含桉烷型倍半萜的藥物組合物及其在制藥中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供以結構式（I）所示的兩個桉烷型倍半萜7-桉烷-4(15)-1β,6α-二醇[7-eudesm-4(15)-ene-1β,6α-diol,1]和pumilaside?A(2)為活性成分與可藥用載體組成的藥物組合物，它們在制備抗乙型病毒性肝炎的藥物中的應用，以及化合物1和2及其藥物組合物的制備方法。
【專利說明】含桉烷型倍半萜的藥物組合物及其在制藥中的應用
【技術領域】:
[0001]本發(fā)明屬于藥物【技術領域】，具體地說，涉及含桉烷型倍半萜化合物I或/和2與可藥用載體組成的治療乙型病毒性肝炎的藥物組合物，它們的制備方法，以及化合物I和2及其藥物組合物在制備抗乙型病毒性肝炎的藥物中的應用。
【背景技術】:
[0002]乙型病毒性肝炎簡稱乙型肝炎，是由乙型肝炎病毒(h印atitis B virus, HBV)弓丨起的，一般通過血液和體液傳播、呈慢性攜帶狀態(tài)的傳染病。其傳染性比艾滋病強50~100倍，健康人群被感染后罹患肝硬化和肝細胞癌的風險增加1000倍，并最終導致死亡。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計，全世界共有20億HBV攜帶者，其中慢性乙型肝炎(chronichepatitis B, CHB)患者3.5億；僅在中國就有約1.2億人攜帶HBV，其中CHB患者超過3000萬，每年約35萬例患者死于CHB相關疾病?，F(xiàn)有的抗HBV藥物(主要包括疫苗、干擾素和核苷類)的療效已得到確認，但由于易產(chǎn)生耐藥性、作用靶點單一、副作用明顯等原因仍無法滿足臨床需要。迄今為止，乙型肝炎依舊是威脅全世界人類健康的重要問題，抗HBV藥物仍然是全球藥物研發(fā)的熱點之一。
[0003]天然產(chǎn)物由于結構復雜多樣，從中尋找高效低毒、作用靶點新穎的先導化合物已經(jīng)成為新型抗HBV藥物研發(fā)的重要組成部分。據(jù)統(tǒng)計，通過體內(nèi)和體外活性篩選被證實具有潛在抗HBV活性的天然產(chǎn)物類型包括木脂素、萜類、生物堿、黃酮、香豆素、環(huán)肽等。茵陳為菊科植物濱蒿 Artemisia scoparia Waldst.et Kit.或茵陳蒿 Artemisia capillarisThunb.的干燥地上部分。春季幼苗高6~IOcm時采收或秋季花蕾長成至花初開時采割，除去雜質(zhì)和老莖，曬干。春季 采收的習稱“綿茵陳”，秋季采割的稱“花茵陳”。本品味苦、辛，微寒。歸脾、胃、肝、膽經(jīng)。關于茵陳藥理活性的記載最早見于《神農(nóng)本草經(jīng)》中，謂其能除“熱結黃疸，久服輕身益氣耐老”。中醫(yī)認為其氣芳香，有清濕熱，退黃疸的功效，臨床上主要用來治療黃疸尿少、濕瘡瘙癢、黃疸型傳染性肝炎等癥狀。
[0004]茵陳廣泛用于慢性乙型肝炎的治療?！吨袊幍洹分惺珍浀亩喾N治療乙肝的中藥制劑(乙肝寧顆粒、乙肝養(yǎng)陰活血顆粒、小兒肝炎顆粒、護肝片、利肝隆顆粒、肝炎康復丸、茵芪肝復顆粒、茵桅黃口服液、茵膽平肝膠囊、黃疸肝炎丸、清肝利膽膠囊等)中均以茵陳作為主要藥效組分。為揭示茵陳的活性成分，中外研究者其化學成分進行了大量研究，結果表明茵陳中主要含有香豆素，黃酮，色原酮，三萜，留體，烯炔，長鏈脂肪族化合物，嘧啶，揮發(fā)油等。然而，現(xiàn)有文獻中對于這些化合物活性的報導主要集中在保肝利膽方面，其抗HBV活性物質(zhì)仍然不清楚。
[0005]桉烷型倍半萜存在于多種植物中，先前的研究表明該類化合物對HIV以及I型單純皰疹病毒(HSV-1)病毒具有一定的抑制作用[Hayashi等，Journal ofAntimicrobial Chemotherapyl996, 37, 759-68;Zhihua Sun 等，Journal of NaturalProducts2004, 67，1975-9]。趙昱等從菊科六棱菊屬植物中分離得到的一系列對映桉烷型倍半萜醇和苷對HBsAg的分泌和HBV DNA的復制均具有一定的抑制作用[趙昱CN1935762A]。它們的結構與本申請所要求保護的化合物完全不同。
[0006]現(xiàn)有的研究表明，7-桉烷-4 (15)-1 β，6α-二醇(I)具有一定的抗瘧原蟲、抗炎活性，而pumilaside A(2)對腫瘤的生長具有一定的抑制作用。II1-Min Chung等研究表明化合物I對氯喹敏感的惡性瘧原蟲(P.falciparum)具有一定的抑制作用，IC5tl為 42.1 ±2.1 μChung 等，Phytotherapy Research2010, 24，451-3)。PisethKhiev等也對其抗炎活性進行了研究，結果表明化合物I在0.5mg/耳的劑量下對豆蘧酰佛波醇乙酯(TPA)引起的小鼠耳水腫具有一定的抑制作用，抑制率為29.9%(A.BereniceAG 等，Journal of Natural Products, 2004，67，914-7)。此外，Xinya Xu 等研究也表明pumilaside A(2)在A549, LAC, Hela以及HepG2細胞系中均顯示出一定的抗腫瘤活性，IC5tl在 0.012-6.29 μ M 之間(Xu XY 等，F(xiàn)ood Chemistry2010, 123，1123-6)。
[0007]迄今，現(xiàn)有技術中沒有關于7-桉烷-4(15)-1 β，6α-二醇(I)和pumilasideA(2)抗乙型肝炎活性的報道，也沒有它們及其藥物組合物在制備或治療乙型病毒性肝炎的藥物中的應用的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0008]本發(fā)明的目的在于提供一類具有治療乙型病毒性肝炎藥用價值的式(I)所示的化合物I和2以及與可藥用載體或賦形劑組成的藥物組合物在制備抗乙型病毒性肝炎藥物中的應用；化合物I和2及其藥物組合物的制備方法。
[0009]為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術方案:
[0010]結構式(I)所示的桉烷 型倍半萜化合物I或/和2在制備抗乙型肝炎性病毒藥物
中的應用，
[0011]
【權利要求】
1.結構式(I)所示的桉烷型倍半萜化合物I或/和2在制備抗乙型肝炎病毒藥物中的應用，
2.用于治療乙型病毒性肝炎的藥物組合物，其中含有治療有效量的權利要求1中結構式(I)所示的桉烷型倍半萜化合物I或/和2和藥學上可接受的載體。
3.權利要求1所述式(I)化合物I和2的制備方法,取茵陳蒿(Artemisiacapillaris)全草，粉碎，用90%乙醇回流提取兩次，每次3小時，合并乙醇提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，將該提取液懸浮于水溶液中，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分用甲醇-氯仿溶解吸附于硅膠上，室溫放置揮干溶劑，研碎后經(jīng)硅膠柱層析，用甲醇-氯仿(0:100-60:40)洗脫，得到7個組分(A-G)，組分D經(jīng)過MCI CHP-20P gel柱中壓制備，甲醇-水(30:70-100:0)洗脫，得到4個流份D-1~D-4.D-1再通過硅膠柱層析，以乙酸乙酯-石油醚(20:80)洗脫，并經(jīng)S印hadex LH-20柱(甲醇)純化得到化合物I ;組分F經(jīng)過MCI CHP-20P gel柱中壓制備，甲醇-水(30:70-100:0)洗脫，得到4個流份F-1~F-4，F(xiàn)-2再通過硅膠柱層析，以甲酸-甲醇-氯仿(0.1:3:97)洗脫，并經(jīng)Sephadex LH-20柱(甲醇)純化得到化合物2。
4.制備權利要求2所述的藥物組合物的方法,首先取茵陳蒿(Artemisiacapillaris)全草，粉碎，用90%乙醇回流提取兩次，每次3小時，合并乙醇提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，將該提取液懸浮于水溶液中，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分用甲醇-氯仿溶解吸附于硅膠上，室溫放置揮干溶劑，研碎后經(jīng)硅膠柱層析，用甲醇-氯仿(0:100-60:40)洗脫，得到7個組分(A-G)，組分D經(jīng)過MCI CHP-20P gel柱中壓制備，甲醇-水(30:70-100:0)洗脫，得到4個流份D-1~D-4.D-1再通過硅膠柱層析，以乙酸乙酯-石油醚(20:80)洗脫，并經(jīng)S印hadex LH-20柱(甲醇)純化得到化合物I ;組分F經(jīng)過MCI CHP-20P gel柱中壓制備，甲醇-水(30:70-100:0)洗脫，得到4個流份F-1~F-4，F(xiàn)-2再通過硅膠柱層析，以甲酸-甲醇-氯仿(0.1:3:97)洗脫，并經(jīng)Sephadex LH-20柱(甲醇)純化得到化合物2 ；然后化合物I或/和2按常規(guī)制劑制作方法加入可藥用載體或賦形劑。
【文檔編號】C07C29/76GK103784427SQ201410074452
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年3月3日 優(yōu)先權日:2014年3月3日
【發(fā)明者】陳紀軍, 趙勇, 馬云保, 黃曉燕, 耿長安, 張雪梅 申請人:中國科學院昆明植物研究所