一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法。步驟如下：首先將需要重組的蛋白用3KDa的膜超濾濃縮后，再用HAC調(diào)pH到4.5；Tris-lmmol/LEDTA,pH=7.1分步進(jìn)行洗脫；平衡、冼脫流速75cm/h，214nm紫外監(jiān)測(cè)儀用PBS緩沖液洗脫，收集洗脫峰；并收集樣品進(jìn)行SDS-PAGE屯泳分析；超聲破碎的懸濁菌液13000rpm；分析前可以放入甘氨酸電泳液中3-5分鐘；洗脫流速至少達(dá)到75cm/h。本發(fā)明的有益效果是，實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，費(fèi)用較低，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種陽(yáng)離子重組蛋白的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法，具體來(lái)說(shuō)，一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]質(zhì)粒是真核細(xì)胞細(xì)胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細(xì)胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細(xì)菌細(xì)胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸(DNA)分子?，F(xiàn)在習(xí)慣上用來(lái)專(zhuān)指細(xì)菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細(xì)胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細(xì)菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環(huán)狀DNA分子，這就是質(zhì)粒(plasmid)(補(bǔ)充:部分質(zhì)粒為RNA)。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱(chēng)為附加體(episome)，這類(lèi)質(zhì)粒能夠整合進(jìn)真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來(lái)成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細(xì)胞體內(nèi)外都可復(fù)制，通過(guò)個(gè)些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過(guò)轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，不斷的復(fù)制，來(lái)得到目的產(chǎn)物。這就是轉(zhuǎn)化的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問(wèn)題，我們提出了以下技術(shù)方案:
一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法，步驟如下:首先將需要重組的蛋白用3KDa的膜超濾濃縮后，再用HAC調(diào)pH到4.5 ；Tris-lmmol/L EDTA, pH=7.1分步進(jìn)行洗脫；平衡、冼脫流速75cm/h, 214nm紫外監(jiān)測(cè)儀用PBS緩沖液洗脫，收集洗脫峰；并收集樣品進(jìn)行SDS-PAGE屯泳分析。
[0004]本發(fā)明中，超聲破碎的懸濁菌液13000rpm。
[0005]本發(fā)明中，分析前可以放入甘氨酸電泳液中3-5分鐘。
[0006]本發(fā)明中，洗脫流速至少達(dá)到75cm/h。
[0007]本發(fā)明的有益效果是，實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，費(fèi)用較低，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。
【具體實(shí)施方式】
[0008]一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法，步驟如下:首先將需要重組的蛋白用3KDa的膜超濾濃縮后，再用HAC調(diào)pH到4.5 ；Tris-lmmol/L EDTA, pH=7.1分步進(jìn)行洗脫；平衡、冼脫流速75cm/h, 214nm紫外監(jiān)測(cè)儀用PBS緩沖液洗脫，收集洗脫峰；并收集樣品進(jìn)行SDS-PAGE屯泳分析。超聲破碎的懸濁菌液13000rpm。
[0009]分析前放入甘氨酸電泳液中5分鐘。洗脫流速達(dá)到75cm/h。
[0010]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法，其特征在于，步驟如下:首先將需要重組的蛋白用3KDa的膜超濾濃縮后，再用HAC調(diào)pH到4.5 ；Tris-lmmol/L EDTA, pH=7.1分步進(jìn)行洗脫；平衡、冼脫流速75cm/h，214nm紫外監(jiān)測(cè)儀用PBS緩沖液洗脫，收集洗脫峰；并收集樣品進(jìn)行SDS-PAGE屯泳分析。
2.如權(quán)利要求1所述的一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法，其特征在于，超聲破碎的懸濁菌液 13000rpm。
3.如權(quán)利要求1所述的一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法，其特征在于，分析前可以放入甘氨酸電泳液中3-5分鐘。
4.如權(quán)利要求1所述的一種陽(yáng)離子重組蛋白的方法，其特征在于，洗脫流速至少達(dá)到75cm/h。
【文檔編號(hào)】C07K1/34GK103613639SQ201310523238
【公開(kāi)日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】徐麗 申請(qǐng)人:徐麗