專利名稱：2′，5′-寡聚腺苷酸的雙重作用抗菌毒衍生物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一些治療用2′，5′-寡聚腺苷類似物，藥用共聚物和這些類似物的組合物，以及它們的應(yīng)用。
本發(fā)明中的主題物質(zhì)的全包包含有特別長(zhǎng)的專業(yè)術(shù)語(yǔ)。通常專業(yè)人員都將這些術(shù)語(yǔ)用常用的縮寫(xiě)代替。下面首先給出在本文中可能用到的這些專業(yè)術(shù)語(yǔ)的常用縮寫(xiě)。
縮寫(xiě)RT，逆轉(zhuǎn)錄酶A，腺嘌呤核苷(腺苷)或腺苷酸或腺苷酰(基)，蟲(chóng)草品或C或3′-dA，3′-脫氧腺苷或3′-脫氧腺苷酸，A-3′-氨基，3′-氨基-3′-脫氧腺苷殺結(jié)核菌素，4-氨基-7-(β-D-呋喃核糖基)-吡咯并-〔2，3-d〕吡啶3′-dATP，3′-脫氧腺苷三磷酸ATP，腺苷三磷酸I，肌苷或肌苷酸或肌苷?；?A(Xylo-A)或木糖腺苷，9-β-D-呋喃木糖基-腺苷
dCF或2′-脫氧助間型霉素，(R)-3-(2-脫氧-β-D-呋喃蘇糖基)-3，6，7，8-四氫咪唑并〔4，5-d〕二氮雜
-8-醇2-5A或2′，5′-寡(A)或2′，5′-寡腺苷酸，由2′，5′-磷酸二酯鍵連接的腺苷酸寡聚體及其5′末端三磷酸衍生物C，蟲(chóng)草品2′，5′-蟲(chóng)草品類似物或2′，5′-寡聚蟲(chóng)草品，由2′，5′-磷酸二酯鍵連接的寡聚3′-脫氧腺苷酸及其5′末端三磷酸衍生物2′，5′-An或核心寡聚體，2′，5′-磷酸二酯鍵連接的腺苷酸寡聚體2′，5′-A3或2′，5′-腺苷酸三聚體核，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)腺苷2′，5′-A4或2′，5′-腺苷四聚體核，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)腺苷2′，5′-3′dA3或2′，5′-C-C-C或(2′，5′)蟲(chóng)草品三聚體核，3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰-(2′，5′)3′脫氧腺苷2′，5′-C-C-C-C或2′，5′蟲(chóng)草品四聚體核，3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷3′，5′A3，腺苷酰(3′，5′)腺苷酰(3′，5′)腺苷2′，5′-I3或2′，5′-肌苷三聚體核，肌苷酰(2′，5′)肌苷酰(2′，5′)肌苷
dd benz，苯并咪唑酰(2′，5′)5，6-三氯苯并咪唑核糖EBV，EB病毒(愛(ài)博斯坦-巴氏病毒，愛(ài)-巴病毒)EBNA，與早期核抗原聯(lián)合的愛(ài)-巴病毒HBV，乙肝病毒HIV，人免疫缺損性病毒，包括HIV-1，HIV-2以及其它所有亞型的HIV病毒HBLV，人嗜淋巴B細(xì)胞病毒HTLV，人嗜淋巴T細(xì)胞病毒，包括HTLV-Ⅰ，HTLV-Ⅱ和HTLV-Ⅲ，以及其它所有的HTLV亞型IFNαα-干擾素rIFN-αA重組α-干擾素dsRNA雙鏈核苷酸2′，5′-A-A-Tu，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)殺結(jié)核菌素2′，5′-Tu-Tu-Tu，(2′，5′)殺結(jié)核菌素酰(2′，5′)殺結(jié)核菌素酰(2′，5′)殺結(jié)核菌素2′，5′-A-A-ara-A，腺 酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)阿糖腺苷2′，5′-C-C-A，3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)腺苷2′，5′-A-C-C，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷2′，5′-C-A-C，3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷2′，5′-C-C-A，3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)腺苷2′，5′-A-C-A，腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)腺苷2′，5′-木-A3，木糖腺苷酰(2′，5′)木糖腺苷酰(2′，5′)木糖腺苷2′，5′-木-A4，木糖腺苷酰(2′，5′)木糖腺苷酰(2′，5′)木糖腺苷酰(2′，5′)木糖腺苷Ac，乙酰基Bz，芐基MMTr，5′-O-對(duì)-甲氧基三苯甲基2′，5′-三苯甲基-C3，5′-O-對(duì)-甲氧基三苯甲基-3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷2′，5′-三苯甲基-A3，5′-O-對(duì)-甲氧基三苯甲基腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)腺苷2′，5′-C-C-dCF，3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)2′-脫氧助間型霉素2′，5′-A-A-A-3′-氨基，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)3′-氨基-3′-脫氧腺苷SiTBD，叔丁基二甲基硅烷基或-Si(CH3)2C(CH3)32′，5′-A(si)-A(si)-A，3′-O-叔丁基二甲基硅烷基-腺苷酰(2′，5′)3′-O-叔丁基二甲基硅烷基(2′，5′)-腺苷2′，5′-A-A-A-3′-O-甲基，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)3′-O-甲基腺苷2′，5′-A-A-A-3′-O-戊基，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)3′-O-戊基腺苷2′，5′-A-A-A-3′-O-己基，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)3′-O-己基腺苷2′，5′-A-A-A-3′-O-庚基，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)3′-O-庚基腺苷2′，5′-EHNA-A-A，赤-9-(2-羥基-3-壬基)-腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)腺苷縮寫(xiě)“四聚體”化合物代表下面列出的腺苷酰(A)和3′-脫氧腺苷酰(C)單位2′，5′-A-A-C-C，腺苷酰(2′，5′)腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷酰(2′，5′)3′-脫氧腺苷以上化合物縮寫(xiě)時(shí)也可省去2′，5′前綴，連字號(hào)和3′后綴;因此2′，5′-C-C-C-3′也被縮寫(xiě)成CCC。
作為干擾素介導(dǎo)的抗病毒領(lǐng)域知識(shí)的擴(kuò)展，2′，5′-寡聚腺苷的化學(xué)合成和酶合成及其作為抗病毒反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用，已成為人們注意的焦點(diǎn)。在植物和動(dòng)物中，2′，5′-寡聚(A)是天然廣譜抗病毒防御機(jī)理的一部分。人們普遍認(rèn)為，2-5A路徑(也就是熟知的2-5A/L-RNA酶路徑或抗病毒體系)存在于干擾素的抗病毒機(jī)理中，其也參與細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的調(diào)節(jié)。
該路徑包括2-5A激活潛化的內(nèi)源性核糖核酸酶(RNA酶L，EC3.1.27)。2-5A由2′，5′-寡聚腺苷酶合成酶(在下文中指“2-5A合成酶”)從ATP合成得到〔ATP(2′，5′)寡聚(A)-腺苷轉(zhuǎn)移酶(EC2.7.7.19)〕。當(dāng)被雙鏈RNA激活后，2-5A合成酶將ATP轉(zhuǎn)變成2-5A，即，2′，5′-連接的寡聚腺苷酸鏈(并在5′末端連有一個(gè)三磷酸)。2-5A合成酶以不同的異構(gòu)酶形式存在，被干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生，但是在沒(méi)有干擾素存在的情況下也能檢測(cè)出低水平的2-5A合成酶。2-5A通過(guò)結(jié)合并激活它唯一的已知靶酶〔只依賴2-5A的核糖核酶內(nèi)切酶(RNA酶L)〕。后者裂解病毒成細(xì)胞的mRNA或rRNA，因此抑制蛋白質(zhì)的合成〔Hovanessian等，Eur.J.Biochem.93515-526(1979);Kerr等，Proe.Natl.Acad.Sci.USA 75256-260(1978)〕。真正的2-5A分子在生物體系中的半衰期較短，這在用于控制病毒復(fù)制方面是一缺點(diǎn)。另外，生物活性的2-5A被三種酶滅活相對(duì)非專屬性2′-磷酸二酯酶，5′-磷酸酶以及相對(duì)非專屬性2′，3′-外切核酸酶。一些細(xì)胞因子(如白細(xì)胞介素-6，IL-6)激活2-5A合成酶并使該酶或該酶的具體形式產(chǎn)生有生物活性的2-5A(Biokel，M，Dveksler，G，Dieffenbach，C.，W-，Ruhl，S.，Midura，S.，B.and Pluynik，D.H.，Cytokine 2238-246(1990)and Cohen，B.，Gothelf，Y.，Vaiman，D.，Revel，M.，and Chebath，J.，Cytokine383-91(1991))。
2-5A合成酶/RNA酶L路徑可以被很多病毒激活(當(dāng)病毒感染后)，包括HIV-1(Schr
der，H.C.，Wenger，R.，Kuchino，Y.，and Muller，W.E.G.，J.Biol.Chem.264，5669(1989);Schroder，H.C.，Wenger，R.，Rottman，M.，and Muller，W.E.G.，Biol.Chem.Hoppe-Seyler 369，985(1988))。本路徑的激活延遲HIV感染過(guò)程。為了激活RNA酶L，自然產(chǎn)生的2-5A需要一個(gè)5′-三磷酸，這一分子是不穩(wěn)定的。帶有5′-單磷酸的2-5A分子或5′端不含磷酸的2-5A核在生理?xiàng)l件下不能活化RNA酶L。
“人B-嗜淋巴病毒”(也就是知名的嗜淋巴B細(xì)胞病毒)，現(xiàn)在稱作HHV-6，具有一個(gè)大分子量的雙鏈DNA基因組，這一點(diǎn)在形態(tài)學(xué)上與皰疹病毒類病毒相似，但是又在宿主范圍，體外生物效應(yīng)，抗原特點(diǎn)和基因型等方面區(qū)別于人和非人類靈長(zhǎng)動(dòng)物皰疹病毒。Salahuddin等，在Science 234596-601(1986);Josephs等，Science 234 601-602(1986)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該病毒可以感染新分離的B-細(xì)胞，使之轉(zhuǎn)化為具有核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含體的單-或雙具核的大折射細(xì)胞。推測(cè)HBLV就是引起慢性單核細(xì)胞增殖樣綜合癥的原因，該病的疲勞癥可持續(xù)一年多。
人免疫缺損病毒(“HIV”)，也就是知名的人T-細(xì)胞白血病病毒Ⅲ(HTLV-Ⅲ)，是一種D逆轉(zhuǎn)錄型病毒，它是獲得性免疫缺損綜合癥的致病劑。象所有的逆轉(zhuǎn)錄病毒一樣，HIV復(fù)制時(shí)必須將正鏈RNA基因組轉(zhuǎn)錄至DNA，此過(guò)程必須有RNA依賴性DNA聚合酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)參加。逆轉(zhuǎn)錄酶的這一特點(diǎn)使得逆轉(zhuǎn)錄病毒和病毒都需要一個(gè)短的逆轉(zhuǎn)錄步驟，這就使逆轉(zhuǎn)錄酶成為抗病毒(特別是抗逆轉(zhuǎn)錄病毒)治療的一個(gè)主要靶點(diǎn)。
2-5A合成酶/RNA酶L體系作為抗病毒細(xì)胞防御機(jī)制已顯示是一個(gè)很有希望的抗病毒化學(xué)治療靶點(diǎn)，特別應(yīng)歸于它們與病毒基因組或轉(zhuǎn)錄(如HIV-1RNA基因組)中的雙鏈部分的相互作用(Lengyel，P.，Annu.Rev.Biochem.51，251(1982);Pestka，S.，編著，Methods Enzymol.118，119(1986);Lengyel，R.，J.Intesteson Res.7，511(1987);Sen，G.C.，Prog.Nucleic Acid Res.Molec.Biol.27，105(1982))。但是，實(shí)際需要的是能抵抗酶(可降解正常的2-5A)降解的2-5A的衍生物。需要一個(gè)用具有廣譜并有雙重作用(即該化合物即能激活2-5A路徑又能抑制病毒DNA聚合酶的活性)的化合物治療病毒感染的方法。
根據(jù)一個(gè)實(shí)例，本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)式Ⅰ所代表的新型化合物或其藥用鹽的應(yīng)用
其中n是1-8的整數(shù)，m是0，1，2，或3，R是獨(dú)立的氫或羥基，X是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，n最好是1-3，特別是1或2，X最好是從C1-C3烷基和C1-C3烷氧基中選擇。
根據(jù)另外一個(gè)實(shí)例，本發(fā)明涉及一種治療病毒的方法，包括給哺乳動(dòng)物服用有效劑量的結(jié)構(gòu)式Ⅰ或結(jié)構(gòu)式Ⅱ所代表的一種或多種化合物或其藥用鹽，但不包括正常的2′，5′-寡聚腺苷酸和其鹽，在這里結(jié)構(gòu)式Ⅰ中的n，m，R和X與上面定義的相同，
在結(jié)構(gòu)式Ⅱ中
X是NH2或CH2;
m是零，1，2或3;
n是1-8的正整數(shù);
每一個(gè)R1都可獨(dú)立地從下組基團(tuán)中選擇氧，硫，硫酸酯，硒，C1-C8烷基和C1-C8烷氧基;
每一個(gè)R2都可獨(dú)立地從下組基團(tuán)中選擇氧，硫，硫酸酯，硒，C1-C8烷基和C1-C8烷氧基;
每一個(gè)R3都可獨(dú)立選擇氧，羥基，氨基和-OSi(CH3)2-C(CH3)3中的任何一個(gè)基團(tuán);
R4和R5可以獨(dú)立地從下組基團(tuán)中選擇氧;羥基;氨基;C1-C8烷基;C1-C8烷氧基;C1-C8烷基氨基，烷基羰基，烷基羧基和烷基鹵化物;和C1-C8烷氧基氨基，烷氧基羰基，烷氧基羧基及烷氧基鹵化物;
從而同時(shí)引起所說(shuō)哺乳動(dòng)物的2-5A合成酶/RNA酶L抗病毒路徑的激活和病毒DNA聚合酶的抑制。
優(yōu)先選擇，n是1-3，最好是1或2。另外優(yōu)先選取的烷基，烷氧基，取代烷基或取代烷氧基(這些基團(tuán)都可包含有1-8個(gè)碳原子)等取代基是含1-4個(gè)碳原子，最好是1-3個(gè)碳原子。對(duì)鹵素取代的烷基和烷氧基來(lái)說(shuō)，鹵素原子最好是氯，溴或氟，尤其是氯最好。
就本發(fā)明的一個(gè)比較好的亞類來(lái)說(shuō)，
基團(tuán)A是
其中m與上面定義的一樣;而且最好至少有一個(gè)R1是硫，其余的R1均是氧。另外一個(gè)較好的實(shí)例表明，最好至少有一個(gè)R3或R4是氫，其余的是羥基。
根據(jù)另外一個(gè)實(shí)例，本發(fā)明涉及一個(gè)共聚化合物，該共聚物由結(jié)構(gòu)式Ⅱ所示的化合物與一個(gè)內(nèi)收物共價(jià)連接而成，其中的內(nèi)收物可增加共聚物穿透完整細(xì)胞的能力。
內(nèi)收物最好通過(guò)2′-末端核苷酸的2′或3′位的羥基與寡聚體偶聯(lián)，而且優(yōu)先選擇2′位。
在一個(gè)實(shí)例中，內(nèi)收物可以是維生素，該維生素的選擇應(yīng)能保證哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞中含有相應(yīng)的細(xì)胞受體，以使維生素通過(guò)受體介導(dǎo)的胞飲作用而被細(xì)胞吸收。在本發(fā)明中，類似這種有用的維生素有維生素B12，生物素，核黃素和葉酸等。
另外，內(nèi)收物可以是親脂性的分子或基團(tuán)，象具有下面結(jié)構(gòu)式的?；?，
其中X是從1-20的整數(shù)，最好是從2-14。另外一個(gè)較好的脂溶性基團(tuán)是膽甾醇基。
作為共聚物類化合物中的一個(gè)較好的亞類，與內(nèi)收物共價(jià)偶聯(lián)的化合物或其藥用鹽具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ的結(jié)構(gòu)其中
m是零，1，2或3，n是1-8的整數(shù)，最好是1，2或3，
每個(gè)R3和R4可以獨(dú)立選取氫和羥基，每個(gè)R2可以獨(dú)立選取硫和氧，R5是羥基，該化合物通過(guò)2′-末端核苷酸的2′-位與內(nèi)收物共價(jià)連接起來(lái)。


圖1是描述2-5A合成酶/RNA酶L細(xì)胞內(nèi)酶路徑的示意圖。
圖2A是H9細(xì)胞與熒光素-牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)的葉酸鹽(25μg/ml)在貧含葉酸鹽的介質(zhì)中保溫5小時(shí)后的相襯顯微鏡顯微照相。
圖2B是與圖2A中所示一樣的細(xì)胞的熒光顯微照相。
圖2C是H9細(xì)胞與沒(méi)有葉酸鹽偶聯(lián)的熒光素-BSA保溫5小時(shí)后的相襯顯微鏡顯微照相。
圖2D是與圖2C中所示一樣的細(xì)胞的熒光顯微照相。
本專利選用即能激活2-5A合成酶/RNA酶L抗病毒防御路徑，又能抑制病毒產(chǎn)生的DNA聚合酶活性的治療劑進(jìn)行病毒性疾病的治療。所謂“治療”也意味著包含防御。這種雙重功效的治療劑是病毒DNA聚合酶(在病毒感染期產(chǎn)生的)的選擇性廣譜抑制劑。聚合酶是病毒復(fù)制的關(guān)鍵因素。本發(fā)明實(shí)踐中所應(yīng)用的化合物可以是正常2-5A的5′末端磷酸基，核糖基和/或核苷間連接鍵修飾后的衍生物。這些衍生物具有代謝穩(wěn)定、無(wú)毒等特點(diǎn)，并有雙重抗病毒功效，即，它們即能激活2-5A合成酶/RNA酶L抗病毒路徑，又能抑制由病毒引起產(chǎn)生的DNA聚合酶。因此，我們從激活哺乳動(dòng)物所固有的抗病毒機(jī)制和抑制病毒信息轉(zhuǎn)移過(guò)程中的關(guān)鍵酶這兩個(gè)方面探討了抗病毒治療。
在本發(fā)明的實(shí)踐中的一類比較有用的化合物中，2′，5′-蟲(chóng)草品的一個(gè)或多個(gè)3′-羥基被氫原子取代形成2′，5′-蟲(chóng)草品衍生物。這種修飾增加了衍生物抵抗磷酸二酯酶降解的能力。這類化合物的制備已有專利報(bào)道美國(guó)專利4，464，359(2′，5′-寡聚蟲(chóng)草品)和美國(guó)專利4，859，768〔2′，5′-寡聚蟲(chóng)草品和混和的2′，5′-寡聚(蟲(chóng)草品/腺苷)〕。核心2′，5′-蟲(chóng)草品衍生物是沒(méi)有毒性的，并且在感染細(xì)胞中有廣譜的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒活性(Montefioni，D.C.Sobol，R.W.，Reichenfacn，N.L.，Suhadolnik，R.J.，Charabala，R.，Pfleiderer，W.，Modlizewski，A.，Rolinson，W.E.，Jr.，and Mitchell，W.M.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86，7191(1989);Suhadolink，R.J.，Lebleu，B.，Pfleideser，W.，Charubala，R.，Montefiori，D.C.，Mitchell，W.M.，Sobol，R.W.，Li，S.W.，kariko，K.，and Reichenbach，N.L.，Nucleosides & Nucleotides 8，987(1989);Muller，W.E.G.，Weiler，B.E.，Charubala，R.，Pfleideser，W.，Leserman，L.，Sobol，R.W.，Suhadolnik，R.J.，and Schroder，H.C.，Biochemistsy 30，2027(1991))。其它的3′-羥基被修飾的2-5A蟲(chóng)草品衍生物也已經(jīng)被合成出來(lái)，如專利4，859，768中所述的氨基和OSi(CH3)2-C(CH3)3取代。除了將一個(gè)或多個(gè)核苷的3′-羥基修飾之外，其它的2-5A衍生物還包含有5′-末端磷酸基的修飾。這些2-5A衍生物保留了抑制病毒DNA聚合酶的能力，并且保持了代謝穩(wěn)定性，但是，他們能激活RNA酶L。除此之外，已經(jīng)合成了許多不同的2-5A寡聚腺苷酸衍生物，且顯示高效的抗病毒活性。
在本發(fā)明的另外一個(gè)實(shí)例中，修飾了核苷間的磷酸二酯鍵。在一個(gè)較好的實(shí)例中，硫取代了正常磷酸二酯鍵上的一個(gè)氧原子，形成了2′，5′-硫代磷酸寡聚腺苷酸。在美國(guó)專利4，924，624中描述了這類化合物的制備(包括光學(xué)異構(gòu)體)。2′，5′-磷酸二酯鍵骨架中的氧原子被硫取代后，使分子中引入了手性中心，因此也就引入了骨架的新的化學(xué)問(wèn)題。與正常的2-5A核相比，核心2′，5′-硫代磷酸衍生物增加了對(duì)磷酸二酯酶和磷酸酶的抵抗作用，并且增加了新的生物活性。這些立體化學(xué)修飾的分子是第一類能激活RNA酶L的2′，5′-連接的核心分子。2′，5′-硫代磷酸衍生物通過(guò)激活2-5A合成酶/RNA酶L抗病毒體系和抑制病毒DNA聚合酶而起作用。2′，5′-硫代磷酸三聚體能在微摩爾濃度水平激活RNA酶L，這與自然產(chǎn)生的P3A3相似。在本文的核苷間磷酸二酯鍵的修飾中，其它的用來(lái)取代氧原子的基團(tuán)還有硫酸酯，硒，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基等。
在本發(fā)明的另外一個(gè)實(shí)例中，制備了能增加對(duì)完整細(xì)胞穿透能力的具有雙重功能的抗病毒2-5A衍生物，該衍生物通過(guò)寡聚體與內(nèi)收物偶聯(lián)而得到。一組比較好的內(nèi)收物是水溶性的維生素(包括但不僅限于生物素，葉酸，維生素B2，或核黃素)。另外一些較好的內(nèi)收物包括親脂性的分子和化學(xué)基團(tuán)，如酰基或膽甾醇基等例子。這種共聚體被完整的細(xì)胞通過(guò)受體介導(dǎo)的胞飲作用而內(nèi)吞。
服用外活性的，代謝穩(wěn)定的，并具有雙重功能的2-5A類似物，將增加肌體對(duì)由于2-5A缺損引起的病癥的防御能力，特別是人和動(dòng)物防御病毒的感染。此處所說(shuō)的“2-5A缺損”是指所有的能阻斷正常2-5A生成和/或2-5A-依賴性RNA酶L活化的生理?xiàng)l件發(fā)生變化的現(xiàn)象、條件，或2-5A路徑阻斷。由2-5A缺損引起的病癥包括病毒感染，特別是HTLV感染，尤其是HIV感染;慢性疲勞和其它的HHV-6相關(guān)的病癥;乙肝和其它的肝炎病毒感染;皮T-細(xì)胞淋巴瘤和其它的HTLV-相關(guān)的病癥等。其它的相關(guān)疾病包括慢性骨髓性白血病;急性白血病;T-細(xì)胞白血病;阿耳茨海默氏病(早老性癡呆);帕金森氏病(震顫麻痹);多重硬化;自體免疫病;以及外科和其它創(chuàng)傷引起的免疫機(jī)能障礙。2-5A路徑缺損尤其是表現(xiàn)在慢性病毒感染和免疫細(xì)胞缺損類疾病中。
在2-5A分子的3′-羥基和別的部位進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾后，明顯地增加了分子對(duì)磷酸二酯酶和細(xì)胞核酸酶(Cellular nucleases)的代謝穩(wěn)定性，并且保留了激活RNA酶L和抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒逆轉(zhuǎn)錄的能力。同樣，母體2-5A的3′-末端核酸被取代修飾后，產(chǎn)生一個(gè)更穩(wěn)定的分子。代謝穩(wěn)定的2-5A類似物的持續(xù)高細(xì)胞內(nèi)濃度就是它們分子穩(wěn)定性增加的結(jié)果。另外，5′-末端的修飾將增強(qiáng)2-5A分子激活RNA酶L的能力。
2-5A類似物的長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)的藥物活性提供了一個(gè)更有利的治療指數(shù)。這樣可以降低給藥頻率(與代謝不穩(wěn)定的2-5A相比)。降低給藥頻率對(duì)很多由2-5A路徑缺損引起的慢性疾病來(lái)說(shuō)是非常重要的。另外，對(duì)2-5A衍生物進(jìn)行適當(dāng)?shù)挠欣诖┩讣?xì)胞的修飾，也將增加治療指數(shù)，它將降低達(dá)到治療效果時(shí)所必需的給藥量。
2-5A衍生物在治療由病毒引起的感染時(shí)特別有用。與病毒感染有關(guān)的2-5A路徑缺損包括病毒干擾由雙鏈RNA介導(dǎo)的2-5A合成酶的活化，從而引起路徑的滅活。在沒(méi)有2-5A合成酶活化的條件下，2-5A的產(chǎn)生，以及RNA酶L的活化，都將降低。根據(jù)本發(fā)明，在給藥后，外源性的并且代謝穩(wěn)定的2-5A類似物能抵消這種由病毒引起的2-5A路徑缺損。象正常的2-5A一樣，2-5A類似物能激活RNA酶L(該酶裂解病毒RNA)。
2-5A類似物在御防各種人T-細(xì)胞白血病病毒(總稱為“HTLV”)感染方面特別有效，這些病毒有引起皮T-細(xì)胞淋巴瘤的HTLV-Ⅰ;引起Sezany淋巴瘤的HTLV-Ⅱ;HTLV-Ⅲ;和HTLV-Ⅳ，該病毒同前認(rèn)為是多發(fā)性硬化的致病劑。每種HTLV病毒都是逆轉(zhuǎn)錄病毒。HTLV-Ⅲ(也就是知名的“HIV-Ⅰ”)引發(fā)獲得性免疫缺損綜合癥(“AIDS”，“愛(ài)滋病”)。該化合物也確信能治療HIV-2(第二個(gè)從血清學(xué)上區(qū)分的亞型)。在下文中HIV將代表HIV-1或HIV-2，以及其它的現(xiàn)在或下文中所知的HIV亞型。
2-5A類似物也能特別有效地防御引起病毒性肝炎的各種肝炎病毒，它被認(rèn)為是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒的混合型，并且依靠DNA依賴性DNA聚合酶進(jìn)行DNA基因型的復(fù)制。2-5A類似物也能特別有效在御防由DNA基因型病毒引起的感染，如皰疹病毒。
在HTLV-感染(特別是HIV-1感染的病人)的血液?jiǎn)渭?xì)胞中，已經(jīng)證實(shí)有非常低水平的2-5A/或RNA酶L活性。與之對(duì)照，健康人的血液?jiǎn)魏思?xì)胞中顯示出較高的2-5A水平(平均)，并能容易地檢測(cè)出RNA酶L活性。同樣，慢性疲勞癥患者的血液?jiǎn)魏思?xì)胞顯示出低水平的2-5A，和新的RNA斷裂碎片，這些斷裂新產(chǎn)物區(qū)別于從正常個(gè)體的血液?jiǎn)魏思?xì)胞中觀察到的專一性裂解產(chǎn)物。
本文描述了本發(fā)明用于治療HIV-1(通常作為逆轉(zhuǎn)錄病毒的典型)感染和乙肝病毒(該病毒同時(shí)具有逆轉(zhuǎn)錄病毒和DNA基因型病毒的性質(zhì))感染的實(shí)踐過(guò)程，并且本發(fā)明的方法能用于治療任何由病毒組成的致病劑引起的疾病。
另外，慢性病毒感染通常伴隨著細(xì)胞因子失衡，從而導(dǎo)致附加的致病效應(yīng)，包括非生物活性的2-5A的積聚。本發(fā)明將通過(guò)提供有生物活性的2-5A來(lái)校正這種非平衡效應(yīng)。
在本發(fā)明的應(yīng)用過(guò)程中用到的一般化合物的制備方法已在有關(guān)專利文獻(xiàn)中報(bào)道美國(guó)專利4，859，768和4，924，624。在本發(fā)明的具體實(shí)踐中用到的其它化合物可以用下面給出的一般合成技術(shù)(象那些專利中報(bào)道的一樣)進(jìn)行制備。
用于本發(fā)明的實(shí)例化合物包括下面給出的核心化合物，以及它們對(duì)應(yīng)的5′-單、雙和三磷酸，和它們的可以藥用的鹽混和的蟲(chóng)草品/腺苷寡聚體2′，5′-C-C-C2′，5′-A-A-C2′，5′-A-C-C2′，5′-C-C-A2′，5′-C-A-C2′，5′-C-C-A和2′，5′-A-C-A，除了有A和C組合的各種“四聚體”外，還包括(但不局限于)，2′，5′-C-C-C-C2′，5′-A-A-A-C2′，5′-A-A-C-C2′，5′-A-A-C-A及其類似物烷氧基化合物2′，5′-A-A-A-3′-O-甲基
2′，5′-A-A-A-3′-O-戊基2′，5′-A-A-A-3′-O-己基2′，5′-A-A-A-3′-O-庚基氨基化合物2′，5′-A-A-A-3′-氨基各種各樣的化合物2′，5′-A(si)A(si)A，2′，5′-A-A-阿糖-A，2′，5′-A-A-Tu，2′，5′-Tu-Tu-Tu，2′，5′-I3，2′，5′-木糖-A3，2′，5′-木糖-A4，2′，5′-C-C-dCF，2′，5′-EHNA-A-A，和5，6-二氯苯并咪唑酰(2′，5′)5，6-二氯苯并咪唑酰(2′，5′)5，6-二氯苯并咪唑核糖核苷，3′-脫氧腺苷酰-(2′，5′)-3′-脫氧腺苷酰-(2′-4′)-9-(4′羥基丁基)腺苷，和3′-脫氧腺苷酰-(2′，5′)-3′-脫氧腺苷酰-(2′-4′)-9-(4′羥基乙氧基)腺苷，
以上提到的最后兩個(gè)化合物是統(tǒng)稱為“C-C-醚-A”的一組化合物中選出的兩個(gè)代表性化合物。它們的特點(diǎn)是在蟲(chóng)草品核苷和腺苷之間通過(guò)一個(gè)醚鍵連接。相應(yīng)地，當(dāng)蟲(chóng)草品殘基被腺苷取代，這類化合物統(tǒng)稱為“A-A-醚-A”。
2-5A衍生物對(duì)乙肝病毒復(fù)制的抑制通過(guò)抗乙肝病毒試驗(yàn)檢驗(yàn)了幾種2-5A衍生物的抗病毒活性。將不斷產(chǎn)生乙肝病毒的肝細(xì)胞(Acs等，Proceedings of the National Academy of Sciences，USA 844641-4645(1987))接種在24孔組織培養(yǎng)板中，當(dāng)生長(zhǎng)至融合后，在連續(xù)十天內(nèi)，每天加入20um的2-5A衍生物。培養(yǎng)基質(zhì)每天更換一次。過(guò)0，3，6和十天后分別分析用過(guò)的培養(yǎng)基質(zhì)中的細(xì)胞外乙肝病毒DNA。將處理十天后的細(xì)胞溶化24小時(shí)，并分析細(xì)胞內(nèi)的基因DNA形式。Korda和Milman已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了該方法的簡(jiǎn)單過(guò)程(Antiviral Research 217217(1991))。下面將給出更詳細(xì)的試驗(yàn)參數(shù)。
細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的乙肝病毒DNA都通過(guò)常規(guī)的技術(shù)過(guò)程進(jìn)行了分析，目的是(1)考證化合物功效，和(2)從檢查病毒復(fù)制形式的典型實(shí)例中，盡可能提供化合物在乙肝病毒復(fù)制路徑中的作用靶點(diǎn)的有關(guān)數(shù)據(jù)。在處理期間，培養(yǎng)基質(zhì)每天都進(jìn)行更換的目的是(1)防止從試驗(yàn)化合物中代謝生成的強(qiáng)毒性化合物集結(jié)，(2)提供一個(gè)機(jī)會(huì)來(lái)分析在獨(dú)立的24小時(shí)間隔時(shí)間內(nèi)乙肝病毒的產(chǎn)物，并能定量比較病毒粒子所產(chǎn)生的任何效應(yīng)。
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，選用印跡雜交技術(shù)(Southern印跡和斑點(diǎn)印跡)和〔32P〕-標(biāo)記的乙肝病毒探針進(jìn)行乙肝病毒DNA的分析。乙肝病毒DNA的水平可以通過(guò)比較每個(gè)硝酸纖維膜上(凝膠和斑點(diǎn)印跡)的已知量乙肝病毒DNA水平來(lái)測(cè)得。利用AMBISβ計(jì)數(shù)器可以直接定量測(cè)出雜交探針的放射性衰減。利用多點(diǎn)分析所得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)校正由β計(jì)數(shù)器測(cè)得的靶DNA的cpm(每分鐘衰變次數(shù))的相對(duì)水平。釋放到培養(yǎng)基質(zhì)中的乙肝病毒DNA水平可以用斑點(diǎn)印跡雜交測(cè)得。然后將所測(cè)得的乙肝病毒DNA水平與在0天的水平相對(duì)照來(lái)確定藥物處理的影響。
乙肝病毒復(fù)制的相對(duì)水平可以由復(fù)制中間體和游離基因單體的水平來(lái)顯示。在每個(gè)斑帶中，DNA的相對(duì)量都用完整的乙肝病毒DNA作為標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)樵诿總€(gè)細(xì)胞基質(zhì)中這類乙肝病毒DNA的水平是穩(wěn)定的。如果復(fù)制中間體損失，并且整體乙肝病毒DNA的水平不變，則表明乙肝病毒DNA的復(fù)制受到抑制。在本試驗(yàn)中，下列2-5A衍生物顯示出抗乙肝病毒活性木-A3，A-A-醚-A，EHNA-AA，CAC，ACCA和ddbenz。
對(duì)這些抑制劑進(jìn)一步進(jìn)行研究，將這些2-5A衍生物中的5個(gè)化合物稀釋，除20/μM外，分別在2/μM和6/μM進(jìn)行試驗(yàn)。在20/μM濃度時(shí)，這5個(gè)2-5A衍生物都顯示出明顯的抗乙肝病毒活性，而且在2/μM濃度時(shí)，其中的3個(gè)衍生物(A-A-醚-A，ddbenz，和CAC)也有很高的活性。這些結(jié)果表明，許多2-5A衍生物具有抗乙肝病毒活性。根據(jù)本發(fā)明可以推知，如果在這些和其它的一些2-5A衍生物的5′末端加以修飾，以增加2-5A衍生物活化RNA酶L的能力，將增加它們的抗乙肝病毒活性。同樣，根據(jù)本發(fā)明也可以推知，如果在這些5′修飾和5′末端修飾的2-5A衍生物上共價(jià)偶聯(lián)上親脂性的內(nèi)收物(如，膽甾醇，棕櫚酸，葉酸，等等)，它們的抗乙肝病毒活性將進(jìn)一步增加。
為了確定這5個(gè)具有抗乙肝病毒活性的2-5A衍生物的治療指數(shù)，用常規(guī)的中性紅試驗(yàn)測(cè)試了它們的毒性。在培養(yǎng)器中確定這些化合物毒性的過(guò)程是一個(gè)非常常規(guī)的技術(shù)，可概括如下2.2.15細(xì)胞在96孔平底組織培養(yǎng)板中長(zhǎng)至融合，每孔中含0.2ml培養(yǎng)基質(zhì)，并用化合物藥物處理。每個(gè)化合物都在四個(gè)不同的濃度下進(jìn)行試驗(yàn)，并且每個(gè)都進(jìn)行三份培養(yǎng)試驗(yàn)。在每塊96孔培養(yǎng)板中都保留未經(jīng)藥物處理的對(duì)照培養(yǎng)基，并在每塊板中保留不含細(xì)胞的孔用來(lái)校正光掃描計(jì)數(shù)結(jié)果?；衔锏亩拘钥梢酝ㄟ^(guò)細(xì)胞對(duì)中性紅染料的吸收抑制來(lái)確定，這可以通過(guò)測(cè)定細(xì)胞(經(jīng)十天藥物處理后，再過(guò)24小時(shí))在510nm波長(zhǎng)下的吸收并與未處理的對(duì)照細(xì)胞相比較而得到(Finter等，J.Med.Chem.5419(1969))。
上述的所有2-5A衍生物在最高試驗(yàn)濃度(抗病毒試驗(yàn)濃度，20/μM)時(shí)均未發(fā)現(xiàn)毒性現(xiàn)象。在試驗(yàn)的5個(gè)2-5A衍生物中，有四個(gè)在9倍于有效抗病毒量(180/μM)時(shí)仍沒(méi)有毒性。第五個(gè)化合物(dd benz)在180/μM時(shí)表現(xiàn)出低毒性。
為進(jìn)一步研究上述2-5A衍生物抑制乙肝病毒的專一性，也對(duì)它們的裂解產(chǎn)物進(jìn)行了可能的抗病毒活性檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)苯并咪唑，二苯并咪唑，腺苷，蟲(chóng)草品或9-β-D-木糖腺苷等均沒(méi)有抗乙肝病毒活性。這些結(jié)果表明，在適當(dāng)?shù)臐舛认拢?-5A衍生物可以專一性地抑制乙肝病毒的復(fù)制而對(duì)未感染的細(xì)胞沒(méi)有毒性，并且這種抑制歸因于2-5A衍生物本身而不是它們的代謝物。
硫代磷酸酯對(duì)病毒的抑制RNA酶L是2-5A合成酶/RNA酶L抗病毒防御路徑中的一個(gè)重要的功能性酶。2-5A衍生物激活這種嚴(yán)格依賴2-5A的核糖核酸內(nèi)切酶和由此引起的RNA的水解在抑制病毒復(fù)制和調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)方面都是關(guān)鍵的。干擾素的一些抗逆轉(zhuǎn)錄病毒活性都是通過(guò)激活2-5A合成酶/RNA酶L路徑介導(dǎo)的。在建立抗逆轉(zhuǎn)錄病毒狀態(tài)時(shí)，直接由2-5A衍生物激活RNA酶L避免了對(duì)干擾素的需求。在2-5A分子的3′羥基和核苷間2′，5′磷酸二酯鍵部位進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，所得到的2-5A衍生物代謝穩(wěn)定(因此抵抗磷酸二酯和磷酸酶的水解)并且有生物活性(能激活RNA酶L)?？刂坪铣蛇^(guò)程能夠使設(shè)計(jì)和合成的2-5A衍生物(ⅰ)增加代謝穩(wěn)定性，避免核酸降解，(ⅱ)抵抗磷酸酶，(ⅲ)活化RNA酶L時(shí)不需5′磷酸化，(ⅳ)能轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入完整細(xì)胞。在2-5A分子的磷酸二酯鍵上引入手性中心，可以作為一種方法在分子水平區(qū)別RNA酶L的激活和抑制。首先用酶法合成得到了純的非對(duì)映異構(gòu)的硫代磷酸2-5A衍生物的二聚體和三聚體。最近又用化學(xué)方法(通過(guò)磷酸三酯法和亞磷酸三酯法)合成、純化并鑒定發(fā)兩個(gè)二聚體，四個(gè)三聚體，和八個(gè)四聚體等非對(duì)映異構(gòu)體。這些手性分子呈現(xiàn)出突出的生物活性，它們打破了活化RNA酶L必須有三腺苷酸殘基和5′末端磷酸這一傳統(tǒng)的理論。正常的2-5A核心分子不能活化RNA酶L，與之相對(duì)照，象2′，5′-硫代磷酸5′-單磷酸(pRpRp，SpRp和RpSp)(在10-8M)一樣，2′，5′-硫代磷酸三聚體核心分子的四個(gè)立體異構(gòu)體中有三個(gè)(RpRp，SpSp和RpSp)能結(jié)合并激活RNA酶L(在10-5M)。
為了確定這些體外的研究結(jié)果是否能擴(kuò)展到體內(nèi)模型(用病毒感染的細(xì)胞)，將2′，5′-硫代磷酸四聚體5′-單磷酸顯微注射入HeLa細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，然后用VSV(水泡性口炎病毒)轉(zhuǎn)染。2′，5′-硫代磷酸四聚體5′-單磷酸(pRpRpRp，pSpRpRp和pRpSpSp)都能激活RNA酶L。但是pSpSpSp異構(gòu)體(在濃度高達(dá)10-6M)不能激活RNA酶L。同時(shí)顯微注射入pSpSpSp抑制劑和2-5A，則失去了防御病毒(VSV)復(fù)制的能力。在培養(yǎng)皿中，Rp-和Sp-2′，5′-硫代磷酸酯能抑制HIV-1在完整細(xì)胞中的復(fù)制。2′，5′-硫代磷酸酯通過(guò)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制來(lái)御防HIV-1對(duì)靶細(xì)胞的感染〔在曲拉通破壞HIV-1病毒粒子(取自H9/HTLV-ⅢB培養(yǎng)上清液)的溶解液中測(cè)得〕。0.25-256/μM濃度的A3或p3A3不能抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶。與2-5A相對(duì)照，2′，5′-硫代磷酸四聚體5-單磷酸衍生物是很有效的HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶活性抑制劑。最有效的HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑是p3A3aS，在HIV-1-感染的細(xì)胞溶解液中，0.5/μM的p3A3aS對(duì)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制率是50%。AMPS的濃度高達(dá)200/μM時(shí)也不能抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶，這說(shuō)明降解產(chǎn)物與2′，5′-硫代磷酸酯的抑制活性無(wú)關(guān)。
紫外分析進(jìn)行的交聯(lián)研究表明，d(T)16和tRNALys3與均勻純的重組體p66HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶上動(dòng)力學(xué)非常重要的引物結(jié)合點(diǎn)專一性地結(jié)合。寡聚d(T)n與p66逆轉(zhuǎn)錄酶的結(jié)合不受dNTPs(指四種脫氧核糖三磷酸)的影響;在競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)中，引物類似物〔Sd(c)和d(c)〕、天然引物tRNALys3和p3A3aS以一級(jí)指數(shù)方式抑制d(T)n-p66/逆轉(zhuǎn)錄酶復(fù)合物的形成。2-5A和2-5A衍生物對(duì)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制發(fā)生在引物結(jié)合點(diǎn)。在平衡的結(jié)合條件下，2′，5′-P3A4呈現(xiàn)一級(jí)結(jié)合動(dòng)力學(xué)并且1/2競(jìng)爭(zhēng)濃度是55μM(KD＝31×10-6M)。2′，5′-P3A4aS呈現(xiàn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)結(jié)合，其1/2競(jìng)爭(zhēng)濃度是5.1×10-6M(KD＝2-0.9×10-6M)。2′，5′-A3核，2′，5′-pA3，3′，5′-A3核，3′，5′-PA33′，5′-P3A3和ATP不能抑制HIV-1 RT與d(T)16的結(jié)合。
2′，5′-蟲(chóng)草品三聚體核和5′-單磷酸(1/μM)〔當(dāng)與抗體靶向脂質(zhì)體(靶向于T細(xì)胞受體分子CD3)結(jié)合時(shí)〕可以90%抑制HIV-1復(fù)制。參見(jiàn)文獻(xiàn)中的表1Müller，W.E.G.，Weiler，B.E.，Charubala，R.，Pfleiderer，W.，Leserman，L.，Sobol，R.W.，Suhadolnik，R.J.，和Schroder，H.C.，Biochemlstry 30，2027(1991)。斑點(diǎn)印跡和凝膠阻滯試驗(yàn)表明，2′，5′-蟲(chóng)草品三聚體核和5′-單磷酸干擾tRNALys3與HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶的結(jié)合，參見(jiàn)Muller等的圖3。上面提到的文獻(xiàn)與本文有關(guān)，可作參考。pC3不能激活RNA酶L，并且對(duì)細(xì)胞RNA或蛋白質(zhì)的量沒(méi)有影響。在濃度為10/μM時(shí)，細(xì)胞DNA聚合酶α，β和γ幾乎不受C3或pC3〔C＝蟲(chóng)草品〕的影響。
我們首次得到有效的抗逆轉(zhuǎn)病毒活性的化合物(2-5A衍生物)。這些化合物作用于受HIV-1-感染的細(xì)胞時(shí)有雙重作用(ⅰ)它們激活2-5A合成酶/RNA酶L抗逆轉(zhuǎn)錄病毒體系，并且(ⅱ)抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶。就2′，5′-硫代磷酸核和它們的5′-單磷酸而言，它們能阻止急性感染(通過(guò)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制)，并且同時(shí)也能降解HIV-1mRNA(通過(guò)激活RNA酶L)。
能增加細(xì)胞吸收能力的2′，5′-寡聚腺苷衍生物共聚體為了增加2-5A衍生物進(jìn)入完整細(xì)胞的內(nèi)吞作用，可將生物活性的2-5A衍生物與水溶性的維生素(葉酸、生物素、核黃素、或維生素B12)或親脂性的化學(xué)基團(tuán)偶聯(lián)形成共聚物。
這一過(guò)程包括(ⅰ)化學(xué)合成有生物活性并且代謝穩(wěn)定的衍生物，例如，2′，5′-Cn，2′，5′-硫代磷酸酯(根據(jù)美國(guó)專利4，924，624制備)，和其它的代謝穩(wěn)定的衍生物(如美國(guó)專利4，859，768中報(bào)導(dǎo)的那些化合物)。根據(jù)上述文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的方法，設(shè)計(jì)并合成了一些2-5A衍生物，并且從RNA酶L的水平和逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制兩個(gè)方面檢驗(yàn)了它們的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒效能。在多步化學(xué)合成(通過(guò)磷酸三酯法和亞磷酰胺法)中，可以分別用酶促方法得到毫克量和克量的2′，5′-寡聚核苷酸。正確選擇合適的糖、堿基和磷酸保護(hù)基，直接影響到反應(yīng)的收率及產(chǎn)物的純化和色譜分析。
成功地促進(jìn)2-5A衍生物(有生物活性并且代謝穩(wěn)定)的轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)于持續(xù)研究HIV-1復(fù)制的抑制和有效藥物的運(yùn)輸是非常重要的。有幾種幫助2-5A衍生物轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞的方法可供選用。
2′，5′-寡聚腺苷酸親脂性共聚體第一種幫助轉(zhuǎn)運(yùn)的方法是在分子的2′，3′-末端共價(jià)偶聯(lián)上一個(gè)親脂性基團(tuán)(如?；蚰戠薮蓟?。例如，可以合成并分離純化得到2′-末端羥基通過(guò)酯鍵與棕櫚?；?結(jié)構(gòu)式Ⅲ)或膽甾醇甲?；?結(jié)構(gòu)式Ⅳ)相連的2′，5′-蟲(chóng)草品核衍生物。
實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這些酯化后的化合物能夠抑制HIV-1感染的H9細(xì)胞(在培養(yǎng)皿中)中的HIV-1復(fù)制。
2-5A類似物與膽甾醇所形成的共聚物可以通過(guò)化合物Ⅴ
其中m是0，1，2或3，n是1-8的整數(shù)，R可以獨(dú)立地選取氫或羥基，R1是-COOH或-NH2，R2可以獨(dú)立地選取硫或氧，R3可以獨(dú)立地選取硫或氧，X是1-17的整數(shù)，與膽甾醇氯甲酸酯的偶聯(lián)反應(yīng)而合成得到，該反應(yīng)在二氯甲烷溶液中進(jìn)行，并且加入二甲基氨基吡啶(DMAP)催化。反應(yīng)產(chǎn)物用柱層析分離純化。
而且，最好R取代基不全是羥基，也就是說(shuō)，至少有一個(gè)R是氫。最好n是1-3，尤其是1或者2。5′末端磷酸基上的R2最好是硫。最后，X的值最好是1-8，尤其是1-4。結(jié)構(gòu)式Ⅴ所代表的2′，5′A衍生物共聚物也可以通過(guò)功能化適當(dāng)?shù)?′磷酸化的2′，5′-寡聚腺苷酸，2′，5′-寡聚蟲(chóng)草品或混和的2′，5′-寡聚(腺苷/蟲(chóng)草品)等寡聚體來(lái)制備，這些制備方法可以參考美國(guó)專利4，464，359或4，859，768。進(jìn)行寡聚體功能化時(shí)，可以將它們的2′末端核酸偶聯(lián)一個(gè)烷基連接-(CH2)xR1，其中的X和R1與上面定義的一樣。
值得提出的是，除了包含有磷酸二酯鍵連接的寡聚體以外，結(jié)構(gòu)式Ⅴ所代表的2-5A衍生物共聚物能夠通過(guò)烷基連接臂與2′，5′-硫代磷酸酯的2′-末端核苷的連接而制備。2′，5′-硫代磷酸酯的制備(包括它們的對(duì)映體的拆分)方法已在美國(guó)專利4，924，624中報(bào)道。如果再改進(jìn)一步，將專利4，924，624和4，859，768中的合成技術(shù)組合起來(lái)，就可以制備得到混和的2′，5′-(磷酸二酯鍵/硫代磷酸酯鍵)-寡聚腺苷酸。
在分子中所有的核苷間連接鍵中的R2都是氧(如連接鍵是磷酸二酯鍵)的情況下，可以通過(guò)相應(yīng)的末磷酸化的核心化合物與POCl3反應(yīng)而得到它們的5′-單磷酸衍生物。如果核苷間連接鍵中至少有一個(gè)是硫代磷酸酯鍵(即，R2是硫)，這種處理將導(dǎo)至硫原子從硫代磷酸酯鍵中消除，從而得到2′，5′-寡聚腺苷酸。所以，含有硫代磷酸酯鍵的核心寡聚體的5′單磷酸化衍生物必須從對(duì)應(yīng)的全保護(hù)核心寡聚體(其中5′末端核苷的單甲氧基三苯甲基保護(hù)基已被脫除)制備。具體過(guò)程在美國(guó)專利4，924，624欄26-31中有詳細(xì)敘述。
2-5-衍生物/?；簿畚锟梢杂脴?biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)使待偶聯(lián)化合物與酰氯反應(yīng)而得到?；蛘撸部梢灾苯佑?′-羥基已經(jīng)被?；蚰戠薮技柞；セ哪┒撕塑者M(jìn)行2′，5′-寡聚體的合成。合成方案1以膽甾醇偶聯(lián)的和?；南x(chóng)草品三聚體化合物(包括化合物12和13)的制備為例(但不僅限于此例)闡明了其中的一種制備方法方案1
方案1(續(xù))
方案1(續(xù))
方案1(續(xù))
在方案1中，多步化學(xué)合成從5′-O-二甲氧基三苯甲基-N6-對(duì)硝基-苯基乙氧羰基-蟲(chóng)草品(1)和相應(yīng)的2′-O-琥珀酸酯(2)開(kāi)始?；衔?與膽甾醇氯甲酸酯反應(yīng)得到化合物3，化合物3脫除三苯甲基得到化合物4，化合物4在合成中用做2′-末端構(gòu)建單元。琥珀酸酯2與膽甾醇縮合得到酯5，脫除三苯甲基得到化合物6。
合成方案2舉例闡明了三聚體共聚物的合成路線，該實(shí)例從化合物6開(kāi)始。這一蟲(chóng)草品衍生物首先與全保護(hù)的磷酸亞胺7反應(yīng)，得到二聚體8(收率很高)。脫除5′末端三苯甲基得到化合物9，隨后與第二分子化合物7得到全保護(hù)的三聚體10。然后，分別用酸脫除二甲氧基三苯甲基，用DBU脫除對(duì)硝基苯基乙氧羰基，得到完全游離的蟲(chóng)草品三聚體共聚物11。從這個(gè)實(shí)例中我們可以看出，本方法的優(yōu)點(diǎn)是膽甾醇和琥珀酸連接臂間的酯鍵在整個(gè)化學(xué)操作過(guò)程中不受影響。
用完全類似的方法，以膽甾醇碳酸酯4開(kāi)始經(jīng)過(guò)同樣的步驟，可制備得到蟲(chóng)草品三聚體共聚物12。
也可以用完全類似的方法，制備得到2′-末端帶有?；墓押塑账?蟲(chóng)草品三聚體共聚物13。
本發(fā)明中的親脂性共聚體有潛在的能力通過(guò)擴(kuò)散作用(利用它們的親脂性)進(jìn)入細(xì)胞。它們能夠進(jìn)入完整的細(xì)胞，并產(chǎn)生與正常2-5A一樣的生物活性。一旦進(jìn)入細(xì)胞，共聚體就被水解而釋放出2-5A衍生物。
2′，5′-寡聚腺苷酸維生素共聚物第二種幫助寡核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)的方法是在2-5A衍生物分子中共價(jià)偶聯(lián)上水溶性的維生素(如生物素、葉酸、核黃素或維生素B12等)。2-5A衍生物與水溶性維生素共價(jià)偶聯(lián)后，可以通過(guò)受體介導(dǎo)的胞飲作用將活性分子協(xié)同運(yùn)入完整細(xì)胞，并完全保留了它們的生物活性。
作為描述本理論的一個(gè)模型試驗(yàn)，我們?cè)谂囵B(yǎng)的H9細(xì)胞中做了熒光素-牛血清白蛋白(BSA)共價(jià)偶聯(lián)的葉酸的內(nèi)吞試驗(yàn)(圖2A和2B)。在對(duì)照試驗(yàn)中，H9細(xì)胞與沒(méi)有葉酸偶聯(lián)的熒光素-BSA保溫5小時(shí)，沒(méi)有被吸收(圖2C和2D)。這些結(jié)果表明在H9細(xì)胞上存在著葉酸受體，這一受體可用來(lái)靶向運(yùn)輸2-5A衍生物。葉酸受體能夠與葉酸偶聯(lián)的分子結(jié)合，并在5小時(shí)內(nèi)80%被細(xì)胞吸收。
2-5A衍生物能夠與水溶性的維生素共價(jià)偶聯(lián)起來(lái)，以而有利于極性的2-5A分子進(jìn)入完成的細(xì)胞，并且不損害細(xì)胞膜。水溶性的維生素共價(jià)偶聯(lián)在2-5A分子的2′，3′-末端，利用受體介導(dǎo)的胞飲作用被完整細(xì)胞吸收。實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明，與生物素、葉酸、核黃素和維生素B12等共價(jià)偶聯(lián)的極性2-5A分子可以非損傷性地轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞漿，并且隨后通過(guò)受體介導(dǎo)的胞飲作用有效地被吸收。在這種方法中，利用天然維生素的胞飲作用來(lái)完成細(xì)胞吸收，這就避免了其它已有方法(如顯微注射，電打孔，聲處理，清潔劑滲透)產(chǎn)生的膜損傷。在所有的分化細(xì)胞中，維生素吸收都以比較合理的速率進(jìn)行。根據(jù)這種維生素共聚物的有效的吸收，可以相信，完全能夠使2-5A/葉酸共聚物的細(xì)胞內(nèi)濃度達(dá)到大約10-6M;這些濃度足以活化RNA酶L和抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶。因?yàn)榧?xì)胞有相似數(shù)目的葉酸，生物素和維生素B12受體，所以推測(cè)2-5A/生物素和2-5A/維生素B12也能達(dá)到相似的細(xì)胞內(nèi)濃度。
2-5A維生素B12共聚物在進(jìn)行2-5A或生物活性的2-5A衍生物與維生素B12的共價(jià)偶聯(lián)時(shí)，可以首先用弱酸(0.4MHCl，室溫72小時(shí))將維生素B12轉(zhuǎn)化為它的單酸衍生物。然后用適當(dāng)?shù)目s合劑〔如，1-乙基-3-(二甲基-氨基-丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)〕使待偶聯(lián)2-5A化合物〔如結(jié)構(gòu)式Ⅴ所示化合物(R1＝NH2)〕與維生素B12的羧基反應(yīng)。反應(yīng)得到的2-5A/維生素B12共聚物可以用Sephadex G-25或反相HPLC層析分離純化。并根據(jù)已報(bào)道的2-5A和維生素B12的消失系數(shù)進(jìn)行鑒定。
2-5A/葉酸共聚物2-5A葉酸共聚物可以通過(guò)待偶聯(lián)化合物〔如結(jié)構(gòu)式Ⅴ(R1＝NH2)所示化合物〕在適當(dāng)?shù)目s合劑(如EDAC)存在下反應(yīng)得到，所得產(chǎn)物可用柱層析，薄層層析或HPLC純化。
2-5A/生物素共聚物生物素化的2-5A共聚物可以通過(guò)商業(yè)化的N-羥基琥珀酰亞胺生物素與化合物Ⅴ(R＝NH2)反應(yīng)得到，所得產(chǎn)物可用類似于2-5A/葉酸共聚物的方法純化。
包含有3′-末端非環(huán)核苷的2′，5′-蟲(chóng)草品類似物的制備結(jié)構(gòu)式Ⅰ所代表的三聚體“核心”蟲(chóng)草品類似物(即，結(jié)構(gòu)式Ⅰ所代表化合物，其中m是0，n是1)可用方案2所示路線制備，其中，“bz”是苯甲?；癕eOTr”是單甲氧基三苯甲基，“npe”是2-(4-硝基苯基)乙基，“npeoc”是〔2-(4-硝基苯基)-乙氧基〕羰基。為了描述方便，化合物均以銨鹽形式制備，可以理解，本發(fā)明不僅局限于此。本合成方案例舉了四個(gè)化合物(18，19，20和21)的制備過(guò)程。
方案2
根據(jù)Charubala等人的方法〔Helv.Chim.Acta 70，2028(1987)〕，二核苷酸單磷酸酯9可以從3′-脫氧-5′-O-(單甲氧基三苯甲基)N6-〔2-(4-硝基苯基)乙氧基碳基〕腺苷(4)制備得到。根據(jù)Charubala等人的方法可以制備得到化合物4，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成2′-三磷酸酯衍生物5，其中化合物5的磷酸功能基上含有2，5-二氯苯基和2-(4-硝基)苯基乙基(方案1)。用4-硝基苯甲醛肟從化合物5中脫去2，5-二氯苯基得到二酯6。另一方面，用酸脫除5′-O-單甲氧基三苯甲基得到5′-羥基三酯7。這兩個(gè)合成單元6和7在催化劑2，4，6-三異丙基苯基磺酰氯和1-甲基-1H-咪唑存在下縮合，經(jīng)分離純化并干燥，得到二聚的磷酸三酯8，收率為88%。再用肟脫除這一二聚單元中的2，5-二氯苯基得到對(duì)應(yīng)的二核苷酸單磷酸二酯9。
為了合成三聚體14-17，上述二聚磷酸二酯與適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)無(wú)環(huán)核苷10-13在2，4，6-三異丙基苯基磺酰氯和1-甲基-1H-咪唑存在下縮合，可以得到70-75%的目的產(chǎn)物。非環(huán)核苷10-13可以按照Tychinskaya等Bioorg.Khim(USSP)5，1059(1979)和Mikhailov等，Izv.Akad.Nauk.Ser.Khim.2582(1974)的方法制備。三聚體酯9(1mmol)和適當(dāng)?shù)姆黔h(huán)核苷類似物與無(wú)水吡啶共蒸發(fā)(5×10ml)而干燥，并且最后溶解在10ml無(wú)水吡啶中。然后，依次加入0.46ml(6mmol)1-甲基-1H-咪唑和0.606g(2mmol)2，4，6-三異丙基苯磺酰氯，反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?0小時(shí)后，用100ml氯仿稀釋，并用2×50ml水洗。有機(jī)層干燥并濃縮，所得殘?jiān)詈笥眉妆?3×20ml)共蒸發(fā)后，用柱層析純化(硅膠，10×2.5cm，氯仿/甲醇＝100∶1)，得到無(wú)色泡狀化合物14-17，收率是85-90%。相應(yīng)地，向保護(hù)的三聚體15-18(0.028g;15/μmol)溶液中加入5ml0.5MDBU的吡啶溶液，室溫?cái)嚢?0小時(shí)，用1M的醋酸/吡啶溶液中和(2.5ml)，蒸干。殘?jiān)屑尤?5ml濃氨水，室溫?cái)嚢?8小時(shí)后減壓蒸除溶劑，所得殘余物用80%醋酸/水(4ml)室溫處理24小時(shí)脫除三苯甲基。蒸除溶劑后，殘余物用水共蒸發(fā)幾次，溶于水后直接上DEAE A-25 Sephadex柱(60×1cm)，用0.001-0.3M碳酸氫三乙胺緩沖液(pH＝7.5)梯度洗脫(線性梯度)。產(chǎn)物組分濃縮并用水共蒸發(fā)幾次，再進(jìn)一步用紙層析純化(異丙醇/濃氨/水＝6∶1∶3)。剪下產(chǎn)物帶并用水洗脫，冷凍干燥后，分別得到3′-脫氧腺苷酰-(2′，5′)-3′-脫氧腺苷酰-(2′-2′)-9-(2′-羥基乙基)腺苷(二銨鹽，18)，3′-脫氧腺苷酰-(2′-5′)-脫氧腺苷酰-(2′-3′)-9-(3′-羥基丙基)腺苷(二銨鹽，19)，3′-脫氧腺苷酰-(2′-5′)-3′-脫氧腺苷酰-(2′-4′)-9-(4′-羥基丁基)腺苷(二銨鹽，20)，和3′-脫氧腺苷酰-(2′-5′)-3-脫氧腺苷酰-(2′-2″)-9-〔(2″-羥基乙氧基)甲基〕腺苷二銨鹽(21)等無(wú)色粉末，收率為75-85%。所有化合物的純度均經(jīng)TLC，UV，和1H-NMR譜檢驗(yàn)。
所有三聚體被依次脫除保護(hù)基，0.5M DBU(1，8-二氮雙環(huán)〔5.4.0〕壬-7-烯)的無(wú)水吡啶溶液室溫20小時(shí)脫除2-(4-硝基苯基)乙基，氨的二氧六環(huán)溶液脫除苯甲?；詈笏崽幚砻摮?′-O-單甲氧基三苯甲基，得到相應(yīng)的全脫保護(hù)三聚體18-21，這些產(chǎn)物都經(jīng)DEAE Sephadex柱層析和紙層析純化分離，并經(jīng)過(guò)TLC，UV，HPLC和1H-NMR譜鑒定(未給出有關(guān)數(shù)據(jù))。
四聚體(C-C-C-醚-A)可以按照上述同樣的方法制備合成，即，用相應(yīng)的保護(hù)三核苷酸9a代替方案2中的二核苷酸單磷酸酯9與適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)非環(huán)核苷縮合。同樣，選用適當(dāng)?shù)母呒?jí)的寡核苷酸與非環(huán)核苷縮合，可以得到更高級(jí)的這種3′-非環(huán)蟲(chóng)草品寡聚體。
在制備非磷酸化的核心分子單磷酸化衍生物時(shí)，可以從全保護(hù)的三聚體(如，14-17)開(kāi)始，先用酸脫除三苯甲基，再與二-對(duì)-硝基苯基乙基磷酰氯反應(yīng)，再經(jīng)脫保護(hù)和層析純化分離即得到5′-單磷酸化的寡聚體。這種5′-單磷酸化的過(guò)程可以參考美國(guó)專利4，859，768中的實(shí)例6的方法進(jìn)行。
核心分子的5′-二磷酸和5′-三磷酸衍生物可以按照上述專利中的方法制備。簡(jiǎn)單地說(shuō)，在1ml二甲基甲酰胺中溶解0.1mM單磷酸化的核心化合物(無(wú)水三丁基胺鹽)和0.5mM1，1′-羰基二咪唑，然后加入0.5mM焦磷酸三丁基胺(溶解在5ml二甲基甲酰胺中)，室溫?cái)嚢?0小時(shí)，反應(yīng)物用5ml甲醇處理，蒸干并用2×20cmDEAE纖維素柱層析分離，用碳酸氫三乙胺進(jìn)行線性梯度洗脫(0-0.4M，pH＝7.5，3升)即可分離得到5′-二-和5′-三-磷酸產(chǎn)物(參照Hoard等J.Amer.Chem.Soc.87，1785-1788(1965)所報(bào)導(dǎo)的方法)。然后，5′-二磷酸產(chǎn)物和5′-三磷酸產(chǎn)物可以用DEAE-Sephadex
A25和Sephadex
進(jìn)行純化。
2-5A類似物和共聚物可以按照美國(guó)專利4，924，624，4，859，768，國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朠CT/US85/03634(國(guó)際公布號(hào)WO89/03683)或中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?9106235.1所報(bào)道的劑量給藥。因此，藥用時(shí)，可以將2′，5′-寡聚腺苷類似物摻入適于藥用的載體中。這些用作藥物組合物的載體可以是有機(jī)的或無(wú)機(jī)的，固態(tài)的或液態(tài)的。適用的液相載體包括水和醇(如乙醇，苯甲醇和聚乙二醇)。比較好的注射用液相載體包括水，0.6%食鹽水，葡萄糖溶液和二醇溶液(如，丙二醇水溶液或聚乙二醇水溶液)，組合物的性質(zhì)可以通過(guò)加入一種或多種具有特殊性質(zhì)的輔劑(如，增粘劑，表面活性劑，pH調(diào)節(jié)劑，防腐劑，甜味劑，穩(wěn)定劑，色素，懸浮劑，粒劑，色劑，崩解劑，促效劑，乳化劑和hymectants)加以改善。所得到的組合物可以是溶液，懸浮液，片劑，膠囊，軟膏，酏劑，針劑等藥用劑型。
給藥劑量依賴于感染或病癥的嚴(yán)重程度和客體的大小和重量。根據(jù)客體的大小和重量及病癥的性質(zhì)，劑量可以在很大范圍內(nèi)改變。就一個(gè)具體例子來(lái)說(shuō)，化合物可以做成0.1-100mg/ml的水溶液，磷酸鹽緩沖液或其它合適的液體溶液，或者做成每片含有0.01-1克活性化合物的片劑。
化合物可以以水溶性鹽的形式給藥?？梢运幱玫乃苄喳}包括例如，活性化合物的鈉、鉀和銨鹽。它們很容易地溶解在水或鹽水中。這種配方可以包含有附加的試劑(如，糖，或蛋白質(zhì))以保持滲透平衡。
患有，或懷疑患有，或有危險(xiǎn)患有由于2-5A路徑損傷引起的任何癥狀的動(dòng)物或人，可以報(bào)用0.1毫克-1克劑量的2′，5′-寡聚腺苷酸類似物。每天的給藥總量可以不同，例如，從0.001克到約1克，但是給藥量可以較高或較低。化合物的給藥途徑可以是以下幾種(但不僅限于此)中的任何一種，包括靜脈注射，腹腔或肌內(nèi)注射，和口服。實(shí)現(xiàn)這些給藥方式的技術(shù)都是已知的常規(guī)醫(yī)務(wù)技術(shù)。給藥頻率可以快到一天幾次，或慢至幾個(gè)星期一次。對(duì)于靜脈注射，特別是用于治療HIV(愛(ài)滋病毒)，每毫升藥液中最好含有約0.1到約1克的活性組分。
2′，5′-寡聚腺苷類似物還可以局部給藥來(lái)治療與2-5A路徑缺損引起的疾病有關(guān)的皮膚損傷?？梢杂米銐蛄康乃幬锝M合物(含有一種或多種2′，5′-寡聚腺苷類似物)涂抹在損傷或影響部位。
對(duì)于共聚物來(lái)說(shuō)，如果2-5A類似物與增強(qiáng)細(xì)胞吸收能力的內(nèi)收物偶聯(lián)，那么給藥劑量依賴于2-5A類似物部分的重量。除了與常用的載體一起給藥以外，2-5A類似物可以通過(guò)很多特殊的寡核苷酸或核酸轉(zhuǎn)運(yùn)技術(shù)(如，被單層脂質(zhì)體或重組仙臺(tái)病毒被膜包裹，或與載體分子如，多聚(L-賴氨酸)〕共價(jià)偶聯(lián))給藥。這些方法已在國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朠CT/US85/03634中報(bào)道，其中的所有發(fā)現(xiàn)和發(fā)明都可作為本文的參考。
另外，2-5A衍生物和共聚物可以通過(guò)微小的微米大小的聚苯乙烯載體給藥，通過(guò)它溶解在血流中并釋放出活性藥物組分。其它適用的載體在以上提到的專利文獻(xiàn)中都已討論，文獻(xiàn)中的所有發(fā)現(xiàn)和發(fā)明都可作為本文的參考。
所有有關(guān)合成，制備和分析方法的參考文獻(xiàn)都可作為本文的參考。
本發(fā)明可以在保持原文精神或必要特征的條件下有其它特殊的體現(xiàn)形式，因此，本發(fā)明所指的范圍應(yīng)當(dāng)參照附加的權(quán)利要求書(shū)，而不是前文中的特殊情況。
權(quán)利要求
1.具有結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物或其藥用鹽
其中n是1-8的正整數(shù)，m是0，1，2，或3，R是氫，X是C1-C6的烷基或C1-C6的烷氧基。
2.權(quán)利要求1中的化合物，其中X是C1-C3的烷基或C1-C3的烷氧基。
3.權(quán)利要求1中所述化合物，具體指下面一組化合物3′-脫氧腺苷酰-(2′-5′)-3′-脫氧腺苷酰(2′-2′)-9-(2′-羥基乙基)腺苷，它的5′單一，雙-和三-磷酸衍生物，及其任何的可以藥用的鹽。
4.權(quán)利要求1中所述化合物，具體指下列一組化合物3′-脫氧腺苷酰-(2′，5′)-3′-脫氧腺苷酰(2′，3′)-9-(3′-羥基)腺苷，它們的單-，雙-，和三-磷酸鹽，及其任何的可以藥用的鹽。
5.權(quán)利要求1中所述化合物，具體指下列一組化合物3′-脫氧腺苷酰-(2′，5′)-3′-脫氧腺苷酰(2′，4′)-9-(4′-羥基)腺苷，它們的單-，雙-，和三-磷酸鹽，及其任何的可以藥用的鹽。
6.權(quán)利要求1中所述化合物，具體指下列一組化合物3′-脫氧腺苷酰-(2′，5′)-3′-脫氧腺苷酰(2′，2′)-9-〔(2″-羥基)甲基〕腺苷，它們的單-，雙-，和三-磷酸鹽，及其任何的可以藥用的鹽。
7.由權(quán)利要求1中所述化合物和藥用載體組成的藥用組合物。
8.由權(quán)利要求2中所述化合物和藥用載體組成的藥用組合物。
9.下面結(jié)構(gòu)式所代表化合物或其藥用鹽與能增加進(jìn)入完整細(xì)胞的穿透能力的內(nèi)收物共價(jià)連接所形成的共價(jià)物，但該式化合物不包括正常的2′，5′-寡聚腺苷酸及其鹽，
其中
X是NH2或CH2;m是零，1，2，或3;n是1-8的整數(shù);每個(gè)R1可以獨(dú)立地從下緩基團(tuán)中選擇氧，硫，硫酸酯，硒，C1-C8烷基和C1-C8烷氧基;每個(gè)R2可以獨(dú)立從下組基團(tuán)中選擇氧，硫，硫酸酯，硒，C1-C8烷基，C1-C8烷氧基;每個(gè)R3可以獨(dú)立地選擇氫，羥基，氨基，和叔丁基二甲基硅烷氧基(-OSi(CH3)2-C(CH3)3)，R4和R5可以獨(dú)立地選擇氫;羥基;氨基;C1-C8烷基;C1-C8烷氧基;C1-C8烷基氨基，烷基羰基，烷基羧基和烷基鹵化物，和C1-C8烷氧基氨基，烷氧基羰基，烷氧基羧基和烷氧基鹵化物。
10.權(quán)利要求9中所述共聚物，其中內(nèi)收物是一種維生素，該維生素有對(duì)應(yīng)的細(xì)胞表面受體，從而可進(jìn)行對(duì)該維生素受體介導(dǎo)的胞飲作用。
11.權(quán)利要求10中所述共聚物，其中內(nèi)收物是維生素B12。
12.權(quán)利要求10中所述共聚物，其中內(nèi)收物是生物素。
13.權(quán)利要求10中所述共聚物，其中內(nèi)收物是葉酸。
14.權(quán)利要求10中所述共聚物，其中內(nèi)收物是親脂性基團(tuán)。
15.權(quán)利要求14中所述共聚物，其中內(nèi)收物是下面結(jié)構(gòu)式所代表的?；?br> 其中X是1-20的整數(shù)。
16.權(quán)利要求14中所述共聚物，其中內(nèi)收物由膽甾醇基組成。
17.權(quán)利要求9中所述的共聚物，其中
m是0，1，2，或3，n是1-8的整數(shù)，每個(gè)R3和R4獨(dú)立地選取氫或羥基，每個(gè)R2可獨(dú)立地選取硫或氧，R5是羥基，或者它們的可以藥用的鹽，該化合物通過(guò)它們2′末端核苷的2′-位與所說(shuō)的內(nèi)收物共價(jià)相連。
18.權(quán)利要求17中所述共聚物，其中內(nèi)收物是一種維生素。
19.權(quán)利要求18中所述共聚物，其中的維生素可選擇維生素B12，葉酸，或生物素。
20.權(quán)利要求17中所述共聚物，其中內(nèi)收物是親脂性基團(tuán)。
21.權(quán)利要求17中所述共聚物，其中內(nèi)收物是膽甾醇。
全文摘要
通過(guò)將代謝穩(wěn)定，無(wú)毒且具有雙重治療作用的2′，5′-寡聚腺苷酸(2—5A)衍生物給藥于哺乳動(dòng)物以抑制病毒感染，該化合物能激活對(duì)細(xì)胞內(nèi)潛在2—5A依賴的內(nèi)源性核糖核酸酶(RNA酶L)且還能抑制病毒DNA聚合酶。本發(fā)明還記載了用于治療轉(zhuǎn)運(yùn)的2—5A衍生物的共聚物。
文檔編號(hào)C07H21/00GK1078473SQ9310198
公開(kāi)日1993年11月17日 申請(qǐng)日期1993年3月11日 優(yōu)先權(quán)日1992年3月12日
發(fā)明者R·J·蘇哈多尼克, W·弗萊德勒 申請(qǐng)人:坦普爾大學(xué)