本發(fā)明涉及化合物的新用途，具體是5-胡椒基噻唑衍生物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：中國(guó)發(fā)明專利[CN104530035A，2015年4月22日公開]描述了5-胡椒基-4-烷基-2-芳氨基噻唑衍生物或其鹽在制備抗農(nóng)用殺菌劑和殺蟲劑中的應(yīng)用。胡艾希等描述了5-芐基-4-烷基-2-芳氨基噻唑衍生物及其鹽在制備抗癌藥物中的應(yīng)用[高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)，2013，34(7)：1646～1652；中國(guó)發(fā)明專利CN102070556B，2013年3月20日授權(quán)；中國(guó)發(fā)明專利CN102319244A，2012年1月18日公開]。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供化學(xué)結(jié)構(gòu)式Ⅰ所示的5-胡椒基噻唑衍生物或其鹽在制備抗癌藥物中的應(yīng)用：其中，R選自：C1～C2烷基；C3～C4直鏈烷基或C3～C4支鏈烷基；X1、X5選自：氫、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴或硝基；X2、X4選自：氫、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、硝基或三氟甲基；X3選自：氫、氘、C1～C2烷基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、硝基、乙氧甲酰基或三氟甲基；所述鹽選自：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、蘋果酸鹽、乳酸鹽、琥珀酸鹽、馬來(lái)酸鹽或富馬酸鹽。本發(fā)明的目的在于提供了5-胡椒基噻唑衍生物選自：5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-甲基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-溴苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3-(三氟甲基)苯氨基]噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-甲氧基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-硝基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲酰基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，5-二氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑或5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3，5-二(三氟甲基)苯氨基]噻唑。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：5-胡椒基噻唑衍生物或其鹽具有良好的抗癌活性。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例旨在說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步限定。實(shí)施例15-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-甲基苯氨基)噻唑的制備2mmol2，2-二甲基-5-(3，4-亞甲二氧基)-4-溴-3-戊酮、2mmol2-甲基苯基硫脲，15mL丙酮，回流8h，反應(yīng)液用氨水調(diào)節(jié)pH7，柱層析得黃色油狀物5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-甲基苯氨基)噻唑，收率60.4％。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.45(s，9H，3×CH3)，2.34(s，3H，CH3)，4.06(s，2H，CH2)，5.94(s，2H，OCH2O)，6.62～6.75(m，3H，C6H3)，7.01～7.26(m，4H，C6H4)。實(shí)施例25-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-甲基苯氨基)噻唑的制備制備方法同實(shí)施例1，反應(yīng)8h，得到黃色油狀物5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-甲基苯氨基)噻唑，收率65.4％。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.45(s，9H，3×CH3)，2.33(s，3H，CH3)，4.08(s，2H，CH2)，5.96(s，2H，OCH2O)，6.64～6.77(m，3H，C6H3)，6.91(d，J＝7.6Hz，1H，C6H44-H)，7.07(d，J＝7.6Hz，2H，C6H46-H)，7.08(s，1H，C6H42-H)，7.22(t，J＝8Hz，1H，C6H45-H)。實(shí)施例35-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑的制備制備方法同實(shí)施例1，反應(yīng)6h，得到黃色油狀物5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑，收率48.9％；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.41(s，9H，3×CH3)，4.11(s，2H，CH2)，5.95(s，2H，OCH2O)，6.65～6.76(m，3H，C6H3)，7.12～7.23(m，3H，C6H44，5，6-H)，7.60(s，1H，C6H42-H)。實(shí)施例45-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-溴苯氨基)噻唑的制備制備方法同實(shí)施例1，反應(yīng)6h，得到黃色固體5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-溴苯氨基)噻唑，收率51.1％，m.p.118～120℃；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.41(s，9H，3×CH3)，4.10(s，2H，CH2)，5.95(s，2H，OCH2O)，6.65～6.76(m，3H，C6H3)，7.22(d，J＝8.8Hz，2H，C6H42，6-H)，7.40(d，J＝8.8Hz，2H，C6H43，5-H)。實(shí)施例55-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑的制備制備方法同實(shí)施例1，反應(yīng)6h，得到黃色油狀物5-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑，收率74.5％，；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.43(s，9H，3×CH3)，4.12(s，2H，CH2)，5.96(s，2H，OCH2O)，6.66～6.77(m，3H，C6H3)，7.42(d，J＝8.4Hz2H，C6H42，6-H)，7.56(d，J＝8.4Hz，2H，C6H43，5-H)。實(shí)施例65-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-甲氧基苯氨基)噻唑的制備2mmol2，2-二甲基-5-(3，4-亞甲二氧基)-4-溴-3-戊酮、2mmol4-甲氧基苯基硫脲，15mL乙醇，回流8h，反應(yīng)液用氨水調(diào)節(jié)pH7，蒸去部分溶劑，冷凍析晶，過(guò)濾，干燥，得黃色固體5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-甲氧基苯氨基)噻唑，收率27.0％，m.p.147.0～149.0℃；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.34(s，9H，3×CH3)，3.73(s，3H，OCH3)，4.05(s，2H，CH2)，5.98(s，2H，OCH2O)，6.67(d，J＝8Hz，1H，C6H35-H)，6.75(s，1H，C6H32-H)，6.84(d，J＝8Hz，1H，C6H36-H)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H，C6H43，5-H)，7.47(d，J＝8.4Hz，2H，C6H42，6-H)，9.48(s，1H，NH)。實(shí)施例75-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲酰基苯氨基)噻唑的制備制備方法同實(shí)施例6，反應(yīng)6h，得米白色固體5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲酰基苯氨基)噻唑，收率75.3％，m.p.177～180℃；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.38(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，1.44(s，9H，3×CH3)，4.12(s，2H，CH2)，4.35(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2)，5.96(s，2H，OCH2O)，6.67(d，J＝8Hz，1H，C6H35-H)，6.69(s，1H，C6H32-H)，6.76(d，J＝8Hz，1H，C6H36-H)，7.34(d，J＝8.8Hz，2H，C6H42，6-H)，8.01(d，J＝8.8Hz，2H，C6H43，5-H)。實(shí)施例85-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二氯苯氨基)噻唑的制備制備方法同實(shí)施例1，反應(yīng)8h，得到黃色固體5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二氯苯氨基)噻唑，收率69.0％，m.p.124～126℃；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.41(s，9H，3×CH3)，4.11(s，2H，CH2)，5.95(s，2H，OCH2O)，6.65～6.76(m，3H，C6H3)，1.55(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.8Hz，ClC6H36-H)，7.33(d，J＝8.4Hz，1H，ClC6H35-H)，7.63(d，J＝2.8Hz，ClC6H32-H)。實(shí)施例95-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，5-二氯苯氨基)噻唑的制備制備方法同實(shí)施例1，反應(yīng)8h，得到黃色固體5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，5-二氯苯氨基)噻唑，收率64.4％，m.p.99～101℃；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：1.41(s，9H，3×CH3)，4.12(s，2H，CH2)，5.95(s，2H，OCH2O)，6.65～6.76(m，3H，C6H3)，6.96(t，J＝1.6Hz，1H，ClC6H34-H)，7.34(d，J＝1.6Hz，2H，ClC6H32，6-H)。實(shí)施例105-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑的制備制備方法同實(shí)施例1，反應(yīng)8h，得到黃色固體5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑，收率77.4％，m.p.100～102℃；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ：1.51(s，9H，3×CH3)，4.07(s，2H，CH2)，5.98(s，2H，OCH2O)，6.63～6.79(m，3H，C6H3)，7.15～7.40(m，3H，F(xiàn)C6H3)。實(shí)施例115-胡椒基噻唑衍生物(Ⅰ)及其鹽的制備其中R選自：C1～C2烷基；C3～C4直鏈烷基或C3～C4支鏈烷基；X1、X5選自：氫、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴或硝基；X2、X4選自：氫、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、硝基或三氟甲基；X3選自：氫、氘、C1～C2烷基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、硝基、乙氧甲酰基或三氟甲基。所述鹽選自：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、甲磺酸 鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、蘋果酸鹽、乳酸鹽、琥珀酸鹽、馬來(lái)酸鹽或富馬酸鹽。按中國(guó)發(fā)明專利[CN104530035A，2015.4.22公開]方法制備5-胡椒基噻唑衍生物(Ⅰ)。其中，5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3-(三氟甲基)苯氨基]噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-硝基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二甲基苯氨基)噻唑和5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3，5-二(三氟甲基)苯氨基]噻唑及其鹽按中國(guó)發(fā)明專利[CN104530035A]方法制備。中國(guó)發(fā)明專利[CN104530035A]公開了這些化合物的物性和譜圖數(shù)據(jù)。實(shí)施例125-胡椒基噻唑衍生物及其鹽的抗腫瘤活性1.抗腫瘤活性原理MTT法生物活性測(cè)試又稱MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。MTT分析法以活細(xì)胞代謝物還原劑噻唑藍(lán)[3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT]為基礎(chǔ)。MTT是一種能接受氫原子的染料。活細(xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲瓚(formazon)，而死細(xì)胞則無(wú)此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值，既可定量測(cè)出細(xì)胞的存活率。根據(jù)光密度值的變化觀察樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用。2.抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)試樣：5-胡椒基噻唑衍生物(Ⅰ)及其鹽。其中R選自：C1～C2烷基；C3～C4直鏈烷基或C3～C4支鏈烷基；X1、X5選自：氫、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴或硝基；X2、X4選自：氫、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、硝基或三氟甲基；X3選自：氫、氘、C1～C2烷基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、硝基、乙氧甲?；蛉谆Ｋ鳆}選自：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、蘋果酸鹽、乳酸鹽、琥珀酸鹽、馬來(lái)酸鹽或富馬酸鹽。細(xì)胞系：宮頸癌細(xì)胞系Hela、肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和乳腺癌細(xì)胞系MCF-7(中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院細(xì)胞庫(kù)提供)。試劑：噻唑藍(lán)(MTT)、RPMI1640培養(yǎng)液、新生牛血清、抗生素(美國(guó)英杰生命技術(shù)公司)；胰酶(美國(guó)AMRESCO公司)；96孔培養(yǎng)板(美國(guó)英杰生命技術(shù)公司)；二甲 基亞砜(美國(guó)Sigma公司)。儀器：HFsafe-1500型超凈工作臺(tái)、HF151UV型CO2培養(yǎng)箱(上海力申科學(xué)儀器有限公司)；XSP-15C型倒置顯微鏡(上海長(zhǎng)方光學(xué)儀器有限公司)；MultiskanMK3型酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)；超純水制備儀(美國(guó)Milli-Q公司)。實(shí)驗(yàn)操作：試樣對(duì)Hela細(xì)胞、A549細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的測(cè)試。每種細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程相同，一次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每種試樣設(shè)置5個(gè)濃度梯度(0.010μmol/mL、0.030μmol/mL、0.100μmol/mL、0.300μmol/mL和1.000μmol/mL)，每個(gè)濃度四個(gè)平行試樣，每組實(shí)驗(yàn)平行3次，并通過(guò)空白組對(duì)照得出結(jié)論。酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔OD值，檢測(cè)波長(zhǎng)570nm。3.抗腫瘤活性評(píng)價(jià)(1)細(xì)胞抑制率計(jì)算：(2)IC50值計(jì)算試樣濃度對(duì)數(shù)值與細(xì)胞抑制率線性回歸，利用軟件計(jì)算試樣對(duì)細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50值。優(yōu)選化合物對(duì)Hela細(xì)胞、A549細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的IC50見表1～3。表15-胡椒基噻唑衍生物對(duì)Hela細(xì)胞的抑制活性5-胡椒基噻唑衍生物IC50，μmol/L5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-氯苯氨基)噻唑8.27±0.895-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑6.43±3.025-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-硝基苯氨基)噻唑4.15±0.015-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二氯苯氨基)噻唑7.83±2.175-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，5-二氯苯氨基)噻唑5.80±0.595-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑4.60±0.525-胡椒基-4-叔丁基-2-[3，5-二(三氟甲基)苯氨基]噻唑2.07±0.88表25-胡椒基噻唑衍生物對(duì)A549細(xì)胞的抑制活性5-胡椒基噻唑衍生物IC50，μmol/L5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氟苯氨基)噻唑7.57±0.225-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟苯氨基)噻唑5.81±0.275-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氯苯氨基)噻唑6.84±0.215-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-氯苯氨基)噻唑2.06±0.095-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氯苯氨基)噻唑9.19±1.035-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑5.00±0.945-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑9.22±1.645-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-硝基苯氨基)噻唑8.26±0.185-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲?；桨被?噻唑8.51±4.305-胡椒基-4-叔丁基-2-[3，5-二(三氟甲基)苯氨基]噻唑3.52±0.49表35-胡椒基噻唑衍生物對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制活性5-胡椒基噻唑衍生物IC50，μmol/L5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-甲基苯氨基)噻唑4.91±0.035-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氟苯氨基)噻唑4.49±0.495-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氯苯氨基)噻唑8.99±0.975-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-氯苯氨基)噻唑3.00±0.255-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氯苯氨基)噻唑3.48±0.125-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑4.66±0.255-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-溴苯氨基)噻唑4.71±0.815-胡椒基-4-叔丁基-2-[3-(三氟甲基)苯氨基]噻唑3.32±0.315-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑3.54±1.905-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-甲氧基苯氨基)噻唑9.36±1.685-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-硝基苯氨基)噻唑2.55±0.345-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲?；桨被?噻唑5.95±0.375-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑8.66±0.385-胡椒基-4-叔丁基-2-[3，5-二(三氟甲基)苯氨基]噻唑9.03±0.96活性測(cè)試結(jié)果顯示，5-胡椒基噻唑衍生物或其鹽對(duì)宮頸癌細(xì)胞(Hela細(xì)胞)、人肺腺癌細(xì)胞(A549細(xì)胞)和人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7細(xì)胞)具有良好的抑制活性，可用于制備抗腫瘤藥物。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3