枸骨皂苷化合物的制備方法及應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物化學領域，特別涉及一種枸骨皂苷化合物、其制備方法及應用。該化合物23-羥基-烏蘇酸-3β-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷具有抗氧化活性，對H2O2誘導的大鼠心肌細胞損傷或冠脈結扎所致大鼠急性心肌缺血損傷具有一定的保護作用。
【專利說明】枸骨皂苷化合物的制備方法及應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物化學領域，特別涉及一種枸骨皂苷化合物的制備方法及應用。
【背景技術】
[0002]枸骨(Ilexcornuta Lindl.et Paxt.)系冬青科(Aquifoliaceae)冬青屬(Ilex)植物，常綠灌木或喬木，主要分布于我國長江中下游地區(qū)，其根、樹皮、葉和果實均可入藥，是中藥功勞葉的基原植物，其葉既為常用中藥，也為苦丁茶的主要來源之一【Trendin Food Science and Technology, 17 (6)，313 - 323】。枸骨葉始載于《本草拾遺》，具有清熱養(yǎng)陰，補肝益腎，祛風濕等功效，用于肺癆咳嗽，勞傷失血等【中國醫(yī)藥科技出版社，1996:1422】。枸骨葉味苦、微澀、性寒，有清熱解毒、止渴生津、抗菌消炎和防治高血壓等多種功效有散風熱、清頭目、解煩悶、活血脈的功能。現代藥理學研究表明枸骨有降血脂、抗菌、抗生育等功效。
[0003]目前，國內外學者已從枸骨中分離得到三萜及其皂苷類、黃酮及其苷類、多酚類及其衍生物、脂肪酸類等化合物，其中三萜及其皂苷是枸骨中存在的主要類型化合物。枸骨的研究目前主要集中在葉，未見枸骨莖和枸骨根化學成分和現代藥理作用的文獻報道。

【發(fā)明內容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明提供一種枸骨皂苷化合物的制備方法及應用。該化合物23-羥基-烏蘇酸-3 0 -0-0 -D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯基-28-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷具有抗氧化活性，對H2O2誘導的大鼠心肌細胞損傷或冠脈結扎所致大鼠急性心肌缺血損傷具有一定的保護作用。
[0005]為了實現上述發(fā)`明目的，本發(fā)明提供以下技術方案:
[0006]本發(fā)明提供了一種如式I所示化合物的提取方法，包括如下步驟:
[0007]步驟1:取枸骨根或枸骨莖粉碎，與乙醇水溶液混合浸泡后，加熱回流，過濾收集濾液經減壓濃縮，獲得流浸膏；
[0008]步驟2:取所述流浸膏離心，收集上清液經大孔樹脂柱，分別用水、30%乙醇、60%乙醇和90%乙醇洗脫，收集90%乙醇的洗脫組分；
[0009]步驟3:取所述90%乙醇的洗脫組分經減壓硅膠柱，采用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為70:30的洗脫組分，再經中壓反相ODS柱，采用甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，經高效液相分析，收集保留時間為19.4-20.9min的組分，再經半制備高效液相純化，收集79.1~79.2min的組分，即得；
[0010]所述高效液相的流動相為甲醇:水一67:33(v/v)
[0011]所述半制備高效液相的流動相為甲醇:水一64:36(v/v)。
[0012]在本發(fā)明的一些實施例中，步驟2中所述大孔樹脂柱為DlOl型大孔樹脂柱。
[0013]在本發(fā)明的一些實施例中，步驟2中所述半制備高效液相的流動相的流速為2mL/min。[0014]在本發(fā)明的一些實施例中，步驟2中所述高效液相的流動相的流速為lmL/min。
[0015]在本發(fā)明的一些實施例中，步驟I中所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分數為40~70%。
[0016]在本發(fā)明的一些實施例中，以g/mL計，步驟I中所述枸骨莖與所述乙醇水溶液的質量體積比為1:5~15。
[0017]在本發(fā)明的一些實施例中，步驟I中所述加熱回流的溫度為60~80°C，所述加熱回流的時間為2.0~3.0h。
[0018]在本發(fā)明的另一些實施例中，所述步驟I具體為:
[0019]步驟1-1:取枸骨莖粉碎，與5~15倍質量的乙醇水溶液混合浸泡后，于60~80°C加熱回流2h，過濾收集第一濾液和第一濾洛；
[0020]步驟1-2:取所述濾渣與5~15倍質量的乙醇水溶液混合浸泡后，于60~80°C加熱回流2h，過濾收集第二濾液和第二濾洛；
[0021]步驟1-3:重復步驟1-2 ;重復次數至少為0次；
[0022]合并所述第一濾液、所述第二濾液及步驟1-3中的濾液，經減壓濃縮，獲得流浸
膏。
[0023]在本發(fā)明的一些實施例中，所述中壓反相ODS柱采用BAW系統(tǒng)，Rf值為0.45~
0.70。
[0024]本發(fā)明還提供了結構如式I所示化合物在制備抗氧化劑中的應用
[0025]
【權利要求】
1.一種如式I所示化合物的提取方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟1:取枸骨根或枸骨莖粉碎，與乙醇水溶液混合浸泡后，加熱回流，過濾收集濾液經減壓濃縮，獲得流浸膏； 步驟2:取所述流浸膏離心，收集上清液經大孔樹脂柱，分別用水、30%乙醇、60%乙醇和.90%乙醇洗脫，收集90%乙醇的洗脫組分； 步驟3:取所述90%乙醇的洗脫組分經減壓硅膠柱，采用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為70:30的洗脫組分，再經中壓反相ODS柱，采用甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，經高效液相分析，收集保留時間為19.4-20.9min的組分，再經半制備高效液相純化，收集79.1~79.2min的組分，即得； 所述高效液相的流動相為甲醇:水一67:33(v/v)； 所述半制備高效液相的流動相為甲醇:水一64:36(v/v)。
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟2中所述大孔樹脂柱為DlOl型大孔樹脂柱。
3.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟2中所述半制備高效液相色譜的流動相的流速為2mL/min。
4.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟I中所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分數為40~70%。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，以g/mL計，步驟I中所述枸骨莖與所述乙醇水溶液的質量體積比為1:5~15。
6.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟I中所述加熱回流的溫度為60~80°C，所述加熱回流的時間為2.0~3.0h。
7.根據權利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述步驟I具體為: 步驟1-1:取枸骨莖粉碎，與5~15倍質量的乙醇水溶液混合浸泡后，于60~80°C加熱回流2h，過濾收集第一濾液和第一濾洛； 步驟1-2:取所述濾渣與5~15倍質量的乙醇水溶液混合浸泡后，于60~80°C加熱回流2h，過濾收集第二濾液和第二濾洛； 步驟1-3:重復步驟1-2 ;重復次數至少為0次； 合并所述第一濾液、所述第二濾液及步驟1-3中的濾液，經減壓濃縮，獲得流浸膏。
8.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述中壓反相ODS柱采用BAW系統(tǒng)，Rf 值為 0.45 ~0.70。
9.結構如式I所示化合物在制備抗氧化劑中的應用
10.結構如式I所示化合物在制備治庁L肌細胞損傷的藥物中的應用，
11.如權利要求10所述的應用，其特征在于，所述心肌細胞損傷為H2O2誘導的心肌細胞缺氧或冠脈結扎所致急性心肌缺血損傷。
【文檔編號】C07J63/00GK103641883SQ201310743039
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月30日 優(yōu)先權日:2013年12月30日
【發(fā)明者】劉艷麗, 許瓊明, 李杉杉, 陳重, 楊世林, 李笑然 申請人:蘇州大學