本發(fā)明涉及化學(xué)-生物聯(lián)合催化領(lǐng)域，尤其涉及一種化學(xué)與生物聯(lián)合催化合成磷酸吡哆醛的方法。

背景技術(shù)：

磷酸吡哆醛是維生素b6的一種衍生物，是維生素b6參與蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物的多種代謝反應(yīng)的一種活化形式。磷酸吡哆醛是氨基酸代謝中的轉(zhuǎn)氨酶及脫羧酶的輔酶。通過轉(zhuǎn)氨作用，將氨基酸、碳水化合物和脂肪代謝聯(lián)系起來；通過脫羧作用，可生成多種生物活性物質(zhì)，如組胺、血清素、γ-?；∷帷⒘螯S素。磷酸吡哆醛還參與造血，它是δ-氨基γ-酮戊酸（ala）合成酶的輔酶。而δ-氨基γ-酮戊酸合成酶是血紅素合成的限速酶。磷酸吡哆醛還作為糖原磷酸化酶的重要組成部分，參與糖原分解為1-磷酸葡萄糖的過程。此外，磷酸吡哆醛還參與脂肪代謝，促進白細(xì)胞生長。

磷酸吡哆醛作為維生素b6的衍生物在醫(yī)藥上有多種用途，治療原因不明的白細(xì)胞減少癥，治療破傷風(fēng)抗血栓作用，治療口腔潰瘍，治療貧血，治療動脈粥樣硬化，治療痤瘡等。研究還表明，磷酸吡哆醛不但可以用于預(yù)防治療高血壓、心血管疾病及糖尿病等，還可用于治療遲發(fā)性運動障礙、難治性兒童期癲癇及帕金森綜合征。

磷酸吡哆醛還是合成β-羥基烷酸酯的輔酶，聚β-羥基烷酸酯具有良好的柔韌性和抗張性，并具有良好的可塑性，其優(yōu)點是可被微生物降解掉，被稱為“生物可降解塑料”，其發(fā)展?jié)摿Υ?，在工業(yè)用途多，需求量大。同時聚羥基烷酸酯類材料以及不同聚合物的不同組合-聚羥基丁酸酯與聚羥基己酸酯共聚物得到廣泛應(yīng)用，因其材料生物相容性好、無排斥性及可控降解性等特點，再生和應(yīng)用軟骨組織為基礎(chǔ)目標(biāo)的軟骨組織工程技術(shù)成為軟骨損傷治療帶來新的思路，作為新型的生物材料負(fù)載軟骨細(xì)胞在耳鼻喉科得到應(yīng)用。此外，β-羥基烷酸酯在醫(yī)藥領(lǐng)域如藥物釋放和組織工程等中應(yīng)用潛力巨大。β-羥基烷酸酯與通用塑料相比，pha具有良好的生物降解性及相容性，另外它還表現(xiàn)出具有實用價值的光學(xué)活性、壓電性、氣密性等。因此在生物醫(yī)用、食品包裝、感光材料等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。β-羥基烷酸酯是目前研究最多、產(chǎn)量最大、商業(yè)化最為成功的可生物降解聚合物之一。

磷酸吡哆醛還是合成β-羰基酰胺類化合物的輔酶，β-羰基酰胺類化合物在藥物生物活性研究、液晶材料及涂料等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用，市場量大。

目前，鹽酸吡哆醛磷酸化生成磷酸吡哆醛是以化學(xué)合成法進行的，但此種方法存在步驟復(fù)雜、資源消耗多、不易制備等問題，導(dǎo)致了鹽酸吡哆醛與磷酸吡哆醛之間巨大的價格差．需要開發(fā)一種新工藝來降低生產(chǎn)成本。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為克服現(xiàn)有技術(shù)鹽酸吡哆醇由化學(xué)工藝合成磷酸吡哆醛步驟復(fù)雜產(chǎn)量低等缺點，本發(fā)明的目的是通過化學(xué)與生物聯(lián)合催化鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化為磷酸吡哆醛，提供一種環(huán)保高效，選擇性好，反應(yīng)條件溫和，操作方便，成本低廉，具有良好的工業(yè)化應(yīng)用價值的化學(xué)-生物聯(lián)合催化合成吡哆醛的技術(shù)。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種化學(xué)與生物聯(lián)合催化合成磷酸吡哆醛的方法，包括以下步驟：

（1）化學(xué)合成鹽酸吡哆醛取鹽酸吡哆醇1g溶于10ml5%鹽酸溶液中，加入適量（摩爾比1:1）或過量（摩爾比1:1~8）選擇性氧化劑，在磁力攪拌20~40℃水浴加熱反應(yīng)，反應(yīng)3h直到氧化劑完全溶解，并進行2~3抽濾除去機械雜質(zhì)；將所得清亮濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度；向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體；抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體；將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體；

（2）高效酶法轉(zhuǎn)化鹽酸吡哆醛為磷酸吡哆醛

取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽：氫二鉀或磷酸二氫鉀0.05g，用tris緩沖液（ph=6.0）溶解磷酸吡哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為20~30℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理8000r/min，10min，收集上清液，即為磷酸吡哆醛；

步驟（1）的操作需在黑暗條件下進行。

進一步地，步驟（1）所述氧化劑是雙氧水、二氧化錳、硝酸銅、二乙胺中的一種或幾種的混合物。

進一步地，步驟（1）所述氧源為空氣時，空氣壓力為1-5個大氣壓，優(yōu)選為1-2個大氣壓。

進一步地，步驟（1）所述氧化劑是雙氧水，其用量以鹽酸吡哆醇摩爾數(shù)計的0.5-8倍，優(yōu)選1-2倍。進一步地，步驟（1）所述氧化劑是二氧化錳，其用量以摩爾數(shù)計為鹽酸吡哆醇的摩爾數(shù)的0.01-5倍，優(yōu)選0.01-1倍。

進一步地，步驟（1）所述氧化劑是雙氧水、硝酸銅、二乙胺（按照物質(zhì)的量之比約為1:1:1進行配比），其用量以摩爾數(shù)計為鹽酸吡哆醇的摩爾數(shù)的0.1-5倍，優(yōu)選0.8-2倍。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明相較于純化學(xué)方法制備磷酸吡哆醛，條件更為溫和，所消耗的時間較短；且環(huán)保高效，選擇性好、操作方便，成本低廉，具有良好的工業(yè)化應(yīng)用價值。

具體實施方式

通過以下詳細(xì)說明可以進一步理解本發(fā)明的特點和優(yōu)點。所提供的實施例僅是對本發(fā)明方法的說明，而不以任何方式限制本發(fā)明揭示的其余內(nèi)容。

本發(fā)明中，選用的酶為abnova公司的pdxk（human）recombinantprotein（p01）。

【實驗例1】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml5%鹽酸溶液中，加入0.25g二氧化錳粉末，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，直到二氧化錳粉末完全溶解，并進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質(zhì)。將所得清亮濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體。將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為30%-50%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%?！緦嶒灷?】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml，5%鹽酸溶液中，加入0.5g二氧化錳粉末，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，直到二氧化錳粉末完全溶解，并進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質(zhì)。將所得清亮濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體。將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為40%-50%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。

【實驗例3】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml，5%鹽酸溶液中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5ml，5%的雙氧水，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，得無色溶液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體。將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為40%-50%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。

【實驗例4】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml，5%鹽酸溶液中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5ml，10%的雙氧水，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，得無色溶液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為30%-40%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈:水=3:7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。

【實驗例5】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml5%鹽酸溶液中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5ml，15%的雙氧水，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，得無色溶液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體。將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為40%-50%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。

【實驗例6】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml，5%鹽酸溶液中，加入催化體系雙氧水、硝酸銅（按照物質(zhì)的量之比約為1:1進行配比），在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，再進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質(zhì)。將所得清亮濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體。將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為50%-60%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。

【實驗例7】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml5%鹽酸溶液中，加入催化體系雙氧水、二乙胺（按照物質(zhì)的量之比約為1:1進行配比），在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，再進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質(zhì)。將所得清亮濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體。將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為50%-60%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。

【實驗例8】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml5%鹽酸溶液中，加入催化體系雙氧水、硝酸銅、二乙胺（按照物質(zhì)的量之比約為1:1:1進行配比），在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，再進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質(zhì)。將所得清亮濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體。將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為50%-60%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。

【實驗例9】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml，5%鹽酸溶液中，加入0.5g二氧化錳粉末，在磁力攪拌35℃水浴加熱處理3h，直到二氧化錳粉末完全溶解，并進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質(zhì)。將所得清亮濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得白色晶體。將粗產(chǎn)品在稀鹽酸溶液中重結(jié)晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為45%-50%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。

【實驗例10】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶于10ml，5%鹽酸溶液中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5ml，10%的雙氧水，在磁力攪拌35℃水浴加熱處理3h，得無色溶液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮蒸干，溫度應(yīng)低于其分解溫度。向蒸干后的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中于0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風(fēng)干，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經(jīng)高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉(zhuǎn)化率為35%-40%。取上一步反應(yīng)所獲得的產(chǎn)物鹽酸吡哆醛0.1g于離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩沖液溶解磷酸哆醛轉(zhuǎn)移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應(yīng)液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恒溫水浴搖床中反應(yīng)3h，將反應(yīng)后的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈:水=3:7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產(chǎn)物其轉(zhuǎn)化效率為40%-50%。