專利名稱：一種奧曲肽二硫鍵氧化環(huán)合方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種奧曲肽的制備方法，具體地，本發(fā)明涉及奧曲肽二硫鍵氧化環(huán)合方法。
背景技術(shù)：
奧曲肽是人生長抑素類八肽衍生物，是含有一個(gè)二硫鍵的環(huán)八肽，臨床上主要用于上消化道出血和急性胰腺炎的治療。人工用合成法制備奧曲肽時(shí)，只能得到直八肽，然后再氧化成環(huán)八肽，氧化方法的優(yōu)劣直接影響后續(xù)純化的難易，更直接影響最后的產(chǎn)品收率。目前已有的多肽二硫鍵氧化成環(huán)肽的方法是采用碘、鐵(III)氰化鉀或二甲基亞砜進(jìn)行氧化，這些方法具有反應(yīng)條件要求高，副反應(yīng)較多，后處理需要進(jìn)行脫鹽等諸多缺陷。因此，還有必要開發(fā)新的奧曲肽二硫鍵氧化環(huán)合方法。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供一種奧曲肽二硫鍵氧化環(huán)合方法。本發(fā)明的目的是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。一方面，本發(fā)明提供一種奧曲肽二硫鍵氧化環(huán)合方法，所述方法采用醋酸銨緩沖液作為氧化工作液，在PH 7. 50-8. 50下，將奧曲肽前體直八肽氧化成環(huán)八肽。優(yōu)選地，所述方法中醋酸銨緩沖液的濃度為0. 01 0. 05mol/L ；優(yōu)選地，所述方法中奧曲肽前體直八肽的濃度為1 X 10_5 1 X 10_4mol/L。優(yōu)選地，所述方法中氧化的溫度為22 35°C。優(yōu)選地，所述方法中氧化時(shí)間為M 48小時(shí)。優(yōu)選地，用醋酸調(diào)節(jié)pH值至酸性，優(yōu)選為pH 5.0，氧化結(jié)束。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述方法包括以下步驟1)將裂解后的奧曲肽前體直八肽用50%醋酸水溶液溶解；2)用濃度為0. 01 0. 05mol/L的醋酸銨緩沖液將溶解的奧曲肽前體直八肽的濃度稀釋至 ι χ KT5 1 X l(T4mol/L，3)用氨水調(diào)節(jié)pH值至7. 50-8. 50 ；4)于22 ;35°C內(nèi)攪拌氧化M 48小時(shí)；5)用醋酸調(diào)節(jié)pH值至酸性，優(yōu)選為pH 5.0，氧化結(jié)束。優(yōu)選地，所述方法中奧曲肽前體直八肽采用固相多肽合成方法合成和酸解方法裂解。另一方面，本發(fā)明還提供了上述方法制備的奧曲肽。綜上所述，本發(fā)明提供的奧曲肽二硫鍵氧化環(huán)合方法的工藝流程圖見圖1，該方法采用空氣中的氧氣進(jìn)行氧化，將PH調(diào)節(jié)至pH7. 50-8. 50的范圍內(nèi)發(fā)生氧化反應(yīng)(經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明，PH低于7. 50氧化速度太慢，而pH值高于8. 50，容易引起目標(biāo)產(chǎn)物奧曲肽的變性和消旋，同時(shí)氧化物從氧化液中析出而造成氧化液渾濁，因此得不到目標(biāo)產(chǎn)物奧曲肽)，而且氧化時(shí)緩沖液的醋酸銨濃度在0. 01 0. 05mol/L范圍內(nèi)即可提供足夠的pH緩沖，從而避免了緩沖液鹽濃度過高而需要進(jìn)行脫鹽的后處理操作。由此可見，本發(fā)明提供的方法，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)時(shí)間短，副反應(yīng)少，后處理方便，產(chǎn)物純度高，最后產(chǎn)品收率高，適用于規(guī)?；a(chǎn)。


以下，結(jié)合附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中圖1本發(fā)明提供方法的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式以下參照具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。以下各實(shí)施例中使用的試劑和設(shè)備說明如下1)樣品采用固相多肽合成方法合成的奧曲肽前體直八肽后，采用酸解方法裂解，得到裸直八肽，具體方法可參見王德心主編的《固相有機(jī)合成——原理及應(yīng)用指南》(化學(xué)工業(yè)出版社，第127頁)，以及N.休厄德，H. D.賈庫布克著，劉克良，何軍林等譯的《肽 化學(xué)與生物學(xué)》(科學(xué)出版社，第172-183頁)。2)試驗(yàn)試劑分析純氨水(北京精細(xì)化學(xué)品有限公司)分析純醋酸(北京精細(xì)化學(xué)品有限公司)純化水(自制)3)設(shè)備電動攪拌機(jī)(河南英予實(shí)驗(yàn)儀器廠)，100升不銹鋼圓桶恒溫水浴鍋(河南英予實(shí)驗(yàn)儀器廠)pH計(jì)(上海雷磁儀器廠)島津分析液相系統(tǒng)(LC-lOAvp Plus)4)液相分析方法采用島津分析液相系統(tǒng)(LC-lOAvp Plus)進(jìn)行HPLC檢測的色譜條件如下0DS色譜柱4. 6X 150、檢測波長210nm、流速lml/min，乙腈三氟乙酸流動相。實(shí)施例1裂解后的裸直八肽用體積比為50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取樣做HPLC分析，作為氧化前的對照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸銨溶液稀釋至5升，用體積比為50%的氨水溶液調(diào)節(jié)pH值至 8. 40。繼續(xù)30°C保溫?cái)嚢柩趸?，每M小時(shí)取樣HPLC檢測一次，氧化48小時(shí)后，用醋酸調(diào)節(jié)氧化液PH值至5. 00結(jié)束氧化。經(jīng)HPLC分析，采用歸一法積分，即目標(biāo)物積分面積占所有物質(zhì)的積分面積比，得到目標(biāo)產(chǎn)物純度大于80%。實(shí)施例2裂解后的裸直八肽用體積比為50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取樣做HPLC分析，作為氧化前的對照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸銨溶液稀釋至5升，用體積比為50%的氨水溶液調(diào)節(jié)pH值至 8. 00。繼續(xù)30°C保溫?cái)嚢柩趸縈小時(shí)取樣HPLC檢測一次，氧化48小時(shí)后，用醋酸調(diào)節(jié)氧化液PH值至5. 00結(jié)束氧化。經(jīng)HPLC分析，目標(biāo)產(chǎn)物純度大于80 %。實(shí)施例3裂解后的裸直八肽用體積比為50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取樣做HPLC分析，作為氧化前的對照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸銨溶液稀釋至5升，用體積比為50%的氨水溶液調(diào)節(jié)pH值至 7. 50。繼續(xù)30°C保溫?cái)嚢柩趸?，每M小時(shí)取樣HPLC檢測一次，氧化48小時(shí)后，用醋酸調(diào)節(jié)氧化液PH值至5. 00結(jié)束氧化。經(jīng)HPLC分析，目標(biāo)產(chǎn)物純度大于80 %。實(shí)施例4裂解后的裸直八肽用體積比為50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取樣做HPLC分析，作為氧化前的對照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸銨溶液稀釋至5升，用體積比為50%的氨水溶液調(diào)節(jié)pH值至 8. 20。繼續(xù)30°C保溫?cái)嚢柩趸?，每M小時(shí)取樣HPLC檢測一次，氧化36小時(shí)后，用醋酸調(diào)節(jié)氧化液PH值至5. 00結(jié)束氧化。經(jīng)HPLC分析，采用歸一法積分，即目標(biāo)物積分面積占所有物質(zhì)的積分面積比，得到目標(biāo)產(chǎn)物純度大于80%。實(shí)施例5裂解后的裸直八肽用體積比為50%的醋酸水溶液溶解，每克裸直八肽用100毫升溶液。取樣做HPLC分析，作為氧化前的對照溶液。溶液用0. Olmol/L醋酸銨溶液稀釋至5升，用體積比為50%的氨水溶液調(diào)節(jié)pH值至 7. 80。繼續(xù)25°C保溫?cái)嚢柩趸?，每M小時(shí)取樣HPLC檢測一次，氧化36小時(shí)后，用醋酸調(diào)節(jié)氧化液PH值至5. 00結(jié)束氧化。經(jīng)HPLC分析，采用歸一法積分，即目標(biāo)物積分面積占所有物質(zhì)的積分面積比，得到目標(biāo)產(chǎn)物純度大于80%。
權(quán)利要求
1.一種奧曲肽二硫鍵氧化環(huán)合的方法，其特征在于，所述方法采用醋酸銨緩沖液作為氧化工作液，在PH值7. 50-8. 50下，將奧曲肽前體直八肽氧化成環(huán)八肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中醋酸銨緩沖液的濃度為 0.01 0. 05mol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法中奧曲肽前體直八肽的濃度為 1Χ1(Γ5 lXl(T4mol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法中氧化的溫度為 22 35°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法中氧化時(shí)間為 24 48小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟1)將裂解后的奧曲肽前體直八肽用50%的醋酸水溶液溶解2)用濃度為0.01 0. 05mol/L的醋酸銨緩沖液稀釋至1 X 10_5 1 X lO-W/L，3)用氨水調(diào)節(jié)pH值至7.50-8. 50 ；4)于22 35°C內(nèi)攪拌氧化M 48小時(shí)；5)用醋酸調(diào)節(jié)pH值至酸性，氧化結(jié)束。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法中的奧曲肽前體直八肽采用固相多肽合成方法合成和酸解方法裂解。
8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述方法制備的奧曲肽。
全文摘要
本發(fā)明提供一種奧曲肽二硫鍵氧化環(huán)合的方法。本發(fā)明所提供的方法采用醋酸銨緩沖液作為氧化工作液，在pH 7.5-8.5下，將合成的奧曲肽前體直八肽氧化成環(huán)八肽。本發(fā)明所提供的方法氧化條件溫和，副反應(yīng)少，產(chǎn)物純度高，最后產(chǎn)品收率高，適用于規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號C07K7/06GK102336808SQ20101023079
公開日2012年2月1日 申請日期2010年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月14日
發(fā)明者萬興中, 侯全民, 孫平, 肖安付 申請人:北京百奧藥業(yè)有限責(zé)任公司