專利名稱：一種甘氨膽酸的精制方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種甘氨膽酸的精制方法。特別涉及一種采用醇類溶劑和酯類溶劑的混合體系進行重結(jié)晶，結(jié)合濾膜過濾精制甘氨膽酸的方法。
技術背景
甘氨膽酸，(Glycocholic acid), CAS :475-31_0，化學名為 N-(3a, 7a, 12a_ 三羥基-24-羰基膽烷-24-基)-甘氨酸，其結(jié)構(gòu)式如下所示
甘氨膽酸是膽汁酸的主要成分之一，屬于結(jié)合型膽汁酸，其具有乳化性質(zhì)，可使水溶性和脂溶性藥物溶于同一個容器中，例如應用于復合維生素注射液或者注射用復合維生素。因為人體膽汁中本身就含有甘氨膽酸，采用甘氨膽酸/磷脂混合膠束系統(tǒng)溶解脂溶性維生素，是一種生物相容性賦型劑，若用于替代丙二醇和吐溫80和/或吐溫20，則可以解決上述成份對人體，尤其是嬰兒和妊娠婦女的毒性問題。甘氨膽酸一般可用于生化研究及藥用輔料，也有文獻報道，甘氨膽酸對急性和慢性炎癥均有較強的抑制作用而且具有調(diào)節(jié)機體免疫功能的作用。目前國內(nèi)市場上高質(zhì)量的可注射用甘氨膽酸極少，需求量大。
1977年有文獻報道了甘氨膽酸的合成方法，該方法是將膽酸與甘氨酸乙酯鹽酸鹽在縮合劑EEDQ (N —乙氧羰基一 2 —乙氧基一 1，2 —二氫喹啉)作用下進行?；磻玫礁拾蹦懰嵋阴?，再將其水解得到甘氨膽酸(An improved procedure for the synthesis of glycine and taurine conjugates of bile acids. Journal of Lipic Research, 1977， 18:404-407)。該方法制備的甘氨膽酸雜質(zhì)含量較高，達不到供注射用的要求。
一種從牛羊膽汁中提取純化甘氨膽酸的方法為用95%乙醇于膽汁中粗提取，再經(jīng)鹽析、萃取，最后經(jīng)硅膠柱分離提純(趙珍，李培鋒，李慧峰，關紅，李玉娟，牛羊膽汁中甘氨膽酸提取工藝研究，內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學學報，2006 27 (2))。該方法采取的分離提純方法是柱層析，可以保證甘氨膽酸的純度，但是生產(chǎn)批量具有一定的局限性，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。
中國專利CN101817860A中公開了一種甘氨膽酸的制備方法在氮氣保護下，將甘氨酸芐酯鹽酸鹽與膽酸混合于極性溶劑中反應，再經(jīng)硅膠柱分離提純。此方法雖然制備的甘氨膽酸純度較高，但是使用柱層析的方法具有一定的局限性，生產(chǎn)的批量較小，不利于工業(yè)化生產(chǎn)，滿足不了市場的需求。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種甘氨膽酸的精制方法，既可得到高純度的甘氨膽酸， 可用于注射，也利于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明所述的一種甘氨膽酸的精制方法是通過醇類-酯類混合溶劑體系進行重結(jié)晶，結(jié)合濾膜過濾來實現(xiàn)甘氨膽酸的精制。具體技術方案如下將甘氨膽酸粗品在醇類溶劑中溶解，加入活性炭吸附，趁熱用濾膜過濾，濾液中加入酯類溶劑促析，攪拌結(jié)晶，過濾，純化水洗滌，減壓干燥得高質(zhì)量的甘氨膽酸。
本發(fā)明制得的甘氨膽酸純度99. 0%以上，膽酸〈O. 3%，其它單個雜質(zhì)的含量均小于 O. 1%。
本發(fā)明所述的醇類溶劑在混合溶劑重結(jié)晶體系中作為甘氨膽酸的良溶劑，主要用于溶解甘氨膽酸，可選自乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、正丙醇、異丙醇等低級醇類中的一種或幾種。
本發(fā)明所述的濾膜過濾在精制過程中主要用于過濾熱原，提高甘氨膽酸最終澄清度，濾膜材質(zhì)為混合纖維、聚四氟乙烯、聚丙烯膜等。
本發(fā)明所述的酯類溶劑在混合溶劑重結(jié)晶體系中作為甘氨膽酸的促析溶劑，主要用于促進甘氨膽酸析晶，可選自甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸叔丁酯、 乙酸異丙酯等低級脂肪酸酯中的一種或幾種。
根據(jù)本發(fā)明所述，其中醇類溶劑與甘氨膽酸的體積質(zhì)量比(ν/W)為2: f 7:1，優(yōu)選3: f 5:1。
甘氨膽酸的溶解溫度為45_78°C，優(yōu)選55_65°C。
甘氨膽酸的析晶溫度為0_25°C，優(yōu)選10_20°C。
酯類溶劑與甘氨膽酸的體積質(zhì)量比(V/W)為10: f 30:1，優(yōu)選15: f 20:1。
甘氨膽酸與活性炭的用量比(W/W)為20:1 100:1，優(yōu)選40:1-50:1。
濾膜的孔徑為O. 22-0. 8 μ m，優(yōu)選O. 45 μ m。
本發(fā)明所述的甘氨膽酸粗品可以自己制備，也可購買市售級或食品級原料。其他原材料都是常規(guī)使用的，均可從市場購得。
本發(fā)明采用液相色譜法檢測產(chǎn)品純度。
本發(fā)明的所述的精制方法不僅原料易得，精制時間短，操作過程簡單，而且可以得到高純度，并能滿足注射用級別的甘氨膽酸，適于工業(yè)化大生產(chǎn)。
具體實施方式
下列實施例目的在于舉例說明本發(fā)明，并不是對本發(fā)明的范圍和精神作出限制。
實施例1于IOOml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及40ml乙醇，加熱至78°C溶解，加入O. 2g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用 O. 45 μ m濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至500ml反應瓶中，加入200ml乙酸乙酯促析，降溫至10_20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. 6g，收率93%，HPLC含量 99. 5%，膽酸O. 12%，其它最大單雜O. 05%。
實施例2于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1.02%)及140ml乙醇，加熱至45°C溶解，加入1. Og活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至2000ml反應瓶中，加入600ml乙酸乙酯促析，降溫至 10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. 2g,收率91%， HPLC含量99. 6%，膽酸O. 11%，其它最大單雜O. 06%。
實施例3于IOOml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及40ml乙醇，加熱至78°C溶解，加入O. 3g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入400ml乙酸乙酯促析，降溫至 10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品19. Og,收率95. 0%， HPLC含量99. 4%，膽酸O. 13%，其它最大單雜O. 06%。
實施例4于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及140ml乙醇，加熱至45°C溶解，加入O. 8g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用 O. 45 μ m濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入400ml乙酸乙酯促析，降溫至0_5°C 攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. lg，收率90. 5%，HPLC含量99. 4%，膽酸O. 15%，其它最大單雜O. 05%。
實施例5 于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及140ml異丙醇，加熱至45°C溶解，加入O. 8g活性炭，攪拌反應O. 5h， 趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至2000ml反應瓶中，加入600ml乙酸乙酯促析，降溫至10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. 6g，收率93%， HPLC含量99. 7%，膽酸O. 10%,其它最大單雜O. 07%。
實施例6于IOOml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及40ml異丙醇，加熱至78°C溶解，加入O. 2g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入400ml乙酸乙酯促析，降溫至 10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. 2g,收率91%， HPLC含量99. 5%，膽酸O. 17%,其它最大單雜O. 06%。
實施例7于IOOml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%),40ml異丙醇、32ml乙醇，加熱至78°C溶解，加入O. 2g活性炭，攪拌反應 O. 5h，趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入400ml乙酸乙酯促析， 降溫至10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. 4g，收率 92%，HPLC含量99. 7%，膽酸O. 17%，其它最大單雜O. 05%。
實施例8于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及140ml乙醇，加熱至45°C溶解，加入O. 5g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入600ml乙酸乙酯促析，降溫至 10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18.1g,收率90. 5%， HPLC含量99. 5%，膽酸O. 12%，其它最大單雜O. 07%。
實施例9于IOOml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%),40ml乙醇、40ml甲醇，加熱至78°C溶解，加入O. 2g活性炭，攪拌反應O. 5h， 趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入400ml乙酸乙酯促析，降溫至 10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. 5g，收率92. 5%， HPLC含量99. 7%，膽酸O. 18%，其它最大單雜O. 05%。
實施例10于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及72ml乙醇，加熱至65°C溶解，加入O. 4g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 22 μ m濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入200ml乙酸乙酯及200ml乙酸異丙酯促析，降溫至10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品 18. 3g，收率91. 5%，HPLC含量99. 4%，膽酸O. 18%，其它最大單雜O. 06%。
實施例11于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及72ml乙醇，加熱至65°C溶解，加入O. 4g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 22 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入400ml乙酸甲酯促析，降溫至 10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18.1g,收率90. 5%， HPLC含量99. 3%，膽酸O. 18%，其它最大單雜O. 06%。
實施例12于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及60ml甲醇，加熱至55°C溶解，加入O. 4g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入300ml乙酸乙酯促析，降溫至 10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. 8g，收率94%， HPLC含量99. 5%，膽酸O. 15%，其它最大單雜O. 08%。
實施例13于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及72ml正丙醇，加熱至72°C溶解，加入O. 5g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾,濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入300ml乙酸異丙酯促析，降溫至 15-25°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. lg，收率90. 5%， HPLC含量99. 7%，膽酸O. 12%，其它最大單雜O. 05%。
實施例14于250ml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 3%，膽酸2. 8%，其它最大單雜1. 02%)及IOOml乙二醇，加熱至60°C溶解，加入O. 6g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用 O. 8 μ m濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入400ml乙酸乙酯促析，降溫至10_20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. Og,收率90. 0%，HPLC含量99. 6%，膽酸O. 11%，其它最大單雜O. 07%。
實施例15于IOOml反應瓶中加入20. Og甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 8%，膽酸2. 2%，其它最大單雜1. 17%)及60ml異丙醇,加熱至60°C溶解,加入O. 3g活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用O. 45 μ m濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至IOOOml反應瓶中，加入 600ml乙酸叔丁酯促析，降溫至10-20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品18. 5g，收率92. 5%，HPLC含量99. 4%，膽酸O. 15%，其它最大單雜O. 07%。
實施例16于IOL反應瓶中加入2. OKg甘氨膽酸粗品(自制，HPLC含量95. 8%，膽酸2. 2%，其它最大單雜1. 17%)及8L異丙醇，加熱至60°C溶解，加入50. Og活性炭，攪拌反應O. 5h，趁熱用 O. 45 μ m濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至50L反應釜中，加入36L乙酸乙酯促析，降溫至1 0_20°C攪拌結(jié)晶，過濾，濾餅用純化水洗滌，減壓干燥得甘氨膽酸成品1. 87Kg，收率93. 5%，HPLC含量 99. 7%，膽酸O. 12%，其它最大單雜O. 07%。
權利要求
1.一種甘氨膽酸的精制方法，其特征在于將甘氨膽酸粗品溶于醇類溶劑中，加入活性炭吸附，然后用濾膜過濾，再于濾液中加入酯類溶劑析晶，最后過濾，洗滌，干燥得甘氨膽Ife成品。
2.根據(jù)權利要求1所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于醇類溶劑選自乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、正丙醇、異丙醇中的一種或幾種，其中醇類溶劑與甘氨膽酸的體積質(zhì)量比為 2:1 7:1。
3.根據(jù)權利要求2所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于醇類溶劑與甘氨膽酸的體積質(zhì)量比為3:廣5:1。
4.根據(jù)權利要求1所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于甘氨膽酸在醇類溶劑中的溶解溫度為45 78°C。
5.根據(jù)權利要求1所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于甘氨膽酸與活性炭的重量比為 20:1 100:1。
6.根據(jù)權利要求5所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于甘氨膽酸與活性炭的重量比為40:1 50:1。
7.根據(jù)權利要求1所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于酯類溶劑選自甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸叔丁酯、乙酸異丙酯等低級脂肪酸酯中的一種或幾種，其中酯類溶劑與甘氨膽酸的體積質(zhì)量比為10: f 30:1。
8.根據(jù)權利要求7所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于酯類溶劑與甘氨膽酸的體積質(zhì)量比為15: f 20:1。
9.根據(jù)權利要求1所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于析晶溫度為(T25°C。
10.根據(jù)權利要求9所述的甘氨膽酸的精制方法，其特征在于析晶溫度為1(T20°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種甘氨膽酸的精制方法。將甘氨膽酸粗品在醇類溶劑中溶解，加入活性炭吸附，趁熱用濾膜過濾，濾液中加入酯類溶劑促析，攪拌結(jié)晶，過濾，純化水洗滌，減壓干燥得高質(zhì)量的甘氨膽酸。由本發(fā)明方法制得的甘氨膽酸純度99.0%以上，膽酸<0.3%，其它單個雜質(zhì)的含量均小于0.1%，達到注射用要求。本發(fā)明操作簡便，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號C07J41/00GK103012538SQ20111028494
公開日2013年4月3日 申請日期2011年9月23日 優(yōu)先權日2011年9月23日
發(fā)明者裴東, 陳云, 楊乾展 申請人:重慶藥友制藥有限責任公司