)通式
如下 '
<formula>formula see original document page 3</formula>
其中R!為H或甲基；R2為4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3， 4-二氯、4-溴、3， 4-二氟、3-氯-4-氟、3， 4-二甲氧基或4-甲基。2. 2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物的合成路線如下:<formula>formula see original document page 4</formula>
試齊U: (i) (a) MgCl2, Et3N, CH3CN; (b) 2，6-二氯苯乙酸，N， N-羰基二咪唑；(ii)硫脲,EtONa; (iii)取代氯乙酰苯胺，碳酸鉀(K2C03)， MW-二甲基甲酰胺(DMF)。
其中R!為H或甲基；R2為4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3， 4-二氯、4-溴、3， 4-二氟、3-氯-4-氟、3， 4-二甲氧基或4-甲基。
3. 中間體6-(2,6-二氯苯甲基)-2-巰基-3/f-嘧啶-4-酮3的制備方法
將O.lmol的丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)l置于150mL無水乙腈中，依次加入0.12mol的無水MgCl2， 0.152 molEt3N，室溫?cái)嚢?個(gè)小時(shí)；將0.048 mol的2,6-二氯苯乙酸和0.05mol的N,N-羰基二咪唑置于150mL乙腈中反應(yīng)15-20 min.，然后將反應(yīng)混合液加入丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)、無水MgCl2和Et3N的混合液中；室溫?cái)嚢?2-24h，加熱回流2h， TLC跟蹤至反應(yīng)完全；冰浴環(huán)境下滴加13%的鹽酸150mL，滴畢攪拌15-20min.，分層取有機(jī)層蒸干，加入150ml乙酸乙酯；將乙酸乙酯的混合液先用NaHC03溶液洗3次，每次用量200mL，再用NaCl溶液洗3次，每次用量200ml，最后用無水Na2S04干燥，減壓蒸餾得p酮酸酯2的粗品，可不經(jīng)純化直接用于下一步；所述百分比數(shù)均為質(zhì)量百分比，下同。
在干燥的反應(yīng)瓶中，將10g, 0.43mol的鈉分批加入300mL無水乙醇中，待鈉溶解冷卻后，一次性加入24g,0.315mol的硫脲，然后加入粗產(chǎn)品p-酮酸酯2，將混合物加熱回流，TLC跟蹤至P-酮酸酯原料點(diǎn)消失后停止加熱，冷卻后減壓蒸出溶劑，將殘余物溶解于300mL水中，過濾，用10%的鹽酸，冰醋酸調(diào)pF^4，有白色沉淀產(chǎn)生；過濾，濾餅用10mL冰乙醇、lOmL冰乙醚依次洗滌2次，可得白色固體3;含純品90%以上，可不經(jīng)純化直接用于下一步目標(biāo)化合物的合成。
4. 2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物4的制備方法將上述中間體6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巰基-3//-嘧啶-4-酮3，與取代氯乙酰苯胺進(jìn)行烴化反應(yīng)，
然后經(jīng)重結(jié)晶純化得到2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3iZ-嘧啶-4-酮類衍生物4,所述的取代氯乙酰苯胺選自2-氯-iV-(4-硝基苯基)乙酰胺，2-氯-AK4-氯苯基)乙酰胺，2-氯-AK4-甲氧基苯基)乙酰胺，2-氯-iV-(4-溴苯基)乙酰胺，2-氯-AK4-甲基苯基)乙酰胺，2-氯-7V-(3,4-二氯苯基)乙酰胺，2-氯-iV-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺，2-氯-W-(3,4-二甲氧基苯基)乙酰胺或2-氯-JV-(3，4-二氟苯基)乙酰胺，所得目標(biāo)化合物4a-4q，結(jié)構(gòu)見表l。以下提供優(yōu)選的操作步驟
將2mmo1的6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巰基-3//-嘧啶-4-酮3和211:111101的K2C03置于反應(yīng)瓶中，加入無水iV，,二甲基甲酰胺(DMF)15mL，于室溫?cái)嚢?0min后，加入取代氯乙酰苯胺2.2mmo1,室溫?cái)嚢瑁琓LC跟蹤至原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)；加入冰水100mL，有白色沉淀產(chǎn)生；過濾，用乙醇(EtOH)或乙醇-W,A^二甲基甲酰胺(EtOH-DMF)混合溶劑重結(jié)晶得目標(biāo)化合物4a-4q。表l、目標(biāo)化合物4a-4q的結(jié)構(gòu)式
編結(jié)構(gòu)編 號(hào)結(jié)構(gòu)編 號(hào)結(jié)構(gòu)
4ao 1眾 OCH34b0 。A Cl4c0 1 朋A^S 、N、 Br
4d0 CH34eo 。，、4fO 入入、 OCH3
4g0 F4h0 ° ，、 Cl4iO Q ，、 入入、 F
4j0 OCH34ko C1^^^C1 Cl41O A々、 Br
4m0 I A N024n0 OCH34o0 F5.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3界嘧啶-4-酮類衍生物藥物組合物-種抗HIV-1藥物組合物，含有上述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物與藥用輔料，制成不同齊II型的藥物。
6. 2-[(取代苯氨萄羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-噴^$-4-酮類衍生物應(yīng)用本發(fā)明的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物可作為HIV-l非核苷類抑制劑應(yīng)用。具體地說，作為HIV-1抑制劑用于制備抗艾滋病藥物。
本發(fā)明在分子模擬的基礎(chǔ)上，Ce-采用活性基團(tuán)2,6-二氯芐基，在C2—側(cè)鏈引入合適的取代苯氨基羰基甲硫基，以增加抑制劑分子與周圍氨基酸殘基的疏水和氫鍵作用，合成了一系列的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物。該系列化合物具有較高的抗HIV活性，且細(xì)胞毒性較低，具有進(jìn)一步藥用開發(fā)價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明，所有目標(biāo)化合物的編號(hào)與表l相同。所述百分比數(shù)
均為質(zhì)量百分比。
實(shí)施例1:中間體6-(2，6-二氯苯甲基):2-巰基-3樂嘧啶-4-酮的制備方法
將O.lmol的丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)l置于150mL無水乙腈中，依次加入0.12mo1的無水MgCl2， 0.152 mol Et3N，室溫?cái)嚢?個(gè)小時(shí)。將0.048 mol的2，6-二氯苯乙酸和0.05 mol的N,N-羰基二咪唑置于150mL乙腈中反應(yīng)15-20 min，然后將反應(yīng)混合液加入丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)，無水MgCl2, Et3N的混合液中。室溫?cái)嚢?2-24h，加熱回流2h， TLC跟蹤至反應(yīng)完全。冰浴環(huán)境下滴加13%的鹽酸150mL,滴畢攪拌15min-20min，分層取有機(jī)層蒸干，加入150ml乙酸乙酯。將乙酸乙酯的混合液先用NaHC03溶液洗3次，每次用量200mL，再用NaCl溶液洗3次，每次用量200ml,最后用無水Na2S04干燥，減壓蒸餾得|3酮酸酯2的粗品，可不經(jīng)純化直接用于下一步。
在干燥的反應(yīng)瓶中，將鈉(10g,0.43mol)分批加入300mL無水乙醇中，待鈉溶解冷卻后， 一次性加入硫脲(24g，0.315mo1)，然后加入粗產(chǎn)品卩-酮酸酯2 (可累計(jì)獲得)，將混合物加熱回流，TLC跟蹤至p-酮酸酯原料點(diǎn)消失后停止加熱，冷卻后減壓蒸出溶劑，將殘余物溶解于水中(300mL),過濾，用10%的鹽酸，冰醋酸調(diào)PI^4,育白色沉淀產(chǎn)生。過濾，濾餅用10mL冰乙醇、10mL冰乙醚依次洗滌2次，可得白色固體3，含純品95%?？刹唤?jīng)純化直接用于下一步反應(yīng)。6-(2,6-二氯苯甲基)-2-巰基-3//-嘧啶-4-酮白色固物，產(chǎn)率64.2%。6-(2,6-二氯苯甲基)-2-巰基-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮白色固物，產(chǎn)率21 %。實(shí)施例2: 2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3H-嘧啶-4-酮4a的制備將6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巰基-3//-噴啶-4-酮3 (2mmo1, 0.574g)禾Q K2C03 (2mmo1， 0.276g)置于反應(yīng)瓶中，加入無水7V，W-二甲基甲酰胺(DMF) 15mL,于室溫?cái)嚢?0min后，加入2-氯-N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(0.439g,2.2mmo1)，室溫?cái)嚢?，TLC跟蹤至原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)。加入冰水100mL，有白色沉淀產(chǎn)生。過濾，用乙醇-M W-二甲基甲酰胺(EtOH-DMF)混合溶劑重結(jié)晶得H標(biāo)化合物4a。白色晶體，產(chǎn)率25.4%， mp:238-24(TC (dec).產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)-.
'H國(guó)NMR (DMSO-4, ppm) S: 12.80 (s, lk, NH), 10.08 (s, 1H, NH)， 7.45-7.29 (m， 7H)， 5.41 (s， 1H,CH=C=0), 4.05 (s， 2H, S-CH2), 3.99 (s, 2H, CH2), 3.69 (s, OCH3,3H); IR (KBr， cm.1): 3276 (頓)，3075 Onh), 1661 (Doo)， 1247 (uc—N). ESI-MS: w/z 450.6 (M+l), 472.7 (M+Na). C20H17Cl2N3O3S(449.04).
實(shí)施例3. 2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3/f-嘧使-4-酮4b,制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-W-(4-氯苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4b為白色晶體，產(chǎn)率23.6%, mp:223-225。C(dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
iH國(guó)NMR (DMSO-t/6, ppm) S: 12.77 (s, 1H, NH ), 10.37 (s, 1H， NH ), 7.57-7.24 (m, 7H ), 5.44 (s，1H, C-5 H pyrimidine ring), 4.00 (4H, CH2'S-CH2). IR (KBr, cm-1): 3317 (dnh), 3052 (uNH), 1657(uco). ESI-MS:油456.3(M+1), 478.3 (M+Na). C19H14C13N2S20 (454.96).
實(shí)施例4. 2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3/f-嘧咬-4-酮4c制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(4-溴苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3界嘧啶-4-酮4c為白色晶體，產(chǎn)率23.1%，mp:232-233°C(dee).產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H陽(yáng)NMR (DMSO-漆,ppm) 5: 12.82 (s, 1H， NH)， 10.34 (s, 1H， NH), 7.54 (d, M0Hz, 2H)， 7.49 (d，■7=9.0Hz, 2H), 7.44 (d, J= 8.4Hz, 2H)， 7.26 (d,聲8.4Hz, H)， 5.44 (s, 1H, CH=C=0), 4.03 (s, 2H,S-CH2)， 3.97 (s, 2H, CH2); IR (KBr, cm.1): 3320 CuNH)， 3051 (uNH), 1656 (uc=0), 1239 (uc.N), 1206(uc.N). ESI-MS: w/z 498.3 (M十l)， 520.2 (M+Na). C19HwBrCl2N302S (496.94).
實(shí)施例5. 2-[(4-甲基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4d制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-yv-(4-甲基苯基)乙酰胺。
所得產(chǎn)品2-[(4-甲基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3界嘧啶-4-酮4d為白色晶體，產(chǎn)率26.7%, mp: 235-237。C (dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-NMR (DMSO-漆，ppm) & 12.84 (s, 1H, NH), 10.11 (s, 1H， NH), 7.45-7.12 (m, 7H), 5.45 (s, 1H,CH-C，O), 4.05 (s， 2H, S-CH2)， 3.95 (s， 2H， CH2), 2.25 (S， 3H， CH3); IR (KBr，cm"): 3287 ("冊(cè))，3034(v冊(cè))，1663 (uc=0)，1241 (uc.N).ESI-MS:w/2434.7(M+l)，456.5(M+Na).C20H17Cl2N3O2S (433.34).實(shí)施例6. 2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯節(jié)基)-3界嘧啶-4-酮4e制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-AK4-硝基苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4e為白色晶體，產(chǎn)率29.6%, mp: 227陽(yáng)229。C (dec).產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-NMR (DMSO-4 ppm) S: 12.78 (s, 1H, NH), 10.82 (s， 1H， NH)， 7.56 (dd, J產(chǎn)9.6Hz,■72=2.4Hz, 2H), 7.8 (dd， J尸9.6Hz，力=2.4Hz, 2H),7.36 (d, /=7.8Hz, 2H), 7.23 (d, ^7.8Hz, H), 5.52 (s:1H， CH=C=0)， 4.08 (s， 2H， S-CH2), 4.02 (s, 2H, CH2). IR (KBr， cm") 3323 (UnH)， 3077 (vNH), 1655(uc=0)， 1241 (uC-N) , 1205 (uC-N). ESI-MS: w/z 465.5 (M+l). C19H14CI2N404S (464.01).實(shí)施例7. 2-[(3，4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3H-嘧啶-4-酮4f制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-7V-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(3,4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4f為白色晶體，產(chǎn)率22.6%， mp:221-223。C (dec).產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-NMR (DMSO-^， ppm) S: 12.80 (s, 1H, NH)， 10.03 (s,H, NH), 7.51-6.86 (m, 6H), 5.47 (s, 1H，CH=O0)， 4.08 (s, 2H, S- CH2)， 4.02 (s, 2H， CH2)， 3.72 (2xOCH3, 6H); IR (KBr， cm") 32923136 (uNH)， 1664(uo0)， 1231.65 (uc.N)， 1218 (uc.N). ESI-MS:附/z 482.4 (M+3). C21H19C12N304S(479.05).
實(shí)施例8. 2-[(3,4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4g制備方法同實(shí)施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-7V-(3，4-二氟苯萄乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(3,4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4g為白色晶體，產(chǎn)率24,2%, mp:228-230。C (dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù) '
'H-麗R (DMSO-漆，ppm) S: 12.78(s, 1H, NH)， 10.45 (s, 1H, NH), 7.74-7.28 (m, 6H), 5.52 (s, 1H,CH=C=0), 4.05 (s, 2H' S-CH2)， 3.93 (s, 2H， CH2); IR (KBr， cm") :3297 (uNH) , 3085 (dnh),16590o0)， 1241 (o)c.m), 1210 (uC-N). ESI-MS: m/z 456.5 (M+l)， 478.5 (M+Na). Cl9Hi3Cl2F2N302S(455.01).
實(shí)施例9. 2-[(3,4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3iZ-嘧啶-4-酮4h制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(3,4-二氯苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(3,4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯節(jié)基)-3//-嘧啶-4-酮4h為白色晶體，產(chǎn)率26.8%, mp: 236-238°C (dec)
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-NMR (DMSO-^， ppm) S: 12.87 (s, 1H， NH), 10.50 (s， 1H， NH), 7.95 (d， /=2.4Hz， H), 7.58 (d, /=8.4Hz, H)， 7.45 (dd, J尸8.4Hz, Jf2.4Hz, H), 7.42 (d, J=7.8Hz, 2H)， 7.25 (d, J=7.8Hz ， 1H), 5.44 (s,1H， CH=C=0), 4.04 (s, 2H, S-CH2)， 3.95 (s, 2H， CH2); IR (KBr， cm-1): 3291 (uNH), 3091 (uNH), 1660(uc-o), 1234 (uC-N), 1206 (uC-N). ESI-MS: m/z 488.3 (M+l), 510.1 (M+Na). C19H13C14N302S (486.95).實(shí)施例10. 2-[(3-氯-4-氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3界嘧徒-4-酮4i制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-W-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(3-氯-4-氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3/f-噴啶-4-酮4i為白色晶體，產(chǎn)率21.8%, mp: 237-239°C (dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-觀R ( DMSO-c/6, ppm) S: 12.75 (s, LH, NH), 10.41 ( s, 1H， NH)， 7.87-7.25 (m， 6H), 5.50 (s, 1H，CHK>0), 4.02 (s, 2H， S-CH2), 3.93 (s， 2H， CH2); IR (KBr， cm"):3290 (uNH)， 3042 (unh)， 1658(DC=0), 1221 (Dc曙n). ESI-MS: m/z 472.6 (M+l), 494.6 (M+Na). C19H13C13FN302S (470.98).
實(shí)施例11. 2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4j
制備方法同實(shí)施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(4-甲氧基苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4j為白色晶體，產(chǎn)率54.0%, mp: 248-251°C (dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-麗R (DMSO-c/6，卯m ) S: 12.71 (s， 1H， NH ), 9.72 (s, 1H， NH)， 7.40-6.68 (m， 7H)， 4.05 (s， 2H，CH2), 3.99 (s， 2H， CH2)， 2.04 (s, CH3,3H); IR (KBr， cm-1): 3323(vNH)， 3041(dnh)， 1654(uc=。)， 1248("C-N). ESI-MS: w/z 464.5 (M十l)， 502.6 (M+K). C2iH19Cl2N303S (463.05).
實(shí)施例12. 2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4k制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-7V-(4-氯苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4k為白色晶體，產(chǎn)率27.6%， mp: 256-258°C (dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-NMR (DMSO-漆，ppm) S: 12.71 (s, 1H， NH)， 10.00 (s, 1H, NH)， 7.53 (d, 〉8.4Hz, 2H)， 7.37 (d,^8.4Hz, 2H), 7.24 (d， ^7.8Hz, 2H ), 7.04 (d, J-7.8Hz， H), 4.11 (s， 2H, S-CH2), 3.72 (s, 2H， CH2),2.04 (s, CH3, 3H); IR ( KBr, cm.1) 3327 (unh)， 3053 (dnh), 1660 (uc=0), 1260 (uC-N), 1243 (uC-N).EST-MS: w/z 468.5 (M+1). C20H16Cl3N3O2S (467).
實(shí)施例13. 2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮41制備方法同實(shí)施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-W-(4-溴苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(4-溴苯氨萄羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮41為白色晶體，產(chǎn)率29.2%, mp:259-261。C (dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
H-NMR (DMSO-4 ppm) 5: 12.70 (s, 1H， NH)， 9.99 (s， 1H, NH)， 7.49-7.04 (m， 7H), 4.11 (s， 2H，S-CH2)， 3.72 (s, 2H, CH2), 2.04 (s, CH3,3H); IR (KBr, cm"):3307 (uNH), 3051 (uNH), 1656 (\)C=0)，1256 (uc扁n), 1242 (uc—N). ESI-MS: w/z 514.5 (M+3). C20H16BrCl2N3O2S (510.95)..
實(shí)施例14.2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4m制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-W-(4-硝基苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4m為白色晶體，產(chǎn)率24.8%, mp: 250-252°C (dec).產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-NMR (DMS0-4， ppm) 5: 12.76 (s， 1H， NH), 10.47 (s， 1H, NH)， 8.25-6.97 (m, 7H)， 4.10 (s,2H, S-CH2), 3.79 (s， 2H， CH2), 2.03 (s， CH3,3H); IR(KBr， cm—4:3412 (uNH)， 3085 ("NH)， 1649 (vc=0)，1620 (vc=0), 1331 (dc.n)， 1307 (uc.N). ESl-MS: w/z 479.2 (M+1), 501.2 (M+Na). C20H16Cl2N4O4S(478.03).
實(shí)施例15.2-[(3，4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4n制備方法同實(shí)施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(3,4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4n為白色晶體，產(chǎn)率52.3%, mp: 246-249°C (dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-NMR (DMSO-t4, ppm) S: 12.68 (s, 1H， NH), 9.75 (s, 1H， NH)， 7.29-6.89 (m， 6H)， 4.13 (s, 2H，3.73-3.72 (2xOCH3, 6H), 3.67 (s, 2H， CH2), 2.04 (s, CH3, 3H); IR (KBr， cm"):3272 (\)NH),3050 (uNH), 1671 (uc=0), 1651 (uc=0), 1262 (dC-N), 1234(dc.n). ESI-MS: m/z 494.3 (M+1), 516.3(M+Na). C22H21C12N304S (493.06).
實(shí)施例16. 2-[(3,4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4o制備
方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-JV-(3,4-二氟苯基)乙酰胺
所得產(chǎn)品2-[(3,4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4o為白色
晶體，產(chǎn)率29.6%, mp: 247-250°C (dec).
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
'H-雨R (DMSO-^， ppm) S: 12.71 (s， 1H, NH)， 10.10 (s， 1H， NH), 7.68-7.03 (m, 6H), 4.11 (s, 2H,S-CH2), 3.72 (s, 2H, CH2), 2.04 (s, CH3'3H); IR (KBr, cm-1): 3313 (uNH)， 3060 (uNH), 1675 (uc=0),
1647 Oc=0), 1257 (dc.n), 1206 (uc.N). ESI-MS: /w/z 470.3 (M+l)， 492.1 (M+Na). C20H15Cl2F2N3O2S(469.02).
實(shí)施例17. 2-[(3,4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4p制備方法同實(shí)施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-AH3，4-二氯苯基)乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(3，4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4p為白色晶體，產(chǎn)率25.7°/。， mp:256-258。C (dec)
產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
!H-NMR (DMSO-漆,ppm) S: 12.74 (s， 1H, NH)， 10.14 (s, 1H, NH), 7.87 (d, ^7.8Hz, 1H)， 7.58(d, J=9Hz, 1H), 7.38 (dd, J尸9Hz,力-1.8Hz, 1H)， 7.21 (d, J-7.8Hz, 2H), 7.02 (d, J-7.8Hz, 1H), 4.11(s, 2H, S隱CH2)， 3.73 (s, 2H， CH2), 2.04 (s, CH3,3H); IR (KBr, cm-1): 3283 (uNH), 3040 (\)NH), 1673(uc=0), 1646 (uc=0), 1257 (uc.N), 1236 (uc.N). ESI-MS: w/z 504.3 (M+3). C20H15Cl4N3O2S (500.96).實(shí)施例18. 2-[(3-氯斗氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4q制備方法同實(shí)施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(3-氯-4-氟苯萄乙酰胺。所得產(chǎn)品2-[(3-氯-4-氟苯氨萄羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3/f-噴啶-4-酮4q為白色晶體，產(chǎn)率26.6%, mp:259-261。C (dec).產(chǎn)物光譜分析數(shù)據(jù)
!H-NMR (DMS0-4,卯m) S: 12.68 (s， ip， NH), 10.06 (s, 1H， NH)， 7.96-7.02 (m， 6H)， 4.11 (s， 2H,S-CH2), 3.72 (s, 2H, CH2), 2.04 (s, CH3, 3H); IR (KBr, cm"): 3294 (uNH)， 3052 (uNH)， 1673 (uc=0),
1648 (doo)， 1260 ("c.n)， 1221 (dc.n). ESI-MS:附/z 488.2 (M+3). C20HI5Cl3FN3O2S (484.99).實(shí)施例19:抗HIV細(xì)胞活性篩選試驗(yàn)
術(shù)語(yǔ)說明
MTT法噻唑藍(lán)法；MT-4:人急性淋巴母細(xì)胞；CCID50:細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量；DMSO: 二甲基亞砜；
EC5Q:保護(hù)50°/。感染HIV-1的MT-4細(xì)胞免于細(xì)胞病變的化合物濃度；CC5Q:使50。/。未感染HRM的細(xì)胞發(fā)生病變的化合物濃度；SI:選擇性系數(shù)，即CC50/EC5o(HIV-l IIIb)的比値；HIV-1 (IIIB) : HIV-1病毒株IIIB亞型;HIV-2 (ROD) : HIV-2病毒株ROD亞型。
化合物抗HIV活性試驗(yàn)，采用噻唑藍(lán)法(MTT法)在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，加入50uL含l"(^MT-4細(xì)胞(人急性淋巴母細(xì)胞)培養(yǎng)液，再分別加入20uL感染HIV-1 (IIIB)或HIV-2(ROD)的MT-4細(xì)胞混懸液(每毫升含100倍細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量CCID50)，然后加入不同濃度的待測(cè)化合物溶液，每個(gè)濃度3個(gè)孔，經(jīng)過在37'C—定時(shí)間(5天)的培養(yǎng)后，向每個(gè)孔中加入20uL (5mg/ml) MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)，然后加入溶解液二甲基亞砜(DMSO)，與酶標(biāo)儀上，在540nm測(cè)定吸收度，計(jì)算化合物不同濃度下的細(xì)胞增值率P%。同時(shí)設(shè)空白組，由此計(jì)算化合物保護(hù)50%的細(xì)胞免于HIV誘導(dǎo)的細(xì)胞病變所需濃度(EC50)。
化合物毒性測(cè)定在未感染的MT-4細(xì)胞中，與化合物抗HIV活性試驗(yàn)平行操作，用MTT法測(cè)定化合物使50°/。未感染細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞病變的濃度，即毒性濃度(CC50)。
選擇指數(shù)的計(jì)算SI=CC5。/EC50。
對(duì)上述合成的17個(gè)化合物4a-4q進(jìn)行了抗HIV-l (mB)及HIV-2 (ROD)活性篩選，它們的活性和毒性數(shù)據(jù)列于表2中，其中臨床應(yīng)用的核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑奈韋拉平(NVP)、地拉韋啶(DLV)、依法韋侖(EFV)和齊多夫定(AZT)作為陽(yáng)性對(duì)照。由表可以看出，該類化合物對(duì)HIV-2 (ROD)無抑制作用，但對(duì)HIV-1 (IIIB)表現(xiàn)出了一定的抑制活性，其中活性最好的兩個(gè)化合物4k (EC50=0.32±0.11^M, CC50>266.65nM, SI〉836)和41 (EC50=0.18±0.06|aM，CCM>243.56pM， SI 〉1326)。可作為抗HIV的先導(dǎo)化合物加以利用。
表2化合物4a-q的抗HIV-1 (IIIB)及HIV-2 (ROD)的活性和毒性(MT-4細(xì)胞)
編號(hào) EC50(HM)CC鄰OiM)SI(IIIb)
HIV隱l IIIBHIV-2 ROD430.92±0.16>25.2125.52±2.7528
4b0.95±0.11>24.8024.80±2.3523
4c0.74±0.08>22.8422.84±1.9631
4d0.88±0.28>47.43>or=47.43>or=54
4e2.07±1.29>268.64>268.64>130
4f4.48±1.62>165.67165.67±11.2228
4g>273.95>273.95>273.95ND ,
4h>or=84.63>19.5819.59±1.23ND
4i>264.41>264.41>264.41<1
4j2.74土3.00>10.8410.84±7.004
4k032±0.11>266.65>266.65>836
410.18±0.06>243.56>243.56>1326
4m0.99±0.27245.80>261.49>264
4n1.45±1.13>252.84>252.84>175
4o0.69土0.02>265,78>265.78>387
4p22.82>248.40>248.40ND
4q241.09>256.79>256.79ND
NVP0.21> 15.02>72
DLV0.32>3.83>12 .
E'FV0.0044>6.34>1434
AZT0.015>93.55>619權(quán)利要求
1.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3H-嘧啶-4-酮類衍生物結(jié)構(gòu)通式如下其中R1為H或甲基；R2為4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3，4-二氯、4-溴、3，4-二氟、3-氯-4-氟、3，4-二甲氧基或4-甲基。
2. 如權(quán)利要求1所述的2-[(取代苯氨萄羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3/f-嘧啶-4-酮類衍生 物的制備方法，步驟如下將2mmo1的6-(2,6-二氯苯甲基>2-巰基-3樂嘧啶-4-酮(3)和2纖o1的K2C03置于反應(yīng) 瓶中，加入無水W，7V-二甲基甲酰胺(DMF) 15 mL，于室溫?cái)嚢?0min后，加入取代氯乙酰 苯胺2.2mmd，室溫?cái)嚢?，TLC跟蹤至原料點(diǎn)消失，停止反應(yīng)；加入冰水100 mL，有白色沉 淀產(chǎn)生；過濾，用乙醇或乙醇-iV, W-二甲基甲酰胺混合溶劑重結(jié)晶得目標(biāo)化合物4a-4q;其中取代氯乙酰苯胺為2-氯-iV-(4-硝基苯基)乙酰胺，2-氯-iV-(4-氯苯基)乙酰胺，2-氯-^-(4-甲氧基苯基)乙酰胺，2-氯-7V-(4-溴苯基)乙酰胺，2-氯-7V-(4-甲基苯基)乙酰胺，2-氯-AA-(3,4-二氯 苯基)乙酰胺，2-氯-iV-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺，2-氯-AH3,4-二甲氧基苯基)乙酰胺或2-氯-從(3,4-二氟苯基)乙酰胺。
3. 如權(quán)利要求2所述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯節(jié)基)-3//-嘧啶-4-酮類衍 生物的制備方法，其中中間體6-(2,6-二氯苯甲基)-2-巰基-3界嘧啶-4-酮(3)的制備步驟如下將O.lmd的丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)(1)置于150mL無水乙腈中，依次加 入0.12mo1的無水MgCl2, 0.152 molEt3N，室溫?cái)嚢?個(gè)小時(shí)；將0.048 mol的2,6-二氯苯乙 酸和0.05 mol的N,N-羰基二咪唑置于150mL乙腈中反應(yīng)15-20 min.，然后將反應(yīng)混合液加入 丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)、無水MgCl2和Et3N的混合液中；室溫?cái)嚢?2-24h，力口 熱回流2h, TLC跟蹤至反應(yīng)完全；冰浴環(huán)境下滴加13%的鹽酸150mL，滴畢攪拌15-20min.， 分層取有機(jī)層蒸干，加入150ml乙酸乙酯；將乙酸乙酯的混合液先用NaHC03溶液洗3次， 每次用量200mL，再用NaCl溶液洗3次，每次用量200ml，最后用無水Na2S04干燥，減壓蒸 餾得卩酮酸酯(2)的粗品，可不經(jīng)純化直接用于下一步；在千燥的反應(yīng)瓶中，將10g, 0.43mol的鈉分批加入300mL無水乙醇中，待鈉溶解冷卻后， 一次性加入24g,0.315mol的硫脲，然后加入粗產(chǎn)品p-酮酸酯(2)，將混合物加熱回流，TLC 跟蹤至P-酮酸酯原料點(diǎn)消失后停止加熱，冷卻后減壓蒸出溶劑，將殘余物溶解于300mL水中， 過濾，用10%的鹽酸，冰醋酸調(diào)pl^4，有白色沉淀產(chǎn)生；過濾，濾餅用lOmL冰乙醇、10 mL 冰乙醚依次洗滌2次，得白色固體(3)。
4. 如權(quán)利要求1所述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生 物在制備HIV-1抑制劑的藥物中的應(yīng)用。
5. —種抗HIV藥物組合物，用權(quán)利要求1所述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯 芐基)-3H-嘧啶-4-酮類衍生物與藥用輔料制成不同劑型的藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3H-嘧啶-4-酮類衍生物，結(jié)構(gòu)通式如右，其中R₁為H或甲基；R₂為4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3，4-二氯、4-溴、3，4-二氟、3-氯-4-氟、3，4-二甲氧基或4-甲基。本發(fā)明還涉及該類化合物的制備方法及其作為HIV抑制劑的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07D239/00GK101638391SQ20091001772
公開日2010年2月3日 申請(qǐng)日期2009年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月21日
發(fā)明者于明艷, 劉新泳 申請(qǐng)人:山東大學(xué)