專利名稱：從鐵籬巴果中提取制備枸橘苷的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及從鐵籬巴果中提取制備枸橘苷的工藝，尤其是一種采用高速逆流色譜技術(shù)分離純化枸橘苷的方法。
背景技術(shù)：
鐵籬巴果為鼠李科植物馬架子/^^itfrtts ramosissimus (Lour. ) Poir.的果實(shí)，具有化瘀止血、活血止痛的功效，該屬植物化學(xué)成分主要有黃酮、生物堿、五環(huán)三萜類。于磊等通過(guò)硅膠、ODS、Sephadex LH-20和大孔吸附樹脂柱色譜等方法，分離出枸橘苷等9個(gè)化合物。枸橘苷(poncirin)為黃酮類化合物，分子式=C28H34O14,分子量594. 56，在柑橘屬植物中也有分離得到。藥理研究表明，枸橘苷與其他黃酮按一定比例組合具有抗氧化作用?，F(xiàn)有文獻(xiàn)對(duì)枸橘苷的藥理研究及提取工藝等方面的研究較少，因此提供一種簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、易于工業(yè)化生產(chǎn)的枸橘苷的提取方法，對(duì)鐵籬巴果及抗氧化藥物的研究開發(fā)具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是將鐵籬巴果提取物用高速逆流色譜法分離純化，制得高純度的枸橘苷。本發(fā)明的技術(shù)方案為將鐵籬巴果用石油醚脫脂，脫脂藥渣用甲醇提取，提取液濃縮后超濾膜過(guò)濾，酸沉、溶劑萃取，所得萃取物采用乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，經(jīng)制備型高速逆流色譜純化得到高純度枸橘苷。本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟
(1)脫脂取鐵籬巴果藥材粉碎，用6-10倍重量的石油醚進(jìn)行脫脂處理2-3次；
(2)將脫脂后的藥渣用相當(dāng)于5-10倍藥材重量的20%-90%甲醇加熱回流提取2-3次， 提取液合并，經(jīng)超濾膜過(guò)濾，濾出液回收甲醇，得濃縮液；
(3)將濃縮液調(diào)pH至2.0-3. 4，靜置Mh，過(guò)濾，棄濾液，沉淀以去離子水洗至洗出液呈中性；
(4)將步驟(3)所得沉淀物加水飽和乙酸乙酯萃取，萃取至上層萃取液色變淡，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮成浸膏；
(5)采用高速逆流色譜進(jìn)行分離純化，配制溶劑系統(tǒng)，使逆流色譜柱中充滿固定相，然后使主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，由進(jìn)樣閥進(jìn)入制備好的樣品溶液，根據(jù)檢測(cè)器圖譜收集枸橘苷流分，濃縮干燥得枸橘苷。步驟(2)中所述超濾膜截留分子量為1000-10000。步驟(5)中所述高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-甲醇-水，兩相溶劑系統(tǒng)配比為(4-10) :(1-2) (2-6)，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相。步驟(5)中所述高速逆流色譜主機(jī)轉(zhuǎn)速為800-900rpm，流動(dòng)相流速為Uml/min。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明采用高速逆流色譜法從鐵籬巴果中分離得到高純度枸橘苷，制備工藝簡(jiǎn)單、純化效率高，為鐵籬巴果中有效成分的提取利用奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
將鐵籬巴果藥材粉碎成粗粉，取^g，加6倍量石油醚進(jìn)行脫脂處理3次，脫脂藥渣用 8倍量60%甲醇加熱回流提取2次，提取液合并后再進(jìn)行超濾(超濾膜孔徑截留分子量為 5000),濾液回收甲醇后，得濃縮液，用5%鹽酸水溶液調(diào)pH至2. 5，靜置Mh，過(guò)濾棄濾液，沉淀以去離子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水飽和乙酸乙酯萃取分散液，至上層萃取液顏色變淡，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮成乙酸乙酯浸膏，備用。將體積比為4:1:3的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，劇烈振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對(duì)其進(jìn)行超聲脫氣30min， 自然冷卻備用；準(zhǔn)確稱量IOOmg乙酸乙酯浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑(各IOml) 中，過(guò)濾，得樣品溶液；將配置好的固定相充滿高速逆流色譜分離柱中，然后啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī)，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為850rpm，將流動(dòng)相以3ml/min的流速泵入，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖收集流分，低溫濃縮干燥得到枸橘苷，其純度為98. 3%。實(shí)施例2:
將鐵籬巴果藥材粉碎成粗粉，取^g，加10倍量石油醚進(jìn)行脫脂處理2次，脫脂藥渣用 6倍量50%甲醇加熱回流提取3次，提取液合并后再進(jìn)行超濾(超濾膜孔徑截留分子量為 10000)，濾液回收甲醇后，得濃縮液，用5%鹽酸水溶液調(diào)PH至2. 0，靜置Mh，過(guò)濾棄濾液， 沉淀以去離子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水飽和乙酸乙酯萃取分散液，至上層萃取液顏色變淡，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮成乙酸乙酯浸膏，備用。將體積比為5:1:2的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，劇烈振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對(duì)其進(jìn)行超聲脫氣30min， 自然冷卻備用；準(zhǔn)確稱量IOOmg乙酸乙酯浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑(各iaiil) 中，過(guò)濾，得樣品溶液；將配置好的固定相充滿高速逆流色譜分離柱中，然后啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī)，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為800rpm，將流動(dòng)相以2ml/min的流速泵入，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖收集流分，低溫濃縮干燥得到枸橘苷，其純度為98. 7%。實(shí)施例3:
將鐵籬巴果藥材粉碎成粗粉，取^g，加8倍量石油醚進(jìn)行脫脂處理3次，脫脂藥渣用 7倍量20%甲醇加熱回流提取2次，提取液合并后再進(jìn)行超濾(超濾膜孔徑截留分子量為 8000)，濾液回收甲醇后，得濃縮液，用5%鹽酸水溶液調(diào)pH至2. 8，靜置Mh，過(guò)濾棄濾液，沉淀以去離子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水飽和乙酸乙酯萃取分散液，至上層萃取液顏色變淡，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮成乙酸乙酯浸膏，備用。將體積比為8:2:4的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，劇烈振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對(duì)其進(jìn)行超聲脫氣30min， 自然冷卻備用；準(zhǔn)確稱量IOOmg乙酸乙酯浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑(各IOml)中，過(guò)濾，得樣品溶液；將配置好的固定相充滿高速逆流色譜分離柱中，然后啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī)，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為SOOrpm，將流動(dòng)相以％il/min的流速泵入，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖收集流分，低溫濃縮干燥得到枸橘苷，其純度為98. 1。實(shí)施例4:
將鐵籬巴果藥材粉碎成粗粉，取^g，加7倍量石油醚進(jìn)行脫脂處理3次，脫脂藥渣用 5倍量90%甲醇加熱回流提取2次，提取液合并后再進(jìn)行超濾(超濾膜孔徑截留分子量為 6000)，濾液回收甲醇后，得濃縮液，用5%鹽酸水溶液調(diào)pH至3. 0，靜置Mh，過(guò)濾棄濾液，沉淀以去離子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水飽和乙酸乙酯萃取分散液，至上層萃取液顏色變淡，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮成乙酸乙酯浸膏，備用。將體積比為10:1:6的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，劇烈振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對(duì)其進(jìn)行超聲脫氣 30min,自然冷卻備用；準(zhǔn)確稱量IOOmg乙酸乙酯浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑(各 8ml)中，過(guò)濾，得樣品溶液；將配置好的固定相充滿高速逆流色譜分離柱中，然后啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī)，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為900rpm，將流動(dòng)相以2ml/min的流速泵入，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖收集流分，低溫濃縮干燥得到枸橘苷，其純度為98. 4%。實(shí)施例5
將鐵籬巴果藥材粉碎成粗粉，取^g，加8倍量石油醚進(jìn)行脫脂處理2次，脫脂藥渣用 10倍量80%甲醇加熱回流提取3次，提取液合并后再進(jìn)行超濾(超濾膜孔徑截留分子量為 1000),濾液回收甲醇后，得濃縮液，用5%鹽酸水溶液調(diào)pH至3. 4，靜置Mh，過(guò)濾棄濾液，沉淀以去離子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水飽和乙酸乙酯萃取分散液，至上層萃取液顏色變淡，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮成乙酸乙酯浸膏，備用。將體積比為6:2:5的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，劇烈振蕩搖勻，使兩相達(dá)到平衡，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，分別對(duì)其進(jìn)行超聲脫氣30min， 自然冷卻備用；準(zhǔn)確稱量IOOmg乙酸乙酯浸膏溶解于等體積的上相和下相溶劑(各15ml) 中，過(guò)濾，得樣品溶液；將配置好的固定相充滿高速逆流色譜分離柱中，然后啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī)，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為850rpm，將流動(dòng)相以lml/min的流速泵入，待柱內(nèi)溶劑體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，取樣品溶液由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖收集流分，低溫濃縮干燥得到枸橘苷，其純度為98. 6%。
權(quán)利要求
1.從鐵籬巴果中提取制備枸橘苷的工藝，其特征在于包括下列步驟(1)脫脂取鐵籬巴果藥材粉碎，用6-10倍重量的石油醚進(jìn)行脫脂處理2-3次；(2)將脫脂后的藥渣用相當(dāng)于5-10倍藥材重量的20%-90%甲醇加熱回流提取2-3次，提取液合并，經(jīng)超濾膜過(guò)濾，濾出液回收甲醇，得濃縮液；(3)將濃縮液調(diào)pH至2. 0-3. 4，靜置Mh，過(guò)濾，棄濾液，沉淀以去離子水洗至洗出液呈中性；(4)將步驟(3)所得沉淀物加水飽和乙酸乙酯萃取，萃取至上層萃取液色變淡，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮成浸膏；(5)采用高速逆流色譜進(jìn)行分離純化，配制溶劑系統(tǒng)，使逆流色譜柱中充滿固定相，然后使主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，由進(jìn)樣閥進(jìn)入制備好的樣品溶液，根據(jù)檢測(cè)器圖譜收集枸橘苷流分，濃縮干燥得枸橘苷。
2.按照權(quán)利要求1所述的從鐵籬巴果中提取制備枸橘苷的工藝，其特征在于步驟(2) 中所述超濾膜截留分子量為1000-10000。
3.按照權(quán)利要求1所述的從鐵籬巴果中提取制備枸橘苷的工藝，其特征在于步驟(5) 中所述高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-甲醇-水，兩相溶劑系統(tǒng)配比為(4-10) (1-2) (2-6)，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相。
4.按照權(quán)利要求1所述的從鐵籬巴果中提取制備枸橘苷的工藝，其特征在于步驟(5) 中所述高速逆流色譜主機(jī)轉(zhuǎn)速為800-900rpm，流動(dòng)相流速為Uml/min。
全文摘要
從鐵籬巴果中提取制備枸橘苷的工藝，化合物純度高于98%。其提取制備工藝是取鐵籬巴果經(jīng)粉碎，脫脂、提取、膜濾、酸沉、萃取、高速逆流色譜純化、濃縮干燥等步驟分離制備枸橘苷。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、工藝穩(wěn)定、產(chǎn)品純度高，且易于規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H17/07GK102276670SQ201110225530
公開日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月8日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司