專利名稱：微粒及醫(yī)藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有效地運(yùn)送生理活性物質(zhì)、藥物、造影劑、基因等的微粒及醫(yī)藥組合物。本發(fā)明涉及作為所謂給藥系統(tǒng)(Drug Delivery System)的纟鼓粒及醫(yī)藥組合物。更詳細(xì)而言，本發(fā)明涉及有效地包封 例如親水性且分子量大的蛋白質(zhì).肽藥物、核酸藥物等的微粒及醫(yī)藥組 合物。
背景技術(shù)：
人們正在開發(fā)將藥物封入微粒的微粒制劑，并研究將其用作藥物 的載體。該農(nóng)i粒尋皮稱為;f鼓沖立(microparticle)、樣"求(microsphere)、 孩吏月交嚢、纟內(nèi)米粒(nanoparticle )或納米J求(nanosphere )等。但是，通常使用的微粒即由生物分解性聚合物形成的微?；蚋叻?子膠團(tuán)(micelle)中，通常應(yīng)包封藥物的隔室(compartment)是疏水 環(huán)境，將親水性藥物封入微粒內(nèi)的效率低。另一方面，由脂質(zhì)體等脂 質(zhì)形成的微粒的藥物封入效率低，難以緩慢釋放包封的藥物。特別是 難以在保持生理活性的狀態(tài)下將親水性且分子量大的蛋白質(zhì)'肽藥物 封入該微粒中。但是，存在蛋白質(zhì).肽藥物或核酸藥物等被存在于生物體內(nèi)的分解 酶水解的問(wèn)題。要求通過(guò)將蛋白質(zhì) 肽藥物封入微粒的內(nèi)部進(jìn)行微粒制 劑化，避免#:酶分解，在生物體內(nèi)進(jìn)行穩(wěn)定化。另外，如Florence等 使用未包封藥物的微粒的試驗(yàn)所示，粒徑越小，越能促進(jìn)在腸道中的 吸收(參見(jiàn)非專利文獻(xiàn)l)。期待通過(guò)將蛋白質(zhì)'肽藥物或核酸藥物等 封入極微d、的微粒中，適用于伴有疼痛的注射以外的給藥方法。為了解決上述課題，作為封入了蛋白質(zhì)'肽藥物等親水性藥物的微 粒，提出了在添加有兩親性聚合物(amphiphilic polymer)的有機(jī)溶
劑中加入親水性藥物的水溶液，形成反膠束(reverse micelle)后、形 成微粒的方法(專利文獻(xiàn)l, 2)。專利文獻(xiàn)l中記載了下述微粒使用具有作為疏水性片段的生物 體內(nèi)分解性聚合物和作為親水性片段的聚氨基酸的兩親性嵌段共聚 物形成反膠束，內(nèi)部為親水環(huán)境，外層具有疏水性。但是，已知聚氨 基酸經(jīng)常顯示強(qiáng)抗原性。選擇蛋白質(zhì)作為包封的藥物時(shí)，大部分能形 成親水性片段的聚氨基酸具有電荷，如果使用具有電荷的聚合物，則 蛋白質(zhì)的生理活性被破壞。另外，聚氨基酸由氨基酸N-羧基酸酐單 體聚合時(shí)，存在聚合必須在脫水條件下進(jìn)行等不足。專利文獻(xiàn)2公開了含有功能性物質(zhì)被包封在嵌段聚合物中的粒子 的化妝劑或清洗劑，其中，所述粒子是使用乙烯基醚類兩親性嵌段共 聚物形成反膠束、且內(nèi)部為親水環(huán)境、外層具有疏水性的微粒。由于 乙烯基醚類的兩親性嵌段共聚物不具有生物分解性，故該微粒無(wú)法適 用于通過(guò)注射或經(jīng)口給藥等對(duì)生物體內(nèi)給藥。另外，由于該微粒是外 層疏水的微粒，故難以將該微粒制成適合生物體內(nèi)給藥的水性分散 體。專利文獻(xiàn)l:特開平11 - 269097號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)2:特開2004 - 18438號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)l: P.U.Jani及其他3人，"大鼠的消化道粘膜對(duì)納米 粒子的才聶取定量法及粒子粒徑依賴性"(Nanoparticle uptake by the rat gastrointestinal mucosa: quantitation and particle size dependency )、藥 學(xué)與藥理學(xué)雜志(Journal of Pharmacy and Pharmacology ) 、 1990年， 第42巻，第12號(hào)，p.821 - 826。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第l發(fā)明具有下述構(gòu)成。一種微粒，含有兩親性聚合物，由內(nèi)核和疏水性外層構(gòu)成，所述 內(nèi)核由兩親性聚合物的親水性片段形成，所述疏水性外層由兩親性聚 合物的疏水性片段形成，疏水性外層鍵合有表面改性劑。
本發(fā)明的第2發(fā)明具有以下構(gòu)成。一種微粒，由內(nèi)核和疏水性外層構(gòu)成，所述內(nèi)核由兩親性聚合物 成,、其中， 、 — A Z 、(A) 兩親性聚合物的疏水性片段含有脂肪族聚酯、聚原酸酯、 聚氰基丙烯酸酯、聚亞烷基二醇、聚氨酯、聚硅氧烷、聚氨基酸或聚 酸酐中的任一種，并且，(B) 兩親性聚合物的親水性片段含有聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷 酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚曱基丙烯酸、聚-1, 3-二氧戊環(huán)、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚-1, 3, 6-三氧雜環(huán)己烷或多糖類中的任一種。


圖1表示封入了辣根過(guò)氧化物酶的由聚乙二醇-聚(s -己內(nèi)酯)形成的微粒的粒徑分布的例子。圖2表示依賴于表面改性劑添加濃度的微粒的粒徑變化狀態(tài)。 圖3是依賴于兩親性嵌段共聚物的聚(e-己內(nèi)酯)分子量的粒徑變化。圖4表示在各種條件下封入微粒的藥劑胰島素的包封率。 圖5表示在生理?xiàng)l件下蛋白質(zhì)從微粒緩釋的行為。 圖6表示依賴于表面改性劑添加濃度的微粒的粒徑變化狀態(tài)。 圖7表示包封胰島素的微粒通過(guò)小鼠皮下給藥產(chǎn)生的血中葡萄糖 濃度變化。
具體實(shí)施方式
首先，說(shuō)明本發(fā)明的第l發(fā)明。本發(fā)明的第l發(fā)明是一種微粒，含有兩親性聚合物，由內(nèi)核及疏 水性外層構(gòu)成，所述內(nèi)核由兩親性聚合物的親水性片段形成，所述疏 水性外層由兩親性聚合物的疏水性片段形成，該疏水性外層鍵合有表
面改性劑。種以上片段是親水性的，并且，至少l種以上片段是疏水性的。此處， 所謂親水性是指任意片段對(duì)水的溶解度高于其他片段時(shí)，稱該片段是 親水性的。親水片段優(yōu)選可溶于水，即使是難溶的，只要與其他片段 相比，對(duì)水的溶解度高即可。另外，所謂疏水性是指任意片段對(duì)水的 溶解度比其他片段低時(shí)，稱該片段是疏水性的。疏水性片段優(yōu)選不溶 于水，即使是可溶的，只要與其他片段相比，對(duì)水的溶解度低即可。本發(fā)明的微粒優(yōu)選兩親性聚合物的親水性片段為生物體適合性 高分子。本發(fā)明中，所謂生物體適合性高分子是指給與生物體時(shí)不具 有顯著的有害影響的高分子，較具體而言，是指經(jīng)口給與大鼠該高分子時(shí)的LD50為2，000mg / kg以上的高分子。曰月微松的而岳她聚厶物的親水性片段優(yōu)選含有聚乙二醇、聚 乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、 聚-1， 3-二氧戊環(huán)、2-曱基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚 -l, 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸或多糖類中的任一種。乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、 聚-1， 3-二氧戊環(huán)、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚 -l， 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸或多糖類。乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚曱基丙烯酸、 聚-l， 3-二氧戊環(huán)、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚 -l, 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸或多糖類中的任一種的類似物。 本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的親水性片段較優(yōu)選為聚乙二醇、聚 乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、 聚-1， 3-二氧戊環(huán)、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚 -1， 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸或多糖類中的任一種的類似物。
乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚曱基丙烯酸、 聚-1， 3- 二氧戊環(huán)、2-曱基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚-l, 3, 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸或多糖類中的任一種的共聚物。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的親水性片段較優(yōu)選為聚乙二醇、聚 乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚-1, 3-二氧戊環(huán)、2-曱基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚 -1， 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸或多糖類中的任一種的共聚物。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的親水性片段中，作為聚氨基酸，例 如可以舉出聚天冬氨酸、聚谷氨酸、聚賴氨酸、聚精氨酸、聚絲氨酸、 聚蘇氨酸、聚酪氨酸、聚組氨酸、聚半胱氨酸、聚天冬酰胺、聚谷氨 酰胺。另外，作為多糖類，可以舉出纖維素、曱殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、 結(jié)冷膠(GellanGum)、藻酸、透明質(zhì)酸、茁酶多糖或葡聚糖。兩親性聚合物親水性片段的分子量?jī)?yōu)選為50，000以下，較優(yōu)選為5,000以下。^日S激l明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段優(yōu)選含有聚酯、聚原酸 酯、聚氰基丙烯酸酯、聚醚、聚乙烯、聚氨酯、聚硅氧烷、聚氨基酸 或聚酸酐中的任一種。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段較優(yōu)選為聚酯、聚原酸 酯、聚氰基丙烯酸酯、聚醚、聚乙烯、聚氨酯、聚硅氧烷、聚氨基酸 或聚酸酐中的任一種。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段優(yōu)選含有脂肪族聚酯、 聚原酸酯、聚氰基丙烯酸酯、聚亞烷基二醇、聚氨酯、聚硅氧烷、聚 氨基酸或聚酸酐中的任 一 種的類似物。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段較優(yōu)選為脂肪族聚酯、 聚原酸酯、聚氰基丙烯酸酯、聚亞烷基二醇、聚氨酯、聚硅氧烷、聚 氨基酸或聚酸酐中的任 一 種的類似物。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段中，作為聚酯，從下述 的生物分解性等觀點(diǎn)考慮優(yōu)選為脂肪族聚酯，作為聚醚，特別優(yōu)選為 聚丙二醇等聚亞烷基二醇。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段，具體地可以舉出聚乙醇酸、聚乳酸、聚(2-羥基丁酸)、聚(2-羥基戊酸)、聚(2-羥基己酸)、聚(2-羥基癸酸)、聚(蘋果酸)、聚(檸檬酸)、 聚千酯蘋果酸內(nèi)酯(benzyl malolactonate )、聚蘋果酸千基酯、聚{3 - 〔(芐氧基羰基)甲基〕-1, 4-二氧雜環(huán)己烷-2， 5-二酮} }、 聚((3 -丙內(nèi)酯)、聚(5-戊內(nèi)酯)、聚(s -己內(nèi)酯)、聚(N-千 氧基羰基-L-絲氨酸-(3-內(nèi)酯)、聚〔1， 3-雙(對(duì)羧基苯氧基) 曱烷〕、聚(對(duì)苯二曱酸-癸二酸酐)、聚{3， 9-雙(亞乙基-2， 4, 8, 10-四氧螺〔5, 5〕十一烷-1, 6-己二醇)、聚-a-氰基 丙烯酸異丁酯、聚環(huán)氧丙烷、聚曱基丙烯酸烷基酯、聚乙烯基乙酸、 聚硅氧烷、聚丙氨酸、聚亮氨酸、聚異亮氨酸、聚纈氨酸、聚脯氨酸、 聚苯丙氨酸、聚曱硫氨酸或上述高分子化合物的衍生物以及共聚物。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段優(yōu)選為生物體適合性 高分子。本發(fā)明中，所謂生物體適合性高分子是指給與生物體時(shí)沒(méi)有 顯著的有害影響的高分子，較具體而言，將該高分子經(jīng)口給與大鼠時(shí) 的LD50為2，000mg / kg以上。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段優(yōu)選給與生物體時(shí)不 具有顯著的有害影響的疏水性片段，較優(yōu)選為生物分解性高分子。本 發(fā)明中，所謂生物分解性高分子是指給與生物體后，該高分子代謝而 低分子化，能被排泄到體外。酯)、聚乳酸、或聚乙醇酸中的任一種。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段較優(yōu)選為聚(￡-己內(nèi) 酯)、聚乳酸、或聚乙醇酸中的任一種。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段也優(yōu)選為聚(乳酸_乙 醇酸)、聚(乳酸-s -己內(nèi)酯)等的共聚物。本發(fā)明微粒的兩親性聚合物的疏水性片段的分子量?jī)?yōu)選為
1000~ 100,000。本發(fā)明的兩親性聚合物的結(jié)構(gòu)沒(méi)有特別限定，優(yōu)選為具有嵌段 型、接枝型、支化型中任一種結(jié)構(gòu)的共聚物。為嵌段型時(shí)，親水性片段/疏水性片段(A/B)的排列特別優(yōu)選為AB型、ABA型、BAB型。 為三成分以上的嵌段共聚物時(shí)，可以共存多個(gè)成分的親水性片段或疏 水性片段。另外，為接枝型時(shí)，優(yōu)選親水性片段、疏水性片段中的任 一種成為主鏈，另一種成為接枝鏈。本發(fā)明的兩親性聚合物的疏水性片段的平均分子量相對(duì)于親水 性片段的平均分子量的值優(yōu)選為0.1倍~ IO倍，更優(yōu)選為2倍~ 7倍。本發(fā)明的農(nóng)t粒的平均粒徑優(yōu)選為25 ~ 5000納米，更優(yōu)選為50~ 1000納米，較優(yōu)選為150納米以下。關(guān)于粒子的平均粒徑，只要使用 ;敫光散射型粒度分布計(jì)(例如Microtrac ASVR / Microtrac - HRA (9320-X100))，即可直接獲知平均粒徑。本發(fā)明的微粒的形狀沒(méi)有特別限定，可以為球狀、橢圓狀、無(wú)定形。
.曰々人夕義一 、，.，、， —一改性劑的微粒。本發(fā)明的表面改性劑鍵合在含有兩親性聚合物的微粒的疏水性 外層上，該鍵可以為非共價(jià)鍵，也可以為共價(jià)鍵。非共價(jià)鍵優(yōu)選疏水 相互作用，但可以為靜電相互作用、氫鍵、范德華力，也可以為上述 作用復(fù)合形成的鍵。非共價(jià)鍵中，優(yōu)選含有兩親性聚合物的微粒的疏 水性外層與下述表面改性劑的疏水部分通過(guò)疏水性的相互作用而鍵 合。此時(shí)，微粒的分散介質(zhì)特別優(yōu)選水、緩沖液、生理鹽水、表面改 性劑水溶液或作為親水性溶劑的微粒分散體。本發(fā)明的表面改性劑優(yōu)選以非共價(jià)鍵鍵合在含有兩親性聚合物 的微粒的疏水性外層上。外層形成共價(jià)鍵。共價(jià)鍵較優(yōu)選鍵合在兩親性聚合物的疏水性片段的 末端或側(cè)鏈。共價(jià)鍵沒(méi)有特別限定，可以舉出酰胺鍵、酯鍵、氨基曱
酸酯鍵、二硫醚鍵、硫醚鍵、腙鍵。本發(fā)明中，表面改性劑可以在微粒形成后鍵合在表面，也可以使 其鍵合在兩親性聚合物上后形成微粒。本發(fā)明的表面改性劑優(yōu)選存在于表面改性劑能與存在于溶劑或 微粒外部的物質(zhì)接觸的場(chǎng)所。作為本發(fā)明的表面改性劑，優(yōu)選具有提高微粒的膠體穩(wěn)定性的性 質(zhì)、給與生物體后影響微粒的體內(nèi)動(dòng)態(tài)的性質(zhì)中的任 一 種或兩者的化合物。表面改性劑可以為l種，也可以為多種的混合物。此處所謂掮: 高膠體穩(wěn)定性是指防止微粒在溶劑中凝集或使其延遲凝集。將微粒給 予生物體后，作為影響該微粒體內(nèi)動(dòng)態(tài)的化合物，沒(méi)有特別限定，可 以舉出促進(jìn)微粒附著在生物學(xué)屏障的表面、或促進(jìn)微粒入侵到該屏障 中或促使微粒穿過(guò)屏障的化合物。特別優(yōu)選促使微粒穿過(guò)存在于消化 道的粘膜、上皮細(xì)胞層的化合物。作為影響該微粒的體內(nèi)動(dòng)態(tài)的化合 物，可以為減弱微粒與蛋白質(zhì)或細(xì)胞等存在于生物體內(nèi)的物質(zhì)之間的 相互作用的化合物。表面改性劑沒(méi)有限定，優(yōu)選為親水性聚合物。本發(fā)明微粒的表面改性劑中，親水性聚合物優(yōu)選為聚乙二醇、聚 乙蜂吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚曱基丙烯酸、 聚-l, 3-二氧戊環(huán)、2-曱基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚 -l， 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸、蛋白質(zhì)或多糖類中的任一種。本發(fā)明微粒的表面改性劑中，親水性聚合物優(yōu)選為聚乙二醇、聚 乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、 聚-1, 3-二氧戊環(huán)、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚 -l， 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸、蛋白質(zhì)或多糖類中的任一種 的類似物。作為該親水性聚合物的類似物，可以舉出用長(zhǎng)鏈烷基等疏水基團(tuán) 部分修飾親水性聚合物等得到的表面活性劑，但并不限定于此。本發(fā)明微粒的表面改性劑中，親水性聚合物為聚乙二醇時(shí)，優(yōu)選 BASF出售的Pluronic (BASF的注冊(cè)商標(biāo))或同類產(chǎn)品。
作為本發(fā)明微粒的表面改性劑的聚氨基酸，優(yōu)選聚天冬氨酸或聚 谷氨酸或它們的類似物。特別優(yōu)選聚天冬氨酸或聚谷氨酸的一部分導(dǎo) 入了長(zhǎng)鏈烷基的類似物。為了提高粒子的分散性，本發(fā)明微粒的表面改性劑的蛋白質(zhì)優(yōu)選 明膠、酪蛋白或白蛋白。作為本發(fā)明微粒的表面改性劑的多糖類，為了提高粒子的分散 性，優(yōu)選纖維素、曱殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、結(jié)冷膠、藻酸、透明質(zhì)酸、 茁酶多糖或葡聚糖，特別優(yōu)選膽固醇化茁酶多糖。本發(fā)明微粒的表面改性劑的多糖類優(yōu)選纖維素、曱殼質(zhì)、脫乙酰 殼多糖、結(jié)冷膠、藻酸、透明質(zhì)酸、茁酶多糖或葡聚糖中的任一種的 類似物。本發(fā)明中，表面改性劑優(yōu)選為兩親性化合物。 本發(fā)明微粒的表面改性劑中，兩親性化合物優(yōu)選為脂質(zhì)。 本發(fā)明微粒的表面改性劑中，兩親性化合物優(yōu)選為表面活性劑。 本發(fā)明微粒的表面改性劑中，作為表面活性劑，優(yōu)選聚氧乙烯聚 丙二醇共聚物、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山 梨糖醇單脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇二脂肪酸酯、聚氧乙烯甘 油單脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油二脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙 烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油等非離子性活性劑或月桂基硫酸鈉、 月桂基硫酸銨、硬脂酰基硫酸鈉等烷基硫酸鹽或卵磷脂。并且，本發(fā)明微粒的表面改性劑優(yōu)選肽、蛋白質(zhì)、糖類及其類似 物，例如，可以舉出靶向抗體或堿性肽。上述肽、蛋白質(zhì)、糖類特別 優(yōu)選部分修飾長(zhǎng)鏈烷基等疏水基團(tuán)等得到的類似物或修飾了上述親 水性聚合物或兩親性化合物得到的類似物。本發(fā)明微粒的表面改性劑的鍵合量?jī)?yōu)選相對(duì)于粒子重量為0.0001% ~ 1 % 。接下來(lái)，說(shuō)明本發(fā)明的第二發(fā)明。本發(fā)明的第二發(fā)明是一種微粒，由內(nèi)核和疏水性外層構(gòu)成，所述 內(nèi)核由兩親性聚合物的親水性片段形成，所述疏水性外層由該兩親性
聚合物的疏水性片段形成，其中，(A) 兩親性聚合物的疏水性片段含有脂肪族聚酯、聚原酸酯、 聚氰基丙烯酸酯、聚亞烷基二醇、聚氨酯、聚硅氧烷、聚氨基酸或聚 酸酐中的任一種，并且，(B) 兩親性聚合物的親水性片段含有聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚-1, 3-二氧戊環(huán)、2-曱基丙埽酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚-1， 3， 6-三氧雜環(huán)己烷或多糖類中的任一種。成，作為上述兩親性聚合物的親水性片段/疏水性片段的組合例，優(yōu)選聚乙二醇/聚(￡ -己內(nèi)酯)、聚乙二醇/聚(乳酸)共聚物、聚乙烯吡咯烷酮/聚(乳酸)、葡聚糖/聚(乳酸)等。本發(fā)明的第二發(fā)明中，兩親性聚合物的結(jié)構(gòu)沒(méi)有特別限定，優(yōu)選 為具有嵌段型、接枝型、支化型中的任一種結(jié)構(gòu)的共聚物。為嵌段型型、BAB型。另外，為接枝型時(shí)，優(yōu)選親水性片段、疏水性片段中的 任一種成為主《連，另一種成為接枝鏈。本發(fā)明的第二發(fā)明中，作為疏水性片段的平均分子量相對(duì)于親水 性片段的平均分子量的值優(yōu)選為0.1倍~ 10倍，更優(yōu)選為2倍~ 7倍。另夕卜，本發(fā)明的第二發(fā)明中，微粒的平均粒徑優(yōu)選為25nm ~ 5nm， 較優(yōu)選為50nm 1000nm。在第1發(fā)明、第2發(fā)明中本發(fā)明的微粒均可以含有藥物。藥物可以 為1種，也可以混合2種以上。本發(fā)明的微粒優(yōu)選在由兩親性聚合物的親水性片段形成的內(nèi)核 中含有藥物。本發(fā)明的微粒優(yōu)選用作含有具有親水性藥物的微粒形成的醫(yī)藥 組合物。本發(fā)明中的"親水性藥物"是指能分配至粒子的親水性內(nèi)核中 的藥物。作為親水性藥物沒(méi)有特別限定，可以舉出低分子化合物、蛋 白質(zhì)、肽、DNA、 RNA、修飾核酸或診斷用的造影成分。含有本發(fā)明
的微粒的醫(yī)藥組合物優(yōu)選為親水性藥物含有選自蛋白質(zhì)、肽、DNA、 RNA或修飾核酸中的任一種微粒形成的醫(yī)藥組合物。另外，即使藥物 為疏水性藥物，也可以通過(guò)可溶化劑等使其成為水溶性，包含在本發(fā) 明的微粒中。作為可溶化劑，特別優(yōu)選環(huán)糊精或其類似物。作為在含有本發(fā)明的微粒形成的醫(yī)藥組合物中使用的生理活性 蛋白，有肽激素、生理活性蛋白、酶蛋白、抗體等。例如，可以舉出 副曱狀腺激素(PTH)、降鈣素、胰島素、血管緊張素、高血糖素、 促胃液激素、生長(zhǎng)激素(growth hormone )、催乳素(黃體刺激激素)、 促性腺激素(性腺刺激激素)、促甲狀腺激素(thyrotropic hormone )、 腎上腺皮質(zhì)刺激激素、黑色素細(xì)胞刺激激素、加壓素、催產(chǎn)素、促甲 狀腺激素釋放激素、黃體生成激素(LH)、促皮質(zhì)素、生長(zhǎng)激素 (Somatotropin)、促甲狀腺激素(thyrotropin)(曱狀腺刺激激素)、 生長(zhǎng)激素抑制素(生長(zhǎng)激素刺激因子)、丘腦下部激素(GnRH)、 G-CSF、紅細(xì)胞生成素、HGF、 EGF、 VEGF、干擾素a、干擾素(3、 干擾素Y、白介素類、FGF (纖維芽細(xì)胞增殖因子)類、BMP (骨形 成蛋白)類、超氧化物岐化酶(SOD)、尿激酶、溶菌酶、疫苗等。 上述生理活性蛋白可以為天然蛋白或肽，可以為改變了其部分序列的 衍生物，也可以為用聚乙二醇或糖鏈等修飾得到的蛋白。作為核酸， 可以為與陽(yáng)離子性表面活性劑、陽(yáng)離子性脂質(zhì)、陽(yáng)離子性聚合物及它 們的類似物復(fù)合化得到的物質(zhì)。本發(fā)明的微粒可以含有除兩親性聚合物及藥物以外的物質(zhì)。本發(fā)明的微粒所含的物質(zhì)沒(méi)有特別限定，可以添加對(duì)粒子粒徑、 粒子結(jié)構(gòu)、粒子的穩(wěn)定性、兩親性聚合物的穩(wěn)定性、藥物的穩(wěn)定性、 藥物的生理活性帶來(lái)影響的物質(zhì)。本發(fā)明的微?？梢栽诹Ｗ觾?nèi)核、粒子外層中的任 一 處存在添加 劑。能添加到本發(fā)明微粒中的添加劑沒(méi)有特別限定，可以為緩沖劑、 抗氧化劑、鹽、聚合物或糖。含有本發(fā)明的微粒的醫(yī)藥組合物可以含有具有緩沖劑、抗氧化劑、鹽、聚合物或糖的微粒。
能添加到本發(fā)明的微粒中的添加劑例如可以舉出水、醫(yī)藥上允許 的有機(jī)溶劑、膠原、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧基乙烯基聚合物、 羧曱基纖維素鈉、聚丙烯酸鈉、藻酸鈉、水溶性葡聚糖、羧曱基淀粉 鈉、果膠、曱基纖維素、乙基纖維素、黃原酸膠、阿拉伯膠、酪蛋白、 明膠、瓊脂、二甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蠟、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白(HSA)、甘露醇、山梨醇、乳糖、作為醫(yī)藥 添加劑允許的表面活性劑等。含有本發(fā)明微粒的醫(yī)藥品制劑可以為下述形態(tài)由含有本發(fā)明的 微粒的醫(yī)藥制劑與藥學(xué)上允許的添加劑形成的粉末形態(tài)，或者由微粒 制劑與水等介質(zhì)的混合物或多糖類、水等介質(zhì)及該介質(zhì)以外的藥學(xué)上 允許的基劑的混合物等形成的液體形態(tài)，以及將粒子制劑與藥學(xué)上允 許的基劑組合制成固化或半固化的形態(tài)。作為固化的形態(tài)，優(yōu)選膠嚢 劑(例如硬膠嚢劑、軟膠嚢劑等)、顆粒劑、散劑等，作為半固化的 形態(tài)，優(yōu)選將微粒分散在水凝膠中的形態(tài)或分散在凡士林、聚乙二醇 等中的形態(tài)。作為水凝膠，特別優(yōu)選PVA膠、N-異丙基丙烯酰胺凝 膠、明膠、瓊脂膠、纖維素類水凝膠等。作為基劑，可以舉出作為制劑材料慣用的各種有機(jī)或無(wú)機(jī)物質(zhì)， 例如賦形劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑、溶劑、溶解助劑、懸濁化劑、 等張劑、緩沖劑、無(wú)痛化劑、吸收促進(jìn)劑等。作為本發(fā)明微粒的分散介質(zhì)，優(yōu)選使用水、水溶液或水混合性液 體，例如，可以使用甘油或聚乙二醇等、或藥學(xué)上允許的非水溶劑。 水溶液可以為非等滲或等滲溶液中的任一種。作為水溶液，可以舉出 混合水與l種或多種其他成分例如甘油、甘露糖、乙二醇、果糖、木 糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇或聚乙二醇之類其他多元醇或 氯化鈉之類電解質(zhì)配制得到的水溶液。作為非水溶劑，可以舉出乙酰 基甘油脂肪酸酯、液糖、油酸、橙皮油、還原麥芽糖水飴、檸檬酸三 乙酯、高果糖液糖、高葡萄糖水飴、小麥胚芽糖、紅花油、紅花油脂 肪酸、蛇油、聚二甲基硅氧烷、生姜油、大豆卵磷脂、中鏈脂肪酸三 甘油酯、天然維生素E、甘油三乙酸酯、失水山梨醇三油酸酯、胡椒 基丁醚、向日葵油、肌醇六磷酸、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二曱酸二 丁酯、丁基鄰苯二甲酰基丁基乙醇酸酯、葡萄糖果糖液糖、聚山梨醇 酯、水飴、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、棉籽油、單油酸失水山梨醇酯、 丁酸乙酯、磷酸、檸檬油。本發(fā)明的微粒例如可以通過(guò)下述方法制備，所述方法包括(a) 使兩親性聚合物溶解在有機(jī)溶劑中，邊攪拌藥物水溶液邊將其添加到 該聚合物溶液中的工序；(b)將該有機(jī)溶劑置換為其他溶劑的工序； (c)使表面改性劑鍵合在微粒表面的工序，但并不限定于此方法。有機(jī)溶劑優(yōu)選該兩親性聚合物的疏水性片段可溶且親水性片段 難溶或不溶，但也可以為兩片段難溶或兩片段可溶中的任一種。另外， 作為使表面改性劑鍵合在由內(nèi)核和疏水性外層構(gòu)成的微粒的外層的 方法，上述內(nèi)核由兩親性聚合物的親水性片段形成，疏水性外層由疏 水性片段形成，可以在形成微粒后添加表面改性劑，鍵合在微粒外層， 也可以通過(guò)凍結(jié)干燥等對(duì)微粒進(jìn)行暫時(shí)分離后，將分離的微粒添加在 含有表面活性劑的分散介質(zhì)中。將本發(fā)明的微粒用作醫(yī)藥品時(shí)，有機(jī)溶劑優(yōu)選為對(duì)生物體沒(méi)有顯 著影響的有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑沒(méi)有特別限定，可以舉出乙腈、氯苯、 氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、環(huán)己烷、1， 2-二氯乙烯、二氯曱烷、 1, 2 —二甲氧基乙烷、N， N — 二甲基乙酰胺、N， N —二曱基甲酰胺、 1, 4-二氧雜環(huán)己烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、曱酰胺、己烷、甲 醇、2-曱氧基乙醇、曱基丁基酮、甲基環(huán)己烷、N-曱基吡咯烷酮、 硝基曱烷、吡啶、環(huán)丁砜、四氫化萘、曱苯、1, 1， 2-三氯乙烯、 二曱苯、乙酸、丙酮、茴香醚、l-丁醇、2-丁醇、乙酸正丁酯、^又 丁基曱基醚、枯烯、二甲基亞砜、乙醇、乙酸乙酯、二乙基醚、甲酸 乙酯、甲酸、庚烷、乙酸異丁酯、乙酸異丙酯、乙酸曱酯、碳酸二甲 酯、3-甲基-1-丁醇、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、2-甲基-l-丙醇、戊烷、l-戊醇、l-丙醇、2-丙醇、乙酸丙酯、四氫呋喃或 它們的混合溶劑。作為使兩親性聚合物溶解于有機(jī)溶劑的方法，可以舉出攪拌、加 熱、超聲波處理、透析等，但對(duì)其沒(méi)有特別限定。濃度、藥物水溶液的添加量、有機(jī)溶劑組成、攪拌速度、添加至藥物 水溶液中的添加劑進(jìn)行控制。添加劑可以添加到藥物水溶液中，也可 以添加另外制備的添加劑水溶液，還可以添加至有機(jī)溶劑中。形成微粒后，可以通過(guò)蒸發(fā)內(nèi)核水或?qū)⑿纬闪Ｗ訒r(shí)的有機(jī)溶劑置 換為與水相溶的溶劑，除去內(nèi)核水。形成的微粒能通過(guò)冷凍干燥、過(guò) 濾、離心操作、再沉淀進(jìn)行回收。形成粒子用的有機(jī)溶劑不適合冷凍千燥等操作時(shí)，優(yōu)選置換為適 合冷凍干燥的溶劑，置換溶劑的工序可以通過(guò)包括除去溶劑的工序與 添加其他溶劑的工序的方法進(jìn)行。或者，可以簡(jiǎn)單地將粒子分散液添 加至其他溶劑中。作為適合冷凍干燥的溶劑，特別優(yōu)選二氧雜環(huán)己烷、 乙酸、叔丁醇、碳酸二甲酯、嗎啉、對(duì)二甲苯、環(huán)己烷等。作為除去 溶劑的方法，例如可以舉出蒸發(fā)、透析、冷凍干燥、離心操作、過(guò)濾、 再沉淀。表面改性劑例如可以通過(guò)化學(xué)鍵合在該兩親性聚合物的疏水性 片段的末端呈遞到微粒表面?；蛘撸缈梢杂蓛捎H性聚合物形成微 粒后，使表面改性劑鍵合在微粒表面。作為制備微粒后使表面改性劑 鍵合的方法，沒(méi)有特別限定，可以舉出在含有表面改性劑的溶劑中添 加孩i粒的方法。本發(fā)明的微粒優(yōu)選含有水作為內(nèi)核的成分之一的微粒，優(yōu)選通過(guò) 使微粒的水蒸發(fā)制得的微粒。含有本發(fā)明微粒的醫(yī)藥品組合物的給藥方法及應(yīng)用領(lǐng)域沒(méi)有特別限定，能多方利用。例如，該醫(yī)藥品組合物可以利用經(jīng)口給藥、非 經(jīng)口給藥、經(jīng)腸道給藥、經(jīng)肺給藥、局部給藥(鼻、皮膚、眼)及體 腔給藥等給與藥劑。非經(jīng)口給藥時(shí)，可以特別舉出下述給藥方法。 (l)靜脈內(nèi)給藥[通過(guò)使控制釋放作用物質(zhì)例如肽藥劑、細(xì)胞 增殖抑制劑、免疫刺激劑、發(fā)育因子、例如菌落刺激因子(白細(xì)胞調(diào)
整因子)及生長(zhǎng)因子等的微粒在血液中循環(huán)，從而將肝臟、脾臟或骨 髓作為給藥目標(biāo)(把)]。(2) 肌肉內(nèi)給藥(長(zhǎng)期供給作用物質(zhì)例如肽藥劑或激素的儲(chǔ)庫(kù)型(depot)制劑的給與)。(3) 關(guān)節(jié)內(nèi)給藥(例如治療關(guān)節(jié)炎時(shí)的抗風(fēng)濕劑或免疫抑制劑 的給與)。(4) 腔內(nèi)給藥(例如用于治療腹膜或胸膜腔中的癌的細(xì)胞增殖 抑制劑或肽藥劑的給與)。(5) 皮下給藥(例如用于治療皮膚癌的細(xì)胞增殖抑制劑的儲(chǔ)庫(kù) 型制劑的給與)。經(jīng)腸道給藥時(shí)，應(yīng)特別考慮下述方案。 (1 )維生素的給與。(2) 淋巴液的吸附(例如細(xì)胞增殖抑制劑等作用物質(zhì)引起淋巴 節(jié)的目標(biāo)化)。(3) 抗原的供給(例如利用Peyer's結(jié)(Peyer's Patch )的經(jīng)口免 疫化)。(4) 利用M細(xì)胞的肽藥劑的攝取。 經(jīng)肺給藥時(shí)特別考慮下述方案。(1 )氣霧劑或配量氣霧劑(微粒制劑的水性分散液的噴霧給藥) (2)該分散液的點(diǎn)滴注入。 局部給藥時(shí)例如考慮下述方案?！銎つw科用藥劑例如類皮質(zhì)激素類或防霉劑等的給與。 -作為牙周病治療藥的對(duì)牙周袋的給與劑。 -例如(3-阻斷劑類滴眼劑或眼科用凝膠。 .類似脂質(zhì)體制劑的化妝品。根據(jù)本發(fā)明，可以提高蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)的穩(wěn)定性并改善體內(nèi)動(dòng) 態(tài)。根據(jù)本發(fā)明，能經(jīng)口或經(jīng)腸道給與生理活性蛋白質(zhì)，與現(xiàn)有的注 射給藥法相比，能簡(jiǎn)便且溫和地對(duì)患者進(jìn)行藥物治療，從根本上改變 至今為止的蛋白質(zhì)制劑的概念，涉及具有劃時(shí)代的制劑的創(chuàng)制。
皮下注射蛋白質(zhì)時(shí)，通過(guò)使用本發(fā)明的微粒，能長(zhǎng)時(shí)間地釋放， 與現(xiàn)有的給藥方法相比，經(jīng)濟(jì)性優(yōu)越，同時(shí)能減輕患者的負(fù)擔(dān)。 以下給出實(shí)施例，但本發(fā)明并不限定于這些實(shí)施例。 實(shí)施例l微粒的制備使10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚(e -己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5，000、聚(s-己內(nèi)酯)的分子量IO，OOO)溶解于50(VL 氯仿。將該溶液添加至2mL己烷、氯仿混合溶劑(己烷1.6mL、 0.4mL ) 中，配制聚合物溶液。邊以攪拌速度l,600rpm攪拌該聚合物溶液，邊 滴加10-lOO(iL 25wt%的牛血清白蛋白溶液。進(jìn)一步攪拌5分鐘，由 此制備微粒。將該微粒分散液在硅晶片上展開后，在真空下使其充分 千燥，蒸鍍鉑，用掃描型電子顯微鏡(HITACHS-4800)進(jìn)行觀察。<結(jié)果〉觀察到了直徑數(shù)微米~數(shù)百微米的微粒。干燥后觀察的粒子形狀 與覆蓋有聚合物外層的粒子內(nèi)存在蛋白質(zhì)的微粒結(jié)構(gòu)不矛盾。實(shí)施例2 微粒的制備使10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚(s -己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5,000、聚(s-己內(nèi)酯)的分子量10,000或37,000)加熱 溶解在2mL乙酸乙酯中。邊以攪拌速度1,600rpm攪拌該聚合物溶液邊 滴加50 - 200^L辣根過(guò)氧化物酶水溶液(lwt。/。辣根過(guò)氧化物酶、9wt %蔗糖、10mM Tris-HC1 pH7.4)。進(jìn)一步攪拌l小時(shí)，由此制備微 粒。該微粒的粒徑測(cè)定4吏用裝置Zetasizer3 000HSA (馬爾文儀器， MALVERN INSTRUMENTS ),利用動(dòng)態(tài)光散射法進(jìn)行。所得的數(shù)據(jù) 通過(guò)CONTIN法及柱形圖法進(jìn)行解析，算出粒徑。<結(jié)果〉形成了最小數(shù)均粒徑達(dá)到25.1nm的微粒(圖l) 。 z-平均粒徑在 研究的聚合物濃度范圍內(nèi)，從200nm變化至數(shù)微米。 實(shí)施例3孩i粒的制備使10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇_聚(s-己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5，000、聚(e -己內(nèi)酯)的分子量37，000)溶解在2mL 乙酸乙酯中，配制聚合物溶液。邊以攪拌速度l,600rpm攪拌該聚合物 溶液，邊滴入100(aL lwt。/。辣根過(guò)氧化物酶溶液。進(jìn)一步攪拌l小時(shí)后， 添加至10倍量的二氧雜環(huán)己烷中。使溶劑蒸發(fā)，濃縮至約2mL后，將 該粒子分散液添加至含有各種濃度的Pluronic(BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68 (PEO - PPO - PEO嵌段聚合物)的磷酸緩沖液(10mL )中。該微粒 的粒徑測(cè)定使用裝置Zetasizer3000HSA (馬爾文儀器)，利用動(dòng)態(tài)光 散射法進(jìn)行。所得的數(shù)據(jù)根據(jù)CONTIN法及柱形圖法進(jìn)行解析，算出 粒徑。<結(jié)果>在磷酸緩沖液中添加作為表面改性劑的Pluronic ( BASF的注冊(cè)商 標(biāo))F68 ( PEO - PPO - PEO嵌段聚合物)，由此，形成在粒子表面鍵 合有Pluronic (BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68的在水中穩(wěn)定的微粒。由光散 射測(cè)定的結(jié)果可明確粒徑依賴于Pluronic (BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68的 濃度而變化(圖2) 。 Pluronic(BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68為lmg/mL時(shí)， 粒徑約為95nm，隨著Pluronic (BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68濃度的減少而 減少，當(dāng)為0.002mg/mL時(shí)，粒徑約為80nm。實(shí)施例4 微粒的制備將10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚(s -己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5，000、聚(s -己內(nèi)酯)的分子量37，000 )溶解在2mL 乙酸乙酯中，配制聚合物溶液。邊以攪拌速度l,600rpm攪拌該聚合物 溶液，邊滴入100fiL lwt。/o的胰島素溶液。進(jìn)一步攪拌l小時(shí)后，添加 至10倍量的二氧雜環(huán)己烷中。使溶劑蒸發(fā)，濃縮至約2mL后，將該粒
子分散液添加至含有l(wèi)wt。/。聚乙烯醇的磷酸緩沖液(10mL)中。冷凍 干燥試樣后，添加2mL水使粒子再分散。該微粒的粒徑測(cè)定使用裝置 Zetasizer3000HSA (馬爾文儀器)，利用動(dòng)態(tài)光散射法進(jìn)行。所得的 數(shù)據(jù)通過(guò)CONTIN法及柱形圖法進(jìn)行解析，算出粒徑。
<結(jié)果〉使用聚乙烯醇作為表面改性劑，配制包封有胰島素作為藥劑的微 粒。冷凍千燥后，再分散的微粒的平均粒徑為121nm。實(shí)施例5 微粒的制備
將10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚(s -己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5,000、聚(s -己內(nèi)酯)的分子量5，000、 IO，OOO、 16,300、 24,500、 37,000 )溶解在2mL乙酸乙酯中，配制聚合物溶液。邊以攪 拌速度l，600rpm攪拌該聚合物溶液，邊滴入100(iL lwt。/。的胰島素溶 液。進(jìn)一步攪拌1小時(shí)后添加至10倍量的二氧雜環(huán)己烷中。使溶劑蒸 發(fā)，濃縮至約2mL后，將該粒子分散液添加至含有l(wèi)wt。/。聚乙烯醇的 磷酸緩沖液(10mL)中。冷凍干燥試樣后，添加2mL水，使粒子再分 散。該微粒的粒徑測(cè)定使用裝置Zetasizer3000HSA (馬爾文儀器)， 利用動(dòng)態(tài)光散射法進(jìn)行。所得的數(shù)據(jù)根據(jù)CONTIN法及柱形圖法進(jìn)行 解析，算出粒徑。
<結(jié)果〉粒子粒徑隨著兩親性嵌段共聚物的聚U-己內(nèi)酯)片段分子量 變化，從130nm變化至180nm (圖3)。實(shí)施例6 微粒的制備將10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚(乳酸)-聚乙二醇(聚 乙二醇的分子量23,000、聚(乳酸)的分子量20，000)溶解在2mL乙 酸乙酯中，配制聚合物溶液。邊以攪拌速度l,600rpm攪拌該聚合物溶
液，邊滴入100fiL lwt%的辣根過(guò)氧化物酶溶液。進(jìn)一步攪拌l小時(shí)后， 添加至10倍量的二氧雜環(huán)己烷中。使溶劑蒸發(fā)，濃縮至約2mL后，將 該粒子分散液添加至含有l(wèi)wt。/。聚乙烯醇的磷酸緩沖液U0mL)中。 冷凍干燥試樣后，添加2mL水，使粒子再分散。該微粒的粒徑測(cè)定使 用裝置Zetasizer3000HSA (馬爾文儀器)，利用動(dòng)態(tài)光散射法進(jìn)行。 所得的數(shù)據(jù)根據(jù)CONTIN法及柱形圖法進(jìn)行解析，算出粒徑。 <結(jié)果>
使用聚乙二醇-聚(乳酸)-聚乙二醇作為兩親性聚合物，制備 包封有辣根過(guò)氧化物酶的微粒。冷凍干燥后，再分散的微粒的平均粒 徑為75nm。
實(shí)施例7
確定藥物包封量
將10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚(e -己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5,000、聚(s -己內(nèi)酯)的分子量37，000 )溶解在2mL 乙酸乙酯中，配制聚合物溶液。邊以攪拌速度l,600rpm攪拌該聚合物 溶液，邊滴入10(VL lwt。/。的胰島素溶液(含有、不含有9wt。/o蔗糖)。 進(jìn)一步攪拌l小時(shí)后，添加至10倍量的二氧雜環(huán)己烷中。使溶劑蒸發(fā)， 濃縮至約2mL后，將該粒子分散液添加至含有l(wèi)wt%表面改性劑 Pluronic (BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68或聚乙烯醇的磷酸緩沖液(lOmL) 中。冷凍干燥試樣后，添加2mL水，使粒子再分散。藥物的包封率根 據(jù)液相色譜法測(cè)定及用考馬斯亮藍(lán)染色對(duì)超濾后的濾液的蛋白質(zhì)濃 度進(jìn)行定量而確定。
<結(jié)果>
藥物胰島素的包封量不隨表面改性劑的種類而變化，但根據(jù)粒子 內(nèi)有無(wú)添加劑而變化(圖4)。使用Pluronic (BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68、 聚乙烯醇時(shí)在添加蔗糖時(shí)的包封率都為50% ,在未添加時(shí)都為約80%。
實(shí)施例8
藥物從微粒中的緩釋
將10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚U-己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5,000、聚(s -己內(nèi)酯)的分子量37，000)溶解在2mL 乙酸乙酯中，配制聚合物溶液。邊以攪拌速度l,600rpm攪拌該聚合物 溶液，邊滴入100iaL lwt。/。用焚光素標(biāo)記的血清白蛋白水溶液。進(jìn)一 步攪拌l小時(shí)后，添加至10倍量的二氧雜環(huán)己烷中。使溶劑蒸發(fā)，濃 縮至約2mL后，將該粒子分散液添加至含有l(wèi)wt。/。表面改性劑聚乙烯 醇的磷酸緩沖液(10mL)中。冷凍干燥試樣后，添加2mL水，使粒子 再分散。將試樣用磷酸緩沖液(pH7.4)稀釋至十分之一，在37。C下 進(jìn)行孵化。在規(guī)定的時(shí)間采集試樣，對(duì)釋放的蛋白質(zhì)的量進(jìn)行定量。
<結(jié)果〉
可知微粒在生理?xiàng)l件下慢慢分解，慢慢釋放出包封的蛋白質(zhì)(圖 5)。緩釋的時(shí)間尺度為從數(shù)日 數(shù)周的單位。
實(shí)施例9 微粒的制備
將10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚(s -己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5，000、聚(s -己內(nèi)酯)的分子量IO,OOO)溶解在2mL 乙酸乙酯中，配制聚合物溶液。在該聚合物溶液中滴入100jiL 10mg /mL的胰島素溶液，用均化器進(jìn)行攪拌(15000rpm、 5分鐘)。攪拌 后，添加至20mL二氧雜環(huán)己烷中。使溶劑蒸發(fā)，濃縮至約2mL后，將 該粒子分散液添加至含有500mg的Pluronic (BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68 的二氧雜環(huán)己烷(6mL)中。冷凍千燥試樣后，分成8批使其分散在 80mL純水中。用裝有分離分子量10萬(wàn)的過(guò)濾膜的超濾裝置濃縮至 10mL后，添加50mL純水，再次濃縮至5mL。再進(jìn)4于一次濃縮纟喿作后 添加純水至40mL。其后，添加40mL 6mg / mL的Pluronic ( BASF的注 冊(cè)商標(biāo))F68溶液進(jìn)行冷凍干燥。冷凍干燥后，在所得的粉末狀試樣 中添加水，使其再分散。該農(nóng)i粒的粒徑測(cè)定4吏用裝置Zetasizer3000HSA
(馬爾文儀器)，利用動(dòng)態(tài)光散射法進(jìn)行。所得的數(shù)據(jù)根據(jù)CONTIN 法及柱形圖法進(jìn)行解析，算出粒徑。胰島素的包封率通過(guò)于6N HC1 中在105"C下將粒子試樣水解22小時(shí)后，進(jìn)行氨基酸分析，對(duì)蛋白質(zhì) 質(zhì)量進(jìn)行定量從而確定。 <結(jié)果〉
得到278.2mg粒徑為300nm的粒子。根據(jù)氨基酸分析得到的胰島素 包封率為25% 。
實(shí)施例IO 微粒的制備
將1 Omg作為兩親性聚合物的聚乙烯吡咯烷酮-聚(乳酸)(聚乙 烯吡咯烷酮的分子量1,700、聚(乳酸)的分子量2,200 )溶解在2mL 乙酸乙酯中，配制聚合物溶液。在該聚合物溶液中滴入100pL 10mg /mL的胰島素溶液，攪拌數(shù)秒。然后，添加至10倍量的二氧雜環(huán)己 烷中。使溶劑蒸發(fā)，濃縮至約2mL后，將該粒子分散液添加至含有 500mg的Pluronic (BASF的注冊(cè)商標(biāo))F68的二氧雜環(huán)己垸(20mL ) 中。冷凍干燥試樣后，添加2mL水，使粒子再分散。該微粒的粒徑測(cè) 定使用裝置Zetasizer3000HSA (馬爾文儀器)，利用動(dòng)態(tài)光散射法進(jìn) 行。所得的數(shù)據(jù)根據(jù)CONTIN法及柱形圖法進(jìn)行解析，算出粒徑。
<結(jié)果〉
再分散后可見(jiàn)沉淀，但通過(guò)離心操作除去沉淀后，進(jìn)行粒徑測(cè)定 時(shí)，可知形成了90- 130nm的粒子。
實(shí)施例ll 粒子的制備
將10mg作為兩親性聚合物的聚乙二醇-聚(s -己內(nèi)酯)(聚乙 二醇的分子量5，000、聚(s -己內(nèi)酯)的分子量IO，OOO)溶解在2mL 乙酸乙酯中，配制聚合物溶液。在該聚合物溶液中滴入100[iL 10mg /mL的胰島素溶液，用均化器攪拌(15000rpm、 5分鐘)。攪拌后，
添加至20mL二氧雜環(huán)己烷中。使溶劑蒸發(fā)，濃縮至約2mL后，將該粒 子分散液添加至含有各種濃度的Cremophor (BASF的注冊(cè)商標(biāo))EL (聚氧乙烯氫化蓖麻油)的二氧雜環(huán)己烷(8mL)。冷凍干燥試樣后， 添加10mL純水，用超聲波處理使其分散。該微粒的粒徑測(cè)定使用裝 置Zetasizer3000HSA (馬爾文儀器)，利用動(dòng)態(tài)光散射法進(jìn)行。所得 的數(shù)據(jù)根據(jù)CONTIN法及柱形圖法進(jìn)行解析，算出粒徑。 <結(jié)果〉
在純水中分散后的粒子粒徑與Cremophor ( BASF的注冊(cè)商標(biāo))EL 濃度同時(shí)減少，二氧雜環(huán)己烷中的Cremophor ( BASF的注冊(cè)商標(biāo))EL 濃度為1000mg/mL時(shí)粒子粒徑為61nm (圖6)。
實(shí)施例12
胰島素包封粒子的藥效持續(xù)性
將按照實(shí)施例9的方法配制的包封15嗎人胰島素(WAKO公司) 的微粒制劑分散在100iil生理食鹽水(大塚制藥)中，在禁食12小時(shí) 的7周齡雄性BALB/c小鼠(體重19 24g)的背部皮下使用29G注射 針(泰爾茂(TERUMO)公司)進(jìn)行給藥。(作為比較數(shù)據(jù)，使用100nl 溶解有15昭胰島素的生理食鹽水(大塚制藥)。)給藥后的動(dòng)物在分 別獨(dú)立的籠中維持禁食狀態(tài)，在給藥前.及給藥后，使用生化學(xué)自動(dòng) 分析裝置(富士film公司富士DRI-CHEM3500V)、測(cè)定玻片(Slide) (富士film公司GLU-Will )對(duì)通過(guò)尾動(dòng)脈采集的血液經(jīng)時(shí)地測(cè)定血 液中葡萄糖濃度的變化，計(jì)算每2只的血中葡萄糖濃度變化的平均值。 <結(jié)果〉
與給藥前相比，僅給與胰島素的小鼠的血中葡萄糖濃度在10小時(shí) 時(shí)恢復(fù)到80%,與此相對(duì)，給與了包封胰島素的微粒制劑的小鼠維持 血中葡萄糖濃度降低，10小時(shí)后為40%左右，即使經(jīng)過(guò)23小時(shí)后，也 保持在給藥開始前的70 %左右，顯示了來(lái)自該微粒的緩釋性的胰島素 藥效持續(xù)性(圖7)。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性
本發(fā)明的微粒提高親水性且分子量大的蛋白質(zhì).肽藥物、核酸藥 物等在生物體內(nèi)的穩(wěn)定性并改善體內(nèi)動(dòng)態(tài)。能進(jìn)行生理活性蛋白質(zhì)的 經(jīng)口或經(jīng)腸道給藥，與現(xiàn)有的注射給藥方法相比，能簡(jiǎn)便且溫和地對(duì) 患者進(jìn)行藥物治療。注射給藥中，也能夠?qū)崿F(xiàn)皮下給藥時(shí)的緩釋、延 長(zhǎng)血中給藥時(shí)的血中滯留時(shí)間，并能降低注射次數(shù)。
含有本發(fā)明微粒的醫(yī)藥品制劑可期待持續(xù)的藥理效果。另外，含 有本發(fā)明微粒的醫(yī)藥制劑通過(guò)對(duì)基質(zhì)形成材料的選擇，還能控制藥物 的釋放特性。
權(quán)利要求
1、一種微粒，含有兩親性聚合物，由內(nèi)核和疏水性外層構(gòu)成，所述內(nèi)核由兩親性聚合物的親水性片段形成，所述疏水性外層由兩親性聚合物的疏水性片段形成，在疏水性外層鍵合有表面改性劑。
2、 如權(quán)利要求l所述的微粒，其中，所述表面改性劑為親水性聚合物。
3、 如權(quán)利要求2所述的微粒，其中，所述親水性聚合物為聚乙二 醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚曱基丙 烯酸、聚-1， 3-二氧戊環(huán)、2-曱基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合 物、聚-1， 3, 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸、蛋白質(zhì)或多糖類中的 任一種。
4、 如權(quán)利要求2所述的微粒，其中，所述親水性聚合物為聚乙二 醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚甲基丙 烯酸、聚-1, 3-二氧戊環(huán)、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合 物、聚-1， 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸、蛋白質(zhì)或多糖類中的 任一種的類似物。
5、 如權(quán)利要求3或4所述的微粒，其中，所述聚氨基酸為聚天冬 氨酸或聚谷氨酸的類似物。
6、 如權(quán)利要求3或4所述的微粒，其中，所述蛋白質(zhì)為明膠、酪 蛋白或白蛋白中的任一種。
7、 如權(quán)利要求3或4所述的微粒，其中，所述多糖類為纖維素、 曱殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、結(jié)冷膠、藻酸、透明質(zhì)酸、茁酶多糖或葡聚 糖中的任一種。
8、 如權(quán)利要求3或4所述的微粒，其中，所述多糖類為纖維素、 甲殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、結(jié)冷膠、藻酸、透明質(zhì)酸、茁酶多糖或葡聚 糖中的任一種的類似物。
9、 如權(quán)利要求l所述的微粒，其中，所述表面改性劑為兩親性化 合物。
10、 如權(quán)利要求9所述的微粒，其中，所述兩親性化合物為表面 活性劑。
11、 如權(quán)利要求10所述的微粒，其中，所述表面活性劑為聚氧乙烯聚丙二醇共聚物、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯失 水山梨糖醇單脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇二脂肪酸酯、聚氧乙 烯甘油單脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油二脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚 氧乙烯氫化蓖麻油、烷基硫酸鹽或卵磷脂中的任一種。
12、 如權(quán)利要求l所述的微粒，其中，所述兩親性聚合物的親水 性片段含有聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚 丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚-1， 3-二氧戊環(huán)、2-甲基丙烯酰氧基 乙基磷酸膽堿聚合物、聚-1, 3, 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸或多 糖類中的任一種。
13、 如權(quán)利要求l所述的微粒，其中，所述兩親性聚合物的親水 性片段含有聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚 丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚-1, 3-二氧戊環(huán)、2-曱基丙烯酰氧基 乙基磷酸膽堿聚合物、聚-1, 3， 6-三氧雜環(huán)己烷、聚氨基酸或多 糖類中的任一種的類似物。
14、 如權(quán)利要求l所述的微粒，其中，所述兩親性聚合物的疏水 性片段含有脂肪族聚酯、聚原酸酯、聚氰基丙烯酸酯、聚亞烷基二醇、 聚氨酯、聚硅氧烷、聚氨基酸或聚酸酐中的任一種。
15、 如權(quán)利要求l所述的微粒，其中，所述兩親性聚合物的疏水 性片段含有脂肪族聚酯、聚原酸酯、聚氰基丙烯酸酯、聚亞烷基二醇、 聚氨酯、聚硅氧烷、聚氨基酸或聚酸酐中的任一種的類似物。
16、 如權(quán)利要求14或15所述的微粒，其中，脂肪族聚酯為聚(s -己內(nèi)酯)、聚乳酸或聚乙醇酸。
17、 如權(quán)利要求l所述的孩i粒，其中，所述兩親性聚合物的疏水 性片段為生物分解性聚合物。
18、 如權(quán)利要求l所述的微粒，其中，所述兩親性聚合物為具有 嵌段結(jié)構(gòu)、接枝結(jié)構(gòu)或支化結(jié)構(gòu)中的任一種結(jié)構(gòu)的共聚物。
19、 如權(quán)利要求l所述的微粒，平均粒徑為50 1000nm。
20、 一種微粒，由內(nèi)核和疏水性外層構(gòu)成，所述內(nèi)核由兩親性聚 合物的親水性片段形成，所述疏水性外層由兩親性聚合物的疏水性片 段形成，其特征在于，(A) 兩親性聚合物的疏水性片段含有脂肪族聚酯、聚原酸酯、 聚氰基丙烯酸酯、聚亞烷基二醇、聚氨酯、聚硅氧烷、聚氨基酸或聚 酸酐中的任一種，并且，(B) 兩親性聚合物的親水性片段含有聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷 酮、聚乙烯醇、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、聚曱基丙烯酸、聚-1， 3-二氧戊環(huán)、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿聚合物、聚-1， 3， 6-三氧雜環(huán)己烷或多糖類中的任一種。
21、 如權(quán)利要求20所述的微粒，平均粒徑為25nm 5Mm。
22、 如權(quán)利要求1或20所述的微粒，其中，在由兩親性聚合物的 親水性片段形成的內(nèi)核中含有藥物。
23、 一種醫(yī)藥組合物，含有權(quán)利要求1或20所述的微粒。
全文摘要
本發(fā)明的微粒含有兩親性聚合物，由內(nèi)核和疏水性外層構(gòu)成，所述內(nèi)核由兩親性聚合物的親水性片段形成，所述疏水性外層由兩親性聚合物的疏水性片段形成，疏水性外層鍵合有表面改性劑。本發(fā)明的微粒是在由兩親性聚合物的親水性片段形成的內(nèi)核中有效地包封有親水性且分子量大的蛋白質(zhì)·肽藥物、核酸藥物等、并適合于促進(jìn)在生物體內(nèi)的穩(wěn)定化或吸收的微粒。
文檔編號(hào)C08G81/00GK101137700SQ200680007569
公開日2008年3月5日 申請(qǐng)日期2006年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月9日
發(fā)明者井田伸夫, 柿澤資訓(xùn), 西尾玲士, 青木孝夫 申請(qǐng)人:東麗株式會(huì)社