專利名稱：一種蒙花苷單體的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中分離化合物單體的方法，具體來(lái)說(shuō)，涉及一種從野菊花中提取蒙花苷單體的分離純化方法，屬于化合物單體的分離純化技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
野菊花(Flowerof Indian Dendranthema, Wild chrysanthemum)為菊科多年生草本植物野菊的頭狀花序，外形與菊花相似。產(chǎn)品以色黃無(wú)梗、完整、氣香、花未全開(kāi)者為佳。野菊花可廣泛用于治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、風(fēng)火赤眼、頭痛眩暈等病證。同時(shí)又有很好的降壓作用，可用于高血壓病的輔助治療。蒙花苷是野菊花的特征性化學(xué)成分，也是野菊花中活性最高的黃酮類成分，其英文名為 Buddleoside,化學(xué)名為:7-[[6-0-(6-deoxy-alpha-L_mannopyranosyl)-beta-D-glucopyranosyl]oxy]-5_hydroxy-4’ -methoxyflavone,分子式為 C28H32O14,分子量為592.54,屬于Flavonoids黃酮類,其結(jié)構(gòu)式如下:·
權(quán)利要求
1.一種蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟: (1)提取 將野菊花藥材粉碎成直徑3mm的粗粉，按照藥材重量:乙醇溶液體積=IKg:1OL計(jì)算，加入體積百分比為95%的乙醇溶液，回流提取3 4次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，收集、合并濾液； (2)濃縮 將步驟(I)收集、合并的濾液回收乙醇，濃縮至原濾液體積的10%，常溫下靜置析晶10 12小時(shí)，過(guò)濾收集沉淀，除去濾液，將沉淀60°C烘干后進(jìn)行下一步洗滌處理； (3)溶劑洗滌 向步驟(2 )經(jīng)烘干后的沉淀中加入IO倍量體積的甲醇進(jìn)行超聲波洗滌，待產(chǎn)品與甲醇成混懸液后用中速濾紙過(guò)濾,收集過(guò)濾固體,60°C烘干后待下一步處理； (4)溶解、過(guò)濾 將步驟(3)經(jīng)烘干后的固體中，按照固體物質(zhì)量:溶劑體積=Ig: 10mL，加入有機(jī)溶劑溶解，溶解后的溶液用有機(jī)膜過(guò)濾，濾除顆粒雜質(zhì)，收集濾液； (5)高效制備液相色譜分離 取步驟(4)所得的濾液進(jìn)樣，用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)制備分離蒙花苷單體，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液； 所述反相高效液相色譜法的色譜條件如下: 采用填料為C18的色譜柱；以乙腈-0.3wt%醋酸水溶液V/V=30:70為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 334 nm ； (6)產(chǎn)品回收 將步驟(5)高效制備液相色譜分離得到的蒙花苷單體溶液加熱回收乙腈，蒙花苷單體在剩余醋酸水溶液中析出，放置室溫后用漏斗過(guò)濾析出固體，固體65°C干燥至干，即得到蒙花苷單體產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于步驟(4)所述有機(jī)溶劑為吡唆、四氫呋喃或DMF。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于所述蒙花苷單體進(jìn)行高效制備液相色譜分離前，采用液-質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)方法或氣-質(zhì)聯(lián)用、核磁共振碳譜、氫譜確定高效液相色譜中蒙花苷單體的峰形。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于所述液-質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)方法采用填料為C18的色譜柱，流動(dòng)相組成及流速與步驟(4)所述反相高效制備液相色譜法相同，柱溫為室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，根據(jù)色譜峰峰形和質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果，確定蒙花苷單體在液相色譜中所對(duì)應(yīng)的峰形與位置。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟:(1)、提取 取野菊花藥材1kg，粉碎成直徑3mm的粗粉，加入IOL體積百分比為95%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，收集、合并濾液； (2)、濃縮 將步驟(I)收集、合并的濾液回收乙醇，濃縮至3L時(shí)，常溫下靜置析晶12小時(shí)，過(guò)濾收集沉淀，除去濾液，將60°C烘干后的18克沉淀進(jìn)行下一步溶劑洗滌處理；(3)、溶劑洗滌 向步驟(2)所得的沉淀中加入ISOmL甲醇進(jìn)行超聲洗滌，待產(chǎn)品與甲醇成混懸液后用中速濾紙過(guò)濾,收集過(guò)濾固體，60°C烘干后固體為11克,待下一步處理； (4)、溶解、過(guò)濾 將步驟(3)過(guò)濾后所得的固體加IlOmL DMF溶解，溶解后的溶液用0.45 μ m納米有機(jī)膜過(guò)濾，濾液作為下一步制備蒙花苷單體的原料； (5 )、高效制備液相色譜分離 采用填料為C18的色譜柱，柱規(guī)格為50cmX5cm ； 流動(dòng)相組成為:乙腈-0.3%醋酸水溶液，體積比為30:70 ; 流速為60mL/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm，室溫操作； 取步驟(4)所得的濾液進(jìn)樣，每一針進(jìn)樣量3克，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液，重復(fù)此操作，直至制備完成； (6)、產(chǎn)品回收 將步驟(5)高效制備液相色譜分離得到的蒙花苷單體溶液加熱回收乙腈，得到析出產(chǎn)品水溶液1.4L，放置室溫后用漏斗過(guò)濾蒙花苷晶體，過(guò)濾固體于65°C干燥12小時(shí)，得到蒙花苷單體產(chǎn)品6.2克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)3天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為(6.2/10000) X 100%=0.62% ； 通過(guò)更換流動(dòng)相組分，利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復(fù)檢產(chǎn)品純度，測(cè)得結(jié)果為.99.32%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟:(1)提取 取野菊花藥材10kg，粉碎成直徑3mm左右的粗粉，加入100L體積百分比為95%的乙醇溶液，回流提取4次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，收集、合并濾液； (2)濃縮 將步驟(I)收集、合并的濾液回收乙醇，濃縮至約35L左右，常溫下靜置析晶10小時(shí)，過(guò)濾收集沉淀，除去濾液，將60°C烘干后的192克進(jìn)行下一步溶劑洗滌處理； (3)溶劑洗滌 向步驟(2)所得的沉淀中加入1.92L甲醇進(jìn)行超聲洗滌，充分洗滌后用中速濾紙過(guò)濾，收集過(guò)濾固體，烘干后固體約119克，待下一步處理； (4)溶解、過(guò)濾 將步驟(3)烘干后所得的固體加1190mL吡啶溶解，溶解后的溶液用0.45 μ m有機(jī)膜過(guò)濾，濾液作為下一步制備蒙花苷單體的原料； (5)高效制備液相色譜分離 采用填料為C18 (十八烷基硅烷鍵合硅膠)的色譜柱，柱規(guī)格為50CmX8Cm ； 流動(dòng)相組成為:乙腈-0.3%醋酸水溶液，體積比為30:70 ; 流速為 140mL/min; 檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm，室溫操作；取步驟(4)所得的濾液進(jìn)樣，每一針進(jìn)樣量6克，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液，重復(fù)此操作，直至制備完成； (6)產(chǎn)品回收 將步驟(5)高效制備液相色譜分離得到的蒙花苷單體溶液加熱回收乙腈，得到析出產(chǎn)品的水溶液8L，放置室溫后用漏斗過(guò)濾固體，過(guò)濾固體于65°C干燥12小時(shí)，得到蒙花苷單體產(chǎn)品71克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)約4.5天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為(71/10000) X 100%=0.71% ； 通過(guò)更換流動(dòng)相組分，利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復(fù)檢產(chǎn)品純度，測(cè)得結(jié)果為98.90%ο
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟: (1)提取 取野菊花藥材50kg，粉碎成直徑3mm左右的粗粉，加入500L體積百分比為95%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，收集、合并濾液； (2)濃縮 將步驟(I)收集、合并的濾液回收乙醇，濃縮至約150L左右，常溫下靜置析晶11小時(shí)，過(guò)濾收集沉淀，除去濾液，將60°C烘干后的1012克進(jìn)行下一步溶劑洗滌處理； (3)溶劑洗滌 向步驟(2)所得的沉淀中加入10.12L甲醇進(jìn)行超聲洗滌，待產(chǎn)品與甲醇成混懸液后用中速濾紙過(guò)濾,收集過(guò)濾固體，60°C烘干后固體約621克，待下一步處理； (4)溶解、過(guò)濾 將步驟(3)烘干后所得的固體加6210mL四氫呋喃溶解,溶解后的溶液用0.45μηι有機(jī)膜過(guò)濾，濾液作為下一步制備蒙花苷單體的原料； (5)高效制備液相色譜分離 采用填料為C18 (十八烷基硅烷鍵合硅膠)的色譜柱，柱規(guī)格為50CmX20Cm ； 流動(dòng)相組成為:乙腈-0.3%醋酸水溶液，體積比為30:70 ; 流速為 600mL/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm，室溫操作； 取步驟(4)所得的濾液進(jìn)樣，每一針進(jìn)樣量20克(以濾液樣品中所含的干品重量計(jì))，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液，重復(fù)此操作，直至制備完成； (6)產(chǎn)品回收 將步驟(5)高效制備液相色譜分離得到的蒙花苷單體溶液加熱回收乙腈，得到析出產(chǎn)品的醋酸水溶液40L,放置室溫后用漏斗過(guò)濾固體,過(guò)濾固體于65°C干燥12小時(shí),得到蒙花苷單體產(chǎn)品363克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)約6天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為(363/50000) X 100%=0.726% ； 通過(guò)更換流動(dòng)相組分，利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復(fù)檢產(chǎn)品純度，測(cè)得結(jié)果為.98.86%ο
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于在進(jìn)行高效制備液相色譜分離前，通過(guò)液-質(zhì)聯(lián)用方法確定高效液相色譜中蒙花苷單體的峰形，采用的色譜條件與高效制備液相色譜分離相同，取步驟(4)所得的濾液進(jìn)樣，進(jìn)行蒙花苷單體的高效液相分離純化，根據(jù)質(zhì) 譜檢測(cè)結(jié)果，確定蒙花苷單體在液相色譜中所對(duì)應(yīng)的峰形。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種蒙花苷單體的分離純化方法，該方法包括如下工藝步驟(1)提取將野菊花藥材以乙醇溶液回流提取，收集濾液；(2)濃縮將濾液濃縮后靜置析晶并烘干沉淀；(3)溶劑洗滌將沉淀以甲醇進(jìn)行超聲波洗滌，過(guò)濾，收集過(guò)濾固體，烘干；(4)溶解、過(guò)濾經(jīng)烘干后的固體中，加入有機(jī)溶劑溶解，過(guò)濾，收集濾液；(5)高效制備液相色譜分離針對(duì)性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液；(6)產(chǎn)品回收回收乙腈，蒙花苷單體析出后經(jīng)干燥得到蒙花苷單體產(chǎn)品。本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，生產(chǎn)周期短，分離效率高，工藝穩(wěn)定，成本易控制，可實(shí)現(xiàn)大量蒙花苷單體的高純度分離制備，蒙花苷單體純度高，可作為含量測(cè)定的對(duì)照品使用。
文檔編號(hào)C07H1/08GK103073605SQ20121057750
公開(kāi)日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月27日
發(fā)明者白蘭輝, 文煥松, 夏柯, 郭建華, 劉丁 申請(qǐng)人:成都普思生物科技有限公司