專利名稱：組胺衍生物用作免疫調(diào)節(jié)劑和用于免疫治療的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)的方法，更具體地說(shuō)，涉及用含有組胺衍生物的組合物調(diào)節(jié)所述免疫系統(tǒng)的方法。
隨著對(duì)哺乳動(dòng)物中免疫應(yīng)答過(guò)程理解水平的提高，人們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到一些分子在免疫調(diào)節(jié)中扮演著重要角色?？上У氖?，這些分子對(duì)其在細(xì)胞混合物中的單細(xì)胞型上的作用一般是非特異性的，人們急需有效的或細(xì)胞特異性的拮抗劑。
組胺是一種已表明在哺乳動(dòng)物的免疫應(yīng)答過(guò)程中具有重要作用的小分子。然而，它對(duì)具有組胺受體的許多細(xì)胞的廣泛作用限制了它可能的免疫治療應(yīng)用。組織特異性或作用特異性的組胺衍生物會(huì)極大地有助于確定組胺在免疫調(diào)節(jié)中的作用，并產(chǎn)生有價(jià)值的免疫治療。
組胺實(shí)際上能調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中免疫應(yīng)答模型，特別是遲發(fā)性超敏反應(yīng)和T與B細(xì)胞功能的模型。組胺是在對(duì)抗原應(yīng)答不同時(shí)期內(nèi)合成的，并能直接或間接影響對(duì)抗原的進(jìn)一步應(yīng)答。在炎癥和免疫應(yīng)答期間，組織中組胺的濃集會(huì)改變?cè)S多淋巴樣細(xì)胞的功能是可能的、盡管這些作用可能是重要的，但是對(duì)細(xì)胞混合物中單細(xì)胞型的直接作用不能測(cè)定，除非拮抗劑是有效的或細(xì)胞特異性的。拮抗劑對(duì)所有具有組胺受體細(xì)胞的廣泛作用，將限制組胺的任何免疫治療應(yīng)用。參見(jiàn)Khan等人，Clin Immunol.Rev.(1985)4∶1;Melmon等人，Am.J.Med(1981)71∶100和Roclin等人，Cell Immunol.(1978)37∶162。
組胺是一種自體有效物質(zhì)，自體有效物質(zhì)有兒茶酚胺、前列腺素和一些肽，例如緩激肽和可能的淋巴因子。自體有效物質(zhì)不同于激素之點(diǎn)在于，它們是在其作用的局部位點(diǎn)產(chǎn)生的，并且它們能在各種組織中產(chǎn)生。自體有效物質(zhì)在調(diào)節(jié)炎癥中扮演重要角色。炎癥期間，可能發(fā)生的某些情況包括蛋白質(zhì)變性、局部PH降低、釋放出“新肽”和溶酶體酶等等。這些情況產(chǎn)生一種免疫系統(tǒng)不對(duì)新產(chǎn)物過(guò)度作用的環(huán)境。然而，盡管炎癥能產(chǎn)生合適的免疫原，但是發(fā)炎過(guò)程常常不伴隨或伴隨在大量異常免疫應(yīng)答之后。自體有效物質(zhì)看來(lái)多少能調(diào)節(jié)這種應(yīng)答。
在不同免疫階段自體有效物質(zhì)影響天然的抑制基因細(xì)胞、T細(xì)胞子集和B細(xì)胞。自體有效物質(zhì)的受體并不是隨機(jī)地分布(在數(shù)量和對(duì)拮抗劑的親合力方面)在實(shí)施免疫功能的細(xì)胞上。前體B細(xì)胞未顯示出具有組胺和兒茶酚胺受體，而產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞卻具有該受體。T抑制基因(Ts)細(xì)胞調(diào)節(jié)T輔助(Th)和T溶胞(Tc)細(xì)胞對(duì)組胺的CAMP應(yīng)答。分裂素改變這些細(xì)胞對(duì)組胺的應(yīng)答性。某些應(yīng)答組胺的淋巴細(xì)胞上有H1和H2兩個(gè)受體，而其他僅有H2受體。在某些淋巴細(xì)胞中，H2受體似乎減輕對(duì)H1拮抗作用的應(yīng)答，在其他細(xì)胞中沒(méi)有這種相互作用。在某些細(xì)胞中，生物應(yīng)答是抑制的(例如減少?gòu)腂細(xì)胞中釋放抗體抑制淋巴因子釋放或靶細(xì)胞被T效應(yīng)細(xì)胞溶解和抑制從肥大細(xì)胞釋放組胺);在其它細(xì)胞中，應(yīng)答加強(qiáng)免疫功能(例如，增強(qiáng)通過(guò)天然抑制基團(tuán)的抑制和Ts細(xì)胞或T輔助(Th)細(xì)胞增殖)。自體有效物質(zhì)看來(lái)提高了免疫應(yīng)答中所選擇的早期活動(dòng)(例如加強(qiáng)抑制基因功能)，而抑制免疫的晚期表型表現(xiàn)(如淋巴因子或抗體的釋放)。
在新生的或被照射鼠的脾中自然產(chǎn)生的抑制基因細(xì)胞的出現(xiàn)可能在誘導(dǎo)免疫耐性上具有關(guān)鍵作用。參見(jiàn)Strober等人，Ann.Rev.Immunol.(1984)2∶219;Hertel-Wulff等人，J.Immunol.(1984)133∶2791;Okada等人，J.Expt.Med.(1982)156∶522和Okada等人，J.Immnuol.(1982)129∶1892。這些細(xì)胞從其表型上看與NK細(xì)胞相關(guān)但功能不同。天然抑制基因細(xì)胞在淋巴組織早期成熟期間短暫出現(xiàn)，但能在成熟后通過(guò)全淋巴照射誘導(dǎo)。該細(xì)胞具有獨(dú)特的抑制異常反應(yīng)免疫應(yīng)答的抗原特異性溶胞臂(arm)的特性，但留下完整的抗原特異性抑制臂。這樣，在天然抑制基因(NS)細(xì)胞的調(diào)節(jié)環(huán)境中的異常反應(yīng)產(chǎn)生大量抗原特異性抑制基因細(xì)胞，它們依次保持體內(nèi)耐性。這樣，天然抑制基因細(xì)胞可以在防止在同種骨髓嵌合體中的宿主對(duì)移植物和移植物對(duì)宿主病的發(fā)展方面以及在新生的或全淋巴照射(TLI)鼠中的免疫耐性上扮演重要角色。
組胺激活人Ts細(xì)胞并提高鼠NS細(xì)胞的體外抑制能力，參見(jiàn)Khan等人，J.Immunol.(1985)134∶4100和Sansoni等人，J.Clin.Invest.(1985)75∶650。用組胺預(yù)處理兩種人Ts細(xì)胞后，植物血細(xì)胞凝集素誘導(dǎo)的Th細(xì)胞增殖和美國(guó)商陸分裂素誘導(dǎo)的B細(xì)胞分化兩者都被抑制。該效應(yīng)通過(guò)H2受體間介。天然抑制基因功能的提高借助于H1受體。天然抑制基因細(xì)胞可以在長(zhǎng)期組織培養(yǎng)物中增殖和克隆，并在混合的白細(xì)胞反應(yīng)的體內(nèi)和體外兩種模型中引起非特異性抑制。
因此，在免疫調(diào)節(jié)和免疫治療中，使用具有小的或非系統(tǒng)作用的組胺衍生物的方法將是優(yōu)越的。
本發(fā)明提供了用組胺衍生物作為免疫調(diào)節(jié)劑和用于免疫治療的方法。本發(fā)明的一個(gè)具體方案提供了通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)至少抑制一部分抗原特異性抗體應(yīng)答的方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效量的含至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，與此相關(guān)，可任意地施用預(yù)定的抗原或其致免疫部分。
本發(fā)明還提供了治療個(gè)體對(duì)特定抗原過(guò)敏的方法，該方法是對(duì)個(gè)體施用治療有效量的含有至少一種組胺衍生物和可藥用載體或稀釋劑的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性。在一個(gè)變化的具體方案中，將組胺衍生物與個(gè)體可能對(duì)其敏感的預(yù)定抗原或其致免疫部分一同施用。在另一個(gè)變化的具體方案中，將組胺衍生物與具有T細(xì)胞刺激活性的肽一同施用，所述肽源于個(gè)體可能對(duì)其敏感的預(yù)定抗原(例如蛋白質(zhì)過(guò)敏原或自體抗原)。在又一個(gè)變化的具體方案中，將組胺衍生物與個(gè)體可能對(duì)其敏感的預(yù)定抗原或其致免疫部分以及源于相同預(yù)定抗原的具有T細(xì)胞刺激活性的肽同時(shí)施用。


圖1是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表示在3組6只鼠中的抗FeldIIgG抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原處理前一天(天-1)或FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上)或50mg/kg化合物1(中)或100mg/kg化合物1(下)處理過(guò)。
圖2是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表示在3組6只鼠中的IgE抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原處理前一天(天-1)和FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上)或50mg/kg化合物1(中)或100mg/kg化合物1(下)處理過(guò)。
圖3是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在2組6只鼠中的IgG抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原處理前一天(天-1)或FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上)或50mg/kg化合物1(下)處理過(guò)。
圖4是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在2組6只鼠中的IgE抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原處理前一天(天-1)或FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上)或50mg/kg化合物1(下)處理過(guò)。
圖5是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在4組6只鼠中的IgG抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原處理前一天(天-1)或FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上左)或50mg/kg化合物1(上右)或5mg/kg化合物1(下左)或0.5mg/kg化合物1(下右)處理過(guò)。
圖6是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在4組6只鼠中的IgE抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原處理前一天(天-1)或FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上左)或50mg/kg化合物1(上右)或5mg/kg化合物1(下左)或0.5mg/kg化合物1(下右)處理過(guò)。
圖7是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在2組6只預(yù)先已接觸抗原鼠中的IgG抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原2°(第二次提高抗原)處理前一天(天-1)或2°FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上)或50mg/kg化合物1(下)處理過(guò)。
圖8是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在2組6只預(yù)先已接觸抗原鼠中的IgE抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原2°處理前一天(天-1)或2°FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上)或50mg/kg化合物1(下)處理過(guò)。
圖9是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在4組6只預(yù)先已接觸抗原鼠中的IgG抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原2°處理前一天(天-1)或2°FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上左)或50mg/kg化合物1(上右)或75mg/kg化合物1(下左)或100mg/kg化合物1(下右)處理過(guò)。
圖10是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在4組6只預(yù)先已接觸抗原鼠中的IgE抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用FeldI抗原2°處理前一天(天-1)或2°FeldI抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上左)或50mg/kg化合物1(上右)或75mg/kg化合物1(下左)或100mg/kg化合物1(下右)處理過(guò)。
圖11是在附圖9中討論過(guò)的4組6只鼠中完成的總體IgG分析結(jié)果的圖示，該分析用以測(cè)定接受100mg/kg、75mg/kg或50mg/kg劑量的化合物1的鼠與鹽水對(duì)照組相比，IgG是否變化。
圖12是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在3組6只鼠中的IgG抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在用卵白蛋白抗原處理前一天(天-1)和卵白蛋白抗原處理后2天(天+2)用鹽水(PBS)(上)或50mg/kg化合物1(中)或100mg/kg化合物1(下)處理過(guò)。
圖13是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在全部6組6只鼠中的IgG抗FeldI抗體應(yīng)答，鼠在第0天用FeldI抗原處理后用10mg/kg化合物1皮下注射(上圖)或腹膜內(nèi)注射(下圖)處理過(guò)(天-4)-(天+4)天。
圖14是描繪ELISA試驗(yàn)結(jié)果的圖示，表明在與附圖13相關(guān)的實(shí)驗(yàn)中的鹽水對(duì)照組6只鼠(第7組)中的IgG抗FeldI抗體應(yīng)答，對(duì)照組在第0天用10mg/kg FeldI抗原處理過(guò)。
圖15是描繪顯示鼠IgG抗h-Mb抗體應(yīng)答的ELISA試驗(yàn)的圖示，鼠在天-1和第2天用35mg/kg化合物1或化合物3或鹽水(PBS)對(duì)照、在第0天用在弗氏完全佐劑(CFA)中的100μg h-Mb、在第21天用在弗氏不完全佐劑(IFA)中的100μgh-Mb皮下(SC)注射處理過(guò)。將鼠在第33天放血，并對(duì)血清進(jìn)行h-Mb特異性IgG分析。該圖表明了5只鼠的平均抗體結(jié)合。
圖16是描繪顯示鼠IgG抗h-Mb抗體應(yīng)答的ELISA試驗(yàn)的圖示，鼠在天-1和第2天用35mg/kg化合物1或化合物3或鹽水(PBS)對(duì)照、在第0天用在弗氏完全佐劑(CFA)中的100μg h-Mb、在第21天用在弗氏不完全佐劑(IFA)中的100μg h-Mb皮下(SC)注射處理過(guò)。將鼠在第33天放血，對(duì)血清進(jìn)行h-Mb特異性IgG2a分析。該圖表明了5只鼠的平均抗體結(jié)合。
圖17是描繪顯示鼠IgG抗h-Mb抗體應(yīng)答的ELISA試驗(yàn)的圖示，鼠在天-1和第2天用35mg/kg化合物1或化合物3或鹽水(PBS)對(duì)照、在第0天用在弗氏完全佐劑(CFA)中的100μg h-Mb、在第21天用在弗氏不完全佐劑(IFA)中的100μg h-Mb皮下(SC)注射處理過(guò)。將鼠在第33天放血，對(duì)血清進(jìn)行h-Mb特異性IgG2b分析。該圖表明了5只鼠的平均抗體結(jié)合。
圖18是描繪顯示化合物1和化合物3對(duì)h-Mb特異性T細(xì)胞增殖的作用的ELISA試驗(yàn)的圖示，在天-2和天-1給3只鼠靜脈內(nèi)注射35mg/kg化合物1或化合物3或PBS(對(duì)照)。將鼠在第0天以皮下注射100μg h-Mb/CFA引發(fā)。匯集淋巴結(jié)并在第7天收獲，該圖表明了淋巴結(jié)T細(xì)胞增殖。
圖19是描繪顯示單單化合物1、單單化合物3、或化合物1和化合物3一起對(duì)NOD鼠糖尿病發(fā)病率的影響的圖示，10只鼠在生命的90和91天以皮下注射35mg/kg單單化合物1、單單化合物3、化合物1和化合物3一起、或鹽水(PBS)處理過(guò)。糖尿病的發(fā)病率通過(guò)血清葡萄糖含量測(cè)定。
圖20是描繪顯示單單化合物1，單單化合物3、或化合物1與化合物3一起對(duì)NOD鼠糖尿病發(fā)病率的影響的圖示。10只鼠在生命的76天在每個(gè)示出的數(shù)據(jù)點(diǎn)以皮下注射35mg/kg單單化合物1、單單化合物3、化合物1和化合物3一起、或鹽水(PBS)處理過(guò)。糖尿病的發(fā)病率通過(guò)血清葡萄糖含量測(cè)定。
圖21是描繪化合物1和化合物3對(duì)鼠IgM應(yīng)答的作用的圖示，鼠在第0天和第2天用35mg/kg化合物1、化合物3或PBS(對(duì)照)、在第0天用100μg h-Mb/CFA皮下注射處理，將鼠在第7天放血，對(duì)血清進(jìn)行h-Mb特異性IgM分析。該圖表明了5只鼠的平均抗體結(jié)合。
本發(fā)明提供了通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)抑制至少一部分抗原特異性抗體應(yīng)答的方法，該方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效量的含有至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性。這里所使用的組胺衍生物包括在組胺側(cè)鏈伯胺上通過(guò)用脂族基(例如烷基、芳烷基(芳基結(jié)合到脂族鏈上))的衍生作用改性的組胺，其中的脂族鏈可以是不同長(zhǎng)度支鏈的或直鏈的，所說(shuō)組胺衍生物可以含有氧羰基(例如酮基)、非氧羰基(例如羧酰氨基(carboxamide))或雜原子。這些改性的組胺衍生物可以通過(guò)連接到載體分子(如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)或它們的衍生物)上進(jìn)一步改性。
一般來(lái)說(shuō)，組胺衍生物及其可藥用的鹽可通過(guò)組胺中伯胺的衍生作用形成，以產(chǎn)生帶有0-1個(gè)含1-3個(gè)碳的不同長(zhǎng)度的側(cè)鏈(優(yōu)選的是甲基、尤其在氨基的α位)、0-2個(gè)非氧羰基、0-4個(gè)雜原子而不是非氧羰基氧、0-1個(gè)芳基或取代芳基(優(yōu)選的取代基是在組胺連接鏈對(duì)位的甲基或三氟甲基)和0-1個(gè)共價(jià)健合的氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)或它們的衍生物。
具體來(lái)講，本發(fā)明方法中使用的組胺衍生物具有下列結(jié)構(gòu)式
其中His-NH是指帶有NH的組胺殘基，NH是側(cè)鏈氨基(2-(4′-咪唑啉基)乙氨基);
n表示鏈中亞甲基的數(shù)目，一般是0-10，更通常是2-6，優(yōu)選的是2-5;
X是羰基、亞甲基或亞烷基，即-CHR-(其中R是1-3個(gè)碳原子的烷基鏈，優(yōu)選甲基)。
Y是末端基團(tuán)，為甲基或酰胺，即-CONHZ，其中Z是氫或者優(yōu)選Z是有機(jī)基團(tuán)，從而產(chǎn)生N-取代酰胺，其中的N-取代基是烷基，優(yōu)選直鏈烷基(即(CH2)m-CH3，其中m一般是0-10，更通常是2-6，優(yōu)選2-5);Y可以是芳基或取代芳基(即phi-D)，其中phi是亞苯基，特別是對(duì)-亞苯基，D是氫、甲基或雜原子取代的甲基(優(yōu)選的是鹵代甲基、更優(yōu)選的是三氟甲基，并且D基團(tuán)在鏈的對(duì)位);或氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)或它們的衍生物。
A是生理學(xué)上可接受的抗衡離子，例如乙酸根、氯離子、硫酸根和磷酸根等，特別是氯離子。b是指附加質(zhì)子和在鹽中發(fā)現(xiàn)的抗衡離子的數(shù)目(例如，可中含的堿性胺的數(shù)目)，b一般是0-2，優(yōu)選的是1-2，不過(guò)，當(dāng)Y是氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)或它們的衍生物時(shí)，b可以大于2，以部分或完全中和由Y產(chǎn)生的附加電荷。而且當(dāng)Y是甲基時(shí)，X是羰基或者R是甲基。N不是4。
特別有益的組胺衍生物包括下式化合物
其中His-NH是指帶有NH的組胺殘基，NH是側(cè)鏈氨基;
X′是CO、CH2或CHCH3;
phi是亞苯基、特別是對(duì)亞苯基;
D是甲基或三氟甲基;
E是任何天然產(chǎn)生的(特別是基因編碼的)氨基酸殘基側(cè)鏈，即E是H(在這種情況下氨基酸是甘氨酸)或鍵合到甘氨酸α碳上的一個(gè)氨基酸側(cè)鏈(在這種情況下氨基酸是非甘氨酸的氨基酸);
G是OH、NH2或NHCH3;
帶有氮的Z′(Z′連接在氮上)是多(氨基酸);
n′是2到5的整數(shù)、通常是3到5;
n″是2到3的整數(shù);
p′是1到8的整數(shù);
更具體地說(shuō)，有益的單個(gè)組胺衍生物包括在下列結(jié)構(gòu)式中His-NH-Q(HA)b
其中A和b是如上所定義的，Q是-CO-(CH2)3-CO-NH-phi-CH3-CH2-(CH2)4-CH3-CH2-(CH2)3-CO-NH-phi-CH3-CO-(CH2)2-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)2-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)1-CO-NH-phi-CF3-CHCH3-(CH2)2-CO-NH-phi-CF3-CHCH3-(CH2)3-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)4-CO-NH-phi-CH3-(CH2)5-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)3-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)4-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)4-CO-NH-(CH2)3-CH3-CHCH3-(CH2)3-CO(BOC)0-1-N(H)1-0-Phe-Gly-NHCH3其中BOC是叔丁氧羰基保護(hù)基。
組胺衍生物可通過(guò)本領(lǐng)域公知的各種方法合成，組胺化合物合成的一般討論可見(jiàn)于US4，996，221，該專利引入本文作為參考。?；苌锟捎山M胺與合適的羧酸經(jīng)與酸酐、碳二亞胺或芳基鹵混合的方法制備。非支鏈烷基化衍生物可通過(guò)使用鹵化物或擬鹵化合物(例如，溴、氯、甲苯磺酰基等)的取代反應(yīng)來(lái)合成，或者優(yōu)選的是通過(guò)在氰基硼氫化鈉或類似試劑存在下用酐使組胺還原胺化來(lái)合成。支鏈烷基化衍生物可通過(guò)用合適的甲基酮衍生物使組胺還原胺化或通過(guò)鹵化物或擬鹵化物取代(使用有利于取代而不利于消除的條件)來(lái)制備。盡管這些是可能的合成路線，但本領(lǐng)域公知的其它方法也將用于產(chǎn)生本發(fā)明的化合物。
組胺衍生物可通過(guò)常規(guī)的純化技術(shù)(例如結(jié)晶)、或通過(guò)色譜技術(shù)(如柱色譜、高效液相色譜、制備薄層色譜)等進(jìn)行純化。
應(yīng)該理解本發(fā)明包括組胺衍生物，其中組胺通過(guò)一個(gè)連接基團(tuán)連接到多(氨基酸)分子的氨基酸上，從而定義為軛合物。組胺衍生物可以連接到載體例如多肽、蛋白質(zhì)、糖蛋白或其衍生物(均包括在多(氨基酸)名稱里)上。
軛合物可以提供各種功能，改變組胺衍生物的生理特性、用作免疫原、提供細(xì)胞特異性結(jié)合等。依據(jù)軛合物的目的可通過(guò)加入另外的定能度、取代基等使組胺衍生物的性質(zhì)改性至更低或更高的程度。特別是對(duì)于從免疫原產(chǎn)生抗體，一種基團(tuán)可以被另一種基團(tuán)取代，例如用羰基取代甲基或三氟甲基。就免疫原來(lái)說(shuō)，也可以期望在組胺或介于組胺衍生物末端之間進(jìn)行取代。
軛合物可通過(guò)各種不同的官能度鍵合形成酰胺、亞甲基胺、硫醚、二硫化物、磺酰胺、偶氮、脒等。特定官能度的選擇將取決于軛合物的目的、合成的容易程度、連接官能度的穩(wěn)定性、連接基對(duì)物理、化學(xué)等的影響。
對(duì)大部分來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的軛合物具有下式
其中所有符號(hào)已在前面定義，只是氫、甲基或三氟甲基可以被W代替，W是對(duì)T的一個(gè)鍵或連接基團(tuán)，其中T是一個(gè)氨基酸衍生物或多(氨基酸)，d是每個(gè)T中組胺衍生物的數(shù)目，一般平均范圍是1-50，更通常是1-20，最常見(jiàn)的是1-10;
W是一個(gè)鍵或至少一個(gè)非氫原子連接基團(tuán)。它可以是亞甲基(例如通過(guò)高碘酸裂解的糖或其它酐的還原胺化)、非氧羰基、硫、亞烷基非氧羰基亞烷基、亞烷基硫、亞烷基非氧羰基、芳基偶氮等。特別的連接基團(tuán)并不關(guān)鍵，除非這里指明T是氨基酸或含約2-2000、通常約2-1000個(gè)氨基酸殘基的多(氨基酸)，它還可以包括糖或類脂類，并且可以是抗體形成的載體(例如牛血清清蛋白、鑰孔 血藍(lán)素、β-球蛋白等)。至少約100個(gè)氨基酸或?qū)τ谔禺愋越Y(jié)合位點(diǎn)的通常的多(氨基酸)可以是激素、淋巴因子或生長(zhǎng)因子等。
連接基團(tuán)可提供鍵，它在生理?xiàng)l件下能阻止或易于水解。
選擇鍵合到組胺衍生物和載體上的官能度使得彼此互補(bǔ)，從而在兩者之間形成合適的化學(xué)鍵。這樣，如果載體含有胺功能基(例如賴氨酸或?qū)Π被奖彼醾?cè)鏈)，則組胺衍生物的官能度可以是羧酸、磺酸等。
每一載體上組胺衍生物的數(shù)目可以是1個(gè)或者是大于1的任何數(shù)目，每個(gè)載體分子的組胺衍生物的數(shù)目取決于載體上合適官能基的數(shù)目以及在偶合反應(yīng)中的化學(xué)計(jì)量。
合成路線是本領(lǐng)域公知的。一種方法包括制備合適的組胺衍生物，其中延伸的胺側(cè)鏈或組胺上其它位點(diǎn)具有一合適的官能基。然后將一種或多種官能基化的組胺衍生物依次偶合到載體的合適側(cè)鏈上。另一種合成方法可以包括通過(guò)將含有另外可與組胺反應(yīng)的官能基的衍生基團(tuán)部分直接偶合到載體側(cè)鏈上使載體初步改性。然后將所得載體衍生物直接偶合到組胺上。例如，通過(guò)還原胺化反應(yīng)產(chǎn)生軛合物。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)上述組胺衍生物在通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)抑制至少一部分抗原特異性抗體應(yīng)答的方法上是有用的。具體地說(shuō)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)施用有效量的至少一種組胺衍生物(該組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合特異性)可以抑制IgG和/或IgE抗體產(chǎn)生。它表明IgM抗體的產(chǎn)生沒(méi)有被抑制。該抑制作用取決于組胺衍生物的劑量，它可以持續(xù)幾個(gè)月，該作用可通過(guò)重復(fù)施用組胺衍生物被延長(zhǎng)，以及，該作用可以使已經(jīng)建立的抗原應(yīng)答逆轉(zhuǎn)。施用本發(fā)明的至少一種組胺衍生物導(dǎo)致通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)抑制抗原特異性抗體應(yīng)答，至少約30%抑制IgE抗體產(chǎn)生和/或至少約60%抑制IgG抗體產(chǎn)生，更優(yōu)選最多約100%抑制IgG抗體產(chǎn)生。優(yōu)選的是，IgE抗體的產(chǎn)生和IgG抗體的產(chǎn)生都被基本抑制(例如IgE的產(chǎn)生至少約30%被抑制并且IgG的產(chǎn)生至少約60%被抑制)。
按本領(lǐng)域公知的方法給哺動(dòng)物施用含有至少一種組胺衍生物的組合物的方式可以有多種變化。優(yōu)選的是將組合物與生理上適宜的或可藥用載體同時(shí)給藥。載體可以是本領(lǐng)域公知的任何生理上可接受的緩沖液，并且包括但不限于磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)。合適的給藥方法包括但不限于，口服給藥、非腸道給藥或通過(guò)注射給藥等。優(yōu)選的施用途徑是皮下注射。含有至少一種組胺衍生物的組合物的藥物有效濃度和劑量是廣泛變化的，這取決于目的、宿主和所采用的特定衍生物。濃度可以在低于10-1M，較好是低于或等于10-3M范圍內(nèi)變化。這類組合物合適的單藥物有效劑量范圍是從約0.5mg/kg體重到約100mg/kg。優(yōu)選的范圍是從約1mg/kg到50mg/kg，優(yōu)選約1-20mg/kg，更優(yōu)選約1-10mg/kg。合適的藥理學(xué)上的有效日總劑量范圍從約1mg/kg到100mg/kg。
本發(fā)明也提供了通過(guò)對(duì)預(yù)定抗原敏感的哺乳動(dòng)物(即該哺乳動(dòng)物已對(duì)預(yù)定抗原產(chǎn)生抗體)的免疫系統(tǒng)抑制至少一部分對(duì)預(yù)定抗原(例如，蛋白質(zhì)過(guò)敏原或自體抗原)的抗原特異性抗體應(yīng)答的方法。按照這一具體方案，給對(duì)預(yù)定抗原或其致免疫部分(即能引起免疫應(yīng)答的抗原的一部分)敏感的哺乳動(dòng)物施用有效量的含至少一種組胺衍生物的組合物。施用至少一種組胺衍生物導(dǎo)致通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)至少部分抑制對(duì)所述預(yù)定抗原的抗體的進(jìn)一步產(chǎn)生。
在上述具體方案的一種變化情況中，將預(yù)定抗原或其致免疫部分與本發(fā)明的組胺衍生物同時(shí)施用于對(duì)預(yù)定抗原或其致免疫部分敏感的哺乳動(dòng)物，以專門抑制對(duì)預(yù)定抗原或其致免疫部分的特異性抗體應(yīng)答(即至少部分抑制了對(duì)預(yù)定抗原或其致免疫部分有特異反應(yīng)活性的抗體的進(jìn)一步產(chǎn)生)。預(yù)定抗原或致免疫部分可與含有至少一種組胺衍生物的組合物同時(shí)或相繼施用于哺乳動(dòng)物。這里所使用的抗原包括但不限于蛋白質(zhì)過(guò)敏原、自體抗原或至少一種能引起免疫應(yīng)答的兩種抗原中任一抗原的致免疫部分。
本發(fā)明的另一個(gè)具體方案提供了治療對(duì)抗原(例如蛋白質(zhì)過(guò)敏原或自體抗原)過(guò)敏的方法。按照該方法，將具有T細(xì)胞刺激活性和源于蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其他抗原的肽與本發(fā)明的組胺衍生物同時(shí)或相繼施用于對(duì)蛋白質(zhì)過(guò)敏原或自體抗原(肽源于這些抗原)過(guò)敏的個(gè)體。T細(xì)胞刺激活性在這里被定義為誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖、淋巴因子分泌和/或T細(xì)胞無(wú)反應(yīng)性/耐受性(tolerization)。這種T細(xì)胞刺激活性可以通過(guò)用一種源于蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其他抗原的肽對(duì)源于對(duì)蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其他抗原過(guò)敏的個(gè)體的T細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并測(cè)定在對(duì)肽的應(yīng)答中T細(xì)胞增殖的存在。
在治療對(duì)蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其他抗原過(guò)敏的方法中有用的肽具有T細(xì)胞刺激活性，特別是具有人T細(xì)胞刺激活性，因此它包括至少一種蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其他蛋白質(zhì)抗原的T細(xì)胞表位。優(yōu)選的肽含有至少兩種T細(xì)胞表位(例如該肽含有至少約8個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選至少15個(gè)氨基酸殘基)。源于蛋白質(zhì)過(guò)敏原的肽尤其不結(jié)合免疫球蛋白E(IgE)或者結(jié)合IgE的程度明顯低于蛋白質(zhì)過(guò)敏原(肽源于它)結(jié)合IgE的程度。
T細(xì)胞表位被相信涉及起動(dòng)和延長(zhǎng)對(duì)蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其它蛋白質(zhì)抗原(它們分別引起無(wú)反應(yīng)性臨床癥狀和其他疾病)的免疫應(yīng)答。這些T細(xì)胞表位被認(rèn)為通過(guò)結(jié)合到一種代表細(xì)胞的抗原表面的合適HLA分子上，在T輔助細(xì)胞水平觸發(fā)早期活動(dòng)并刺激相關(guān)的T細(xì)胞亞群。這些活動(dòng)引起T細(xì)胞增殖、淋巴因子分泌、局部炎癥反應(yīng)，補(bǔ)充額外的免疫細(xì)胞至該部位以及活化引起抗體產(chǎn)生的B細(xì)胞鏈鎖。這些抗體的一種同型，即IgE對(duì)無(wú)反應(yīng)性癥狀的發(fā)展是至關(guān)重要的，并且在T輔助細(xì)胞水平上，在活動(dòng)的鏈鎖早期它的產(chǎn)生受到淋巴因子性質(zhì)的影響。一種T細(xì)胞表位是能被T細(xì)胞受體識(shí)別的基本元素或最小單位，該表位包括對(duì)受體識(shí)別所必需的氨基酸，并且在蛋白質(zhì)的氨基酸序列中可以是鄰近的和/或非鄰近的。模擬T細(xì)胞表位和改變對(duì)蛋白質(zhì)過(guò)敏原無(wú)反應(yīng)性應(yīng)答的氨基酸序列包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
這些肽的使用可能tolerize或anergize適宜的T細(xì)胞亞群，這樣它們變成對(duì)蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其它抗原無(wú)應(yīng)答性而且不參與刺激對(duì)這種暴露的免疫應(yīng)答。此外，與暴露于天然產(chǎn)生的蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其部分相比，使用含有至少一種蛋白質(zhì)過(guò)敏原的T細(xì)胞表位的肽可以改變淋巴因子分泌情況(例如，導(dǎo)致IL-4減少和/或IL-2增加)。而且，暴露于肽中可以影響T細(xì)胞亞群(T細(xì)胞亞群通常參與對(duì)過(guò)敏原的應(yīng)答)，以使這些T細(xì)胞從通常對(duì)過(guò)敏原暴露的位點(diǎn)(例如鼻粘膜、皮膚和肺)移向肽的治療給藥位點(diǎn)。這種T細(xì)胞亞群的再分配可以改善或降低個(gè)體免疫系統(tǒng)的能力，以刺激在通常對(duì)過(guò)敏原暴露的位點(diǎn)正常的免疫應(yīng)答，引起過(guò)敏性癥狀的減輕。延長(zhǎng)因施用組胺衍生物所產(chǎn)生的免疫調(diào)節(jié)作用所引起的效果。
當(dāng)肽源于蛋白原過(guò)敏原時(shí)，它們可以含有至少一種(優(yōu)選至少兩種)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的T細(xì)胞表位，例如選自下列一組的蛋白質(zhì)過(guò)敏原Dermatophagoides蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Felis蛋白質(zhì)過(guò)敏原、豕草屬(Ambrosia)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Lolium蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Crypotomeria蛋白質(zhì)過(guò)敏原、鏈格孢屬(Alternaria)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Alder蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Betula蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Ouercus蛋白質(zhì)過(guò)敏原、齊墩果屬(Olea)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Artemisia蛋白質(zhì)過(guò)敏原、車前屬(Plantago)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Parietaria蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Canine蛋白質(zhì)過(guò)敏原、蠊屬(Blattella)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Apis蛋白質(zhì)過(guò)敏原、大蠊屬(Periplaneta)蛋白質(zhì)過(guò)敏原。優(yōu)選的肽源于下列蛋白質(zhì)過(guò)敏原Der pⅠ、Der pⅡ、Der fⅠ、Der fⅡ、Amb aⅠ.1、Amb aⅠ.2、Amb aⅠ.3、Amb aⅠ.4、Amb aⅡ、Lol pⅠ、Lol pⅨ、Cry jⅠ、Cry jⅡ、和Fel dⅠ。
本發(fā)明的方法中有用的肽可以從蛋白質(zhì)抗原(而不是蛋白質(zhì)過(guò)敏原)產(chǎn)生，而提高或降低抗原特異性免疫應(yīng)答是合乎需要的。例如，具有已知自體抗原(該抗原涉及自體免疫病的發(fā)病機(jī)理)的人T細(xì)胞刺激活性的肽或含有至少一種已知自體抗原的T細(xì)胞表位的肽能被用于減少對(duì)自體抗原的抗體應(yīng)答，以干擾效能和/或降低與副作用相關(guān)的免疫復(fù)合。
為了保留自體抗原的T細(xì)胞反應(yīng)性，源于自體抗原的具有人T細(xì)胞刺激活性的肽可以用標(biāo)準(zhǔn)T細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)確定，或者如果需要，準(zhǔn)確的T細(xì)胞表位可通過(guò)精細(xì)定位圖技術(shù)和所產(chǎn)生的含有至少一個(gè)T細(xì)胞表位的肽確定。選擇刺激T細(xì)胞并且不具備自體抗原不期望性質(zhì)(例如在對(duì)自體抗原敏感的絕大多數(shù)個(gè)體中不結(jié)合自體抗體)的肽用于免疫治療方法中。本發(fā)明方法中有用的自體抗原包括糖尿病中的胰島素、谷氨酸脫羧酶(64K)、PM-1和羧肽酶;多發(fā)性硬化中的myclin基本蛋白;胎兒成紅細(xì)胞增多病中的rh因子;重癥肌無(wú)力中的乙酰膽堿受體;格雷夫斯病中的甲狀腺劑受體;古德帕斯徹綜合征中的基本膜蛋白;甲狀腺炎中的甲狀腺蛋白。
本發(fā)明也提供了一種治療個(gè)體對(duì)抗原(例如蛋白質(zhì)過(guò)敏原或自體抗原)過(guò)敏的方法，該方法是通過(guò)給對(duì)抗原過(guò)敏的個(gè)體施用治療有效量的含有一種組胺衍生物和可藥用載體或稀釋劑的治療組合物完成的。按照本發(fā)明，對(duì)個(gè)體施用這種治療組合物導(dǎo)致在用藥后多達(dá)150天抑制至少一部分抗原特異性抗體應(yīng)答。這種組合物一年至少給個(gè)體施用一次，優(yōu)選的是一年施用多達(dá)四次。
可任意地將抗原或其致免疫部分相繼或同時(shí)對(duì)個(gè)體施用，以專門抑制個(gè)體對(duì)抗原或其致免疫部分的抗原特異性免疫應(yīng)答。另外，可以將具有T細(xì)胞刺激活性和源于抗原的肽對(duì)個(gè)體施用，以使該個(gè)體對(duì)該抗原脫敏，較好的是肽包括至少一種該抗原的T細(xì)胞表位。將這樣的肽以有效降低個(gè)體對(duì)過(guò)敏原或其他抗原過(guò)敏的劑量和時(shí)間長(zhǎng)度施用于對(duì)過(guò)敏原或其他蛋白質(zhì)抗原(該肽源于它們)敏感的個(gè)體。
具有T細(xì)胞刺激活性的肽可以以治療組合物的形式施用，該組合物包括生理學(xué)可接受的賦形劑。例如，所說(shuō)肽可與適宜的稀釋劑、載體和/或合適的佐劑一起使用?？伤幱玫南♂寗┌}水和含水緩沖液?？伤幱玫妮d體包括聚乙二醇(Wei等人，International Archives of Allergy and Applied Immunology 64∶84-99(1981))和脂質(zhì)體(Strejan等人，Journal of Neuroimmunology 7∶27(1984))?？伤幱玫淖魟┌鞯\。這種組合物一般通過(guò)注射給藥、口服給藥(如以膠囊形式)、吸入法給藥、透皮施用或直腸給藥。
本發(fā)明由下列非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明實(shí)施例1Fel d I的單克隆親合純化從幾個(gè)多貓家庭收集房間灰塵樣品，用來(lái)分離和純化Fel d I。將單克隆抗體1G9或6F9按現(xiàn)有方案(Chapman，M.D.，等人，J.Immunology，140(3)∶812-818(1988))偶合到瓊脂糖4B上用來(lái)純化。通過(guò)將純化的Fel d I蛋白質(zhì)裝到含4N NaCl的，Phenyl-Sepharose柱(Pharmacia)上并用2M和1M NaCl洗脫的方法脫色。通過(guò)將2N和1M鹽洗脫液在蒸餾水中透析并凍干的方法回收已脫色的Fel d I蛋白質(zhì)。另一種脫色方法是在親合純化之前將房屋灰塵提取物過(guò)Sephacryl 200柱(Pharmacia)。
親合純化的Fel d I的明礬沉淀在50ml錐形管中加入10ml 10%硫酸鋁鉀(Banco，F(xiàn)ortWorth，TX)。邊攪拌邊滴加22.8ml 0.25N NaOH。室溫培養(yǎng)10分鐘。在1000g離心10分鐘。移出并棄去上清液。加50ml蒸餾水至沉淀物上并重新懸浮Al(OH)3。在1000g離心10分鐘。1mgAl(OH)3將結(jié)合約50-200μg Fel d I蛋白質(zhì)。將200μg/ml Fel d I蛋白質(zhì)與1ml Al(OH)3結(jié)合。因此，稀釋于5ml磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中的1mg Fel d I蛋白質(zhì)與5ml Al(OH)3結(jié)合。室溫培養(yǎng)30分鐘。樣品分裝到eppendorf管中并在eppifuge(15，000rpm)中旋轉(zhuǎn)10分鐘。將上清液倒入管中，以檢驗(yàn)抗原的出現(xiàn)，從而確證它被結(jié)合。將沉物在所需體積的PBS中重新懸浮以便給鼠注射(參見(jiàn)AntibodiesA Laboratory Manual(1988)，Ed Harlow和Dave Lane著，P99)。
抗-Fel d I IgG Elisa用在PBS中的1μg/ml Fel d I以50μl/孔涂覆Costar EIA板(＃3590)，在4℃過(guò)夜，用1x PBS洗滌板(重復(fù)3次)。室溫下用在PBS-Tween(PBS-T)中的1% BSA(基本上無(wú)球蛋白)以100μl/孔阻滯1小時(shí)。在室溫以100μl/孔加入稀釋于(PBS-T)中的試驗(yàn)血清1小時(shí)。用1x PBS洗板3次。在室溫以100μl/孔加入在PBS-T中稀釋1/5000的山羊抗鼠IgG 1小時(shí)。用1x PBS洗板3次。在室溫以100μl/孔加入在PBS-T中稀釋1/10，000的抗生蛋白鏈菌素-HRP 30分鐘。用1x PBS-T洗板3次。用KPL的TMB底物展開(kāi)。用1M磷酸中止反應(yīng)。用Elisa閱讀器在OD 450nm閱讀。
抗-Fel d I IgE Elisa用在PBS中的10mg/ml Fel d I以50μl/孔涂覆Cornig Elisa板，在4℃過(guò)夜。用1x PBS洗板3次，在37℃用在PBS中的0.05%明膠以100μl/孔阻滯板1小時(shí)。用PBS-T洗板3次。加入100μl用PBS-T稀釋的試驗(yàn)血清，在37℃培養(yǎng)1小時(shí)。用PBS-T洗滌3次。向每孔中加入100μl用PBS-T稀釋1/2000的Biotin標(biāo)記的Em95，在室溫培養(yǎng)1小時(shí)，用PBS-T洗滌3次。向每孔中加入100μl用PBS-T稀釋1/5000的生物素(Biotin)標(biāo)記的山羊抗鼠IgE(H&L)，在室溫培養(yǎng)1小時(shí)，用PBS-T洗滌3次。向每孔中加入100μl用PBS-T稀釋1/10，000的抗生蛋白鏈菌素-HRP，在室溫培養(yǎng)半小時(shí)，用PBS-T洗滌3次。用KLP的TMP過(guò)氧化物酶底物展開(kāi)。用1M磷酸中止反應(yīng)。用Elisa閱讀器在OD 450nm閱讀。
引發(fā)試驗(yàn)＃34本實(shí)驗(yàn)分析了兩種不同劑量的具有下式的組胺衍生物在對(duì)Fel d I體內(nèi)免疫應(yīng)答上的作用
我們選擇Balb/c鼠(平均重25g)進(jìn)行這一實(shí)驗(yàn)是由于該鼠對(duì)Fel d I具有良好的IgG應(yīng)答。在用抗原處理前一天(天-1)和抗原處理后2天(天+2)給各組鼠腹膜內(nèi)注射化合物1治療兩次?；衔?的劑量為100mg/kg或50mg/kg，或者是在100μl PBS中的鹽水對(duì)照。在第0天，給三組鼠腹膜內(nèi)注射10μg Fel d I明礬(如上所述獲得的)。
這三組鼠的引發(fā)和放血時(shí)間表如下在如上所述的第1次免疫后21天將鼠放血用于1°應(yīng)答。鼠被強(qiáng)化，14天后將鼠放血用于2°應(yīng)答，再過(guò)14天后再放血(不介入抗原注射)用于2°B應(yīng)答。這種強(qiáng)化方案(即，2°，2°B，3°，3°B)重復(fù)下去直到將鼠放血用于5°B。每一次將鼠強(qiáng)化，它們接受天-1和天+2劑量的化合物1，并且在第0天給其注射10μg Fel d I明礬。所有血清如在Elisa中所述用于試驗(yàn)對(duì)Fel d I的IgG和IgE抗體應(yīng)答。
在天-1和天+2接受100mg/kg化合物1的鼠可見(jiàn)某些毒性。那個(gè)組中的6只鼠有2只死亡。
如圖1和2所示，用100mg/kg化合物1免疫的鼠與鹽水對(duì)照組鼠(有明顯的對(duì)Fel d的IgG應(yīng)答和中等的IgE應(yīng)答)相比沒(méi)有對(duì)Fel d I的IgG或IgE應(yīng)答。接受50mg/kg化合物1的鼠與鹽水對(duì)照鼠相比具有較低的IgG和IgE應(yīng)答。
表1第1組 6只鼠 第0天, 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 50mg/kg 化合物 1第2組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 100mg/kg 化合物 1第3組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 PBS對(duì)照實(shí)施例2引發(fā)＃37引發(fā)＃34的結(jié)果表明鼠中Fel d I特異性抗體的減少是由于在每一次用抗原強(qiáng)化中使用化合物1處理造成的。本實(shí)驗(yàn)中，在用抗原開(kāi)始注射時(shí)施用單劑量化合物1。鼠組僅在第一次引發(fā)中在抗原免疫前一天和抗原免疫后兩天給各組鼠施用在100μl PBS中的50mg/kg化合物1或鹽水。免疫和放血時(shí)間表與引發(fā)＃34相同，然而在后續(xù)強(qiáng)化中不給藥物，僅在第0天施用10μg Fel d I明礬。
如圖3所示，在1°用50mg/kg化合物1免疫的鼠與鹽水對(duì)照組相比具有良好的對(duì)Fel d I的IgG應(yīng)答。在化合物1處理組中顯示出對(duì)Fel d I應(yīng)答的延遲作用。IgE特異性Fel d I應(yīng)答在兩個(gè)組之間未表現(xiàn)出明顯的不同(圖4)表2第1組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 PBS 對(duì)照,僅在1°第2組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬僅天-1和天+2 50 mg/kg 化合物1,在1°實(shí)施例3引發(fā)＃38本實(shí)施例中給3組鼠施用較小劑量的化合物1。在用抗原處理前一天(天-1)和抗原處理后兩天(天+2)對(duì)各組鼠腹膜內(nèi)注射化合物1治療兩次?；衔?的劑量為50mg/kg、5mg/kg、0.5mg/kg(在100μl PBS中)或者一種鹽水對(duì)照。在第0天，給四組鼠腹膜內(nèi)注射10μg Fel d I明礬，免疫和放血時(shí)間表如引發(fā)34中所述。
圖5表明，對(duì)鼠施用50mg/kg化合物1與鹽水對(duì)照相比降低了IgG特異性Fel d I應(yīng)答。接受5mg/kg或0.5mg/kg化合物1的各組與鹽水對(duì)照相比IgG特異性Fel d I應(yīng)答沒(méi)有明顯不同。如圖6所示，在所有組中均呈現(xiàn)對(duì)Fel d I的低IgE應(yīng)答。
表3第1組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 PBS 對(duì)照第2組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 50 mg/kg 化合物 1第3組 6只鼠 第0天 10μg 明礬天-1和天+2 5 mg/kg 化合物 1第4組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 0.5 mg/kg 化合物 1實(shí)施例4引發(fā)＃40為抑制各組已接觸抗原鼠的Fel d I應(yīng)答，兩組鼠用10μg Fel d I明礬預(yù)引發(fā)，并在免疫后21天放血。在下一次強(qiáng)化(2°)中，在抗原免疫前一天(天-1)和抗原免疫后兩天(天+2)給兩組鼠腹膜內(nèi)注射50mg/kg化合物1或鹽水。在第0天腹膜內(nèi)注射10μg Fel d I明礬進(jìn)行抗原免疫。兩周后將鼠放血，兩周后(沒(méi)有強(qiáng)化)再放一次血。將兩組鼠如引發(fā)＃34中所述在每一預(yù)定免疫中僅以10μg Fel d I明礬強(qiáng)化。
圖7和8說(shuō)明僅在2°強(qiáng)化中接受藥物的鼠較在2°中僅接受鹽水的鼠具有低得多的IgG和IgE特異性Fel d I應(yīng)答。這說(shuō)明在給鼠施用一劑量化合物1之前，鼠并沒(méi)有高的對(duì)Fel d I的應(yīng)答。這樣，就不清楚Fel d I特異性應(yīng)答是否減小或者IgG Fel d I應(yīng)答是否減少和延遲，正如引發(fā)＃37所示。
表4第1組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 PBS 對(duì)照,僅在2°第2組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬僅天-1和天+2 50mg/kg化合物1,在2°中實(shí)施例5引發(fā)＃41用另一組接受75mg/kg的鼠重復(fù)引發(fā)＃34。這樣，鼠組在抗原處理前一天(天-1)和抗原處理后2天(天+2)給各組鼠腹膜內(nèi)注射化合物1處理兩次?；衔?的劑量為100mg/kg、75mg/kg、50mg/kg(在100μl PBS中)或鹽水對(duì)照。在第0天，給四組鼠腹膜內(nèi)注射10μg Fel d I明礬。這四組鼠的引發(fā)和放血時(shí)間表按引發(fā)＃34中所述。
如圖9和10所示，用100mg/kg化合物1免疫的鼠與鹽水對(duì)照鼠(具有良好的對(duì)Fel d I IgG應(yīng)答和中等的IgE應(yīng)答)相比沒(méi)有對(duì)Fel d I的IgG或IgE應(yīng)答。接受75mg/kg和50mg/kg化合物1的鼠與鹽水對(duì)照鼠相比具有對(duì)Fel d I的低IgG應(yīng)答。
進(jìn)行總體IgG試驗(yàn)(圖11)以確定是否藥物治療組與鹽水對(duì)照組相比具有不同量的IgG。在早期放血中接受100mg/kg、75mg/kg和50mg/kg的鼠與鹽水對(duì)照組相比總體IgG無(wú)變化。Fel d I具有能引起免疫球蛋白含量增加的促有絲分裂污染物。促有絲分裂作用表明被該組胺類似物降低。
表6第1組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 100 mg/kg 化合物 1第2組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 75 mg/kg 化合物 1第3組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 50 mg/kg 化合物 1第4組 6只鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬天-1和天+2 PBS 對(duì)照實(shí)施例7引發(fā)＃42除卵白蛋白用作抗原外，引發(fā)和放血程序如引發(fā)＃34中所述進(jìn)行。在抗原處理前一天(天-1)和抗原處理后2天(天+2)給各組鼠腹膜內(nèi)注射化合物1處理兩次?；衔?的劑量為100mg/kg、50mg/kg(在100μl PBS中)或鹽水對(duì)照。在第0天，給三組鼠腹膜內(nèi)注射50μg卵白蛋白。
如圖12所示，用100mg/kg化合物1免疫的鼠與鹽水對(duì)照鼠(具有良好的對(duì)卵白蛋白的IgG應(yīng)答)相比具有對(duì)卵白蛋白低的IgG應(yīng)答。接受50mg/kg化合物1的鼠表現(xiàn)出具有與鹽水對(duì)照組相似的對(duì)卵白蛋白的IgG應(yīng)答，說(shuō)明未減少抗體應(yīng)答。在所有三組中顯示出相似的對(duì)卵白蛋白的IgE應(yīng)答(圖12)。
表7第1組 6只鼠 第0天 50μg 卵白蛋白 明礬天-1和天+2 100 mg/kg 化合物 1第2組 6只鼠 第0天 50μg 卵白蛋白 明礬天-1和天+2 50 mg/kg 化合物 1第3組 6只鼠 第0天 50μg 卵白蛋白 明礬天-1和天+2 PBS 對(duì)照實(shí)施例8引發(fā)＃45下列實(shí)驗(yàn)比較了化合物1腹膜內(nèi)(i.p.)和皮下(S.C.)施用在應(yīng)答方面是否不同。在3-9天(而不是僅僅2天)也施用幾個(gè)小劑量的化合物1。下列是各組鼠和它們的免疫時(shí)間表。
表8第1組 6只Balb/c鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬 i.p.
天-1,0,+1 30mg/kg組胺類似物i.p.
(共90mg/kg)第2組 6只Balb/c鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬 i.p.
天-4,-3,-2,-1 10mg/kg化合物1 i.p.
0,+1,+2,+3,+4 (共90mg/kg)第3組 6只Balb/c鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬 i.p.
天-2,-1,0,+1,+2 10mg/kg化合物1 S.C.
(共50mg/kg)第4組 6只Balb/c鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬 i.p.
天-1,0,+1 10mg/kg化合物1 S.C.
(共90mg/kg)第5組 6只Balb/c鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬 i.p.
天-4,-3,-2,-1 10mg/kg化合物1 S.C.
0,+1,+2,+3,+4 (共90mg/kg)第6組 6只Balb/c鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬 i.p.
天-2,-1,0,+1,+2 10mg/kg化合物1 S.C.
(共50mg/kg)第7組 6只Balb/c鼠 第0天 10μg Fel d I 明礬 i.p.
圖13和14表明皮下(S.C.)施用10mg/kg化合物1九天(共90mg/kg)與鹽水對(duì)照和腹膜(i.p.)施用10mg/kg化合物1九天相比表現(xiàn)出對(duì)Fel d I抗體應(yīng)答降低。
實(shí)施例9使用不同劑量的化合物1和采用不同的途徑施用化合物1進(jìn)行多種不同的引發(fā)。在研究中我們發(fā)現(xiàn)化合物1在高劑量時(shí)有一些毒性。在接受200mg/kg(i.p.)總劑量的6/18鼠(33%)中觀察到毒性。在接受90mg/kg(i.p.)總劑量(0mg/kg i.p.，連續(xù)9天)的2/6鼠(33%)中也觀察到毒性。在更低的水平上顯示出，腹膜內(nèi)(i.p.)施用100mg/kg的總劑量仍有2/36(5.5%)鼠死亡。接受總劑量50mg/kg(10mg/kg，連續(xù)5天)(i.p.)的1/6(16.7%)鼠也死亡。皮下(S.C.)施用化合物1的鼠未見(jiàn)死亡。因此，盡管任何其他降低毒性的給藥途徑也是優(yōu)選的，但是皮下施用組胺衍生物和可藥用載體顯然是優(yōu)選的施用途徑。
表9化合物1 時(shí)間 總劑量 給藥途徑 毒性的劑量鼠#死亡鼠/總數(shù)100mg/kg 天-1和天+2 200mg/kg i.p. 6/18100mg/kg 第0天 100mg/kg i.p. 0/675mg/kg 天-1和天+2 150mg/kg i.p. 0/1850mg/kg 天-1和天+2 100mg/kg i.p. 2/3650mg/kg 第0天 50mg/kg i.p. 0/630mg/kg 天-1,0,+1 90mg/kg S.C. 0/630mg/kg 天-1,0,+1 90mg/kg i.p. 0/610mg/kg 天-4--1,0, 90mg/kg S.C. 0/6+1-+4
10mg/kg 天-4--1,0, 90mg/kg i.p. 2/6+1-+410mg/kg 天-2,-1,0, 50mg/kg S.C. 0/6+1,+210mg/kg 天-2,-1,0, 50mg/kg i.p. 1/6+1,+25mg/kg 天-1和天+2 10mg/kg i.p. 0/60.5mg/kg 天-1和天+2 1mg/kg i.p. 0/6實(shí)施例10Fel d I的單克隆親合純化按Chapman等人所述從房屋灰塵提取物中純化天然Fel d I蛋白質(zhì)。簡(jiǎn)言之，將房屋灰塵(得自多貓家中所用的真空容器)用PBS提取，然后冷凍干燥，重新溶于水中。將該提取物加到與抗Fel d I單克隆抗體(雜交瘤6F 9和1G 4均由M，Chapman提供)偶合的柱上。用100mM甘氧酸(PH2.5)從柱子上洗脫Fel d I并進(jìn)行中和。
特異性結(jié)合ELISA.
為了進(jìn)行IgG試驗(yàn)，通過(guò)將50μl/孔的在PBS中的2μg/ml Fel dI在4℃培養(yǎng)過(guò)夜，將Fel dI涂覆在Immulon 2(Dynatech，Chantilly，VA)96孔板上。將孔用在PBS中的0.5%明膠培養(yǎng)一小時(shí)。用PBS-T(1x PBS+0.05%吐溫20)將板洗滌三次。血清用PBS-T稀釋。在室溫培養(yǎng)1小時(shí)并用PBS-T洗滌后，通過(guò)用生物素化的(biotinylated)山羊抗鼠IgG(Southern Biotechnology Associates，Birmingham，AL)培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)合的鼠抗體。將結(jié)合到辣根過(guò)氧化酶(Southern Biotechnology Associates)上的抗生蛋白鏈菌素加入，以檢測(cè)結(jié)合生物素化的抗體-絡(luò)合物的抗原。TMB過(guò)氧化酶底物(Dirkegaard and Perry，Gaithersburg，MD)是按照所提供的說(shuō)明使用的，而所得O.D.(450nm)值是使用ELISA閱讀機(jī)(Bio-Tek model ＃310，Winooski，VT)測(cè)定的。血清滴度是通過(guò)25%陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行測(cè)定的。
H-Mb ELISA是使用同型特異性多克隆試劑同樣實(shí)施。同樣檢測(cè)結(jié)合IgE的抗原，但使用生物素化的EM 95-1，一種對(duì)小鼠IgE具有特異性的鼠單克隆抗體。在IgE ELISA中使用生物素化的山羊抗鼠IgG(Dirkegaard and Perry)作為增加的信號(hào)放大步驟。
增殖測(cè)定的培養(yǎng)條件抗原激發(fā)后7天從動(dòng)物中取出腹股溝的、主動(dòng)脈旁的和腘的淋巴結(jié)，這些器官的細(xì)胞通過(guò)用玻璃杵(pestal)使其強(qiáng)行通過(guò)一不銹鋼篩懸浮。細(xì)胞在培養(yǎng)前用1% FCS在RPMI 1640中洗滌兩次。全部細(xì)胞在37℃ 5% CO2中在含有10% FCS(＃F4884，Sigma St.louis，MO)、100U/ml青霉素G、10μg/ml鏈霉素、10mM谷氨酰胺和5x10-5M2-ME的RPMI-1640中，進(jìn)行培養(yǎng)。在96孔板的一式三份0.2ml孔中，以4x106細(xì)胞/ml濃度對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。增殖是在第7天通過(guò)加入用氚標(biāo)記的胸苷進(jìn)行測(cè)量。
組胺類似物對(duì)抗體同型的作用近來(lái)的工作表明輔助T細(xì)胞子集能夠增大不同抗體的同型。鼠TH1細(xì)胞表現(xiàn)出刺激IgG2的產(chǎn)生，而TH2細(xì)胞刺激IgG1和IgE的產(chǎn)生。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)明是否組胺類似物能特異地影響不同種群的輔助T細(xì)胞功能。比較了兩種不同組胺類似物(化合物1和化合物3)影響對(duì)馬肌紅蛋白(H-Mb)的抗體應(yīng)答的能力。化合物3的結(jié)構(gòu)式如下His-NH-(CH2)5-CONH-phi-CF3IgM對(duì)H-Mb的特異性應(yīng)答是在第0天和第2天用藥物引發(fā)抗原后的第7天進(jìn)行測(cè)試(圖21)。未檢測(cè)到35mg/kg組胺類似物對(duì)抗原特異性IgM的影響，而IgM是在應(yīng)答H-Mb引發(fā)中產(chǎn)生的。
另一組鼠在天(-1)和第2天用35mg/kg組胺類似物處理。這些鼠在第0天和第21天接受H-Mb。對(duì)這些鼠的血清(第33天)進(jìn)行H-Mb特異性IgG分析。圖15表明化合物1和化合物3能夠抑制H-Mb特異性IgG的產(chǎn)生。對(duì)同樣的血清進(jìn)行H-Mb特異性IgG2a(圖15)和IgG2b(圖16)分析?；衔?顯示降低了H-MB特異性IgG2a和IgG2b(圖17)。這意味著化合物3活性靶可能是部分TH1通道。相反，化合物1不影響H-Mb特異性IgG2a或IgG2b。在化合物1處理(圖15)后發(fā)現(xiàn)IgG的降低反映出對(duì)IgG1的作用?；衔?能降低IgG和IgE對(duì)Fel d I的應(yīng)答(如實(shí)施例1-6中所討論的)說(shuō)明它的靶可能是TH2通道。
組胺類似物對(duì)T細(xì)胞增殖的效應(yīng)組胺類似物的受體在大多數(shù)涉及免疫應(yīng)答的細(xì)胞上都存在。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定化合物1和化合物3的作用靶。鼠用Mb引發(fā)在天(-2)和天(-1)用藥物(ⅳ)處理。收集流出的淋巴結(jié)并測(cè)量抗原特異性增殖(圖18)。通過(guò)用化合物3處理鼠，抗原特異性T細(xì)胞增殖降低。數(shù)據(jù)表明，特異性T細(xì)胞活化的刺激受化合物3影響。這表明與化合物3的抗體同型影響是一致的。TH1活性與大多數(shù)T細(xì)胞體外增殖有關(guān)。
實(shí)施例11組胺自體有效物質(zhì)對(duì)自身免疫疾病模型的影響胰島素依賴性糖尿病(IDDM或Ⅰ型糖尿病)是一種自身免疫疾病，并涉及在朗格爾漢斯胰島中產(chǎn)生胰島素的β細(xì)胞的淋巴細(xì)胞依賴性炎性損傷。T淋巴細(xì)胞與胰細(xì)胞損傷有關(guān)，而自身抗體產(chǎn)生與胰島炎(即IDDM的炎性損傷)的發(fā)展有關(guān)。一種鼠(非肥胖性糖尿病的鼠-NOD鼠)的菌株造成一種類型的胰損傷，它十分相似于人的Ⅰ型糖尿病。使用在NOD鼠中有效的免疫抑制藥物的許多實(shí)驗(yàn)預(yù)示了在對(duì)Ⅰ型糖尿病敏感的人中免疫抑制的價(jià)值。不幸的是，可用于治療敏感病人Ⅰ型糖尿病的免疫抑制劑僅在它們應(yīng)用期間有效。這些抑制劑，可能除了抗CD4單克隆抗體外，在長(zhǎng)期連續(xù)施用時(shí)毒性太大。
下列實(shí)驗(yàn)集中在化合物1和3對(duì)高血糖過(guò)程和胰島炎發(fā)展的作用。實(shí)驗(yàn)集中在以下問(wèn)題1.短程(兩劑)用藥或結(jié)合用藥是否改變高血糖癥發(fā)作和死亡發(fā)生;2.以任何比短程更明確的方式以一周間隔長(zhǎng)期用藥是否改變IDDM的發(fā)作;3.中斷兩劑給藥是否延遲或改變胰炎性損傷的發(fā)作或嚴(yán)重程度?？梢哉J(rèn)為自體有效物質(zhì)(組胺類似物)的免疫抑制效應(yīng)會(huì)影響病程，因?yàn)榛衔?能抑制對(duì)抗原的T細(xì)胞增殖。因此可以限制T細(xì)胞介導(dǎo)的溶胞作用。
在10只一組雌性NOD鼠中對(duì)用化合物1、3或1加3短期治療的效果進(jìn)行試驗(yàn)。連續(xù)兩天給藥(35mg/kg，皮下注射給藥)，化合物1或3的累積劑量為70mg/kg，而化合物1和3相結(jié)合的累積劑量為140mg/kg。在第90和91天給藥(圖19)。在用化合物3或化合物1+3處理組中抑制高血糖的出現(xiàn)最明顯。很可能，化合物1+3的明顯作用是由該兩種藥的附加H2作用引起的。
在每組10只鼠的組中試驗(yàn)了用組胺類似物長(zhǎng)期治療對(duì)NOD鼠中高血糖發(fā)展的影響。將化合物1、3或1+3按上述所用的同樣劑量皮下注射給藥。藥物或?qū)φ罩委熓窃诘?6天開(kāi)始并在以后14天以同一劑量/kg重復(fù)，然后以一周間隔重復(fù)。圖20表明，在用化合物1+3治療達(dá)140天的組中沒(méi)有任何疾病。
總之，實(shí)施例1-11表明，組胺類似物是有效的免疫抑制劑而且每一個(gè)具有不同的免疫調(diào)節(jié)的潛能機(jī)理?；衔?抑制T細(xì)胞依賴性IgE、IgG1(但不是IgM、IgG2a或IgG2b)抗體應(yīng)答。在各種抗原應(yīng)答中，化合物3抑制IgG1、IgG2a和IgG2b(但不是IgM)應(yīng)答?；衔?對(duì)IgE的作用將進(jìn)行試驗(yàn)。在所測(cè)試的劑量中僅化合物3呈現(xiàn)出直接抑制對(duì)特異性抗原的T細(xì)胞增殖?？贵w產(chǎn)生的抑制是可轉(zhuǎn)移的而且在對(duì)抗原的應(yīng)答建立后也可以看到。
組胺類似物在人IDDM的鼠模型中具有同樣的免疫抑制效應(yīng)。類似物治療延遲了在NOD鼠中高血糖和胰島炎的發(fā)作。因?yàn)橛没衔?和3(而不是用化合物1單獨(dú))治療得到至今所測(cè)定的最大作用，這些結(jié)果表明H1和H2受體效應(yīng)可能是必要的而且對(duì)NOD鼠的作用是協(xié)同的，或者明顯的協(xié)同作用可能是單純地由兩種藥物分別提供的附加H2效應(yīng);將對(duì)劑量依賴性和H1和H2阻斷劑的阻斷效應(yīng)進(jìn)行研究，以確定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所依據(jù)的藥物機(jī)理;自體有效物質(zhì)作用所依據(jù)的細(xì)胞機(jī)理不是通過(guò)對(duì)同型作用的選擇性建立的，并且T細(xì)胞增殖作用表明化合物3的靶可能是TH1細(xì)胞。
雖然本發(fā)明參考其優(yōu)選具體方案進(jìn)行了描述，其他的具體方案也能達(dá)到同樣結(jié)果。對(duì)本發(fā)明的變更和修改對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的，并且按照本發(fā)明的精神和范圍所有這些修改和等同物都包括在所附權(quán)利要求內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)抑制至少一部分抗原特異性抗體應(yīng)答的方法，包括給所述哺乳動(dòng)物施用有效量的含有至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，所說(shuō)組胺衍生物的特征在于在組胺分子的側(cè)鏈胺上被具有一個(gè)有2-10個(gè)碳原子的脂族鏈的取代基單取代，其中該鏈的α碳是亞甲基或者被氧或1-3個(gè)碳原子的烷基取代，所說(shuō)鏈末端為氫或羧酰氨基，其中碳-酰胺基氮被1-6個(gè)碳原子的烷基、甲苯基或三氟甲苯基取代，當(dāng)所說(shuō)鏈末端為氫時(shí)，鏈長(zhǎng)為5或6個(gè)碳原子。
2.一種通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)抑制至少一部分抗原特異性抗體應(yīng)答的方法，包括給所述哺乳動(dòng)物施用有效量的含有至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，所說(shuō)組胺衍生物具有下式其中X是CO或CHR，其中R是1-3個(gè)碳原子的烷基;n是2-6的整數(shù);Y是CH3或CONHZ(其中Z是H);(CH2)mCH3;(其中m是1-4)、取代苯基(其中取代基是甲基或三氟甲基);A是生理學(xué)上可接受的抗衡離子;b是0-2的整數(shù)。
3.一種通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)抑制至少一部分抗原特異性抗體應(yīng)答的方法，包括給所述哺乳動(dòng)物施用有效量的含有至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，所說(shuō)組胺衍生物具有下式其中n′是2-5X′是CO，CH2或CHCH3;D是甲基或三氟甲基;phi是亞苯基;A是生理學(xué)上可接受的抗衡離子;b′是1-2的整數(shù)。
4.如權(quán)利要求1的方法，其中所述組胺衍生物選自由下列結(jié)構(gòu)式組成的組胺衍生物其中A是生理學(xué)上可接受的抗衡離子，例如乙酸根、氯離子、硫酸根、磷酸根等，優(yōu)選氯離子;其中b表示附加質(zhì)子和在鹽中發(fā)現(xiàn)的抗衡離子數(shù)目(例如，可中和堿性胺的數(shù)目)，一般是0-2，優(yōu)選的是1-2;其中Q被定義為-CO-(CH2)3-CO-NH-phi-CH3-CH2-(CH2)4-CH3-CH2-(CH2)3-CO-NH-phi-CH3-CO-(CH2)2-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)2-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)1-CO-NH-phi-CF3-CHCH3-(CH2)2-CO-NH-phi-CF3-CHCH3-(CH2)3-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)4-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)3-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)4-CO-NH-phi-CH3-CHCH3-(CH2)4-CO-NH-(CH2)3-CH3-CHCH3-(CH2)3-CO(BOC)0-1NH1-0-Phe-Gly-NHCH3其中BOC是叔丁氧羰基保護(hù)基。
5.如權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的組胺衍生物包括-CH(CH3)-(CH2)4-CONH-phi-CF3或-CH(CH3)-(CH2)3-CONH-phi-CF3。
6.如權(quán)利要求1的方法，其中通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)至少抑制約30%IgE抗體的產(chǎn)生。
7.如權(quán)利要求1的方法，其中通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)至少抑制約60%IgG抗體的產(chǎn)生。
8.如權(quán)利要求1的方法，其中通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)基本上抑制IgG和IgE抗體的產(chǎn)生。
9.如權(quán)利要求1的方法，還包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用抗原或其致免疫部分的步驟，以專門抑制對(duì)所說(shuō)抗原或所說(shuō)其致免疫部分的抗原特異性抗體應(yīng)答。
10.如權(quán)利要求1的方法，其中的組合物包括至少一種濃度小于或等于10-3M的所說(shuō)組胺衍生物。
11.如權(quán)利要求9的方法，其中的組合物包括至少一種濃度小于或等于10-3M的所說(shuō)組胺衍生物。
12.如權(quán)利要求1的方法，其中的組合物包括至少一種以小于或等于10mg/kg的劑量施用的所說(shuō)組胺衍生物。
13.如權(quán)利要求1的方法，其中的組合物經(jīng)皮下給藥。
14.如權(quán)利要求9的方法，其中的組合物經(jīng)皮下給藥。
15.一種通過(guò)對(duì)預(yù)定抗原敏感并且已經(jīng)對(duì)所說(shuō)預(yù)定抗原產(chǎn)生抗體的免疫系統(tǒng)抑制至少一部分對(duì)所說(shuō)預(yù)定抗原的抗原特異性抗體應(yīng)答的方法，包括對(duì)所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用有效量的含有至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，所說(shuō)組胺衍生物的特征在于在組胺分子的側(cè)鏈上被具有一個(gè)有2-10個(gè)碳原子的脂族鏈的取代基單取代，其中該鏈的α碳是亞甲基或者被氧或1-3個(gè)碳原子的烷基取代，所說(shuō)鏈末端為氫或羧酰氨基，其中羧酰氨基氮被1-6個(gè)碳原子的烷基，甲苯基或三氟甲苯基取代，當(dāng)所說(shuō)鏈末端為氫時(shí)，鏈長(zhǎng)為5或6個(gè)碳原子，其中對(duì)所說(shuō)預(yù)定抗原的抗體的進(jìn)一步產(chǎn)生至少部分被抑制。
16.如權(quán)利要求15的方法，其中所說(shuō)的含有至少一種組胺衍生物的組合物以有效量施用以基本抑制對(duì)所述預(yù)定抗原的抗體的產(chǎn)生。
17.如權(quán)利要求15的方法，還包括對(duì)所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用所說(shuō)預(yù)定抗原或其致免疫部分的步驟，以專門抑制對(duì)所說(shuō)預(yù)定抗原或所說(shuō)其致免疫部分抗原特異性抗體應(yīng)答。
18.如權(quán)利要求15的方法，其中的預(yù)定抗原是蛋白質(zhì)過(guò)敏原。
19.如權(quán)利要求17的方法，其中的預(yù)定抗原是蛋白質(zhì)過(guò)敏原。
20.如權(quán)利要求19的方法，還包括對(duì)所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用源于所說(shuō)預(yù)定抗原的肽的步驟，所說(shuō)肽含有至少一種所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的T細(xì)胞表位。
21.如權(quán)利要求15的方法，其中預(yù)定抗原是蛋白質(zhì)過(guò)敏原，并且該方法進(jìn)一步包括對(duì)所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用源于所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的肽的步驟，所說(shuō)肽含有至少一種所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的T細(xì)胞表位。
22.一種治療個(gè)體對(duì)抗原過(guò)敏的方法，包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用治療有效量的含有至少一種組胺衍生物和可藥用載體或稀釋劑的治療組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，所說(shuō)組胺衍生物的特征在于在組胺分子的側(cè)鏈胺上被具有一個(gè)有2-10個(gè)碳原子的脂族鏈的取代基單取代，其中該鏈的α碳是亞甲基或者被氧或1-3個(gè)碳原子的烷基取代，所說(shuō)鏈末端為氫或羧酰氨基，其中羧酰氨基氮被1-6個(gè)碳原子的烷基，甲苯基或三氟甲苯基取代，當(dāng)所說(shuō)鏈末端為氫時(shí)，鏈長(zhǎng)為5或6個(gè)碳原子。
23.如權(quán)利要求22的方法，其中的治療組合物一年至少施用一次。
24.如權(quán)利要求23的方法，其中的治療組合物一年施用多達(dá)4次。
25.如權(quán)利要求22的方法，還包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用所說(shuō)抗原或其致免疫部分的步驟，以專門抑制對(duì)所說(shuō)抗原或所說(shuō)其致免疫部分的抗原特異性抗體應(yīng)答。
26.如權(quán)利要求22的方法，其中的抗原是自體抗原。
27.如權(quán)利要求25的方法，其中的抗原是自體抗原。
28.一種治療個(gè)體對(duì)蛋白質(zhì)過(guò)敏原過(guò)敏的方法，包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用治療有效量的含有至少一種組胺衍生物和可藥用載體或稀釋劑的治療組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，所說(shuō)組胺衍生物的特征在于在組胺分子的側(cè)鏈胺上被具有一個(gè)有2-10個(gè)碳原子的脂族鏈的取代基單取代，其中該鏈的α碳是亞甲基或者被氧或1-3個(gè)碳原子的烷基取代，所說(shuō)鏈末端為氫或羧酰氨基，其中羧酰氨基氮被1-6個(gè)碳原子的烷基，甲苯基或三氟甲苯基取代，當(dāng)所說(shuō)鏈末端為氫時(shí)，鏈長(zhǎng)為5或6個(gè)碳原子。
29.如權(quán)利要求28的方法，還包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用蛋白質(zhì)過(guò)敏原或其致免疫部分的步驟，以專門抑制對(duì)所說(shuō)過(guò)敏原或所說(shuō)其致免疫部分的過(guò)敏原特異性抗體應(yīng)答。
30.如權(quán)利要求28的方法，還包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用源于所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的肽的步驟，所說(shuō)肽含有至少一種所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的T細(xì)胞表位。
31.如權(quán)利要求29的方法，還包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用源于所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的肽的步驟，所說(shuō)肽含有至少一種所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的T細(xì)胞表位。
32.如權(quán)利要求30的方法，還包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用源于所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的肽的步驟，所說(shuō)肽含有至少兩種所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的T細(xì)胞表位。
33.如權(quán)利要求31的方法，還包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用源于所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的肽的步驟，所說(shuō)肽含有至少兩種所說(shuō)蛋白質(zhì)過(guò)敏原的T細(xì)胞表位。
34.如權(quán)利要求30的方法，其中的蛋白質(zhì)過(guò)敏原選自Dermatophagoides蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Felis蛋白質(zhì)過(guò)敏原、豕草屬(Ambrosia)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Lolium蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Cryptomeria蛋白質(zhì)過(guò)敏原、鏈格孢屬(Alternaria)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Alder蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Betula蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Quercus蛋白質(zhì)過(guò)敏原、齊墩果屬(Olea)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Artemisia蛋白質(zhì)過(guò)敏原、車前屬(Plantago)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Parietaria蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Canine蛋白質(zhì)過(guò)敏原、蠊屬(Blatlella)蛋白質(zhì)過(guò)敏原、Apis蛋白質(zhì)過(guò)敏原、大蠊屬(Periplaneta)蛋白質(zhì)過(guò)敏原。
35.如權(quán)利要求30的方法，其中的蛋白質(zhì)過(guò)敏原選自Der p Ⅰ、Der p Ⅱ、Der f Ⅰ、Der f Ⅱ、Amb a Ⅰ.1、Amb a Ⅰ.2、Amb a Ⅰ.3、Amb a Ⅰ.4、Amb a Ⅱ、Lol p Ⅰ、Lol p Ⅸ、Cry j Ⅰ、Cry j Ⅱ和Fel d Ⅰ。
36.一種通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)抑制至少一部分抗原特異性抗體應(yīng)答的方法，包括下列步驟1)對(duì)所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用含有至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，所說(shuō)組胺衍生物的特征在于在組胺分子的側(cè)鏈胺上被具有一個(gè)有2-10個(gè)碳原子的脂族鏈的取代基單取代，其中該鏈的α碳是亞甲基或者被氧或1-3個(gè)碳原子的烷基取代，所說(shuō)鏈末端為氫或羧酰氨基，其中羧酰氨基氮被1-6個(gè)碳原子的烷基，甲苯基或三氟甲苯基取代，當(dāng)所說(shuō)鏈末端為氫時(shí)，鏈長(zhǎng)為5或6個(gè)碳原子。2)對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用抗原或其致免疫部分以專門抑制對(duì)所說(shuō)抗原或所說(shuō)其致免疫部分的抗原特異性抗體應(yīng)答。
37.如權(quán)利要求26的方法，還包括對(duì)所說(shuō)個(gè)體施用源于所說(shuō)自體抗原的肽的步驟，所說(shuō)肽含有至少一種所說(shuō)自體抗原的T細(xì)胞表位。
38.如權(quán)利要求22的方法，其中的預(yù)定抗原是自體抗原并且還包括至少一種所說(shuō)自體抗原的T細(xì)胞表位。
全文摘要
本發(fā)明提供了組胺衍生物作為免疫調(diào)節(jié)劑和用于免疫治療的方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了通過(guò)哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)抑制至少一部分抗原特異性抗體應(yīng)答的方法，該方法包括對(duì)所說(shuō)的哺乳動(dòng)物施用有效量的含有至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性。本發(fā)明也涉及治療個(gè)體對(duì)特定抗原過(guò)敏的方法，該方法是對(duì)個(gè)體施用治療有效量的含有至少一種組胺衍生物的組合物，所說(shuō)組胺衍生物對(duì)至少一種組胺受體具有結(jié)合專一性，與此相關(guān)，可任意地對(duì)個(gè)體施用個(gè)體可能對(duì)其敏感的抗原或其致免疫部分或其T細(xì)胞刺激部分。
文檔編號(hào)C07K14/415GK1078153SQ9310251
公開(kāi)日1993年11月10日 申請(qǐng)日期1993年1月21日 優(yōu)先權(quán)日1992年1月21日
發(fā)明者K·L·梅爾蒙, J·L·格林斯坦, P·卡斯羅波 申請(qǐng)人:伊姆羅吉制藥公司