專利名稱：以β-環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法及在手性藥物分離中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分離技術(shù)，特別是一種以β-環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法及在手性藥物分離中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
毛細(xì)管電色譜目前是一種較新的分離技術(shù)，它主要是基于色譜分離機(jī)制進(jìn)行的。在毛細(xì)管中填充、涂敷或鍵合固定相，使被分離組分在固定相中進(jìn)行保留和分配。由于毛細(xì)管電色譜是基于液相色譜和毛細(xì)管電泳技術(shù)相結(jié)合的一種分離技術(shù)，所以它具有良好的選擇性和較高的分離效率。根據(jù)固定相不同的填充方法，毛細(xì)管電色譜可以分為3個(gè)亞型，即 毛細(xì)管開管柱(0TC-CEC)，毛細(xì)管填充柱(PC-CEC)和毛細(xì)管整體柱(MC-CEC)。填充毛細(xì)管電色譜是把固定相填充到毛細(xì)管中的一種電色譜技術(shù)，它是毛細(xì)管電色譜最常用的一種技術(shù)，因?yàn)樗蟹蛛x效率高，固定相資源豐富等優(yōu)點(diǎn)，所以應(yīng)用范圍較廣。環(huán)糊精(CD)是一類研究很多的超分子化合物，由于環(huán)糊精中的各個(gè)葡萄糖基都不能繞糖苷鍵自由旋轉(zhuǎn)，因此環(huán)糊精的形狀呈錐體圓桶形。圓筒的內(nèi)側(cè)是以糖苷氧原子連結(jié)C-H組成的環(huán)，呈現(xiàn)相對(duì)的疏水性，可以接受不同類型的客體化合物，尤其是那些非極性基團(tuán)。環(huán)糊精空穴的外環(huán)為一級(jí)和二級(jí)羥基，使得環(huán)糊精外部呈親水性。CD有多個(gè)手性中心，其促使對(duì)映體分離的基本原理是在它們之間形成包合物，而不同包合物的穩(wěn)定常數(shù)不同，從而實(shí)現(xiàn)分離。由于環(huán)糊精類手性選擇劑擁有很多手性中心、每個(gè)葡萄糖單元都是固定的椅式結(jié)構(gòu)，使得環(huán)糊精具有很多結(jié)合部位，如β -環(huán)糊精有35個(gè)不同的結(jié)合部位，這種結(jié)構(gòu)使得環(huán)糊精比相同的葡萄糖結(jié)構(gòu)和數(shù)量的線性多糖擁有多得多的手性識(shí)別能力，可以分離更多的對(duì)映體。在α-⑶、β-⑶、Y-⑶這3種天然⑶中，α-⑶因空腔較小，Y -⑶因難于制備，價(jià)格昂貴，使其應(yīng)用受到了一定的限制，而β-CD制備相對(duì)較容易，價(jià)格低廉；無毒，無環(huán)境污染；其空腔能與大部分客體體積相匹配得到使其得到了廣泛應(yīng)用，因此，本發(fā)明的研制成功具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述情況，為解決現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種以β -環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法及在手性藥物分離中的應(yīng)用，可有效解決毛細(xì)管電色譜柱的制備及手性藥物分離的問題。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，以β -環(huán)糊精為起始反應(yīng)物，采用分步合成法，依次合成六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-環(huán)糊精、六位單取代的氨化-環(huán)糊精、硅烷化硅膠以及環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相，將環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相裝填至毛細(xì)管柱中，制備成毛細(xì)管填充柱，其步驟包括有①.六位單取代的對(duì)甲苯磺酰環(huán)糊精的制備，②.六位單取代的氨化-β-環(huán)糊精的制備，③.硅烷化硅膠的制備，④.β-環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相的制備，⑤.毛細(xì)管填充柱的制備。本發(fā)明環(huán)糊精鍵合硅膠固定相的制備相對(duì)較容易，價(jià)格低廉，低毒，環(huán)境污染低，此外，采用分步合成法能有效的控制產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和純度，β-CD的空腔與大部分客體體積相匹配，是環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法及在手性分離中的應(yīng)用上的創(chuàng)新。


圖I為本發(fā)明鹽酸舍曲林在CEC模式下的拆分色譜圖。
圖2為本發(fā)明鹽酸克倫特羅在CEC模式下的拆分色譜圖。
具體實(shí)施例方式以下對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)說明。本發(fā)明的具體制備過程如下
①.六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β -環(huán)糊精(β -⑶-6-OTs)的制備
a.環(huán)糊精重結(jié)晶，室溫18-25 °C下，β-環(huán)糊精(β_⑶)在水中的溶解度為18.8 mg/g，在80°C為196.6 mg/g，β -環(huán)糊精與純水按質(zhì)量比1:5進(jìn)行重結(jié)晶，在500ml燒杯中加入200 ml蒸懼水,加熱至微沸,稱取40g3 -環(huán)糊精,攪拌加入至溶解,趁熱快速抽濾，濾液于冰箱中放置12h，β -環(huán)糊精結(jié)晶析出，抽濾，得重結(jié)晶后的β -環(huán)糊精，按上述步驟將β -環(huán)糊精重結(jié)晶3次，將所得經(jīng)3次重結(jié)晶的β -環(huán)糊精置于真空干燥箱中80°C干燥12h，備用；
b.對(duì)甲苯磺酰氯重結(jié)晶及其乙腈溶液的制備，稱取對(duì)甲苯磺酰氯10g，加入30ml石油醚，置于加熱套中加熱至60 90°C使之溶解，放置室溫18-25°C，并于4 °C冷藏12 h，抽濾，得重結(jié)晶的對(duì)甲苯磺酰氯，按上述步驟重結(jié)晶3次，再置真空干燥箱中25 °C干燥4h，得3次重結(jié)晶的對(duì)甲苯磺酰氯，稱取5. 04g 3次重結(jié)晶的對(duì)甲苯磺酰氯溶于15ml乙腈中，成對(duì)甲苯磺酰氯乙腈溶液，備用；
c.六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-環(huán)糊精合成方法，稱取30g步驟a中3次重結(jié)晶后的環(huán)糊精于三頸燒瓶中，加入250ml蒸餾水，室溫18-25°C下，逐滴加入濃度為O. 335g/ml氫氧化鈉溶液10ml，攪拌lh，冰浴中在45_55min內(nèi)逐滴加入步驟b中制備的對(duì)甲苯磺酰氯乙腈溶液15ml,繼續(xù)攪拌20min,抽濾,濾液用質(zhì)量濃度為10%的鹽酸調(diào)至pH=8,4°C冷藏12h，過濾，得固體物，固體物在真空干燥箱中50°C干燥12h，成磺?；磻?yīng)粗產(chǎn)物，稱取25g的磺?；磻?yīng)粗產(chǎn)物，置于加熱套中加水加熱，至其完全溶解，再冷卻至室溫18-25°C，冷藏12h，抽濾，得重結(jié)晶產(chǎn)物，按上述步驟重結(jié)晶3次，得3次重結(jié)晶的產(chǎn)物六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β-環(huán)糊精，再置于真空干燥箱中，在50°C下干燥12h，用NMR及TLC驗(yàn)證六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β -環(huán)糊精的純度，放于干燥器中，備用；d. NMR驗(yàn)證β -CD-6-OTs的純度以 DMSO 為溶劑，測(cè)試了 β -CD、β -CdKTs1H-NMR 圖譜
I) β-CD 的1H-NMR 圖譜，1H NMR (400 MHz, DMS0)，δ 5. 69 (dd, J = 21. 9, 4.3Hz, 4H), 4.81 (d, /=2.7 Hz, 2H)，4.45 (t, /=5.3 Hz, 2H)，3.95 - 3. 27 (m,19H), 3. 25 (s, 1H), 2.48 (d, /=1.5 Hz, 1H)
2) β-CD-6-OTs 的1H-NMR 圖譜，1H-NMR (400 MHz, DMSO)，δ 7. 73 (d, J = 8. 2Hz, 2H), 7. 41 (d, J = 8. 2 Hz, 2H)，5. 70 (s, 20H)，4. 89 - 4. 74 (m, 8H)，4. 5 -3. 3 (m, 47H)，2. 42 (s, 3H)
從β -⑶1H-NMR圖譜中分析可以得到δ 5. 8 ppm和δ 5. 7 ppm分別是β -⑶C2位和C3位羥基上氫的信號(hào)峰，δ 4. 8 ppm是β -⑶Hl氫的信號(hào)峰，然而δ 4. 5 ppm是β -⑶C6位羥基上氫的信號(hào)峰，化學(xué)位移在3. 7 3. 2 ppm是β -⑶Η2 - Η6氫的信號(hào)峰。β -⑶-6-0TS的1H-NMR圖譜中分析可以得到，有新的信號(hào)峰出現(xiàn)，化學(xué)位移在7. 41 7. 72 ppm之間的峰為苯環(huán)上氫的信號(hào)峰；同時(shí)在δ 4. 8 ppm旁邊也有新的信號(hào)峰出現(xiàn)，它是環(huán)糊精取代位置氫的信號(hào)峰；化學(xué)位移在4. 6 4. 2 ppm是β -OTKTs C6位羥基上氫的信號(hào)峰；化學(xué)位移在3. 7 3. 5 ppm和3. 4 3. 2 ppm分別是環(huán)糊精H6，H3，H5和H4，H2氫的信號(hào)峰；并且在δ2.4 ppm也出現(xiàn)了新的信號(hào)峰，它是β -⑶-6_0Ts取代 基團(tuán)-CH3上氫的信號(hào)峰。β -⑶-6-OTs和β -⑶的核磁共振氫譜相比較，有很多新的信號(hào)峰出現(xiàn)，可以看到β_⑶-6-OTs中苯環(huán)的特征峰δ7. 41和δ7. 72。1H-NMR圖譜表明，對(duì)甲苯磺酰氯成功修飾了環(huán)糊精上羥基，成功合成了 β -CD-6-OTs，表明本發(fā)明研制成功。e. TLC 驗(yàn)證 β-CD-6-OTs 的純度
以硅膠板為固定相，丁酮一甲醇一水比例為8:1:4 (ν/ν/ν)做為展開劑，以β-⑶為參照物，研究了磺?；磻?yīng)產(chǎn)物經(jīng)純化后，制備的β -⑶-6-OTs和未反應(yīng)完全的β -⑶的分離。結(jié)果表明，制備的β_⑶-6-OTs經(jīng)過重結(jié)晶純化后，在β_⑶相應(yīng)的位置沒有斑點(diǎn)，表明得到較純的β -⑶-6-OTs。β -⑶-6-OTs和β -⑶的相對(duì)比移值為I. 5。試驗(yàn)中，六位單取代的對(duì)甲苯磺酰環(huán)糊精合成反應(yīng)常用氫氧化鈉水溶液和無水吡啶為反應(yīng)溶劑，但對(duì)兩種方法進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)采用氫氧化鈉水溶液作為反應(yīng)溶劑時(shí)，反應(yīng)條件容易、毒性較小、環(huán)境污染小。所以本發(fā)明選用以氫氧化鈉水溶液為反應(yīng)溶劑，進(jìn)行磺?；磻?yīng)。②.六位單取代的氨化-β -環(huán)糊精的制備
稱取步驟①的c步驟中制備的六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β -環(huán)糊精3. 0g，溶于45ml乙二胺，均勻混合后，于80°C下反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去未反應(yīng)的過量乙二胺，再將剩余的混合物均勻分散在-10 °C的冰丙酮中，沉淀析出粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物用體積濃度為10%的甲醇溶液溶解，再用丙酮沉出，如此反復(fù)3-5次，得沉出物，真空干燥后，得白色產(chǎn)物，SP為六位單取代的氨化-β -環(huán)糊精，用核磁共振氫譜表征制備的六位單取代氨化-環(huán)糊
不目；
用核磁共振氫譜表征制備的六位單取代氨化-β -環(huán)糊精以DMSO為溶劑，測(cè)試了六位單取代的氨化-β-環(huán)糊精1H-NMR圖譜。1HNMR (400 MHz, DMS0) δ 5. 69 (s, 14HC2 - 0H，C3 - 0H)，4. 81 (s, 7H Cl - H), 4. 45 (s, 6H C6 - 0H)，3. 81 - 3. 19 (m, 42H,C3 - H, C5 - H, C6 - H, C2 - H, C4 - H)，2. 08 - I. 81 (m, 4H, NH2 - CH2CH2 - NH - ) ·
化學(xué)位移在2. I ppm處的峰為烷基上氫的信號(hào)。1H-NMR圖譜表明，乙二胺成功地將酰氯基團(tuán)取代，修飾成氨化環(huán)糊精。氨化環(huán)糊精和酰氯化環(huán)糊精核磁共振氫譜相比較，可以看到氨化環(huán)糊精中苯環(huán)的特征峰消失。說明第二步反應(yīng)成功且得到較純的氨化環(huán)糊精。③.硅烷化硅膠的制備本發(fā)明用Y-(2，3-環(huán)氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(ΚΗ-560)作為擔(dān)體，ΚΗ-560的乙氧基與硅膠表面的硅羥基反應(yīng)，制備得到硅烷化硅膠，即硅膠ΚΗ-560。本發(fā)明通過-Si-O-Si-鍵將ΚΗ-560鍵合到硅膠表面。由于空間位阻效應(yīng)，不可能ΚΗ-560的三個(gè)甲氧基都與硅醇基反應(yīng)，而甲氧基在含水的條件下可以水解成羥基。所以本反應(yīng)必須在無水條件下進(jìn)行。a試劑與器皿的處理
分子篩(分子篩是結(jié)晶態(tài)的硅酸鹽或硅鋁酸鹽，由硅氧四面體或鋁氧四面體通過氧橋鍵相連而形成，分子尺寸大小通常為O. 3-2. Onm的孔道和空腔體系，從而具有篩分分子的特性)置于馬弗爐中，在400°C下活化4h，然后置于玻璃器皿中，冷卻后迅速倒入甲苯中，除去甲苯中的微量水分子，得到無水甲苯，反應(yīng)所需的玻璃器皿反應(yīng)前均在115-125 (最好為120°C)干燥；
b.硅膠活化·
硅膠活化的目的是將硅膠表面的金屬離子除去，使硅膠表面的硅醇基裸露的更多，從而使更多的環(huán)糊精可以鍵合到硅膠的表面，以提高鍵合量；
稱取l.Og高效液相色譜硅膠(3 ym),加到三口燒瓶?jī)?nèi)，用7. 5ml質(zhì)量濃度為20%的鹽酸溶液，110°C加熱攪拌回流6 h，在室溫18-25°C下過濾，以超純水洗滌濾餅，直至pH呈中性，在真空干燥箱中120°C下干燥12h，得活化后的硅膠，置于干燥器中備用；
c.娃膠KH-560合成
稱取上述活化后的硅膠O. 5g于三頸瓶中，加入5ml無水甲苯和30 μ I三乙胺，形成混懸液，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入250 μ I ΚΗ-560，100 120 1攪拌回流10 h，反應(yīng)完成后，抽濾，依次用無水甲苯，無水乙醚，丙酮，甲醇各洗滌3次，80°C真空干燥12 h，得到硅烷化硅膠，即硅膠KH-560 ；
將硅膠KH-560進(jìn)行元素分析，元素分析實(shí)測(cè)的結(jié)果為N 0% ；C 5. 9% ；H1. 1% ;碳元素含量的增加表明KH-560成功地鍵合到了硅膠表面。④.β -環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相的制備
固定相鍵合通常有兩種不同的方法(1)先將環(huán)糊精接到空間臂一端，再把空間臂另一端鍵合到硅膠表面上；(2)先將硅膠鍵合到空間臂一端，再將環(huán)糊精接到空間臂另一端。這兩種方法，無論采用哪一種都要將固定相鍵合到硅膠的表面，所以鍵合這一步反應(yīng)非常關(guān)鍵，直接關(guān)系到整個(gè)合成實(shí)驗(yàn)的成敗。本發(fā)明采用先將硅膠鍵合到空間臂一端，再將環(huán)糊精接到空間臂另一端的方法。將步驟③的步驟c中制備的硅膠ΚΗ-560置于真空干燥箱120°C真空干燥12h，稱取O. 2g干燥后的硅膠KH-560和步驟②中制備的六位單取代氨化-β -環(huán)糊精I(xiàn). Og,置于單口燒瓶中，再加入IOml無水甲苯，氮?dú)獗Ｗo(hù)，110°C加熱攪拌回流10h，反應(yīng)完成后，抽濾，用甲醇、丙酮和水洗滌3-5次，60°C于真空干燥箱中干燥12h，得β-環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相；鍵合固定相的元素分析，元素分析實(shí)測(cè)的結(jié)果為N 0. 27 % ；C 13. 4 % ；H 2. I %，氮元素的增加證明環(huán)糊精鍵合固定相鍵合成功。研制中，采用硅膠與硅烷化試劑在無水甲苯體系中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，70 80°C加熱回流進(jìn)行反應(yīng)，生成-Si-0-Si-，這樣就把硅烷化試劑鍵合到硅膠表面。同時(shí)也有文獻(xiàn)報(bào)道，硅膠與硅烷化試劑在DMF體系中，進(jìn)行反應(yīng)。文獻(xiàn)報(bào)道，也有先制成環(huán)糊精衍生物，再將環(huán)糊精衍生物與KH-560在DMF體系中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下80°C反應(yīng)4h，相當(dāng)于先在環(huán)糊精上接上適當(dāng)長(zhǎng)度的空間臂，之后再與硅膠在DMF體系中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下110°C反應(yīng)24h，即再將空間臂另一端鍵合到硅膠上。也有采用硅膠與硅烷化試劑在DMF體系中，80 90°C加熱回流反應(yīng)，生成-Si-0-Si-，把硅烷化試劑鍵合到硅膠表面。本發(fā)明采用將硅膠與KH-560先發(fā)生硅烷化反應(yīng)，先將硅膠鍵合到空間臂一端，得到硅膠KH-560，再將其與氨化環(huán)糊精在無水甲苯體系中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，110°C反應(yīng)10h，成功而且簡(jiǎn)便地得到β-環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相，簡(jiǎn)單、效果好。⑤.毛細(xì)管填充柱的制備
將上述β-環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相按已申請(qǐng)專利的方法填充到毛細(xì)管柱中，并燒制柱塞，制備成毛細(xì)管填充柱；(此步驟已申請(qǐng)專利，申請(qǐng)公開號(hào)為CN102512849A)
⑥.毛細(xì)管電色譜拆分色譜柱在采用毛細(xì)管電色譜模式對(duì)手性藥物進(jìn)行拆分中的應(yīng)用。應(yīng)用實(shí)例
下面采用本發(fā)明制得的β-環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相填充的毛細(xì)管柱，對(duì)鹽酸舍曲林和鹽酸克倫特羅進(jìn)行手性拆分。毛細(xì)管電色譜模式拆分手性藥物的圖譜見圖I和圖2，從圖I中可以看出鹽酸舍曲林可以達(dá)到基線分離，而圖2鹽酸克倫特羅只能達(dá)到部分分離。證明了本發(fā)明制得的β_環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相填充的毛細(xì)管柱，并且應(yīng)用毛細(xì)管電色譜模式拆分手性藥物具有可行性，也為環(huán)糊精衍生物手性固定相應(yīng)用到毛細(xì)管電色譜中奠定了基礎(chǔ)。鹽酸舍曲林和鹽酸克倫特羅參數(shù)對(duì)比
—I流動(dòng)相I毛細(xì)管柱
鹽酸舍曲林乙腈/磷酸鹽=20:80 40αηΧ100μιη ·(1 (填充長(zhǎng)度15cm)_
亙酸克倫特羅I磷酸鹽緩沖溶液|40αηΧ100μιη ·(1 (填充長(zhǎng)度15cm)
本發(fā)明成功制備了毛細(xì)管填充柱β -環(huán)糊精鍵合硅膠固定相，相比目前其他合成
方法，采用分步合成法能有效的控制了產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和純度，并且選用了毒性較小的反應(yīng)物，
此外，本發(fā)明使用此固定相成功拆分了藥物，為毛細(xì)管填充柱的研究起到推動(dòng)作用，使毛細(xì)
管電色譜能得以更廣泛的應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種以β-環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法，其特征在于，以β -環(huán)糊精為起始反應(yīng)物，采用分步合成法，依次合成六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β -環(huán)糊精、六位單取代的氨化-β -環(huán)糊精、硅烷化硅膠以及β -環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相，將β -環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相裝填至毛細(xì)管柱中，制備成毛細(xì)管填充柱。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的以β_環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 ①.六位單取代的對(duì)甲苯磺酰環(huán)糊精的制備 a.在燒杯中加入200ml蒸餾水，加熱至微沸，稱取40gβ -環(huán)糊精，攪拌加入至溶解，趁熱快速抽濾，濾液于冰箱中放置12h，β -環(huán)糊精結(jié)晶析出，抽濾，得重結(jié)晶后的β -環(huán)糊精，按上述步驟β -環(huán)糊精重結(jié)晶3次，將所得3次重結(jié)晶的β -環(huán)糊精置于真空干燥箱中80°C干燥12 h，備用； b.對(duì)甲苯磺酰氯重結(jié)晶及其乙腈溶液的制備，稱取對(duì)甲苯磺酰氯10g，加入30ml石油醚，置于加熱套中加熱至60 90°C使之溶解，放置室溫18-25°C，并于4°C冷藏12h，抽濾，得重結(jié)晶的對(duì)甲苯磺酰氯，按上述步驟重結(jié)晶3次，再置真空干燥箱中25°C干燥4h，得3次重結(jié)晶的對(duì)甲苯磺酰氯，稱取5. 04g 3次重結(jié)晶的對(duì)甲苯磺酰氯溶于15ml乙腈中，成對(duì)甲苯磺酰氯乙腈溶液，備用； c.六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-環(huán)糊精合成方法，稱取30g步驟a中3次重結(jié)晶后的β -環(huán)糊精于三頸燒瓶中，加入250ml蒸餾水，室溫18-25°C下，逐滴加入濃度為O. 335g/ml氫氧化鈉溶液IOml,攪拌Ih,冰浴中在45_55min內(nèi)逐滴加入步驟b中制備的對(duì)甲苯磺酰氯乙腈溶液15ml,繼續(xù)攪拌20min,抽濾,濾液用質(zhì)量濃度為10%的鹽酸調(diào)至pH=8,4°C冷藏12h，過濾，得固體物，固體物在真空干燥箱中50°C干燥12h，成磺酰化反應(yīng)粗產(chǎn)物，稱取25g的磺?；磻?yīng)粗產(chǎn)物，置于加熱套中加水加熱，至其完全溶解，再冷卻至室溫18_25°C，冷藏12h，抽濾，得重結(jié)晶產(chǎn)物，按上述步驟重結(jié)晶3次，得3次重結(jié)晶的產(chǎn)物六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β -環(huán)糊精，再置于真空干燥箱中，在50°C下干燥12h，用NMR及TLC驗(yàn)證六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β -環(huán)糊精的純度，放于干燥器中，備用； ②.六位單取代的氨化-β-環(huán)糊精的制備 稱取步驟①的c步驟中制備的六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β -環(huán)糊精3. 0g，溶于45ml乙二胺，均勻混合后，于80°C下反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去未反應(yīng)的過量乙二胺，再將剩余的混合物均勻分散在-10°C的冰丙酮中，沉淀析出粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物用體積濃度為10%的甲醇溶液溶解，再用丙酮沉出，如此反復(fù)3-5次，得沉出物，真空干燥后，得白色產(chǎn)物，即為六位單取代的氨化-β -環(huán)糊精，用核磁共振氫譜表征制備的六位單取代氨化-β -環(huán)糊不目； ③.硅烷化硅膠的制備 用Y-(2, 3_環(huán)氧丙氧)丙基二甲氧基娃燒，即ΚΗ-560作為擔(dān)體,利用ΚΗ-560的乙氧基與硅膠表面的硅羥基反應(yīng)，制備得到硅烷化硅膠，即硅膠ΚΗ-560，方法是 a.硅膠活化 將硅膠表面的金屬離子除去，使硅膠表面的硅醇基裸露的更多，從而使更多的環(huán)糊精可以鍵合到硅膠的表面，以提高鍵合量，方法是稱取I. Og高效液相色譜硅膠，加到三口燒瓶?jī)?nèi)，用7. 5ml質(zhì)量濃度為20%的鹽酸溶液，110°C加熱攪拌回流6h，在室溫18-25°C下過濾，以超純水洗滌濾餅，直至pH呈中性，在真空干燥箱中120°C下干燥12h，得活化后的硅膠，置于干燥器中備用； b.硅膠KH-560合成 稱取上述活化后的硅膠O. 5g于三頸瓶中，加入5ml無水甲苯和30 μ I三乙胺，形成混懸液，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入250 μ I ΚΗ-560,100 120°C攪拌回流10h，反應(yīng)完成后，抽濾，依次用無水甲苯，無水乙醚，丙酮，甲醇各洗滌3次，80°C真空干燥12h，得硅烷化硅膠，即硅膠KH-560 ； ④.β-環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相的制備 將步驟③的b步驟中制備的硅膠ΚΗ-560置于真空干燥箱120°C真空干燥12h，稱取O.2g干燥后的硅膠KH-560和步驟②中制備的六位單取代氨化-β -環(huán)糊精I(xiàn). Og,置于單口燒瓶中，再加入IOml無水甲苯，氮?dú)獗Ｗo(hù)，110°C加熱攪拌回流10h，反應(yīng)完成后，抽濾，用甲醇、丙酮和水洗滌3-5次，60°C于真空干燥箱中干燥12 h，得β-環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相； ⑤.毛細(xì)管填充柱的制備 將β -環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相按申請(qǐng)公開號(hào)為CN102512849A的方法，填充到毛細(xì)管柱中，并燒制柱塞，制備成毛細(xì)管填充柱，即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的以β_環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法，其特征在于，所述的無水甲苯是將分子篩置于馬弗爐中，在400°C下活化4h，然后置于玻璃器皿中，冷卻后迅速倒入甲苯中，除去甲苯中的微量水分子，得到無水甲苯，反應(yīng)所需的玻璃器皿反應(yīng)前均在115-125°C干燥。
4.權(quán)利要求I或2所述方法制備成的以β_環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱，在采用毛細(xì)管電色譜模式對(duì)手性藥物進(jìn)行拆分中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及以β-環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法及在手性藥物分離中的應(yīng)用，可有效解決毛細(xì)管電色譜柱的制備及手性藥物分離的問題，其解決的技術(shù)方案是，包括有以下步驟①六位單取代的對(duì)甲苯磺酰-β-環(huán)糊精的制備，②六位單取代的氨化-β-環(huán)糊精的制備，③硅烷化硅膠的制備，④β-環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相的制備，⑤毛細(xì)管填充柱的制備，本發(fā)明價(jià)格低廉，低毒，環(huán)境污染低，是β-環(huán)糊精為鍵合固定相的毛細(xì)管電色譜柱的制備方法及在手性分離中的應(yīng)用上的創(chuàng)新。
文檔編號(hào)C07B57/00GK102921193SQ201210452390
公開日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月13日
發(fā)明者周婕, 張振中, 劉倩, 鄭旭霞, 葉凡 申請(qǐng)人:鄭州大學(xué)