專利名稱：一種關(guān)附辛素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥提取分離技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種關(guān)附辛素的制備方法，特別涉及一種超臨界CO2萃取和制備液相制備關(guān)附辛素的方法。
背景技術(shù)：
關(guān)白附為毛茛科烏頭屬植物黃花烏頭iAconi-tum coreanum ( Levi) Rapaics)的塊根，味辛，甘，熱，有毒，歸肝，胃經(jīng)。關(guān)白附為常用中藥，具有祛風(fēng)、燥濕、化痰、止痛等功效，主治中風(fēng)痰壅，口眼歪斜，癲癇，偏正頭痛，風(fēng)痰眩暈，破傷風(fēng)，小兒驚風(fēng)，風(fēng)濕痹痛，瘡瘍疥癬，皮膚濕癢等癥?，F(xiàn)代藥理研究表明，關(guān)白附具有抗心律失常，抗炎鎮(zhèn)痛，對血液系統(tǒng)的一系列作用。其主要活性成分為二萜生物堿，迄今已分離得到其中28個二萜生物堿，其中包括關(guān)附甲素、關(guān)附壬素、關(guān)附辛素等。關(guān)附辛素為水溶性型生物堿，又名atisine chloride,能抑制骨骼肌系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，具高毒性，對小鼠的LD50為9. Omg-kg,且其在關(guān)白附藥材中含量較高，是藥材質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分之一。本發(fā)明首次使用超臨界流體萃取和制備高效液相結(jié)合的方法制備關(guān)附辛素，為關(guān)白附植物的研究提供有力的物質(zhì)基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種超臨界CO2和制備液相色譜結(jié)合提取翠雀屬中關(guān)附辛素的方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)的，一種關(guān)附辛素的制備方法，其特征在于它是經(jīng)CO2超臨界流體萃取得二萜生物堿類化合物、氧化鋁柱層析分離、再利用制備液相純化得關(guān)附辛素產(chǎn)品。所述的一種關(guān)附辛素的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(1)CO2超臨界流體萃取
取關(guān)白附藥材粉碎，加入質(zhì)量濃度50-70%的乙醇作為夾帶劑，裝入萃取釜中溫度保持在 38-60°C，壓力為 20-45MPa，CO2 流速為 12_45kg/h，進(jìn)行萃取 60_200min ；
(2)氧化鋁柱層析分離
將步驟(2)中所得萃取物經(jīng)氧化鋁柱層析，依次用環(huán)己烷、環(huán)己烷-乙酸乙酯、甲醇梯度洗脫，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并關(guān)附辛素流分，回收至干，得關(guān)附辛素粗品；
(3)制備液相純化
將粗品用甲醇溶解，注入制備型高效液相色譜純化，收集關(guān)附辛素成分峰，真空干燥得關(guān)附辛素。所述的制備液相的流動相為有機(jī)相-O. 2%醋酸鹽緩沖體系，所述有機(jī)相為甲醇或乙腈，占流動相比例為25-50%，所述的醋酸鹽緩沖體系為醋酸銨-醋酸緩沖體系。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明采用的工藝，萃取溫度低，可避免成分熱分解；具有制備量大、產(chǎn)品純度高、簡單易行等優(yōu)點(diǎn)，可產(chǎn)業(yè)規(guī)?；?。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行說明。實(shí)施例I :
取關(guān)白附藥材1kg，粉碎，加入500ml質(zhì)量濃度70%的乙醇作為夾帶劑，裝入萃取釜中溫度保持在60°C，壓力為45MPa，通入CO2流速為12kg/h，進(jìn)行萃取200min，調(diào)節(jié)解析斧溫度和壓力，收集從解析釜出料口放出的萃取物。將萃取物與氧化鋁攪拌均勻，依次用環(huán)己烷、環(huán)己烷-乙酸乙酯(1:1.5)、甲醇梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集合并關(guān)附辛素流分，回收試齊U，得到關(guān)附辛素粗品。取關(guān)附辛素粗品用甲醇溶解，注入制備型高效液相儀，以50%乙腈/甲醇-O. 2%醋酸銨緩沖液(醋酸調(diào)節(jié)pH為5. 5)為流動相，流速控制為20ml/min，得到純度98. 9%的關(guān)附辛素7. 3g。實(shí)施例2:
取關(guān)白附藥材1kg，粉碎，加入500ml質(zhì)量濃度50%的乙醇作為夾帶劑，裝入萃取釜中溫度保持在38°C，壓力為20MPa，通入CO2流速為45kg/h，進(jìn)行萃取60min，調(diào)節(jié)解析斧溫度和壓力，收集從解析釜出料口放出的萃取物。將萃取物與氧化鋁攪拌均勻，依次用環(huán)己烷、環(huán)己烷-乙酸乙酯(1:1.5)、甲醇梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集合并關(guān)附辛素流分，回收試齊U，得到關(guān)附辛素粗品。取關(guān)附辛素粗品用甲醇溶解，注入制備型高效液相儀，以35%乙腈/甲醇-O. 2%醋酸銨緩沖液(醋酸調(diào)節(jié)pH為5.5)為流動相，流速控制為16ml/min，得到純度98. 3%的關(guān)附辛素7. 6g。實(shí)施例3
取關(guān)白附藥材10kg，粉碎，加入500ml質(zhì)量濃度60%的乙醇作為夾帶劑，裝入萃取釜中溫度保持在40°C，壓力為35MPa，通入CO2流速為45kg/h，進(jìn)行萃取lOOmin，調(diào)節(jié)解析斧溫度和壓力，收集從解析釜出料口放出的萃取物。將萃取物與氧化鋁攪拌均勻，依次用環(huán)己烷、環(huán)己烷-乙酸乙酯(I: I. 5)、甲醇梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集合并關(guān)附辛素流分，回收試齊U，得到關(guān)附辛素粗品。取關(guān)附辛素粗品用甲醇溶解，注入制備型高效液相儀，以40%乙腈/甲醇-O. 2%醋酸銨緩沖液(醋酸調(diào)節(jié)pH為5. 5)為流動相，流速控制為20ml/min，得到純度97. 3%的關(guān)附辛素68. 9g。
權(quán)利要求
1.一種關(guān)附辛素的制備方法，其特征在于它是經(jīng)CO2超臨界流體萃取得二萜生物堿類化合物、氧化鋁柱層析分離、再利用制備型液相純化得關(guān)附辛素產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種關(guān)附辛素的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)CO2超臨界流體萃取 取關(guān)白附藥材粉碎，加入質(zhì)量濃度50-70%的乙醇作為夾帶劑，裝入萃取釜中溫度保持在 38-60°C，壓力為 20-45MPa，CO2 流速為 12_45kg/h，進(jìn)行萃取 60_200min ； (2)氧化鋁柱層析分離 將步驟(2)中所得萃取物經(jīng)氧化鋁柱層析，依次用環(huán)己烷、環(huán)己烷-乙酸乙酯、甲醇梯度洗脫，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并關(guān)附辛素流分，回收至干，得關(guān)附辛素粗品； (3)制備液相純化 將粗品用甲醇溶解，注入制備型高效液相色譜純化，收集關(guān)附辛素成分峰，真空干燥得關(guān)附辛素。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種關(guān)附辛素的制備方法，其特征在于所述的制備液相的流動相為有機(jī)相-0. 2%醋酸鹽緩沖體系，所述有機(jī)相為甲醇或乙腈，占流動相比例為25-50%，所述的醋酸鹽緩沖體系為醋酸銨-醋酸緩沖體系。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種關(guān)附辛素的制備方法，它是經(jīng)CO2超臨界流體萃取得二萜生物堿類化合物、氧化鋁柱層析分離、再利用制備液相純化得關(guān)附辛素產(chǎn)品。本發(fā)明不僅可以連續(xù)提取出二萜生物堿類化合物，而且能夠制備出高純度的關(guān)附辛素產(chǎn)品，它既適合小型實(shí)驗(yàn)，也可以用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D221/22GK102627606SQ201210124898
公開日2012年8月8日 申請日期2012年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月26日
發(fā)明者劉東鋒, 吳艷波 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司