專(zhuān)利名稱(chēng)：魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種標(biāo)樣的制備方法，具體涉及一種魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法。
背景技術(shù)：
神經(jīng)酰胺是細(xì)胞膜的組成部分，具有以下生物功能1、神經(jīng)酰胺與糖甙結(jié)合形成 神經(jīng)鞘苷，存在于動(dòng)、植物等真核細(xì)胞的細(xì)胞膜，參與細(xì)胞功能；2.調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)變異的作 用；3.誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；4.調(diào)節(jié)蛋白分泌；5.在炎癥中的作用；6.具有良好的保水作用等。神 經(jīng)酰胺類(lèi)物質(zhì)，是一類(lèi)大分子的化合物，分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜，如果沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)樣品，就無(wú)法檢測(cè)出 含量，也就無(wú)法證明提取物中有無(wú)神經(jīng)酰胺，提取工藝是否有效。神經(jīng)酰胺的含量檢測(cè)，雖 然有動(dòng)物神經(jīng)酰胺的檢測(cè)方法，標(biāo)樣易買(mǎi)，但對(duì)于植物神經(jīng)酰胺卻是另一碼事，標(biāo)樣難買(mǎi)， 尤其是魔芋神經(jīng)酰胺不僅買(mǎi)不到標(biāo)樣，同時(shí)有關(guān)其結(jié)構(gòu)、分子量等完全空白一片。發(fā)明人對(duì)從魔芋中提取神經(jīng)酰胺的方法進(jìn)行了長(zhǎng)期大量的研究，目前已 經(jīng)完成了從魔芋中提取神經(jīng)酰胺的工藝研究，并在中國(guó)申請(qǐng)了專(zhuān)利，專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)枮?CN200910263528. 7。本發(fā)明是在此基礎(chǔ)上，對(duì)魔芋神經(jīng)酰胺進(jìn)行的進(jìn)一步研究，以上述專(zhuān)利 申請(qǐng)中公開(kāi)的方法制備的魔芋神經(jīng)酰胺為基礎(chǔ)，通過(guò)純化和結(jié)構(gòu)鑒定，制備出魔芋神經(jīng)酰 胺的標(biāo)樣，為本領(lǐng)域?qū)δв笊窠?jīng)酰胺的進(jìn)一步利用提供了研究基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)步驟(1)、采用RP-C18硅膠柱層析制備標(biāo)樣通過(guò)濕法裝柱，濕法上樣，依據(jù)所分離 物質(zhì)的極性差異，采用RP-C18硅膠柱使雜質(zhì)與神經(jīng)酰胺得到有效分離。步驟(2)、收集洗脫液為水_甲醇從2 8體積比至水-甲醇5 5體積比時(shí)所流 出的組分=RP-C18硅膠柱層析采用梯度洗脫，洗脫液為水-甲醇按不同比例配制。更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟(1)所述RP-C18硅膠柱層析，洗脫液流速為1.0ml/ min，每5ml收集一次。更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟(2)所述RP-C18-膠柱層析洗脫液梯度變化為 水-甲醇是1 9-8 2體積比。更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟(2)所述RP-C18硅膠柱層析制備時(shí)，于水-甲醇從 28體積比至水-甲醇55體積比時(shí)收集得到魔芋神經(jīng)酰胺四個(gè)標(biāo)樣。本發(fā)明提供了魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法，將魔芋神經(jīng)酰胺進(jìn)行純化和結(jié)構(gòu)分 析鑒定，制備了魔芋神經(jīng)酰胺的標(biāo)樣，為對(duì)魔芋神經(jīng)酰胺的進(jìn)一步利用打下了良好的基礎(chǔ)， 具有很實(shí)際的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
具體實(shí)施例方式一種魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法，是將純化后的魔芋神經(jīng)酰胺組分II進(jìn)行 RP-C18硅膠柱層析分離，水-甲醇梯度洗脫，洗脫液流速為l.Oml/min，每5ml收集一次。水_甲醇從2 8體積比至水-甲醇5 5體積比處收集得化合物I、II、III、IV。
化合物I、II、III、IV均為白色無(wú)定型粉末狀固體。分別對(duì)化合物I、II、III、IV進(jìn) 行結(jié)構(gòu)解析，得到如下結(jié)論化合物I、II、III、IV的ESI-MS分別顯示m/z 736. 80，746. 72， 792. 81,820. 70，其1HNMR 13CNMR HMBC 1H-1H COSY 譜圖表明化合物 I、II、III、IV為如下結(jié) 構(gòu)其中，化合物I、II、III、IV對(duì)應(yīng)的η值分別為11、13、15、19。四種化合物對(duì)應(yīng)的魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的名稱(chēng)分別為Ι-Ο-β-D-吡喃葡萄糖-(2S，3R，4E，8Z)-2-N-[(2 ‘R) _2_ 羥基-十六碳酰氨 胺]-4，8十八碳二烯；1-0- β -D-吡喃葡萄糖-(2S，3R，4Ε，8Ζ) -2-Ν- [ (2 ‘R) -2-羥基-十八碳酰氨 胺]-4，8十八碳二烯；Ι-Ο-β-D-吡喃葡萄糖-(2S，3R，4E，8Z)-2-N-[(2 ‘R) _2_ 羥基-二十碳酰氨 胺]-4，8十八碳二烯；1-0- β -D-吡喃葡萄糖-(2S，3R，4Ε，8Ζ) -2-Ν- [ (2 ‘R) -2-羥基-二十二碳酰氨胺] 碳酰氨胺]_4，8十八碳二烯。
權(quán)利要求
一種魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法，其特征在于通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)步驟(1)、采用RP C18硅膠柱層析制備標(biāo)樣通過(guò)濕法裝柱，濕法上樣，依據(jù)所分離物質(zhì)的極性差異，采用RP C18硅膠柱使雜質(zhì)與神經(jīng)酰胺得到有效分離；步驟(2)、收集洗脫液為水 甲醇從2∶8體積比至水 甲醇5∶5體積比時(shí)所流出的組分RP C18硅膠柱層析采用梯度洗脫，洗脫液為水 甲醇按不同比例配制。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法，其特征為步驟(1)所述 RP-C18硅膠柱層析，洗脫液流速為l.Oml/min，每5ml收集一次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法，其特征為步驟(2)所述 RP-C18硅膠柱層析洗脫液梯度變化為水-甲醇是1 9-8 2體積比。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法，其特征為步驟(2)所述 RP-C18硅膠柱層析制備時(shí)，于水-甲醇從2 8體積比至水-甲醇5 5體積比時(shí)收集得 到魔芋神經(jīng)酰胺四個(gè)標(biāo)樣。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種魔芋神經(jīng)酰胺標(biāo)樣的制備方法，其主要步驟為步驟(1)、采用RP-C18硅膠柱層析制備標(biāo)樣通過(guò)濕法裝柱，濕法上樣，依據(jù)所分離物質(zhì)的極性差異，采用RP-C18硅膠柱使雜質(zhì)與神經(jīng)酰胺得到有效分離。步驟(2)、收集洗脫液為水-甲醇從2∶8體積比至水-甲醇5∶5體積比時(shí)所流出的組分RP-C18硅膠柱層析采用梯度洗脫，洗脫液為水-甲醇按不同比例配制。本發(fā)明工藝先進(jìn)，操作簡(jiǎn)便，收率高，生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)C07H1/08GK101914119SQ20101025414
公開(kāi)日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月16日
發(fā)明者侯雪, 李獻(xiàn) 申請(qǐng)人:成都希福食品有限公司