專利名稱：一種環(huán)糊精鍵合固定相的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及色譜固定相，具體的說(shuō)是采用click chemistry作為鍵合反應(yīng)方法制 備環(huán)糊精鍵合固定相。
背景技術(shù)：
環(huán)糊精是一類由葡萄糖單元通過(guò)l，4-a糖苷鍵聯(lián)接起來(lái)的環(huán)狀寡聚糖，具有特 殊的穴腔結(jié)構(gòu)，能與許多分子發(fā)生"超分子"相互作用，形成"包容絡(luò)合物"，被稱為繼冠醚 之后的"第二代主體分子"。隨著色譜分離技術(shù)的快速發(fā)展，環(huán)糊精在色譜分離(包括毛細(xì) 管電泳和電色譜)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用[Song Li and William C. Purdy，Chem. Rev. 1992， 92， 1457-1470]。將環(huán)糊精或者其衍生物通過(guò)化學(xué)鍵合的方式固載到硅膠等基質(zhì)表面作為 液相色譜分離材料，顯示出很好的分離性能，可用于手性分離[D.W.Armstrong, et al， J Chromatogr.A， 1994， 743， 261-267 ;Ng Siu Choon，et al，J.S印Sci. 2006， 29， 1849-1871]， 位置異構(gòu)體分離[Yu-Qi Feng，et al，Anal. Chim. Acta, 2004， 513， 481-492]等。固體基質(zhì)表 面鍵合環(huán)糊精的方法受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，取得了很大進(jìn)展。前期的研究中，化學(xué) 鍵合方法主要是非選擇性的鍵合反應(yīng)，即同時(shí)將環(huán)糊精上的所有羥基或多個(gè)羥基進(jìn)行衍生 化，然后與硅膠表面的活性基團(tuán)反應(yīng)[D. W. Armstrong, US-Patent (1985) 4539399]，得到的 分離材料表面鍵合量較高。但是，這些鍵合方法得到的是交聯(lián)的環(huán)糊精固定相，其表面鍵合 環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)在一定程度上被破壞，因而其分離選擇性也受到了一定影響。近年來(lái)，選擇性 的鍵合反應(yīng)越來(lái)越受重視，即環(huán)糊精或其衍生物上只有一個(gè)或幾個(gè)受限制的基團(tuán)與硅膠表 面的活性基團(tuán)反應(yīng)，得到的分離材料表面的環(huán)糊精能很好的保持其結(jié)構(gòu)[Siu-Choon Ng，et al，Tetrahedron Lett. 2002，43，677-681 ;Siu-Choon Ng，et al，Tetrahedron Lett. 2004， 45， 4469-4472]，其分離選擇性也得到了較大的提高。 近年來(lái)，在親水色譜模式下分離強(qiáng)極性化合物越來(lái)越受到關(guān)注。親水作用液相 色譜模式類似于正相色譜，使用極性固定相和極性相對(duì)較小的流動(dòng)相，但與正相色譜不同 的是其流動(dòng)相中含水(水含量一般小于40% ) [Alpert， A. J. J. Chromatogr. 1990,499， 177-196 ;K皿t Irgum，et al， J. S印.Sci. 2006， 29， 1784-1821]。親水作用色譜的固定相是 親水色譜的核心。目前，對(duì)各類親水作用固定相缺乏系統(tǒng)的比較研究，還沒(méi)有被廣泛使用 和普遍接受的親水作用色譜固定相[Guo， Y. et al， J. Chromatogr. A， 2005， 1074， 71-80]。 由于環(huán)糊精分子上含有多個(gè)羥基，是強(qiáng)親水的功能分子，適合作為親水色譜固定相[K皿t Irgum， et al， J. S印.Sci. 2006， 29， 1784-1821]。另外，由于環(huán)糊精分子特殊的空間結(jié)構(gòu)， 以環(huán)糊精分子為功能基團(tuán)的親水色譜固定相不僅可以實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單強(qiáng)極性化合物的分離，而且 可以在親水模式下實(shí)現(xiàn)對(duì)強(qiáng)極性對(duì)映異構(gòu)體的分離[MarkA. Strege， Anal. Chem. 2000,72， 1736-1739]。但是，這些選擇性的鍵合環(huán)糊精固定相的制備過(guò)程較復(fù)雜，反應(yīng)條件也比較苛 刻，操作難度大。因此，發(fā)展快速、簡(jiǎn)便的高選擇性鍵合方法具有重要意義。
"點(diǎn)擊化學(xué)"(click chemistry)是美國(guó)斯克利普斯研究所(ScrippsResearch Institute)的K. B. Sharpless教授(2001年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)得主)在2001年提出的一個(gè)
4合成化學(xué)概念[K.Barry Sharpless， et al， Angew. Chem. Int. Ed. 2001， 40， 2004-2021]，其 核心內(nèi)容是以高選擇性，高轉(zhuǎn)化率，條件溫和，操作簡(jiǎn)單的化學(xué)反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)功能基團(tuán)的偶 聯(lián)，達(dá)到高效制備功能分子和功能材料的目的。當(dāng)前，最為廣泛使用的"點(diǎn)擊化學(xué)"(click chemistry)反應(yīng)是Huisgen 1，3-diploar cycloaddition反應(yīng)，其反應(yīng)式如下
r <formula>formula see original document page 5</formula>"點(diǎn)擊化學(xué)"(click chemistry)已經(jīng)被應(yīng)用到制備高效液相色譜分離材料的研究 中[Aiwen Lei and Xinmiao Liang，et al， Chem. Comm. 2006， 4512-4514]，并且顯示出潛在 的優(yōu)勢(shì)。目前還沒(méi)有使用"點(diǎn)擊化學(xué)"(clickchemistry)制備環(huán)糊精鍵合固定相的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種全新的、操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)條件溫和的環(huán)糊精鍵合固定 相的制備方法，以提高環(huán)糊精的鍵合選擇性和鍵合量，改善環(huán)糊精固定相的分離性能，特別 是適合于在親水色譜模式下分離強(qiáng)極性化合物。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為 —種采用click chemistry作為反應(yīng)方法制備鍵合型環(huán)糊精固定相，即利用硅膠 表面的疊氮基(或炔基)與環(huán)糊精分子上修飾的炔基(或疊氮基)的1，3-環(huán)加成反應(yīng)，將 單取代環(huán)糊精高選擇性的鍵合到硅膠表面。首先通過(guò)硅烷偶聯(lián)劑在硅膠表面引入疊氮基或 者炔基制備疊氮基硅膠衍生物或炔基硅膠衍生物，然后通過(guò)疊氮基與炔基的1，3-環(huán)加成 反應(yīng)，即clickchemistry，在水溶液中20 8(TC的條件下反應(yīng)24 72小時(shí)，將修飾了炔 基或疊氮基的環(huán)糊精鍵合到硅膠表面，經(jīng)洗滌、干燥等后處理即得環(huán)糊精鍵合固定相。
所得分離材料經(jīng)紅外光譜和元素分析進(jìn)行結(jié)構(gòu)和鍵合量表征，以勻漿法填充 4. 6*150mm不銹鋼色譜柱，以堿基、核苷和糖等一系列強(qiáng)極性化合物為探針評(píng)價(jià)了所得環(huán)糊 精鍵合固定相的分離性能。本發(fā)明所提供的鍵合反應(yīng)選擇性高，能很好的保持環(huán)糊精的結(jié) 構(gòu)，制備方法簡(jiǎn)便，適用范圍較廣，所制備的環(huán)糊精鍵合固定相表面鍵合率高，適合用作高 效液相色譜分離材料，特別適用于在親水液相色譜模式下分離強(qiáng)極性化合物。
具體制備步驟如下 1).疊氮基硅膠衍生物和炔基硅膠衍生物的制備 a.疊氮基硅膠的制備在有機(jī)溶劑中加入硅烷偶聯(lián)劑、疊氮化鈉和催化劑，硅烷 偶聯(lián)劑、疊氮化鈉與催化劑的摩爾比為1 : 1.2-3 : 0.01-0. l，于60 13(TC條件下反應(yīng) 8 24小時(shí)，然后加入經(jīng)16(TC加熱6 18小時(shí)的微球型硅膠，每克硅膠所需硅烷偶聯(lián)劑 為2-8mmo1 ;在60 13(TC條件下繼續(xù)反應(yīng)12 24小時(shí)，用砂芯漏斗過(guò)濾，依次用二氯甲 烷，乙醇，水，丙酮洗滌，所得固體于真空干燥箱中40 8(TC條件下干燥6 12小時(shí)，即得 疊氮基硅膠衍生物。 步驟a所用硅烷偶聯(lián)劑有如下結(jié)構(gòu)
<formula>formula see original document page 5</formula>
其中，X為-0CH3或-0CH2CH3, A為CI—或Br—。 所用有機(jī)溶劑為乙腈、甲苯或N， N-二甲基甲酰胺，每克硅膠所需有機(jī)溶劑的量為5-20mL ;催化劑為碘化鈉或者碘化鉀；球形硅膠是粒徑和孔徑均勻的全多孔硅膠小球，粒徑為5 40 ii m，孔徑為60 300A。 b.炔基硅膠的制備在有機(jī)溶劑中加入硅烷偶聯(lián)劑和丙炔胺，硅烷偶聯(lián)劑丙炔胺
的摩爾比為l : 1.2-3，于60 10(TC條件下反應(yīng)8 24小時(shí)，然后加入經(jīng)16(TC加熱6
18小時(shí)的微球型硅膠，每克硅膠所需硅烷偶聯(lián)劑為2-8mmo1 ;在60 IO(TC條件下繼續(xù)反
應(yīng)12 24小時(shí)，用砂芯漏斗過(guò)濾，依次用二氯甲烷，乙醇，水，丙酮洗滌，所得固體于真空干
燥箱中40 8(TC條件下干燥6 12小時(shí)，即得炔基硅膠衍生物。 步驟b所用硅烷偶聯(lián)劑有如下結(jié)構(gòu) 其中，X為_(kāi)0CH3或_0CH2CH3 。 所用有機(jī)溶劑為乙腈、甲苯或N， N- 二甲基甲酰胺，每克硅膠所需有機(jī)溶劑的量為5-20mL ;球形硅膠是粒徑和孔徑均勻的全多孔硅膠小球，粒徑為5 40 ii m，孔徑為60 300A。 2).含疊氮基的單取代環(huán)糊精和含炔基的單取代環(huán)糊精的制備
a.疊氮基環(huán)糊精的制備 在DMF中加入單-6-對(duì)甲基苯磺?；?環(huán)糊精，疊氮化鈉，催化劑。單_6_對(duì)甲基苯磺?；鵢環(huán)糊精，疊氮化鈉與催化劑的摩爾比為1 : 3 10 : 0. 2 1，于50 IO(TC反應(yīng)12 36小時(shí)，然后將溶劑DMF濃縮至20 % 80% ，將濃縮后的反應(yīng)體系倒入大量的丙酮中析出固體，用水重結(jié)晶1 3次即得單-6-疊氮基-環(huán)糊精。其中，催化劑為碘化鈉或者碘化鉀。 步驟a所得疊氮基環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)可表示為
b.炔基環(huán)糊精的制備將單_6-對(duì)甲基苯磺酰基-環(huán)糊精，丙炔胺混合，每克單-6-對(duì)甲基苯磺?；?環(huán)糊精所需丙炔胺為1 10ml，于50 85t:反應(yīng)12 36小時(shí)，然后將反應(yīng)體系倒入乙腈中析出固體，用甲醇重結(jié)晶1 3次即得單-6-去氧-N-炔丙基胺-環(huán)糊精。 步驟b所得疊氮基環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)可表示為
<formula>formula see original document page 7</formula> 3). click chemistry反應(yīng)鍵合環(huán)糊精 將上述制備的疊氮基硅膠衍生物(或炔基硅膠衍生物)加入體積比為1/10 10/1的水/甲醇或水/乙醇混合溶劑中，每克硅膠衍生物所需混合溶劑量為20-50mL，再 加入單-6-去氧-N-炔丙基胺_環(huán)糊精(或單-6-去氧-疊氮基-環(huán)糊精)、催化劑，環(huán)糊 精的摩爾劑量為硅膠上疊氮基(或炔基)的摩爾劑量的1 io倍，催化劑為硫酸銅和抗壞 血酸鈉，所用摩爾劑量分別為修飾有末端炔基的醇羥基化合物摩爾劑量的1 10%和2 40% ;在10 8(TC條件下反應(yīng)24 72小時(shí)，用砂芯漏斗過(guò)濾，依次用乙醇，水，重量濃度 2-20% EDTA水溶液，水，丙酮洗滌，所得固體于真空干燥箱中40 8(TC條件下干燥6 12 小時(shí)，即鍵合型環(huán)糊精固定相。
該鍵合反應(yīng)可表示為
<formula>formula see original document page 7</formula>
<formula>formula see original document page 8</formula> 或<formula>formula see original document page 8</formula> 本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn) 1.應(yīng)用范圍廣。本發(fā)明使用click chemistry將環(huán)糊精高選擇性的鍵合到硅膠表 面，得到的色譜分離材料具有很高的柱效和分離選擇性，是一類分離性能很好的的親水色 譜分離材料，可用于分離分析各類強(qiáng)極性化合物，也可以用于各種強(qiáng)極性化合物的分離制備。 2.鍵合反應(yīng)選擇性高，表面鍵合量大。由于Click chemistry的反應(yīng)選擇性和反 應(yīng)轉(zhuǎn)化率很高，在表面反應(yīng)中表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢(shì)，可以避免副反應(yīng)的發(fā)生，同時(shí)提高表面反 應(yīng)效率，所以本發(fā)明制備鍵合型環(huán)糊精固定相是一種高選擇性的制備方法，能夠很好的保 持硅膠表明環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)和功能，同時(shí)其表面鍵合量較高。 3.制備過(guò)程簡(jiǎn)單，鍵合反應(yīng)條件溫和，有利于實(shí)現(xiàn)商品化。本發(fā)明提供的制備過(guò)程 較文獻(xiàn)報(bào)道的制備選擇性鍵合環(huán)糊精固定相簡(jiǎn)單，步驟較少，中間體容易制備。同時(shí)，最后 一步鍵合反應(yīng)(也是最關(guān)鍵的一步)為clickchemistry反應(yīng)，反應(yīng)條件溫和，在水溶液中 進(jìn)行，而且十分容易放大到大量制備(公斤級(jí))。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備的環(huán)糊精鍵合固定相用于分離堿基和核苷的色譜圖；
圖2為本發(fā)明實(shí)施例1制備的環(huán)糊精鍵合固定相用于分離糖的色譜圖；
圖3為本發(fā)明實(shí)施例2制備的環(huán)糊精鍵合固定相用于分離堿基和核苷的色譜圖；
圖4為本發(fā)明實(shí)施例2制備的環(huán)糊精鍵合固定相用于分離糖的色譜圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所述的固定相可有效地用于親水作用色譜模式下對(duì)極性化合物的分離。下 面結(jié)合實(shí)例和附圖，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)例僅限于說(shuō)明本發(fā)明，而非對(duì)本發(fā)明的限定。 實(shí)施例1燥12小時(shí)即得產(chǎn)品，結(jié)構(gòu)為 實(shí)施例3 在1000ml三口燒瓶中加入500ml無(wú)水DMF，45mmol(約10ml) 3-氯丙基三乙氧基硅烷，60mmol (約4. 0g)疊氮化鈉，然后加入3. Ommol碘化鈉(約0. 5g)作為催化劑，8(TC下反應(yīng)24h，然后加入粒徑為5 m的球形硅膠顆粒20g， 80°C下再反應(yīng)24h，然后依次用二氯甲烷，乙醇，水，丙酮各洗滌兩次，每次200ml，6(TC真空干燥12小時(shí)即得(3-丙基)疊氮基硅膠。 50ml的三口燒瓶在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入15ml丙炔胺，然后加入6g單_6_對(duì)甲基苯磺?；?p-環(huán)糊精，加熱回流12小時(shí)。氮?dú)獗Ｗo(hù)下冷卻至室溫，將反應(yīng)體系倒入乙腈中析出固體。固體用甲醇重結(jié)晶即得產(chǎn)品單_6-去氧-N-炔丙基胺基-13 -環(huán)糊精。
取2. 5g干燥后(3-丙基)疊氮基硅膠于反應(yīng)器中加入60ml水，60ml乙醇，4g單-6-去氧-N-炔丙基胺-13 -環(huán)糊精，然后加入0. 075g硫酸銅和0. 18g抗壞血酸鈉作為催化劑，室溫下反應(yīng)48h，依次用乙醇，水，10%的EDTA水溶液，水，丙酮各洗滌兩次，每次100ml，室溫下真空干燥12小時(shí)即得產(chǎn)品，結(jié)構(gòu)為
實(shí)施例2 在1000ml三口燒瓶中加入500ml無(wú)水甲苯，120mmo1 (約30ml) 3-異氰酸基三乙氧基硅烷，160mmo1丙炔胺(約9g) ， 80°C下反應(yīng)12h，然后加入粒徑為5 y m的球形硅膠顆粒40g，8(TC下再反應(yīng)48h，然后依次用二氯甲烷，乙醇，水，丙酮各洗滌兩次，每次200ml，6(TC真空干燥12小時(shí)，即得炔基硅膠衍生物。 50ml的三口燒瓶在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入15mlDMF，然后加入10g單_6_對(duì)甲基苯磺?；?P _環(huán)糊精，加熱至65t:反應(yīng)24小時(shí)。將溶劑DMF濃縮到5ml，倒入丙酮中析出固體。固體用水重結(jié)晶即得產(chǎn)品單_6-去氧_ 13 _疊氮基環(huán)糊精。 取2. 5g干燥后炔基硅膠衍生物于反應(yīng)器中加入60ml水，60ml乙醇，4g單_6_去氧_疊氮基_環(huán)糊精，然后加入0. 05g硫酸銅和0. 15g抗壞血酸鈉作為催化劑，室溫下反應(yīng)48h，依次用乙醇，水，10%的EDTA水溶液，水，丙酮各洗滌兩次，每次100ml，室溫下真空干
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與實(shí)施例1不同之處在于，采用單_6-對(duì)甲基苯磺?；?a -環(huán)糊精代替單_6-對(duì)
甲基苯磺?；?P-環(huán)糊精，按實(shí)施例1的合成步驟可得另一種環(huán)糊精鍵合固定相，結(jié)構(gòu)為
其結(jié)構(gòu)為
實(shí)施例4 與實(shí)施例2不同之處在于，采用單_6-對(duì)甲基苯磺酰基-a -環(huán)糊精代替單_6_對(duì) 甲基苯磺?；鵢 P _環(huán)糊精，按實(shí)施例2的合成步驟可得另一種環(huán)糊精鍵合固定相，結(jié)構(gòu)為
其結(jié)構(gòu)為
實(shí)施例5 使用實(shí)施例1所制備鍵合型環(huán)糊精分離材料，用勻漿法填裝4.6*150咖不銹鋼色 譜柱，在親水作用色譜模式下分離堿基和核苷混合物，單糖及其衍生物和二糖的混合物。以 乙腈/水作為流動(dòng)相，梯度洗脫條件下，兩類混合物得到了很好的分離(如圖l和圖2所 示)。 圖l所用色譜條件為流動(dòng)相A為lOmM醋酸銨水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，流速 lml/min ;梯度條件為0_5min，5% A ;5_7min，5% -18% A ;7_15min， 18% ;柱溫30。C;檢測(cè) 波長(zhǎng)260nm。圖中1為胸腺嘧啶，2為尿嘧啶，3為尿苷，4為腺苷，5為腺嘌呤，6為胞嘧啶， 7為胞苷，8為鳥苷。 圖2所用色譜條件為流動(dòng)相A為lOmM醋酸銨水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，流速 lml/min ;梯度條件為:0_20min，10% -25% A ;20-25min， 25% -30% A ;柱溫30。C ;蒸發(fā)光
散射器檢測(cè)漂移管溫度50°C ;吹掃氣壓力20psi。圖中1為粘液酸，2為核糖，3為木糖，
4為果糖，5為甘露糖，6為葡萄糖，7為山梨醇，8為蔗糖，9為纖維二糖，10為麥芽糖，11為 乳糖。 實(shí)施例6 使用實(shí)施例2所制備鍵合型環(huán)糊精分離材料，用勻漿法填裝4. 6*150mm不銹鋼色 譜柱，在親水作用色譜模式下分離堿基和核苷混合物，單糖和二糖混合物。以乙腈/水作為
10流動(dòng)相，梯度洗脫條件下，兩類混合物得到了很好的分離(如圖3和圖4所示)。 圖3所用色譜條件為流動(dòng)相A為10mM醋酸銨水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，流速
lml/min ;梯度條件為0_5min，5% A ;5_7min，5% -18% A ;7_15min， 18% ;柱溫30。C;檢測(cè)
波長(zhǎng)260nm。圖中1為胸腺嘧啶，2為尿嘧啶，3為尿苷，4為腺苷，5為腺嘌呤，6為胞嘧啶，
7為胞苷，8為鳥苷。 圖4所用色譜條件為流動(dòng)相A為lOmM醋酸銨水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，流速 lml/min ;梯度條件為0-10min， 10% A ;10-25min， 10% -30% A ;柱溫30。C;蒸發(fā)光散射器 檢測(cè)漂移管溫度5(TC ;吹掃氣壓力20psi。圖中1為粘液酸，2為核糖，3為木糖，4為果 糖，5為甘露糖，6為葡萄糖，7為山梨醇，8為蔗糖，9為纖維二糖，10為麥芽糖，11為乳糖。
權(quán)利要求
一種環(huán)糊精鍵合固定相的制備方法，其特征在于，按如下步驟采用click chemistry反應(yīng)進(jìn)行制備1).疊氮基硅膠衍生物和炔基硅膠衍生物的制備a.疊氮基硅膠衍生物的制備在有機(jī)溶劑中加入硅烷偶聯(lián)劑、疊氮化鈉和催化劑，硅烷偶聯(lián)劑、疊氮化鈉與催化劑的摩爾比為1∶1.2-3∶0.01-0.1，于60～130℃條件下反應(yīng)8～24小時(shí)，然后加入經(jīng)160℃加熱6～18小時(shí)的微球型硅膠，每克硅膠所需硅烷偶聯(lián)劑為2-8mmol；在60～130℃條件下繼續(xù)反應(yīng)12～24小時(shí)，用砂芯漏斗過(guò)濾，依次用二氯甲烷，乙醇，水，丙酮洗滌，所得固體于真空干燥箱中40～80℃條件下干燥6～12小時(shí)，即得疊氮基硅膠衍生物；b.炔基硅膠衍生物的制備在有機(jī)溶劑中加入硅烷偶聯(lián)劑和丙炔胺，硅烷偶聯(lián)劑丙炔胺的摩爾比為1∶1.2-3，于60～100℃條件下反應(yīng)8～24小時(shí)，然后加入經(jīng)160℃加熱6～18小時(shí)的微球型硅膠，每克硅膠所需硅烷偶聯(lián)劑為2-8mmol；在60～100℃條件下繼續(xù)反應(yīng)12～24小時(shí)，用砂芯漏斗過(guò)濾，依次用二氯甲烷，乙醇，水，丙酮洗滌，所得固體于真空干燥箱中40～80℃條件下干燥6～12小時(shí)，即得炔基硅膠衍生物；2).含疊氮基的單取代環(huán)糊精和含炔基的單取代環(huán)糊精的制備a.疊氮基環(huán)糊精的制備在DMF中加入單-6-對(duì)甲基苯磺?；?環(huán)糊精，疊氮化鈉，催化劑；單-6-對(duì)甲基苯磺?；?環(huán)糊精，疊氮化鈉，催化劑的摩爾比為1∶3～10∶0.2～1，于50～100℃反應(yīng)12～36小時(shí)，然后將溶劑DMF濃縮至20％～80％，將濃縮后的反應(yīng)體系倒入大量的丙酮中析出固體，用水重結(jié)晶1～3次即得單-6-疊氮基-環(huán)糊精；b.炔基環(huán)糊精的制備將單-6-對(duì)甲基苯磺?；?環(huán)糊精，丙炔胺混合，每克單-6-對(duì)甲基苯磺酰基-環(huán)糊精所需丙炔胺為1～10ml，于50～85℃反應(yīng)12～36小時(shí)，然后將反應(yīng)體系倒入乙腈中析出固體，用甲醇重結(jié)晶1～3次即得單-6-去氧-N-炔丙基胺基-環(huán)糊精；3).click chemistry反應(yīng)鍵合環(huán)糊精將上述制備的疊氮基硅膠衍生物或炔基硅膠衍生物加入體積比為1/10～10/1的水/甲醇或水/乙醇混合溶劑中，每克硅膠衍生物所需混合溶劑量為20-50mL，再加入單-6-去氧-N-炔丙基胺-環(huán)糊精或單-6-去氧-疊氮基-環(huán)糊精、催化劑；催化劑為硫酸銅和抗壞血酸鈉，所用摩爾劑量分別為單取代環(huán)糊精摩爾劑量的1～10％和2～40％；在10～80℃條件下反應(yīng)24～72小時(shí)，用砂芯漏斗過(guò)濾，依次用乙醇，水，重量濃度2-20％EDTA水溶液，水，丙酮洗滌，所得固體于真空干燥箱中40～80℃條件下干燥6～12小時(shí)，即鍵合型環(huán)糊精固定相。
2. 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)所用的有機(jī)溶劑為乙腈，甲 苯或N， N-二甲基甲酰胺；每克硅膠所需有機(jī)溶劑的量為5-30mL。
3. 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)中a所用硅烷偶聯(lián)劑有如下結(jié)構(gòu) <formula>formula see original document page 2</formula>其中，X為-OCH3或-OCH2CH3， A為CI—或Br—。
4. 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)中a所用的催化劑為碘化鈉或者碘化鉀。
5. 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)中b所用硅烷偶聯(lián)劑有如下 結(jié)構(gòu)其中，X為-0CH3或-0CH2CH3。
6. 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟1)所用的球形硅膠是全多孔硅 膠小球，粒徑為5 40 ii m，孔徑為60 300A。
7. 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟2)中a所用的催化劑為碘化鈉 或者碘化鉀。
8. 按照權(quán)利要求l所述的制備方法，其特征在于步驟2)所用的環(huán)糊精為a-環(huán)糊精， e-環(huán)糊精，或Y-環(huán)糊精。
9. 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟3)所用的單-6-去氧-N-炔丙 基胺_環(huán)糊精或單_6-疊氮基_環(huán)糊精摩爾比劑量為硅膠上疊氮基或炔基的摩爾比劑量的 2 5倍。
全文摘要
本發(fā)明涉及環(huán)糊精鍵合固定相的制備，具體的說(shuō)是采用click chemistry作為鍵合反應(yīng)方法制備環(huán)糊精鍵合固定相，該制備方法包括兩個(gè)步驟首先通過(guò)硅烷偶聯(lián)劑在硅膠表面引入疊氮基或者炔基制備疊氮基硅膠衍生物或炔基硅膠衍生物，然后通過(guò)疊氮基與炔基的1，3-環(huán)加成反應(yīng)，即clickchemistry，在水溶液中20～80℃的條件下反應(yīng)24～72小時(shí)，將修飾了炔基或疊氮基的環(huán)糊精鍵合到硅膠表面。本發(fā)明所提供的鍵合反應(yīng)選擇性高，能很好的保持環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)，制備方法簡(jiǎn)便，適用范圍廣，所制備的環(huán)糊精鍵合固定相表面鍵合量較高，適合用作高效液相色譜分離材料，特別適用于在親水液相色譜模式下分離強(qiáng)極性化合物。
文檔編號(hào)B01J20/286GK101745371SQ20081022987
公開(kāi)日2010年6月23日 申請(qǐng)日期2008年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月17日
發(fā)明者梁鑫淼, 趙艷艷, 郭志謀 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所