專利名稱：去鐵胺制劑和多晶型物及其制備方法
發(fā)明概述本發(fā)明涉及去鐵胺-1-癸-磺酸鹽的新多晶型結(jié)晶體及其制備方法和藥物組合物，本發(fā)明還涉及該結(jié)晶體用于治療目的的用途及其藥物組合物的制備方法；本發(fā)明也涉及其它的晶形?？偟膩?lái)講，本發(fā)明還涉及新的含有去鐵胺-B鹽作為活性組分的藥物組合物。發(fā)明背景在US3247197中描述了去鐵胺-B及其藥物上可接受的加成鹽的制備方法。諸如在上述美國(guó)專利中描述的該胺及其鹽具有與三價(jià)金屬離子，尤其是鐵離子形成穩(wěn)定配合物的突出能力。因此，在諸如β-地中海貧血癥的鐵過(guò)量疾病的治療中，作為藥物鐵螯合劑，去鐵胺-B(甲磺酸鹽形式，商品名Desferal)是極其重要的。它是目前市場(chǎng)上可購(gòu)得的極少數(shù)用于治療地中海貧血癥的藥物之一。
作為控制β-地中海貧血癥中的輸血鐵過(guò)量所必需的方法，目前廣泛采用的是經(jīng)緩慢皮下輸注(8-12小時(shí))進(jìn)行去鐵胺-B(甲磺酸鹽的形式)給藥。然而，這種治療方法對(duì)病人而言顯得麻煩、不舒服和不方便，并且費(fèi)用高。病人適應(yīng)性差，即對(duì)鐵螯合療法的不適應(yīng)性已被認(rèn)為是導(dǎo)致地中海貧血癥病人死亡的最重要原因。因此急需一種更為簡(jiǎn)單和方便且費(fèi)用更低的鐵螯合療法用于治療鐵過(guò)量。
長(zhǎng)期以來(lái)，這種需求是顯而易見(jiàn)的，并且，為了獲得一種形式的去鐵胺-B(當(dāng)采用更為方便的方法實(shí)施給藥時(shí)，該形式的去鐵胺-B在鐵過(guò)量治療中是有效的)，多年來(lái)已進(jìn)行了大量的嘗試。在W093/24451中描述了用于口服給藥的去鐵胺-B有機(jī)磺酸鹽。
在有機(jī)化學(xué)物質(zhì)的化學(xué)和藥物研制中，有機(jī)化學(xué)物質(zhì)的形態(tài)和多晶型現(xiàn)象是極其重要的。僅有單一晶形的物質(zhì)是已知的，同樣，也存在具有兩個(gè)、三個(gè)甚至是更多個(gè)多晶型物的物質(zhì)?；趹?yīng)用數(shù)學(xué)，不能計(jì)算或預(yù)測(cè)可能的形態(tài)和結(jié)構(gòu)變體以及各自的物化關(guān)系曲線，尤其是熱力學(xué)穩(wěn)定性曲線。就晶形數(shù)目及其穩(wěn)定性而言，相關(guān)的有機(jī)化學(xué)物質(zhì)的多晶型現(xiàn)象是如此驚人。
如果物質(zhì)的兩種、三種或更多種晶形是已知的，那么一般來(lái)講，它們的絕對(duì)和相對(duì)物化穩(wěn)定性是可以測(cè)定的。在整個(gè)化學(xué)和藥物制備過(guò)程中，不穩(wěn)定晶形會(huì)帶來(lái)很多不利，這是因?yàn)樵谥苽溥^(guò)程的各個(gè)步驟中或在各中間儲(chǔ)存過(guò)程中，不穩(wěn)定晶形可能會(huì)部分或全部轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定晶形。由于亞穩(wěn)性，不穩(wěn)定晶形可以長(zhǎng)期保持并最終可能在某個(gè)不確定的時(shí)候發(fā)生自然轉(zhuǎn)變。這種向更穩(wěn)定晶形轉(zhuǎn)化的可能性與各制備批次有關(guān)，并且不能逐一預(yù)見(jiàn)。因而，可能又對(duì)化學(xué)研究和藥物臨床研究造成困難。例如，通過(guò)諸如溶解度的變化，這些晶形轉(zhuǎn)變可使藥物的生物利用率產(chǎn)生劇變。
在例如US3247197中描述了去鐵胺-B和其藥物上可接受的鹽的制備方法。諸如在上述美國(guó)專利中描述的該胺及其鹽具有與三價(jià)金屬離子，尤其是鐵離子Fe3+形成穩(wěn)定配合物的突出能力。因此，在例如與鐵過(guò)量有關(guān)的疾病，如β-地中海貧血癥的治療中，作為藥物上可采用的鐵螯合劑，去鐵胺-B(甲磺酸鹽形式，商品名Desferal)是極為重要的。它是目前市場(chǎng)上可購(gòu)得的極少數(shù)用于治療地中海貧血癥的藥物之一。
作為控制由輸血引起的β-地中海貧血癥患者鐵過(guò)量的方法，目前廣泛采用的是經(jīng)緩慢皮下輸注(8-12小時(shí))進(jìn)行去鐵胺-B(甲磺酸鹽的形式)給藥。然而，這種治療方法對(duì)病人而言顯得麻煩、不舒服和不方便，并且費(fèi)用高。因此急需一種更為簡(jiǎn)單和方便且費(fèi)用更低的鐵螯合療法。
根據(jù)本發(fā)明，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，某些去鐵胺-B脂族磺酸鹽可以持續(xù)釋放制劑進(jìn)行混合，并且這種制劑可采用方便的注射法按適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔以較小的劑量進(jìn)行腸胃外給藥，去鐵胺-B鹽在注射間隔時(shí)間內(nèi)逐漸釋放。因此，本發(fā)明提供了含有懸浮于腸胃外給藥用油中的具有至少8個(gè)碳原子的脂族磺酸去鐵胺-B鹽顆粒的腸胃外注射組合物。
作為對(duì)長(zhǎng)期使用的Desferal的改進(jìn)，EP 643690中特別公開(kāi)了以去鐵胺-B的1-癸磺酸鹽作為鐵螯合劑。然而，其中未記載去鐵胺-1-癸磺酸鹽是否存在其它的晶體變型。令人吃驚的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了該物質(zhì)的一些新晶形。因此，本發(fā)明還涉及去鐵胺-1-癸磺酸鹽的新穩(wěn)定結(jié)晶體及其制備方法。


附圖1/3是去鐵胺癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2的X-射線圖。橫坐標(biāo)(X-軸)衍射角2θ(范圍3°-30°)；縱坐標(biāo)(Y-軸)相對(duì)強(qiáng)度。
附圖2/3是去鐵胺癸磺酸鹽的結(jié)晶體A1的X-射線圖。橫坐標(biāo)(X-軸)衍射角2θ(范圍3°-30°)；縱坐標(biāo)(Y-軸)相對(duì)強(qiáng)度。
附圖3/3是去鐵胺癸磺酸鹽的結(jié)晶體B(與結(jié)晶體A11-A13的混合物)的X-射線圖。橫坐標(biāo)(X-軸)衍射角2θ(范圍3°-30°)；縱坐標(biāo)(Y-軸)相對(duì)強(qiáng)度。發(fā)明詳述本發(fā)明的第一優(yōu)選方案涉及含有懸浮于腸胃外給藥油中的具有至少8個(gè)碳原子的脂族磺酸的去鐵胺-B鹽顆粒的腸胃外注射組合物。
一般，去鐵胺-B鹽可以是具有8-20個(gè)碳原子的脂族磺酸的鹽。所述酸包括烴基磺酸，例如，鏈烷磺酸、鏈烯磺酸和炔基磺酸，如辛烷-1-磺酸、辛烷-2-磺酸、壬烷-1-磺酸、壬烷-2-磺酸、正癸磺酸、正十二磺酸、十四磺酸、十六磺酸、十八磺酸、辛烯-1-磺酸、癸烯-1-磺酸、十二碳烯-1-磺酸、十四碳烯-1-磺酸、十六碳烯-1-磺酸或癸基乙炔基磺酸，以及烴基被諸如羥基、C1-C4烷氧基、酰氧基、C1-C4烷氧羰基、鹵素或氨基取代的上述酸?？梢园碬O93/24451中的描述制備該鹽。
去鐵胺-B鹽優(yōu)選為具有8-20個(gè)碳原子，優(yōu)選8-10個(gè)碳原子的脂族磺酸的鹽，尤其是正辛磺酸或正癸磺酸的鹽。本發(fā)明使用的去鐵胺-B正癸磺酸鹽的優(yōu)選的特別穩(wěn)定晶形為晶體變型A2，下文將對(duì)該晶形進(jìn)行更詳細(xì)描述。
本發(fā)明使用的去鐵胺-B正癸磺酸鹽的其它優(yōu)選晶形為晶體變型A1，用DSC(差示掃描量熱法)測(cè)得該晶形熔點(diǎn)為140-153℃并且在其X-射線衍射圖樣中具有下述特征衍射線(2θ衍射角±0.1°)4.1°、6.3°、8.4°、10.5°、12.6°、16.9°、18.0°、19.8°、20.8°、22.1°、25.0°、25.6°和26.4°(參見(jiàn)下文的詳細(xì)說(shuō)明)。結(jié)晶體A1不及結(jié)晶體A2穩(wěn)定，尤其是在水和極性溶劑或其混合物存在的條件下更是如此。然而，在本發(fā)明組合物的腸胃外給藥油中，結(jié)晶體A1是動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定的。
在低于室溫，優(yōu)選在0-5℃的溫度下，通過(guò)將正癸磺酸堿金屬鹽的水溶液逐漸加入到去鐵胺-B甲磺酸鹽的水溶液中，可以制得結(jié)晶體A2。然后，將該混合物加熱至升高的溫度，優(yōu)選溫度范圍為室溫-該混合物的沸點(diǎn)，更優(yōu)選30-80℃。
適用于本發(fā)明組合物的另一種去鐵胺-B正癸磺酸鹽晶形是結(jié)晶體A1與結(jié)晶體B的混合物。結(jié)晶體B熔點(diǎn)為大約142℃(用DSC法測(cè)定)并且在其X-射線衍射圖樣中具有下述特征衍射線(2θ衍射角±0.1°)3.5°、7.1°、8.9°、9.9°、11.3°、12.3°、19.0°、21.7°、22.1°和23.8°。結(jié)晶體B不及結(jié)晶體A1穩(wěn)定，當(dāng)升溫速率為10℃/min時(shí)，它轉(zhuǎn)化為結(jié)晶體A1。如WO93/24451中實(shí)施例1所述，將癸烷-1-磺酸與去鐵胺-B游離堿反應(yīng)生成粗鹽，將粗鹽溶解在含水乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，過(guò)濾所得溶液，并在減壓條件下除去部分乙醇直至產(chǎn)物析出，由此可制得結(jié)晶體A1和結(jié)晶體B的混合物。
懸浮于油中的去鐵胺-B鹽顆粒平均粒徑一般為1-1000微米，優(yōu)選3-500微米，尤其是5-100微米，更優(yōu)選5-10微米。
腸胃外給藥用油可以是任何藥物上可接受的油或藥物上可接受油的混合物，其粘度應(yīng)適合于注射給藥。所述油包括礦物油、植物油和動(dòng)物油以及由這些油得到的脂肪酸酯，優(yōu)選植物油或由植物油得到的脂肪酸酯，例如，精制石蠟油、蓖麻油、芝麻油、棉籽油、葵花油、椰子油、棕櫚仁油、花生油、麥胚油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、椰子脂肪酸酯和棕櫚仁脂肪酸酯，即，辛酸和癸酸與甘油或丙二醇的酯，以及上述兩種或多種油的混合物。腸胃外給藥油優(yōu)選包括油酸乙酯、油酸乙酯與芝麻油的混合物或辛酸與癸酸混合物的甘油三酯。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，腸胃外給藥油含有25-100重量％油酸乙酯和0-75重量％芝麻油，或者腸胃外給藥油含有辛酸與癸酸混合物的甘油三酯，辛酸與癸酸的重量比為10∶9-13∶6。所述甘油三酯可從市場(chǎng)上購(gòu)得，例如，從德國(guó)Hls AG購(gòu)得的Miglyol 812。
在本發(fā)明組合物中，去鐵胺-B鹽一般以治療有效量存在，對(duì)于每毫升腸胃外給藥用油，去鐵胺-B鹽的量通常為0.05-0.4g，優(yōu)選0.1-0.3g。組合物適于以腸胃外注射劑量存在于諸如玻璃或塑料注射器或小瓶或聚乙烯容器的適當(dāng)容器中，所述腸胃外注射劑量一般為0.5-10ml，優(yōu)選3-7ml。優(yōu)選將組合物裝在預(yù)裝(prefilled)注射器或封口(bottlepack)聚乙烯容器中并從該注射器或容器中給藥。
在某些情況下，本發(fā)明組合物最好還含有表面活性劑(乳化劑)。組合物中含有乳化劑(含量?jī)?yōu)選為組合物的0.1-3體積％)可防止固體去鐵胺-B鹽顆粒的聚集傾向并有利于鹽顆粒在油中更均勻分散。合適的表面活性劑包括藥物上可接受的非離子表面活性劑，優(yōu)選親脂性表面活性劑，例如，脫水山梨糖醇脂肪酸酯，特別是脫水山梨糖醇一月桂酸酯、脫水山梨糖醇一油酸酯和脫水山梨糖醇三油酸酯，聚山梨醇酯，如聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一月桂酸酯、聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯、聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯和聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐三油酸酯，聚氧化亞乙基二醇的C10-C20烷基醚，如聚氧乙烯(4)十二烷基醚，和磷脂表面活性劑，如大豆卵磷脂。
本發(fā)明組合物中還可以含有其它的諸如在常規(guī)腸胃外注射給藥組合物中使用的賦形劑，例如，滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖和氯化鈉，防腐劑，如苯甲醇、苯甲酸芐酯和對(duì)羥基苯甲酸的甲酯和丙酯，以及抗氧劑，如丁化甲酚和生育酚。
本發(fā)明還提供了如上所述的本發(fā)明組合物的制備方法，該方法包括將去鐵胺-B鹽顆粒與腸胃外給藥用油和表面活性劑(如果存在的話)混合。在適宜的實(shí)施方案中，分兩階段進(jìn)行混合，其中(a)將鹽與部分油進(jìn)行研磨，和(b)將剩余的油加入到磨過(guò)的混合物中，如果使用表面活性劑，則在階段(a)和/或階段(b)中添加表面活性劑。如果給藥用油含有粘度不同的油的混合物，例如，含有芝麻油和油酸乙酯的混合物，那么可以在加入較低粘性油之前，將鹽與較高粘性油方便地混合。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將去鐵胺-B鹽加入到油或油與表面活性劑的混合物中，采用藥學(xué)上可接受的研磨法優(yōu)選在膠體磨等中均化所得混合物，直至獲得所需鹽粒徑?；蛘?，可以使用空氣噴射磨將去鐵胺鹽微粉化，使用utraturrax混合器將該鹽懸浮于油相中，隨后填充到所需容器中并用γ或β射線(10-100kGy千戈瑞放射劑量)或熱處理對(duì)容器和藥物消毒。
在無(wú)菌條件下提純?nèi)ヨF胺-B鹽，使用常規(guī)方法，例如，使用孔徑為0.22μm的過(guò)濾器過(guò)濾或在170℃加熱至少2小時(shí)將油消毒，并在無(wú)菌條件下將無(wú)菌油與純化的去鐵胺-B鹽混合，由此可確保制得本發(fā)明無(wú)菌組合物。
通過(guò)例如肌肉或皮下注射可以進(jìn)行本發(fā)明組合物的腸胃外給藥。在進(jìn)行本發(fā)明組合物腸胃外給藥后，去鐵胺-B可以經(jīng)48小時(shí)緩慢釋放。向患者給藥的去鐵胺-B鹽劑量可高達(dá)每天大約4g，例如，每天500mg-4g。通過(guò)每天或每?jī)商爝M(jìn)行一次快速濃注可以方便地完成該劑量的輸注。本發(fā)明包括治療鐵過(guò)量疾病、鋁過(guò)量、阿爾茨海默氏病、瘧疾、再輸注損傷(reperfusion injury)或癌癥的方法，該方法包括對(duì)需要進(jìn)行上述治療的溫血哺乳動(dòng)物，尤其是人類腸胃外注射上文定義的本發(fā)明組合物。
本發(fā)明還涉及去鐵胺-1-癸磺酸鹽(該鹽優(yōu)選用于上文提及的組合物及其制備中)的新穩(wěn)定晶形及該晶形的制備方法。
本發(fā)明涉及式1所示的去鐵胺-1-癸磺酸鹽晶形(N-[5-{3-[(5-氨基戊基)-羥氨基甲?；鵠-丙酰氨基}-戊基]-3-[{5-(N-羥基乙酰氨基戊基}-氨基甲酰基]-丙?；惲u肟酸-1-癸磺酸鹽)，
在氮?dú)庀?，?0℃/min的加熱速率進(jìn)行差示掃描量熱法，測(cè)得該結(jié)晶體的熔點(diǎn)范圍為154-158℃，并且在其X-射線圖中具有下述特征衍射線(2θ衍射角±0.1°)3.1°、7.3°、9.4°、13.7°和23.7°。
本發(fā)明尤其涉及去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體，在氮?dú)庀?，?0℃/min的加熱速率進(jìn)行差示掃描量熱法，測(cè)得該結(jié)晶體的熔點(diǎn)范圍為154-158℃，并且在其X-射線圖中具有下述特征衍射線(2θ衍射角±0.1°)3.1°、4.2°、7.3°、8.4°、9.4°、10.5°、13.7°、16.8°、17.4°、18.0°、18.4°、19.6°、20.1°、20.9°、22.3°、23.7°、25.1°和25.6°。
該新特定晶形(本發(fā)明稱作“結(jié)晶體A2”)的特性優(yōu)于去鐵胺-1-癸磺酸鹽的所有其它已知晶形的特性。在通常的溫度范圍內(nèi)，結(jié)晶體A2的物化和熱力學(xué)穩(wěn)定性優(yōu)于其它的已知晶形，因而更適合于固態(tài)化學(xué)物質(zhì)的生產(chǎn)和藥物制劑的開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)及治療應(yīng)用。更準(zhǔn)確地講，與結(jié)晶體A2相比，所有已知的晶形是亞穩(wěn)態(tài)的。因此，不論在生產(chǎn)、儲(chǔ)存中和在治療應(yīng)用過(guò)程中(例如在貯存注射之后)使用的分散劑是什么，只有結(jié)晶體A2不會(huì)發(fā)生固態(tài)轉(zhuǎn)變。而且，結(jié)晶體A2比結(jié)晶體A1易于研磨。
在熔點(diǎn)范圍內(nèi)，結(jié)晶體A2具有良好的熱穩(wěn)定性。在10℃/min的加熱速率下，結(jié)晶體A2在148-162℃的溫度范圍內(nèi)(包括熔點(diǎn)溫度范圍154-158℃在內(nèi))熔化。
特別優(yōu)選由附圖1/3X射線圖表征的結(jié)晶體A2。
除了結(jié)晶體A2外，本發(fā)明還提供了其它不太穩(wěn)定的結(jié)晶體。結(jié)晶體A1的熔點(diǎn)范圍為140-153℃。它相當(dāng)于EP643690中記載的晶形。更精確的差示掃描量熱法(DSC)表明，結(jié)晶體A1是由4個(gè)熔點(diǎn)為148℃、150℃、152℃和153℃的亞晶形A11、A12、A13和A14組成。這些亞晶形是在物質(zhì)的制備過(guò)程中以不同的數(shù)量比獲得并一起生成結(jié)晶體A1。
結(jié)晶體B可同樣出現(xiàn)在去鐵胺-1-癸磺酸鹽的制備過(guò)程中。DSC表明其熔點(diǎn)為大約142℃，并且在10℃/min的加熱速率下，可以觀察到結(jié)晶體B轉(zhuǎn)化為A1的一種或幾種亞晶形，即A11-A14。
具體地說(shuō)，由DSC獲得了有關(guān)不同晶形的下列數(shù)據(jù)去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2的DSC圖，樣品重2.177mg，在氮?dú)庀?，?0℃/min的加熱速率，測(cè)得熔點(diǎn)為T42熔點(diǎn)＝155℃。
去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A11、A12和A13的DSC圖，樣品重2.747mg，在氮?dú)庀拢?0℃/min的加熱速率，測(cè)得下列熔點(diǎn)TA11熔點(diǎn)＝148℃；TA12熔點(diǎn)＝150℃和TA13熔點(diǎn)＝152℃。
去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A1的DSC圖，樣品重2.683mg，在氮?dú)庀?，?0℃/min的加熱速率，測(cè)得下列熔點(diǎn)TA12熔點(diǎn)＝149℃；TA13熔點(diǎn)＝151℃和TA14熔點(diǎn)＝153℃。
去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體B(與結(jié)晶體A11-A13的混合物)的DSC圖，樣品重2.285mg，在氮?dú)庀?，?0℃/min的加熱速率，測(cè)得下列熔點(diǎn)TB熔點(diǎn)＝142℃。
除了熔點(diǎn)外，還可以根據(jù)X射線粉末圖區(qū)分晶形。在透射幾何形狀(transmission geometry)的紀(jì)尼葉相機(jī)中用Cu-Kα1射線拍得的X射線粉末圖優(yōu)選用于表征有機(jī)物固體。特別是X-射線衍射圖樣已被成功地用于測(cè)定物質(zhì)的不同晶形。為了表征本發(fā)明的去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2，在室溫下進(jìn)行檢測(cè)并在3°-30°的衍射角(2θ)范圍內(nèi)記錄X射線照片。對(duì)于Cu-Kα1射線，列出了本發(fā)明所有的衍射角2θ。表1去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2的X射線衍射圖樣(最重要衍射線的衍射角和強(qiáng)度)(圖5)
表2和3重述了上述結(jié)晶體A1和結(jié)晶體B的X射線衍射圖樣。表2去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A1的X射線衍射圖樣(最重要衍射線的衍射角和強(qiáng)度)(圖6)
表3去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體B的X射線衍射圖樣(最重要衍射線的衍射角和強(qiáng)度)(圖6)
X射線衍射圖樣證明了用A1、A2和B表示的去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體是完全不同的多晶型晶體。X射線衍射圖樣與可測(cè)得結(jié)晶體A1的4個(gè)不同熔點(diǎn)的DSC法(參見(jiàn)上文)相比，其區(qū)別在于X射線衍射圖樣太小，不能反映出對(duì)應(yīng)于表2的反射角2θ值的明顯偏差。
用于區(qū)分結(jié)晶體的另一個(gè)合適的參數(shù)通常是它們的收濕性，由此可判斷結(jié)晶體的穩(wěn)定性。例如，在已知相對(duì)濕度的氣氛，優(yōu)選氮?dú)夥罩?，通過(guò)稱重水蒸氣吸收率可測(cè)得試驗(yàn)物質(zhì)的吸水性。表4在25℃，結(jié)晶體A1和A2的吸水百分?jǐn)?shù)
與結(jié)晶體A1相比，結(jié)晶體A2具有明顯較低的吸水性，這表明本發(fā)明的結(jié)晶體A2的穩(wěn)定性更高。
本發(fā)明還涉及生產(chǎn)本發(fā)明去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2的方法。
該方法的特征在于，在至少一個(gè)工序中，將未知或未詳細(xì)說(shuō)明晶型組成的去鐵胺-1-癸磺酸鹽在極性溶劑中的懸浮液保持在升高的溫度下；或者在至少一個(gè)工序中，在升高的溫度下制得去鐵胺-1-癸磺酸鹽在極性溶劑中的濃溶液，然后在2℃/min或更低的冷卻速率下進(jìn)行結(jié)晶。
極性溶劑是例如極性有機(jī)化合物，例如，低級(jí)醇、低級(jí)酮、低級(jí)腈和低級(jí)環(huán)醚，和水或其混合物。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)”是指含有1-4個(gè)碳原子和一個(gè)或兩個(gè)諸如氧、氮和/或硫的雜原子的有機(jī)化合物。優(yōu)選的極性有機(jī)溶劑是水溶性有機(jī)溶劑，例如，甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丙酮、乙基甲基酮、乙腈、四氫呋喃或?qū)Χ蹼s環(huán)己烷。水或水溶性有機(jī)溶劑，特別是甲醇、乙醇、正丙醇和/或異丙醇與水的混合物尤其有利于制備本發(fā)明的結(jié)晶體A2。最優(yōu)選水。
所述“升高的溫度”是指“室溫-溶劑或溶劑混合物沸點(diǎn)”的溫度范圍，優(yōu)選30-80℃，或者是指“室溫-極性溶劑沸點(diǎn)”的溫度范圍，該溫度范圍一般也較低，優(yōu)選35-60℃。
所述“濃溶液”是指含有一定量溶解物質(zhì)的溶液，當(dāng)冷卻該溶液至較低溫度時(shí)，溶解的物質(zhì)將會(huì)部分結(jié)晶。優(yōu)選的濃溶液是飽和或稍稍過(guò)飽和的溶液。如果不升高溫度，則物質(zhì)的飽和或過(guò)飽和溶液將不會(huì)再溶解任何物質(zhì)。比如，通過(guò)將飽和溶液快速冷卻至稍稍較低的溫度下即可制得過(guò)飽和溶液。使用飽和溶液是特別有利的。
優(yōu)選的溶液冷卻速率為2℃/min或更低。1℃/min或更低的冷卻速率是尤其有利的。
在該方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，加入至少一粒晶種。
例如，通過(guò)將懸浮液保持在所述升高的溫度下，由不太穩(wěn)定的晶形或幾種不太穩(wěn)定晶形的混合物可制得適當(dāng)?shù)木ХN。
在該方法特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，制備極性溶劑中的去鐵胺甲磺酸鹽溶液，加熱至所需溫度，然后將在同樣的或別的極性溶劑中的等摩爾1-癸磺酸鹽溶液的一部分加入到其中，加入至少一粒晶種，保持此狀態(tài)直至發(fā)生結(jié)晶作用，然后將在同樣的或別的極性溶劑中的等摩爾1-癸磺酸鹽溶液的剩余部分緩慢加入其中，之后維持所需溫度；或者在升高的溫度下制得極性溶劑中的去鐵胺-1-癸磺酸鹽的熱飽和溶液，在加入至少一粒晶種后，以1℃/min或更低的冷卻速率冷卻至較低的升高溫度，在此期間發(fā)生結(jié)晶作用，將晶體懸浮液保持在該較低溫度下。
所述“1-癸磺酸鹽”可以是例如在選用的極性溶劑中比去鐵胺-1-癸磺酸鹽具有更好溶解性的所有1-癸磺酸的鹽。這些鹽可以是與堿的鹽，例如，相應(yīng)的堿金屬鹽，如鈉鹽或鉀鹽或氨或有機(jī)胺的鹽，所述氨或有機(jī)胺是例如，環(huán)胺，如一、二或三烷基胺，如羥基-低級(jí)烷基胺，如一、二或三羥基-低級(jí)烷基胺，羥基-低級(jí)烷基-低級(jí)烷基胺或多羥基-低級(jí)烷基胺。環(huán)胺是例如嗎啉、硫代嗎啉、哌啶或吡咯烷。一低級(jí)烷基胺可以是例如乙基和叔丁基胺，二低級(jí)烷基胺可以是例如二乙基和二異丙基胺，三低級(jí)烷基胺可以是例如三甲基和三乙基胺。相應(yīng)的羥基-低級(jí)烷基胺是例如一、二和三乙醇胺，羥基-低級(jí)烷基-低級(jí)烷基胺是例如N，N-二甲基氨基和N，N-二乙基氨基乙醇，多羥基-低級(jí)烷基胺可以是例如葡糖胺。優(yōu)選藥物上可接受的鹽，尤其是鈉鹽。
用基本已知的方式從母液中分離收集晶體，例如，在或不在加壓和/或抽真空條件下進(jìn)行過(guò)濾，或進(jìn)行離心，并隨后進(jìn)行干燥。
本發(fā)明還涉及含有作為活性組分的去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2和藥物上可接受的載體的藥物制劑，優(yōu)選如上文和下文所述。本發(fā)明還涉及該藥物制劑的制備方法，優(yōu)選如上文所述。本發(fā)明還涉及去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2在治療選自鐵過(guò)量疾病、鋁過(guò)量、阿爾茨海默氏病、瘧疾、再輸注損傷(reperfusioninjury)和癌癥的疾病，尤其是治療地中海貧血癥中的用途或在制備治療上述疾病的藥物制劑中的用途。本發(fā)明進(jìn)一步涉及治療選自鐵過(guò)量疾病、鋁過(guò)量、阿爾茨海默氏病、瘧疾、reperfusioninjury和癌癥的疾病的方法，尤其涉及治療地中海貧血癥的方法，該方法包括對(duì)需要上述治療的患者使用一定劑量的去鐵胺-1-癸磺酸鹽結(jié)晶體A2，使用的劑量在所述疾病的治療中為藥物有效量。
在所有情況下，活性組分的劑量和百分比與常規(guī)劑量和百分比相一致，尤其為上文和下文所述的劑量和百分比。實(shí)施例本發(fā)明用下述實(shí)施例描述，其中除非另有說(shuō)明，份用重量表示。但本發(fā)明不受實(shí)施例的限制。實(shí)施例中所用的去鐵胺-B正癸磺酸鹽，樣品I制備如下在0-5℃，經(jīng)60分鐘，將10％的1-癸磺酸鈉鹽水溶液加入到20％的去鐵胺-B甲磺酸鹽水溶液中，癸磺酸鹽與甲磺酸鹽的摩爾比為1∶1。沉淀出去鐵胺-B正癸磺酸鹽。在過(guò)濾收集產(chǎn)物前，于0-5℃，將該懸浮液再攪拌1-2小時(shí)。用水洗滌產(chǎn)物，并在40℃真空干燥20小時(shí)，最后過(guò)篩防止產(chǎn)物結(jié)塊。實(shí)施例中所用的去鐵胺-B正癸磺酸鹽，樣品II制備如下在30-40℃，將去鐵胺-B甲磺酸鹽(12.3份)溶解于水(47份)中，在50℃，經(jīng)幾分鐘，向其中加入正癸磺酸鈉(0.7份)的水(12.0份)溶液。加入去鐵胺-B正癸磺酸鹽(0.08份)使溶液結(jié)晶，在50℃攪拌所得懸浮液30分鐘，然后，在50-52℃，在攪拌條件下，經(jīng)3-4小時(shí)，再次緩慢加入正癸磺酸鈉(3.8份)的水(64份)溶液。在50-52℃，將所得懸浮液再攪拌1-2小時(shí)并冷卻過(guò)夜至40℃。過(guò)濾收集產(chǎn)物，用水洗滌，在50℃真空干燥20小時(shí)，最后過(guò)篩防止產(chǎn)物結(jié)塊。實(shí)施例中所用的去鐵胺-B正癸磺酸鹽，樣品III制備如下在40℃，將由正癸磺酸與WO93/24451的實(shí)施例1中描述的去鐵胺-B游離堿(548g)反應(yīng)制得的粗去鐵胺-B正癸磺酸鹽溶解在乙醇(3000ml)和水(600 ml)的混合物中。過(guò)濾溶液并在40℃減壓(40mbar)蒸餾濃縮濾液。用水(3000)稀釋得到的濃懸浮液，過(guò)濾收集產(chǎn)物，用水洗滌，在50℃/20mbar真空干燥20小時(shí)，最后過(guò)篩防止產(chǎn)物結(jié)塊。
在實(shí)施例1-16中，得到所述的去鐵胺-B鹽腸胃外注射組合物。并給出了所得的各種懸浮去鐵胺-B鹽的平均粒徑和顆粒大小分布的結(jié)果。實(shí)施例1組合物A將去鐵胺-B正癸磺酸鹽樣品I(1g)與芝麻油(3.75ml)和聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯(0.02ml)混合直至得到無(wú)塊懸浮液。向所得懸浮液中加入油酸乙酯(1.25ml)并隨即用研棒和研缽將其充分混合。結(jié)果平均粒徑為59.18μm；顆粒大小分布為90％小于113.19μm，50％小于50.08μm和10％小于5.41μm。實(shí)施例2組合物B用2.5ml芝麻油和2.5ml油酸乙酯代替其在實(shí)施例1中的用量，重復(fù)實(shí)施例1。結(jié)果平均粒徑為66.34μm；顆粒大小分布為90％小于121.78μm，50％小于62.34μm和10％小于6.49μm。實(shí)施例3組合物C用1.25ml芝麻油和3.75ml油酸乙酯代替其在實(shí)施例1中的用量，重復(fù)實(shí)施例1。結(jié)果平均粒徑為68.97μm；顆粒大小分布為90％小于119.31μm，50％小于66.97μm和10％小于7.97μm。實(shí)施例4組合物D用0.043ml聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯代替其在實(shí)施例2中的用量，重復(fù)實(shí)施例2。結(jié)果平均粒徑為57.02μm；顆粒大小分布為90％小于107.45μm，50％小于54.65μm和10％小于4.99μm。實(shí)施例5組合物E不用聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯，重復(fù)實(shí)施例2。結(jié)果平均粒徑為60.04μm；顆粒大小分布為90％小于112.84μm，50％小于56.42μm和10％小于5.25μm。實(shí)施例6組合物F用2.5ml芝麻油、2.5ml油酸乙酯和0.043ml聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯代替其在實(shí)施例1中的用量，并且在制備的第一階段中將上述組份與脫水山梨糖醇三油酸酯(0.057ml)混合，重復(fù)實(shí)施例1。結(jié)果平均粒徑為60.36μm；顆粒大小分布為90％小于109.36μm，50％小于58.14μm和10％小于5.12μm。實(shí)施例7組合物G用大豆卵磷脂(0.011g)代替實(shí)施例2中使用的聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯，重復(fù)實(shí)施例2。結(jié)果平均粒徑為43.13μm；顆粒大小分布為90％小于93.62μm，50％小于34.26μm和10％小于4.98μm。實(shí)施例8組合物H用0.027g大豆卵磷脂代替其在實(shí)施例7中的用量，重復(fù)實(shí)施例7。結(jié)果平均粒徑為52.07μm；顆粒大小分布為90％小于117.62μm，50％小于39.98μm和10％小于5.99μm。實(shí)施例9組合物I將去鐵胺-B正癸磺酸鹽樣品II(1g)與芝麻油(2.5ml)和聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯(0.02ml)混合直至得到無(wú)塊懸浮液。向所得懸浮液中加入油酸乙酯(2.5ml)并隨即將其充分混合。結(jié)果平均粒徑為41.48μm；顆粒大小分布為90％小于99.19μm，50％小于26.31μm和10％小于5.24μm。實(shí)施例10組合物J用0.004ml聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯代替其在實(shí)施例9中的用量，重復(fù)實(shí)施例9。結(jié)果平均粒徑為43.60μm；顆粒大小分布為90％小于104.11μm，50％小于26.63μm和10％小于5.22μm。實(shí)施例11組合物K
用0.043ml聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯代替其在實(shí)施例9中的用量，重復(fù)實(shí)施例9。結(jié)果平均粒徑為30.60μm；顆粒大小分布為90％小于73.40μm，50％小于17.18μm和10％小于5.22μm。實(shí)施例12組合物L(fēng)不用實(shí)施例9中使用的聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯，重復(fù)實(shí)施例9。結(jié)果平均粒徑為43.75μm；顆粒大小分布為90％小于104.80μm，50％小于25.32μm和10％小于5.3μm。實(shí)施例13組合物M用3.75ml芝麻油和1.25ml油酸乙酯代替其在實(shí)施例9中的用量并且不用實(shí)施例9中使用的聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯，重復(fù)實(shí)施例9。結(jié)果平均粒徑為50.52μm；顆粒大小分布為90％小于118.97μm，50％小于31.87μm和10％小于6.91μm。實(shí)施例14組合物N用1.25ml芝麻油和3.75ml油酸乙酯代替其在實(shí)施例9中的用量并且不用實(shí)施例9中使用的聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯，重復(fù)實(shí)施例9。結(jié)果平均粒徑為35.83μm；顆粒大小分布為90％小于86.60μm，50％小于19.85μm和10％小于5.92μm。實(shí)施例15組合物0不用實(shí)施例9中使用的聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯，重復(fù)實(shí)施例9。結(jié)果平均粒徑為39.50μm；顆粒大小分布為90％小于96.33μm，50％小于22.08μm和10％小于6.23μm。實(shí)施例16組合物P用5.00ml油酸乙酯代替其在實(shí)施例9中的用量并且不使用實(shí)施例9中使用的芝麻油，重復(fù)實(shí)施例9。結(jié)果平均粒徑為35.44μm；顆粒大小分布為90％小于79.52μm，50％小于19.79μm和10％小于5.85μm。實(shí)施例17在倉(cāng)鼠中的血漿濃度I在三輥磨中將去鐵胺-B正癸磺酸鹽樣品I(1g)與緩慢加入的芝麻油(2.5ml)、油酸乙酯(2.5ml)、聚氧乙烯(20)單月桂酸酯(0.057ml)和聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐一油酸酯(0.043ml)的混合物研磨。如下所述，將所得的腸胃外注射懸浮液用于進(jìn)行去鐵胺-B鹽的體內(nèi)釋放試驗(yàn)按1ml/kg的劑量在100±20g的雄性金黃倉(cāng)鼠的頸背處皮下注射上述懸浮液。以不同的時(shí)間間隔定期麻醉動(dòng)物，通過(guò)心臟穿刺得到血樣，將血液收集在肝素化注射器中并離心。除去血漿，免疫測(cè)定血漿中去鐵胺-B和代謝產(chǎn)物B的總濃度。對(duì)于不同的時(shí)間間隔，以三只動(dòng)物的平均值所表示的結(jié)果如下時(shí)間(小時(shí)) 血漿中去鐵胺-B和代謝產(chǎn)物B的總濃度(μg/ml)3 24.576 14.3624 0.5330 0.5848 2.3154 0.7772 0.481680.45采用固相酶免疫測(cè)定法進(jìn)行免疫測(cè)定，所述固相酶免疫測(cè)定法能檢測(cè)到諸如血漿和尿的生物流體中鐵螯合物DesferalTM及其主要代謝產(chǎn)物B(MetB)的存在。為此，研制了多克隆兔抗體。該抗體能辨別母體分子去鐵胺(DFO)及其螯合物形式—鐵胺(FO)。該方法的主要原理如下通過(guò)生物素/鏈霉抗生物素的連接將FO涂于96孔板(Nunc Maxisorb)的孔中。用含有檸檬酸鐵(1mM)作為鐵源的稀釋(1/20緩沖液)生物流體(血清、尿等)繪制DFO或代謝產(chǎn)物B的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在同樣的流體中，對(duì)試驗(yàn)樣品進(jìn)行相應(yīng)稀釋。加入適當(dāng)稀釋的抗鐵胺抗體并進(jìn)行反應(yīng)。洗滌除去未結(jié)合抗體。使用與抗體結(jié)合的山羊抗兔lgG Fc片段辣根過(guò)氧化酶和過(guò)氧化酶底物檢測(cè)結(jié)合抗體。產(chǎn)生的色量與樣品中的DFO/MetB的量成反比。
抗體制備如下根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法制備致免疫的牛血清白蛋白(BSA)/去鐵胺綴合物(用N-琥珀酰亞氨基(succinimidyl)3-(2-吡啶基二硫代)-丙酸酯(proprionate)(SPDP)活化BSA，通過(guò)滲析除去過(guò)量的DPDP，用二硫蘇糖醇還原，得到結(jié)合了巰基的BSA，滲析，然后加入SPDP、DFO和N-甲基嗎啉，一小時(shí)后，在1000g離心5分鐘，并在4℃對(duì)磷酸鹽緩沖液(PBS)滲析17小時(shí)，在-80℃保存所得溶液。用類似的方法可得到匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)/DFO綴合物)。然后將分別與弗氏不完全佐劑混合的BSA-DFO綴合物和KLH-DFO綴合物(按1∶1混合)經(jīng)皮下交替注射至荷蘭兔(Harlan-Olac)體內(nèi)(450μg BSA-DFO 0月，300μg KLD-DFO 1月，250μg BSA-DFO2月，150μg KLH-DFO 3月，150μg BSA-DFO 6月，150μg KLH-DFO10月)。分離血液，在-20℃保存制得的血清。用常規(guī)方法在蛋白質(zhì)A-瓊脂糖上分離抗體。
在N-甲基嗎啉存在下，通過(guò)水/二甲基甲酰胺中的生物素-LC-NHS與FO反應(yīng)，制備生物素-FO/DFO綴合物。
競(jìng)爭(zhēng)分析法是基于樣品中的藥物與結(jié)合藥物為結(jié)合抗體而相互競(jìng)爭(zhēng)，而抗體可用結(jié)合了抗種抗體的辣根過(guò)氧化酶來(lái)檢測(cè)。通過(guò)在適當(dāng)?shù)纳锪黧w/緩沖液混合物中稀釋的DFO的標(biāo)準(zhǔn)曲線和代謝產(chǎn)物B(MetB)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(摩爾當(dāng)量濃度)測(cè)定藥物的濃度。抗體僅能識(shí)別鐵結(jié)合型DFO或任何鐵螯合型代謝產(chǎn)物，通過(guò)向樣品緩沖液中加入1mM檸檬酸鐵它們可就地進(jìn)行轉(zhuǎn)化。在兩種不同的緩沖液中進(jìn)行檢測(cè)，兩種不同的緩沖液為0.3M的PBS pH6.4或0.3M硼酸鹽pH7.4。加入1mM檸檬酸鐵(1/2)也可使血漿或尿樣轉(zhuǎn)化為鐵結(jié)合形式。
在pH為9.6的0.1M碳酸鹽涂浸緩沖液(carbonate coatingbuffer)中，將鏈霉抗生物素稀釋至0.1μg/ml，并將其加入到微滴定板的孔(100μl/孔)中，然后在22℃培養(yǎng)過(guò)夜。用PBS/吐溫(Tween)(吐溫20，Sigma，Poole，Dorset)洗滌孔四次。在37℃，用含有0.1％酪蛋白的200μl PBS培養(yǎng)1小時(shí)以飽和板上殘余的吸附部位。用PBS/Tween洗滌孔四次。用PBS/酪蛋白將生物素-FO(427μg/ml)稀釋至1ng/ml并在22℃下在孔(100μl/孔)中培養(yǎng)2小時(shí)。用PBS/Tween洗滌孔四次。將DFO和MetB的標(biāo)樣(2.80500-0.00273/0.00000μM)加入到12套一式二份的孔(50μl/孔)中。用pH 6.4或7.4的緩沖液按1∶800的比例稀釋兔抗鐵胺抗體，并將其加入到同一套孔(50μl/孔)中，在小型搖動(dòng)器中混合30秒并在22℃培養(yǎng)2小時(shí)。用任意一種緩沖液稀釋樣品并如FO標(biāo)準(zhǔn)樣用同樣的方法進(jìn)行處理。用PBS/Tween洗滌孔四次。按1∶2500的比例稀釋結(jié)合了抗兔IgG Fc抗血清的辣根過(guò)氧化酶(Biogenesis，Poole，Dorset)并于4℃在孔(100μl/孔)中培養(yǎng)過(guò)夜。用PBS/Tween洗滌孔四次。在暗處用100μl/孔的二鹽酸鄰苯二胺將板培養(yǎng)20分鐘，可得到洗滌后仍具有殘余結(jié)合力的結(jié)合了抗血清的酶。加入1M鹽酸(100μl/孔)終止反應(yīng)。用Dynatech MR600光度計(jì)在490μm處測(cè)定色度。實(shí)施例18在倉(cāng)鼠中的血漿濃II用瑪瑙研棒和瑪瑙研缽代替實(shí)施例17中的三輥磨，研磨鹽和懸浮液的其它組份，重復(fù)實(shí)施例17。如實(shí)施例17，用所得的腸胃外注射懸浮液進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果如下時(shí)間(小時(shí)) 血漿中去鐵胺-B和代謝產(chǎn)物B的總濃度(μg/ml)318.19610.72
24 0.9130 0.6348 0.5354 1.0672 0.511681.69實(shí)施例19在倉(cāng)鼠中的血漿濃度III用去鐵胺-B正癸磺酸鹽的樣品III(1g)代替實(shí)施例17中使用的去鐵胺-B鹽I，重復(fù)實(shí)施例17。如實(shí)施例17，用所得腸胃外注射懸浮液進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果如下時(shí)間(小時(shí)) 血漿中去鐵胺-B和代謝產(chǎn)物B的總濃度(μg/ml)3 20.056 18.0324 1.0630 1.0948 1.0554 1.9672 0.841680.78實(shí)施例20在倉(cāng)鼠中的血漿濃度IV用去鐵胺-B正癸磺酸鹽的樣品III(1g)代替實(shí)施例18中使用的去鐵胺-B鹽I，重復(fù)實(shí)施例18。如實(shí)施例17，用所得腸胃外注射懸浮液進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果如下時(shí)間(小時(shí))血漿中去鐵胺-B和代謝產(chǎn)物B的總濃度(μg/ml)3 17.616 17.15
24 0.6730 0.4148 0.6054 0.8872 0.50168 0.47實(shí)施例21在倉(cāng)鼠中的血漿濃度V用瑪瑙研棒和瑪瑙研缽將去鐵胺-B正癸磺酸鹽樣品III(1g)與緩慢加入的芝麻油(2.5ml)、油酸乙酯(2.5ml)、脫水山梨糖醇三油酸酯(0.075ml)和聚氧乙烯-4-十二烷基醚(0.025ml)的混合物研磨。如實(shí)施例17，用所得腸胃外注射懸浮液進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果如下時(shí)間(小時(shí))血漿中去鐵胺-B和代謝產(chǎn)物B的總濃度(μg/ml)3 5.936 14.1024 7.9130 0.4148 4.9154 0.8996 0.17實(shí)施例22組合物Q將去鐵胺-B正癸磺酸鹽樣品II(12.15份)加入到Miglyol812(47.25份)中。所得懸浮液用膠體磨均化直至懸浮鹽的平均粒徑為5-10微米，從而制得腸胃外注射懸浮液。實(shí)施例23對(duì)膽汁分泌的影響用19.8份去鐵胺-B正癸磺酸鹽樣品II和99份Miglyol 812代替其在實(shí)施例22中的用量，重復(fù)實(shí)施例22。用所得腸胃外注射懸浮液進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定其對(duì)膽管插套管大鼠的鐵分泌影響。在收集對(duì)照用膽汁和尿樣3小時(shí)后，將懸浮液(591μl/kg，相對(duì)于去鐵胺的劑量為117mg/kg)經(jīng)皮下注射到大鼠(雄性費(fèi)歇爾)體內(nèi)。然后每隔3小時(shí)收集膽汁樣品并測(cè)定其中鐵含量。注射了懸浮液的大鼠的試驗(yàn)結(jié)果如下(三只大鼠的平均值)注射后的時(shí)間(小時(shí))膽汁中Fe含量(mg/kg)0 11.03 86.96 111.89 105.112 96.115 92.718 88.221 86.224 92.027 76.730 67.033 52.736 35.539 16.142 9.645 8.448 7.2實(shí)施例24組合物R用空氣噴射磨研磨(正中顆粒大小為5-10μm)去鐵胺-B正癸磺酸鹽樣品II后，將所得物料在油相(比例和組份如實(shí)施例22或23)中混合。將均相懸浮液裝入容器(玻璃小瓶，預(yù)裝(prefilled)注射器或封口(bottlepack)容器)中，用γ或β射線熱處理滅菌。實(shí)施例25倉(cāng)鼠體內(nèi)鐵的排除將芝麻油(2.0ml)、油酸乙酯(2.0ml)、脫水山梨糖醇三油酸酯(7.5μl)和聚氧乙烯-4-十二烷基醚(25μl)的混合物緩慢加入到去鐵胺-B正癸磺酸鹽中，同時(shí)用瑪瑙研棒和瑪瑙研缽研磨，得到腸胃外注射懸浮液。測(cè)試該懸浮液對(duì)載負(fù)鐵的雄性金黃倉(cāng)鼠體內(nèi)的鐵排除的影響，試驗(yàn)經(jīng)靜脈注射了59Fe示蹤鐵蛋白。在鐵蛋白給藥1小時(shí)后，將懸浮液經(jīng)皮下注射給藥，其中去鐵胺的劑量為150μmol/kg。24或48小時(shí)后，用γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定尿和糞便中的59Fe含量。注射了懸浮液的倉(cāng)鼠的試驗(yàn)結(jié)果(6只動(dòng)物的平均值)和未接受鐵螯合劑的對(duì)照用倉(cāng)鼠的試驗(yàn)結(jié)果(5只動(dòng)物的平均值)如下排除59Fe的量(％)注射倉(cāng)鼠 對(duì)照倉(cāng)鼠24小時(shí)尿樣 0.74 0.02624小時(shí)糞便 7.09 1.1448小時(shí)尿樣 0.052 0.03748小時(shí)糞便 2.59 1.00實(shí)施例26結(jié)晶體A2為制備晶種，將由結(jié)晶體B和結(jié)晶體A1的混合物組成的84g去鐵胺-1-癸磺酸鹽加入到含有痕量tinovetin(十二烷基醚硫酸酯(lauryl ether sulphate)和乙氧基化壬基酚的混合物)作為濕潤(rùn)劑的820ml蒸餾水中。在80℃水浴中將形成的懸浮液保溫1小時(shí)，同時(shí)攪拌。隨后用吸濾器趁熱過(guò)濾懸浮液。在通氮?dú)夥罩?，室溫干燥過(guò)濾的物質(zhì)。測(cè)定所得晶種的化學(xué)純度和形態(tài)均勻性，如果結(jié)晶體A2不純，則重復(fù)上述過(guò)程。這樣可得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例27結(jié)晶體A2將145mg去鐵胺-1-癸磺酸鹽結(jié)晶體B和結(jié)晶體A1(由少量的A11和約等份的A12和A13組成)的混合物懸浮在含有痕量tinovetin作為濕潤(rùn)劑的1.2ml蒸餾水中。在80℃水浴中將懸浮液保溫2小時(shí)，同時(shí)攪拌。隨后用吸濾器趁熱過(guò)濾懸浮液。在通氮?dú)夥罩惺覝馗稍镞^(guò)濾的物質(zhì)。這樣可得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例28結(jié)晶體A2在室溫，將20.1kg去鐵胺甲磺酸鹽溶解于水中并將其加熱至50℃。將7.3kg1-癸磺酸鈉的一部分(15％)溶解于50℃水中，并將得到的溶液一次加入到去鐵胺甲磺酸鹽溶液中。在溶液中引入A2晶種，隨后在50℃攪拌30分鐘，出現(xiàn)結(jié)晶。然后，將另外一部分(85％)1-癸磺酸鈉水溶液經(jīng)3-4小時(shí)加入到熱懸浮液中完成結(jié)晶。在50℃將懸浮液再攪拌90分鐘，然后緩慢冷卻至40℃。經(jīng)過(guò)濾干燥器濾出產(chǎn)物，用水洗滌產(chǎn)物并真空干燥，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例29結(jié)晶體A2在30-40℃，將12.3kg去鐵胺甲磺酸鹽溶解于47.0kg水中。將溶液除菌過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移至結(jié)晶釜中。在45-50℃，用幾分鐘的時(shí)間向其中加入在12.0kg水中的0.7kg1-癸磺酸鈉的無(wú)菌水溶液，加入0.08kg去鐵胺-1-癸磺酸鹽結(jié)晶體A2，開(kāi)始結(jié)晶。在50℃攪拌30分鐘后，在約50-52℃，經(jīng)3-4小時(shí)將另外的在64.0kg水中的3.8kg1-癸磺酸鈉的無(wú)菌水溶液加入其中，同時(shí)輕輕攪拌。然后在50-52℃下，將懸浮液再放置1-2小時(shí)，隨后冷卻過(guò)夜至約40℃。在無(wú)菌條件下抽濾出產(chǎn)物，用54kg水分幾次洗滌產(chǎn)物，并在50℃減壓(＜20hPa)干燥24-40小時(shí)。得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例30結(jié)晶體A2在回流溫度(約78℃)下，將20.0kg去鐵胺-1-癸磺酸鹽溶解于80.0kg無(wú)水乙醇中，過(guò)濾溶液。將補(bǔ)充了8.0kg乙醇沖洗液的濾液經(jīng)1-2小時(shí)冷卻至40℃，這樣即可在約75℃時(shí)向澄清液中引入少量的去鐵胺-1-癸磺酸鹽結(jié)晶體A2作晶種，從而發(fā)生結(jié)晶。將懸浮液在40℃保持30分鐘，然后用大約1小時(shí)將懸浮液冷卻至0℃，在此溫度下再攪拌1-2小時(shí)。抽濾出產(chǎn)物，產(chǎn)物用24.0kg乙醇分幾次洗滌，在50℃下減壓(＜20hPa)干燥。得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例31結(jié)晶體A2在回流溫度(約78℃)下，將20.0kg去鐵胺-1-癸磺酸鹽溶解于80.0kg無(wú)水乙醇中，除菌過(guò)濾溶液。將補(bǔ)充了8.0kg乙醇沖洗液的濾液經(jīng)大約2小時(shí)逐步冷卻至44℃，這樣即可在約68℃時(shí)向澄清液中引入少量的去鐵胺-1-癸磺酸鹽結(jié)晶體A2作晶種，從而發(fā)生結(jié)晶。將懸浮液在44℃保持30分鐘，然后用大約1-2小時(shí)將懸浮液冷卻至0℃，并在此溫度下再攪拌約1小時(shí)。抽濾出產(chǎn)物，產(chǎn)物用乙醇分幾次洗滌，并在50℃減壓(＜20hPa)干燥。
權(quán)利要求
1.一種腸胃外給藥組合物，含有懸浮于腸胃外給藥用油中的具有至少8個(gè)碳原子的脂族磺酸的去鐵胺-B鹽顆粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中鹽是正辛磺酸鹽或正癸磺酸鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中鹽是一定晶形的去鐵胺-B正癸磺酸鹽，其熔點(diǎn)為154-158℃并且在其X-射線衍射圖樣中具有下述特征衍射線(2θ衍射角±0.1°)3.1°、7.3°、9.4°、13.7°、23.7°。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求的組合物，其中鹽顆粒的平均粒徑為5-10微米。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一權(quán)利要求的組合物，其中油包括至少一種植物油或由植物油得到的脂肪酸酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一權(quán)利要求的組合物，其中腸胃外給藥油含有辛酸與癸酸混合物的甘油三酯，辛酸與癸酸的重量比為10∶9-13∶6。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求的組合物，還含有表面活性劑。
8.權(quán)利要求1-7中任一權(quán)利要求的組合物的制備方法，該方法包括將去鐵胺-B鹽顆粒與腸胃外給藥油和表面活性劑，如果存在的話，混合。
9.治療鐵過(guò)量疾病、鋁過(guò)量、阿爾茨海默氏病、瘧疾、再輸注損傷或癌癥的方法，該方法包括將權(quán)利要求1-8中任一權(quán)利要求的組合物腸胃外注射到需要這種治療的溫血哺乳動(dòng)物體中。
10.式1所示的去鐵胺-1-癸磺酸鹽結(jié)晶體(N-[5-{3-[(5-氨基戊基)-羥氨基甲?；鵠-丙酰氨基)-戊基]-3-[{5-(N-羥基乙酰氨基戊基}-氨基甲?；鵠-丙?；惲u肟酸-1-癸磺酸鹽)，
在氮?dú)庀?，?0℃/min的加熱速率進(jìn)行差示掃描量熱法，測(cè)得該結(jié)晶體的熔點(diǎn)范圍為154-158℃，并且在其X-射線圖中具有下述特征衍射線(2θ衍射角±0.1 °)3.1 °、7.3°、9.4°、13.7°和23.7°。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的結(jié)晶體，在其X-射線圖中具有下述特征衍射線(2θ衍射角±0.1°)3.1°、4.2°、7.3°、8.4°、9.4°、10.5°、13.7°、16.8°、17.4°、18.0°、18.4°、19.6°、20.1°、20.9°、22.3°、23.7°、25.1°和25.6°。
12.權(quán)利要求10或11的結(jié)晶體的制備方法，其特征在于在至少一個(gè)工序中，將未知或未詳細(xì)說(shuō)明形態(tài)構(gòu)成的去鐵胺-1-癸磺酸鹽在極性溶劑中的懸浮液保持在升高的溫度下；或者在至少一個(gè)工序中，在升高的溫度下制得去鐵胺-1-癸磺酸鹽在極性溶劑中的濃溶液，然后在2℃/min或更低的冷卻速率下進(jìn)行結(jié)晶。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其特征在于極性溶劑是低級(jí)醇、水或水與低級(jí)醇的混合物，所述升高的溫度范圍在室溫-極性溶劑沸點(diǎn)之間。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其特征在于加入至少一粒晶種。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其特征在于制備極性溶劑中的去鐵胺甲磺酸鹽溶液，加熱至所需升高的溫度，然后將在同樣的和/或其它的極性溶劑中的等摩爾1-癸磺酸鹽溶液的一部分加入到其中，加入至少一粒晶種，直至發(fā)生結(jié)晶作用，然后將在同樣的和/或其它的極性溶劑中的等摩爾1-癸磺酸鹽溶液的剩余部分緩慢加入其中，之后維持所需升高的溫度；或者在升高的溫度下制得去鐵胺-1-癸磺酸鹽在極性溶劑中的熱飽和溶液，在加入至少一粒晶種后，以1℃/min或更低的冷卻速率冷卻至較低的升高的溫度，在此期間發(fā)生結(jié)晶作用，將晶體懸浮液保持在該較低溫度下。
16.一種藥物制劑，含有權(quán)利要求12或13的去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2和藥物上可接受的載體，所述結(jié)晶體A2作為活性組分。
17.權(quán)利要求12或13的去鐵胺-1-癸磺酸鹽結(jié)晶體A2在制備治療選自鐵過(guò)量疾病、鋁過(guò)量、阿爾茨海默氏病、瘧疾、再輸注損傷和癌癥的疾病的藥物制劑中的用途。
18.治療選自鐵過(guò)量疾病、鋁過(guò)量、阿爾茨海默氏病、瘧疾、再輸注損傷和癌癥的疾病的方法，該方法包括對(duì)需要上述治療的患者使用一定劑量的權(quán)利要求12或13所述的去鐵胺-1-癸磺酸鹽的結(jié)晶體A2，使用的劑量在所述疾病治療中為藥物有效量。
全文摘要
含有懸浮于腸胃外給藥用油中的具有至少8個(gè)碳原子的脂族磺酸的去鐵胺－B鹽顆粒的腸胃外注射組合物。本發(fā)明提供了去鐵胺－B癸磺酸鹽的新結(jié)晶體，公開(kāi)了一種具有優(yōu)良穩(wěn)定性的晶形。
文檔編號(hào)C07C259/00GK1239946SQ97180523
公開(kāi)日1999年12月29日 申請(qǐng)日期1997年12月8日 優(yōu)先權(quán)日1996年12月10日
發(fā)明者E·瑪?shù)? A·J·吉?dú)W弗羅伊, H·荷特, A·伯克哈德, I·F·哈桑, N·羅瑟, J·尼克林, A·斯圖爾特, P·范·霍吉維斯特 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司