一種以金福菇為原料提取分離金福菇多糖tlh-3的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法，本方法以金福菇為原料，利用閃式提取技術(shù)，快速、高效的提取金福菇多糖TLH-3，然后利用季銨鹽沉淀法和超濾技術(shù)進行多糖純化。本發(fā)明方法步驟簡便、易于操作，TLH-3的提取率為5％以上，最終產(chǎn)品純度高達90％以上，整個工藝完成時間小于5小時，大大提高了生產(chǎn)效率，降低了能耗，屬于典型的綠色環(huán)保工藝。
【專利說明】一種以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法 一、

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種食用菌的加工方法，具體地說是一種以金福菇為原料提取分離金 福菇多糖TLH-3的方法。 二、

【背景技術(shù)】
[0002] 金福燕（Tricholoma lobayense Heim)又稱為巨大口蘑、大白口蘑、洛巴伊口蘑，日 本稱白色松茸，是一種珍貴的天然保健食品和高品位的食用菌，其多糖和蛋白聚糖具有免 疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤的活性。
[0003] 閃式提取技術(shù)是通過破碎組織來提取所需成分的一種新型高效的提取技術(shù)，與常 規(guī)提取方法相比，該方法具有低溫、快速、高效的優(yōu)點。季銨鹽沉淀法是多糖純化的方法之 一，季銨鹽可與酸性糖形成不溶性沉淀，常用于酸性多糖的分離。該方法操作簡便，處理量 大，無需其它有機試劑。膜技術(shù)是一項新興的用于澄清、分離、除菌和濃縮等方面的綠色和 節(jié)能技術(shù)，具有操作簡單、節(jié)能、無污染、可在常溫下連續(xù)操作等優(yōu)點，廣泛用于化工、食品、 生物、制藥等領(lǐng)域。
[0004] 金福菇主要含有三個多糖組分，中性糖TLH-1、酸性糖TLH-2和TLH-3,其中TLH-3 的分子量為4. 22X 103Da，其抗氧化活性和抗壞血酸相當，可作為天然無毒抗氧化劑，應(yīng)用 于食品、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域。
[0005] 多糖的分離純化大多采用傳統(tǒng)的水提醇沉法，需要二次提取，提取時間長，除蛋白 的過程繁瑣且時間較長，能耗大。CN102603908A公開了一種天然抗氧化劑金福菇多糖的制 備方法，該方法利用水提醇沉法提取金福菇多糖，將金福菇多糖加熱浸提2-4小時，醇沉過 夜，該工藝提取時間長，高溫提取對多糖結(jié)構(gòu)造成破壞；柱層析法分離純化得到TLH-3,該 方法首先采用經(jīng)過DEAE-Sephorase F. F凝膠柱純化，然后用Superdex200層析柱分離得到 TLH-3,整個過程需要2-3天，該工藝耗時長，效率差，步驟繁瑣，金福菇多糖TLH-3的得率 低，成本高，不能進行工業(yè)化生產(chǎn)。 三、


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明旨在提供一種以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法，所要解 決的技術(shù)問題是降低提取溫度并提高提取效率，提高金福菇多糖TLH-3的得率和純度。
[0007] 本發(fā)明采用閃式提取技術(shù)提取金福菇多糖TLH-3,并將季銨鹽沉淀法與超濾技術(shù) 聯(lián)用，制備工藝簡單易行，效率高，整個操作過程溫度不超過40°C，金福菇多糖TLH-3的得 率和純度較高，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0008] 本發(fā)明以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法，操作步驟如下：
[0009] (1)將金福菇放入閃式提取器中，加入20-40質(zhì)量倍的水，常溫下提取30-45S，提 取電壓為100-130V ;
[0010] (2)將步驟（1)得到的提取液用離心分離或減壓抽濾的方式去除顆粒性雜質(zhì)，收 集上清液；
[0011] (3)將步驟（2)得到的上清液加入質(zhì)量濃度1-10%的十六烷基三甲基溴化銨 (CTAB)溶液中，靜置1. 0-1. 5h，離心并收集沉淀物，將所得沉淀物用質(zhì)量濃度10 %的NaCl 溶液溶解，得到酸性亞組分溶液；
[0012] (4)將步驟（3)得到的酸性亞組分溶液在25-35°C下通過1000-1500道爾頓的超 濾膜脫鹽，超濾驅(qū)動壓力為0. 10-0. 18MPa ;然后在25-35°C下用1-10萬道爾頓的超濾膜進 行超濾，超濾驅(qū)動壓力〇. 10-0. 18MPa，濾出液于-50°C冷凍干燥后得到金福菇多糖TLH-3。
[0013] 本發(fā)明使用的金福菇可以是金福菇干粉也可以是新鮮的金福菇。本發(fā)明所用試劑 和原料均市售可得。
[0014] 純品鑒定：將本發(fā)明得到的金福菇多糖TLH-3樣品用高壓液相色譜儀檢測純度， 色譜條件：分析柱 TSK-GEL G4000PWX ((p7.5mm><30nim; Tosoh Corporation，Tokyo, Japan); 柱溫35°C ;流動相：蒸餾水；流速：lmL/min ;檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器；上樣量為10μ L。 色譜圖見圖1。
[0015] 本發(fā)明得到的金福菇多糖TLH-3與CN102603908A公開的一種天然抗氧化劑金福 菇多糖的制備方法中的TL-3從理化性質(zhì)和活性上分析為同一個多糖。
[0016] 本發(fā)明以金福菇為原料，利用閃式提取技術(shù)，快速、高效的提取金福菇多糖TLH-3, 然后利用季銨鹽沉淀法和超濾技術(shù)進行多糖純化。本發(fā)明方法步驟簡便、易于操作，金福菇 多糖TLH-3的提取率為5%以上，產(chǎn)品純度高達90%以上，整個工藝完成時間小于5小時， 大大提高了生產(chǎn)效率，降低了能耗，屬于典型的綠色環(huán)保工藝。本發(fā)明整個工藝過程不超過 40°C，金福菇多糖TLH-3的得率高，藥理效果強，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)，所得產(chǎn)品市場前景十 分看好，經(jīng)濟效益廣闊。 四、

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1為本發(fā)明提取得到的金福菇多糖TLH-3的高壓液相色譜圖。 五、

【具體實施方式】
[0018] 實施例1 :
[0019] 本實施例中以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法如下：
[0020] (1)將金福菇放入閃式提取器中，加入20質(zhì)量倍的水，常溫下提取30s，提取電壓 為 100V ;
[0021] (2)將步驟（1)得到的提取液離心分離，收集上清液；離心分離的參數(shù)為：離心轉(zhuǎn) 速為3800r/min，離心時間為22min ;
[0022] (3)將步驟（2)得到的上清液加入質(zhì)量濃度3 %的CTAB溶液中，靜置1. 0h，離心并 收集沉淀物，將所得沉淀物用質(zhì)量濃度10%的NaCl溶液溶解，得到酸性亞組分溶液；
[0023] (4)將步驟（3)得到的酸性亞組分溶液在25°C下用1000道爾頓的超濾膜進行超 濾脫鹽，超濾驅(qū)動壓力0. l〇MPa ;然后在25°C下用1萬道爾頓的超濾膜進行超濾，超濾驅(qū)動 壓力0. lOMPa，濾出液于-50°C冷凍干燥后得到金福菇多糖TLH-3。
[0024] 本實施例得到的金福菇多糖TLH-3的提取率為5. 3%，純度達到92%。
[0025] 實施例2 :
[0026] 本實施例中以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法如下：
[0027] (1)將金福菇放入閃式提取器中，加入30質(zhì)量倍的水，常溫下提取35s，提取電壓 為 110V ;
[0028] (2)將步驟（1)得到的提取液離心分離，收集上清液；離心分離的參數(shù)為：離心轉(zhuǎn) 速為4000r/min，離心時間為20min ;
[0029] (3)將步驟（2)得到的上清液加入質(zhì)量濃度5 %的CTAB溶液中，靜置1. 2h，離心并 收集沉淀物，將所得沉淀物用質(zhì)量濃度10%的NaCl溶液溶解，得到酸性亞組分溶液；
[0030] (4)將步驟（3)得到的酸性亞組分溶液在30°C下用1200道爾頓的超濾膜進行超 濾脫鹽，超濾驅(qū)動壓力0. 13MPa ;然后在30°C下用3萬道爾頓的超濾膜進行超濾，超濾驅(qū)動 壓力0. 13MPa，濾出液于-50°C冷凍干燥后得到金福菇多糖TLH-3。
[0031] 本實施例得到的金福菇多糖TLH-3的提取率為5. 5%，純度達到91%。
[0032] 實施例3 :
[0033] 本實施例中以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法如下：
[0034] (1)將金福菇放入閃式提取器中，加入35質(zhì)量倍的水，常溫下提取40s，提取電壓 為 120V ;
[0035] (2)將步驟（1)得到的提取液離心分離，收集上清液；離心分離的參數(shù)為：離心轉(zhuǎn) 速為4200r/min，離心時間為18min ;
[0036] (3)將步驟（2)得到的上清液加入質(zhì)量濃度7 %的CTAB溶液中，靜置1. 3h，離心并 收集沉淀物，將所得沉淀物用質(zhì)量濃度10%的NaCl溶液溶解，得到酸性亞組分溶液；
[0037] (4)將步驟（3)得到的酸性亞組分溶液在23°C下用1300道爾頓的超濾膜進行超 濾脫鹽，超濾驅(qū)動壓力0. 15MPa ;然后在33°C下用5萬道爾頓的超濾膜進行超濾，超濾驅(qū)動 壓力0. 15MPa，濾出液于-50°C冷凍干燥后得到金福菇多糖TLH-3。
[0038] 本實施例得到的金福菇多糖TLH-3的提取率為5. 7%，純度達到94%。
[0039] 實施例4 :
[0040] 本實施例中以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法如下：
[0041] (1)將金福菇放入閃式提取器中，加入40質(zhì)量倍的水，常溫下提取45s，提取電壓 為 130V ;
[0042] (2)將步驟⑴得到的提取液用三層濾紙進行減壓抽濾，收集上清液；
[0043] (3)將步驟（2)得到的濾液加入質(zhì)量濃度10 %的CTAB溶液中，靜置1. 5h，離心并 收集沉淀物，將所得沉淀物用質(zhì)量濃度10%的NaCl溶液溶解，得到酸性亞組分溶液；
[0044] (4)將步驟（3)得到的酸性亞組分溶液在35°C下用1500道爾頓的超濾膜進行超 濾脫鹽，超濾驅(qū)動壓力0. 18MPa ;然后在35°C下用10萬道爾頓的超濾膜進行超濾，超濾驅(qū)動 壓力0. 18MPa，濾出液于-50°C冷凍干燥后得到金福菇多糖TLH-3。
[0045] 本實施例得到的金福菇多糖TLH-3的提取率為5. 2%，純度達到96%。
【權(quán)利要求】
1. 一種以金福菇為原料提取分離金福菇多糖TLH-3的方法，其特征在于包括以下步 驟： (1) 將金福菇放入閃式提取器中，加入20-40質(zhì)量倍的水，常溫下提取30-45S ; (2) 將步驟（1)得到的提取液用離心分離或減壓抽濾的方式去除顆粒性雜質(zhì)，收集上 清液； (3) 將步驟（2)得到的上清液加入質(zhì)量濃度1-10%的十六烷基三甲基溴化銨溶液中， 靜置1. 0-1. 5h，離心并收集沉淀物，將所得沉淀物用質(zhì)量濃度10%的NaCl溶液溶解，得到 酸性亞組分溶液； (4) 將步驟（3)得到的酸性亞組分溶液在25-35°C下通過兩次超濾膜超濾，濾出液冷凍 干燥后得到金福菇多糖TLH-3。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于： 第一次超濾的超濾膜為1000-1500道爾頓，超濾驅(qū)動壓力為0. 10-0. 18MPa。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于： 第二次超濾的超濾膜為1-10萬道爾頓，超濾驅(qū)動壓力為〇. 10-0. 18MPa。
【文檔編號】C08B37/00GK104045733SQ201410318373
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年7月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月4日
【發(fā)明者】陳彥, 劉柳, 郭文強, 王亞, 陸永明 申請人:安徽大學(xué)