專(zhuān)利名稱(chēng)：全人源抗人her2單抗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗人HER2單抗。本發(fā)明特別與高親和力低解離速率的抗人HER2單抗有關(guān)。本發(fā)明的優(yōu)選抗人HER2單抗包含全人源Fc區(qū)和框架區(qū)以及通過(guò)分子進(jìn)化獲取的全人源的輕鏈和/或重鏈可變區(qū)。本發(fā)明還披露了這種全人源抗體組成的藥物組合物在人疾病的治療中的應(yīng)用以及在治療中使用這種全人源抗體的方法。
背景技術(shù)：
人表皮生長(zhǎng)因子受體2 (簡(jiǎn)稱(chēng)HER2)，也稱(chēng)之為HER2/neu、ErbB_2、CD340和pl85， 是一種由表皮生長(zhǎng)因子受體的同源基因HER2/neU編碼的蛋白，它可導(dǎo)致乳腺癌侵襲性顯著提高(Dank Μ. 2001，Orv Hetil. 18 ；142 (46) :2563-8)，在 25 30% 的乳腺癌病人的過(guò)
量表達(dá)常常與基因擴(kuò)增有關(guān)。HER2是ErbB蛋白家族，即由四種結(jié)構(gòu)上相關(guān)的穿膜受體酪氨酸激酶構(gòu)成的表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)中的一員，它可以通過(guò)多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活和分化。該家族包括ErbB-l(也稱(chēng)為表皮生長(zhǎng)因子受體，EGFR)、ErbB-2(在人和嚙齒類(lèi)中也稱(chēng)為 HER2 和 neu)、ErbB-3 (也稱(chēng)為 Her3)和 ErbB-4 (也稱(chēng)為 Her4) (Yeon CH, Pegram MD, 2005， Invest New Drugs. 23(5) :391-409)。人體缺乏ErbB信號(hào)可導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病如多發(fā)性硬化和 Alzheimer 癥(Bublil EM and Yarden Y. 2007，Curr Opin Cell Biol. 19(2) 124-134)。小鼠中ErbB家族中任何成員的丟失都將造成包括肺、皮膚、心臟和大腦等器官的缺陷，從而導(dǎo)致胚胎死亡。ErbB過(guò)量則可導(dǎo)致多種類(lèi)型的實(shí)體瘤。在人的許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)了 ErbB-I和ErbB-2，其信號(hào)過(guò)量可能是這些腫瘤發(fā)展和惡化的關(guān)鍵因子(Cho HS and Leahy DJ,2002, Science,297(5585) :1330-1333)。HER2 的功能HER2是一種位于細(xì)胞膜表面的受體酪氨酸激酶，通常與導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)。它是由HER2/neU基因編碼的，也是一個(gè)已知的原癌基因。HER2是一個(gè)孤立的受體，EGF家族配體中沒(méi)有任何一個(gè)可以激活它。但是，ErbB受體與配體結(jié)合時(shí)可發(fā)生二聚體化，HER2是ErbB家族中其他成員青睞的二聚體化對(duì)象(Olayioye MA, 2001, Breast Cancer Res, 3 (6) :385-389)。HER2 基因是位于人第 17 號(hào)染色體的 17q21_q22 區(qū)域(Coussens L ；Yang—Feng TL, Liao YC,et al, 1985,. Science,230(4730) :1132-1139)。HER2 與癌癥研究發(fā)現(xiàn)，在25 30%的乳腺癌病人中會(huì)發(fā)生HER2基因的擴(kuò)增。這種擴(kuò)增事件不僅是一種孤立的不良預(yù)后因子，也是阿霉素為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療提高療效、Hercetpin治療效果的預(yù)測(cè)因子，還是降低對(duì)激素療法反應(yīng)的監(jiān)測(cè)指標(biāo)(Yeon CH, Pegram MD, 2005, Invest New Drugs, 23 (5) :391-409)。該受體在乳腺癌中的過(guò)量表達(dá)將增加復(fù)發(fā)和不良預(yù)后。由于有預(yù)后和對(duì)Herceptin反應(yīng)預(yù)測(cè)的功能，進(jìn)行HER2/neU檢查是乳腺癌治療中的常規(guī)項(xiàng)目。 該基因在其他腫瘤如卵巢癌、胃癌和侵襲性子宮癌(例如漿液性子宮癌)中也有過(guò)量表達(dá)。HER2與GRB7基因緊密連鎖，因此會(huì)發(fā)生共擴(kuò)增。GRB7也是一個(gè)原癌基因，在乳腺癌、睪丸種系細(xì)胞癌、胃癌和食道癌中是活動(dòng)的。已經(jīng)證明，ER+/HER2+和ER-/HER2+乳腺癌可以從抑制 PI3K/AKT 途徑的藥物獲益(Estrogen Receptor Status of HER2+Breast Cancer Correlates with Response to Anti-HER Therapies. ScienceDaily, May 6, 2010)。已經(jīng)知道HER2的成簇可能在腫瘤發(fā)生上起重要作用(Nagy P, et al，1999，J Cell Sci. 112,1733-1741 ；Rainer Kaufmann, et al，2010，J Microscopy, doi :10.1111/ j. 1365-2818. 2010. 03436. χ)。以HER2為靶點(diǎn)的藥物HER2基因在大約25 30%的乳腺癌中是過(guò)量表達(dá)的或擴(kuò)增的。HER2過(guò)量表達(dá)或擴(kuò)增的乳腺癌病人無(wú)病存活期和總存活期都會(huì)縮短。有證據(jù)表明，HER2蛋白是過(guò)量表達(dá)HER2的腫瘤進(jìn)行抗體治療的獨(dú)特而理想的靶點(diǎn)。以HER2胞外區(qū)的一個(gè)表位為靶點(diǎn)的Here印tin因療效突出，副作用小，已在臨床上大量應(yīng)用(Tokuda Y, 2003, Int J Clin Oncol, 8 (4) :224-9)。臨床前和臨床研究證明，該抗體在單用或與化學(xué)藥物聯(lián)用都有顯著的抗腫瘤活性(Yeon CH, Pegram MD, 2005, Invest New Drugs, 23 (5) :391-409)，對(duì) HER2 過(guò)量表達(dá)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌也有明顯療效。該抗體的作用機(jī)理包括破壞DNA的修復(fù)和誘導(dǎo)ADCC 效應(yīng)(Dank Μ, 2001, Orv Hetil, 142(46) :2563-8)。Here印tin僅僅對(duì)HER2/neu受體過(guò)量表達(dá)的癌癥有效。Hec印tin在與HER2結(jié)合后的作用機(jī)理之一是通過(guò)增加P27來(lái)阻止細(xì)胞的分化(XF Le，F(xiàn)ranz Pruefer, Robert Bast, 2005, Cell Cycle,4(1) :87-95)。HER2蛋白的表達(dá)是受雌激素受體調(diào)控的。雌二醇和三苯氧胺可通過(guò)雌激素受體正常下調(diào)HER2的表達(dá)。但是，當(dāng)共激活因子AIB-3超過(guò)PAX2 時(shí)，則在三苯氧胺作用下上調(diào)HER2的表達(dá)，從而導(dǎo)致抗三苯氧胺乳腺癌(Hurtado A, Holmes ΚΑ, Geistlinger TR,et al，2008，Nature，456(7222) :663-666)。Herceptin不僅對(duì)HER2陽(yáng)性的乳腺癌有效果顯著，對(duì)侵襲性子宮癌等也有療效。 例如，抗HER2單抗Here印tin已被FDA批準(zhǔn)用于治療HER2過(guò)量表達(dá)的乳腺癌和轉(zhuǎn)移性胃癌，并正在研究用于其他癌癥的可能性(Loredana Vecchione, et al. k 2009，Expert Opinion on Investigational Drugs, 18 (7) :945-955)，在治療子宮乳頭狀漿液性腺癌上
也獲得一定療效。另一個(gè)以HER2為靶點(diǎn)的抗體藥物是Pertuzumab單抗(de Bono, et al，2007，J Clin Onco, 25 (3) =257-262)。該抗體可通過(guò)抑制HER2和HER3受體的二聚化來(lái)抑制腫瘤的生長(zhǎng)，目前已在臨床后期。它通過(guò)與HER2結(jié)合來(lái)抑制HER2與其他HER受體的二聚體化。 有人認(rèn)為，二聚體化可導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)減緩?？笻ER2抗體治療包括單獨(dú)注射抗人HER2抗體或與其他抗體或化學(xué)治療劑聯(lián)用。盡管對(duì)HER2在乳腺癌發(fā)展中的實(shí)際功能和機(jī)理尚不明了，但它仍然是控制或者殺死HER2陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的重要靶點(diǎn)。特別是，表達(dá)HER2的腫瘤細(xì)胞，例如乳腺癌，使其成為抗體療法的重要靶點(diǎn)。然而，至今已經(jīng)獲得的結(jié)果在支持HER2是乳腺癌免疫療法的有用靶點(diǎn)的同時(shí)，由于仍有HAMA或HACA反應(yīng)且劑量高至440mg/劑量，因注射間隔短需要頻繁注射，現(xiàn)有的人源化抗體還不是十分理想的治療劑。因此，在抗HER2抗體治療方面需要更為有效的能夠預(yù)防和治療多種與HER2相關(guān)的疾病(包括但不限于乳腺癌)方面需要更好的治療性抗體。PEG化是一種改進(jìn)蛋白特性的技術(shù)。共價(jià)結(jié)合到藥物或蛋白分子上的PEG可以“遮蔽”這些制劑，使其免疫原性和抗原性降低，免受受體免疫系統(tǒng)的攻擊，從而增加其在溶液中的流體動(dòng)力學(xué)體積，并可通過(guò)降低腎排除延長(zhǎng)其在循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期。PEG化還可以給疏水藥物和蛋白提供水溶性。因此，PEG化可用于改善抗體，尤其是scFv和Fab這種半衰期短的分子的特性。我們所需要的抗人HER2單抗應(yīng)當(dāng)具有更高的親和力和低解離速率，使接受治療的乳腺癌病人不易復(fù)發(fā)，注射到人體后不引起或極少引起HAMA或HACA反應(yīng)，在循環(huán)系統(tǒng)中半衰期長(zhǎng)，從而延長(zhǎng)注射間隔，降低治療費(fèi)用。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明概述本發(fā)明提供了全人源抗人HER2單抗的氨基酸序列與應(yīng)用。特別是，本發(fā)明的這種分子對(duì)人HER2分子具有高親和力和低解離速率。本發(fā)明中，所述抗體分子的重鏈和輕鏈?zhǔn)侨嗽吹?，盡管嵌合的或人源化的也可以使用，但是用于人體時(shí)，全人源的可以避免很多副作用，例如HAMA和HACA反應(yīng)引起的那些副作用。本發(fā)明的某些實(shí)施例提供了包括抗人HER2單抗分子的組合物，所述分子包含 (a) 一個(gè)包含 Fc 片段和 SEQ ID NO =USEQ ID NO :3、SEQ ID NO 5 或 SEQ ID NO 7 所示的氨基酸序列等部分構(gòu)成的完整的或不完整的輕鏈；和(b) —個(gè)由Fc片段和SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 4,SEQ ID NO :6或SEQ ID NO :8所示的氨基酸序列等部分構(gòu)成的完整的或不完整的輕鏈。本發(fā)明的抗人HER2單抗分子包括重鏈和輕鏈，所述輕鏈包含如SEQ ID NO =USEQ ID NO :3、SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 7所示氨基酸序列或其一部分，所述重鏈包含如SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6或SEQ ID NO 8所示的氨基酸序列或其一部分。本發(fā)明的優(yōu)選抗人HER2單抗包含全人源Fc區(qū)和框架區(qū)以及通過(guò)分子進(jìn)化獲取的全人源的輕鏈和/或重鏈可變區(qū)。本發(fā)明中的輕鏈和重鏈的框架區(qū)都是全人源的，其框架區(qū)來(lái)自人IgA、IgD、IgE、 IgG或IgM亞型；優(yōu)選的是來(lái)自人IgGl，最優(yōu)選的是來(lái)自IgGl kappa。本發(fā)明中，重鏈和輕鏈的Fc區(qū)都是全人源的，其Fc區(qū)來(lái)自人IgA、IgD、IgE、IgG 或IgM亞型，優(yōu)選的是人IgGl。本發(fā)明所述抗體分子的Fc可以是天然的，也可以是修飾過(guò)的。所述Fc區(qū)可以是采用任何有效的基因工程方法或其他方法改造過(guò)的，其效應(yīng)功能得到提高或降低的變異體。本發(fā)明的全人源框架和Fc區(qū)是直接或間接從人體得到的。所述的直接方法包括但不限于基因組DNA克隆、cDNA、cDNA文庫(kù)。所述的間接方法包括但不限于根據(jù)包括但不限于GenBank或其他出版物提供的生物信息為基礎(chǔ)部分合成或完全從頭合成完整的DNA。 DNA合成技術(shù)包括但不限于以PCR為基礎(chǔ)的DNA合成方法。在某些實(shí)施例中，所述抗人HER2抗體分子包括全長(zhǎng)分子或其一個(gè)片段(例如Fv、 Fab、F(ab)2等。在特定實(shí)施例中，所述抗人HER2抗體分子包含一個(gè)單域(即⑶R)、單鏈Fv、 Fab 或 F(ab)2 等。在某些實(shí)施例中，輕鏈包括全人源框架。在另一些實(shí)施例中，輕鏈可變區(qū)包含一種人源的種系框架。在特定的實(shí)施例中，所述輕鏈包含SEQ ID NO 1, SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :5或SEQ ID NO :7所示的氨基酸序列或其一部分；在特定的實(shí)施例中，重鏈可變區(qū)包含人的種系框架區(qū)。在另外一些實(shí)施例中，所述重鏈包含如SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :4、SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 8所示的氨基酸序列或其一部分。在某些情況下，所述抗人HER2抗體分子可以是為延長(zhǎng)其在循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期用化學(xué)方法進(jìn)行了 PEG修飾的。PEG修飾是通過(guò)活化scFv、Fab或F(ab)2分子上截短的鉸鏈區(qū)的一個(gè)氨基酸殘基實(shí)現(xiàn)的，方法是Chapman AP等的論文中描述的(PEG)-Iysyl maleimide 方案(Chapman AP, et al, 1999, Nature Biotechnology，17 :780-783)。其他替代方法的細(xì)節(jié)可以在許多出版物中找到，例如Knight DM, et al，2004，Platelets, 15 (7) 409-18 和美國(guó)專(zhuān)利 US5824784。在某些實(shí)施例中，所述抗人HER2單抗分子包含由輕鏈和重鏈組成的Fab分子。所述輕鏈包括SEQ ID NO =USEQ ID NO :3、SEQ ID NO :5或SEQ ID NO :7所示的氨基酸序列， 所述重鏈包括SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 8所示的氨基酸序列。在某些實(shí)施例中，所述抗人HER2抗體分子包含一種Fab，并進(jìn)一步包含完整的Fc 區(qū)，從而形成全長(zhǎng)的單抗分子，或者進(jìn)一步包含F(xiàn)c的一部分，從而形成不完整的單抗分子。此外，F(xiàn)c區(qū)應(yīng)當(dāng)具有補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒作用(CDC)和抗體依賴(lài)的細(xì)胞毒作用 (ADCC)。這些功能可以通過(guò)氨基酸替換進(jìn)行修飾，以減少或消除或增強(qiáng)其效應(yīng)功能。本發(fā)明的抗人HER2抗體分子是在真核或原核受體細(xì)胞中表達(dá)的。在某些實(shí)施例中，編碼輕鏈和/或重鏈的核酸序列包含在一種質(zhì)?；蚱渌磉_(dá)載體中。本發(fā)明提供了在治療中使用這種抗體的方法。這些方法包括(1) 一種包含本發(fā)明所述抗人HER2抗體分子的藥物組合物。( 對(duì)客體施用這種藥物組合物。所述客體是指具有本品適應(yīng)癥癥狀的病人。在某些實(shí)施例中，所述適應(yīng)癥可從以下疾病中選擇①HER2 陽(yáng)性乳腺癌；②其他與HER2有關(guān)的疾病，例如HER2陽(yáng)性的卵巢癌、胃癌、子宮癌。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了抗人HER2單抗分子。特別是，本發(fā)明提供了具有高親和力和低解離速率的抗人HER2單抗分子。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的所述抗人HER2單抗分子由具有全人源框架的輕鏈和/或重鏈組成的。為方便描述，本發(fā)明就此內(nèi)容分成以下幾方面進(jìn)行描述。 I.抗人HER2單抗分子；II.制備抗人HER2單抗分子；III.用于治療的配方和使用方法；以及IV.抗人HER2抗體分子的其他用途。I.抗人HER2抗體分子本發(fā)明的單抗可以用多種技術(shù)獲得，包括但不限于Kohler和Milstein (1975， Nature256 495)發(fā)表的標(biāo)準(zhǔn)的雜交瘤技術(shù)。盡管原則上這一技術(shù)是受偏愛(ài)的，但其他獲得單抗的技術(shù)也可以應(yīng)用，例如轉(zhuǎn)基因小鼠或雜交瘤技術(shù)。小鼠細(xì)胞雜交瘤技術(shù)已經(jīng)十分成熟，免疫和融合伙伴已經(jīng)十分清楚。但是，用小鼠或其他非人動(dòng)物雜交瘤產(chǎn)生的抗體會(huì)引起 HAMA反應(yīng)，從而導(dǎo)致用于人體疾病治療時(shí)會(huì)引起副作用。以這些抗體為基礎(chǔ)獲得的嵌合的或人源化的單抗用于人體時(shí)仍然能夠引起HACA反應(yīng)，從而導(dǎo)致類(lèi)似的免疫反應(yīng)，盡管比原型分子輕微。全人源雜交瘤技術(shù)仍然處于開(kāi)發(fā)狀態(tài)，尚不足以獲得用于人類(lèi)疾病治療的單抗。
對(duì)于人類(lèi)疾病治療來(lái)說(shuō)，需要全人源抗體以減少或消除引起副作用的HAMA或 HACA反應(yīng)。盡管轉(zhuǎn)基因小鼠已經(jīng)有很成功的記錄，其他技術(shù)也是可以選擇的。抗體庫(kù)技術(shù)，特別是由CAT及其他機(jī)構(gòu)建立的全人源抗體庫(kù)技術(shù)就是其中一種值得考慮的選擇。CAT建立的技術(shù)在一些治療性抗體的開(kāi)發(fā)上獲得了某種程度的成功，引起了國(guó)際上的關(guān)注，但是它依然有非常明顯的問(wèn)題，即獲得高親和力scFv分子的幾率很低。這就需要對(duì)該技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)，以滿足治療性抗體的需要。本發(fā)明對(duì)現(xiàn)有抗體庫(kù)技術(shù)的最重要的改進(jìn)有(1)用3000位來(lái)自于不同民族和地區(qū)的健康成年人血樣構(gòu)建了超大規(guī)模全人源天然Fab抗體庫(kù)，稱(chēng)之為HuLib。顯然，與已發(fā)表的抗體庫(kù)相比，該抗體庫(kù)具有更豐富的遺傳變異。對(duì)于熟知本領(lǐng)域的人員來(lái)說(shuō)，不難理解這將大大提高遺傳復(fù)雜性和通過(guò)淘篩或其他方法獲得高親和力Fab分子的可能性。此處可以使用的其他抗體庫(kù)可以是合成的或部分合成的，也可以是scFv，起始材料也可以是其他非人動(dòng)物，例如小鼠。( 為了提高親和力和改變獲得的Fab分子親和力以外的其他性狀以滿足治療的需要，采用了分子進(jìn)化技術(shù)。通過(guò)分子進(jìn)化改進(jìn)的分子可以借助哺乳動(dòng)物細(xì)胞、 酵母菌細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞進(jìn)行生產(chǎn)。本發(fā)明中的原型Fab分子是用人HER2作為抗原在上述抗體庫(kù)進(jìn)行淘篩獲得的，它將被用做后續(xù)分子進(jìn)化的原型分子以獲得親和力等技術(shù)指標(biāo)達(dá)到治療性藥物要求的候選單抗。本發(fā)明的分子進(jìn)化技術(shù)是通過(guò)PCR引入突變的，它包括(1)關(guān)鍵氨基酸(KA)掃描。KA掃描被用來(lái)在人工進(jìn)化之前檢定最有意義、最有可能獲得有用突變體的位點(diǎn)，以減少無(wú)效突變。KA掃描是檢定可以通過(guò)任何可能的突變方案并通過(guò)親和力測(cè)定獲得有效突變體的氨基酸位點(diǎn)的過(guò)程。若一個(gè)具有一個(gè)特定氨基酸位點(diǎn)突變的突變子的親和力發(fā)生了變化，該位點(diǎn)就是有用的突變位點(diǎn)，反之亦然。基于這樣的掃描方法就可以確定有效的和無(wú)效的突變位點(diǎn)，并可借助Cunningham和Wells (1998，Science, 244 :1081-1085)的方法在設(shè)計(jì)突變方案之前對(duì)各位點(diǎn)進(jìn)行分類(lèi)。借此可以大大簡(jiǎn)化突變?cè)O(shè)計(jì)的數(shù)據(jù)處理，并減少甚至避免無(wú)效突變，這又使突變后亞庫(kù)的構(gòu)建和淘篩大大簡(jiǎn)化。( 突變引物設(shè)計(jì)。突變引物設(shè)計(jì)是這一技術(shù)中獲得足夠數(shù)量的有用突變的關(guān)鍵步驟，本發(fā)明中采用了 GCR引物設(shè)計(jì)方案，詳細(xì)情況見(jiàn)PCT/CN2009/074839。本發(fā)明中所述的目標(biāo)區(qū)域(即擬突變的區(qū)域)是一個(gè)抗體分子的CDR區(qū)，優(yōu)先選擇的是輕鏈和重鏈的CDR3。本發(fā)明中，所述的隨機(jī)突變優(yōu)先選擇的是在每一個(gè)有用突變位點(diǎn)以19種或20種天然氨基酸進(jìn)行飽和隨機(jī)突變。( 此外，根據(jù) Kabat計(jì)數(shù)法確定的目標(biāo)CDR的側(cè)翼序列也有一些氨基酸對(duì)于產(chǎn)生對(duì)親和力有意義的突變子是重要的，至少在某些情況下，某種程度上是這樣。因此，KA掃描應(yīng)當(dāng)覆蓋CDR及其側(cè)翼氨基酸以獲得更廣泛的親和力改善的變異。在本發(fā)明，有用的氨基酸位點(diǎn)可以用本領(lǐng)域熟知的方法突變?yōu)殡S機(jī)氨基酸或特定的氨基酸。突變?yōu)閿M定的氨基酸序列可以通過(guò)改變編碼該氨基酸的核酸序列來(lái)實(shí)現(xiàn)。這種編碼在特定CDR區(qū)具有一個(gè)或多個(gè)突變的突變子的核酸分子可以用本領(lǐng)域熟知的方法獲得。所述的突變方法包括但不限于對(duì)已經(jīng)提前制備的編碼CDR區(qū)的核酸進(jìn)行定點(diǎn)突變、寡核苷酸介導(dǎo)的突變、位點(diǎn)特異性突變或隨機(jī)PCR突變、表達(dá)框突變等。制備這種取代突變子的一種優(yōu)選方法是定點(diǎn)突變。這一技術(shù)在本領(lǐng)域是廣為熟知的(例如Carter等，1985，NAR， 13 =4431-4443 和 Kunkel 等，1987，PNAS，82 :488-492)。以 PCR 為基礎(chǔ)的突變方法，其突變核苷酸被置入到了引物中，從而使相應(yīng)的PCR產(chǎn)物帶有突變，這也是可達(dá)到此目的的一種優(yōu)選的方法，詳細(xì)情況可參考Vallette等，1989，NAR，723-733。本發(fā)明中最佳的突變方法是用根據(jù)GCR方法或其他可用的方法設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR在特定的位點(diǎn)進(jìn)行隨機(jī)突變。必要時(shí)可以同時(shí)對(duì)一個(gè)以上的位點(diǎn)進(jìn)行突變從而獲得具有多個(gè)突變的突變子。本發(fā)明采用Kabat 方法編碼各個(gè) CDR 區(qū)(EA 等，1991，Sequences of proteins of immunological interest,5th ed. U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)。在某些實(shí)施例中，抗人HER2單抗分子由一條全人源輕鏈和一條全人源重鏈組成。 對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員，不難理解當(dāng)本發(fā)明的抗人HER2單抗分子用于人體治療疾病時(shí)將很少或沒(méi)有免疫反應(yīng)。本發(fā)明的某些實(shí)施例中，抗人HER2單抗分子帶有Fc區(qū)，其優(yōu)選來(lái)源是直接從人種系或通過(guò)其他途徑例如全長(zhǎng)DNA合成、人基因組庫(kù)等獲得。本發(fā)明提供親和力高、解離速率低的抗人HER2單抗，該單抗在低劑量下是有效的。本領(lǐng)域技術(shù)人員不難理解，本發(fā)明的抗人HER2單抗分子特別適合用于人體疾病的治療，它不像帶有鼠源成分的嵌合型抗人HER2單抗分子(例如Rituxan)那樣容易引發(fā)HACA反應(yīng)。本發(fā)明所述的⑶R可以與任何類(lèi)型的框架區(qū)整合為有功能的scFv、Fab和/或進(jìn)一步與Fc區(qū)整合從而形成有功能的全長(zhǎng)抗體分子。優(yōu)選的CDR區(qū)與全人源框架區(qū)或其亞區(qū)和種系的或經(jīng)過(guò)修飾的Fc區(qū)進(jìn)行整合。可以用于與本發(fā)明的CDR區(qū)整合的全人源框架包括但不限于K0L、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY和P0M(見(jiàn)(I)Kabat et al，1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest,US Department of Health and Human Services, and(2)NIH, USA ；and Wu et al, 1970, J Exp Med 132:211-250)。II.產(chǎn)生結(jié)合HER2分子的方法本發(fā)明的抗體或抗體片段可以通過(guò)輕鏈和重鏈基因在受體細(xì)胞中的重組表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。所述受體細(xì)胞可以是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，也可以是酵母或細(xì)菌細(xì)胞。本發(fā)明中輕鏈和重鏈的表達(dá)可以通過(guò)瞬時(shí)或穩(wěn)定表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。兩種表達(dá)策略都包括用一種或多種帶有編碼抗體輕鏈和重鏈的DNA片段的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染(哺乳動(dòng)物和酵母系統(tǒng))或轉(zhuǎn)化(細(xì)菌系統(tǒng))受體細(xì)胞，從而使輕鏈和重鏈在受體細(xì)胞中表達(dá)，優(yōu)選的表達(dá)方式是分泌到培養(yǎng)基中，可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的層析等方法從中回收抗體。標(biāo)準(zhǔn)的重組 DNA方法可以有效地用于輕鏈和重鏈基因的獲得、克隆至表達(dá)載體以及引入到受體細(xì)胞。本發(fā)明中在分子進(jìn)化之前或之后通過(guò)淘篩獲得的抗體分子是Fab形式的。這種形式可以通過(guò)本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的基因工程技術(shù)方便地進(jìn)一步轉(zhuǎn)換成scFv、全長(zhǎng)抗體或其他形式。本發(fā)明中，一旦通過(guò)上述方法獲得了編碼所需VL和VH區(qū)的DNA片段，就可以用標(biāo)準(zhǔn)基因工程方法進(jìn)一步轉(zhuǎn)換成全長(zhǎng)的抗體輕鏈和重鏈基因、Fab片段基因或scFv基因。為獲得全長(zhǎng)輕鏈基因，可以把編碼VL區(qū)的DNA整合到人輕鏈恒定區(qū)。優(yōu)先選擇的是人K或λ恒定區(qū)，最優(yōu)先選擇的是人κ恒定區(qū)。為了獲得全長(zhǎng)重鏈基因，可以把編碼 VH區(qū)的DNA整合到重鏈的恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)可以從以下幾種中選擇，IgG，、IgA、IgE、IgM 或IgD。優(yōu)先選擇的是IgGl IgG4，最優(yōu)先選擇IgGl(Y)的恒定區(qū)。
為了獲得單鏈Fv基因，可以用PCR方法從上述Fab分子進(jìn)一步獲得VH-和VL-DNA 編碼區(qū)，然后用(Gly4Ser)3編碼區(qū)作Linker把兩個(gè)片段連接成一個(gè)完整分子，使得所述VH 和VL序列可以用McCafferty等(1990，Nature, 348 :552-554)描述的方法以單鏈Fv蛋白的方式在E. coli中表達(dá)。為了表達(dá)本發(fā)明所述的抗體或抗體的片段，可以把其相應(yīng)的輕鏈和重鏈編碼序列插入到表達(dá)載體的轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列之間。本發(fā)明所述的表達(dá)載體包含調(diào)控序列如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等。所述的表達(dá)載體及其控制序列應(yīng)當(dāng)與受體細(xì)胞兼容。編碼輕鏈和重鏈的基因可以分別插入到兩個(gè)獨(dú)立的載體，也可以插入到同一個(gè)載體。所述表達(dá)載體可以預(yù)置了恒定區(qū)，也可以不預(yù)置恒定區(qū)。如果一個(gè)抗體基因只含有可變區(qū)，應(yīng)當(dāng)使用預(yù)置了恒定區(qū)的表達(dá)載體。除了轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控序列，本發(fā)明的表達(dá)載體還含有(1)在每一個(gè)表達(dá)框有一個(gè)信號(hào)肽序列，它可以促進(jìn)抗體從受體細(xì)胞分泌到培養(yǎng)基中；( 至少一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；(3) 一個(gè)或多個(gè)選擇標(biāo)記基因，借此可方便地對(duì)引入了表達(dá)載體的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選。典型的選擇標(biāo)記基因可為受體細(xì)胞提供抗性，例如細(xì)菌對(duì)抗生素的抗性，哺乳動(dòng)物細(xì)胞或其他受體細(xì)胞對(duì)G418、潮霉素和MTX等的抗性。所有這些信息對(duì)本領(lǐng)域的人員都已經(jīng)廣為熟知。 優(yōu)選的用于本發(fā)明的受體細(xì)胞包括具有或不具有DHFR的CHO細(xì)胞系、HEK293細(xì)胞系?？贵w的表達(dá)是通過(guò)培養(yǎng)攜帶有上述表達(dá)載體的受體細(xì)胞，然后對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化進(jìn)行的。本發(fā)明的受體細(xì)胞也可以用來(lái)生產(chǎn)截短的抗體片段，如Fab或scFv。為此目的，盡管哺乳動(dòng)物或其他受體細(xì)胞也可以使用，但以E. coli為代表的細(xì)菌是優(yōu)先選擇的受體細(xì)胞。本發(fā)明中抗體或抗體片段的回收和純化主要包括(1)對(duì)樣品進(jìn)行調(diào)適，即為純化做準(zhǔn)備。首先要去除細(xì)胞、細(xì)胞碎片、脂質(zhì)和凝聚物。為此，可先離心，然后0.45 μ m過(guò)濾的方法。( 層析，包括但不限于親和、離子交換、分子篩的等層析方法。在有些情況下，超濾或透析也可選用。本發(fā)明優(yōu)先選擇的純化方法是Protein A/G親和后在目標(biāo)抗體可結(jié)合到柱子上、陰離子可穿過(guò)的低PH下進(jìn)行陽(yáng)離子交換層析。也可以在抗體分子可穿過(guò)，但陰離子可結(jié)合到柱子上的高PH下用陰離子層析。在離子交換層析中，許多具有不同等電點(diǎn)的雜蛋白可以被去除。(3)如有必要，可用分子篩對(duì)已經(jīng)獲得的原液進(jìn)行進(jìn)一步純化。為獲得高純度的單抗，本發(fā)明中在過(guò)濾后經(jīng)過(guò)GE HealthCare生產(chǎn)的單抗 selectSuRe, Capto S和Capto Q進(jìn)行純化。為建立更有效的方法，也可以使用包括單抗 selectSuRe和CaptoA dhere兩種組分的兩步法。III.制劑及其應(yīng)用本發(fā)明的抗人HER2單抗，包括全長(zhǎng)的和截短的，都是治療或診斷與HER2相關(guān)的人體疾病的有用材料。如上所述，抗人HER2單抗可用于治療人乳腺癌以及其他HER2陽(yáng)性疾病，例如卵巢癌、胃癌、子宮癌。熟知本領(lǐng)域的人會(huì)知道，與各種放射性或非放射性標(biāo)記物偶聯(lián)的抗人HER2對(duì)于診斷和治療是有用的。可用于此目的放射性標(biāo)記物包括但不限于131I、125I、"Tc和9°Y，可用于此目地的非放射標(biāo)記物包括但不限于酶(例如HRP、AP等)、熒光染料、毒素等。在優(yōu)選的案例中，接受治療的客體是非免疫抑制的(如SLE和RA病人)。盡管機(jī)理仍然不清楚，但本領(lǐng)域的技術(shù)人員很清楚，本發(fā)明的抗人HER2抗體分子引起HACA反應(yīng)的可能性比以前知道的抗人HER2抗體要低很多，特別是對(duì)非免疫抑制的病人來(lái)說(shuō)更是如此。因此，非免疫抑制的病人可以不用過(guò)分顧忌引起副作用的HACA反應(yīng)。此外，本發(fā)明的抗體分子的親和能力顯著提高，因此其有效劑量可明顯降低，這進(jìn)一步避免了可能的HACA反應(yīng)。本發(fā)明的抗人HER2單抗分子可以與包括但不限于化療或放療等其他抗腫瘤治療方法聯(lián)用，在某些情況下，也可以與一些細(xì)胞因子，如G-CSF聯(lián)用。本發(fā)明的抗人HER2抗體分子可以制備成適于給病人使用的劑型，其含有一種人 HER2結(jié)合分子，例如抗體或抗體片段，和一種或多種作為醫(yī)藥可接受的載體，例如溶劑、分散介質(zhì)、包裹劑、抗生素、抗真菌物質(zhì)、等滲物質(zhì)、減緩吸收物質(zhì)以及其他的生理學(xué)上能接受的物質(zhì)。可接受的載體物質(zhì)包括以下一種或多種水、鹽、磷酸鹽緩沖液、葡聚糖、甘油、乙醇等，可單用或組合使用。優(yōu)選的等滲劑是糖、聚乙醇如甘露醇、山梨醇，也可以是氯化鈉。最優(yōu)先選擇的等滲劑是海藻糖。所述載體可進(jìn)一步含有微量輔助物質(zhì)，如潤(rùn)濕劑、乳化劑、防腐劑或緩沖液，這些物質(zhì)有助于提高所述分子的貨架期或有效性。本發(fā)明的組分可以形成多種多樣的形式，例如注射或輸液、分散液或懸浮液等。本發(fā)明的優(yōu)選方式是注射液或輸液。IV.抗人HER2單抗的其他應(yīng)用本發(fā)明的抗人HER2單抗可用于樣品中HER2定性或定量免疫檢測(cè)。免疫檢測(cè)是一種檢測(cè)在含有復(fù)雜混合物的溶液中是某種物質(zhì)是否存在或濃度的方法。除了結(jié)合的特異性夕卜，所有免疫檢測(cè)的主要共同特點(diǎn)是可產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。當(dāng)今，多數(shù)免疫檢測(cè)方法都依賴(lài)于與可測(cè)標(biāo)記相關(guān)的分析試劑。本發(fā)明可用的標(biāo)記可以從以下物質(zhì)中選擇放射性同位素、 酶、熒光物質(zhì)、磷光物質(zhì)和合學(xué)發(fā)光染料、磁性顆粒、染料、金和銀等的膠體、金屬螯合劑、輔酶等。本發(fā)明中優(yōu)選方案是酶(例如HRP和AP)，以及熒光染料。其中最選的是HRP和AP 等酶。本領(lǐng)域中的許多檢測(cè)方法都是廣為熟知并在臨床或科學(xué)研究中廣泛應(yīng)用，例如疾病檢測(cè)、生物化學(xué)研究等。


圖1是Fab表達(dá)載體pGPIO結(jié)構(gòu)示意圖。其中，Plac是在E. coli中表達(dá)的啟動(dòng)子，ompA和pelB是信號(hào)肽編碼序列，GPIII是噬菌體尾部蛋白GPIII的編碼序列，MCSl和 MCS2是Fab輕鏈和重鏈的克隆位點(diǎn)。圖2是全長(zhǎng)抗體分子在哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如CHO、HEK293等)瞬時(shí)或穩(wěn)定表達(dá)的雙元表達(dá)載體PGP6C構(gòu)建過(guò)程及結(jié)構(gòu)示意圖。為了在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)抗體的輕鏈和重鏈，用如下方法構(gòu)建了雙表達(dá)框表達(dá)載體。(1)用PCR為基礎(chǔ)的全基因合成方法(Xiong AS 等，2004，NAR，32 (12) :e98.)按照 GenBank Accession No. AB608262. 1 序列資料合成人 IgGl 輕鏈(Kappa)恒定區(qū) CL，5'-增加多克隆位點(diǎn) Pstl/Nhel/Bglll/EcoRI/EcoRV/ XhoI, 3'-端增加SV40 poly A信號(hào)編碼區(qū)(簡(jiǎn)寫(xiě)為pASV40)5'-端22個(gè)堿基(以 pCI-Neo為模板)，以便于通過(guò)重疊PCR與Pcmv片段進(jìn)行拼接。片段長(zhǎng)度為34^p。(2)以 P3 (ttccctttagtgagggtt aatg, pASV405 ‘ _ 端弓丨物區(qū))禾口 P4 (ccggatcgatccttatcggattt/ ACCACATTTGTAG AGGTTTTACTTG, Pcmv 3 ‘-端引物區(qū) /pA 5 ‘-端引物區(qū))為引物，pCI-Neo為模板擴(kuò)增pASV40片段，長(zhǎng)度為^^p。以Pl (ctgcag (PstI)gctagcagatctgaattc gatatcctcgag，多克隆位點(diǎn)_CL片段5_端引物區(qū))和P4為引物進(jìn)行重疊PCR對(duì)上述兩個(gè)片段拼接，獲得多克隆位點(diǎn)-CL-pA片段，長(zhǎng)度為618bp。(3)以 P5 (caagtaaaacctctacaaatgtggta/aaatccgataaggatcgatccgg, pASV403 ‘-端弓丨物區(qū) / Pcmv 5 ‘-端弓丨物)和 P6(ggtacc (Kpni)CTGTGGAGAGAAAGG CAAAGTG, KpnI 位點(diǎn) /PCMV 3'-端引物區(qū))為引物，pCI-Neo (Invitrogen)為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得1151bp片段。用Pl和P6為引物通過(guò)重疊對(duì)上述兩個(gè)片段拼接，其最終結(jié)構(gòu)為=PstI-多克隆位點(diǎn)-CL-pA-PCMV-Kpnl，長(zhǎng)度為1791bp。該片段克隆至pUC57上，測(cè)序驗(yàn)證無(wú)誤后，插入到 phCMVl (Gene Therapy Systems, Inc.)載體的 Pstl/Kpnl 位點(diǎn)，即構(gòu)成預(yù)置了 CL 的雙表達(dá)框表達(dá)載體。最后,把根據(jù)GenBank Accession No. BC092518. 1人工合成的人CH(Gamma) 片段插入到上述載體的Acc65I/NotI位點(diǎn)，即構(gòu)成預(yù)置了人輕鏈恒定區(qū)CL和重鏈恒定區(qū)CH 的雙表達(dá)框載體PGP6C。圖3A-圖;3B是分子進(jìn)化后獲得的Fab分子、原型分子、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的親和力比較圖。親和力以Friguet測(cè)定。圖3A是A2D5，B5F4，C3A6EOT2，F(xiàn)2G6及其原型E3F2、 陽(yáng)性對(duì)照h4D5Fab和陰性對(duì)照C2B8Fab的親和力比較圖。圖是A6E7，B2F7，D3E5，F(xiàn)5E2， H2D3及其原型G6E7、陽(yáng)性對(duì)照h2C4Fab和陰性對(duì)照C2B8Fab的親和力比較圖。圖4是全長(zhǎng) F2G6F、H2D3F及其陽(yáng)性對(duì)照h4D5F和h2C4F親和力比較圖，親和力為Friguet法測(cè)定。圖5是F2G6F、H2D3F及其陽(yáng)性對(duì)照h4D5F和h2C4F從HER2解離的速率比較圖。圖6是抗HER2單抗F2G6F、H2D3F及其陽(yáng)性對(duì)照h4D5F和h2C4F、陰性對(duì)照C2B8F 對(duì)荷SKBR3腫瘤的裸鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用比較圖。圖 7 是抗 HER2 單抗 h4D5F、F2G6F、h2C4F、H2D3F 誘導(dǎo) HER2 陽(yáng)性細(xì)胞 SKBR3 和 HER2 陰性細(xì)胞A431發(fā)生⑶C效應(yīng)比較圖，陰性對(duì)照是C2B8F。圖中數(shù)據(jù)是加入上述抗體后2小時(shí)和6小時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞裂解的情況，人血清為補(bǔ)體供源。圖8是以MNC細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，抗HER2抗體誘導(dǎo)HER2陽(yáng)性的SKBR3和HER2陰性的A431細(xì)胞ADCC作用的比較圖，C2B8F為陰性對(duì)照。結(jié)果表明，所有抗HER2抗體都能誘導(dǎo)SKBR3的ADCC，但對(duì)A431無(wú)效。C2B8F對(duì)兩種細(xì)胞都沒(méi)有裂解作用。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例是為了說(shuō)明或進(jìn)一步闡釋本發(fā)明的某些優(yōu)選的實(shí)施例以及某些論點(diǎn)， 并非要限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1.大規(guī)模全人源抗體庫(kù)構(gòu)建這一實(shí)施例描述如何構(gòu)建Fab形式的超大規(guī)模全人源天然抗體庫(kù)。本發(fā)明的Fab 抗體庫(kù)是用來(lái)自不同地區(qū)、不同民族的3000多名健康成人的血樣，參照以下文獻(xiàn)構(gòu)建的， 詳細(xì)構(gòu)建過(guò)程在文獻(xiàn)目錄之后描述。1. Dantas, BC, et al，2005，Construction of a human Fab phage display library from antibody repertoires of osteosarcoma patients. Gene. Mo. Res,4(2) 126-140.2. Hiroshi, T，et al，1999，Preparation of Recombinant Human Monoclonal Antibody Fab Fragments Specific for Entamoeba histolytica, Clinical and Diagnostic Labor Immunol, May 1999,383-387.
3.Wu, BP, et al,2001, Construction and selection of the natural immune Fab antibody phage display library from patients with colorectal cancer, World J Gastroenterol,7(6) :811-815.4. Lee, CV, et al, 2004, High-affinity Human Antibodies from Phage-displayed Synthetic Fab Libraries with a Single Framework Scaffold,J Mol Biol,340,1073-1093.5. Michael H, et al,2005, Antibody phage display, Mod Asp Immunobiol,15 47-49.6. De Haard HJ,et al,1999,A large non-immunized human Fab fragment phage library that permits rapid isolation and kinetic analysis of high affinity antibodie. J Biol Chem，1999，274 :18218-18230.7. Fellouse, FA,2007, High-throughput generation of synthetic antibodies from highly functional minimalist phage-displayed libraries. J Mol Biol 373, 924-940.1.血樣和cDNA合成取每個(gè)供體的血樣1毫升混合，用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單核細(xì)胞，然后用 Invitrogen或Roche公司的試劑盒分離總mRNA，用GIBCO的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA的第一鏈。操作按照制造商的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。2.擴(kuò)增重鏈和輕鏈的Fab區(qū)為了擴(kuò)增編碼κ和λ輕鏈以及Υ重鏈的Fd區(qū)，采用了表1所示的引物組。除了上述輕鏈或重鏈的互補(bǔ)序列外，引物上帶有特定的酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基以便于克隆。用 100 μ 1體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，正義鏈和反義鏈引物均采用ImM終濃度，PCR按下述條件進(jìn)行 25個(gè)循環(huán)94°C 30秒，50°C 30秒，72°C 1分鐘；94°C 4分鐘預(yù)變性，72°C 5分鐘延伸。用 QIAquick PCR Purification Kit(QIAGEN GmbH，Hilden，Germany)純化擴(kuò)增的DNA片段。純化的片段用&icI/HindIII或Xhol/Spel酶切后瓊脂糖電泳分離，用QIAEX Gel Extraction Kit進(jìn)行膠回收。表1.用于人免疫球蛋白基因PCR擴(kuò)增的引物組，下劃線部分是增加的酶切位點(diǎn)， 兼并密碼為M = A or C，Y = C or T，W = A or T，R = A or G，H = A，C，or T，S = C or G, and K = T or G.
權(quán)利要求
1.一種全人源抗人HER2單抗，其特征在于，所述全人源抗人HER2單抗能特異性地與人 HER2結(jié)合ο
2.如權(quán)利要求1所述的全人源抗人HER2單抗，其特征在于，所述全人源抗人HER2單抗為 IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAU IgA2、分泌型 IgA、IgD 或 IgE 型的抗體。
3.如權(quán)利要求1所述的全人源抗人HER2單抗，其特征在于，所述全人源抗人HER2單抗包括輕鏈與重鏈；所述輕鏈包含如SEQ ID NO =USEQ ID NO :3、SEQ ID NO :5或SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列或其一部分，所述重鏈包含如SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :4、SEQ ID NO 6 或SEQ ID NO :8所示氨基酸序列或其一部分。
4.如權(quán)利要求3所述的全人源抗人HER2單抗，其特征在于，所述全人源抗人HER2單抗是一種全長(zhǎng)的抗體、抗體的一個(gè)片段或片段組合物或單鏈抗體。
5.如權(quán)利要求3所述的全人源抗人HER2單抗，其特征在于，所述全人源抗人HER2單抗為SCFV、Fab、F(ab' )2，或具有與人HER2結(jié)合能力的其他形式。
6.如權(quán)利要求1所述的全人源抗人HER2單抗，其特征在于，所述全人源抗人HER2單抗是PEG化的或非PEG化的。
7.一種轉(zhuǎn)染子、真核或原核受體細(xì)胞，其特征在于，所述轉(zhuǎn)染子、真核或原核受體細(xì)胞能產(chǎn)生權(quán)利要求3所述抗體或權(quán)利要求3所述抗體一部分的抗體，其中，權(quán)利要求3所述抗體一部分的抗體選自權(quán)利要求3所述抗體的SCFV、Fab、F(ab)2、F(ab' )2或其他形式的能與人HER2結(jié)合的抗體。
8.一種用于治療或預(yù)防與人HER2或HER2表達(dá)細(xì)胞有關(guān)的疾病的藥物組合物，包括有效治療劑量的如權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述全人源抗人HER2單抗及藥學(xué)上可接受的輔料。
9.一種用于治療或預(yù)防乳腺癌的藥物組合物，包括有效治療劑量的如權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述全人源抗人HER2單抗及藥學(xué)上可接受的輔料。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗人HER2單抗。本發(fā)明特別與高親和力、低解離速率的抗人HER2單抗有關(guān)。本發(fā)明的優(yōu)選抗人HER2單抗包含全人源Fc區(qū)和框架區(qū)以及通過(guò)分子進(jìn)化獲取的全人源輕鏈和/或重鏈的CDR區(qū)。本發(fā)明還披露了這種全人源抗體組成的藥物組合物在人疾病的治療中的應(yīng)用以及在治療中使用這種全人源抗體的方法。
文檔編號(hào)C07K16/28GK102492039SQ20111037165
公開(kāi)日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月21日
發(fā)明者劉慶法 申請(qǐng)人:無(wú)錫天演生物技術(shù)有限公司