一種快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，該方法包括如下步驟：向煙用水基膠樣品中加入萃取劑，所述萃取劑與水基膠樣品的體積質(zhì)量比例為5?40mL:0.3g；然后進(jìn)行超聲萃取，萃取時(shí)間為5?45min，得到萃取液；將得到的萃取液進(jìn)行離心，取上清液，向上清液中吹入氮?dú)猓玫綕饪s的上清液；使?jié)饪s的上清液通過(guò)濾膜，得到待測(cè)液；采用超高效液相色譜?二極管陣列對(duì)得到的待測(cè)液中的異噻唑啉酮類化合物進(jìn)行定量分析。本發(fā)明可同時(shí)對(duì)煙用水基膠中至少3種異噻唑啉酮類化合物進(jìn)行分析檢測(cè)，而且處理簡(jiǎn)便，分析速度快，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確且重復(fù)性好、靈敏度高，適用于煙用水基膠及其它復(fù)雜基質(zhì)中3種異噻唑啉酮類化合物的測(cè)定。
【專利說(shuō)明】
一種快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉 酮類化合物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 水基膠是通過(guò)乳液聚合而成的含水膠乳，易受微生物侵襲，而異噻唑啉酮的添加 可以起到殺菌防腐的作用。但研究發(fā)現(xiàn)，暴露在環(huán)境中的異噻唑啉酮類化合物會(huì)存在健康 隱患，如甲基異噻唑啉酮具有一定的細(xì)胞毒性和神經(jīng)毒性，與皮膚接觸有過(guò)敏性反應(yīng)等。而 國(guó)內(nèi)外對(duì)玩具、食品、化妝品等領(lǐng)域?qū)Ξ愢邕蜻悮⒕鷦┑挠昧?、殘留量和特定迀移量都 有嚴(yán)格的管控，如歐盟玩具安全標(biāo)準(zhǔn)EN71-9-2005(對(duì)MI、CMI和BIT的限量分別為10、10和 5mg/kg，并且MI和BIT總限量為15mg/kg) [ 6 ]、；我國(guó)GB 9685-2008《食品容器、包裝材料用添 加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(對(duì)MI、CMI和BIT的特定迀移限量分別為0.5mg/kg、不能檢出和1.2mg/ kg )、；我國(guó)和歐盟化妝品法規(guī)對(duì)MI和BIT的限量均分別為0.01 %和0.0015 %。由于煙用水基 膠由于可能會(huì)直接接觸消費(fèi)者的口腔，異噻唑啉酮的加入量直接影響到吸食安全性，因此 建立水基膠中異噻唑啉酮含量的測(cè)定方法對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量安全管控尤為必要。
[0003] 目前，異噻唑啉酮類化合物的檢測(cè)方法主要有紫外分光光度法、高效液相色譜法、 氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。水基膠中異噻唑啉酮類化合物的 已報(bào)道檢測(cè)方法有高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，而超高效液相色譜法尚無(wú)報(bào) 道。相比之下，高效液相色譜法分析時(shí)間長(zhǎng)，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法設(shè)備要求高，而超高效液 相色譜是一種基于小顆粒填料技術(shù)，具有超高速度、超高分離度和超高靈敏度的新一代液 相分離技術(shù)。不僅分析時(shí)間短，而且分離效果和靈敏度高。因此急需研發(fā)出超高效液相色譜 法的水基膠中異噻唑啉酮類化合物的檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] (一)要解決的技術(shù)問(wèn)題
[0005] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題就是如何簡(jiǎn)單、快速、靈敏的測(cè)定煙用水基膠中的異噻 唑啉酮類化合物，而提供一種快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法。
[0006] (二)技術(shù)方案
[0007] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類 化合物的方法，該方法包括如下步驟：
[0008] 步驟一:超聲萃?。合驘熡盟z樣品中加入萃取劑，所述萃取劑與水基膠樣品的 體積質(zhì)量比例為5-40mL: 0.3g;然后進(jìn)彳丁超聲萃取，萃取時(shí)間為5_45min，得到萃取液；
[0009] 步驟二：離心濃縮：將步驟二得到的萃取液進(jìn)行離心，所述的離心轉(zhuǎn)速為5000-1000〇1'/111；[11，離心時(shí)間2-101]1；[11，取上清液，向上清液中吹入氮?dú)?，得到濃縮的上清液 ；
[0010] 步驟三:濾膜過(guò)濾:使?jié)饪s的上清液通過(guò)濾膜，所述的濾膜為〇. 20-0.25μπι的有機(jī) 相濾膜，得到待測(cè)液；
[0011] 步驟四：定量分析:采用超高效液相色譜-二極管陣列對(duì)步驟三得到的待測(cè)液中的 異噻唑啉酮類化合物進(jìn)行定量分析。
[0012] 優(yōu)選地，在步驟一中，所述的萃取劑為水和甲醇，水和甲醇的體積比為0.5-10:1。 [00 13]優(yōu)選地，在步驟一中，所述的水和甲醇的體積比為1:1。
[0014] 優(yōu)選地，在步驟一中，所述萃取劑與水基膠樣品的體積質(zhì)量比例為20mL:0.3g;所 述的超聲萃取時(shí)間為30min。
[0015] 優(yōu)選地，在步驟二中，所述的離心轉(zhuǎn)速為9000r/min，離心時(shí)間5min。
[0016] 優(yōu)選地，在步驟二中，所述的上清液的濃縮倍數(shù)為2-8倍 [0017]優(yōu)選地，在步驟三中，所述的濾膜為〇.22μπι的有機(jī)相濾膜。
[0018] 優(yōu)選地，在步驟四中，所述的超高效液相色譜的條件為：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH Phenyl(2. IX 50mm，1.7ym)，ACQUITY UPLC BEH C18(2. IX 50mm，1·7μπι)或ACQUITY 1^〇：!?5了3(2.1\50111111，1.84111)，優(yōu)選厶〇01]叮￥1^1^：!^5了3(2.1\50臟，1.84111) ;柱溫： 25-50°C，優(yōu)選35°C ;進(jìn)樣量：5-10yL，優(yōu)選8yL;流速:0 · 1-0 · 5mL/min，優(yōu)選0 · 2mL/min;流動(dòng) 相A為水，B為乙腈;梯度洗脫程序?yàn)?0~（l-8)min:B由0.01-0.5%上升為20-60%; (1-8)~ (8-12)min:B由20-60%降為0.01-0.5%，保持l-5min;優(yōu)選0~4min:B由0.1%上升為40% ; 4~5min:B由40%降為0.1%，保持2min。
[0019] 優(yōu)選地，在步驟四中，所述的二極管陣列條件為：檢測(cè)波長(zhǎng)：0~（0.5-7)min: 275nm，（0 · 5-7 · 5)~（l_8)min: 318nm;優(yōu)選0~3 · 4min: 275nm，3 · 4~4min: 318nm〇
[0020] 優(yōu)選地，在步驟四中，采用超高效液相色譜-二極管陣列對(duì)步驟三得到的待測(cè)液中 的異噻唑啉酮類化合物進(jìn)行定量分析中采用水和甲醇配制混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液、不 同濃度梯度的異噻唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，具體為：
[0021] 混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液:分別稱取2-甲基-3(2H)_異噻唑啉酮(MI)、5_氯-2-甲基-2H-異噻唑-3-酮(CMI)和1，2_苯并異噻唑基-3(2H)_酮(BIT)三種不同質(zhì)量的異噻唑 啉酮標(biāo)樣，置于50mL容量瓶中，加入甲醇定容，搖勻，得到混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液，備 用；
[0022] 不同濃度梯度的異噻唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確移取5，10，50，100，250，500yL混 合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液于6只25mL容量瓶中，用水定容，搖勻，得到不同濃度梯度的異噻 唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。
[0023](三)有益效果
[0024]本發(fā)明快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法具有顯著的效果:可同 時(shí)對(duì)煙用水基膠中至少3種異噻唑啉酮類化合物進(jìn)行分析檢測(cè)，而且前處理簡(jiǎn)便，分析速度 快，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確且重復(fù)性好、靈敏度高，適用于煙用水基膠及其它復(fù)雜基質(zhì)中3種異噻唑 啉酮類化合物的測(cè)定。
【附圖說(shuō)明】
[0025]為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以 根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0026]圖1是標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖；
[0027]圖2是實(shí)施例樣品色譜圖；
【具體實(shí)施方式】
[0028] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。以下實(shí)施例用于 說(shuō)明本發(fā)明，但不能用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0029] 作為本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式，采用甲醇和水配制標(biāo)準(zhǔn)溶液(混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn) 貯備液和不同濃度梯度的異噻唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液）：
[0030] 1)混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液:分別準(zhǔn)確稱取2-甲基-3(2H)_異噻唑啉酮(MI)、5_ 氯-2-甲基-2H-異噻唑-3-酮(QO)U， 2-苯并異噻唑基-3(2H)-酮(BIT)3種不同治療的異噻 唑啉酮標(biāo)樣，見(jiàn)表1，精確至0. 〇〇〇 Ig，置于50mL容量瓶中，加入甲醇定容，搖勻，得到混合異 噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液。
[0031 ] 表1:混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液中化合物濃度
[0033] 2)不同濃度梯度的異噻唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確移取5，10，50，100，250，500yL 混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液于6只25mL容量瓶中，用水定容，搖勻，得到不同濃度梯度的異 噻唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0034] 分別對(duì)6個(gè)不同濃度梯度的異噻唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行UPLC/PDA分析，如圖1所 示，以異噻唑啉酮類化合物的峰面積(Y)對(duì)相應(yīng)的異噻唑啉酮化合物濃度(X，yg/mL)進(jìn)行線 性回歸分析，得到3種異噻唑啉酮類化合物的工作曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù)。通過(guò)稀釋最低 濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，異噻唑啉酮在儀器上產(chǎn)生不低于3倍信噪比（S/N)和10倍信噪比（S/N) 所對(duì)應(yīng)的分析物濃度分別計(jì)為方法的檢出限(LOD)和定量限(L0Q)。結(jié)果如表2所示。
[0035]表2異噻唑啉酮類化合物工作曲線、相關(guān)系數(shù)、檢測(cè)限和定量限
[0037]采用標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定本發(fā)明所述檢測(cè)方法的回收率，稱取一定量的已檢出3種異 噻唑啉酮含量的煙用水基膠樣品（圖2)，分3份，分別按照低、中、高3個(gè)添加水平加入上述混 合標(biāo)準(zhǔn)品，按優(yōu)化的方法測(cè)定異噻唑啉酮的含量，計(jì)算方法的回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可 以看出，異噻唑啉酮的回收率在92.2 %~100.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.8 %~6.8%， 表明本方法的準(zhǔn)確性和精密度較好。
[0038] 表3:回收率和精密度(n = 6)
[0041]本發(fā)明所述的檢測(cè)方法可同時(shí)對(duì)煙用水基膠中至少3種異噻唑啉酮類化合物進(jìn)行 分析檢測(cè)，而且前處理簡(jiǎn)便，分析速度快，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確且重復(fù)性好、靈敏度高，適用于煙用 水基膠及其它復(fù)雜基質(zhì)中3種異噻唑啉酮類化合物的測(cè)定。
[0042]下面用實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明：
[0043] 實(shí)施例1
[0044] 1)分別準(zhǔn)確稱取8種不同類型煙用水基膠樣品0.3g于50mL具塞三角瓶中，先加入 IOmL超純水輕微搖晃使水基膠均勾分散，再加入IOmL甲醇混勾后，超聲30min;
[0045] 2)轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，9000r/min離心5min，取2mL上清液，用氮吹濃縮至ImL后 (不足ImL時(shí)加入超純水定容至ImL)過(guò)0.22μπι水相濾膜于色譜瓶，待分析；
[0046] 3)用超高效液相色譜-二極管陣列（UPLC-PDA)進(jìn)行定量分析，檢測(cè)結(jié)果如表4所 不。
[0047] 其中，UPLC-PDA條件如下：
[0048] 色譜條件：分析柱：Waters ACQUITY UPLC HSS Τ3(2· IX 50mm, 1·7μπι);柱溫：35 °C ;進(jìn)樣量:8yL;流速:0.2mL/min;流動(dòng)相A為水，B為乙腈;梯度洗脫程序?yàn)?0~4min: B由 0.1% 上升為 40%;4 ~5min:B 由 40% 降為 0.1%，保持 2min。
[0049] PDA 條件：檢測(cè)波長(zhǎng)：0~3 · 4min: 275nm，3 · 4~4 · Omin: 318nm;
[0050] 表4:3種異噻唑啉酮化合物的含量(yg/g)
[0052] 注未檢出
[0053]結(jié)果表明，煙用水基膠中3種異噻唑啉酮類化合物都有不同程度的添加，其中MI使 用相對(duì)于CMI和BIT更多。
[0054]以上實(shí)施方式僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而非對(duì)本發(fā)明的限制。盡管參照實(shí)施例對(duì)本發(fā) 明進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行各種組合、 修改或者等同替換，都不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要 求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征在于，該方法包括 如下步驟： 步驟一:超聲萃?。合驘熡盟z樣品中加入萃取劑，所述萃取劑與水基膠樣品的體積 質(zhì)量比例為5-40mL:0.3g;然后進(jìn)彳丁超聲萃取，萃取時(shí)間為5_45min，得到萃取液； 步驟二:離心濃縮:將步驟二得到的萃取液進(jìn)行離心，所述的離心轉(zhuǎn)速為5000-10000r/ min，離心時(shí)間2-1 Omin，取上清液，向上清液中吹入氮?dú)?，得到濃縮的上清液； 步驟三:濾膜過(guò)濾:使?jié)饪s的上清液通過(guò)濾膜，所述的濾膜為〇 . 20-0.25μπι的有機(jī)相濾 膜，得到待測(cè)液； 步驟四：定量分析:采用超高效液相色譜-二極管陣列對(duì)步驟三得到的待測(cè)液中的異噻 唑啉酮類化合物進(jìn)行定量分析。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征 在于，在步驟一中，所述的萃取劑為水和甲醇，水和甲醇的體積比為0.5-10:1。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征 在于，在步驟一中，所述的水和甲醇的體積比為1:1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征 在于，在步驟一中，所述萃取劑與水基膠樣品的體積質(zhì)量比例為20mL:0.3g;所述的超聲萃 取時(shí)間為30min。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征 在于，在步驟二中，所述的離心轉(zhuǎn)速為9000r/min，離心時(shí)間5min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征 在于，在步驟二中，所述的上清液的濃縮倍數(shù)為2-8倍。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征 在于，在步驟三中，所述的濾膜為0.22μπι的有機(jī)相濾膜。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征 在于，在步驟四中，所述的超高效液相色譜的條件為:色譜柱為ACQUITY UPLC BEH Phenyl (2.1X50mm，1.7ym)，ACQUITYUPLCBEHC18(2.1X50mm，1.7ym)SACQUITYUPLCHSST3 (2 · 1 X 50mm，1 · 8μπι);柱溫：25-50°C ;進(jìn)樣量：5-10yL;流速:0 · 1-0 · 5mL/min;流動(dòng)相A為水，B 為乙腈;梯度洗脫程序?yàn)椋憨杶（l-8)min:B由0.01-0.5%上升為20-60%; (1-8)~（8-12) 11^11:8由20-60%降為0.01-0.5%，保持1-511^11。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方法，其特征 在于，在步驟四中，所述的二極管陣列條件為:檢測(cè)波長(zhǎng):〇~(〇. 5-7)min: 275nm，（0.5-7.5) ~（l-8)min:318nm〇10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的快速檢測(cè)煙用水基膠中異噻唑啉酮類化合物的方 法，其特征在于，在步驟四中，采用超高效液相色譜-二極管陣列對(duì)步驟三得到的待測(cè)液中 的異噻唑啉酮類化合物進(jìn)行定量分析中采用水和甲醇配制混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液、不 同濃度梯度的異噻唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，具體為： 混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液:分別稱取2-甲基-3(2H)_異噻唑啉酮、5-氯-2-甲基-2H-異噻唑-3-酮和1,2-苯并異噻唑基-3(2H)_酮三種不同的異噻唑啉酮標(biāo)樣，置于50mL容量瓶 中，加入甲醇定容，搖勻，得到混合異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液，備用； 不同濃度梯度的異噻唑啉酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確移取5，10，50，100，250，500yL混合異 噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液于6只25mL容量瓶中，用水定容，搖勻，得到不同濃度梯度的異噻唑啉 酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105842351SQ201610152249
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年3月17日
【發(fā)明人】姬厚偉, 劉劍, 彭黔榮, 董睿, 張麗, 王芳
【申請(qǐng)人】貴州中煙工業(yè)有限責(zé)任公司