含有抗白介素-4 受體(il-4r)的抗體的穩(wěn)定制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了包含能與人白介素-4受體(hIL-4R)特異性結(jié)合的人抗體的藥物制劑。除抗-hIL-4R抗體外，所述制劑可含有至少一種氨基酸、至少一種糖、或至少一種非離子表面活性劑。本發(fā)明的藥物制劑在儲存數(shù)月后表現(xiàn)出基本程度上的抗體穩(wěn)定性。
【專利說明】含有抗白介素-4受體(IL-4R)的抗體的穩(wěn)定制劑
發(fā)明領域
[0001]本發(fā)明涉及治療性抗體制劑領域。更具體地，本發(fā)明涉及包含與人白介素-4受體特異性結(jié)合的人抗體的藥物制劑領域。
[0002]序列表
[0003]與本說明書一同提交了適用ST.25的序列表文本文件。該文本文件的內(nèi)容通過引用并入本文。與該ST.25文本文件一致的序列表紙件作為本說明書的一部分包括在說明書內(nèi)。
【背景技術】
[0004]治療性大分子(例如抗體)應以這樣的方式配制，即，不僅使得該分子適合施用于患者，而且還在儲存和使用期間保持它們的穩(wěn)定性。例如，液體溶液中的治療性抗體易于降解、聚集和/或不期望的化學改變，除非恰當?shù)嘏渲圃撊芤?。液體制劑中抗體的穩(wěn)定性不僅取決于制劑中使用的賦形劑種類，還取決于賦形劑相對于彼此的量和比例。此外，當制備液體抗體制劑時，除了穩(wěn)定性之外，還需要考慮其它因素。此類其他考慮的實例包括溶液的粘度和給定制劑能夠容納的抗體濃度，以及制劑的目視質(zhì)量或外觀。因此，當配制治療抗體時，必須非常仔細以得到保持穩(wěn)定、含有足夠濃度的抗體、以及擁有適當?shù)恼扯群推渌沟弥苿┛煞奖愕厥┯糜诨颊叩钠渌匦缘闹苿?br> [0005]抗人白介素-4受體a (hIL-4Ra)的抗體是需要適當配制的治療相關的大分子的一個實例?？筥hIL-4Ra抗體是臨床上有用的，用于治療或預防疾病，諸如特應性皮炎、變應性哮喘和其他病癥。示例性的抗-1L-4Ra抗體尤其描述于美國專利US7，605，237、7，608，693,7, 465，450 和 7，186，809 ；以及美國專利申請 US2010-0047254 和 2010-0021476中。
[0006]盡管抗-hIL_4Ra抗體是已知的，但在本領域仍然需要包含抗_hIL_4Rα抗體的新藥物制劑，其足夠穩(wěn)定并且適合施用于患者。
[0007]發(fā)明概沭
[0008]本發(fā)明通過提供包含能與人白介素-4受體a (hIL-4Ra)特異性結(jié)合的人抗體的藥物制劑，從而滿足了前述需求。
[0009]一方面，提供了液體藥物制劑，其包括⑴能與人白介素_4受體a (hIL_4Ra)特異性結(jié)合的人抗體；(?)緩沖液；(iii)有機共溶劑；(iv)熱穩(wěn)定劑和(V)粘度下降劑。
[0010]在一個實施方案中，所述抗體以約150mg/ml±50mg/ml的濃度提供。在另一個實施方案中，所述抗體以約150mg/ml±15mg/ml的濃度提供。在一個具體的實施方案中，所述抗體以約150mg/ml的濃度提供。
[0011]在一個實施方案中，所述抗體包含任何一條或多條SEQ ID NO: 1-8的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述抗體包含:(a)包含重鏈互補決定區(qū)1、2和3(HCDR1-HCDR2-HCDR3)的重鏈可變區(qū)(HCVR)，所述互補決定區(qū)各自包含序列SEQ ID NO: 2,SEQ ID NO: 3和SEQ IDN0:4 ;以及(b)包含輕鏈互補決定區(qū)1、2和3(LCDR1-LCDR2-LCDR3)的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，所述互補決定區(qū)各自包含序列SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7和SEQ ID N0:8。在一個具體的實施方案中，所述抗體包含HCVR和LCVR，其各自包含氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ IDN0:5。
[0012]在一個實施方案中，所述抗體包含任何一條或多條SEQ ID N0:9-16的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述抗體包含:(a)包含重鏈互補決定區(qū)1、2和3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3)的重鏈可變區(qū)(HCVR)，所述互補決定區(qū)各自包含序列SEQID NO: 10、SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 12 ;以及(b)包含輕鏈互補決定區(qū)1、2和3 (IXDR1-1XDR2-1XDR3)的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，所述互補決定區(qū)各自包含序列SEQ IDNO: 14, SEQ ID N0:15和SEQ ID N0:16。在一個具體的實施方案中，所述抗體包含HCVR和LCVR，其各自包含氨基酸序列SEQ ID N0:9和SEQ ID N0:13。
[0013]在一個實施方案中，所述抗體包含任何一條或多條SEQ ID N0:17-24的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述抗體包含:(a)包含重鏈互補決定區(qū)1、2和3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3)的重鏈可變區(qū)(HCVR)，所述互補決定區(qū)各自包含序列SEQID NO: 18、SEQ ID NO: 19和SEQ ID NO:20 ;以及(b)包含輕鏈互補決定區(qū)1、2和3 (IXDR1-1XDR2-1XDR3)的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，所述互補決定區(qū)各自包含序列SEQ IDNO:22, SEQ ID N0:23和SEQ ID N0:24。在一個具體的實施方案中，所述抗體包含HCVR和LCVR，其各自包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO:21。
[0014]在一個實施方案中，所述液體制劑的pH為約pH5.9±0.5。在一個具體實施方案中，所述液體制劑的PH為約pH5.9±0.1。在一個實施方案中，所述液體藥用緩沖液包括一種或多種緩沖液，其能夠緩沖的范圍為約PH5.6至約pH6.2。
[0015]在一個實施方案中，所述液體藥物制劑包含包括至少2種緩沖液的緩沖系統(tǒng)。在一個實施方案中，所述緩沖系統(tǒng)包括第一緩沖液，其有效PH范圍為3.6-5.6，以及第二緩沖液，其有效PH范圍為5.5-7.4。在一個實施方案中，第一緩沖液的pKa為約4.8±0.3，第二緩沖液的PKa為約6.0±0.3。在一個具體的實施方案中，第一緩沖液是乙酸鹽緩沖液，第二緩沖液是組氨酸緩沖液。在一個具體的實施方案中，所述乙酸鹽的濃度為
12.5mM±l.9mM，組氨酸的濃度為 20mM±3mM。
[0016]在一個實施方案中，有機共溶劑是含有聚氧乙烯部分的非離子聚合物。在某些實施方案中，有機共溶劑是聚山梨酯20、泊洛沙姆181和聚乙二醇3350中的任何一種或多種。在一個特定的實施方案中，有機共聚物是聚山梨酯20。
[0017]在一個實施方案中，有機共溶劑的濃度為約0.2%±0.03%至約1%±0.15%“重量體積比”或“w/v”,其中，例如0.lg/ml=10%,0.01g/ml=l%)。在一個具體的實施方案中，有機共溶劑是聚山梨酯20，其濃度為約0.2%±0.03%w/v。
[0018]在一個實施方案中，熱穩(wěn)定劑是糖。在一個實施方案中，所述糖選自鹿糖、甘露醇和海藻糖。在一個具體的實施方案中，所述熱穩(wěn)定劑是蔗糖。
[0019]在一個實施方案中，熱穩(wěn)定劑濃度為約0.9%±0.135%w/v至約10%±1.5%w/v。在一個具體的實施方案中，所述熱穩(wěn)定劑是濃度為約5%±0.75%w/v的蔗糖。
[0020]在一個實施方案中，粘度下降劑是鹽，其選自精氨酸鹽酸鹽、硫氰酸鈉、硫氰酸銨、硫酸銨、氯化銨、氯化鈣、氯化鋅和乙酸鈉。在一個具體的實施方案中，粘度下降劑是L-精
氨酸鹽酸鹽。[0021]在一個實施方案中，粘度下降劑的濃度不超過lOOmM。在一個實施方案中，粘度下降劑的濃度為50mM±7.5mM。在另一個實施方案中，粘度下降劑的濃度為25mM±3.75mM。在一個具體的實施方案中，粘度下降劑是25mM ±3.75mM的L-精氨酸
鹽酸鹽。
[0022]在一個實施方案中，所述液體藥物制劑的粘度小于或等于35±3.5厘泊，在一個實施方案中，所述粘度為約21.5±13.5厘泊、約11±1.1厘泊或約8.5±0.85厘泊。在一個具體的實施方案中，所述液體藥物制劑的粘度為約8.5±0.85厘泊。
[0023]在一個實施方案中，液體藥物制劑的重量摩爾滲透壓濃度低于約450m0sm/kg。在一個實施方案中，液體藥物制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約290±20m0sm/kg。
[0024]在一個實施方案中，所述液體藥物制劑在5° C儲存6個月后，至少90%或至少95%的天然形式的抗-hIL_4Ra抗體從該液體藥物制劑中回收，其通過尺寸排阻色譜法確定。在一個特定的實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在5° C儲存6個月后，至少98%的天然形式的抗_hIL-4Ra抗體從該液體藥物制劑中回收。
[0025]在一個實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，所述液體藥物制劑在45° C儲存8周后，至少90%的天然形式的抗體從該液體藥物制劑中回收。
[0026]在一個實施方案中，經(jīng)陽離子交換色譜確定，所述液體藥物制劑在45° C儲存8周后，低于45%的抗體為酸性形式。
[0027]在一個實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，所述液體藥物制劑在25° C儲存6個月后，低于約4%的抗體發(fā)生聚集。
[0028]一方面提供了液體藥物制劑,其包括:⑴約150mg/ml±50mg/ml與hIL_4Ra特異性結(jié)合的人抗體，其中所述抗體包括重鏈可變區(qū)(HCVR)和輕鏈可變區(qū)(LCVR)，其分別包含氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO: 5 ; (ii)約12.5mM ±2mM乙酸鹽；(iii)約20mM±3mM 組氨酸；(iv)約 5%±0.75%(w/v)鹿糖；(V)約 0.2%±0.03%(w/v)聚山梨酯20;以及(vi)約 25mM±3.75mM 精氨酸，pH 為約 5.9±0.5，
[0029]在一個實施方案中，所述液體藥物制劑粘度為約8.5±0.85厘泊至約11±1.1厘泊。在一個具體的實施方案中，所述液體藥物制劑粘度為約8.5±0.85厘泊。
[0030]在一個實施方案中，所述液體藥物制劑是生理上等滲的。在一個實施方案中，液體藥物制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約290±20m0sm/kg。
[0031]在一個實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在5° C儲存6個月后，至少約98%的天然形式的抗-hIL_4Ra抗體從該液體藥物制劑中回收。
[0032]在一個實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，所述液體藥物制劑在45° C儲存8周后，至少約90%的天然形式的抗-hIL-4Ra抗體從該液體藥物制劑中回收。
[0033]在一個實施方案中，經(jīng)陽離子交換色譜確定，所述液體藥物制劑在45° C儲存8周后，低于約45%的抗體為酸性形式。
[0034]在一個實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，所述液體藥物制劑在25° C儲存6個月后，低于約4%的抗體發(fā)生聚集。
[0035]—方面,提供了穩(wěn)定的低粘度等張液體藥物制劑,其含有至少100mg/ml的穩(wěn)定的抗-hIL4-Ra抗體。在一個實施方案中，所述抗體的濃度為約150mg/ml±50mg/ml。在一個具體的實施方案中，所述抗體濃度為約150mg/ml 土 15mg/ml。[0036]在一個實施方案中，所述抗體包含任何一條或多條SEQ ID NO: 1_8的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)(HCVR)和輕鏈可變區(qū)(LCVR)，其中HCVR/LCVR組合分別包括重鏈和輕鏈互補決定區(qū)(HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其分別包含氨基酸序列SEQ ID N0s:2-3-4/SEQ ID NOs: 6_7_8。在一個具體的實施方案中，所述抗體包含HCVR和LCVR，其各自包含氨基酸序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO: 5。
[0037]在某些實施方案中，所述制劑的粘度低于35±3.5厘泊，低于20±2厘泊，低于15±1.5厘泊，或低于10±1厘泊。在一個具體的實施方案中，所述液體制劑粘度為約
8.5±2.5 厘泊。
[0038]在一個實施方案中，所述制劑的摩爾滲透壓濃度是生理上可相容的，在一個具體的實施方案中，所述制劑的摩爾滲透壓濃度是290±20m0sm/kg。
[0039]在一個實施方案中，所述抗體在約5° C下保存至少約6個月后是穩(wěn)定的。在一個具體的實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，至少約98%的抗體在5° C下保存約6個月后保留其天然構(gòu)型。
[0040]在一個實施方案中，所述抗體在約45° C儲存至少約8周后是穩(wěn)定的。在一個具體的實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在45° C儲存約8周后，至少約90%的抗體保留其天然構(gòu)型。在一個具體的實施方案中，經(jīng)陽離子交換色譜確定，在45° C儲存約8周后，低于約45%的抗體包含酸性形式。
[0041]在一個實施方案中，所述抗體在約25° C儲存至少約6個月后是穩(wěn)定的。在一個具體的實施方案中，經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在25。C儲存約6個月后，低于約4%的抗體包含聚集形式。
[0042]在一個實施方案中，所述制劑包括緩沖液，其pH值為約pH5.9±0.5。在一個實施方案中，所述緩沖液包括乙酸緩沖液和組氨酸緩沖液。在一個具體的實施方案中，所述乙酸鹽濃度為12.5mM±l.9mM，組氨酸濃度為20mM±3mM。
[0043]在一個實施方案中，所述制劑包括有機共溶劑，其濃度為約0.2%±0.03%至約1%±0.15%w/v。在一個實施方案中，所述有機共溶劑是非離子聚合物，其含有聚氧乙烯部分。在某些實施方案中，所述有機共溶劑是聚山梨酯20、泊洛沙姆181和聚乙二醇3350中的任何一種或多種。在一個特定的實施方案中，有機共溶劑是濃度為約0.2%±0.03%w/v的聚山梨酯20。
[0044]在一個實施方案中，所述制劑包括濃度為約0.9%±0.135%w/v至約10%土 1.5%w/v的熱穩(wěn)定劑。在一個實施方案中，所述熱穩(wěn)定劑是糖。在一個實施方案中，所述糖選自蔗糖、甘露醇和海藻糖。在一個具體的實施方案中，所述熱穩(wěn)定劑是濃度為約5%±0.75%w/v的蔗糖。
[0045]在一個實施方案中，所述制劑包括濃度不超過約IOOmM的粘度下降劑，在一個實施方案中，粘度下降劑是精氨酸。在一個具體的實施方案中，粘度下降劑是濃度為25mM ±3.75mM的L-精氨酸鹽酸鹽。
[0046]在一個具體的實施方案中，所述穩(wěn)定的低粘度等滲液體藥物制劑的粘度為約
8.5±2.5厘泊，重量摩爾滲透壓濃度為約290±20m0sm/kg，并且包括:⑴約150mg/ml±15mg/ml的抗_hIL_4Ra抗體，其中所述抗體包括重鏈可變區(qū)(HCVR)和輕鏈可變區(qū)(LCVR)，其分別包含氨基酸序列 SEQ ID NO:1 和 SEQ ID NO: 5 ; (ii) 12.5mM ± 1.9mM 乙酸鹽；(iii)20mM±3mM 組氨酸；(iv)0.2%±0.03%(w/v)聚山梨酯 20 ； (v)5%±0.75%(w/v)蔗糖；以及(vi)25mM±3.75mML-精氨酸鹽酸鹽。根據(jù)該實施方案，⑴經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，至少約98%的抗體在5° C下保存至少約6個月后保留其天然構(gòu)型，(ii)經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在45° C儲存約8周后，至少約90%的抗體保持其天然構(gòu)型，(iii)經(jīng)陽離子交換色譜確定，在45° C儲存約8周后，低于約45%的抗體包含酸性形式，以及(iv)經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在25° C儲存約6個月后，低于約4%的抗體包含聚集形式。
[0047]一方面，任意前述方面的液體藥物制劑在容器中提供。在一個實施方案中，所述容器是玻璃瓶，在另一個實施方案中，所述容器是微量輸注器。在另一個實施方案中，所述容器是注射器。在一個具體的實施方案中，所述注射器包括碳氟化合物包被的活塞。在一個具體的實施方案中，所述注射器是低鎢注射器。
[0048]本發(fā)明的其他實施方案在下文詳細描述的基礎上是很明顯的。
[0049]發(fā)明詳沭
[0050]在描述本發(fā)明之前，應當理解，本發(fā)明不限于所描述的特定方法和實驗條件，因為這些方法和條件可以變化。還應當理解，本文使用的術語僅用于描述特定實施方案的目的，而不是意圖用于限制，因為本發(fā)明的范圍僅由所附權(quán)利要求限定。
[0051]除非另外定義，本文使用的技術和科學術語具有與本發(fā)明所屬領域普通技術人員通常所理解的相同的含義。當涉及具體列舉的數(shù)值或數(shù)值范圍時，本文使用的術語“約”表示該值可與列舉的值有不超過1%的變化。例如，如本文所使用的那樣，表述“約100”包括99和101以及之間的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
[0052]盡管可使用與本文描述的類似或等價的任何方法和材料來實施或測試本發(fā)明，但現(xiàn)在描述了優(yōu)選的方法和材料。本文提及的所有公開物均通過引用以其全文并入本文。
[0053]藥物制劑
[0054]本文使用的表述“藥物制劑”表示至少一種活性成分(例如，小分子、大分子、化合物等，其能夠在人或非人動物中發(fā)揮生物活性)以及至少一種非活性的成分的組合，所述非活性成分當與活性成分和/或一種或多種其他非活性成分組合時，適合于治療性施用于人或非人動物。除非特別另外指出，本文使用的術語“制劑”的意思是“藥物制劑”。本發(fā)明提供了包含至少一種治療性多肽的藥物制劑。根據(jù)本發(fā)明的某些實施方案，該治療性多肽是與人白介素-4受體a (hIL_4Ra)特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段。更具體地，本發(fā)明包括藥物制劑，其包含:(i)與hIL_4Ra特異性結(jié)合的人抗體；(ii)乙酸/組氨酸緩沖系統(tǒng)；(iii)有機共溶劑，其為非離子表面活性劑；(iv)熱穩(wěn)定劑，其為碳水化合物；和(v)粘度下降劑。包含在本發(fā)明范圍內(nèi)的具體示例性成分和制劑詳述如下。
[0055]與hIL_4R特異性結(jié)合的抗體
[0056]本發(fā)明的藥物制劑可包含能與hIL_4Ra特異性結(jié)合的人抗體，或其抗原結(jié)合片段。本文使用的術語“hIL_4Ra ”是指與白介素-4(IL_4)特異性結(jié)合的人細胞因子受體。在某些實施方案中，包含在本發(fā)明藥物制劑中的抗體與hIL_4Ra的細胞外結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合。示范性的人IL-4受體a (hIL-4Ra)氨基酸序列描述于SEQ ID NO: 25。hIL_4Ra的抗體描述于U.S.7，605，237和7，608，693中。hIL_4Ra的細胞外結(jié)構(gòu)域由SEQ ID NO: 26的氨基酸序列表示。
[0057]本文使用的術語“抗體”通常是指包含通過二硫鍵互相連接的四個多肽鏈即兩個重(E>鏈和兩個輕(L)鏈的免疫球蛋白分子,及其多聚體(例如，IgM);然而,僅由重鏈組成(即，缺乏輕鏈)的免疫球蛋白分子也包含在術語“抗體”的定義之內(nèi)。每一重鏈包含重鏈可變區(qū)(本文簡寫為HCVR或Vh)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含三個結(jié)構(gòu)域:CH1、CH2和CH3。每一輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(本文簡寫為LCVR或')和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個結(jié)構(gòu)域(CLl)。V1^P'區(qū)可進一步細分為高可變區(qū)，稱為互補決定區(qū)(CDR)，其與稱為框架區(qū)(FR)的更保守的區(qū)域互相交替。每一個V1^P'包含3個⑶R和4個FR，從氨基端至羧基端以以下順序排列:FR1、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
[0058]除非特別另外指出，本文使用的術語“抗體”應當理解為包含完整的抗體分子及其抗原結(jié)合片段。本文使用的術語抗體的“抗原結(jié)合部分”或“抗原結(jié)合片段”(或簡稱“抗體部分”或“抗體片段”)是指保持了與hIL_4Ra特異性結(jié)合能力的抗體的一個或多個片段。
[0059]本文使用的“分離的抗體”是指基本上沒有具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體(例如，分離的與hIL_4Ra特異性結(jié)合的抗體基本上沒有與hIL_4Ra以外的抗原特異性結(jié)合的抗體)。
[0060]術語“特異性結(jié)合”等是指抗體或其抗原結(jié)合片段與抗原形成在生理條件下相對穩(wěn)定的復合物。特異性結(jié)合可通過至少約IxlO-6M或更大的解離常數(shù)來表征。用于確定兩個分子是否特異性結(jié)合的方法是本領域公知的，并且例如包括平衡透析法、表面等離激元等。然而，分離的與hIL_4Ra特異性結(jié)合的抗體可具有與其他抗原的交叉反應性，所述其他抗原諸如是來自其他物種的IL-4R分子。在本文上下文中，與hIL_4Ra以及一種或多種其他抗原結(jié)合的多特異性(例如，雙特異性)抗體被認為是“特異性結(jié)合”hIL_4Ra。此外，分離的抗體可基本上沒有其他細胞材料和/或化學物質(zhì)。
[0061 ] 可包含在本發(fā)明藥物制劑中的示例性抗-hIL_4R a抗體在US7, 605, 237和US7, 608，693中得以闡述，其 公開內(nèi)容在此全文引入本文作為參考。
[0062]根據(jù)本發(fā)明的某些實施方案，所述抗-hIL_4Ra抗體是包含IGHV3-9亞型的重鏈可變區(qū)和IGKV2-28亞型的輕鏈可變區(qū)的人IgGl (參見Barbie和Lefranc, The HumanImmunoglobulin Kappa Variable (IGKV) Genes and Joining (IGKJ) Segments, Exp.Clin.1mmunogenet.1998;15:171-183;和 Scaviner,D.等,Protein Displays of the HumanImmunoglobulin Heavy, Kappa and Lambda Variable and Joining Regions, Exp.Clin.1mmunogenet., 1999;16:234-240)。
[0063]在某些實施方案中，所述抗hIL-4Ra包含至少一個氨基酸替換，其導致相對于種系IGHV3-9序列或種系IGKV2-28序列的抗體表面暴露的電荷發(fā)生變化。種系IGHV3-9和種系IGKV2-28序列和氨基酸位點編號與國際免疫遺傳學(IMGT)信息系統(tǒng)提供的一致，參見 Lefranc, M.-P.,等，IMG I the international ImMunoGeneTics information
system?, Nuc1.Acids Res, 37, D1006-D1012 (2009)。在某些實施方案中，暴露的表面包括互補決定區(qū)(⑶R)。在某些實施方案中，氨基酸替換包括:(a)用堿性氨基酸替換IGHV3-9的CDR2中的中性氨基酸(例如58位)，(b)用中性氨基酸替換IGHV3-9的CDR3中的酸性氨基酸(例如107位)，以及(c)用中性氨基酸替換IGKV2-28的CDRl中的堿性氨基酸(例如33位)?？贵w電荷分布的獨特變化，特別是在環(huán)境界面(例如在CDR中)，預期將會對抗體在溶液中的穩(wěn)定性造成不可預測的影響。
[0064]在某些實施方案中，抗hIL-4Ra抗體包含至少一個氨基酸替換，其使得相對于種.系IGHV3-9序列或IGKV2-28序列的抗體可變區(qū)框架區(qū)的扭轉(zhuǎn)應變發(fā)生變化。在某些實施方案中，所述氨基酸替換選自:(a)用脯氨酸替換IGHV3-9框架區(qū)3(FR3)的非脯氨酸氨基酸(例如96位)，以及(b)用非脯氨酸氨基酸替換IGKV2-28框架區(qū)2 (FR2)的脯氨酸(例如46位)。肽鏈、尤其是框架區(qū)旋轉(zhuǎn)能力的變化影響了 CDR和溶劑的界面，其預期能對溶液中抗體的穩(wěn)定性產(chǎn)生不可預知的影響。
[0065]根據(jù)本發(fā)明的某些實施方案，所述抗hIL_4Ra抗體或其抗原結(jié)合片段包括SEQ IDN0:2的重鏈互補決定區(qū)(HCDR)1、SEQ ID N0:3的HCDR2以及SEQ ID N0:4的HCDR3。在某些實施方案中，所述抗hIL-4Ra抗體或其抗原結(jié)合片段包括SEQ ID NO:1的HCVD。
[0066]根據(jù)本發(fā)明的某些實施方案，所述抗hIL_4Ra抗體或其抗原結(jié)合片段包括SEQ IDNO:6 的輕鏈(K )互補決定區(qū)(LCDR) USEQ ID NO:7 的 LCDR2 以及 SEQ ID NO:8 的 LCDR3。在某些實施方案中，所述抗hIL-4Ra抗體或其抗原結(jié)合片段包括SEQ ID N0:5的LCVD。
[0067]根據(jù)本發(fā)明的某些其他實施方案，所述抗hIL_4R a抗體或其抗原結(jié)合片段包括SEQ ID NO:10 的 HCDRl，SEQ ID NO:1I 的 HCDR2，SEQ ID NO:12 的 HCDR3，SEQ ID NO:14 的IXDR1，SEQ ID NO: 15的IXDR2，以及SEQ ID勵:16的^:01?3。在某些實施方案中，所述抗hIL-4Ra抗體或其抗原結(jié)合片段包括SEQ ID NO:9的HCVD和SEQ ID NO: 13的LCVD。
[0068]根據(jù)本發(fā)明的某些其他實施方案，所述抗hIL_4R a抗體或其抗原結(jié)合片段包括SEQ ID NO:18 的 HCDRl，SEQ ID NO:19 的 HCDR2，SEQ ID NO:20 的 HCDR3，SEQ ID NO:22 ^LCDR1，SEQ ID NO:23的LCDR2，以及SEQ ID N0:24的LCDR3。在某些實施方案中，所述抗hIL-4Ra抗體或其抗原結(jié)合片段包括SEQ ID NO: 17的HCVD和SEQ ID N0:21的LCVD。
[0069]本文實施例中使用的非限制性的示例性的抗體稱為“mAbl”。這一抗體在US7, 608，693 中也稱為 H4H098P。mAbl (H4H098P)包含具有 SEQ ID NOs: 1/5 的 HCVR/LCVR氨基酸序列對，以及由 SEQ ID NOs:2-3-4/SEQ ID NOs:6-7-8 表示的 HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 結(jié)構(gòu)域。
[0070]本發(fā)明可使用的另一非限制性的示例的抗體稱為“mAb2”。這一抗體在US7, 608, 693 中也稱為 H4H083P。mAb2 (H4H083P)包含具有 SEQ ID NOs:9/13 的 HCVR/LCVR 氨基酸序列對，以及由 SEQ ID NOs: 10-11-12/SEQ ID NOs: 14-15-16 表示的HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 結(jié)構(gòu)域。
[0071]本發(fā)明可使用的另一非限制性的示例的抗體稱為“mAb3”。這一抗體在US7，608，693 中也稱為 H4H095P。mAb3 (H4H095P)包含具有 SEQ ID NOs: 17/21 的 HCVR/LCVR 氨基酸序列對，以及由 SEQ ID NOs: 18-19-20/SEQ ID NOs: 22-23-24 表示的HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 結(jié)構(gòu)域。
[0072]包含在本發(fā)明藥物制劑中的抗體或其抗原結(jié)合片段的量可根據(jù)制劑要求的特定性質(zhì)、以及預期使用該制劑的具體環(huán)境和目的而不同。在某些實施方案中，該藥物制劑是液體制劑，其可含有約100± 10mg/mL至約200±20mg/mL的抗體；約110± llmg/mL至約190± 19mg/mL 的抗體；約 120± 12mg/mL 至約 180± 18mg/mL 的抗體；約 130± 13mg/mL 至約170± 17mg/mL 的抗體；約 140± 14mg/mL 至約 160± 16mg/mL 的抗體；或約 150±15mg/mL 的抗體。例如，本發(fā)明的制劑可包括約90mg/mL ;約95mg/mL ;約100mg/mL ;約105mg/mL ;約110mg/mL ;約 115mg/mL ;約 120mg/mL ;約 125mg/mL ;約 130mg/mL ;約 131mg/mL ;約 132mg/mL ;約 133mg/mL ;約 134mg/mL ;約 135mg/mL ;約 140mg/mT,;約 145mg/mL ;約 150mg/mL ;約155mg/mL ;約 160mg/mL ;約 165mg/mL ;約 170mg/mL ;約 175mg/mL ;約 180mg/mL ;約 185mg/mL ;約190mg/mL ;約195mg/mL ;或約200mg/mL的能與hIL_4Ra特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0073]賦形劑和DH
[0074]本發(fā)明的藥物制劑包含一種或多種賦形劑。本文使用的術語“賦形劑”是指添加至制劑中的任何非治療性物質(zhì)，以提供期望的稠度、粘度或穩(wěn)定性。
[0075]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物制劑包含至少一種有機共溶劑，其類型和含量使之在粗重操作例如渦旋條件下能夠穩(wěn)定hIL_4R a抗體。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”表示在整個粗重操作過程中防止超過抗體總量2%的抗體聚集(基于摩爾量)。在某些實施方案中，粗重操作是使包含抗體和有機共溶劑的溶液渦旋約120分鐘。
[0076]在某些實施方案中，有機共溶劑是非離子表面活性劑，例如烷基聚(氧化乙烯)?？砂ㄔ诒景l(fā)明的制劑中的特定的非離子表面活性劑包括:例如聚山梨酯，如聚山梨酯20，聚山梨酯28，聚山梨酯40，聚山梨酯60，聚山梨酯65，聚山梨酯80，聚山梨酯81和聚山梨酯85。泊洛沙姆例如泊洛沙姆181，泊洛沙姆188，泊洛沙姆407或聚乙二醇(PEG)。聚山梨酯20也稱為吐溫20、脫水山梨醇單月桂酸酯和聚氧乙烯山梨坦單月桂酸酯，泊洛沙姆181 也稱為 PLURONIC F68。
[0077]本發(fā)明的藥物制劑中所含的有機共溶劑的量可根據(jù)制劑所需的特定性質(zhì)、以及預期使用該制劑的具體環(huán)境和目的而不同。在某些實施方案中，該制劑可含有約0.1%± 0.01%至約2%±0.2%的表面活性劑。例如，本發(fā)明的制劑可包含約0.09% ;約0.10% ;約0.11% ;約
0.12% ;約 0.13% ;約 0.14% ;約 0.15% ;約 0.16% ;約 0.17% ;約 0.18% ;約 0.19% ;約 0.20% ;約
0.21% ;約 0.22% ;約 0.23% ;約 0.24% ;約 0.25% ;約 0.26% ;約 0.27% ;約 0.28% ;約 0.29%或約
0.30%聚山梨酯20或泊洛沙姆181。例如，本發(fā)明的制劑可包含約0.5% ;約0.6% ;約0.7% ；約 0.8% ;約 0.9% ;約 1% ;約 1.1% ;約 1.2% ;約 1.3% ;約 1.4% ;約 1.5% ;約 1.6% ;約 1.7% ;約
1.8% ;約 1.9% 或約 2.0% 的 PEG3350。
[0078]穩(wěn)定hIL_4Ra抗體的示范性的有機共溶劑包括0.2%±0.02%的聚山梨酯20、
0.2%±0.02% 泊洛沙姆 181 或 1%±0.1%PEG3350。
[0079]本發(fā)明的藥物制劑還可包含一種或多種熱穩(wěn)定劑，其類型和含量能夠在熱應激條件下穩(wěn)定hIL_4Ra抗體。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”表示當含有抗體和熱穩(wěn)定劑的溶液在約45° C保留多達約28天時，超過約92%的抗體保持在天然構(gòu)型。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”是指當含有抗體和熱穩(wěn)定劑的溶液在約45° C保留多達約28天時，低于約5%的抗體發(fā)生聚集。
[0080]在某些實施方案中，熱穩(wěn)定劑是糖或糖醇，其選自蔗糖、海藻糖和甘露醇或其任意組合，其含量可根據(jù)預期使用該制劑的具體環(huán)境和目的而不同。在某些實施方案中，所述制劑可含有約2.5%至約10%的糖或糖醇；約3%至約9.5%的糖或糖醇；約3.5%至約9%的糖或糖醇；約4%至約8.5%的糖或糖醇；約4.5%至約8%的糖或糖醇；約5%至約7.5%的糖或糖醇；約5.5%至約7%的糖或糖醇；或約6.0%至約6.5%的糖或糖醇。例如，本發(fā)明的藥物制劑可包含約 2.5%±0.375% ;約 3%±0.45% ;約 3.5%±0.525% ;約 4.0%±0.6% ；約 4.5%±0.675% ；約 5.0%±0.75% ；約 5.5%±0.825% ；約 6.0%±0.9% ；約 6.5%±0.975% ；約 7.0%± 1.05% ；約 7.5%± 1.125% ；約 8.0%± 1.2% ；8.5%± 1.275% ；約 9.0%± 1.35% 或約10.0%土 L 5%的糖或糖醇(例如蔗糖、海藻糖或甘露醇)。
[0081]本發(fā)明的藥物制劑還可包含緩沖液或緩沖系統(tǒng)，其用于維持穩(wěn)定的pH值，幫助穩(wěn)定hIL_4Ra抗體。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”表示當含有抗體和緩沖液的溶液在約45° C下放置多達約14天時，低于3.0%±0.5%的抗體發(fā)生聚集。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”表示當含有抗體和緩沖液的溶液在約25° C下放置多達約6個月時，低于3.7%±0.5%的抗體發(fā)生聚集。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”表示當含有抗體和緩沖液的溶液在約45° C下放置多達約14天時，經(jīng)尺寸排阻色譜法測定至少95%±0.5%的抗體保留其天然構(gòu)象。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”表示當含有抗體和緩沖液的溶液在約25° C下放置多達約6個月時，經(jīng)尺寸排阻色譜法測定至少96%±0.5%的抗體保留其天然構(gòu)象。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”表示當含有抗體和緩沖液的溶液在約45° C下放置多達約14天時，經(jīng)陽離子交換色譜確定至少62%±0.5%的抗體保持中性構(gòu)象。在某些實施方案中，“穩(wěn)定”表示當含有抗體和緩沖液的溶液在約25° C下放置多達約6個月時，經(jīng)陽離子交換色譜確定至少54%±0.5%的抗體保持中性構(gòu)象?！爸行詷?gòu)象”表示從離子交換樹脂上洗脫下來的主峰的抗體組分，通常在其一側(cè)具有更多個“堿性”峰，而另一側(cè)具有更多個“酸性”峰。
[0082]本發(fā)明的藥物制劑的pH值可為約5.2至約6.4。例如，本發(fā)明的制劑的pH可以為約 5.2 ;約 5.3 ;約 5.4 ;約 5.5 ;約 5.6 ;約 5.7 ;約 5.8 ;約 5.9 ;約 6.0 ;約 6.1 ;約 6.2 ;約
6.3或約6.4，在某些實施方案中，pH為約5.3±0.2 ;約5.9±0.2或約6.0±0.2。
[0083]在某些實施方案中，所述緩沖液或緩沖系統(tǒng)包括至少一種緩沖液，其緩沖范圍與pH5.2-6.4完全或部分重疊。在一個實施方案中，所述緩沖液或緩沖系統(tǒng)包括兩種緩沖液，第一種的有效PH范圍為3.6-5.6，第二種的有效pH范圍為5.5-7.4。在一個實施方案中，第一緩沖液的PKa為約4.8±0.3，第二緩沖液的pKa為約6.0±0.3。在某些實施方案中，緩沖系統(tǒng)包括乙酸鹽緩沖液和組氨酸緩沖液。在某些實施方案中，每1份乙酸鹽具有約1.3-1.9份組氨酸(摩爾)。在某些實施方案中，每1份乙酸鹽具有約1.6±0.25份組氨酸(摩爾)。在某些實施方案中，乙酸鹽的濃度為約2.5mM至約22.5mM ;約3.0mM至約22mM ；約 3.5mM 至約 21.5mM ;約 4.0mM 至約 21.0mM ;約 4.5mM 至約 20.5mM ;約 5.0mM 至約 20mM ；約 5.5mM 至約 19.5mM ；約 6.0mM 至約 19.0mM ；約 6.5mM 至約 18.5mM ；約 7.0mM 至約 18.0mM ;約 7.5mM 至約 17.5mM ;約 8.0mM 至約 17mM ;約 8.5mM 至約16.5mM ;約 9.0mM 至約 16.0mM ;約 9.5mM 至約 15.5mM ;約 10.0mM 至約 15.0mM ;約10.5mM 至約 14.5mM ;約 12.5mM±l.875mM ;約 11.0mM 至約 14.0mM ;約 11.5mM 至約13.5mM或約12.0mM至約13.0mM。在某些實施方案中，組氨酸的濃度為約IOmM至約30mM ;約IlmM至約29mM ;約12mM至約28mM ;約13mM至約27mM ;約14mM至約26mM ;約 15mM 至約 25mM ;約 16mM 至約 24mM ;約 17mM 至約 23mM ;約 18mM 至約 22mM或約19mM至約21mM。在某些實施方案中，所述緩沖系統(tǒng)包含約12.5mM的乙酸鹽和約20mM的組氨酸，pH為約5.9。
[0084]本發(fā)明的藥物制劑還可包含一種或多種賦形劑，其用于維持低粘度或降低含有高濃度蛋白(例如通常>100mg/ml的蛋白)的制劑的粘度。在某些實施方案中，所述制劑包含精氨酸，其含量足以使所述制劑的粘度維持在約35厘泊以下，約30厘泊以下，約25厘泊以下，約20厘泊以下，約15厘泊以下，約14厘泊以下，約13厘泊以下，約12厘泊以下，約10厘泊以下，或約9厘泊以下。[0085]在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物制劑含有精氨酸，優(yōu)選L-精氨酸鹽酸鹽，其濃度為約25mM±3.75mM，約50mM±7.5mM，或約100mM±15mM。在某些實施方案中，所述精氨酸濃度為約20mM至約30mM，約21mM至約29mM，約21.25mM至約28.75mM，約22mM至約28mM，約23mM至約27mM或約24mM至約26mM。
[0086]示例件制劑
[0087]根據(jù)本發(fā)明的一個方面，藥物制劑是低粘度的、通常是生理上等滲的液體制劑，其包括:(i)能特異性結(jié)合hIL-4Ra的人抗體(例如mAbl、mAb2或mAb3 [見上文])，濃度為約100mg/ml或更高；(ii)在約5.9±0.6提供足夠緩沖的緩沖系統(tǒng)；(iii)尤其是作為熱穩(wěn)定劑的糖；(iv)有機共溶劑，其保護抗體結(jié)構(gòu)的完整性；以及(V)氨基酸，其控制粘度用于皮下注射。
[0088]根據(jù)一個實施方案，該藥物制劑包括:(i)能特異性結(jié)合hIL_4Ra的人IgGl抗體，其包括取代的IGHV3-9型重鏈可變區(qū)和取代的IGLV2-28型輕鏈可變區(qū)(例如mAbl)，濃度為約100mg/ml至約200mg/ml ；(ii)包括乙酸鹽和組氨酸的緩沖系統(tǒng)，其在約pH5.9±0.6有效緩沖；(iii)用作熱穩(wěn)定劑的蔗糖；(iv)用作有機共溶劑的聚山梨酯；以及(V)用作粘度下降劑的精氨酸。
[0089]根據(jù)一個實施方案，該藥物制劑包括:(i)能特異性結(jié)合hIL_4Ra的人IgGl抗體，其包括 SEQ ID NO:2 的 HCDR1、SEQ ID NO:3 的 HCDR2、SEQ ID NO:4 的 HCDR3、SEQ IDN0:6 的 LCDR1、SEQ ID NO:7 的 LCDR2 和 SEQ ID N0:8 的 LCDR3，濃度為約 150mg/ml±25mg/ml ；(ii)約12.5mM±1.9mM的乙酸鹽、約20mM±3mM的組氨酸，其有效緩沖在約pH5.9±0.3 ; (iii)約 5%w/v±0.75%w/v 的鹿糖；(iv)約 0.2%w/v±0.03%w/v 的聚山梨酯20;以及(V)約25mM±3.75mM 的精氨酸，其為L-精氨酸鹽酸鹽。
[0090]包含在本發(fā)明中的藥物制劑的其他非限制性實例在本文其他地方闡述，包括以下提供的工作實施例。
[0091]藥物制劑的穩(wěn)定性和粘度
[0092]本發(fā)明的藥物制劑通常顯示出高水平的穩(wěn)定性。本文就藥物制劑而言使用的術語“穩(wěn)定的”是指藥物制劑中的抗體在限定條件下儲存后保持可接受程度的化學結(jié)構(gòu)或生物學功能。即使包含于其中的抗體在儲存一定時間后沒有保持100%的其化學結(jié)構(gòu)或生物學功能，制劑也可以是穩(wěn)定的。在某些環(huán)境下，儲存一定時間后，保持約90%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%的抗體結(jié)構(gòu)或功能，可以認為是“穩(wěn)定的”。
[0093]可尤其通過確定在給定溫度下儲存一定時間后制劑中剩余的天然抗體百分比來測定穩(wěn)定性。天然抗體百分比可尤其通過尺寸排阻色譜法(例如，尺寸排阻高效液相色譜法[SE-HPLC])來確定天然抗體百分比。本文使用的短語“可接受程度的穩(wěn)定性”表示在給定溫度下儲存一定時間后，在制劑中能檢測到至少90%的天然形式的抗體。在某些實施方案中，在給定溫度下儲存一定時間后，在制劑中能檢測到至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的天然形式的抗體。在其之后測定穩(wěn)定性的限定時間可以是至少2周、至少I個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久。評估穩(wěn)定性時可儲存藥物制劑的溫度可以是從約-80°C至約45°C的任何溫度，例如，在約-30°C、約-20°C、約(TC、約4° -8° C、約5°C、約25°C或約45°C儲存。例如，如果在5°C儲存3個月后，通過SE-HPLC檢測到超過約90%、95%、96%、97%或98%的天然抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在5°C儲存6個月后，通過SE-HPLC檢測到超過約90%、95%、96%、97%或98%的天然抗體，則也認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在5°C儲存9個月后，通過SE-HPLC檢測到超過約90%、95%、96%、97%或98%的天然抗體，則也認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在25°C儲存3個月后，通過SE-HPLC檢測到超過約90%、95%、96%或97%的天然抗體，則也認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在25°C儲存6個月后，通過SE-HPLC檢測到超過約90%、95%、96%或97%的天然抗體，則也認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在25°C儲存9個月后，通過SE-HPLC檢測到超過約90%、95%、96%或97%的天然抗體，則也認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。
[0094]可尤其通過確定在給定溫度下儲存一定時間后制劑中聚集形式的抗體百分比來測定穩(wěn)定性，其中穩(wěn)定性與形成的聚集體百分比成反比。聚集抗體百分比可尤其通過尺寸排阻色譜法(例如，尺寸排阻高效液相色譜法[SE-HPLC])來確定。本文所用的“可接受程度的穩(wěn)定性”表示在給定溫度下儲存一定時間后，在制劑中最多能檢測到5%的聚集形式的抗體。在某些實施方案中，在給定溫度下儲存一定時間后，在制劑中最多能檢測到約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集形式的抗體。在其之后測定穩(wěn)定性的限定時間可以是至少2周、至少I個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久。評估穩(wěn)定性時可儲存藥物制劑的溫度可以是從約-80°C至約45°C的任何溫度，例如，在約-30°C、約-20°C、約(TC、約4° -8° C、約5°C、約25°C或約45°C儲存。例如，如果在5°C儲存3個月后，檢測到低于約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在5°C儲存6個月后，檢測到低于約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在5°C儲存9個月后，檢測到低于約5%、4%、3 %、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在25°C儲存3個月后，檢測到低于約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在25°C儲存6個月后，檢測到低于約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚 集形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在25°C儲存9個月后，檢測到低于約5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的聚集形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。
[0095]可尤其通過確定在離子交換過程中遷移至更酸性的部分的抗體(“酸性形式”)而非抗體主要部分(“中性構(gòu)象”)的百分比來測定穩(wěn)定性，其中穩(wěn)定性與酸性形式抗體的部分成反比。不希望受任何理論限制，抗體的脫酰胺作用可使抗體帶更多負電荷，因此相對于未脫酰胺的抗體更為酸性(參見例如Robinson, N., Protein Deamidation, PNAS, 2002年4月16日，99 (8): 5283-5288)?！八峄摹被颉懊擋０返摹笨贵w百分比可尤其通過離子交換色譜測定(例如陽離子交換高效液相色譜[CEX-HPLC])。這里所用的術語“可接受程度的穩(wěn)定性”表示在給定溫度下儲存一定時間后，在制劑中最多能檢測到45%的酸性形式的抗體。在某些實施方案中，可接受程度的穩(wěn)定性表示在給定溫度下儲存一定時間后，在制劑中最多能檢測到約 45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5% 或 0.1% 的酸性形式抗體。在其之后測定穩(wěn)定性的限定時間可以是至少2周、至少I個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久。評估穩(wěn)定性時可儲存藥物制劑的溫度可以是從約_80°C至約45°C的任何溫度，例如，在約-30°C、約-20°C、約(TC、約4° -8° C、約5°C、約25°C或約45°C儲存。例如，如果在5°C儲存3個月后，檢測到低于約 15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5% 或 0.1% 的酸性形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。同樣，如果在25°C儲存3個月后，檢測到低于約18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5% 或 0.1% 的酸性形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在45°C儲存8周后，檢測到低于約45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸性形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。如果在40°C儲存2周后，檢測到低于約20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5% 或 0.1% 的酸性形式的抗體，則認為該藥物制劑是穩(wěn)定的。
[0096]可用其他方法評估本發(fā)明制劑的穩(wěn)定性，例如，用以確定熱穩(wěn)定性的差示掃描量熱法(DSC)、用以確定機械穩(wěn)定性的受控攪拌、以及用以確定溶液濁度的約350nm或約405nm的吸光度。例如，如果在約5°C至約25°C儲存6個月或更久后，與制劑在t=0時的OD4tl5相比該制劑的OD405的改變小于約0.05(例如，0.04,0.03,0.02,0.01或更少)，則可認為本發(fā)明的制劑是穩(wěn)定的。
[0097]還可通過測量抗體對其靶標的生物活性和/或結(jié)合親和力來評估穩(wěn)定性。例如，如果在例如5°C、25°C、45°C等儲存一定時間(例如，1-12個月)后，包含在制劑中的抗-1L-4Ra抗體以在所述儲存之前抗體結(jié)合親和力的至少90%、95%或更高的親和力與IL-4Ra結(jié)合，則可認為本發(fā)明的制劑是穩(wěn)定的。結(jié)合親和力可通過例如ELISA或等離子體共振測定。生物活性可通過例如IL-4Ra活性試驗進行確定，例如使表達IL_4Ra的細胞與包含抗IL-4Ra抗體的制劑接觸。抗體與所述細胞的結(jié)合可直接測定，例如通過FACS分析測定?；蛘撸琁L-4Ra系統(tǒng)的下游活性可在抗體和IL-4Ra激動劑存在下測定，并與無抗體情況下IL-4Rci系統(tǒng)的活性進行比較。在某些實施方案中，IL-4Rci可以是細胞內(nèi)源性的。在其他實施方案中，IL-4 Ra可在細胞內(nèi)異位表達。
[0098]評估制劑中抗體穩(wěn)定性的其他方法在以下實施例中說明。
[0099]在某些實施方案中，本發(fā)明的液體藥物制劑可展現(xiàn)出低至中度的粘度水平。本文使用的術語“粘度”可以是“運動粘度”或“絕對粘度”?！斑\動粘度”是在重力影響下流體的阻止流動的量度。當將兩個等體積的流體置于相同的毛細血管粘度計中并允許其借助重力流動時，粘的流體比更不粘的流體需要更長的時間流過該毛細管。例如，如果一種流體花200秒完成其流動,而另一流體花400秒，則第二種流體的運動粘度度量是第一種的兩倍?！敖^對粘度”有時也稱為動力學或簡單粘度，是運動粘度和流體密度的結(jié)果(絕對粘度=運動粘度X密度)。運動粘度的單位是L2/T，其中L是長度，T為時間。通常，運動粘度表示為厘沱(cSt)。運動粘度的SI單位是mm2/s，其為lcSt。絕對粘度表示為厘泊(cP)單位。絕對粘度的SI單位是毫帕斯卡-秒(mPa-s),其中l(wèi)cP=lmPa_s。
[0100]如本文使用的那樣，就本發(fā)明的流體制劑而言的低粘度水平將展現(xiàn)出低于約15厘泊(cP)的絕對粘度。例如，當應用標準粘度測量技術測量時，如果制劑展現(xiàn)出約15cP、約14cP、約13cP、約12cP、約IlcPj^] 10cP、約9cP、約8cP或更低的絕對粘度時，將認為本發(fā)明的流體制劑具有“低粘度”。如本文使用的那樣，就本發(fā)明的流體制劑而言的中等粘度水平將展現(xiàn)出約35cP至約15cP之間的絕對粘度。例如，當應用標準粘度測量技術測量時，如果制劑展現(xiàn)出約 34cP、約 33cP、約 32cP、約 31cP、約 30cP、約 29cP、約 28cP、約 27cP、約 26cP、約 25cP、約 24cP、約 23cP、約 22cP、約 21cP、約 20cP、約 19cP、18cP、約 17cP、約 16cP 或約
15.1cP的絕對粘度時，將認為本發(fā)明的流體制劑具有“中等粘度”。
[0101]如以下實施例所示，發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，通過將抗體與約25mM至約IOOmM的精氨酸一起配制時，能夠獲得包含高濃度的抗-hIL-4Ra抗體(例如，約100mg/ml至高達至少200mg/ml)的低至中等粘度的流體制劑。此外，還發(fā)現(xiàn)通過調(diào)節(jié)鹿糖含量至低于約10%，能夠更大程度地降低制劑粘度。
[0102]藥物制劑的容器及施用方法
[0103]本發(fā)明的藥物制劑可包含在任何適于儲存藥物以及其他藥物組合物的容器中。例如，本發(fā)明的藥物制劑可包含在具有一定體積的密封及滅菌的塑料或玻璃容器中，諸如小瓶、安瓿、注射器、藥筒或瓶子。不同類型的小瓶可用于包含本發(fā)明的制劑，例如包括透明和不透明(例如，琥珀色)玻璃或塑料小瓶。同樣地，可應用不同類型的注射器來容納和/或施用本發(fā)明的藥物制劑。
[0104]本發(fā)明的藥物制劑可包含在“正常鎢”注射器或“低鎢”注射器中。如本領域技術人員可理解的那樣，制備玻璃注射器的方法包括應用熱的鎢棒，其用于刺穿玻璃，由此產(chǎn)生液體可被吸入或從注射器排出的孔。這一方法導致了在注射器內(nèi)表面上沉積痕量的鎢?？蓱秒S后的洗滌和其他加工步驟來減少注射器中的鎢量。本文使用的術語“正常鎢”是指注射器含有超過500十億分之一(ppb)的鎢。術語“低鎢”是指注射器含有低于500ppb的鎢。例如，根據(jù)本發(fā)明的低鎢注射器可含有低于約490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10 或更低 ppb 的鎢。
[0105]注射器中使用的橡膠活塞以及用于封閉小瓶開口的橡膠塞可被涂覆，從而防止注射器或小瓶中藥物成分的污染和/或保持其穩(wěn)定性。因此，根據(jù)某些實施方案，本發(fā)明的藥物制劑可包含在具有經(jīng)涂覆的活塞的注射器中，或在用經(jīng)涂覆的橡膠塞密封的小瓶中。例如，活塞或塞子可用碳氟化合物膜涂覆。適于與含有本發(fā)明藥物制劑的小瓶和注射器一起使用的經(jīng)涂覆的塞子或活塞的實例例如在美國專利號4，997，423,5, 908，686,6, 286，699、6，645，635和7，226，554中提及，其內(nèi)容在此以其全文引入作為參考?？捎糜诒景l(fā)明上下文中的具體的示例性涂覆的橡膠塞和活塞可從West Pharmaceutical Services公司(Lionville, PA)以商標名 “FiliroTec?” 獲得。
[0106]根據(jù)本發(fā)明的某些實施方案，該藥物制劑可包含在低鎢注射器中，所述注射器具有碳氣化合物涂覆的活塞。
[0107]藥物制劑可通過腸胃外途徑施用于患者，諸如注射(例如，皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)等)、或經(jīng)皮、粘膜、鼻、呼吸道和/或口腔施用。可應用多種可重復使用的筆和/或自動注射器遞送裝置來皮下遞送本發(fā)明的藥物制劑。實例包括但不限于AUT0PENTM(0wenMumford, Inc., Woodstock, UK)、DISETR0NIC?筆(Disetronic Medical Systems, Bergdorf,瑞士)、HUMAL0G MIX75/25? 筆、HUMAL0G? 筆、HUMALIN70/30? 筆(Eli Lilly andC0.，Indianapolis, IN)、N0V0PEN?1、II 和 III (Novo Nordisk, Copenhagen,丹麥)、N0V0PENJUNIOR?(Novo Nordisk, Copenhagen,丹麥)、BD? 筆(Becton Dickinson, FranklinLakes, NJ)、0ΡΤΙΡΕΝ?、0ΡΤΙΡΕΝ PRO?、0ΡΤΙΡΕΝ STARLET? 和 0PTICLIK?(sanof1-aventis,Frankfurt,德國)?？捎糜谄は逻f送本發(fā)明藥物組合物的一次性筆和/或自動注射器遞送裝置的實例包括但不限于 SOLOSTAR? 筆(sanof1-aventis)、FLEXPEN?(Novo Nordisk)、以及 KWIKPEN?(Eli Lilly)、SURECLICK? 自動注射器(Amgen, Thousand Oaks, CA),PENLET?(HaseImeier, Stuttgart,德國)、EPIPEN(Dey, L.P.)和 HUMIRA? 筆(AbbottLabs, Abbott Park, IL).[0108]微量輸液器用于遞送本發(fā)明制劑的用途也包含在本文之內(nèi)。本文使用的術語“微量輸液器”表示設計用于在較長時間(例如，約10、15、20、25、30分鐘或更長)內(nèi)緩慢施用大體積(例如，約2.5mL或更多)治療制劑的皮下遞送裝置。例如參見U.S.6，629，949、US6, 659，982 和 Meehan 等，J.Controlled Release46:107-116 (1996)。微量輸液器尤其可用于遞送包含在高濃度(例如，約100、125、150、175、20011^/1^或更高)和/或粘稠溶液中的大劑量治療蛋白。
[0109]在一個實施方案中，用自動注射器中的預裝注射器皮下施用約lml±0.15ml體積的含有約150mg/ml±15mg/ml抗-1L-4Ra抗體的液體藥物制劑。在另一個實施方案中，所述制劑用微量輸液器施用的體積為約Iml至2.5ml。所述制劑可預裝于小袋或筒中，以供微
量輸液器使用。
[0110]藥物制劑的治療用途
[0111]本發(fā)明藥物制劑尤其可用于治療、預防和/或緩解任何與IL-4活性相關的疾病或病癥，包括由IL-4Ra的活化介導的疾病或病癥?？赏ㄟ^施用本發(fā)明的藥物制劑治療或預防的示例性、非限制性的疾病和病癥包括各種特應性疾病例如特應性皮炎、變應性結(jié)膜炎、變應性鼻炎、哮喘和其他IgE/Th2介導的疾病。
[0112]因此，本發(fā)明包括治療、預防或緩解任何與IL-4活性或IL-4Ra活化相關的疾病或病癥(包括上文提及的示例 性疾病、病癥和病狀)的方法。本發(fā)明的治療方法包括向個體施用本文公開的任何包含抗-hIL_4Ra抗體的制劑。施用該藥物制劑的個體可以例如是需要此類治療、預防或緩解，或以其他方式受益于抑制或弱化IL-4和/或IL-4Ra介導的活性的任何人或非人動物。例如，該個體可以是診斷患有、或認為有風險摧患任何前述疾病或病癥的個體。本發(fā)明還包括本文公開的任何藥物制劑在制備用于治療、預防或緩解任何與IL-4活性或IL-4Ra活化相關的疾病或病癥(包括上文提及的示例性疾病、病癥和病狀)的藥物中的用途。
實施例
[0113]提供了以下實施例，以便為本領域技術人員提供如何制備和使用本發(fā)明的方法和組合物的完整公開和說明，并且不意味著限制發(fā)明人認為的本發(fā)明范圍。已經(jīng)盡力確保所使用數(shù)字(例如，量、溫度等)的精確，但需考慮一些實驗誤差和偏差。除非另外指出，份數(shù)是指重量份數(shù)，分子量是平均分子量，溫度是攝氏度，以及壓力是或接近大氣壓力。
[0114]最初的制劑開發(fā)行為包括篩選液體mAbl (本發(fā)明的抗-1L-4Ra抗體)制劑中的有機共溶劑、熱穩(wěn)定劑和緩沖液，以鑒定在維持皮下注射劑的滲透壓和粘度的同時與所述蛋白相容并提高其穩(wěn)定性的賦形劑。同樣檢驗了緩沖條件以確定達到最大蛋白穩(wěn)定性的最優(yōu)pH值。
[0115]實施例1.有機共溶劑[0116]觀察到mAbl在攪拌條件下不穩(wěn)定。反相高效液相色譜(RP-HPLC)和尺寸排阻高效液相色譜(SE-HPLC)分析表明當mAbl在室溫下渦旋后蛋白損失并且蛋白聚集增加(表1，參見“無共溶劑”數(shù)據(jù))。SE-HPLC和RP-HPLC測定表明，向mAbl溶液中加入有機共溶劑防止了蛋白的降解(表1)。然而，觀察到加入某些有機共溶劑降低了 mAbl的熱穩(wěn)定性(表2)。熱應激后的RP-HPLC表明(表2)，含PEG3350 (3%)和PEG300 (10%和20%)的制劑的蛋白回收率出現(xiàn)了不同程度的下降。此外，經(jīng)SE-HPLC確定，與無共溶劑的制劑相比，含有 PLURONIC F68 (泊洛沙姆 181) (0.2%)、PEG300 (10% 和 20%)以及丙二醇(20%)的制劑出現(xiàn)更多的聚集體形成。聚山梨酯20 (0.2%)和聚山梨酯80 (0.2%)提供了相當?shù)臄嚢韬蜔釕し€(wěn)定性。
[0117]根據(jù)表1，0.3mll5mg/ml的mAbl在IOmM磷酸鹽溶液(pH6.0)以及不同濃度的有機共溶劑在2ml的玻璃瓶中渦旋約120分鐘。通過在405nm處的光密度(OD)確定濁度，記錄為與起始材料相比在405nm處OD值的相對變化。通過反相HPLC (RP-HPLC)測定總的mAbl回收百分比。天然和聚集的mAbl的百分比通過尺寸排阻HPLC(SE-HPLC)測定?！捌鹗疾牧稀睓趦?nèi)的SE-HPLC結(jié)果是無渦旋條件下各制劑的平均值。
[0118]表1
[0119]
【權(quán)利要求】
1.液體藥物制劑，其包括:(i)能與人白介素-4受體a(hIL-4Ra)特異性結(jié)合的人抗體；(ii)pH為5.9±0.5pH單位的緩沖液；(iii)有機共溶劑；(iv)熱穩(wěn)定劑；和(V)粘度下降劑。
2.權(quán)利要求1的液體藥物制劑，其中所述抗體濃度為150mg/ml±50mg/ml。
3.權(quán)利要求1或2的液體藥物制劑,其中所述抗體濃度為150mg/ml±15mg/ml。
4.權(quán)利要求1-3任一項的液體藥物制劑，其中所述緩沖液包含有效pH范圍為3.6-5.6的第一緩沖液和有效pH范圍為5.5-7.4的第二緩沖液。
5.權(quán)利要求4的液體藥物制劑，其中第一緩沖液的pKa為約4.8±0.3，第二緩沖液的pKa 為約 6.0±0.3。
6.權(quán)利要求5的液體藥物制劑，其中第一緩沖液是乙酸鹽，第二緩沖液是組氨酸。
7.權(quán)利要求1-6任一項的液體藥物制劑，其中所述緩沖液包含濃度為12.5mM±1.85mM的乙酸鹽和濃度為20mM±0.3mM的組氨酸。
8.權(quán)利要求1-7任一項的液體藥物制劑，其中所述有機共溶劑選自聚山梨酯20、泊洛沙姆181和聚乙二醇3350。
9.權(quán)利要求1-8任一項的液體藥物制劑，其中所述有機共溶劑的濃度為約0.085%至約1.15%w/v。
10.權(quán)利要求1-9任一項的液體藥物制劑，其中所述有機共溶劑是濃度為0.2%±0.03%w/v 的聚山梨酯 20。
11.權(quán)利要求1-10任一項的液體藥物制劑，其中所述熱穩(wěn)定劑選自蔗糖、甘露醇和海藻糖。
12.權(quán)利要求1-11任一項的液體藥物制劑，其中所述熱穩(wěn)定劑濃度為約3.5%至約ll%w/v。
13.權(quán)利要求1-12任一項的液體藥物制劑，其中所述熱穩(wěn)定劑是濃度為5%±0.75%w/v的蔗糖。
14.權(quán)利要求1-13任一項的液體藥物制劑，其中所述粘度下降劑濃度低于約100mM。
15.權(quán)利要求1-15任一項的液體藥物制劑，其中所述粘度下降劑是濃度為25mM ±3.75mM 或 50mM ±7.5mM 的精氨酸。
16.權(quán)利要求1-15任一項的液體藥物制劑,其中所述液體的粘度小于或等于35±3.5厘泊。
17.權(quán)利要求1-16任一項的液體藥物制劑，其中所述液體的粘度為21.5±13.5厘泊。
18.權(quán)利要求1-16任一項的液體藥物制劑，其中所述液體的粘度為11±1.1厘泊或8.5±0.85 厘泊。
19.權(quán)利要求1-18任一項的液體藥物制劑，其中所述液體的重量摩爾滲透壓濃度是290土 20m0sm/kg。
20.權(quán)利要求1-19任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在約5°C儲存約6個月后，至少回收到約90%的天然形式的抗體。
21.權(quán)利要求1-20任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在約5°C儲存約6個月后，至少回收到約95%的天然形式的抗體。
22.權(quán)利要求1-21任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在約5°C儲存約6個月后，至少回收到約98%的天然形式的抗體。
23.權(quán)利要求1-22任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在約45°C儲存約8周后，至少回收到約90%的天然形式的抗體。
24.權(quán)利要求1-23任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)陽離子交換色譜確定，在約45°C儲存約8周后，低于約45%的回收抗體為酸性形式。
25.權(quán)利要求1-24任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在25°C儲存6個月后，低于約4%的回收抗體發(fā)生聚集。
26.權(quán)利要求1的液體藥物制劑，其中所述特異性結(jié)合hIL-4R的人抗體包含重鏈可變區(qū)(HCVR)和輕鏈可變區(qū)(LCVR)，其中(&)!10^包括重鏈互補決定區(qū)!《1?1、!《1?2和!《1?3，其分別包含氨基酸序列(i) SEQID NO:2,SEQ ID NO:3 和 SEQ ID N0:4, (ii)SEQ ID NO: 10,SEQ ID NO: 11 和 SEQ ID NO: 12，或(iii) SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19和 SEQ ID NO: 20;以及(b)LCVR包括輕鏈互補決定區(qū)LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分別包含氨基酸序列(i)SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7 和 SEQ ID NO:8，(ii)SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15 和 SEQ ID NO: 16，或(iii)SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23 和 SEQ ID NO:24。
27.權(quán)利要求26的液體藥物制劑，其中所述HCVR和LCVR分別包括SEQID ΝΟ:1和SEQID NO:5的氨基酸序列。
28.權(quán)利要求1-27任一項的液體藥物制劑，其包含在玻璃小瓶中。
29.權(quán)利要求1-27任一項 的液體藥物制劑，其包含在注射器中。
30.權(quán)利要求1-27任一項的 液體藥物制劑，其包含在微量輸液器中。
31.權(quán)利要求29的液體藥物制劑，其中所述注射器包含碳氟化合物涂覆的活塞。
32.權(quán)利要求29或31的液體藥物制劑，其中所述注射器是低鎢注射器。
33.液體藥物制劑，其包含:(i)150mg/ml±50mg/ml的能與hIL-4Ra特異性結(jié)合的人抗體，其中所述抗體包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)(HCVR/LCVR)氨基酸序列對SEQ IDNO: 1/5 ； (ii) 12.5mM±2mM 乙酸鹽；(iii) 20mM ±3mM 組氨酸；(iv)5%±0.75% 蔗糖；(V)0.2%±0.03% 聚山梨酯 20 ;以及(vi)25mM±3.75mM 精氨酸，pH 值為 5.9±0.5。
34.權(quán)利要求33的液體藥物制劑，其中所述液體的粘度是11±1.1厘泊或8.5±0.85厘泊。
35.權(quán)利要求33或34的液體藥物制劑，其中所述液體的重量摩爾滲透壓濃度是290土 20m0sm/kg。
36.權(quán)利要求33-35任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在5°C下保存6個月后至少回收到98%的天然形式的抗體。
37.權(quán)利要求33-36任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在45°C儲存8周后至少回收到90%的天然形式的抗體。
38.權(quán)利要求33-37任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)陽離子交換色譜確定，在45°C儲存8周后，低于45%的回收抗體為酸性形式。
39.權(quán)利要求33-38任一項的液體藥物制劑，其中經(jīng)尺寸排阻色譜法確定，在25。C儲存6個月后，低于約4%的回收抗體發(fā)生聚集。
【文檔編號】C07K16/28GK103501814SQ201180058528
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2011年10月5日 優(yōu)先權(quán)日:2010年10月6日
【發(fā)明者】D·B·迪克斯, X·唐 申請人:瑞澤恩制藥公司