專利名稱：新的抗血栓形成的制劑及制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的藥物制劑，包括凝血酶抑制劑HOOC-CH2-(R)-Cgl-Aze-Pab與一種或多種吸收增強(qiáng)劑，還涉及該藥物制劑的制備方法和該制劑在血栓栓塞治療方面的用途，以及用該制劑對(duì)需要這種治療病人進(jìn)行治療的方法。
背景技術(shù)：
血液凝固既是止血(即防止血液從損壞的血管中喪失)的主要過程又是血栓形成(即由血塊造成血管的病理性閉塞)的主要過程。血液凝固是一系列復(fù)雜的酶學(xué)反應(yīng)的結(jié)果；最終是凝血酶原向具有活性的凝血酶的轉(zhuǎn)變。
凝血酶對(duì)血液凝固起了重要的作用。它激活血小板，將纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槟茏园l(fā)聚合成纖維的纖維蛋白單體，而且凝血酶還能激活因子XIII，該因子反過來又與所述聚合物交聯(lián)而轉(zhuǎn)變成不溶性的纖維蛋白。凝血酶進(jìn)一步激活正反饋反應(yīng)中的因子V和因子VIII。因此預(yù)測凝血酶抑制劑將通過對(duì)血小板活化、纖維蛋白形成和纖維蛋白穩(wěn)定過程的抑制作用而成為有效的抗凝劑。通過對(duì)所述正反饋機(jī)理的抑制，認(rèn)為該抑制劑在導(dǎo)致血凝固和形成血栓過程的鏈早期產(chǎn)生抑制作用。
凝血酶抑制劑這種肽，和其它肽類物質(zhì)一樣，引入機(jī)體后易受到限制或改變吸收。這是由于代謝屏障和物理特性不同的影響所致，如酶降解，易于和制劑中或生物環(huán)境下的成分形成配合物，對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)率的限制等。本發(fā)明藥物制劑的一個(gè)目的是便于活性成分克服這種障礙，并且使活性劑得到增強(qiáng)的和可重復(fù)性吸收，有這種影響并因此對(duì)治療劑有如此幫助的制劑成分稱為吸收增強(qiáng)劑。
現(xiàn)有技術(shù)在現(xiàn)有文獻(xiàn)中，有幾篇報(bào)道和綜述涉及到吸收增強(qiáng)劑在藥物制劑中的用途。文獻(xiàn)報(bào)道了不同類型物質(zhì)的增強(qiáng)特性，例如表面活性劑和脂質(zhì)、螯合物和聚合物。E J Van Hoog dalem等在制藥理論(Pharmac TheorVol 44,407～443(1989))、S Muranishi在治療藥物載體評(píng)論(Crit RevTher Drug Carrier Sys Vol 7,1-33(1990))，E S Swenson和W J Curatolo在藥物釋放評(píng)論進(jìn)展(Adv Drug Deliv Rev Vol 8,39～92,(1992))和Harwood大學(xué)出版社1994年出版(Harwood Academic Publishers1994)的關(guān)于藥物吸收增強(qiáng)(in Drug Absorption Enhancement)(EdABG deBoer)等提供了大量綜述性文獻(xiàn)。
本

發(fā)明內(nèi)容
據(jù)發(fā)現(xiàn)，在含有所述治療作用的凝血酶抑制劑的藥物制劑中，摻入增強(qiáng)劑后可改善具有治療作用的凝血酶抑制HOOC-CH2-(R)-Cgl-Aze-Pab的吸收性。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種新型的藥物制劑和該藥物制劑的制備方法，該制劑包括凝血酶抑制劑HOOC-CH2-(R)-Cgl-Aze-Pab與一種或多種吸收增強(qiáng)劑和任選的藥學(xué)上適用的載體。
獲得治療學(xué)上有效藥物改良制劑的方法是基于使用吸收增強(qiáng)劑，例如但不限于表面活性劑、脂質(zhì)、其它藥物和聚合物的使用，以便當(dāng)該藥物經(jīng)不同的給藥途徑，如口服、直腸、口腔、鼻肺吸入等給藥時(shí)獲得治療劑的吸收增強(qiáng)和/或減少吸收變化的正性結(jié)果。并且這些吸收劑的結(jié)合將導(dǎo)致吸收高度增強(qiáng)的正性協(xié)同作用。
本發(fā)明所描述的吸收增強(qiáng)作用意指通過制劑中的一種或多種添加劑來獲得，例如，但不限于非甾體抗炎藥物和衍生物，如水楊酸鈉，5-甲氧基水楊酸鈉、吲哚美辛和雙氯滅痛；表面活性劑，如非離子型表面活性劑，例如，脫水山梨醇酯(司盤系列)、聚山梨醇(吐溫系列)、聚氧乙烯基化乙二醇、單乙醚(如Brij系列)，聚氧化烷基酯(Myri系列)，聚氧乙基烷基酚(象Triton系列)，象糖苷類的烷基葡萄糖苷，例如，十二烷基麥芽糖苷，脂肪酸糖酯，例如，月桂酸蔗糖酯、一硬脂酸蔗糖酯等和皂草苷；兩性表面活性劑，例如三甲胺乙內(nèi)鹽(甜菜堿)；陰離子表面活性劑，例如，脂肪醇硫酸酯，聚氧乙基醇硫酸酯，其它的象磺基琥珀酸二辛酯；陽離子表面活性劑，例如，銨化物。
膽鹽，如二羥基膽鹽類的脫氧膽酸鈉，三羥基膽鹽類的甘氨膽酸鈉和夫西地酸鈉，例如，二羥基夫地酸鈉；皂類和脂肪酸及其鹽，例如，辛酸、癸酸和癸酸鈉；脂質(zhì)，象甘油脂，例如，甘油-辛酸酯和甘油-油酸酯；磷脂，例如，二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)和二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)；油，例如，豆油和葵花油；烯胺，如DL-苯丙氨酸和乙酰乙酸乙酯烯胺；螯合劑，例如，EDTA、EGTA和枸椽酸；吩噻嗪，如氯丙嗪；肉毒堿和肽的脂肪酸衍生物，例如，棕櫚酰-DL-肉毒堿和N-肉豆蔻酰-L-丙基-L-脯氨酰-甘氨酸鹽；其它物質(zhì)，例如，氮酮，伴刀豆球蛋白A，磷酸鹽和膦酸酯衍生物，如DL-α-甘油磷酸酯和3-氨基-1-羥基亞丙基-1，1-二膦酸酯，馬來酸二乙酯和丙二酸二乙基乙氧亞甲酯；來自美拉德反應(yīng)(Maillard reactions)的產(chǎn)物，例如，來自葡萄糖賴氨酸反應(yīng)的化合物；聚合物，如聚丙烯酸類，例如，Carbopol，Poly Carbophil；聚氨基葡萄糖和聚氨基葡萄糖衍生物；和嵌段共聚物，例如，Poloxamers，poloxamines，和meroxapols。
適用的增強(qiáng)劑的組合物是但不限于脂質(zhì)和膽鹽，例如，甘油-油酸酯和牛磺膽酸鈉；脂質(zhì)和磷脂，例如，中鏈的甘油酯和卵磷脂；表面活性劑和油，例如，脂肪酸蔗糖酯和豆油；和聚合物和脂質(zhì)，例如，polycarbophil和甘油-油酸酯。
可用的劑型可以是根據(jù)已知技術(shù)制備的固體、半固體或液體制劑。通常活性物質(zhì)的組成占制劑重量的0.1～99％，更具體地占需要非腸道給藥的制劑重量的0.1～50％，占適合口服給藥制劑重量的0.2～90％。
適合人體治療的治療活性藥物的日給藥劑量在腸道給藥中為每公斤體重0.001～100mg，而非腸道給藥每公斤體重為0.001～50mg。
增強(qiáng)劑或增強(qiáng)劑組合物將構(gòu)成制劑重量的0.1～99％。如此獲得的制劑將經(jīng)過不同的機(jī)理增加治療藥物的吸收和/或減少治療藥物的吸收可變性。
本發(fā)明的藥物制劑包括修飾的二肽HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab和所述的吸收增強(qiáng)劑，將用于預(yù)防及治療動(dòng)脈和靜脈血栓栓塞。
本發(fā)明的另一目的是制備上述藥物制劑的方法，它包括向治療活性化合物HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab的溶液中加入吸收增強(qiáng)劑，任選地用緩沖劑將溶液的pH調(diào)至治療上適用的pH范圍內(nèi)，例如5-9，優(yōu)選7-8，例如7.4，并將所有的成分混合。緩沖劑可以是磷酸鹽緩沖液，如K2HPO4NaH2PO4。像載體、等滲劑如NaCl等本技術(shù)領(lǐng)域中的技術(shù)人員已知的藥物制劑中常用的其它成分，也可以加到本發(fā)明的藥物制劑中。
附圖簡述

圖1顯示了兩種吸收增強(qiáng)劑對(duì)HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab在腸膜中滲透性的影響。
發(fā)明詳述下列描述是對(duì)發(fā)明各方面的說明實(shí)驗(yàn)部分一般實(shí)驗(yàn)方法質(zhì)譜在Finnigan MAT TSQ 700型備有電子噴涂設(shè)備的三節(jié)四極質(zhì)譜儀上記錄。
1H NMR和13C NMR譜用BRUKER AC-P300和BRUKER AM500光譜儀測定，前者1H在500.14MHz和13C在125.76MHz下測定，而后者1H在300.13MHz和13C在75.46MHz下測定。
約為10～50mg的樣品溶解在0.6ml的下列溶劑之一中CDCl3(同位素純度＞99.8％)，CD3OD(同位素純度＞99.95％)或D2O(同位素純度＞99.98％)。所有溶劑購自Dr.Glaser AG，Basel。
1H和13C在CDCl3和CD3OD的化學(xué)位移值是相對(duì)于作為外標(biāo)物的四甲基硅烷的化學(xué)位移值。在D2O中的1H的化學(xué)位移值相對(duì)于3-(三甲基硅基)-d4-丙酸鈉鹽的位移值，而D2O中的13C的化學(xué)位移值相對(duì)于1，4-二氧六環(huán)(67.3ppm)的位移值，這兩種都作為外標(biāo)物。與內(nèi)標(biāo)物相比，用外標(biāo)物校正可能在某些情況下造成微小的位移差，然而，1H的化學(xué)位移差小于0.02ppm而13C的化學(xué)位移差小于0.1ppm。
含有一個(gè)脯氨酸或一個(gè)“類脯氨酸”殘基的肽序列的1H NMR譜常顯示出兩套共振信號(hào)。這表示相應(yīng)地存在兩種起作用的相對(duì)于繞酰胺鍵轉(zhuǎn)動(dòng)的構(gòu)象異構(gòu)體，這里脯氨酸有酰胺鍵的N-部分。該兩種構(gòu)象取名為順式和反式。含有該序列的序列(R)Cha-Aze-和(R)Cha-Pil-常導(dǎo)致順式和反式的平衡，用一種構(gòu)象異構(gòu)體作為優(yōu)勢構(gòu)象體(＞90％)。那種情況下，只報(bào)主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的1H化學(xué)位移。僅在非優(yōu)勢旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的位移信號(hào)能被清楚地解析的情況下才將其報(bào)道在NMR文獻(xiàn)中。同樣的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)CDCl3中NH-信號(hào)適用，僅在信號(hào)可被解析的情況下才將其報(bào)道在NMR文獻(xiàn)里。這意味著對(duì)一些中間體所報(bào)的質(zhì)子數(shù)比從化學(xué)式預(yù)料的質(zhì)子數(shù)少。
快速層析在常壓下60號(hào)的硅膠中(40～63mm，230-400目)進(jìn)行。
冷凍干燥在Leybold-Heraeus，Lyovac GT2型裝置中進(jìn)行。起始原料的制備4-氨甲基-1-(N-芐氧碳酰脒基)-苯(H-Pab(2))(i)4-氰芐基疊氮室溫下將疊氮化鈉20.23g(0.31mol)溶于50ml水所得的溶液加入4-氰芐基溴49.15g(251mmol)的DMF200ml的溶液中。發(fā)生放熱反應(yīng)，1.5小時(shí)后用200ml的甲苯稀釋反應(yīng)混合物(注意為避免潛在爆炸性疊氮化合的分離，建議加水前向反應(yīng)混合物加入甲苯)和500ml水。水相用另外的甲苯2×50ml提取。合并的有機(jī)提取液用2×50ml水和鹽水洗，最后干燥(MgSO4)并過濾。
該溶液用于下步反應(yīng)中。1H-NMR(300MHz，CDCl3)；δ4.4(s，2H)，7.4(d，2H)，7.7(d，2H).(ii)4-脒基芐基疊氮在-5℃以上，將氯化氫發(fā)泡通過250ml無水乙醇和步驟(i)所得溶液(約200ml)的混合物中直至達(dá)到飽和。在8℃存放24h蒸發(fā)大部分溶劑，隨后經(jīng)加入無水乙醚產(chǎn)生白色結(jié)晶而沉淀，過濾出生成的白色結(jié)晶并將其溶解在1.8升的酒精氨溶液中。48小時(shí)后除去大部分溶劑并加入200ml 3.75M的NaOH溶液，析出無色的4-脒基芐基疊氮結(jié)晶。由過濾分出結(jié)晶。此刻4-脒基芐基疊氮的產(chǎn)量為22.5g(總計(jì)51％)。乙基咪唑并芐基疊氮化物鹽酸鹽(Ethylimidatobenzyl azidehydrochloride)1H-NMR(500MHz，CD3OD)；δ1.6(t，3H)，4.5(s，2H)，4.65(q，2H)，4.8(br s，2H)，7.6(d，2H)，8.1(d，2H)4-脒基芐基疊氮1H-NMR(500MHz，CDCl3)；δ4.3(s，2H)，5.7(br s，3H)，7.3(d，2H)，7.6(d，2H).
13C-NMR(125MHz，CDCl3)脒碳δ165.5。(iii)4-(芐氧碳酰脒基)芐基疊氮將上述(ii)所得結(jié)晶溶解于500ml的二氯甲烷中，干燥所得溶液(K2CO3)，過濾并加入27ml(194mmol)的三乙胺。將25ml的氯甲酸芐酯在攪拌下慢慢地加到上述溶液中的同時(shí)用冰浴冷卻反應(yīng)混合物。30分鐘后再加入2ml的氯甲酸芐酯，并再繼續(xù)攪拌30分鐘，接著加入水，水相用2M HCl調(diào)至pH7。干燥有機(jī)相(MgSO4)后真空除去溶劑。最后從乙醚/二氯甲烷/己烷中分離出無色的4-(芐氧碳酰脒基)芐基疊氮結(jié)晶。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)；δ4.4(s，2H)，5.3(s，2H)，6.3-7.0(br s，1H)，7.3-7.4(m，5H)，7.5(d，2H)，7.9(d，2H)，9.3-9.6(br s，1H).
13C-NMR(125MHz，CDCl3)脒碳δ167.5。(iv)4-氨甲基-1-(N-芐氧碳酰脒基)-苯(H-Pab(z))室溫下將三苯基膦26.3g(100mmol)加到上述(iii)中的溶于THF 160ml的4-(芐氧碳酰脒基)芐基疊氮溶液中。16h后再加入三苯基膦6.6g(25mmol)，將溶液放置4h后真空除去溶劑。殘物溶于二氯甲烷后用2M HCl提取。水相用二氯甲烷和乙醚洗，隨后用3.75MNaOH溶液堿化。接著用二氯甲烷提取并干燥(K2CO3)，而后真空下除去溶劑得到經(jīng)靜置可固化的黃色油20g(以氰芐基溴開始其總產(chǎn)率為28％)
1H-NMR(500MHz，CDCl3)；δ1.2-2.2(br s，2H)，3.8(s，2H)，5.2(s，2H)，7.2-7.35(m，5H)，7.4(d，2H)，7.8(d，2H)，9.1-9.6(br s，1H).
13C-NMR(125MHz，CDCl3)脒碳δ164.6。碳?；鸡?68.17。H-Aze-OMe x HCl按Seebach D等在利比?；瘜W(xué)記事(Liebigs Ann Chem p687，1990)所述方法制備。Boc-(R)Cgl-OHBoc-(R)-Pgl-OH 32.6g(0.13mol)溶于300ml的甲醇后加入Rh/Al2O35g。該溶液在5.2～2.8MPa下氫化3天。過濾后并將溶劑蒸發(fā)，NMR顯示約25％的標(biāo)題化合物的甲酯存在。將粗產(chǎn)物溶于THF500ml中，再加300ml水和20g的LiOH。過夜攪拌該混合物后蒸去THF。余下的水相用KHSO4酸化并用乙酸乙酯提取3次。合并的有機(jī)層用水洗，干燥(NaSO4)后蒸發(fā)，得到所需要的產(chǎn)物28.3g(83％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ0.9-1.7(m，20H)，4.0-4.2(m，1H)，5.2(d，1H).Boc-(R)-Cgl-Aze-OH(i)Boc-(R)Cgl-Aze-OMe攪拌下于5℃向Boc-(R)Cgl-OH 3.86g(15mmol)、H-Aze-OMe xHCl 2.27g(15mmol)和DMAP 2.75g(22.5mmol)在CH3CN 40ml的混合物中加入EDC 3.16g(16.5mmol)。該反應(yīng)混合物室溫下攪拌48h。蒸發(fā)溶劑后殘留物溶于EtoAc 150ml和H2O 20ml中。分出的有機(jī)層用2×20ml 0.5M KHPO4，2×10ml NaHCO3(飽和的)，1×10ml H2O，1×10ml鹽水洗滌后干燥(MgSO4)。蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物4.91g(92％)，此化合物不需進(jìn)一步純化用于下步反應(yīng)。
1H NMR(500MHz，CDCl3，0.1g/ml)主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，0.83-1.35(m，5H)，1.38(s，9H)，1.47-1.84(m，6H)，2.18-2.27(m，1H)，2.50-2.62(m，1H)，3.72(s，3H)，3.94-4.06(m，1H)，4.07-4.15(m，hH)，4.39-4.47(m，1H)，4.68(dd，J＝9.1，J＝5.1，1H)，5.09(d，J＝9.2，1H).
來自次要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體可解析的峰，2.27-2.35(m，1H)，3.77(s，3H)，3.80-3.87(m，1H)，3.88-3.95(m，1H)，4.92(d，J＝9.2，1H)，5.21(dd，J＝9.1，J-5，1H).
(ii)Boc-(R)Cgl-Aze-OH按照所描述的Boc-(R)Cha-Pic-OEt(參見下文)方法將Boc-(R)Cgl-Aze-OMe進(jìn)行水解。產(chǎn)品從乙醇/丙酮/水(1/1/3.95)體系中結(jié)晶，產(chǎn)率80％。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.85-1.3(m，5H)，1.40(s，9H)，1.5-1.9(m，6H)，1.95-2.2(m，2H)，3.92(m，1H)，4.09(m，1H)，4.35(m，1H)，4.95(m，1H)，5.16(bd，1H).
化合物HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab的制備(i)Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)攪拌下向Boc-(R)Cgl-Aze-OH 3.40g(10mmol)(參見起始原料的制備)和DMAP 5.13g(42mmol)在120ml的CH3CN的混合物中加入H-Pab(Z)×HCl 3.18g(參見起始原料的制備)。室溫?cái)嚢?h后將反應(yīng)混合物冷卻至-8℃，并加入EDC 2.01g(10.5mmol)。待反應(yīng)物溫度升至室溫后再繼續(xù)攪拌47h。將溶劑蒸發(fā)，殘留物溶于200ml的EtOAc中。有機(jī)相用H2O1×50ml、0.5M KHSO41×50+2×25ml，NaHCO3(飽和的)2×25ml，H2O1×50ml洗滌后干燥。蒸發(fā)溶劑后得到標(biāo)題化合物5.21g(86％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.8-1.9(m，20H；其中1.30(s，9H))，2.35-2.6(m，2H)，3.74(bt，1H)，4.10(m，1H)，4.25-4.4(m.2H)，4.45-4.6(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.75-5.0(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.08(bd，2H)，5.15(s，2H)，7.15-7.35(m，5H)，7.41(dd，2H)，7.77(d；2H)，8.21(m，1H).(ii)H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)向冷卻的(冰浴溫度)HCl(g)18.8g的EtOAc 195ml的溶液中一起加入Boc-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)4.69g(7.743mm0l)和EtOAc 40ml。待反應(yīng)物的溫度升至室溫后攪拌30分鐘。向澄清的溶液中加入Et2O 140ml后其有沉淀生成。該反應(yīng)物室溫放置1h 40min。濾出沉淀，用Et2O150ml快速洗滌后真空干燥。沉淀溶于H2O 50ml后用2M NaOH 15ml堿化。用CH2Cl21×100+1×50ml提取堿化后的水相。用H2O1×20ml、鹽水1×20ml洗滌合并的有機(jī)相后干燥(MgSO4)。將溶劑蒸發(fā)后得到標(biāo)題化合物3.44g(88％)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.8-2.0(m，11H)，2.51(m，1H)，2.67(m，1H)，3.07(d，1H)，4.11(m，1H)，4.18(m，1H)，4.43(dd，1H)，4.53(dd，1H)，4.91(m，1H)，5.22(s，2H)，7.2-7.4(m，7H)，7.45(d，2H)，8.51(d，2H).(iii)BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)將H-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)1.13g(2.2mmol)、芐基-2-(鄰-硝基苯磺酰氧基)醋酸酯((2-NO2)Ph-SO2-OCH2-COOBn)0.9g(2.6mmol)(見起始原料制備)、K2CO30.99g(5.6mmol)和CH3CN113ml混合后在60℃油浴上加熱3h。真空蒸發(fā)溶劑。加入EtoAc后用水洗滌混合物，有機(jī)相用1M KHSO4提取后該水相用EtOAc洗滌。酸化后的水相用1N NaOH堿化至pH＞8后用EtOAc提取。有機(jī)相用H2O洗后干燥(Na2SO4)、過濾和真空蒸發(fā)，得到1.17g殘留物，所得到殘留物先用CH2Cl2/MeOH(NH3-飽和)95/5，后用乙醚/MeOH(NH3飽和的)9/1為洗脫劑的兩次快速層析后得到標(biāo)題化合物0.525g(36％)。
也可用芐基-2-(對(duì)-硝基苯磺酰氧基)醋酸酯((4-NO2)Ph-SO2-OCH2-COOBn)用上述同樣的方法進(jìn)行烷基化反應(yīng)(參見起始原料的制備)。得到產(chǎn)率為52％的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85-2.15(m，11H)，2.48(m，1H)，2.63(m，1H)，2.88(d，1H)，3.24(d，1H)，3.27(d，1H)，3.95(m，1H)，4.05(m，1H)，4.44(m，1H)，4.55(m，1H)，4.91(m，1H)，5.07(s，2H)，5.22(s，2H)，7.2-7.4(m，10H)，7.45(d，2H)，7.79(d，2H)，8.42(m，1H).(iva)HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab×2HCl將BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)，20mg(0.031mmol)溶于甲醇5ml。加幾滴氯仿和5％Pd/C后反應(yīng)混合物常壓氫化1h。過濾、蒸發(fā)后，產(chǎn)物從水中凍干，結(jié)果得到標(biāo)題化合物11mg(72％)。
1H-NMR(500MHz，D2O)δ1.0-2.0(m，11H)，2.10(m，1H)，2.44(m，1H)，2.82(m，1H)，3.90(s，2H)，4.09(d，1H)，4.4-4.55(m，2H)，4.66(s，2H)，5.08(m，1H)，7.65(d，2H)，7.89(d，2H).13C-NMR(75.5MHz，D2O)脒基和碳?；鸡?67.3，167.9，169.9和1724。
BnOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)溶于EtOH(99％)后常壓5％ Pd/C催化氫化5h。通過Cellite濾出催化劑后蒸發(fā)溶劑得到產(chǎn)率為97％的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(500MHz，CD3OD，兩種旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ1.00-1.12(m，1H)，1.13-1.34(m，4H)，1.55-1.70(m，3H)，1.73-1.85(m，2H)，1.94-2.02(bd，1H)，2.32-2.42(m，1H)，2.54-2.64(m，1H)，2.95-3.10(AB-系統(tǒng)相加d，3H)，4.18-4.25(bq，1H)，4.28-4.32(bq，1H)，4.43-4.60(AB-系統(tǒng)，2H)，4.80-4.85(dd，1H)，7.48-7.54(d，2H)，7.66-7.71(d，2H).
出現(xiàn)的次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的可解析的信號(hào)δ0.95(m)，1.43(m)，2.24(m)，2.84(d)，3.96(m)，4.03(m)，7.57(bd)，7.78(bd).13C-NMR(125MHz，CD3OD)脒基和碳?；鸡?68.0，173.0，176.3和179.0。制劑的制備制劑AHOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(主藥)1.1mg/10ml蔗糖-硬脂酸酯(S-1570)1.1mg/10ml磷酸鹽緩沖劑(KH2PO4Na2HPO4)0.1MpH7.4加到10ml。制劑BHOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab(主藥)1.1mg/10ml蔗糖-棕櫚酸酯(P-1570)1.1mg/10ml磷酸鹽緩沖劑(KH2PO4Na2HPO4)0.1MpH7.4加到10ml。
制劑A和B的試驗(yàn)在安放到Ussing室中的大鼠結(jié)腸段上進(jìn)行(Artursson等人藥理學(xué)研究(Pharm Research)Vol10，No8，p1123-29(1993)。在不同的時(shí)間間隔取膜兩側(cè)的樣品溶液并對(duì)HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab的濃度進(jìn)行分析。試驗(yàn)對(duì)腸膜的穿過能力作為滲透性的指標(biāo)。滲透性系數(shù)用化合物在穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)在表面積為A的漿膜的變化率dQ/dt和它在粘膜側(cè)初始濃度C0，根據(jù)公式Papp＝dQ/dt*1/AC0來計(jì)算。
結(jié)果顯示在圖1中，圖中的N代表實(shí)驗(yàn)中所用的大鼠的數(shù)量。結(jié)果表明，凝血酶抑制劑HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab通過腸膜進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的滲透性比兩種對(duì)照的蔗糖酯，一硬脂酸蔗糖酯和一棕櫚酸蔗糖酯強(qiáng)2-3倍。因此，該結(jié)果的顯著結(jié)論是，吸收增強(qiáng)劑的存在增加了治療活性劑的生物利用度。
縮寫詞Aze＝(S)-氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸Cgl＝(S)-環(huán)己基甘氨酸Pab＝1-脒基-4-氨甲基苯
權(quán)利要求
1.一種藥物制劑，該制劑包括治療活性化合物HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab的或者其立體異構(gòu)體或者其生理上可接受的鹽和一種或多種吸收增強(qiáng)劑，以及任選的藥物載體。
2.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是表面活性劑。
3.按權(quán)利要求2的藥物制劑，其中表面活性劑是一種烷基糖苷，如糖苷。
4.按權(quán)利要求2的藥物制劑，其中表面活性劑是脂肪酸糖酯。
5.按權(quán)利要求4的藥物制劑，其中脂肪酸糖酯是一硬脂酸蔗糖酯或一棕櫚酸蔗糖酯。
6.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是一種非甾體抗炎藥物或它的衍生物。
7.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是膽鹽。
8.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是脂質(zhì)。
9.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是一種皂、脂肪酸、肉毒堿的脂肪酸衍生物或一種肽。
10.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是一種油。
11.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是一種烯胺。
12.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是一種螯合劑。
13.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是一種吩噻嗪。
14.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是一種美拉德反應(yīng)(Maillard reactwns)的產(chǎn)物。
15.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是一種聚合物。
16.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是氮酮，伴刀豆球蛋白A，磷酸酯或膦酸酯衍生物，馬來酸二乙酯或丙二酸二乙基乙氧亞甲酯。
17.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是脂質(zhì)類、脂質(zhì)和磷酯，脂質(zhì)和膽鹽、脂質(zhì)和油、脂質(zhì)和表面活性劑，脂質(zhì)和聚合物的組合物。
18.按權(quán)利要求1的藥物制劑，其中吸收增強(qiáng)劑是表面活性劑和油的組合物。
19.按在前任一權(quán)利要求的藥物制劑，其中活性化合物HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab呈游離堿狀態(tài)。
20.由在前任一權(quán)利要求限定的藥物制劑的制備方法，其特征在于向化合物HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab的溶液中加入一種吸收增強(qiáng)劑，由緩沖劑將pH調(diào)節(jié)到治療上可接受的pH，并將所有的成分混合。
21.由在前權(quán)利要求1-19任一權(quán)利要求所限定的藥物制劑在治療血栓栓塞方面的用途。
22.對(duì)需要抗血栓形成治療病人進(jìn)行治療的一種治療方法，包括給該病人施用有效量的、由權(quán)利要求1-19任一權(quán)利要求所限定的藥物制劑。
23.一種治療血栓栓塞的方法，包括將限于上述1-19任何一個(gè)權(quán)利要求中的藥物制劑以有效量施用于需要該治療的病人。
24.一種增加治療活性化合物HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab吸收的方法，該方法包括將選自表面活性劑、烷基糖苷、糖脂肪酸酯、膽鹽、脂質(zhì)、皂、脂肪酸或肉毒堿的脂肪酸衍生物，肽、非甾體抗炎藥、油、烯胺、螯合劑、吩噻嗪、聚合物，麥拉德反應(yīng)的產(chǎn)物、氮酮、伴刀豆球蛋白A、磷酸酯或膦酸酯衍生物、馬來酸二乙酯、丙二酸的乙基乙氧亞甲酯或其組合物的吸收增強(qiáng)劑加到上述活性化合物溶液中，任選地用緩沖劑將pH調(diào)至治療上可接受的pH并且混合所有的成分。
25.按權(quán)利要求24的方法，其中吸收增強(qiáng)劑選自一硬脂酸蔗糖酯或一棕櫚酸蔗糖酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的藥物制劑，該制劑包括凝血酶抑制劑HOOC-CH
文檔編號(hào)C07K14/81GK1168635SQ9519658
公開日1997年12月24日 申請(qǐng)日期1995年11月29日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月2日
發(fā)明者J·E·洛夫羅施, A·L·昂格爾 申請(qǐng)人:阿斯特拉公司