本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，涉及34-Dimethyl apratoxin A/E的合成新路線，尤其涉及一種具有極強抗腫瘤活性的化合物34-Dimethyl apratoxin A/E的制備方法。
背景技術：
現(xiàn)有技術公開了34-Dimethyl apratoxin A/E為一種具有強烈抑制細胞內(nèi)分泌型分子共翻譯轉運過程的活性化合物(J Med Chem,2014,57:3011-3029)，具有極強細胞毒活性，對人結腸癌細胞株HCT116的IC50值為1.99nM。
目前公開的僅有的一條34-Dimethyl apratoxin A/E的合成路線包括：目標化合物經(jīng)一個三肽片段，一個4-氨基-5-巰基戊酸片段和一個7-脯氨酸長鏈脂肪酸縮合最后大環(huán)內(nèi)酰胺化得到；對于7-脯氨酸長鏈脂肪酸片段的合成，該合成路線采用特戊醛為原料，經(jīng)不對稱羥醛縮合、叔丁基二甲基硅基保護、還原、羥基活化消除、脫叔丁基二甲基硅基、酯化、烯烴復分解成環(huán)、不對稱1,4-加成、胺酯交換、對甲氧基芐基保護、還原、羥醛縮合、水解、烯丙基酯保護、三氯乙氧羰基保護、脫對甲氧基芐基、酯化、脫烯丙基酯19步反應以12％的收率得到該片段；對于4-氨基-5-巰基戊酸片段的合成，該合成路線以(D)-半胱氨酸為原料，經(jīng)酰胺化、還原、wittig反應、還原、水解及親核取代6步反應以24％的收率完成4-氨基-5-巰基戊酸片段的合成；該合成路線的三肽片段是從N端到C端的順序依次酰胺化得到；完成三個片段的合成后，該合成路線從7-脯氨酸長鏈脂肪酸片段出發(fā)進行片段的組裝，經(jīng)酰胺化、環(huán)合、脫三氯乙氧羰基、脫烯丙基酯、酰胺化、脫烯丙基、脫芴甲氧羰基以及大環(huán)內(nèi)酰胺化完成目標產(chǎn)物的合成(J Med Chem,2014,57:3011-3029)，路線如下反應式所示，該反應路線包含27步線性步驟，總產(chǎn)率3％；該合成路線存在如下問題：
1.整條路線反應步數(shù)過長，使用了大量保護基與脫保護基反應，導致目標產(chǎn)物總產(chǎn)率低；
2.合成中間體8的反應使用了價格昂貴的Grubbs催化劑，導致合成成本高；
3.合成中間體9的反應使用了劇毒的氰化試劑，使整條合成路線環(huán)境不友好；
4.合成路線的具體實施底物投料量較小，反應放大后產(chǎn)率得不到保障。
以上問題都將導致34-Dimethyl apratoxin A/E(化合物31)的大量制備成為困難。
反應條件：I.D-Proline，Acetone；II.TBSCl，imidazole；III.NaBH4；IV.MsCl；V.t-BuOK；VI.TBAF；VII.VIII.Grubbs G2；IX.MeLi，CuCN；X.Al(Me)3XI.PMBOC(NH)CCl3；XII.DIBAL-H；XIII.D-(N-Ts)-Val，BH3；XIV，LiOH；XV，AllylBr；XVI，TrocCl；XVII，DDQ；XVIII，F(xiàn)moc-Pro-OH，Cl3PhCOCl；XIX，Pd(PPh3)4
反應條件：I.EDCl，HOBt；II.LiAlH4，III.IV，NaBH4，V，LiOH；VI.AllylBr
反應條件：I.25，TMSOTf，lutidine，PyAOP II.TiCl4；III.Zn，NH4OAc；IV.Pd(PPh3)4
反應條件：I.Et2NH；II.PyAOP；Et2NH III.Pd(PPh3)4；IV.Pd(PPh3)4。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的視為克服現(xiàn)有技術的已報道的合成路線存在的缺點，提供一條高效制備34-Dimethyl apratoxin A/E的合成路線，并能進行規(guī)模制備。
具體的，本發(fā)明提供了一種34-Dimethyl apratoxin A/E的制備方法，其通過以下合成路線：
按下述步驟實施：
(1)D-脯氨酸作為催化劑，以特戊醛為起始原料與丙酮發(fā)生不對稱羥醛縮合反應生成(S)-4-羥基-5,5-二甲基己-2-酮(1)；
(2)1在干燥的四氫呋喃中與二異丙基氫化鋁-78℃反應5-10小時，酮羰基立體選擇性還 原為羥基得到(2S,4S)-5,5-二甲基己-2,4-二醇(32)；
(3)在無機堿(例如NaOH、KOH、CsOH、Ba(OH)2、Mg(OH)2、Ca(OH)2、Sr(OH)2、KHCO3、K2CO3、Na2CO3、Cs2CO3)或有機堿(例如三乙胺、三正丁胺、吡啶)存在下，化合物32與二氯亞砜環(huán)合制得(4S,6S)-4-叔丁基-6-甲基亞硫酸丙烯酯，之后用三氯化釕高碘酸鈉將亞硫酸烯丙基酯氧化為硫酸烯丙基酯得(4S,6S)-4-(叔丁基)-6-甲基硫酸丙烯酯(33)；
(4)33與烯丙基銅鎂試劑經(jīng)親核取代反應生成硫酸氫鹽后在酸性條件(例如硫酸、鹽酸)下水解生成(3S,5S)-2,2,5-三甲基辛-7-烯-3-醇(34)；
(5)在2,4,6-三氯苯甲酰氯條件下，34與Fmoc-L-脯氨酸發(fā)生酯化反應得到烯烴35；
(6)35用臭氧在-78℃將碳碳雙鍵氧化形成臭氧化物，之后再用還原劑(例如二甲硫醚、三苯基膦)還原成醛(36)；
(7)醛36在N-Ts-D-Val與硼烷形成的Lewis酸催化下與1-甲氧基-2-甲基-1-(三甲基硅氧基)丙烯在-78℃條件下發(fā)生不對稱羥醛縮合反應生成甲酯(37)；
(8)37在酸性條件下將甲酯水解成羧酸，更具體的說，37在無機酸(例如硫酸、鹽酸)存在下以高沸點溶劑(例如DMF、DMSO、二氧六環(huán)、甲苯、吡咯烷酮類)為溶劑在20℃-160℃的溫度范圍內(nèi)反應0.5-10小時，水解為羧酸(38)；
(9)在縮合劑(例如DCC、EDC、HATU、PyAOP)存在下，N-Boc-S-Trt-D-半胱氨酸與2,2-二甲基-1,3-二氧六環(huán)-4,6-二酮縮合得到氨基甲酸酯(39)；
(10)39的酮羰基用硼氫化鈉乙酸還原體系還原為亞甲基得到氨基酸甲酯(40)；
(11)氨基酸甲酯40在高沸點溶劑(例如DMF、DMSO、二氧六環(huán)、甲苯、吡咯烷酮類)中，在20℃-160℃的溫度范圍內(nèi)反應0.5-10小時脫羧環(huán)合，得到內(nèi)酰胺(41)；
(12)41在堿性條件下水解為(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(三苯基甲巰基)戊酸(24)。更具體的說41在無機堿(例如NaOH、KOH、CsOH、Ba(OH)2、Mg(OH)2、Ca(OH)2、Sr(OH)2、KHCO3、K2CO3、Na2CO3、Cs2CO3)或有機堿(例如三乙胺、吡啶)存在下，以低級醇(例如甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、正戊醇、異戊醇)或其他溶劑(例如丙酮、DMF、DMSO、THF、二氧六環(huán)、吡咯烷酮類)為溶劑，在20℃-160℃的溫度范圍內(nèi)反應0.5-10小時，水解為(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(三苯基甲巰基)戊酸(24)；
(13)24與烯丙基溴在堿性條件下經(jīng)親核取代反應生成(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(三苯基甲巰基)戊酸烯丙基酯(25)；
(14)25在三氟甲磺酸三甲基硅酯和2,6-二甲基吡啶的條件下脫除叔丁氧羰基，之后與羧酸38在縮合劑PyAOP的條件下縮合形成酰胺42；
(15)42在Lewis酸催化下加熱環(huán)合形成噻唑啉化合物27，更具體的說，在Lewis酸(例如TiCl4、PCl5)存在下以低級鹵代烷烴為溶劑(例如二氯乙烷、二溴乙烷)為溶劑，在20℃-100℃的溫度范圍內(nèi)反應0.5-6小時，環(huán)合形成噻唑啉化合物27；
(16)27用四三苯基膦鈀脫除烯丙基酯制得羧酸28；
(17)化合物29(制備方法可參見如：J Med Chem,2014,57:3011-3029)用有機堿(例如二乙胺)脫除Fmoc保護基后在縮合劑(例如HATU,PyAOP)存在下與羧酸28發(fā)生縮合反應制得烯丙基酯30；
(18)30用四三苯基膦鈀脫除烯丙基酯后用二乙胺脫除Fmoc保護基，之后在縮合劑(例如HATU、PyAOP)在二氯甲烷溶劑中1nM的濃度下室溫反應10-24小時進行分子內(nèi)酰胺化反應制得34-Dimethyl apratoxin A/E。
本發(fā)明中，所述合成路線中制備化合物35，37，38，27和34-Dimethyl apratoxin A/E的步驟為關鍵反應步驟。
本發(fā)明中，具體反應條件如下：
反應條件：I.D-Proline，Acetone；II.DIBAL-H；III SOCl2，NaHCO3；IV.RuCl3，NaIO4；V.AllylMgBr，H2SO4；VI.Fmoc-Pro-OH，Cl3PhCOCl；VII.O3，Me2S；VIII.D-(N-Ts)-Val，BH3；IX.HCl
反應條件：I.DCC，DMAP；II.NaBH4，AcOH，III.Tol；IV，NaOH；V，AllylBr
反應條件：I.25，TMSOTf，lutidine，38，PyAOP II.TiCl4；III.Pd(PPh3)4
反應條件：I.Et2NH；II.PyAOP；Et2NH III.Pd(PPh3)4；IV.Pd(PPh3)4。
本發(fā)明的優(yōu)點有：
1、本發(fā)明以特戊醛為起始原料，經(jīng)9步反應合成了關鍵長鏈脂肪酸片段，經(jīng)16步線性步驟合成目的化合物，與現(xiàn)有技術相比，節(jié)省了9步反應，制備方法更為簡便，合成路線顯著縮短。
2、由于節(jié)省了9步反應，使得產(chǎn)物質(zhì)量和收率均得到提高，而且適合規(guī)模制備。
3、與現(xiàn)有合成路線相比，本發(fā)明使用的反應不使用昂貴以及劇毒的試劑，使得整個制備方法更加綠色經(jīng)濟。
下面結合實施例對本發(fā)明做進一步說明，但不限制本發(fā)明。
以下反應采用的起始原料以及試劑均由上海泰坦科技股份有限公司提供。
具體實施方式
實施例1 制備(S)-4-羥基-5，5-二甲基己-2-酮(1)
稱取D-脯氨酸(15.9g，138.1mmol)加入到960mL DMSO和240mL丙酮的混合溶液中，常溫攪拌半小時，往上述體系中加入特戊醛(50mL，460.4mmol)，室溫條件下攪拌7天，在冰浴下加入飽和氯化銨溶液(500mL)淬滅反應，用乙酸乙酯萃取(400mL×3)，有機相用飽和食鹽水洗(400mL×2)，用無水硫酸鈉干燥，有機相濃縮至干，以石油醚/乙酸乙酯＝6∶1進行柱層析分離，得到淡黃色油狀液體52(39.8g，60.0％)。
MS(API-ES)：145.2[M+H]+，127.2[M-H2O+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：3.68(d，J＝10.5Hz，1H)，2.42-2.61(m，2H)，2.01(s，3H)，0.87 (s,9H)。
實施例2 制備(2S,4S)-5,5-二甲基己-2,4-二醇(32)
取1(38.0g,263.7mmol)溶于四氫呋喃(300mL)，溶液冷至-78℃，滴加DIBAL-H(263.7mL,395.5mmol,1.5M甲苯溶液)，滴加完畢后在-78℃反應5小時，滴加1M鹽酸(200mL)淬滅反應，反應體系用硅藻土過濾，濾液濃縮除去甲苯和四氫呋喃，用乙酸乙酯(1L)溶解并以飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥。濾除硫酸鈉，有機相濃縮至干，以石油醚/乙酸乙酯＝6:1進行柱層析分離得到白色固體32(24.8g,65.3％)。
MS(API-ES):169.2[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.92(m,1H),3.54(dd,J＝13.6,1.3Hz,1H),3.28(m,2H),1.49(brd,J＝5.0Hz,1H),1.30(d,J＝5.0Hz,1H),1.14(d,J＝6.8Hz,3H),0.89(s,9H).。
實施例3 制備(4S,6S)-4-叔丁基-6-甲基硫酸丙烯酯(33)
將32(66.5g,454.5mmol)、無水碳酸鈉(482.2g,4.5mol)和干燥二氯甲烷(500mL)混合，-15℃下滴加二氯亞砜(164.7mL,22.7mol)，滴加完畢后室溫反應3小時。反應體系用硅藻土過濾，濾液濃縮至干，可不經(jīng)精制直接用于下步反應；
將上一步粗產(chǎn)物溶于混合溶劑中(水(460mL),乙腈(230mL),四氯化碳(460mL)),冰浴條件加入三氯化釕(6.0g,23.0mmol)和高碘酸鈉(147.6g,690.0mmol)室溫反應6小時。二氯甲烷萃取(400mL×3),有機相分別用飽和氯化銨溶液，飽和碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干，以石油醚/乙酸乙酯＝6:1進行柱層析分離，得到白色固體33(68.4g,71.5％)。
MS(API-ES):231.1[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):4.85-4.87(m,1H),4.64(dd,J＝11.2,7.2Hz,1H),1.85(t,J＝7.2,1H),1.72(t,J＝11.2,1H),1.47(d,J＝8.2Hz,3H),0.94(s,9H).。
實施例4 制備(3S,5S)-2,2,5-三甲基辛-7-烯-3-醇(34)
將34與碘化亞銅(38.1g,0.2mol)和干燥四氫呋喃(200mL)混合，-25℃下滴加烯丙基溴化鎂(650mL,1M乙醚溶液)，-25℃反應8小時后滴加20％硫酸(500mL),滴加完畢后室溫反應10小時。硅藻土過濾，濾液分液，水相用乙醚萃取(200mL×2),合并有機相，有機相用無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干，以石油醚/乙酸乙酯＝6:1進行柱層析分離，得到黃色油狀液體33(24.0g,88.1％)。
MS(API-ES):193.2[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):5.81–5.91(m,1H),4.96–5.05(m,2H),3.56(dd,J＝10.2,1.8Hz,1H),2.33–2.40(m,1H),1.95–2.02(m,1H),1.82–1.93(m,1H),1.38-1.43(m,1H),1.16-1.21(m,1H),0.98(d,J＝6.6Hz,1H),0.90(s,9H).。
實施例 制備5烯烴(35)
將Fmoc-脯氨酸(9.5g,28.2mmol)與干燥四氫呋喃(30mL)混合,0℃下滴加2,4,6-三氯苯甲酰氯(5.2mL,35.3mmol)和二異丙基乙胺(6.2mL,35.3mmol)，0℃反應10分鐘。滴加33(4.0g,23.5mmol)的5mL四氫呋喃溶液,0℃反應30分鐘。之后一次性加入二甲氨基吡啶(8.6g,70.5mmol),室溫反應6小時。加入乙酸乙酯(500mL)稀釋，分別用飽和氯化銨溶液，飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌各兩次，有機相用無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干以石油醚/乙酸乙酯＝4:1進行柱層析分離，得到淡黃色油狀液體35(19.1g,81.2％)。
MS(API-ES):512.3[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):7.73–7.85(m,2H),7.53–7.70(m,2H),7.36–7.46(m,2H),7.27–7.36(m,2H),5.58–5.82(m,1H),4.85–5.10(m,2H),4.23–4.58(m,4H),4.09–4.23(m,1H),3.63–3.74(m,1H),3.49–3.62(m,1H),2.38–1.92(m,3H),1.62–1.99(m,1H),1.51–1.65(m,1H),1.31–1.50(m,3H),0.79–0.11(m,13H).。
實施例6 制備醛(36)
將35(12.0g,24.5mmol)溶于干燥二氯甲烷(200mL)中,在-78℃條件下向反應體系中通入臭氧至反應體系變成藍色，之后通入氮氣至藍色褪去，往反應體系中滴加二甲基硫醚(7.2mL,98.1mmol),反應體系緩慢升至室溫反應12小時。將反應液濃縮至干，以石油醚/乙酸乙酯＝4:1進行柱層析分離，得到淡黃色油狀液體35(9.1g,75.6％)。
實施例7 制備甲酯(37)
將N-Ts-纈氨酸(30.0g,106.9mmol)溶于干燥二氯甲烷(600mL)，0℃滴加1M硼烷四氫呋喃溶液(106.9mL,106.9mmol),0℃反應2小時。將反應體系冷卻至-78℃，滴加醛37(35.0g,71.2mmol)的400mL干燥二氯甲烷溶液中，滴加完畢后滴加1-甲氧基-2-甲基-1-(三甲基硅氧基)丙烯，-78℃反應5小時。用pH＝8的Na2HPO4和NaH2PO4的緩沖溶液(100mL)淬滅反應，分液，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濃縮至干，石油醚/乙酸乙酯＝4:1進行柱層析分離，得白色固體37(35.0g,82.8％)。
MS(API-ES):594.4[M+H]+。
實施例8 制備羧酸(38)
將37(8.4g,14.2mmol)溶于二氧六環(huán)(100mL)中,加入濃鹽酸(30.0mL,946.2mmol),加熱至110℃反應10小時。將反應體系冷卻至0℃，加入1M的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH＝5,乙酸乙酯萃取(150mL×3),有機相無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濃縮至干，以石油醚/乙酸乙酯＝1:2進行柱層析分離，得淡黃色固體38(6.3g,76.3％)。
MS(API-ES):580.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):7.76(d,J＝7.1Hz,2H),7.54–7.68(m,2H),7.36–7.43(m,2H),7.28–7.36(m,2H),4.91(d,J＝11.8Hz,1H),4.41–4.49(m,1H),4.23–4.38(m,1H),3.73–3.82(m,2H),3.58–3.73(m,4H),3.44–3.58(m,2H),2.22–2.36(m,1H),1.91–2.08(m,4H),1.57–1.85(m,7H),0.68–1.06(m,26H).。
實施例9 制備氨基甲酸酯(39)
將N-Boc-S-Trt-D-半胱氨酸(10.0g,21.6mmol)溶于干燥二氯甲烷(200mL)中，0℃依次加入2,2-二甲基-1,3-二氧六環(huán)-4,6-二酮(3.4g,23.7mmol)、二環(huán)己基碳二亞胺(4.9g,23.7mmol)和二甲氨基吡啶(4.0g,32.4mmol)，室溫反應16小時。分別用飽和氯化銨溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，有機相無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干，可不經(jīng)精致直接用于下一步反應。
實施例10 制備氨基甲酸酯(40)
將上一步未精制的39溶于干燥二氯甲烷中(50mL)，0℃加入冰醋酸(15.6mL,237.6mmol),分批加入硼氫化鈉(2.0g,54.0mmol)，0℃反應1小時。加入二氯甲烷(200mL)稀釋，分別用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干，可不經(jīng)精制直接用于下一步反應。
實施例11 制備內(nèi)酰胺(41)
將上一步未經(jīng)精制的40溶于甲苯(200mL)，反應置于110℃反應8小時，反應液濃縮至干，可不經(jīng)精制直接用于下一步反應。
實施例12 制備(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(三苯基甲巰基)戊酸(24)
將上一步未經(jīng)精制的41溶于丙酮(或如前面所述其他溶劑)(200mL)，加入2M氫氧化鈉水溶液(或如前面所述其他堿)(54.0mL,108.0mmol)，室溫反應3小時。用2M鹽酸調(diào)節(jié)pH＝4，乙酸乙酯萃取(100mL×3),有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干，可不經(jīng)精制直接用于下一步反應。
實施例13 制備(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-5-(三苯基甲巰基)戊酸烯丙基酯(25)
將上一步為未經(jīng)精制的24與無水碳酸鉀(7.4g,53.9mmol)和干燥DMF(200mL)混合,加入烯丙基溴(3.2mL,36.8mmol)。室溫反應5小時，將反應鹽倒入0℃下1M鹽酸中，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干，石油醚/乙酸乙酯＝4:1進行柱層析分離，得黃色油狀液體25(7.2g,62.7％)。
MS(API-ES):554.2[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.68(d,J＝10.5Hz,1H),2.42-2.61(m,2H),2.01(s,3H),0.87(s,9H)。
實施例 制備14酰胺42
25(2.0g,3.8mmol)溶于干燥二氯甲烷中(48mL)，0℃依次加入2,6-二甲基吡啶(6.8mL,46.3mmol)，三氟甲磺酸三甲基硅酯(8.4mL,23.8mmol)，室溫反應1小時。0℃滴加甲醇(5mL)淬滅反應，分別用飽和碳酸氫鈉和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干，可不精制用于下一步反應。
羧酸38(1.7g,2.9mmol)溶于干燥四氫呋喃(25mL)，依次加入上一步未經(jīng)精制的25脫叔丁氧羰基粗產(chǎn)物、(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(2.4g,4.6mmol)和N,N-二異丙基乙胺(1.7mL,9.6mmol)，室溫反應10小時。反應液用乙酸乙酯稀釋(200mL),分別用飽和氯化銨、飽和碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾液濃縮至干。以石油醚/乙酸乙酯＝1:2進行柱層析分離，得淡黃色油狀液體42(1.5g,52.1％)。
MS(API-ES):1015.6[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.68(d,J＝10.5Hz,1H),2.42-2.61(m,2H),2.01(s,3H),0.87(s,9H)。
實施例15 制備噻唑啉化合物27
將42(2.3g,2.3mmol)溶于二氯乙烷(400mL),加入四氯化鈦(2.0mL,18.5mmol),60℃反應2小時，反應冷卻至室溫，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)攪拌20分鐘。分液，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾除硫酸鈉，濾液濃縮至干。以石油醚/乙酸乙酯＝4:1進行柱層析分離，得無色油狀液體27(0.8g,47.5％)。
MS(API-ES):755.4[M+Na]+。
實施例16 制備羧酸28
將27(0.65g,0.89mmol)溶于干燥四氫呋喃(10mL)中，分別加入N-甲基苯胺(0.24mL,2.2mmol)和四三苯基膦鈀(104.0mg,0.09mmol)室溫反應1小時。反應液濃縮至干以石油醚/乙酸 乙酯＝1:4快速進行柱層析分離后用于下一步反應。
實施例17 制備烯丙基酯30
將29溶于乙腈(10mL)中，加入二乙胺(5mL)室溫反應半小時。反應液濃縮至干，加入甲苯(5mL×3)共沸3次，油泵真空干燥2小時，供下一步反應使用。
將28溶于干燥四氫呋喃中(10mL),依次加入上一步反應產(chǎn)物、(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(1.1g,2.2mmol)和N,N-二異丙基乙胺(0.76mL,4.4mmol)，室溫反應16小時。反應液用乙酸乙酯稀釋(200mL)，分別用飽和氯化銨、飽和碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾液濃縮至干。以石油醚/乙酸乙酯＝1:4進行柱層析分離，得白色泡狀固體30(0.68g,65.0％)。
MS(API-ES):1144.6[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.68(d,J＝10.5Hz,1H),2.42-2.61(m,2H),2.01(s,3H),0.87(s,9H)。
實施例18 制備34-Dimethyl apratoxin A/E
將30(0.72g,0.64mmol)溶于干燥四氫呋喃(10mL)中，分別加入N-甲基苯胺(0.17mL,1.6mmol)和四三苯基膦鈀(74.0mg,0.06mmol)室溫反應1小時。反應液濃縮至干，以石油醚/乙酸乙酯＝1:4為洗脫液快速進行柱層析分離后用于下一步反應。
將上一步反應溶于乙腈(24mL)中，加入二乙胺(12mL)室溫反應半小時。反應液濃縮至干，加入甲苯(15mL×3)共沸3次，油泵真空干燥2小時，供下一步反應使用。
將上一步反應溶于干燥二氯甲烷中(740mL),依次加入(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(0.85g,1.6mmol)和N,N-二異丙基乙胺(0.94mL,5.4mmol)，室溫反應24小時。反應液用分別用飽和氯化銨、飽和碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濾液濃縮至干。以石油醚/乙酸乙酯＝1:4進行柱層析分離，得白色固體31(0.25g,46.4％)。
MS(API-ES):842.6[M+H]+。