專利名稱：一種常山堿的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物提取工藝，具體地，涉及一種常山堿的提取工藝。
背景技術(shù)：
中獸藥是近年來(lái)的新興產(chǎn)業(yè)，簡(jiǎn)單說(shuō)，就是將中醫(yī)藥理論應(yīng)用于動(dòng)物身上，由于中藥既可預(yù)防和治療疾病、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，又不會(huì)產(chǎn)生危害人體健康的藥物殘留，因此，逐步受到廣大獸藥生產(chǎn)企業(yè)和畜禽養(yǎng)殖者的重視，中獸藥的生產(chǎn)和使用比例逐年擴(kuò)大。目前，許多大型畜禽養(yǎng)殖企業(yè)已將中獸藥作為預(yù)防、治療疾病及促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的重點(diǎn)使用對(duì)象，中小型養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的中獸藥使用也日益廣泛，中獸藥更是成為獸藥生產(chǎn)企業(yè)研制和開(kāi)發(fā)的首選項(xiàng)目。中藥常山(Dichroa febrifuga Lour)是一種重要的植物資源，全世界共有13種， 我國(guó)有3種，廣泛分布于陜、甘、川、藏等省區(qū)，常山根、莖、葉、花均可入藥。常山堿為常山中主要有效成分之一，國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，常山堿及其衍生物(如常山酮)具有良好的退熱、抗炎、抗瘧疾、抗腫瘤、抗流感、降血壓以及治療糖尿病、硬皮病等藥理作用。眾所周知，常山酮具有良好的抗球蟲(chóng)效果，但作為一種化學(xué)合成藥，國(guó)外只有法國(guó)一家公司生產(chǎn)(商品名為速丹)，國(guó)內(nèi)目前尚無(wú)常山酮工業(yè)化的報(bào)道，產(chǎn)品主要依靠進(jìn)口，價(jià)格昂貴，在臨床中全面推廣幾乎不可能。最新研究發(fā)現(xiàn)，常山堿同樣具有良好的抗球蟲(chóng)效果，且作為一類新型抗球蟲(chóng)提取藥，具有成本低廉、安全高效和綠色環(huán)保的優(yōu)點(diǎn)，市場(chǎng)應(yīng)用前景廣闊。試驗(yàn)結(jié)果表明，純度為O. 24%的常山堿按照O. 05 g/kg飼料添加給藥，對(duì)人工感染雞柔嫩艾美爾球蟲(chóng)病具有良好的治療效果，抗蟲(chóng)指數(shù)ACI可達(dá)169.01。球蟲(chóng)病是呈全球性分布的常見(jiàn)禽病之一，禽類5% 10%的死亡率是由球蟲(chóng)病引起的，并導(dǎo)致家禽生長(zhǎng)受阻、飼料轉(zhuǎn)化率降低和肉蛋品質(zhì)下降。全世界每年由雞球蟲(chóng)病造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)50億美元，我國(guó)為30億元人民幣。球蟲(chóng)病流行的雞群生長(zhǎng)嚴(yán)重滯后，隨之誘發(fā)大腸桿菌病、支原體病等，進(jìn)一步加大養(yǎng)雞業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失。在球蟲(chóng)感染中，柔嫩、堆型和巨型艾美耳球蟲(chóng)對(duì)雞群威脅最大。目前，用球蟲(chóng)疫苗免疫預(yù)防尚處于起步階段，疫苗的穩(wěn)定性和劑型等方面存在諸多不足。常用的抗球蟲(chóng)化學(xué)藥物很多，但容易產(chǎn)生耐藥性，且不能提高機(jī)體免疫力，氯羥吡啶，鹽酸氨丙啉等藥物甚至對(duì)免疫力有明顯的抑制效應(yīng)，導(dǎo)致防治效果降低。常山堿是農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提取分離得到的抗球蟲(chóng)組分，包括α、 β和Y三種，藥理毒理試驗(yàn)表明該藥具有廣譜高效、低毒低殘留和不易產(chǎn)生耐藥性的特點(diǎn)，對(duì)雞、火雞、兔子、豬、牛、羊、魚(yú)和部分野生動(dòng)物球蟲(chóng)病均有良好的防治作用。球蟲(chóng)引發(fā)雞大量死亡的一個(gè)最主要原因是導(dǎo)致雞盲腸、小腸嚴(yán)重出血，進(jìn)而造成機(jī)體免疫力下降和繼發(fā)其它疾病。我們研究發(fā)現(xiàn)，常山堿不僅對(duì)雞球蟲(chóng)有良好的抑殺作用，而且可激發(fā)機(jī)體抗感染的免疫力和增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬作用，進(jìn)而顯著提高抗球蟲(chóng)效果。提取工藝是生物堿工業(yè)化生產(chǎn)的首要環(huán)節(jié)，特別是其提取和分離操作。常山中常山堿的含量極低，僅為萬(wàn)分之三，提取分離非常困難。傳統(tǒng)的生物堿提取分離方法能耗、物耗大，雜質(zhì)多，效率低，如浸潰、煎煮、溶劑回流、滲漉等。超聲輔助提取技術(shù)主要是靠超聲波空化產(chǎn)生的極大壓力造成被破碎物細(xì)胞壁及整個(gè)生物體瞬間破裂，同時(shí)超聲波產(chǎn)生振動(dòng)作用加強(qiáng)了細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散及溶解，加速植物中有效成分滲透進(jìn)入溶劑而使提取效率獲得顯著提高。利用超聲技術(shù)可以縮短提取時(shí)間，提高提取率，提取過(guò)程溶劑用量相對(duì)較少，可以降低成本，并且整個(gè)過(guò)程無(wú)需加熱，提高了熱敏性生物堿的提取率且對(duì)其生理活性基本沒(méi)有影響。常用的純化方法包括有機(jī)溶劑萃取和大孔樹(shù)脂吸附等方法；有機(jī)溶劑萃取雖然操作簡(jiǎn)單，但存在有機(jī)溶劑用量大、對(duì)人危害大和純化效果差等缺點(diǎn)；大孔樹(shù)脂吸附法純化效果較好，但前處理繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供了一種安全、低成本、高效率的常山堿提取工藝。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案
本發(fā)明所提常山堿的提取工藝具有以下有益效果
本發(fā)明中將常山粉碎后，利用稀鹽酸酸化、超聲波萃取的方法提取常山堿，顯著縮短了提取時(shí)間，提高了常山堿得率；利用二氯甲烷萃取，結(jié)合硅膠柱層析的方法進(jìn)行純化，提高了常山堿的純度，同時(shí)，工藝本身操作簡(jiǎn)單，使用安全，成本低廉，特別適于工業(yè)化生產(chǎn)；所用試劑毒性小，價(jià)格便宜，可回收利用；超聲提取技術(shù)效率高、周期短、效果好；硅膠色譜法純化效果好，一次純化后常山堿含量可達(dá)O. 63%-1. 38%，為常山堿的工業(yè)化生產(chǎn)和球蟲(chóng)病防治奠定了基礎(chǔ)。


圖I :鄰氨基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖2 :供試藥材、對(duì)照藥材和β -常山堿標(biāo)準(zhǔn)品的TLC圖譜。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。實(shí)施例I
常山堿的提取工藝，包括以下步驟
(1)將200g常山藥材干燥、粉碎為常山粗粉；
(2)將步驟(I)得到的常山粗粉與質(zhì)量濃度為O.5%的鹽酸按質(zhì)量體積比1:9混合，在 60°C下超聲提取4小時(shí)，抽濾，收集濾液；
(3)濾液用濃氨水調(diào)pH值至9，二氯甲烷萃取3次，收集下層液；
(4)下層液減壓濃縮，減壓濃縮的溫度為30°C，收集濃縮液；
(5)濃縮液用硅膠柱層析純化后洗脫，洗脫液為二氯甲烷、甲醇和濃氨水的混合物，體積比為8:2:0. I收集洗脫液；
(6)洗脫液減壓濃縮，減壓濃縮的溫度為30°C，得到常山堿浸膏。含量測(cè)定常山堿為混合物，因此不能用用高壓液相測(cè)定含量；參照相關(guān)文獻(xiàn)，依據(jù)常山堿在堿水中水解產(chǎn)生鄰氨基苯甲酸，鄰氨基苯甲酸與亞硝酸形成重氮鹽，重氮鹽遇乙二胺鹽酸鹽顯色的原理，利用紫外分光光度法測(cè)定常山堿含量，具體數(shù)值如表I所示
表I不同量筇氨基苯甲酸鹽的吸光度值
權(quán)利要求
1.一種常山堿的提取工藝，其特征在于，包括以下步驟(1)常山藥材干燥、粉碎為常山粗粉；(2)將步驟(I)得到的常山粗粉與質(zhì)量濃度為5%以下的鹽酸按質(zhì)量與體積比1:3-15 混合，在20°C _80°C下超聲提取O. 5小時(shí)以上，抽濾，收集濾液；(3)濾液用濃氨水調(diào)pH值至8以上，二氯甲烷萃取3次，收集下層液；(4)下層液減壓濃縮，收集濃縮液；(5)濃縮液用硅膠柱層析純化后洗脫，收集洗脫液；(6)洗脫液減壓濃縮，得到常山堿浸膏。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(2)所述鹽酸質(zhì)量濃度為O. 2-5% ;所述常山粗粉與鹽酸的體積比為1:6。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟⑵所述溫度為50°C; 所述時(shí)間為I小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I和2所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(3)所述用濃氨水調(diào)pH值至11。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(4)和步驟(6)中的減壓濃縮的溫度為30°C -35°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(5)所述洗脫液為二氯甲烷、甲醇和濃氨水的混合物，體積比為8:2:0. I。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(2)重復(fù)2-10次后合并濾液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(2)得到的濾液為經(jīng)過(guò)無(wú)水二氯甲烷除雜后的濾液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種常山堿的提取工藝，包括以下步驟(1)常山藥材干燥、粉碎為常山粗粉；(2)將步驟(1)得到的常山粗粉與質(zhì)量濃度為5%以下的鹽酸按質(zhì)量與體積比1:3-15混合，在20℃-80℃下超聲提取0.5小時(shí)以上，抽濾，收集濾液；(3)濾液用濃氨水調(diào)pH值至8以上，二氯甲烷萃取3次，收集下層液；(4)下層液減壓濃縮，收集濃縮液；(5)濃縮液用硅膠柱層析純化后洗脫，收集洗脫液；(6)洗脫液減壓濃縮，得到常山堿浸膏。該方法克服了傳統(tǒng)技術(shù)提取率低、提取周期長(zhǎng)、成本昂貴、工藝復(fù)雜、無(wú)法大生產(chǎn)等不足，可以高效率地從常山中分離較高純度的常山堿，為常山堿的工業(yè)化生產(chǎn)和球蟲(chóng)病防治奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C07D401/06GK102600217SQ201210015939
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月18日
發(fā)明者梁劍平, 羅曉琴, 郭志廷, 雷宏?yáng)| 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所