專利名稱：血管生成抑制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有RGD模擬活性的非肽化合物，也涉及具有RGD模擬活性的非肽化合物的合成和生物學活性。尤其是涉及硝基芳基的RGD模擬物及它們的合成和生物活性。
背景技術：
整合蛋白是一類促進細胞-細胞和細胞-間質附著的胞外蛋白質(Cheresh，D.A.；Mecham.R.P.Eds.；Academic PressNew York，1994；Stromblad，S.；Cheresh，D.A.Chem.Bio.1996，3，881)。這些重要的生物學目標物是由α-亞基和更小的β-亞基組成的膜結合雜二聚糖蛋白。配體結合的相對親合力和特異性可通過不同α-和β-亞基的特殊組合確定。在這些受體家族的成員中，αIIbβ3、α5β1、αvβ3和αvβ5研究得最多。與這些整合蛋白結合的許多天然配體，如粘連蛋白(與α5β1結合)、纖維蛋白原(與αIIbβ3結合)和晶體蛋白(與αvβ3結合)，在其天然序列中包含主要肽序列Arg-Gly-Asp(RGD)，該序列被多數(shù)整合蛋白認可。對于抑制血小板聚集，αIIbβ3已經(jīng)顯示出是一個優(yōu)良的目標物，一些資料已經(jīng)公開了包含肽和非肽結構的有效結合劑的設計和合成(Ojima et al.Bioorg.Med.Chem.，1995，337；Engleman et al.Ann.Rep.Med.Chem.1996，31，191)。
在血管生成過程中，αvβ3和αvβ5的功能已經(jīng)顯示出是致命的。Ceresh及其同事已經(jīng)表明，這些整合蛋白通過抗體或環(huán)肽對含RGD配體的結合的體內抑制影響血管生成并誘導腫瘤消退(Brooks et al.Science 1994 et al.Rosenfeld et al.Cell 1994，79，1157)。除了對血管生成適當之外，人們也已公知αvβ3在調節(jié)破骨細胞與骨基質的附著及在移植平滑肌細胞中起著重要的作用。
由此αvβ3的拮抗劑被預想成治療各種疾病(如糖尿病性視網(wǎng)膜病、癌癥、骨質疏松癥和再狹窄)的有效治療劑(Van der Pluijm etal.Bone Mineral Res.1994，9，1021；Helfrich et al.J.BoneMineral Res.1992，7，335；Horton et al.Exp.Cell Res.1991，195，368；Robey et al.Ann.Rep.Med.Chem.1993，28，227；Choiet al.Surgery 1994，19，125；Matsuno et al.Circulation 1994，90，2203；Hammes et al.Nature Med.1996，2，529；Friedlanderet al.Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 1996，93，9764)。
Kessler et al.報道了αvβ3的第一小分子拮抗劑(實施例1，

圖1；Gurrath et al.Eur.J.Biochem.1992，210，911；Mulleret al.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1992，31，326；Aumailleyet al.FEBS Lett.1991，291，50；Pfaff et al.J.Bio.Chem.1994，269，20233；Haubner et al.J.Am.Chem.Soc.1996，118，7461)。接著，來自Dupont-Merck(實施例2，圖1)和SmithKlineBeecham(SKB)(實施例3，圖1)出版了他們在該領域的研究成果。另外，其它含RGD的環(huán)肽4和5(圖1)也分別被Burgess et al.和Goodman et al.合成出來了，它們顯示出很活躍(Bach et al.J.Am.Chem.Soc.1996，118，293；Peishoff et al.J.Med.Chem.1992，35，3962；Burgess et al.J.Med.Chem.1996，39，4520；Tranet al.Bioorg.Med.Chem.Lett.1997，7，997)。
最近，許多研究小組報道他們的研究成果，對αvβ3結構具有高親合力的配體明顯地改變了傳統(tǒng)的肽結構(實施例6至9，圖2)。這些αvβ3結構包含中心支架(如苯、苯并二氮類或脲骨架)，帶有羧酸鹽和胍基基團的附屬物與中心支架相連(Duggan et al.Abstracts of Papers，21th ACS National Meeting，New Orleans，LA，March 24-28，1996；American Chemical SocietyWashington，DC，1996，MEDI 234；Keenan et al.J.Med.Chem.1997，40，2289；Corbett et al.Bioorg.Med.Chem.Lett.1997，7，1371；Gadeket al.Abstracts of Papers，21th ACS National Meeting，NewOr1eans，LA，March 24-28，1996；American Chemical SocietyWashington，DC，1996，MEDI 235；Hirschmann et al.J.Am.Chem.Soc.1996，115，12550)。
人們所需要的就是合成可使用的RGD模擬物，該模擬物具有體內穩(wěn)定性且對各種整合蛋白目標物具有高活性和選擇性；另外就是研制出制備這類化合物的有效通用方法。
發(fā)明概要本發(fā)明涉及設計、化學合成和生物學評價一系列含硝基芳基的RGD模擬物。更具體地，本發(fā)明涉及將新的硝基芳基體系與1998年4月21日出版的美國專利5,741,796中公開的芳基醚/α-氨基酸/胍類結構相結合的化合物，即“Merck化合物”，上述專利文獻在此引作參考。
本發(fā)明一方面涉及由下列通式表示的RGD模擬物 在上述結構中，R1選自下列基團 其中X選自硫、-NH-和氧。R2選自-CO2-叔丁基、-CO-芳基和-SO2-芳基。優(yōu)選的芳基包括苯基、1-萘基和2-萘基。優(yōu)選的R2為-SO2-芳基。優(yōu)選的RGD模擬物有下列結構表示 其它優(yōu)選的RGD模擬物有下列一組結構式表示 本發(fā)明另一方面涉及制備上述RGD模擬物的方法。首先提供由下列結構式表示的含有與硝基芳基環(huán)共價相連的氟基團的硝基芳基前體 在上述結構中，R3為酸保護基團。然后，通過親核芳族取代，利用含被護胍基團的親核試劑取代氟基團，生成被護RGD模擬物。最后，利用酸將被護RGD模擬物脫保護。
本發(fā)明的另一方面涉及由下列結構式表示的RGD模擬物 在上述結構中，R2選自-CO2-叔丁基和-SO2-芳基。優(yōu)選的芳基包括苯基、1-萘基和2-萘基。
為了確定結合選擇性，本發(fā)明測試了上述RGD模擬物對各種整合蛋白(αvβ3、αIIbβ3和αvβ5)抑制細胞附著的能力。選擇的化合物還在CAM(小雞絨膜尿囊膜)測定中測試了其體內抑制血管生成的能力。所有化合物均被證實具有對上述目標物具有抑制活性和選擇性，與其作為血管生成抑制劑的活性相一致。
本發(fā)明另一方面涉及對αIIbβ3調節(jié)的細胞附著與αvβ3調節(jié)的細胞附著的差示抑制。表達αIIbβ3的細胞與含有選擇RGD模擬物的溶液相接觸。溶液中這類RGD模擬物的濃度足以抑制αIIbβ3調節(jié)的細胞附著。結果被抑制的αIIbβ3調節(jié)的細胞附著至少大約為αvβ3調節(jié)的細胞附著的100倍?？捎糜诒景l(fā)明這一方面的優(yōu)選RGD模擬物如下 附圖描述圖1說明了基于RGD肽序列的αvβ3拮抗劑的選擇結構。
圖2說明了具有高αvβ3親合力的選擇非肽RGD模擬物。
圖3說明了作為RGD模擬物和苯并咪唑22的目標硝基芳基醚(10-21)。
圖4說明了硝基芳基醚RGD模擬物的一般結構和反合成分析。
圖5說明了氨基酯26、29a和29b在下列試劑和條件下的合成(a)1.1當量Boc2O，1.0當量Na2CO3，1，4-二噁烷，25℃，88％；(b)i)20％Cs2CO3水溶液，H2O∶MeOH(1∶2.5)，25℃，4小時，100％，ii)1.1當量BnBr，DMF，25℃，14小時，88％；(c)1.5當量PhI(OCOCF3)2，DMF∶H2O(1∶1)，2.0當量吡啶，25℃，3.5小時，41％；(d)1.1當量ArSO2Cl，2.25當量NaOH，二噁烷∶H2O(1∶2)，0至25℃，3小時，[27a為71％，27b為66％]；(e)1.3當量Br2，9.2當量NaOH，H2O，0至99℃，[28a為75％，28b為81％]；(f)異丁烯，2.8當量濃H2SO4，DME，-78至25℃，48小時，[29a為55％，29b為51％]。DME＝二甲氧基乙烷；DMF＝二甲基甲酰胺；pH＝苯基；2-萘基。
圖6說明了在下列試劑和條件下合成化合物10-13(a)5.0當量MeC(OMe)3，PhMe，80℃，8小時，98％；(b)1.1當量N3(CH2)2OTBS，0.1當量TBAF，4 MS，DMF，25℃，4小時，73％；(c)2.0當量LiOH·H2O，3∶1 二噁烷∶H2O(3∶1)，25℃，4小時，99％；(d)1.0當量DCC，0.2當量4-DMAP，CH2Cl2，25℃，4小時，82％；(e)50％TFA于CH2Cl2溶液，25℃，2小時，84％；(f)1.1當量PhSO2Cl，或1-Naphso2cl，1.3當量i-Pr2NEt，CH2Cl2，25℃，4小時，38a(78％)或38b(57％)；(g)2.0當量Ph3P，44當量H2O，THF，25℃，12小時，80％，大約1∶1 35a∶35b；80％，大約1∶1 39a∶41a；81％，大約1∶1 39b∶41b；(h)2.0當量LiOH·H2O，THF∶H2O(3∶1)，25℃，4小時，93-99％ 36ab、40ab、42a；(i)1.1當量1H-吡唑-1-羧基脒·HCl，1.1當量i-Pr2NEt，DMF，25℃，16小時，13-15％ 10、11、13；50℃，16小時，5％ 12，在RP-HPLC之后。TFA＝三氟乙酸；TBAF＝四正丁基氟化銨；DDC＝1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺。
圖7說明了在下列試劑和條件下合成胍衍生物51-56(a)1.0當量BtBMTP，2.0當量Et3N，1.0當量HgCl2，DMF，25℃，4小時，98％；(b)1.0當量BtBMTP，DMF，25℃，14小時，95％；(c)1.0當量BtBCT，DMF，25℃，14小時，60％；(d)0.2當量BtBMTP，0.4當量Et3N，0.2當量HgCl2，DMF，25℃，4小時，51％；(e)0.66當量o-NH2C6H4NH2，5.5N HCl水溶液，回流，24小時，73％；(f)1.0當量DmPD·HBr，iPr2NEt，DMF，25℃，11小時，51％。Boc＝叔丁氧基羰基；BtBCT＝N，N′-二-叔丁氧基羰基硫脲；BtBMTP＝1，3-二(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫假脲；DmPD·HBr＝2-(3，5-二甲基吡唑基)-4，5-脫氫咪唑氫溴化物。
圖8說明了在下列試劑和條件下合成化合物11和14-19(a)1.2當量(COCl)2，PhH，DMF，0℃，6小時，99％；(b)1.0當量29a或29b，1.2當量Et3N，CH2Cl2，0℃，2小時，58(98％)或59(96％)；(c)對于602.2當量NaH，2.2當量51，DMF，25℃，8小時，66％；對于634.0當量NaH，1.2當量51，DMF，25℃，4小時，69％；(d)1.1當量53，DMF，25℃，4小時，73％；對于641.9當量53，NMP，25℃，99％；(e)對于652.2當量NaH，2.5當量54，DMF，25℃，12小時，23％；(f)1.1當量52，DMF，25℃，6小時，83％；對于662.0當量52，DMF，25℃，20小時，99％；(g)50％TFA于CH2Cl2，25℃，30分鐘，90-99％ 11、14-19，在RP-HPLC之后。Boc＝叔丁氧基羰基；TFA＝三氟乙酸；NMP＝N-甲基-2-吡咯烷酮；DMF＝二甲基甲酰胺。
圖9說明了在下列試劑和條件下合成化合物20和21(a)1.0當量55，2.2當量Et3N，DMF，25℃，16小時，92％；(b)50％ TFA于CH2Cl2中，25℃，4小時，97％；(c)1.0當量56，2.2當量Et3N，DMF，12小時，120％(粗收率)；(d)50％ TFA于CH2Cl2中，25℃，4小時，83％，在RP-HPLC之后。TFA＝三氟乙酸；DMF＝二甲基甲酰胺。
圖10說明了在下列試劑和條件下合成化合物22(a)NH3，DMF，25℃，5小時，93％；(b)10％ Pd/C，H2，MeOH，25℃，8小時，90％；(c)1.1當量PhNCS，EtOH，14小時，69％；(d)1.0當量HgCl2，1.0當量Et3N，DMF，4小時，81％；(e)50％TFA于CH2Cl2中，30分鐘，88％(收率)，在RP-HPLC之后。TFA＝三氟乙酸；DMF＝二甲基甲酰胺。
圖11表示匯總數(shù)據(jù)，表明硝基芳基醚對與RGD相關的配體和整合蛋白的相互作用。該圖表示了配體結合一半最大抑制所需的濃度(IC50)。為了參考，包括了肽GRGDSPK和化合物1。通過對αvβ3的IC50，儲存了數(shù)據(jù)?！甤Q’值表示NPE相對于化合物1的活性?！尽硎綢C50沒有達到測試的最大濃度10μM。
圖12表示匯總數(shù)據(jù)，表明硝基芳基醚對與RGD相關的細胞和靜止配體附著的作用。該圖表示了配體結合一半最大抑制所需的濃度(IC50)。在存在這里所描述的本發(fā)明硝基芳基醚的條件下，允許25000個細胞附著于靜止配體。圖12表示了在一半最大抑制細胞附著所得到的濃度(IC50)。通過對αvβ3的IC50(由低到高)，儲存了數(shù)據(jù)。
詳細描述實施例1非肽整合蛋白拮抗劑的設計、合成和生物學評價在該實施例中，我們描述了一系列含硝基芳基RGD模擬物的設計、化學合成和生物學評價。圖3顯示了目標化合物(10-22)。導致其設計的考慮包括(a)指向胍/芳基磺酰胺官能團的重要性的Merck發(fā)現(xiàn)(Duggan et al.Abstracts of Papers，211thACSNational Meeting，New Orleans，LA，March 24-28，1996；AmericanChemical SocietyWashington，DC，1996，MEDI 234)；以及(b)正如圖4所示，容易從o-硝基-芳基氟化物得到這類結構。設計的分子屬于通式(I)結構(圖4)，該分子可通過偶合中心硝基氟代芳族系II和片斷III(親核試劑)及IV(氨基酸成分)而衍生。
對于合成化合物10-22(圖3)，需要氨基酸衍生物26、29a和29b。這些中間體可由圖5所示的L-天冬酰胺酸(23)得到。由此，在標準條件下將23轉化成Boc衍生物(24，88％)可在生成苯甲酯(Cs2CO3-BnBr)而得到25(收率88％)之后進行。利用PhI(OCOCF3)2還原伯酰胺，可得到衍生物26，收率為41％?；酋０?9a和29b可通過下述方法制得磺?；被幔玫?7a，接著進行Hoffmann重組，利用異丁烯酯化所得氨基酸(28a和28b)(圖5)。
圖6概述了制備化合物10-13的初始方法。由此，在80℃下，利用原乙酸三甲酯處理，將4-氟-o-硝基苯甲酸(30)轉化成其甲酯(31，98％)，然后，在催化劑量TBAF存在下，于DMF中與N3(CH2)2OTBS反應，結果生成化合物32(73％；收率不是最佳)。皂化32(LiOH，收率為99％)，得到羧酸33，在存在DCC和4-DMAP條件下，利用積木塊26濃縮羧酸33，得到主要中間體34(收率為82％)。為了合成10，在存在H2O條件下，利用Ph3P還原化合物34，得到胺35a以及重組產物35b(合并收率為80％)，其中側鏈雜原子具有互換位置(通過內部親核攻擊，參見結構35a)。當放置在環(huán)境溫度下時，伯胺35a經(jīng)歷著定量轉變成伯醇36b。但是，通過堿性水解(LiOH)和脒基化反應(1H-吡唑-1-羧基脒·HCl)，可迅速處理化合物，以低收率獲得目標化合物10(在RP-HPLC純化后收率為15％)。
為了合成磺酰胺化合物11-13，常用中間體34脫保護(TFA，84％)，無約束的胺(37)與適當?shù)没酋Ｂ确磻?，得到化合?8a(78％)和38b(57％)。利用Ph3P-H2O還原疊氮官能團38a和38b，再得到相應伯胺(39a和39b)及其重組伯醇(41a和41b)，總收率為80％。堿性水解39a和39b，生成相應的羧酸(40a和40b，收率為93-99％)，如上文進行脒基化反應，分別得到所需的化合物11和13(收率為13-15％)。類似地，水解41a(LiOH，收率為96％)，接著進行脒基化反應，通過化合物42以低收率得到化合物12。
在還原側鏈疊氮基團過程中觀察到的重組可引導我們探求合成目標硝基芳基醚化合物的另一種方法。根據(jù)新的計劃，包含完全保護胍部分的親核試樣可在中心硝基芳基體系中取代氟化物。為此，親核試劑51-56(Poss et al.Tetrahedron Lett.1992，33，5933；Iwanowicz et al.Synth.Commun.1993，23，1443；Cherkaoui etal.Bull.Soc.Chim.Fr.1991，255)可由容易得到的起始原料并通過圖7所示的標準化學方法制備。通過親核芳族取代將這些片段摻入到分子主結構的方法以及最終目標物的合成如圖8(11、14-19)和圖9(21和22)所示。由此，在存在Et3N的條件下，將酰氯57(由羧酸30衍生而得)與胺29a和29b偶合，分別得到酰胺58(98％)和59(99％)。在DMF中，于存在NaH的條件下，將58與親核試劑51偶合，得到產物60，收率為66％。類似地，通過偶合59與51，可得到63(收率為69％)。通過在環(huán)境溫度下，于DMF中與胺53反應，可由58和59以收率為73％和99％分別得到氨基化合物61和64。將58暴露在硫醇54和NaH中(DMF，25℃，收率為23％)，可得到硫醚62。在室溫下，于CH2Cl2中利用TFA處理化合物60-64，可以優(yōu)良的收率(在RP-HPLC之后為90-99％)得到胍和羧酸基二者伴隨脫保護。分別由58和59，可通過類似的方式制備哌嗪化合物16和19，首先利用親核試劑52取代氟化物，接著如圖8概述的方法對所得衍生物65和66進行TFA誘導脫保護。
化合物20和21的合成如圖9所示。在存在Et3N條件下，于25℃下，在DMF中，將58與55反應，生成化合物67(收率為92％)，將其在25℃下暴露于TFA∶CH2Cl2(1∶1)中，得到目標苯并咪唑20(收率為97％)。類似地，化合物21可通過由58與56反應(Et3N，DMF，25℃，94％)得到的中間體68制備，接著再脫保護(RP-HPLC純化后收率為83％)。
最后，化合物22的制備如圖10所示。由此，在DMF中將主要中間體57與氨反應，以收率93％得到硝基苯胺69。在存在10％Pd/C催化劑條件下，于MeOH中利用H2還原69，得到1，2-二胺70(90％)，再在EtOH中與苯基異硫氰酸酯反應，得到硫脲71(收率為69％)。在環(huán)境溫度下，于DMF中，利用HgCl2和Et3N處理71，得到胍72(收率為81％)。在72中利用于CH2Cl2中的TFA裂解叔丁酯，然后得到目標化合物22(收率為80％，RP-HPLC純化之后)。
實驗記錄一般性除非另外指明，所有反應均在含有不含水并在無水條件下新蒸的溶劑的氬氣氣氛下進行。四氫呋喃(THF)和乙醚從鈉-苯甲酮中蒸出，二氯甲烷(CH2Cl2)、苯(PhH)和甲苯從氫化鈣中蒸出。無水溶劑也可通過將其通過市購的活化礬土柱制得。除非另外說明，收率是指利用色析法和光譜法(1H NMR)純化的均相物質。除非另外指明，所有試劑均以最高商業(yè)質量購得，在使用時無需進一步純化。
所有反應均通過薄層色譜分析法檢測。所述薄層色譜分析法在下述條件下進行0.25mm E.Merck硅膠板(60F-254)，利用UV光作為顯影劑，磷鉬酸或對甲氧基苯甲醛的7％乙醇溶液作為展開劑。E.Merck硅膠(60，粒度為0.040-0.063mm)用于快速柱色譜純化。制備性薄層色譜分離可在0.25、0.50或1mm E.Merck硅膠板(60F-254)上進行。反相HPLC在Waters Model 600E HPLC儀器上進行，該儀器使用Vydac 218TP1022柱，在40分鐘內，利用90∶10 & 40∶60 H2O∶CH3CN+0.1％ TFA梯度溶液在254nm處檢測。
利用Bruker DRX-600、AMX-500、AMX-400或AC-250儀器記錄NMR光譜，利用殘留不含重氫的溶劑作為內部參照進行校驗。下列縮略語用于解釋峰裂數(shù)s為單峰；d為雙峰；t為三峰；q為四峰；m為多重峰；band為幾個重疊信號；b為寬峰。利用Perkin-Elmer 1600系列FT-IR分光計記錄IR光譜。在快速原子轟擊(FAB)條件下，利用VG ZAB-ZSE質譜儀記錄高分辨率質譜。利用Perkin Elmer ScienceAPI III質譜儀記錄電噴質譜。如圖5所示，合成氨基酸衍生物25。
化合物25向叔丁氧基羰基-(L)-天冬酰胺酸(12.6g，50mol；Aldrich)的MeOH(200ml)溶液中加入水(20ml)。利用20％ Cs2CO3水溶液(57ml)中和溶液，然后蒸發(fā)至干。所得殘留物收集在DMF(50ml)中，然而通過蒸發(fā)至干而共沸干燥。將銫鹽收集在DMF(125ml)中，接著加入芐基溴(6.5ml，55mol)。在室溫下攪拌混合物6小時，蒸發(fā)至干，利用水(500ml)研磨殘留物。加固體溶解在乙酸乙酯(150ml)中，利用水(75ml)洗滌有機相，在Na2SO4上干燥，減壓除去溶劑。油乙酸乙酯/己烷重結晶初酯，得到25(15.1g，88％)，為無色固體。
IR(KBr)nmax3401，3349，3204，2982，2935，1741，1688，1657，1524，1293，1169，1055 cm-1；1HNMR(500MHz，CDCl3)d 7.36-7.32(m，5小時，Ph)，5.73(d，J＝8.5Hz，1H，NHCO2)，5.59(bs，1H，CONHH)，5.40(bs，1H，CONHH)，5.20(d，J＝12.5Hz，1H，CHHPh)，5.17(d，J＝12.5Hz，1H，CHHPh)，4.56(ddd，J＝4.0，5.0，8.5Hz，1H，CHCH2)，2.95(dd，J＝5.0，16.5Hz，1H，CHCHH)，2.76(dd，J＝4.0，16.5Hz，1H，CHCHH)，1.42(s，9H，tBu)；13C NMR(150MHz，CDCl3)d 171.9，171.2，155.7，135.4，128.5，128.3，128.2，80.1，67.4，50.3，37.4，28.3；FAB-HRMS(M+Na+)計算值345.1426，實測值345.1421.
如圖5所示，合成化合物26在室溫下，向二(三氟乙酰氧基)苯基碘(2.0g，4.7mmol)的DMF∶H2O(24ml，1∶1 v/v)攪拌溶液中加入化合物25(1.0g，3.1mmol)。15分鐘后，加入吡啶(0.5ml，6.2mmol)，持續(xù)攪拌3小時。減壓蒸發(fā)溶劑，將殘留物溶解在水(30ml)中。利用水洗滌溶液，利用1N NaOH堿化水層，利用二氯甲烷萃取。減壓除去溶劑，得到油狀殘留物。通過快速柱色譜純化(10％MeOH，于CH2Cl2中)，得到胺26，為黃色油狀物(0.37g，41％)。Rf＝0.11(2.5％甲醇，于乙酸乙酯中)；IR(薄膜)nmax3366，3313，3064，2979，2934，1688，1518，1501，1456，1393，1368，1324，1254，1204，1166，1055，1002，838，800，743，692cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 7.36-7.28(m，5H，Ph)，6.36(bm，2H，NH2)，6.06(d，J＝7.5Hz，1H，NHCO2)，5.18(d，J＝12.0Hz，1H，CHHPh)，5.13(d，J＝12.0Hz，1H，CHHPh)，4.52-4.43(bm，1H，CHCH3)，3.35(bdd，J＝12.5Hz，1H，CHCHH)，3.24(bdd，J＝6.5，12.5Hz，1H，CHCHH)，1.32(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 170.0，155.9，134.8，128.5，128.4，128.3，80.6，67.7，52.9，41.6，28.0；FAB-HRMS(M+H+)計算值295.1658，實測值295.1650.
如圖5所示，合成化合物27a。在0℃下向(L)-天冬酰胺酸(23)(10.00g，75.7mmol)的H2O∶二噁烷(50ml∶50ml)的溶液中加入NaOH(3.40g，85.0mmol)。在0℃下15分鐘后，加入苯基磺酰氯(10.6ml，84.0mmol)，，接著在0下加入NaOH(3.40g，85.0mmol)的H2O(50ml)溶液。30分鐘后，撤去冷卻浴，減壓濃縮溶液至大約50ml。利用乙酸乙酯(2×50ml)萃取水相。在0℃下利用濃HCl(pH≈1)酸化水相，沉淀出被護氨基酸，通過過濾收集所得固體，利用水(20ml)洗滌。在大約50℃下烘干過夜，得到27a，為無色固體(14.6g，71％)。粗產物可在無需進一步純化下使用。
IR(KBr)nmax3495，3338，3260，1723，1648，1578，1449，1325，1261，1202，1166，1086cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 7.88-7.86(m，2H，Ph)，7.60-7.57(m，1H，Ph)，7.54-7.51(m，2H，Ph)，4.23(t，1H，J＝6.0Hz，CHCO2H)，2.66(dd，1H，J＝6.0，15.5Hz，CHH(C＝O)NH2)，2.60(dd，J＝6.0，15.5Hz，CHH(C＝O)NH2)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 174.3，173.6，142.1，133.7，130.0，128.2，53.9，39.6；FAB-HRMS (M+H+)計算值273.0545，實測值273.0540.
如圖5所示，合成化合物27b。通過與合成27a相同的方法制備化合物27b，只是使用2-萘磺酰氯代替苯基磺酰氯。粗收率16.06g(66％)。
IR(KBr)nmax3424，3289，2925，1851，1713，1673，1502，1399，1333，1258，1223，1191，1159，1127，1075，1023，964，866，822，794，714，669，638，548，477cm-1；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)d8.40(d，J＝1.0Hz，1H，萘基)，8.15(d，J＝9.0Hz，1H，NHSO2)，8.12(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，8.07(d，J＝9.0Hz，1H，萘基)，8.01(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.81(dd，J＝1.5，8.8Hz，1H，萘基)，7.68(ddd，J＝1.5，6.8，7.5Hz，1H，萘基)，7.64(ddd，J＝1.5，6.8，7.5Hz，1H，萘基)，7.33(bs，1H，CONHH)，6.87(bs，1H，CONHH)，4.16(bm，1H，CHCH2)，2.47(dd，J＝7.0，15.5Hz，1H，CHCHH)2.28(dd，J＝6.5，15.5Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，DMSO-d6)d 172.0，170.5，138.4，134.1，131.6，129.2，129.0，128.6，127.8，127.4，127.1，122.6，52.5，38.0；FAB-HRMS(M+H+)計算值323.0702，實測值 323.0708.合成化合物55(b)，其中化合物55的-NH取代基被-OH取代。
步驟A在25℃下，向3-羥基丙酸(0.073g，0.16mmol，1.0當量)溶液中加入DMF(0.5ml，0.32M)、咪唑(26.0mg，0.38mmol，2.4當量)he TBDPSCl(0.046ml，0.19mmol，1.2當量)，允許攪拌2.5小時。然后，利用乙醚(10ml)稀釋溶液，再用5％氯化氫飽和溶液(2×10ml)、水(2×10ml)、鹽水(1×5ml)洗滌，在MgSO4上干燥。通過快速柱色譜純化化合物(硅石，80％乙醚，于石油醚中)，將其應用到下列步驟中步驟B在室溫下，將于5.5N HCl(10ml)中的苯二胺(1.08g，0.01mol)溶液加入到由步驟A得到的被護中間體(1.125g，0.015mol)中?；亓鞣磻旌衔?4小時，然后允許冷卻至室溫。真空蒸發(fā)溶劑，得到沉淀，過濾并利用乙醚洗滌，然后，步驟C按照下列方法去除TBDPS基團將由步驟B得到的中間體(7.481mmol)的THF(0.1M)溶液冷卻至0℃，利用共沸干燥的(苯，3×50ml)TBAF(22.44mmol)處理。在0℃下攪拌攪拌反應混合物10小時，利用飽和水合NH4Cl驟冷。分離兩層，利用乙酸乙酯和乙醚的混合物萃取水相。利用鹽水洗滌合并的有機相，干燥并濃縮。通過硅膠柱色譜純化，得到純化合物55(b)，其中化合物55的-NH2取代基被-OH取代。合成化合物55(c)，其中化合物55的取代基-NH2被-SH取代。
在室溫下，向于5.5N HCl(10ml)中的苯二胺(1.08g，0.01mol)溶液中加入3-巰基丙酸(1.125g，0.015mol)?；亓鞣磻旌衔?4小時，然后允許冷卻至室溫。真空蒸發(fā)溶劑，過濾并利用乙醚洗滌，得到純化合物55(c)，其中化合物55的取代基-NH2被-SH取代。
合成化合物67(b)和(c)，其中-NH-基團被-S-或-O-二價基團取代(-NH-的情況如圖9所示)。在室溫下，向57(0.10g，0.20mmol；如上合成)的DMF(8ml)溶液中加入55(b)或(c)(0.038g，0.22mmol；如上合成)和三乙胺(0.06ml，0.44mmol)。在25℃下攪拌16小時之后，利用EtOAc(10ml)和水(10ml)稀釋反應混合物。分層，利用乙酸乙酯(2×10ml)萃取水層。收集有機萃取物，利用水(2×10ml)和鹽水(20ml)洗滌，在Na2SO4上干燥。再過濾并減壓蒸發(fā)之后，通過快速色譜純化殘留物(硅石，乙酸乙酯)，得到67(b)和(c)。
合成化合物20(b)或(c)，其中-NH-基團被-S-或-O-二價基團取代(-NH-的情況如圖9所示)。在室溫下，向67(b)或(c)(0.068g，0.11mmol；如上合成)的CH2Cl2(2ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml)。4小時之后，真空蒸發(fā)溶劑，得到油狀物，在RP-HPLC之后(C-18)，得到20(b)或(c)。
如圖5所示，合成化合物28a。向安裝有磁性攪拌棒的圓底燒瓶中加入NaOH(11.15g，280.0mmol)的水(50ml)溶液，冷卻至0℃。在5分鐘內滴加溴(2.60ml，50.0mmol)，反應混合物在此溫度下再攪拌5分鐘。在0℃下，一次加入被護氨基酸27a(10.44g，38.0mmol)的NaOH(3.10g，70.0mmol，30ml水)溶液。在此溫度下繼續(xù)攪拌20分鐘，撤去冷卻浴，加熱至90℃30分鐘。在冷卻至0℃后，利用1M濃鹽酸將反應混合物的pH值調至7。通過過濾收集所得無色沉淀。利用水洗滌殘留物，在大約50℃下烘干過夜，得到28a，為無色固體(6.95g，75％)。粗產物在無需進一步純化下使用。
IR(KBr)nmax3509，3299，3058，2936，1636，1596，1522，1446，1413，1355，1340，1300，1246，1163，1094，1028，924cm-1；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)d 7.84-7.82(m，2H，Ph)，7.66-7.63(m，1H，Ph)，7.60-7.56(m，2H，Ph)，7.58(bm，1H，NHSO2Ph)，3.35(bs，2H，NH2)，3.17(dd，J＝4.5，9.5Hz，1H，CHCH2)，3.01(dd，J＝2.5，12.0Hz，1H，CHH)，2.80(dd，J＝9.5，12.0Hz，1H，CHH)；13C NMR(125MHz，DMSO-d6)d 169.4，139.1，132.7，129.2，126.8，52.7，41.7；FAB-HRMS(M+Na+)計算值245.0596，實測值245.0599.
如圖5所示，合成化合物28b。根據(jù)制備28a相同的方法制備化合物28b，使用27b替代27a。初收率11.88g(81％)，為淺褐色固體。
IR(KBr)nmax3338，3241，3056，2831，2601，1651，1604，1513，1463，1404，1382，1335，1151，1076，1039，985，955，931，913，855，814，787，7 49，657，618，550，480Cm-1；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)d 8.48(br.s，1H，萘基)，8.16-8.10(2bd，2H，萘基)，8.04(d，J＝8.5Hz，1H，萘基)，7.85(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，萘基)，7.70(ddd，J＝1.5，7.0，8.0Hz，1H，萘基)，7.66(ddd，J＝1.0，7.0，8.0Hz，1H，萘基)，7.45(bm，1H，NHSO2)，3.54-3.19(bm，2H，NH2)，3.23(dd，重疊，J＝4.5，9.5Hz，1H，CHCH2)，3.04(dd，J＝4.5，12.00Hz，1H，CHCHH)，2.83(dd，J＝9.5，12.00Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)d 169.3，136.1，134.3，131.6，129.4，129.2，128.9，128.0，127.8，127.6，122.5，52.7，41.6；FAB-HRMS(M+H+)計算值295.0753，實測值295.0761.
如圖5所示，合成化合物29a。安裝有磁性攪拌棒的密封試管中充填有28a(4.88g，20.0mmol)和75ml無水二甲氧基乙烷。在加入3.0ml濃硫酸之后，在氬氣氣氛中將反應混合物冷卻至-78℃，將40.0ml異丁烯充入到密封試管中。在密閉后，撤去冷卻浴，反應混合物在室溫下攪拌48小時。將反應混合物注入到100ml冰水中。利用乙醚(40ml)萃取水溶液，利用6N NaOH水溶液將pH調節(jié)至12-13。利用乙酸乙酯(4×50ml)萃取游離胺，利用NaHCO3飽和水溶液(50ml)、5％KHSO4水溶液(50ml)和鹽水(50ml)順序地洗滌合并的有機萃取液。有機相在MgSO4上干燥，減壓病真空除去溶劑，得到29a(10.9g，55.5％)，為灰白色固體。粗產物在無需進一步純化下使用。Rf＝0.27(硅膠，乙酸乙酯)；IR(KBr)nmax3372，3295，2981，2932，1726，1452，1337，1261，1161，1094，945，898，845，753cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 7.86-7.84(m，2H，Ph)，7.58-7.54(m，1H，Ph)，7.51-7.48(m，1H，Ph)，3.76(dd，J＝4.0，5.5Hz，1H，CHCH2)，3.02(dd，J＝9.0，13.0Hz，1H，CHH)，2.88(dd，J＝5.5，13.0Hz，1H，CHH)，1.27(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.3，139.7，132.8，129.1，127.2，82.8，58.8，44.9，27.7；FAB-HRMS(M+H+)計算值301.1222，實測值301.1211.
如圖5所示，合成29b。根據(jù)制備29a相同的方法制備化合物29b，使用28b替代28a。初收率4.56g(51％)，為灰白色固體。Rf＝0.25(硅膠，乙酸乙酯+2％v/v Et3N)；IR(KBr)nmax3360，3264，3057，2981，2935，2873，2747，1731，1588，1501，1455，1339，1254，1220，1157，1076，952，926，823，782，747，663，619，552，481cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.40(bs，1H，萘基)，7.92(bd，J＝8.5Hz，2H，萘基)，7.86(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.82(dd，J＝1.5，8.5Hz，1H，萘基)，7.64-7.55(2×ddd，重疊，J＝1.0，7.0，8.5Hz，2H，萘基)，3.84(dd，J＝4.2，5.8Hz，1H，CHCH2)，3.30-2.60(bm，superimposed，2H，NH2)，3.03(dd，J＝4.2，13.4Hz，1H，CHCHH)，2.88(dd，J＝5.8，13.4Hz，1H，CHCHH)，1.08(s，9H，t-Bu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.2，136.3，134.9，132.0，129.5，129.2，128.9，128.6，127.8，127.5，122.4，82.9，58.6，44.6，27.5；FAB-HRMS(M+H+)計算值351.1379，實測值351.1371.
如圖6所示，合成化合物31。向酸30(5.0g，27mmol；Aldrich)的甲苯懸浮液中加入原乙酸三甲酯(17ml，135mmol)。將混合物加熱至80℃ 12小時，減壓除去溶劑，得到31，為無色固體(5.26g，98％)。Rf＝0.46(硅膠，25％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3061，2960，1714，1614，1542，1438，1351，1297，1262，1233，1130，871，755cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.74(dd，J＝4J(1H-1H)＝2.0Hz，4J(1H-19F)＝7.0Hz，1H，2-Ar-H)，8.32(ddd，4J(1H-1H)＝2.0Hz，4J(1H-19F)＝4.5Hz，3J(1H-1H)＝9.0，1H，6-Ar-H)，7.39(dd，3J(1H-1H)＝9.0Hz，3J(1H-13F)＝10.5Hz，1H，5-Ar-H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 164.1，159.1，156.9，136.5，127.8，118.8，118.7，52.9；FAB-HRMS(M+H+)計算值200.0281，實測值200.0286.
如圖6所示，合成化合物32。在室溫下，向31(4.0g，20mmol)的DMF(10ml)溶液中加入大約4g 4分子篩和4.46g(0.22mmol)N3(CH2)2OTBS。10分鐘后，加入2ml(2.0mmol)1M TBAF的THF溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，然后通過一小段硅藻土(celite)過濾。濾液收集在乙酸乙酯(100ml)中，利用水、飽和NaCO3水溶液和鹽水順序地洗滌。有機萃取液在MgSO4上干燥，過濾并減壓除去溶劑，得到黃色油狀物。經(jīng)快速柱色譜純化(硅膠，40％乙酸乙酯，于己烷中)，得到32，微黃色固體(3.85g，73％)。Rf＝0.35(硅膠，40％乙酸乙酯，于己烷中)；
IR(KBr)nmax2950，2938，2114，1713，1620，1536，1438，1349，1303，1276，1247，1161，1136，918，760cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.54(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.22(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.13(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.32(t，J＝5.0Hz，2H，OCH2)，3.94(s，3H，OCH3)，3.71(t，J＝5.0Hz，2H，CH2N3)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 164.7，154.7，135.3，127.3，123.3，114.0，68.8，52.5，49.7；FAB-HRMS(M+Na+)計算值289.0549，實測值289.0553.
如圖6所示，合成化合物33。向32(3.85g，14.0mmol)的1，4-二噁烷∶水(90ml∶30ml)溶液中加入LiOH·H2O(1.2g，28mmol)。反應混合物在室溫下攪拌4小時，然后加入40ml飽和NH4Cl溶液。減壓除去有機溶劑，得到黃色淤泥狀物，將該淤泥狀物溶解在水中，利用1M KHSO4水溶液酸化。然后利用CH2Cl2(3×70ml)萃取。合并的有機萃取液在MgSO4上干燥，過濾，減壓除去溶劑，得到33，為黃色固體(3.50g，99％)。Rf＝0.10(硅膠，60％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3087，2964，2877，2659，2539，2120，1699，1616，1534，1429，1359，1282，1163，1138，1079，1039，1002，929，847，763，687，642，546cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.40(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.22(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.37(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.37(t，J＝4.5Hz，2H，OCH2)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H，CH2N3)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 167.4，156.0，140.9，136.4，127.9，124.9，115.7，70.3，51.1；FAB-HRMS(M+Na+)計算值275.0392，實測值275.0395.
如圖6所示，合成化合物34。在室溫下，向胺26(0.33g，1.10mmol)和酸33(0.286g，1.10mmol)的CH2Cl2(30ml)溶液中加入催化劑量DMAP(0.03g，0.22mol)和DDC(0.26g，1.1mol)。反應混合物在該溫度下攪拌4小時，過濾沉淀的二環(huán)己基脲，濾液利用水、飽和NaHCO3水溶液和鹽水順序地洗滌。減壓除去有機溶劑，得到油狀物，通過快速柱色譜純化(硅膠，60％乙酸乙酯，于己烷中)后，得到酰胺34，為黃色固體(2.48g，82％)。Rf＝0.28(硅膠，60％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3343，2977，2933，2112，1738，1710，1619，1531，1498，1366，1333，1280，1161，1084，1047cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.23(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.98(dd，J＝2.0，11.0Hz，1H，Ar)，7.40(bt，1H，NHCO)，7.39-7.31(m，5H，Ph)，7.09(d，J＝11.0Hz，1H，Ar)，5.67(d，J＝8.0Hz，1H，NHCO2)，5.21(s，2H，CH2Ph)，4.60-4.50(bm，1H，CHCH2)，4.30(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2)，3.95-3.85(bm，1H，CHCHH)，3.78-3.70(bm，重疊，1H，CHCHH)，3.70(t，J＝6.0Hz，2H，CH2N3)，1.43(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 170.0，164.9，153.8，139.8，135.0，133.0，128.7，128.6，126.9，124.6，114.3，81.0，68.8，67.9，49.8，33.8，28.2，25.5，24.8 ； FAB-HRMS(M+Cs+)計算值661.1023，實測值661.1050.
如圖6所示，合成化合物35ab。向疊氮化物34(50mg，0.095mmol)的THF∶H2O(8ml THF∶0.04ml H2O)混合物的溶液中加入三苯基膦(50mg，0.19mmol)。反應混合物在室溫下攪拌14小時，減壓除去溶劑。通過快速柱色譜純化(硅膠，20％甲醇，于二氯甲烷中)，得到兩個主要餾分(總收率80％)。餾分117mg(淡黃色油狀物，40％)，餾分217mg(淡黃色油狀物，40％)。在茚三酮試驗中，餾分1為陽性，餾分2為陰性。餾分1 35a Rf＝0.48(硅膠，20％甲醇，于二氯甲烷中)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.22(m，1H，Ar)，7.94(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，7.43-7.30(m，6H)，7.07(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，5.80(d，J＝6.0Hz，1H，NHBoc)，5.19(s，2H，CH2Ph)，4.54(bm，1H，CHNHBoc)，4.21(bm，2H，CH2OAr)，3.87-3.76(m，2H)，3.19(s，2H，CH2NH2)，2.75(bs，2H，NH2)，1.41(s，9H，tBu)；FAB-HRMS(M+H+)計算值503.2142，實測值503.2162.餾分2 35b Rf＝0.86(硅膠，20％甲醇，于二氯甲烷中)；
1HNMR(500MHz，CDCl3)d＝8.46(m，1H，Ar)，8.42(t，J＝6.5Hz，1H，NHAr)，7.79(dd，J＝2.5，11.0Hz，1H，Ar)，7.38-7.28(m，5H，Ar)，7.21(m，1H，NHCO)，6.80(d，J＝11.0Hz，1H，Ar)，5.85(d，J＝9.0Hz，1H，NHBoc)，5.19(s，2H，CH2Ph)，4.53(m，1H，CHNHBoc)，3.92(t，J＝6.5Hz，2H，CH2OH)，3.88-3.73(m，2H，CH2NH(CO))，3.52-3.38(m，2H，CH2NHAr)，1.41(s，9H，tBu)； FAB-HRMS(M+Cs+)計算值635.118，實測值635.110.
如圖6所示，合成化合物10。在室溫下，向35a(0.023g，0.046mmol)的THF∶H2O(6ml∶2ml)混合物的溶液中加入LiOH·H2O(4ml，0.092mmol)。攪拌混合物4小時，然后利用乙酸酸化。減壓除去溶劑，殘留物在下一步使用中無需進一步純化。向粗酸的2ml無水DMF溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(9ml，0.05mmol)和1H-吡唑羧基脒·HCl(8mg，0.05mmol)。16小時后，減壓除去溶劑，殘留物通過RP-HPLC(C-18)純化，得到10(3.25mg，13％)，為淺黃色固體。Rt＝20.5分鐘；1H NMR(500MHz，D2O)d 8.33(d，1H，J＝2.0Hz，Ar)，7.98(dd，1H，J＝2.0，9.0Hz，Ar)，7.30(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.42(m，1H，CHNHBoc)，4.34(t，J＝4.0Hz，2H，CH2NH(CO))，3.82(m，2H，NH2(C＝NH)NHCH2，3.63(t，2H，J＝4.0Hz，2H，CH2O)；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值587.0866，實測值587.0895.
如圖6所示，合成化合物37。在室溫下，向34(0.10g，0.019mmol)的CH2Cl2(4ml)溶液中加入三氟乙酸(4ml)。攪拌混合物2小時。真空除去溶劑，得到淺黃色油狀物，在快速色譜純化后(硅石，5％甲醇，于二氯甲烷中)，得到37，為油狀物(0.07g，84％)。Rf＝0.19(硅石，5％甲醇，于二氯甲烷中)；
1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.21(d，J＝2.0Hz，1H，2-Ar-H)，7.95(dd，J＝2.0，11.0Hz，1H，6-Ar-H)，7.39-7.29(m，5H，Ar)，7.21(bm，1H)，7.05(d，J＝9.0Hz，1H)，5.16(s，2H，CH2Ph)，4.27(t，J＝5.0Hz，2H，CH2OAr)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H，CH2N3)，3.95-3.78(bm，1H，CHNH2)，3.65-3.52(bm，1H，CHCHH)，4.32-4.31(bm，1H，CHCHH)；13C(125MHz，CDCl3)d 164.9，153.7，139.2，135.1，133.1，128.6，128.5，128.4，127.0，124.6，114.2，68.7，67.4，49.7，33.8，25.5；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值561.0499，實測值561.0507.
如圖6所示，合成化合物38a。在室溫下，向37(0.13g，0.30mmol)的CH2Cl2(10ml)中加入N，N-二異丙基乙胺(0.07ml，0.39mmol)和苯磺酰氯(0.034ml，0.33mmol)。4小時后，利用CH2Cl2(10ml)和水(10ml)稀釋反應混合物。分層，利用飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌有機層并干燥(MgSO4)。真空除去溶劑，得到油狀物，在制備性薄層色譜純化(硅石，60％乙醚，于己烷中)后得到38a，為油狀物(0.13g，78％)。Rf＝0.43(硅石，60％乙醚，于己烷中)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.26(d，J＝2.0Hz，1H，2-Ar-H)，7.98(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，6-Ar-H)，7.81(d，J＝8.0Hz，2H，Ar)，7.53(t，J＝8.0Hz，1H，p-苯基)，7.42(t，J＝8.0Hz，2H，m-苯基)，7.31-7.30(m，3H，Ar)，7.22-7.21(m，2H，Ar)，7.08(d，J＝9.0Hz，1H，5-Ar-H)，7.03(t，J＝5.5Hz，1H)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，PhCHH)，4.99(d，J＝12.0Hz，1H，PhCHH)，4.29(t，J＝4.5Hz，2H，CH2O)，4.16(dd，J＝4.0，7.5Hz，1H，CHCHH)，3.92-3.87(m，1H，CHCH2)，3.72-3.67(m，重疊，3H，CHCHH，CH2N3)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.2，165.2，153.7，139.3，138.7，134.3，133.1，132.9，129.1，128.4，128.3，126.9，126.5，124.9，114.1，68.7，68.1，55.4，49.7，42.4；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值701.0431，實測值701.0442.
如圖6所示，合成化合物38b。根據(jù)制備38a相同的方法制備化合物38b，使用1-萘磺酰氯替代苯磺酰氯。收率0.031g(57％)，為油狀物。Rf＝0.18(5％甲醇，于二氯甲烷中)；IR(薄膜)nmax3277，2930，2112，1740，1652，1618，1523，1496，1348，1280，1162，1125，984，910，772cm-1.1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.60(d，J＝11.0Hz，1H，萘基)，8.21(dd，J＝2.0，9.3Hz，1H，萘基)，8.03(d，J＝2.9Hz，1H，2-Ar-H)，8.01(d，J＝10.4Hz，1H，萘基)，7.87(d，J＝9.3Hz，1H，萘基)，7.81(dd，J＝2.9，11.0Hz，1H，6-Ar-H)，7.62(ddd，J＝1.7，8.7，8.7Hz，1H，萘基)，7.54(ddd，J＝1.3，8.8，8.8Hz，1H，萘基)，7.47(dd，J＝9.4，10.1Hz，1H，萘基，7.28-7.22(m，3H，Ph)，7.12-7.07(m，2H，Ph)，6.98(d，J＝11.0Hz，1H，5-Ar-H)，6.69(dd，J＝7.5Hz，1H，NHCO)，6.22(d，J＝9.5Hz，1H，NHSO2)，4.89(d，J＝15.0Hz，1H，CHHPh)，4.83(d，J＝15Hz，1H，CHHPh)，4.25(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2)，4.13(ddd，J＝5.4，9.4，9.5Hz，1H，CHCH2)，3.74(ddd，J＝5.4，7.4，17.5Hz，1H，CHCHH)，3.69(t，J＝6.1Hz，2H，CH2N3)，3.67(ddd，重疊，J＝7.5，9.0，17.5Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.3，165.1，153.7，139.1，134.8，134.4，134.0，13 3.5，132.9，129.9，129.0，128.6，128.5，128.3，127.7，126.3，124.8，124.1，114.0，68.7，67.9，55.7，49.8，42.2；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值751.0587，實測值751.0599.
如圖6所示，合成化合物39a和41a。根據(jù)制備35ab相同的方法制備化合物39a和41a，使用化合物38b替代38a。收率F1＝0.029g，F(xiàn)2＝0.028g；總收率80％。在茚三酮試驗中，F(xiàn)2為陽性，而F1不是。Rf(F1)41a＝0.39(硅石，于二氯甲烷中10％甲醇)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.35(bs，1H，2-Ar-H)，8.31(bs，1H，CH2NHAr)，7.76-7.60(m，重疊，3H，Ar)，7.50(bs，1H)，7.38(t，J＝9.0Hz，1H，Ar)，7.28(t，J＝9.0Hz，2H，Ar)，7.26-7.13(m，5H，Ar)，6.86(d，J＝11.0Hz，1H，Ar)，6.64(d，J＝11.0Hz，1H，NHSO2)，4.92(d，J＝15.0Hz，1H，PhCHH)，4.86(d，J＝15.0Hz，1H，PhCHH)，4.26-4.23(m，1H，CHCH2)，3.80-3.67(m，重疊，4H，HOCH2，CHCH2)，3.34-3.31(bm，CH2NHAr)，2.92(bs，CH2OH)；Rf(F2)39a＝0.16(硅石，20％甲醇，于二氯甲烷中)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.24(bs，1H，Ar)，7.94(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，7.80(d，J＝8.0Hz，2H)，7.49(t，J＝8.0Hz，1H，Ph)，7.40(t，J＝8.0Hz，2H，ph)，7.30-7.28(m，3H，Ar)，7.19-7.18(m，重疊， 3H，Ar，NH(CO))，7.02(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，5.01(d，J＝12.5Hz，1H，PhCHH)，4.97(d，J＝12.5Hz，1H，PhCHH)，4.18-4.15(m，重疊， 3H，CHCH2，OCH2)，3.86-3.84(m，1H，CHCHH)，3.70-3.68(m，1H，CHCHH)，3.15-3.13(bm，2H，OCH2NH2)，2.82(bm，2H，NH2)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.5，165.4，154.4，139.9，138.8，134.4，133.0，132.8，129.0，138.5，128.4，127.0，126.3，125.0，114.1，71.4，68.0，55.4，42.3，40.7；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值675.0526，實測值675.0546.
如圖6所示，合成化合物11。根據(jù)制備化合物10相同的方法制備化合物11，使用40a替代36b。收率3.31g(13％)。
1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.26(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.04(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.82-7.80(m，2H，Ph)，7.47-7.36(m，4H，5-ArH，Ph)，4.35(t，J＝5.0Hz，2H，OCH2)，4.19(dd，J＝4.0，14.0Hz，1H，CHCH2)，3.75(dd，J＝4.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.68(t，J＝5.0Hz，2H，CH2NH(C＝N))，3.47(dd，J＝11.0，14.0Hz，1H，CHCHH).
如圖6所示，制備化合物12。在室溫下，向芐基酯41a(0.10g，0.22mmol)的THF∶H2O(3ml∶1ml)溶液中加入LiOH·H2O(18.5mg，0.44mmol)。在攪拌4小時之后，利用乙酸酸化反應混合物，真空除去溶劑，得到粗酸42a。向酸42a的DMF(5ml)溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(38ml，0.22mmol)。在50℃下攪拌16小時之后，真空除去溶劑，得到油狀物，在RP-HPLC(C-18)之后得到12(5.4mg，5％)，為淺黃色固體。Rt＝14.9分鐘；
1H NMR(600MHz，CDCl3)d 8.26(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.67-7.65(m，2H，ph)，7.64(dd，J＝2.0，9.0Hz，Ar)，7.24-7.18(m，3H，Ph)，7.06(d，J＝9.0Hz，Ar)，4.49(t，J＝4.0Hz，2H，CH2OH)，4.15(dd，J＝6.0，10.0Hz，1H，CHCH2)，3.86(t，J＝4.0Hz，2H，CH2N(C＝NH)NH2)，3.70(dd，J＝6.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.35(dd，J＝10.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(150MHz，CDCl3)d 167.6，164.9，147.2，141.7，132.4，130.5，129.6，127.7，126.8，125.6，125.5，122.2，112.5，70.4，42.6，28.7，23.2. 電噴質譜 (M+H+)計算值495，實測值495.
如圖6所示，合成化合物39b。向疊氮化物38b(0.031g，0.05mmol)的THF∶H2O(8ml∶0.04ml)溶液中加入三苯基膦(0.026g，0.1mmol)。在室溫下攪拌12小時后，真空除去溶劑，得到白色固體。通過制備性薄層色譜純化(硅石，20％甲醇，于二氯甲烷中)固體后，得到39b，為油狀物(0.013g，44％)。Rf＝0.1(硅膠，10％甲醇，于二氯甲烷中)；IR(薄膜)nmax3361，3282，3070，2922，2851，1742，1650，1620，1527，1456，1349，1322，1280，1162，1126，989，910 cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d＝8.63(d，J＝10.8Hz，1H，萘基)，8.17(dd，J＝1.0，9.1Hz，1H，naphthyl)，8.02(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，7.92(d，J＝10.3Hz，1H，萘基)，7.77(d，J＝10.3Hz，1H，萘基)，7.72(dd，J＝2.6，11.0Hz，1H，Ar)，7.58(dd，J＝8.3，8.3Hz，1H，萘基)，7.49(dd，J＝7.3，7.3Hz，1H，萘基)，7.41(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H，萘基)，7.23-7.16(m，3H，Ph)，7.09-7.04(m，2H，Ph)，6.84(d，J＝11.1Hz，1H，Ar)，4.83(d，J＝15.2Hz，1H，CHHPh)，4.76(d，J＝15.2Hz，1H，CHHPh)，4.23(dd，J＝5.8，9.1Hz，1H，CHCH2)，4.10-4.04(bm，2H，OCH2)，3.95-3.61(bm，5H，CH2NH2，CHCHH)，3.18-3.05(bm，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 169.6，165.3，154.2，146.9，134.6，134.5，134.0，13 3.9，133.2，129.8，129.0，128.6，128.5，128.4，128.2，127.8，127.0，125.9，124.9，124.2，124.1，114.3，67.6，55.9，42.0，40.5，29.6；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值725.0682，實測值725.0695.
如圖6所示，合成化合物13。根據(jù)制備化合物10相同的方法制備化合物13，使用40b替代36b。收率1.8mg(15％)，為淺黃色固體。
Rt＝21.2分；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.63(d，J＝9.0Hz，1H，萘基)，8.17(dd，J＝1.5，7.5Hz，1H，萘基)，7.94(d，J＝8.5Hz，1H，萘基)，7.88(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，7.76-7.70(m，重疊，2H，6-Ar-H，萘基-)，7.57(ddd，J＝1.0，6.5，9.3Hz，1H，萘基)，7.47(dd，J＝7.5，8.0Hz，1H，萘基)，7.42(ddd，J＝1.0，7.0，7.5Hz，1H，萘基)，7.25(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.36(t，J＝5.0Hz，1H，CH2O)，4.18(dd，J＝4.5，9.5Hz，1H，CHCHH)，3.72(t，J＝5.0Hz，2H，CH2NH)，3.65(dd，J＝4.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.41(dd，J＝9.5，13.5Hz，1H，CHCHH)； 電噴質譜 計算值(M+H+)545，實測值545.
如圖7所示，制備化合物51。在室溫下，向氨基乙醇(43)(1.0ml，16.0mmol)的DMF(30ml)溶液中加入1，3-二-(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(48)(4.81g，16.0mmol)、三乙胺(4.63ml，32.0mmol)和二氯化汞(II)(4.48g，16.0mmol)。4小時后，利用乙酸乙酯稀釋反應混合物，通過一小段硅藻土(celite)過濾。利用水(2×20ml)、鹽水(20ml)順序地洗滌濾液，在MgSO4上干燥。在過濾并加壓蒸發(fā)溶劑后，粗化合物通過快速柱色譜純化，得到51，為無色固體(4.95g，98％)。Rf＝0.43(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3329，3142，2977，2934，2870，1724，1644，1443，1412，1360，1299，1103，1052，1027，864，809，778cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.48(bs，1H，NHCO2)，8.66(m，1H，CH2NH)，4.54(bs，1H，OH)，3.74(t，J＝4.5Hz，2H，CH2OH)，3.54(dt，J＝5.5，5.5Hz，2H，CH2NH)，1.47(s，9H，tBu)，1.45(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 162.8，157.4，153.1，83.5，79.2，63.1，44.4，28.2，28.0； FAB-HRMS(M+H+)計算值304.1872，實測值304.1878.
如圖7所示，合成化合物52。在室溫下，向哌嗪(44)(3.45ml，12.0mmol)的DMF(10ml)溶液中加入1，3-二-(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(48)(0.87g，3.00mmol)。14小時后，利用乙酸乙酯和水稀釋反應混合物。分層，利用水(2×20ml)、鹽水(20ml)順序地洗滌有機層，在Na2SO4上干燥。減壓除去溶劑，得到52，為無色固體(0.93g，95％)。Rf＝0.34(硅膠，10％甲醇，于二氯甲烷中)；IR(KBr)nmax3294，2980，2931，2856，1749，1664，1605，1527，1448，1367，1305，1230，1149，1116，1019，893，842，730，682cm-1.1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 3.48(t，J＝5.0Hz，4H，(CH2)2N(C＝N)，2.83(t，J＝5.0Hz，4H，(CH2)2NH)，1.46(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，甲醇 -d4)d154.4，81.4，48.2，46.0，28.6；FAB-HRMS(M+Na+)計算值341.1226，實測值341.1235.
如圖7所示，制備化合物53。在室溫下，向氨基己烷硫醇(45)(114mg，1.00mmol)的DMF(5ml)溶液中加入N，N′-二-叔丁氧基羰基硫脲(49)(276mg，1.00mmol)和三乙胺(2.79ml，2.00mmol)。14小時后，利用5ml水稀釋反應混合物，利用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。利用鹽水洗滌合并的萃取液，在MgSO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)溶劑后，粗化合物通過快速柱色譜純化(硅膠，25％乙醚，于己烷中)，得到53，為對空氣敏感的無色固體(191mg，59.8％)。Rf＝0.16(硅石，25％乙醚，于己烷中)；IR(KBr)nmax3327，3132，2978，2931，1726，1643，1565，1431，1363，1329，1280，1227，1133，1088，1058，855，809，760，606cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.45(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.61(bt，J＝5.9Hz，1H，CH2NH)，3.74(bdt，J＝6.0，6.5Hz，2H，CH2NH)，2.85(t，J＝6.5Hz，2H，CH2SH)，1.47(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 163.4，156.1，153.1，83.2，79.3，39.2，37.0，28.3，28.1；FAB-HRMS 計算僅實測到S-S二聚物！如圖7所示，合成化合物54。在室溫下，向乙二胺(54)(3.45ml，51.6mmol)的DMF(50ml)溶液中加入1，3-二-(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(48)(3.00g，10.33mmol)、三乙胺(2.88g，20.7mmol)和氯化汞(II)(2.81g，10.3mmol)。4小時后，利用20ml乙酸乙酯稀釋反應化合物，通過一小段硅藻土(celite)過濾。利用水(2×50ml)、鹽水(50ml)順序地洗滌濾液，在MgSO4上干燥?？焖僦V純化(硅膠，20％MeOH，于乙酸乙酯中，+2％v/v Et3N)，得到54，為無色固體(1.60g，51.2％)。Rf＝0.30(硅膠，20％ MeOH，于乙酸乙酯中，+2％v/v Et3N)；IR(KBr)nmax3446，3389，3259，2978，2819，1728，1706，1656，1626，1521，1485，1365，1253，1171，1093，1049，888，802，738，699，562 cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.38(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.61(bt，1H，CH2NH(C＝N))，3.45(bdt，J＝5.5，5.5Hz，2H，CH2NH)，2.85(t，J＝5.5Hz，2H，CH2NH2)，1.46(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 163.4，156.4，153.1，83.1，79.2，41.8，40.9，28.2；FAB-HRMS(M+H+)計算值303.2032，實測值303.2037.
如圖7所示，合成化合物55。在室溫下，向苯二胺(1.08g，0.01mol)的5.5N HCl(10ml)溶液中加入b-丙氨酸(1.125g，0.015mol)?；亓鞣磻旌衔?4小時，然后允許冷卻至室溫。真空除去溶劑，得到沉淀，過濾該沉淀并利用乙醚(1.70g，73％)洗滌。Rf＝0.12(20％甲醇，于二氯甲烷中)；
1H NMR(500MHz，D2O)d7.73-7.72(m，2H，Ar)，7.55-7.53(m，2H，Ar)，3.61-3.55(m，4H，CH2CH2)；13C NMR(125MHZ，D2O)d FAB-HRMS(M+H+)計算值162.1031，實測值162.1029.
如圖7所示，合成化合物56。在室溫下，向乙二胺(46)(1.0ml，0.015mol)的DMF(10ml)溶液中加入2-(3，5-二甲基吡唑基)-4，5-脫氫咪唑氫溴酸鹽(50)(3.67g，0.015mol)和N，N-二異丙基胺(2.61ml，0.015mol)。攪拌11小時后，向反應化合物中加入乙醚(12ml)，生成白色沉淀。過濾該沉淀并利用乙醚洗滌，得到56(1.59g，51％)。
IR(KBr)nmax3164，1681，1599，1484，1287，1211，1137，1069，952cm-1；1H NMR(500MHz，D2O)d 3.54(bs，4H，NHCH2CH2NH)，3.17(t，J＝6.0Hz，CH2NH)，2.65(t，J＝6.0Hz，CH2NH2)；13C NMR(125MHz，D2O)d 160.9，45.3，43.6，40.3；FAB-HRMS(M+H+)計算值129.1140，實測值129.1134.
如圖8所示，合成化合物58。在0℃下，向3-硝基-4-氟苯甲酸(30)(1.59g，8.57mmol；Aldrich)的苯(40ml)溶液中加入DMF(0.03ml，0.40mmol)和草酰氯(3.73ml，20.2mmol)。6小時后，真空除去溶劑。將所得黃色粘稠油狀物(1.73g，8.57mmol)溶解在CH2Cl2(20ml)中。將溶液冷卻至0℃，加入三乙胺(1.28ml，9.20mmol)。加入被護叔丁酯2-氨基丙氨酸29a(2.32g，7.70mmol)的CH2Cl2(40ml)溶液。4小時后，利用水稀釋反應化合物。分層后，利用二氯甲烷(2×50ml)萃取水相。利用飽和NaHCO3-水溶液洗滌合并的有機萃取液，在MgSO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)溶劑后，該粗化合物通過快速柱色譜純化(硅膠，45％乙酸乙酯，于己烷中)，得到58，為黃色泡沫狀物(3.90g，98％)。Rf＝0.19(硅膠，40％乙酸乙酯，于己烷中)；
IR(KBr)nmax3286，2980，2936，1730，1653，1619，1537，1493，1448，1349，1314，1159，1131，1092cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.56(dd，4J(1H-1H)＝2.5Hz，4J(1H-19F)＝7.5Hz，1H，2-Ar-H)，8.12(ddd，4J(1H-1H)＝2.5Hz，4J(1H-19F)＝4.0Hz，3J(1H-1H)＝9.0Hz，1H，6-Ar-H)，7.84(d，J＝7.5Hz，2H，o-苯基)，7.58(d，J＝7.5Hz，1H，p-苯基)，7.50(t，J＝7.5Hz，2H，m-Ar)，7.34(dd，3J(1H-1H)＝9.0Hz，3J(1H-19F)＝10.0Hz，Ar-H)，7.13(t，J＝5.5Hz，1H，(C＝O)NH)，5.89(d，J＝8.0Hz，1H，CHNHSO2Ph)，3.97-3.92(m，2H，CHH，CHCH2)，3.60-3.54(m，1H，CHH)，1.29(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.1，164.5，158.1，156.0，138.6，134.2，134.1，133.2，130.9，129.2，127.2，125.6，118.9，118.7，84.2，55.8，42.5，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值600.0217，實測值600.0195.
如圖8所示，合成化合物59。根據(jù)制備化合物58相同的方法制備化合物59，只是使用2-萘磺酰氯替代苯磺酰氯。收率985mg(96％)，為灰白色固體。Rf＝0.24(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3395，3297，3083，2981，2937，1734，1671，1620，1534，1494，1460，1345，1264，1156，1128，1079，977，918，833，750，661，617，549，479 cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.46(dd，4J(1H-1H)＝2.5Hz，4J(1H-19F)＝7.0Hz，1H，2-Ar-H)，8.38(d，J＝2.0Hz，1H，萘基)，8.02(ddd，4J(1H-1H)＝2.5Hz，4J(1H-19F)＝4.0Hz，3J(1H-1H)＝8.8Hz，1H，6-Ar-H)，7.90(bd，重疊，J＝8.5Hz，1H，萘基)，7.88 (bd，重疊，J＝8.5Hz，1H，萘基)，7.83(bd，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.79(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H，萘基)，7.62(ddd，J＝1.0，7.5，8.5Hz，1H，萘基)，7.58(ddd，J＝1.0，7.5，8.5Hz，1H，萘基)，7.27(br.dd，J＝6.0，8.5Hz，1H，CONH)，7.18(bdd，3J(1H-1H)＝9.0Hz，3J(1H-19F)＝10.0Hz，1H，5-Ar-H)，6.15(d，J＝8.0Hz，1H，NHSO2)，4.06(ddd，J＝4.0，5.5，8.0Hz，1H，CHCH2)，3.93(ddd，J＝4.0，6.0，11.0Hz，1H，CHCHH)，3.57(ddd，J＝5.5Hz，8.5Hz，1H，CHCHH)，1.17(s，9 H，tBu)；13C NMR (125MHz，CDCl3)d 168.3，164.3，158.0，155.8，135.5，134.7，134.1，134.0，131.8，130.5，129.5，129.1，128.6，127.7，125.4，122.0，118.6，118.4，83.9，55.9，42.3，27.4；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值650.0373，實測值650.0358.
如圖8所示，合成化合物60。在0℃下，向安裝有磁性攪拌棒的圓底燒瓶中放入NaH(60％懸浮液，于礦物油中)(0.16g，3.96mmol)和THF(10ml)。向攪拌懸浮液中加入51(0.55g，1.80mmol)的THF(5ml)溶液。在此溫度下再繼續(xù)攪拌30分鐘，所的灰色懸浮液備用。將安裝有磁性攪拌棒的圓底燒瓶中充填芳族氟化物58(0.1g，0.30mmol)和DMF(10ml)。冷卻溶液至0℃，通過注射器將先前制備好的5.5ml懸浮液加入。在0℃下8小時后，通過加入水(10ml)使反應停止，利用乙酸乙酯稀釋。分離水相并利用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。利用水(2×10ml)和鹽水(10ml)順序地洗滌合并的有機萃取液，在MgSO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)溶劑后，殘留物通過快速柱色譜純化(硅石，60％乙酸乙酯，于己烷中)，得到60，為淺黃色泡沫狀物(0.15g，66％)。Rf＝0.1 8(硅石，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3331，2978，2951，1733，1645，1619，1532，1367，1319，1277，1144，1051，1025cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.43(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.76(bt，J＝5.5Hz，1 H，CH2NH(C＝N))，8.32(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，8.00(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H，Ar)，7.85-7.84(m，2H，Ph)，7.58(t，J＝8.0Hz，1H，Ph)，7.49(t，J＝8.0Hz，2H，Ph)，7.20(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，6.95(t，J＝8.0Hz，1H，NHCO)，5.84(d，J＝7.5Hz，1H，HNSO2)，4.28(t，J＝5.5Hz，2H，CH2O)，3.96-3.87(m，重疊，4H，CHCH2，CH2NH(C＝N))，3.60-3.54(m，1H，CHCH2)，1.50(s，9H，tBu)，1.48(s，9H，tBu)，1.28(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.2，165.0，163.3，156.5，154.5，154.1，150.9，139.4，138.8，133.1，132.7，129.2，127.2，126.5，125.0，114.5，84.0，83.4，68.1，55.9，42.4，39.4，28.3，28.0，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值883.1949，實測值883.1970.
如圖8所示，合成化合物11。向60(30.0mg，0.04mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液中滴加三氟乙酸(2ml)。反應混合物在25℃下攪拌2小時。減壓除去溶劑，殘留物通過RP-HPLC(C-18)純化，得到11，為淺黃色固體(22.0mg，92％)。Rt＝12.2分鐘；IR(KBr)nmax3418，1679，1529，1433，1354，1319，1278，1198，1161，1092，1046，932，837，802，756，688cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.26(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.04(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.82-7.80(m，2H，Ph)，7.47-7.36(m，4H，Ar)，4.35(t，J＝5.0Hz，2H，OCH2)，4.19(dd，J＝4.0，14.0Hz，1H，CHCH2)，3.75(dd，J＝4.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.68(t，J＝5.0Hz，2H，CH2NH(C＝N))，3.47(dd，J＝11.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 167.7，155.0，142.2，140.7，134.5，133.6，130.0，128.2，125.9，115.7，69.8，43.3，41.8，25.2；FAB-HRMS(M+H+)計算值495.1298，實測值495.1311.
如圖8所示，合成化合物61。向58(100mg，0.20mmol)的DMF(10ml)溶液中加入53(68mg，0.22mmol)。在室溫下攪拌4小時后，利用水(10ml)稀釋反應混合物，利用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水相。利用水(2×10ml)和鹽水(20ml)順序地洗滌合并的有機萃取液，在Na2SO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)，殘留物通過快速柱色譜(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)純化，得到61，為淺黃色泡沫狀物(110mg，73％)。Rf＝0.48(硅膠，60％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(film)nmax3318，2925，1723，1623，1517，1412，1324，1158cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.47(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.59(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，8.56(t，J＝10.0Hz，1H，NH)，8.43(t，J＝10.0Hz，1H，NH)，7.93(dd，J＝2.5Hz，10.0Hz，1H，Ar)，7.84(d，J＝9.0Hz，2H，Ph)，7.53(t，J＝10.0Hz，1H，Ph)，7.46(t，J＝10.0Hz，2H，Ph)，7.21(d，J＝10.0Hz，1H，Ar)，6.81(t，J＝10.0Hz，1H，CONH)，5.87(d，J＝10.0Hz，1H，NHSO2)，3.98-3.93(m，1H，CHCH2)，3.87-3.82(m，1H，CHCHH)，3.72-3.55(m，5H，CHCHH，NHCH2，CH3NH(C＝N))，1.52(s，9H，tBu)，1.47(s，9H，tBu)，1.27(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.4，165.7，163.3，156.6，153.2，146.9，139.1，134.7，133.0，131.4，129.1，127.2，126.2，121.0，114.4，83.7，83.5，79.5，56.2，42.4，42.2，39.0，28.3，28.0，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值882.2109，實測值882.2129.
如圖8所示，合成化合物14。根據(jù)制備化合物11相同的方法制備化合物14，只是使用61替代60。收率33.2g(92％)，為黃色固體。Rt＝15.9分鐘；IR(KBr)nmax3364，3245，2998，2584，1669，1624，1555，1520，1433，1313，1198，1161，923，756，722cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.61(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，7.92(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H，Ar)，7.81(d，J＝7.0Hz，2H，Ph)，7.47-7.40(m，3H，Ph)，7.11(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.19(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.72(dd，J＝5.0，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.67(t，J＝6.0Hz，2H，NHCH2)，3.52(t，J＝6.0Hz，2H，NHCH2)，3.46(dd，J＝9.0，13.5Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 168.3，159.0，148.0，142.1，135.8，133.6，132.9，130.0，127.8，125.0，122.3，114.8 43.2，42.5，41.1，31.1； FAB-HRMS(M+H+)計算值494.1458，實測值494.1444.
如圖8所示，合成化合物62。在0℃下，向54(1.60mg，5.0mmol)的THF(50ml)溶液中加入NaH(60％懸浮液，于礦物油中)(200mg，5.00mmol)。15分鐘后，將所得硫醇鹽溶液備用。通過注射器，向58(100mg，0.20mmol)的DMF(10ml)溶液中加入硫醇鹽溶液(5.0ml，0.5mmol)。在室溫下12小時后，通過加入水(10ml)使反應停止，利用乙酸乙酯稀釋。分相后利用乙酸乙酯(3×25ml)萃取水相。利用水(2×10ml)和鹽水(10ml)順序地洗滌合并的有機萃取液，在MgSO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)后，殘留物通過快速柱色譜純化(硅膠，40％乙酸乙酯，于己烷中)，得到62，為淺黃色泡沫狀物(35mg，23％)。Rf＝0.32(硅膠，40％乙酸乙酯，于己烷中)；Rf＝0.32(silica gel，40％ ethyl acetate in hexanes)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.45(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.65(bt，重疊，J＝4.5Hz，1H，CH2NH(C＝N))，8.63(d，重疊，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.22(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，8.15(dd，J＝2.0，8.5Hz，2H，Ar)，7.84(d，J＝8.0Hz，2H，Ph)，7.56(t，J＝7.5Hz，1H，Ph)，7.48(bdd，J＝7.0，8.0Hz，2H，Ph)，6.98(t，J＝5.5Hz，1H，CONH)，5.72(d，J＝7.0Hz，1H，NHSO2)，3.99-3.93(bm，1H，CHCH2)，3.88(ddd，J＝4.5，5.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.70-3.58(m，3H，CHCHH，CH2NH(C＝N))，3.26(t，J＝8.0Hz，2H，SCH2)，1.57(s，9H，tBu)，1.50(s，9H，tBu)，1.30(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.2，165.1，163.4，156.3，153.1，145.3，141.0，138.9，133.1，132.3，130.3，129.2，127.7，127.2，124.7，84.0，83.5，79.6，55.9，42.4，39.2，30.1，28.4，28.0，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值899.1720，實測值899.1753.
如圖8所示，合成化合物15。根據(jù)制備化合物11相同的方法制備化合物15，只是使用62替代60。收率23.0g(92％)，為黃色固體。Rt＝16.0分鐘；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.58(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.06(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.82(d，J＝7.0Hz，2H，Ph)，7.71(d，J＝8.5Hz，1H，Ph)，7.48-7.41(m，3H，Ar)，4.23(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.80-3.76(m，1H，CHCHH)，3.56(t，J＝6.5Hz，2H，CH2NH(C＝N))，3.50-3.43(m，1H，CHCHH)，3.34(t，J＝6.5Hz，2H，SCH2)；13CNMR(125MHz，甲醇-d4)d 167.6，155.2，142.1，140.7，133.5，133.3，132.5，128.3，128.0，126.0，43.4，40.7，32.3；FAB-HRMS(M+H+)計算值511.1070，實測值511.1058.
如圖8所示，合成化合物65。向58(100mg，0.20mmol)的DMF(10ml)溶液中加入52(68mg，0.22mmol)。6小時后，利用水(25ml)和乙酸乙酯稀釋反應混合物。分相后利用乙酸乙酯(3×30ml)萃取水相。利用水(2×20ml)和鹽水(20ml)順序地洗滌合并的有機萃取液，在Na2SO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)后，殘留物通過快速柱色譜純化(硅膠，40 & 50％乙酸乙酯，于己烷中)，得到65，為淺黃色泡沫狀物(120mg，83％)。Rf＝0.30(硅膠，40％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(膜)nmax3266，2977，1743，1621，1520，1451，1367，1304，1158，1130，1094，1014cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 10.22(bs，1H，(C＝N)HN(C＝O))，8.29(d，J＝2.5Hz，1H，Ar)，7.92(dd，J＝2.5，9.0Hz，1H，Ar)，7.85-7.84(m，2H，Ph)，7.83-7.82(m，1H)，7.56(t，J＝7.0Hz，1H，Ph)，7.48(t，J＝7.0Hz，2H，Ar-H)，7.08(d，J＝9.0Hz，1H，Ar-H)，6.93(t，J＝6.0Hz，1H，CO(NH))，5.85(d，J＝8.0Hz，1H，NHSO2)，3.96-3.87(m，2H，CHCH2，CHCHH)，3.80-3.70(bm，4H，NH(CH2)2)，3.59-3.54(m，1H，CHCHH)，3.23-3.21(m，4H，N(CH2)2)，1.48(s，18H，tBu)，1.26(s，9H，tBu)；13C NMR(500MHz，CDCl3)d 168.3，165.3，155.2，147.5 140.9，138.8，133.1，132.0，129.2，127.2，126.3，126.0，119.9，84.0，56.0，50.3，42.2，28.1，27.6； FAB-HRMS(M+Cs+)計算值908.2265，實測值908.223 3.
如圖8所示，合成化合物16。根據(jù)制備化合物11相同的方法制備化合物16，只是使用66替代65。收率15.0g(93％)，為黃色固體。Rt＝15.3分鐘；
IR(KBr)nmax3367，3239，2925，2857，1662，1613，1523，1449，1388，1320，1199，1173，113 5，1093，992，837，802，721cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.22(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.95(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.79(m，2H，Ph)，7.47-7.38(m，3H，Ph)，7.32(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，4.21(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.74(dd，J＝5.0，10.0Hz，1H，CHCHH)，3.67-3.65(m，4H，N(CH2)2)，3.49-3.44(m，1H，CHCHH)，3.31-3.29(m，4H，N(CH2)2)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 172.6，167.9，158.4，148.3，142.8，142.2，129.9，56.6，50.9，46.3，43.3；FAB-HRMS(M+H+)計算值520.1614，實測值520.1630.
如圖8所示，合成化合物63。在0℃下，向51(130mg，0.43mmol)的THF(5.0ml)溶液中加入NaH(60％懸浮液，于礦物油中)(70mg，1.74mmol)。在此溫度下再繼續(xù)攪拌15分鐘，所的灰色懸浮液備用。向59(200mg，0.39mmol)的DMF(20ml)溶液中加入烷醇(2.5ml)。在0℃下攪拌1小時后，加入剩余的2.5ml烷醇。在0℃下3小時后，通過加入10ml飽和NH4Cl溶液使反應停止，利用乙酸乙酯稀釋。分相后利用乙酸乙酯(3×25ml)萃取水相。利用水(2×10ml)和鹽水(10ml)順序地洗滌合并的有機萃取液，在MgSO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)后，殘留物通過快速柱色譜純化(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)，得到63，為黃色固體(211mg，69％)。Rf＝0.16(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3330，2979，2934，1728，1620，1570，1531，1416，1329，1281，1156，1079，1023，970，916，816，753，660，618，552，477cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.45(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.78(bt，1H，CH2NH(C＝N))，8.37(s，1H，Ar)，8.26(d，J＝2.0Hz，1H，萘基)，7.92-7.87(2×d，J＝8.0Hz，2H，萘基)，7.90(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，7.83(d，J＝8.5Hz，1H，
萘基)，7.79(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，萘基)，7.64-7.55(2×br.dd，2H，萘基)，7.07(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，6.90(dd，J＝5.5，5.5Hz，1H，CH2NH(C＝O))，5.95(d，J＝7.5Hz，1H，NHSO2)，4.22(t，J＝5.3Hz，2H，OCH2)，4.02(ddd，J＝4.0，7.5，8.5Hz，1H，CHCH2)，3.93-3.83(m，重疊，3H，CHCHH，CH2NH(C＝N))，3.55(ddd，J＝5.5，8.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，1.50(s，9H，tBu)，1.47(s，9H，tBu)，1.17(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.3，164.9，156.4，154.0，152.9，139.3，135.6，134.9，132.6，132.0，129.6，129.2，129.1，128.7，127.8，127.7，127.6，126.3，125.0，122.1，114.4，84.0，83.5，68.0，56.1，42.3，39.5，28.3，28.0，27.5；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值933.2105，實測值933.2116.
如圖8所示，合成化合物17。根據(jù)制備化合物11相同的方法制備化合物17，只是使用63替代60。收率32.7g(99％)，為灰白色至淺褐色固體。Rt＝14.5分鐘；IR(KBr)nmax＝3421，2999，2898，1657，1635，1528，1383，1351，1322，1276，1198，1157，1132，1080，1046，979，823，754，660，550cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.15(s，1H，萘基)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.69-7.58(m，4H，萘基，Ar)，7.42-7.35(2×ddd，superimposed，2H，萘基)，6.92(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.21(dd，J＝4.5，9.8Hz，1H，CHCH2)，4.13(t，J＝5.0Hz，2H，OCH2)，3.61(dd，J＝4.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.57(t，J＝4.5Hz，2H，CH2NH(C＝N))，3.28(dd，J＝9.8Hz，13.5Hz，1H，CHCHH)；13CNMR(125MHz，甲醇-d4)d 172.8，167.1，159.3，154.9，140.1，139.5，13 5.9，134.1，133.4，130.3，130.2，129.5，128.8，128.7，128.4，127.3，125.7，123.5，115.3，69.7，56.8，43.1，41.8；FAB-HRMS(M+H+)計算值545.1455，實測值545.1471.
如圖8所示，合成化合物64。在室溫下，向59(50mg，0.10mmol)的1-甲基-2-吡咯烷酮(1ml)溶液中加入53(58mg，0.19mmol)。4小時后，利用水(10ml)稀釋反應混合物，利用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水相。利用水(2×5ml)和鹽水(5ml)順序地洗滌合并的有機萃取液，在MgSO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)后，殘留物通過快速柱色譜純化(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)，得到64，為黃色固體(76mg，99％)。Rf＝0.22(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3300，3065，2975，2931，1734，1660，1620，1535，1497，1347，1261，1159，1129，1079，972，917，817，751，661，551，477cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.49(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O))，8.58(bt，1H，CH2NH(C＝N))，8.47(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，8.41(dd，J＝5.5Hz，1H，NHCH2)，8.37(d，J＝2.0Hz，1H，萘基)，7.90-7.84(m，重疊，3H，萘基)，7.86(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.79(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，萘基)，7.59(ddd，J＝1.5Hz，7.0，7.0Hz，1H，萘基)，7.54(ddd，J＝1.5Hz，7.0，7.0Hz，1H，萘基)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，6.69(t，J＝5.5Hz，1H，CH2NH(C＝O))，5.89(d，J＝8.0Hz，1H，NHSO2)，4.03(ddd，J＝4.0，8.0，8.5Hz，1H，CHCH2)，3.85(ddd，J＝4.0，6.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.70(bdt，J＝5.5，5.5Hz，2H，NHCH2)，3.61-3.50(m，3H，CHCHH，CH2NH(C＝N))，1.52(s，9H，tBu)，1.47(s，9H，tBu)，1.18(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.5，165.6，156.6，153.2，146.9，136.0，134.8，134.6，132.0，131.3，129.6，129.2，128.9，128.6，127.8，127.6，126.0，122.2，120.8，114.3，83.8，83.6，56.4，42.4，42.2，39.1，28.3，28.0，27.6；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值932.2265，實測值932.2285.
如圖8所示，合成化合物18。根據(jù)制備化合物11相同的方法制備化合物18，只是使用64替代60。收率81.7g(90％)，為桔黃色固體。Rt＝12.4分鐘；IR(KBr)nmax3364，1676，1624，1556，1520，1426，1315，1241，1200，1158，1133，1076，1025，999，824，757，719，660，549，479cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.17(bs，1H，萘基)，8.14(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.68-7.65(m，2H，萘基)，7.57(bd，重疊， J＝9.5Hz，1H，萘基)，7.55(dd，重疊，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.41(ddd，J＝1.5，7.0，8.0Hz，1H，萘基)，7.36(ddd，J＝1.5，7.0，8.0Hz，1H，萘基)，6.74(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.25(dd，J＝4.5，10.0Hz，1H，CHCH2)，3.62(dd，J＝4.5，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.52(t，J＝6.0Hz，2H，NHCH2)，3.41(t，J＝6.0Hz，2H，NHCH2)，3.30(dd，J＝10.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 173.0，167.8，147.8，139.5，135.9，135.3，133.4，130.3，130.2，129.3，128.7，128.6，128.3，127.2，123.5，121.5，114.5，57.0，42.9，42.5，41.5；FAB-HRMS(M+Na+)計算值566.1434，實測值566.1453.
如圖8所示，合成化合物66。在室溫下，向59(150mg，0.29mmol)的DMF(5ml)溶液中加入52(190mg，0.58mmol)。20小時后，利用水(25ml)和乙酸乙酯稀釋反應混合物。分相后，利用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。利用水(2×20ml)和鹽水(20ml)順序地洗滌合并的有機萃取液，在MgSO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)后，殘留物通過快速柱色譜純化(硅膠，40％乙酸乙酯，于己烷中)，得到66，為黃色固體(240mg，99％)。Rf＝0.33(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(KBr)nmax3397，2979，2933，1741，1610，1524，1454，1367，1303，1239，1157，1015，975，834，752，661，615，552，477cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 11.49(bs，1H，(C＝N)NH(C＝O)，8.38(bs，1H，萘基)，8.24(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.90(bd，J＝7.5Hz，1H，萘基)，7.87(brd，J＝9.0Hz，1H，萘基)，7.83(dd，superimposed，J＝2.0，8.5Hz，1H，Ar)，7.82(d，superimposed，J＝8.0Hz，1H，萘基)，7.79(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H，萘基)，7.64-7.55(2×bddd，重疊，2H，萘基)，7.13(bm，1H，NH(C＝O))，6.98(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.01(ddd，J＝3.5，8.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.88(ddd，J＝4.0，6.0，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.73(bm，4H，NCH2)，3.55(ddd，J＝5.5，8.5，13.5Hz，1H CHCHH)，3.18(bm，4H，NCH2)，1.48(s，18H，tBu)，1.15(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，CDCl3)d 168.6，165.1，155.2，147.3，140.9，135.6，134.9，132.0，129.6，129.2，129.0，128.7，127.8，127.7，126.2，126.0，122.1，119.8，119.7，83.9，56.1，50.3，42.2，28.2，28.0，27.3；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值958.2422，實測值958.2458.
如圖8所示，合成化合物19。根據(jù)制備化合物11相同的方法制備化合物19，只是使用66替代60。收率31.9g(93％)，為淺黃色固體。Rt＝11.1分鐘；IR(KBr)nmax3401，3297，3251，2996，2928，1659，1613，1523，1451，1385，1323，1199，1157，1138，1078，992，808，753，720，660，549cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.19(bs，1H，萘基)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.76(bd，J＝9.0Hz，1H，萘基)，7.71-7.61(m，重疊，3H，萘基，Ar)，7.55(dd，J＝2.0Hz，8.8Hz，1H，萘基)，7.44-7.36(2×ddd，重疊，2H，萘基)，6.91(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，4.21(dd，J＝4.5，9.5Hz，1H，CHCH2)，3.61(dd，J＝4.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.55(m，4H，NCH2)，3.29(dd，J＝9.5，13.5Hz，1H，CHCHH)，3.15-3.09(m，4H，NCH2)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d167.6，158.5，148.2，142.1，139.4，136.0，133.5，133.3，130.4，130.3，129.7，128.9，128.5，127.3，126.7，123.6，121.2，50.9，49.6，48.6，46.4；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值702.0747，實測值702.0784.
如圖9所示，合成化合物67。在室溫下，向57(0.10g，0.20mmol)的DMF(8ml)溶液中加入55(0.038g，0.22mmol)和三乙胺(0.06ml，0.44mmol)。在25℃下攪拌16小時后，利用EtOAc(10ml)和水(10ml)稀釋反應混合物。分層，利用乙酸乙酯(2×10ml)萃取水層。收集有機萃取液，利用水(2×10ml)和鹽水(20ml)洗滌，在Na2SO4上干燥。過濾并減壓蒸發(fā)后，殘留物通過快速柱色譜純化(硅膠，乙酸乙酯)，得到67，為淺黃色固體(110mg，92％)。Rf＝0.43(硅膠，乙酸乙酯)；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.57(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.96(bm，1H，Ar)，7.83(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.80-7.78(m，2H，Ar)，7.48-7.39(m，4H，Ar)，7.18(dd，J＝4.0，6.0Hz，2H)，7.06(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.12(dd，J＝6.0，8.0Hz，1H，CH2CH)，3.89(t，J＝7.0Hz，2H，CH2Ar)，3.65(dd，J＝5.0，14.0Hz，1H，CHHCH)，3.46(dd，J＝8.0，14.0Hz，1H，CHHCH)，3.26(t，J＝7.0Hz，2H，CH2NH)，1.22(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 170.4，168.1，164.8，153.6，147.9，142.2，135.6，133.6，132.6，132.4，130.1，128.1，127.7，123.5，121.8，114.9，83.3，57.3，43.2，42.3，27.9； 電噴質譜(M+H+)計算值609，實測值609.
如圖9所示，合成化合物20。在室溫下，向57(0.068g，0.11mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml)。4小時后，真空除去溶劑，得到油狀物，在RP-HPLC(C-18)之后，得到20，為黃色固體(0.056g，97％)。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.65(d，J＝1.0Hz，1H，Ar)，7.93(dd，J＝1.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.81(d，J＝8.0Hz，2H，Ph)，7.74(dd，J＝3.0，6.0Hz，2H，Ar)，7.58(dd，J＝3.0，6.0Hz，Ar)，7.48(t，J＝7.0Hz，1H，Ph)，7.43(t，J＝8.0Hz，2H，Ph)，7.16(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.20(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCHH)，4.04(t，J＝6.5Hz，2H，CH2Ar)，3.74(dd，J＝5.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.54(t，J＝6.5Hz，2H，CH2NH)，3.45(dd，J＝9.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 172.6，168.1，152.6，147.3，142.0，135.7，133.5，133.1，132.4，132.3，130.0，127.9，127.8，127.4，122.5，114.8，114.6，56.8，43.2，41.2，27.2；FAB-HRMS(M+Cs+)計算值685.0482，實測值685.0461.
如圖9所示，合成化合物68。在室溫下，向57(0.06g，0.13mmol)的DMF(10ml)溶液中加入56(0.03g，0.14mmol)和三乙胺(0.04ml，0.29mmol)。12小時后，真空除去溶劑，得到68，為粗黃色油狀物(0.09g，110％)。Rf＝0.23(40％甲醇，于二氯甲烷中)；
1HNMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.63(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.93(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.82(d，J＝6.5Hz，2H，Ph)，7.48-7.42(m，3H，Ph)，7.09(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.08-4.06(m，1H，CHCHH)，3.68-3.62(m，重疊，5H，NHCH2CH2NH，CHCHH)，3.50-3.44(m，1H，CHCHH)，3.30(t，J＝3.5Hz，2H，CH2NHAr)，1.24(s，9H，tBu)；電噴質譜計算值(M+H+)573，實測值573.
如圖9所示，合成化合物21。在室溫下，向68(0.09g，0.14mmol)的CH2Cl2(5ml)溶液中加入三氟乙酸(5ml)。4小時后，真空除去溶劑，得到油狀物，在RP-HPLC(C-18)之后，得到21，為黃色固體(0.07g，83％)。Rt＝14.0分鐘；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.64(bs，1H，Ar)，7.94(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，7.82(d，J＝7.0Hz，2H，Ph)，7.48(t，J＝7.0Hz，1H，Ph)，7.43(t，J＝7.0Hz，1H，Ph)，7.12(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.20(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CHCH2)，3.73(dd，J＝5.0，14.0Hz，1H，CHCHH)，3.70-3.66(m，重疊，7H，NCH2CH2N，CH2N(C＝N))，3.52(t，J＝6.0Hz，2H，CH2NHAr)，3.45(dd，J＝9.0，14.0Hz，1H，CHCHH)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 172.7，168.3，161.6，148.0，142.1，135.8，133.5，132.9，130.0，128.0，127.7，122.3，114.9，56.7，44.1，43.2，42.9，42.7；FAB-HRMS(M+H+)計算值520.1614，實測值520.1630.
如圖10所示，合成化合物69。在室溫下，向氟化物57(0.10g，0.20mmol)的無水DMF(10ml)溶液中吹入NH3(g)蒸汽1小時。4小時后，利用乙酸乙酯和水稀釋反應混合物。分層并利用水(2×10ml)、鹽水(20ml)洗滌有機層，干燥(Na2SO4)。真空除去溶劑，得到61，為淺黃色油狀物(0.09g，93％)。Rf＝0.25(硅膠，50％乙酸乙酯，于己烷中)；
IR(薄膜)nmax3359，1729，1631，1516，1308，1258，1158，1093cm-1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 8.54(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.83-7.81(m，2H，Ar)，7.74(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H，Ar)，7.52-7.43(m，3H，Ar)，6.97(d，J＝9.0Hz，1H，Ar)，4.12(dd，J＝6.0，8.0Hz，1H，CH)，3.64(dd，J＝6.0，13.5Hz，1H，CHH)，3.47(dd，J＝8.0，13.5Hz，1H，CHH)，1.25(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d170.5，168.3，149.4，142.2，134.8，133.6，131.7，130.1，128.1，127.1，122.2，119.9，83.4，57.3，43.2，27.9；FAB-HRMS 計算值(M+Cs+)597.0420，實測值597.0439.
如圖10所示，合成化合物70。在室溫下，于氬氣氣氛中，向胺69(0.23g，0.50mmol)的甲醇(15ml)溶液中加入10％Pd/C(0.10g)。燒瓶然后安裝有含H2(g)的氣球。8小時后，通過一小段硅藻土(celite)過濾反應混合物，真空除去溶劑，得到70，為淺褐色油狀物(0.19g，90％)。Rf＝0.11(硅膠，80％乙酸乙酯，于己烷中)；IR(薄膜)nmax3360，2979，1729，1625，1582，1542，1508，1447，1369，1310，1248，1160，1093，758，721，688，590cm1；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 7.82-7.80(m，2H，Ar)，7.53-7.49(m，1H，Ar)，7.46-7.43(m，2H，Ar)，7.11(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，7.05(d，J＝2.0Hz，1H，Ar)，6.64(d，J＝8.5Hz，1H，Ar)，4.08(dd，J＝7.5，14.5Hz，1H，CH)，3.61(dd，J＝6.0，13.5Hz，1H，CHH)，3.47(dd，J＝8.0，13.5Hz，1H，CHH)，1.22(s，9H，tBu)；13C NMR(125MHz，甲醇-d4)d 170.8，170.6，142.1，141.2，134.8，133.7，130.1，128.1，124.5，120.6，116.5，115.5，83.3，57.5，43.1，28.0； FAB-HRMS計算值(M+Na+)435.1702，實測值434.1727.
如圖10所示，合成化合物71。向二胺70(0.092g，0.20mmol)的乙醇(20ml)溶液中加入三乙胺(0.032ml，0.22mmol)和異硫氰酸苯基酯(0.028ml，0.22mmol)。14小時后，真空除去溶劑，得到為褐色殘留物，通過制備性薄層色譜(硅膠，5％甲醇，于二氯甲烷中)純化，得到71，為褐色固體(0.082g，69％)。Rf＝0.16(硅膠，5％甲醇，于二氯甲烷中)；IR(薄膜)nmax3316，3061，2978，1729，1624，1504，1448，1368，1309，1252，1159，1092，837，733 cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 8.15(bs，1H，NH)，7.81(d，J＝7.5Hz，2H，Ar)，7.56-7.03(m，14H)，6.78(bs，1H，NHC＝O)，6.58(d，J＝8.0Hz，1H，HNSO2Ph)，4.51(bs，1H)，4.05(bs，1H)，3.67(bs，1H)，1.20(s，9H，tBu)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 180.3，168.6，167.4，147.0，143.3，139.6，137.6，132.7，129.0，128.4，127.1，126.6，125.4，123.5，116.1，83.2，60.3，56.5，42.0，27.5；FAB-HRMS 計算值(M+Cs+)702.0821，實測值702.0797.
如圖10所示，合成化合物72。在室溫下，向硫脲71(0.077g，0.14mmol)的DMF(10ml)溶液中加入三乙胺(0.02ml，0.14mmol)和氯化汞(II)(0.04g，0.14mmol)。4小時后，通過一小段硅藻土(celite)過濾并浸在乙酸乙酯中。真空除去溶劑，得到72褐色殘留物(0.05g，81％)，將其帶入下一步驟。Rf＝0.32(硅膠，5％甲醇，于二氯甲烷中)；1H NMR(500MHz，CDCl3)d 7.98(m，2H，Ar)，7.53-6.90(m，15H，Ar)，4.16(m，1H，CH)，3.83(bs，1H，CHH)，3.62(bs，1H，CHH)，1.25(bs，9H，tBu)；FAB-HRMS計算值(M+Cs+)668.0944，實測值668.0923.
如圖10所示，合成化合物22。根據(jù)制備化合物10相同的方法制備化合物22，只是使用72替代36b。收率0.04g(88％)。Rt＝14.8分鐘；1H NMR(500MHz，甲醇-d4)d 7.85-7.82(m，3H，Ar)，7.75(dd，J＝1.5，8.5Hz，1H，Ar)，7.56-7.41(m，9H，Ar)，4.22(dd，J＝5.0，9.0Hz，1H，CH)，3.78(dd，J＝5.0，13.5Hz，CHH)，3.48(dd，J＝9.0，13.5Hz，CHH)；13C NMR(150MHz，甲醇-d4)d171.9，169.2，150.7，141.6，136.2，133.1，131.2，130.9，130.6，129.5，128.3，127.5，124.6，124.1，111.9，111.8，56.1，42.8；FAB-HRMS計算值(M+H+)480.1342，實測值480.1352.
權利要求
1.由下列通式表示的RGD模擬物 其中R1選自下列基團之一 以及X選自硫、-NH-和氧的二價基團；R2選自-CO2-叔丁基、-CO-芳基和-SO2-芳基。
2.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中芳基選自苯基、1-萘基和2-萘基。
3.根據(jù)權利要求2的RGD模擬物，其中R2為-SO2-芳基。
4.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
5.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
6.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
7.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
8.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
9.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
10.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
11.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
12.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
13.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
14.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
15.根據(jù)權利要求1所述的RGD模擬物，其中該模擬物由下列結構式表示
16.制備由下列通式表示的RGD模擬物的方法， 其中R1選自下列基團之一 以及X為選自硫、-NH-和氧的二價基團；R2選自-CO2-叔丁基、-CO-芳基和-SO2-芳基，該方法包括下列步驟步驟1提供由下列結構式表示的含有與硝基芳基環(huán)共價相連的氟基團的硝基芳基前體 其中R3為酸保護基團；然后，步驟2通過親核芳族取代，利用含被護胍基團的親核試劑取代氟基團，生成被護RGD模擬物；最后，步驟3利用酸將被護RGD模擬物脫保護。
17.由下列通式表示的RGD模擬物 其中R2選自-CO2-叔丁基和-SO2-芳基。
18.根據(jù)權利要求17所述的RGD模擬物，其中芳基選自苯基、1-萘基和2-萘基。
19.對αiibβ3調節(jié)的細胞附著與αvβ3調節(jié)的細胞附著的不同抑制的方法，該方法包括步驟表達αiibβ3的細胞與含有選擇RGD模擬物的溶液相接觸，所述模擬物選自權利要求5、7、9、11、14或15的化合物，其中所述溶液中RGD模擬物的濃度足以抑制αiibβ3調節(jié)的細胞附著，其中被抑制的αiibβ3調節(jié)的細胞附著至少大約大于αvβ3調節(jié)的細胞附著的100倍。
全文摘要
RGD模擬物其中硝基芳基部分與芳基醚/α－氨基酸/胍結構的結合顯示出了各種整合蛋白拮抗劑和血管生成抑制劑的活性。
文檔編號C07C247/04GK1308534SQ99808280
公開日2001年8月15日 申請日期1999年7月6日 優(yōu)先權日1998年7月6日
發(fā)明者K·C·尼科勞, J·特魯吉洛, K·奇巴勒, B·延德萊特, S·古德曼 申請人:斯克里普斯研究學院