結(jié)核分支桿菌蛋白在制備診斷潛伏性肺結(jié)核感染的產(chǎn)品中的用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了結(jié)核分枝桿菌蛋白Rv2693c和/或Rv1984c在開發(fā)和/或設(shè)計具有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中的應用。本發(fā)明還提供了使用這2種結(jié)核分枝桿菌蛋白制備的蛋白質(zhì)芯片。通過本發(fā)明制備的蛋白質(zhì)芯片，檢測潛伏性肺結(jié)核感染患者及正常人血清中2個蛋白各自相應的IgM抗體的水平，聯(lián)合分析這2個蛋白質(zhì)的相應抗體的檢測結(jié)果，判斷被檢人是否為潛伏性肺結(jié)核感染，檢測結(jié)果表明，本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)芯片輔助診斷潛伏性肺結(jié)核感染的最佳工作點的特異性為80.3%，敏感性為75.6%，均高于現(xiàn)有技術(shù)中潛伏性肺結(jié)核感染診斷的指標。
【專利說明】結(jié)核分支桿菌蛋白在制備診斷潛伏性肺結(jié)核感染的產(chǎn)品中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及結(jié)核分支桿菌蛋白在制備診斷和/或輔助診斷疾病的產(chǎn)品中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]多個世紀以來，結(jié)核病持續(xù)在全球成為一個不容忽視的公共衛(wèi)生問題。目前全球已有三分之一的人口攜帶結(jié)核分枝桿菌，僅2010年一年就新增結(jié)核病病例880萬，死亡145萬，平均不到22秒即有一人死于肺結(jié)核病，結(jié)核病高居傳染病死亡人數(shù)之首。而我國是全球22個結(jié)核病高負擔國家之一，結(jié)核病患者人數(shù)高居全球第二位，受感染人數(shù)超過5億，僅2010年一年就有新發(fā)病例90?120萬，占據(jù)了全球總新增病例的約12%，如不及時采取有效措施，在未來十年內(nèi)可能有3000萬人發(fā)病，將會導致嚴重的公共衛(wèi)生問題和社會問題，所以從國家戰(zhàn)略層面必需盡快實現(xiàn)對肺結(jié)核的有效控制。
[0003]科學證據(jù)表明，結(jié)核感染人體后，在大多數(shù)情況下，會受到人體內(nèi)免疫系統(tǒng)的控制，從而處于一個潛伏感染狀態(tài)，在任何時候都有可能轉(zhuǎn)化為活動性結(jié)核病。考慮到全球結(jié)核感染人口，甚至在我國都是一個十分龐大的數(shù)字，結(jié)合結(jié)核病的易傳播性和社會危害性，在健康人群中篩查結(jié)核潛伏患者就顯得尤為重要。已有研究證實潛伏性肺結(jié)核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的預防性治療可降低HIV/TB雙重感染人群進展為活動性 TB 的風險(Bucher HC,Griffith LE,Guyatt GH, et al:Isoniazid prophylaxisfor tubercu losis in HIV infection:a meta-analysis of randomized controlledtrails [J].AIDS，1999，13:501_508)。但是，目前國內(nèi)診斷潛伏感染主要依據(jù)結(jié)核菌素皮試(PPD皮試)的結(jié)果，一般認為PH)強陽性或在短期內(nèi)從陰性轉(zhuǎn)為陽性者是結(jié)核病潛伏感染者。然而因為pro皮試無法區(qū)分在中國廣泛推廣的BCG接種產(chǎn)生的免疫應答反應與潛伏感染產(chǎn)生的應答反應。而基于抗原抗體反應的血清學診斷，由于其簡便性、快速性，是重要的潛伏性肺結(jié)核感染臨床輔助性診斷手段。因此，從長遠角度看，應致力于發(fā)現(xiàn)敏感性和特異性均較好的結(jié)核標志物。
[0004]理想的結(jié)核診斷標志物應符合以下條件:(1)敏感性高；(2)特異性高；(3)存在于體液，特別是血液中，易于檢測。但是目前肺結(jié)核分支桿菌血清學診斷所針對的抗原如抗原5、38KD抗原、30/31KD抗原以及抗原60等，均存在陽性檢出率低，與其它分支桿菌的交叉免疫性等問題，雖然在療效監(jiān)測、提示復發(fā)、判斷預后和高危人群的普查中具有一定的價值，但目前仍不能用于潛伏性肺結(jié)核感染的確診。為了實現(xiàn)對潛伏性肺結(jié)核感染的高靈敏性，高特異性的診斷，急需在分子水平上尋找到更敏感、更特異的潛伏性肺結(jié)核感染生物標志物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個目的是提供檢測血清中抗Rv2693c抗體和/或抗Rvl984c抗體水平的產(chǎn)品在制備具有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中的應用。
[0006]所述的應用中，所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白:
[0007]a)序列表中的SEQ ID Na.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0008]b)將序列表中的SEQ ID Na.1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)；
[0009]所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白:
[0010]c)序列表中的SEQ ID Na.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0011]d)將序列表中的SEQ ID Ns.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白質(zhì)；
[0012]和/或，所述有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中，包括記載如下內(nèi)容的說明書:與正常未患有任何疾病的人相比，潛伏性肺結(jié)核感染人中，抗Rv2693c抗體水平和抗Rvl984c抗體水平中至少一種顯著升高。
[0013]所述抗體為IgM。
[0014]本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染的標志物組合物，由抗Rv2693c的抗體和抗Rvl984c的抗體組成；
[0015]所述標志物組合物中，各個所述抗體為人離體血清中的抗體；
[0016]所述抗體為IgM。
[0017]所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白:
[0018]a)序列表中的SEQ ID Na.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0019]b)將序列表中的SEQ ID N0.1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)；
[0020]所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白:
[0021]c)序列表中的SEQ ID Na.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0022]d)將序列表中的SEQ ID Ns.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白質(zhì)。
[0023]本發(fā)明的再一個目的是提供血清中的抗Rv2693c的抗體和/或抗Rvl984c的抗體作為標志物在開發(fā)、設(shè)計和/或制備具有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中的應用；所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白:
[0024]a)序列表中的SEQ ID Na.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0025]b)將序列表中的SEQ ID Na.1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)；
[0026]所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白:
[0027]c)序列表中的SEQ ID Na.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；[0028]d)將序列表中的SEQ ID Ns.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白質(zhì)；
[0029]所述有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中，包括記載如下內(nèi)容的說明書:與正常未患有任何疾病的人相比，潛伏性肺結(jié)核感染人中，抗Rv2693c抗體水平和抗Rvl984c抗體水平中至少一種顯著升高。
[0030]所述抗體為IgM。
[0031]所述任一應用中，所述鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染具體指鑒別、診斷和/或輔助診斷待測人是否患有潛伏性肺結(jié)核感染；或篩查和/或輔助篩查待測人群中患有潛伏性肺結(jié)核感染的情況。 [0032]本發(fā)明的還一個目的是提供一種用于鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染的試劑盒，包括檢測芯片，所述檢測芯片上連有Rv2693c和Rvl984c蛋白中的至少I種蛋白，每種蛋白單獨成立一個檢測點；優(yōu)選的，所述檢測芯片上連有Rv2693c和Rvl984c蛋白；
[0033]所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白:
[0034]a)序列表中的SEQ ID Na.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0035]b)將序列表中的SEQ ID Na.1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)；
[0036]所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白:
[0037]c)序列表中的SEQ ID Na.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0038]d)將序列表中的SEQ ID Ns.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白質(zhì)。
[0039]所述試劑盒中，所述檢測芯片是將分別含有Rv2693c和/或Rvl984c蛋白的溶液點樣于載體玻片上制成的。
[0040]所述試劑盒中，所述分別含有Rv2693c和/或Rvl984c蛋白的溶液，由溶質(zhì)和溶劑
組成，所述溶質(zhì)及其在所述溶液中的濃度為:
[0041]
【權(quán)利要求】
1.檢測血清中抗Rv2693c抗體和/或抗Rvl984c抗體水平的產(chǎn)品在制備具有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中的應用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于: 所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白: a)序列表中的SEQID Na.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； b)將序列表中的SEQID N0.1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)； 所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白: c)序列表中的SEQID Na.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； d)將序列表中的SEQID N0.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID N0.2所不蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白質(zhì)； 和/或，所述有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中，包括記載如下內(nèi)容的說明書:與正常未患有任何疾病的人相比，潛伏性肺結(jié)核感染人中，抗Rv2693c抗體水平和抗Rvl984c抗體水平中至少一種顯著升高。
3.一種用于鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染的標志物組合物，由抗Rv2693c的抗體和 抗Rvl984c的抗體組成； 所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白: a)序列表中的SEQID Na.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； b)將序列表中的SEQID N0.1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)； 所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白: c)序列表中的SEQID Na.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； d)將序列表中的SEQID N0.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白質(zhì)。
4.血清中的抗Rv2693c的抗體和/或抗Rvl984c的抗體作為標志物在開發(fā)、設(shè)計和/或制備具有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中的應用；所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白: a)序列表中的SEQID Na.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； b)將序列表中的SEQID N0.1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)； 所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白: c)序列表中的SEQID Na.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； d)將序列表中的SEQID N2.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID N0.2所不蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白質(zhì)； 所述有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中，包括記載如下內(nèi)容的說明書:與正常未患有任何疾病的人相比，潛伏性肺結(jié)核感染人中，抗Rv2693c抗體水平和抗Rvl984c抗體水平中至少一種顯著升高。
5.一種用于鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染的試劑盒，包括檢測芯片，所述檢測芯片上連有Rv2693c和Rvl984c蛋白中的至少I種蛋白，每種蛋白單獨成立一個檢測點；優(yōu)選的，所述檢測芯片上連有Rv2693c和Rvl984c蛋白； 所述Rv2693c是如下a)或b)的蛋白: a)序列表中的SEQID Na.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； b)將序列表中的SEQID N0.1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.1所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白質(zhì)； 所述Rvl984c是如下c)或d)的蛋白: c)序列表中 的SEQID Ns.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； d)將序列表中的SEQID N0.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與SEQ ID Na.2所示蛋白具有相同功能的由c)衍生的蛋白質(zhì)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于:所述檢測芯片是將分別含有Rv2693c和/或Rvl984c蛋白的溶液點樣于載體玻片上制成的。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括說明書，所述說明書記載如下內(nèi)容: 與正常未患有任何疾病的人相比，潛伏性肺結(jié)核感染人中，抗Rv2693c抗體水平和抗Rvl984c抗體水平中至少一種抗體顯著升高。
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7任一所述的試劑盒，其特征在于: 所述抗Rv2693c抗體水平和抗Rvl984c抗體水平中至少一種抗體顯著升高按照如下方法進行判斷:待測樣品的檢測結(jié)果中,抗Rv2693c抗體和/或抗Rvl984c抗體中，至少有I種抗體呈陽性，則判定該待測樣品是潛伏性肺結(jié)核感染陽性，否則為潛伏性肺結(jié)核感染陰性； 所述抗體呈陽性的判斷標準為若各個抗體的信噪比值處于如下值之間，則認為是該抗體呈陽性:Rv2693c的抗體的信噪比值處于2.30和2.35之間，包括2.30和2.35 ；Rvl984c的抗體的信噪比值處于2.24和2.38之間，包括2.24和2.38。
9.根據(jù)權(quán)利要求5-8任一所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括配合檢測芯片一起使用的試劑，所述試劑包括下述I) -4): 1)pH7.4PBS溶液，其組成為:
10.權(quán)利要求5-9任一所述試劑盒在制備具有鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查潛伏性肺結(jié)核感染用途的產(chǎn)品中的應用。
【文檔編號】C07K14/35GK103698511SQ201310607359
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月25日
【發(fā)明者】陶生策, 張先恩, 畢利軍, 鄧教宇, 張治平, 江何偉, 周盈, 谷晶, 郭書娟, 張鴻泰, 王緒德, 王靖方, 侯劍, 周杰, 楊姍姍, 趙斐 申請人:廣東體必康生物科技有限公司