專利名稱：一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志呫噸酮類化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物提取純化技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的方法。
背景技術(shù)：
遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia Willd.和卵葉遠(yuǎn)志Polygala sibirica L.的干燥根，主產(chǎn)于山西、陜西、河南、內(nèi)蒙等地，具有益智安神、祛痰消腫等功效，常用于治療心腎不交引起的失眠多夢(mèng)、健忘驚悸、神志恍惚、咳痰不爽、瘡瘍腫毒、乳房腫痛等。其化學(xué)成分主要包括皂苷類、咕噸酮類和糖酯類成分。藥理研究表明，咕噸酮酮類化合物有著非常廣泛的藥理活性，包括利尿、抗微生物、抗病毒、強(qiáng)心、抗抑郁、抗結(jié)核、抗癌等活性。多數(shù)咕噸酮類化合物能夠抑制單胺氧化酶A和B。一些在自然界分布極少的咕噸酮類化合物表現(xiàn)出抗白血病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)鎮(zhèn)靜作用。此外，咕噸酮類化合物的還有抗炎、 抑制脂質(zhì)氧化等作用。咕噸酮類化合物現(xiàn)有的提取富集分離方法主要有溶劑提取、有機(jī)溶劑萃取、柱層析等方法，未見到用雙水相系統(tǒng)富集分離遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的報(bào)道。雙水相萃取(Aqueous two-phase extraction, ATPE)是兩種水溶性不同的聚合物或者一種聚合物和無機(jī)鹽的混合溶液，在一定的濃度下，體系就會(huì)自然分成互不相容的兩相。被分離物質(zhì)進(jìn)入雙水相體系后由于表面性質(zhì)、電荷間作用和各種作用力(如憎水鍵、 氫鍵和離子鍵)等因素的影響，在兩相間的分配系數(shù)不同，導(dǎo)致其在上下相的濃度不同，達(dá)到分離目的。由于雙水相萃取條件較為溫和，不會(huì)導(dǎo)致被分離物質(zhì)的失活，該技術(shù)已應(yīng)用于生物大分子的分離和純化，并且在生物小分子的分離、抗生素提取、中藥中有效成分提取分離、稀有金屬/貴金屬分離等方面的應(yīng)用也取得了進(jìn)展。近幾年有關(guān)雙水相提取天然藥物中有效成分的報(bào)道也逐年增多。甘草酸采用乙醇/磷酸氫二鉀雙水相體系萃取，分配系數(shù)達(dá)到12. 8，回收率可達(dá)98. 3%。選用PEG/磷酸鹽體系在一定溫度、pH條件下萃取銀杏浸取液，主要藥用成分黃酮類化合物進(jìn)入上相，達(dá)到分離目的，最佳條件在25V，PEG分子量在1500左右。天然產(chǎn)物有效成分含量低、難于富集，體系復(fù)雜，大分子與小分子、生命與非生命物質(zhì)共存，特別是存在結(jié)構(gòu)異構(gòu)體等都使分離提純的工作難度加大，ATPE技術(shù)在天然產(chǎn)物的分離純化等方面的研究和開發(fā)是中藥提純技術(shù)領(lǐng)域的一個(gè)重要方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的方法，該方法利用雙水相萃取技術(shù)的特點(diǎn)，生產(chǎn)成本低、操作簡單、可放大工業(yè)化，同時(shí)提高了遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的提取率。本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的方法，其特征在于包括以下步驟(1)提取將遠(yuǎn)志根粉碎，加入60-90%乙醇溶液超聲或加熱回流提取，過濾，得到提取液；(2)大孔樹脂吸附將上述提取液濃縮，得到乙醇浸膏，用蒸餾水溶解，置大孔樹脂柱上，用蒸餾水洗至流出液無色后，再用3-5倍柱床體積50-65%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收試劑得到濃縮液；(3)雙水相萃取取上述濃縮液，加入乙醇和硫酸銨雙水相系統(tǒng)，混勻，分為上、下兩相；(4)乙酸乙酯反萃取取出富含乙醇的上相，加乙酸乙酯、水和氯化鈉，混勻，室溫靜置，分上、下兩相；(5)濃縮干燥取出含有遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的上相，減壓濃縮，真空干燥得到遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物。步驟(2)所述大孔樹脂為D101、AB_8、HPD100等型號(hào)中的一種。步驟C3)所述雙水相萃取中，濃縮液與乙醇體積比為(3 9) 1，硫酸銨加入量為15-20g/100ml (濃縮液與乙醇總體積)；分相溫度為30_50°C，靜置時(shí)間為2_4小時(shí)。步驟(4)所述乙酸乙酯反萃取中，分相溫度為20-30°C，靜置時(shí)間為1-2小時(shí)。采用雙水相體系富集分離遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物，具有以下優(yōu)勢(shì)(1)采用大孔樹脂吸附，對(duì)遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物進(jìn)行初步富集，提高了咕噸酮類化合物的濃度和純度。(2)乙醇-硫酸銨雙水相分相迅速，沒有乳化層，縮短了生產(chǎn)周期。(3)雙水相富集分離既達(dá)到了富集的目的，又濃縮了料液，表現(xiàn)為大量的雜質(zhì)(如親水性物質(zhì)，細(xì)胞碎片等)進(jìn)入下相，咕噸酮類物質(zhì)進(jìn)入上相，上相體較原始處理液減少， 達(dá)到濃縮效果。(4)雙水相體系條件溫和，能耗低，乙醇和硫酸銨易回收利用，不會(huì)造成環(huán)境污染。(5)本發(fā)明方法回收率高，操作簡單、成本低，可放大工業(yè)化。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 (1)遠(yuǎn)志提取液的制備遠(yuǎn)志根粉碎成粗粉，取5kg采用60%乙醇作為提取溶劑， 固液比為1 8，超聲提取40分鐘，提取2次，合并提取液。(2)大孔樹脂吸附濃縮提取液得到乙醇浸膏，用等體積量的蒸餾水溶解，置于 DlOl大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗至流出液無色后，再以4倍柱床體積50%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至原體積的1/5得到濃縮液。(3)雙水相萃取取濃縮液加入硫酸銨和乙醇混勻，使?jié)饪s液與乙醇體積比為 3 1，硫酸銨的質(zhì)量濃度為20%，35°C水浴攪拌30分鐘，然后靜置3小時(shí)分相，上相是含有遠(yuǎn)志咕噸酮的乙醇水相，將下相降溫、結(jié)晶，過濾，所得硫酸銨晶體可供循環(huán)利用。(4)乙酸乙酯反萃取取IOOml上相液加入70ml乙酸乙酯、40ml水和2g氯化鈉， 充分混勻，在25 °C條件下靜置2小時(shí)分相。(5)濃縮與干燥取富含遠(yuǎn)志咕噸酮的乙酸乙酯相，對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮、70°C真空干燥，得到遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物(9. 89g)。實(shí)施例2
(1)遠(yuǎn)志提取液的制備遠(yuǎn)志根粉碎成粗粉，取5kg采用70%乙醇作為提取溶劑， 固液比為1 10，超聲提取30分鐘，提取2次，合并提取液。(2)大孔樹脂吸附濃縮提取液得到乙醇浸膏，用等體積量的蒸餾水溶解，置于 AB-8大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗至流出液無色后，再以5倍柱床體積65%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至原體積的1/6得到濃縮液。(3)雙水相萃取取濃縮液加入硫酸銨和乙醇混勻，使?jié)饪s液與乙醇體積比為 3 1，硫酸銨的質(zhì)量濃度為20%，45°C水浴攪拌30分鐘，然后靜置4小時(shí)分相，上相是含有遠(yuǎn)志咕噸酮的乙醇水相，將下相降溫、結(jié)晶，過濾，所得硫酸銨晶體可供循環(huán)利用。(4)乙酸乙酯反萃取取IOOml止相液加入90ml乙酸乙酯、45ml水和3g氯化鈉， 充分混勻，在30°C條件下靜置1. 5小時(shí)分相。(5)濃縮與干燥取富含遠(yuǎn)志咕噸酮的乙酸乙酯相，對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮、70°C真空干燥，得到遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物(9.46g)。實(shí)施例3 (1)遠(yuǎn)志提取液的制備遠(yuǎn)志根粉碎成粗粉，取5kg采用90%乙醇作為提取溶劑， 固液比為1 6，超聲提取50分鐘，提取2次，合并提取液。(2)大孔樹脂吸附濃縮提取液得到乙醇浸膏，用等體積量的蒸餾水溶解，置于 HPD100大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗至流出液無色后，再以3倍柱床體積60%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至原體積的1/8得到濃縮液。(3)雙水相萃取取濃縮液加入硫酸銨和乙醇混勻，使?jié)饪s液與乙醇體積比為 3 1，硫酸銨的質(zhì)量濃度為20%，5(TC水浴攪拌30分鐘，然后靜置2小時(shí)分相，上相是含有遠(yuǎn)志咕噸酮的乙醇水相，將下相降溫、結(jié)晶，過濾，所得硫酸銨晶體可供循環(huán)利用。(4)乙酸乙酯反萃取取IOOml上相液加入75ml乙酸乙酯、35ml水和2. 5g氯化鈉，充分混勻，在20°C條件下靜置1小時(shí)分相。(5)濃縮與干燥取富含遠(yuǎn)志咕噸酮的乙酸乙酯相，對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮、70°C真空干燥，得到遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物(8.68g)。
權(quán)利要求
1.一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的方法，其特征在于包括以下步驟(1)提取將遠(yuǎn)志根粉碎，加入60-90%乙醇溶液超聲或加熱回流提取，過濾，得到提取液；(2)大孔樹脂吸附將上述提取液濃縮，得到乙醇浸膏，用蒸餾水溶解，置大孔樹脂柱上，用蒸餾水洗至流出液無色后，再用3-5倍柱床體積50-65%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液， 減壓回收試劑得到濃縮液；(3)雙水相萃取取上述濃縮液，加入乙醇和硫酸銨雙水相系統(tǒng)，混勻，分為上、下兩相；(4)乙酸乙酯反萃取取出富含乙醇的上相，加乙酸乙酯、水和氯化鈉，混勻，室溫靜置，分上、下兩相；(5)濃縮干燥取出含有遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的上相，減壓濃縮，真空干燥得到遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的方法，其特征在于步驟(2)所述大孔樹脂為DlOl、AB-8、HPD100等型號(hào)中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的方法，其特征在于步驟C3)所述雙水相萃取中，濃縮液與乙醇體積比為(3 9) 1，硫酸銨加入量為 15-20g/100ml (濃縮液與乙醇總體積)；分相溫度為30_50°C，靜置時(shí)間為2_4小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志咕噸酮類化合物的方法，其特征在于步驟(4)所述乙酸乙酯反萃取中，分相溫度為20-30°C，靜置時(shí)間為1-2小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種雙水相體系純化遠(yuǎn)志呫噸酮類化合物的方法，該方法包括以下步驟將遠(yuǎn)志用60-90％乙醇超聲或加熱回流提取、過濾、濃縮，濃縮液上大孔吸附樹脂柱，50-65％乙醇洗脫，洗脫液濃縮后按比例加入硫酸銨和乙醇雙水相系統(tǒng)，加熱混合均勻，分為上下兩相；下相降溫、結(jié)晶回收硫酸銨晶體，取出富含乙醇的上相，加乙酸乙酯、水和氯化鈉，混合均勻，取含有遠(yuǎn)志呫噸酮類化合物的上相，減壓濃縮，真空干燥得到遠(yuǎn)志呫噸酮類化合物。本發(fā)明采用大孔樹脂分離和雙水相萃取技術(shù)提純遠(yuǎn)志呫噸酮類化合物，工藝操作簡單，為遠(yuǎn)志呫噸酮類化合物的工業(yè)化提供了技術(shù)基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C07D311/86GK102229594SQ20111011797
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司