專利名稱：表面活性肽及其鹽的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有表面活性能的表面活性肽或其鹽的制造方法。
背景技術(shù)：
已有報告指出，表面活性肽除了具有高表面活性能以外，還具有抗菌活性、溶血性、蛋白變性抑制等多種多樣的功能。這樣的作為功能性材料而有用的表面活性肽，已知可由芽孢桿菌(bacillus)屬微生物生產(chǎn)，并可通過對該芽孢桿菌屬微生物進(jìn)行培養(yǎng)而實(shí)現(xiàn)工業(yè)上對表面活性肽的批量生產(chǎn)(專利文獻(xiàn)I等)。作為由含有該表面活性肽的培養(yǎng)液制造表面活性肽及其鹽的方法，例如可以舉出如下方法:I)使培養(yǎng)液成為酸性，加入二氯甲烷和甲醇、并使(二氯甲烷:甲醇)=2:1(體積比)，從而將表面活性肽萃取至有機(jī)層，進(jìn)行濃縮，然后利用薄層色譜法(TLC)進(jìn)行純化的方法(專利文獻(xiàn)2)；2)在培養(yǎng)液(pH6)中加入辛烷后，對有機(jī)層進(jìn)行濃縮并通過超濾來進(jìn)行純化的方法(非專利文獻(xiàn)I);3)通過離心分離從培養(yǎng)液中分離出菌體等不溶物后，使濾液成為酸性而取得沉淀物，向其中加入二氯甲烷并對表面活性肽進(jìn)行固液萃取后，對有機(jī)層進(jìn)行濃縮。接著，在加入堿水后廢棄有機(jī)層，使水層成為酸性而得到沉淀物，再對該沉淀物進(jìn)行冷凍干燥的方法(專利文獻(xiàn)3) ο現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1:日本特開2002-176993號公報專利文獻(xiàn)2:韓國公開專利第2005-0007670號公報專利文獻(xiàn)3:中國專利申請公開第101041846號說明書非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1:Biochemical Engineering Journal、2008、42、248-25
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題但是，這些從培養(yǎng)液中獲得表面活性肽及其鹽的制造方法由于以下原因而不能認(rèn)為適于工業(yè)上實(shí)施。例如，I)的方法雖然可以直接從培養(yǎng)液中萃取表面活性肽，但由于使用了環(huán)境負(fù)擔(dān)高的二氯甲烷作為萃取溶劑，而且要利用薄層色譜法進(jìn)行純化，因此，從操作方面上，不能認(rèn)為適于工業(yè)上實(shí)施。就方法2)而言，相對于表面活性肽I重量份，需要2500重量份的溶劑(生產(chǎn)Ikg表面活性肽時，溶劑為2.5噸)，從環(huán)境及成本方面上，不能認(rèn)為適于工業(yè)上實(shí)施。就方法3)而言，在菌體分離后，要使濾液成為酸性來收集沉淀物，并且要用二氯甲烷從沉淀物中進(jìn)行萃取等，操作繁瑣，除此之外，還要使用環(huán)境負(fù)擔(dān)大的溶劑，因此，不能認(rèn)為適于工業(yè)上實(shí)施。
鑒于上述情況，本申請的課題在于提供一種不需要繁瑣的操作、且經(jīng)濟(jì)方面有利的適于工業(yè)上實(shí)施的表面活性肽及其鹽的制造方法。例如，本申請的課題在于提供一種不需要分離不溶物(菌體)而直接從培養(yǎng)液中萃取表面活性肽的方法。除了上述課題以外、或者代替上述課題，本申請的目的還在于提供一種即使使用低環(huán)境負(fù)擔(dān)型的溶劑也可以高效地從培養(yǎng)液中萃取表面活性肽的表面活性肽及其鹽的制造方法。解決問題的方法本發(fā)明人等針對適于工業(yè)上實(shí)施的表面活性肽及其鹽的制造方法進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過使用支鏈烷基醇作為萃取溶劑，即使不從培養(yǎng)液中除去不溶物也可以容易地對表面活性肽進(jìn)行萃取、純化。S卩，本發(fā)明涉及一種表面活性肽或其鹽的制造方法，該方法包括:向含有表面活性肽或其鹽的培養(yǎng)液中或從培養(yǎng)液中除去了不溶物的溶液中，加入含有支鏈烷基醇的有機(jī)溶劑來萃取表面活性肽或其鹽。其中，所述表面活性肽或其鹽以下式表示。[化學(xué)式I]
權(quán)利要求
1.表面活性肽或其鹽的制造方法，該方法包括以下工序: 向含有式(I)所示的表面活性肽或其鹽的培養(yǎng)液或從培養(yǎng)液中除去了不溶物的溶液中，加入含有支鏈烷基醇的有機(jī)溶劑來萃取表面活性肽或其鹽，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，萃取時水層的pH為酸性。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，萃取時水層的pH為I 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3中任一項所述的方法，其中，支鏈烷基醇的碳原子數(shù)為3 10。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項所述的方法，其中，有機(jī)溶劑中支鏈烷基醇的含量為30重量％以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5中任一項所述的方法，其中，有機(jī)溶劑含有輔助溶劑，且相對于培養(yǎng)液I重量份，支鏈烷基醇和輔助溶劑的總量為0.6 1.5重量份。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 6中任一項所述的方法,其包括: a)將所述含有表面活性肽的萃取液和堿水溶液混合，然后將有機(jī)層分離，得到含有表面活性肽鹽的水溶液的工序； b)將上述含有表面活性肽鹽的水溶液和無機(jī)酸混合，從而使表面活性肽以固體形式從該混合液中析出的工序。
8.根據(jù)權(quán)利要求1 6中任一項所述的方法，其包括以下工序:將所述含有表面活性肽的萃取液和堿混合，從而由該混合液中得到固體形式的表面活性肽鹽。
9.表面活性肽鹽的制造方法，該方法包括將權(quán)利要求1 7中任一項得到的表面活性肽和堿混合，從而得到表面活性肽鹽或其溶液。
全文摘要
本發(fā)明提供一種表面活性肽或其鹽的制造方法，其包括以下工序向含有式(1)(式中，*表示光學(xué)活性位點(diǎn)。X表示選自亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸中的氨基酸，R表示碳原子數(shù)9～13的烷基及支鏈烷基。M表示堿金屬、堿土金屬、任選被取代的胺等)。所示的表面活性肽或其鹽的培養(yǎng)液或從培養(yǎng)液中除去了不溶物的溶液中加入含有支鏈烷基醇的有機(jī)溶劑來萃取表面活性肽或其鹽。
文檔編號C07K1/14GK103154019SQ20118004759
公開日2013年6月12日 申請日期2011年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月1日
發(fā)明者泉田將司, 川崎宏明, 諸島忠 申請人:株式會社鐘化